JP2022073106A - 漆の産地判定方法 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、漆の産地を簡易に判定する方法を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、漆の全タンパク質量、ウルシオールの組成、及び水分含量のうち少なくとも１つを分析することを含む、漆の産地判定方法を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、漆の産地判定方法に関する。

漆は、伝統的、漆の樹木から採取される樹液から生漆を得て、精製作業を経て製造される。漆の品質は、産地で判断されており、国産品、特に岩手県産品は最高級品と位置付けられ、伝統工芸品、国宝や文化財の建築、修理などに用いられている。

漆は、油中水型（Ｗ／Ｏ型）エマルジョンであり、水相にゴム質とラッカーゼ等のタンパク質が、油層にはウルシオールと糖タンパク質が含まれている。非特許文献１には、生漆主成分の組成として、ウルシオール６０～６５％、ラッカーゼなど０．１～１．０％が含まれることが記載されている。

熊野谷 従（１９９１年）Ｊａｓｃｏ Ｒｅｐｏｒｔ、３３巻、２号、１５－２９ページ

しかし、現状では産地以外に商品として品質を判断する方法が無く、産地を偽って流通する商品についてその産地、品質を判定する方法が提案されていない。一方、漆の品質を示す指標として、産地以外の指標はこれまで知られておらず、消費者も産地以外に漆の品質を判断する手がかりがなかった。非特許文献１にも各産地の漆の組成についての情報はなく、組成と産地の関係について着目するものではない。
本発明は、漆の産地を簡易に判定する方法を提供することを目的とする。

本発明は、下記の〔１〕～〔９〕を提供する。
〔１〕漆の全タンパク質量、ウルシオールの組成、及び水分含量のうち少なくとも１つを分析することを含む、漆の産地判定方法。
〔２〕ウルシオールの組成の分析は、漆をアセトン又は低級アルコール抽出すること、得られるアセトン可溶性画分中のウルシオールの組成を分析すること、を少なくとも含む、〔１〕に記載の方法。
〔３〕アセトン又は低級アルコール抽出は、無色のアセトン可溶性画分が得られるまで複数回行う、〔２〕に記載の方法。
〔４〕ウルシオールの組成の分析は、炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖を有するウルシオールの定量を少なくとも含む、〔１〕～〔３〕のいずれか１項に記載の方法。
〔５〕炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖は、不飽和二重結合を３つ有する、〔４〕に記載の方法。
〔６〕全タンパク質量の分析は、漆をアセトン又は低級アルコール抽出すること、得られる不溶性画分中の全タンパク質量を分析すること、を少なくとも含む、〔１〕～〔３〕のいずれか１項に記載の方法。
〔７〕アセトン又は低級アルコール抽出は、無色のアセトン可溶性画分が得られるまで複数回行う、〔６〕に記載の方法。
〔８〕前記不溶性画分をさらに水抽出し、水溶性画分を超遠心分離し、得られる水可溶性画分中の全タンパク質量を分析すること、をさらに含む、〔６〕又は〔７〕に記載の方法。
〔９〕水分含量の分析は、カールフィッシャー法により行う、〔１〕～〔８〕のいずれか１項に記載の方法。

本発明によれば、漆の産地を簡易に判定する方法が提供される。これにより、漆の品質を明確に表示でき、また、産地偽装を抑制できることが期待される。

図１は、製造例１の黒目漆（上段）、製造例２の黒目漆（中段）、製造例３の黒目漆（下段）のＨＰＬＣチャートである。 図２は、実施例２における製造例１の生漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図３は、実施例２における製造例２の生漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図４は、実施例２における製造例３の生漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図５は、実施例２における市販品の生漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図６は、実施例２における製造例１の黒目漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図７は、実施例２における製造例２の黒目漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図８は、実施例２における製造例３の黒目漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。 図９は、実施例２における市販品の黒目漆のＨＰＬＣ溶出パターンの結果を示す図である。

〔漆の産地の判定方法〕
－漆－
本明細書において、漆は、ウルシの樹液に由来する成分を少なくとも含み、ウルシの樹木から採取される天然樹液、合成品、及びそれらの混合物のいずれを含むものでもよい。また、加工を経ていてもよいし、剤型（例えば、液体、固形、粉末、ペースト状）も特に限定されない。漆は、品質により生漆、黒目漆、又はこれらの漆に添加物を加えて調製した漆等に分類される。また、漆の合成品としては、ナノ粒子を含む人工漆が挙げられる。いずれも本明細書における漆に包含される。添加物としては、例えば、保存剤、油分、着色材、他の塗料成分が挙げられる。

ウルシの樹木は、ウルシ科（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ）に属する植物の樹木である。生育地は、一般に日本、韓国、中国、東南アジアであるが、原料漆液の産地は特に限定されない。ウルシ科に属する植物としては、例えば、ウルシオールを主な成分として含むもの（Ｔｏｘｉｃｏｄｅｎｄｒｏｎ ｖｅｒｎｉｃｉｆｅｒａ、産地：中国、日本、韓国）、ラッコールを主な成分として含むもの（Ｔ．ｓｕｃｃｅｄａｎｅａ、産地：ベトナム、台湾）、チチオールを主な成分として含むもの（Ｇｌｕｔａ ｕｓｉｔａｔａ、産地：ミャンマー、カンボジア、タイ）の３種類が挙げられる。

－水性溶媒による抽出－
本方法において、全タンパク質量、ウルシオールの組成の分析の際には、漆、または必要に応じてその後の処理物サンプルに対し、抽出を行うことが好ましい。抽出には、通常水性溶媒を使用するが、アセトン、低級アルコールが好ましい。低級アルコールとしては、エタノールが好ましい。抽出方法としては、例えば、撹拌抽出、超音波抽出、超臨界抽出が挙げられ、撹拌抽出が好ましいが、これらに限定されない。抽出溶媒の使用量は、漆１ｇに対し３ｍｌ以上、好ましくは５ｍｌ以上、より好ましくは６ｍＬ以上である。漆に対し５～８倍量でもよい。

抽出温度は、常温で行うこともできるが、低温が好ましく、４℃以下がより好ましい。これにより、漆に含まれるラッカーゼの変質を抑制できる。下限は１℃以上が好ましい。これにより、サンプルの凍結による変質を抑制できる。
抽出は、通常、アセトン抽出溶液の色（通常、褐色）が薄くなるまで（好ましくは、完全に消失するまで）行う。これにより、漆に含まれるウルシオールをより効率よく抽出できる。そのため、抽出は少なくとも１回行えばよいが、２回以上行うことが好ましく、３、４又は５回以上行うことがより好ましく、６又は７回以上が更に好ましい。複数回行う場合には、例えば、抽出後に得られる不溶性画分について再びアセトン及び／又は低級アルコールを添加して抽出を行う操作を複数回繰り返すことにより、ウルシオールをより完全に抽出できる。１回の抽出時間は通常１～３時間であり、複数回の抽出を８～１０時間かけておこなうことがより好ましい。抽出の際は必要に応じて撹拌してもよい。

抽出後の溶媒可溶性画分と不溶性画分の分離は、遠心分離によることができる。遠心分離により前者を上清、後者を沈殿物として分離できる。遠心分離は低温で行うことができ、好ましくは１０℃以下、より好ましくは５℃以下である。遠心分離は、高速遠心分離であることが好ましい。高速遠心分離のｇｒａｖｉｔａｔｉｏｎａｌ ｆｏｒｃｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ（ｇ ｆｏｒｃｅ、重量加速度)は、通常６，６００×ｇ以上、好ましくは６，６００×ｇ～９２，７００×ｇ、より好ましくは８，３００×ｇ～４１，２００×ｇである。これにより、上清液と沈殿物を完全に分離できる。

－水抽出－
本方法において、全タンパク質量の分析の際には、水性溶媒による抽出で得られる不溶性分画を水抽出することが好ましい。抽出方法、抽出温度は、水性溶媒の説明で例示した方法と同様である。水の使用量は、漆１ｇに対し３ｍｌ以上、好ましくは５ｍｌ以上、より好ましくは６ｍＬ以上である。漆に対し５～８倍量でもよい。抽出の際は必要に応じて撹拌してもよい。

抽出後の水可溶性画分と、水不溶性画分の分離の際は、超遠心分離を少なくとも行うことが好ましく、高速遠心分離と超遠心分離の組み合わせを行うことがより好ましい。これにより、系内に含まれる測定対象以外の成分（例えば、沈澱し難い微細粒子又は粘性を有する物質（例えば、糖類）、浮遊物等、後の処理（例えば、ＨＰＬＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析）の際に分析の障害となる物質）を除去できる。本明細書において、超遠心分離とは、ｇｒａｖｉｔａｔｉｏｎａｌ ｆｏｒｃｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ（ｇ ｆｏｒｃｅ、重量加速度)が通常１００，０００×ｇ以上、１１０，０００×ｇ以上、１２０，０００×ｇ以上、又は１３０，０００×ｇ以上、好ましくは１４０，０００×ｇ以上又は１５０，０００×ｇ以上、より好ましくは１６０，０００×ｇ以上又は１７０，０００×ｇ以上で行う遠心分離を意味する。上限は、通常は２００，０００×ｇ以下であるが特に限定されない。超遠心分離は低温で行うことができ、好ましくは１０℃以下、より好ましくは５℃以下である。高速遠心分離と超遠心分離の組み合わせを行う場合、高速遠心分離後に得られる上清を超遠心分離に供すればよい。高速遠心分離の好ましい条件は上述したとおりである。高速遠心分離、超遠心分離はそれぞれ２回以上行ってもよい。

－ウルシオールの組成の分析－
ウルシオールの組成の分析は、漆をアセトンなどの水性溶媒で抽出すること、得られるアセトン可溶性画分中のウルシオールの組成を分析すること、を少なくとも含む方法によることができる。ウルシオールは、通常、異なる側鎖を有するウルシオールの混合物であることから、側鎖ごとの含有量を分析、定量でき、好ましくは、炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖を有するウルシオール、より好ましくは、不飽和二重結合を少なくとも１つ有する炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖を有するウルシオール、更に好ましくは、不飽和二重結合を３つ有する炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖（例えば、下記式（１）中の置換基Ｒ¹）を有するウルシオール（以下、Ｃ１５－３ウルシオールと言うことがある）を、少なくとも定量、分析することが好ましい。これにより、産地の判別、品質の判別がより容易となる。さらに、Ｃ１５－３ウルシオール以外の側鎖（例えば、下記式（１）中の置換基Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴）を有するウルシオールの量を検索してもよい。

ウルシオールは、式（１）で表される。

式（１）中、Ｒは、以下のＲ¹～Ｒ⁵のいずれかである。

アセトン可溶性画分中のウルシオールの組成の分析は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）等のクロマトグラフィーによることができる。ＨＰＬＣに先立ち、アセトン溶媒の蒸留減圧留去を行うことが好ましい。

－全タンパク質量の分析－
全タンパク質量の分析は、漆をアセトン抽出すること、得られるアセトン不溶性画分中の全タンパク質量を分析すること、を少なくとも含む方法によることができ、アセトン不溶性画分を更に水抽出し、得られる水可溶性画分中の全タンパク質量を分析することが好ましい。漆に含まれるタンパク質としては、ラッカーゼ、ステラシアニン、糖タンパク質が挙げられる。水可溶性画分中の全タンパク質量の分析は、紫外吸光光度法、蛍光光度法によることができる。

－水分含量の分析－
水分含量の分析方法としては、例えば、乾燥減量法、近赤外分光法、ガスクロマトグラフ法及びカールフィッシャー法等の方法が挙げられる。これらのうち正確性、再現性、感度から、カールフィッシャー法が好ましい。カールフィッシャー法は、滴定セル内でカールフィッシャー試薬（ヨウ化物イオン、二酸化硫黄、アルコールを主成分とする電解液）が、メタノールの存在下で水と特異的に反応することを利用して、物質中の水分を定量する方法である。カールフィッシャー法は、滴定の進め方により容量滴定法及び電量滴定法に分類され、容量滴定法が好ましい。容量滴定法は、滴定フラスコに試料に適した脱水溶剤（例えば、無水分子ふるい）を入れておき、滴定剤で無水状態にしてから試料を加え、あらかじめ力価（ｍｇＨ_２Ｏ／ｍＬ）を標定しておいた滴定剤を用いて滴定を行い、その滴定量（ｍＬ）から試料中の水分含量を求める。

－産地の判定－
産地の判定は、漆の全タンパク質量、ウルシオールの組成、及び水分含量の少なくともいずれかの測定値と産地とを関連付けることにより行うことができる。例えば、産地を確認済みの基準サンプルの各測定値を別途準備し、これらと比較すればよい。具体的には、岩手県産（例えば、二戸産）であることを確認したい場合には、岩手県産の生漆、黒目漆を基準サンプルとして、測定値を準備しておけばよい。

後述の実施例によれば、以下の判定が可能である。
漆のＣ１５－３ウルシオールが、３６％以上であれば、岩手県産の漆である可能性が高いと判断され得る。一方、３６％未満であると、岩手県産の漆ではないか、又は他産の漆が混合している可能性が高いと判断される。また、Ｃ１５－３ウルシオール以外のウルシオール、例えばＣ１７の側鎖を有するウルシオールが検出される場合には、岩手県産の漆ではないか、又は他産の漆が混合している可能性が高いと判断される。不飽和二重結合を２又は１つ有する炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖（例えば、上記式（１）中の置換基Ｒ₂、Ｒ₃）を有するウルシオール（以下、Ｃ１５－２、Ｃ１５－１ウルシオールということがある）が比較的多量に含まれる場合（例えば２５％以上）、捕集又は精製中にＣ１５－３ウルシオールがラッカーゼによる酸化を受けていると推定される。すなわち、Ｃ１５－２、Ｃ１５－１ウルシオールが多く含まれる場合、重合反応の速度が低下するため塗布時の乾燥に長時間を要し、低品質とされる。また炭素原子数１７の炭化水素基である側鎖（例えば、上記式（１）中の置換基Ｒ₅）を有するウルシオール（以下、Ｃ１７ウルシオールということがある）は、国産、中国産、韓国産の漆には含まれない。Ｃ１７ウルシオールが含まれる場合には、ラオス又はベトナム産の漆が混合していると推定される。

漆の全タンパク質量が、生漆の場合、０．７％以上、黒目漆の場合、好ましくは１．０％以上（中でも１．１％以上）であれば、岩手県産の漆である可能性が高いと判断され得る。一方、、生漆の場合、０．７％未満、黒目漆の場合、好ましくは１．０％未満であると、岩手県産の漆ではないか、又は、精製あるいは保存過程で高温による蛋白質の変性の可能性、他産の漆が混合している可能性が高いと判断される。

漆が生漆の場合、水分含量が２０％以下、中でも１５～２０％であれば、岩手県産の生漆である可能性が高いと判断され得る。一方、２０％を超える場合、岩手県産ではないか、又は他産の漆が混合している可能性が高いと判断される。岩手県産の生漆と比較して、他産の生漆は、未熟練漆職人による漆木の木棺部から水が混入すること等により、水分量が多い傾向にある。

〔漆の品質判定方法〕
品質の判定は、漆の全タンパク質量、ウルシオールの組成、及び水分含量の少なくともいずれかの測定値と漆の品質とを関連付けることにより行うことができる。例えば、品質を確認済みの基準サンプルの各測定値を別途準備し、これらと比較すればよい。岩手県産の漆は高品質であることから、基準サンプルとして岩手県産の漆のこれらの測定値を用意しておき、これを基準に品質を判断できる。

後述の実施例によれば、以下の判断が可能である。
漆のＣ１５－３ウルシオールが、３６％以上であれば、高品質の漆であると判断され得る。また、漆の全タンパク質量が２．８ｍｇ／ｍＬ以上（実施例で示される条件で漆サンプル４ｇから得られる抽出液中の全タンパク質量）、すなわち、全タンパク質量の漆サンプル（生漆／黒目漆）の全重量に占める割合が０．７％以上（生漆）、１％以上又は１．１％以上（黒目漆）であれば、高品質の漆であると判断される。
漆が生漆の場合、水分含量が２０重量％以下であれば、高品質の黒目漆であると判断され得る。

製造例１（浄法寺漆）
生漆（浄法寺漆、岩手県産、産地より直接入手）約５０ｍＬをガーゼで濾過し、フラスコ、アスピレーター及びウォーターバスを備えたロータリーエバポーター（東京理化器械社製）のフラスコ中に投入し、系内をアルゴン置換して蒸気圧から４０ｈＰａ前後まで減圧し、気泡が発生しなくなるまで３５℃で蒸留を行った。（蒸留時間：１時間）。減圧蒸留後のサンプル（黒目漆）収量は、約４０ｍＬであり、透明に近く、生漆中の粒子が破壞されて均等な粘液ができ漆中のラッカーゼによるメラニン化反応が起きて、ガラス板に薄く塗った時、黒～茶色の透明な液になった。

製造例２（中国産漆）
実施例１の生漆の代わりに中国産生漆（城口生漆、中国原産、日本製）を用いたほかは実施例１と同様に行った。減圧蒸留後のサンプルは透明に近く、ガラス板に薄く塗ると黒～茶色の透明な液となり、製造例１と同様であった。

製造例３（中国産漆）
実施例１の生漆の代わりに中国産生漆（毛バ生漆、中国原産、日本製）を用いたほかは実施例１と同様に行った。減圧蒸留後のサンプルは透明に近く、ガラス板に薄く塗ると黒～茶色の透明な液となり、製造例１と同様であった。

実施例１（ウルシオールの組成の分析）
製造例１～３のそれぞれの生漆及び蒸留終了後のサンプル（黒目漆）、市販の生漆及び黒目漆（京うるし 堤浅吉漆店製）中の全タンパク質量を以下の手順で測定した。
各サンプル４ｇにアセトン３０ｍｌを添加し、４℃で２時間撹拌してアセトン抽出した。高速遠心機（日立製）で４℃、１４，４００×ｇの条件で遠心分離して沈殿物１と上清１を得た。沈殿物１を同様のアセトン抽出及び遠心分離を４回反復して行い、１２０ｍＬの無色の上清２（アセトン可溶性画分）を沈殿物１（アセトン不溶性画分）から分離した。
その後、上清１と上清２のアセトンを減圧留去して得られるサンプル（ウルシオール画分）について、ＴＬＣ分析、ＨＰＬＣ分析を行い、Ｃ１５－３ウルシオール（炭素原子数１５かつ不飽和二重結合を３つ有するアルケニル基を側鎖として有するウルシオール）の、ウルシオール全量に占める割合を測定した（図１、表１）。ＨＰＬＣの条件は、以下のとおりである。

ＨＰＬＣの条件：
カラム：ＪＵＰＩＴＥＲ（登録商標）、５μｍ、Ｃ１８、２５０×１５．０ｍｍ、０．５ｍｌサンプル ループ（フェノメネックス社製）
サンプル：ウルシオール画分（希釈サンプル）
溶出緩衝液：アセトニトリル：水：酢酸＝９０：１０：２
流速：３ｍｌ／ｍｉｎ、ＵＶ：２８０ｎｍ
定組成溶離
注入サンプル量：希釈サンプル１００μＬ（サンプル１５０μＬ及び緩衝液８５０μＬ)

緩衝液の調製：アセトニトリル１８００ｍＬをミリＱ水２００ｍＬと酢酸４０ｍＬに添加し、全２０４０ｍＬとした後、脱気した。
サンプルのスケールアップ：上記サンプル１５０μＬにアセトニトリル８５０μＬを添加し１ｍＬとした。この希釈サンプルの３００μＬを注入した。

高品質である製造例１の生漆及び黒目漆は、Ｃ１５－３ウルシオールを３６％以上含有していたのに対し、製造例２～３及び市販品の各サンプルは、３５．５％未満であった（表１）。

また、製造例２，３の生漆は、ＨＰＬＣ溶出時間が４～１２分の間に高いピークが数個見られた。これらのピークは、炭素原子数１７の側鎖を有するウルシオール、Ｃ１５－３以外の不純物（例えば、Ｃ１５－２、Ｃ１５－１ウルシオール）と推定される（図１）。

実施例２（全タンパク質量の分析）
実施例１において、上清２を分離後の沈殿物１ １．５ｇを蒸留水１５ｍＬに４℃で溶解し撹拌して懸濁液を得た。この懸濁液を、高速遠心機（日立製）で４℃、１４，４００×ｇの条件で遠心分離し、上清３と沈殿物３を得た。上清３を真空超高速遠心機（日立製）で４℃、１７４，０００×ｇの条件で遠心分離し、ＵＶ吸光度を（２８０ｎｍ）測定し、全タンパク質量を得た（表２、図２～９）。

高品質である製造例１の黒目漆は、全タンパク質量が１．１４％以上であったのに対し、製造例２～３及び市販品の各黒目漆では、１％未満であった（表２、図２～９）。また、製造例１の生漆は、全タンパク質量が０．８６％であったのに対し、製造例２～３及び市販品の各生漆では０．７％未満であった。

実施例３（浄法寺漆）
製造例１～３のそれぞれの生漆及び蒸留終了後のサンプル（黒目漆）、市販の生漆及び黒目漆（京うるし 堤浅吉漆店製）中の水分量を、カールフィッシャー水分計（メトローム社製）を用いてカールフィッシャー法に従って水分量を測定したところ、表３に示す通りであった。
なお、測定条件は以下のとおりとした。
製造例１：減圧蒸留開始時：サンプル１００ｍｇ±５ｍｇ、温度１８０℃、抽出時間１４００秒、流速６０ｍｌ／分；終了後：生漆は１４．６６重量％、 黒目漆は１．２２重量％の水分含量で測定された。
製造例２：減圧蒸留開始時：サンプル約１００ｍｇ、温度１８０℃、抽出時間１４００秒、流速６０ｍｌ／分；終了後：生漆は２８．５５重量％、黒目漆は２．６７重量％の水分含量で測定された。
製造例３：減圧蒸留開始時：サンプル約１００ｍｇ、温度１８０℃、抽出時間１４００秒、流速６０ｍｌ／分；終了後：生漆は２５．７９重量％、黒目漆は２．５２重量％の水分含量で測定された。

製造例１の生漆及び市販品の生漆は、水分含量が２０％以下であったのに対し、製造例２及び３の生漆は、２５％を超えていた。
以上の結果から、漆の全タンパク質量、ウルシオールの組成、及び、生漆の水分含量を測定することにより、産地、品質を判定できることが分かる。

Claims (9)

1. 漆の全タンパク質量、ウルシオールの組成、及び水分含量のうち少なくとも１つを分析することを含む、漆の産地判定方法。
2. ウルシオールの組成の分析は、漆をアセトン又は低級アルコール抽出すること、得られるアセトン可溶性画分中のウルシオールの組成を分析すること、を少なくとも含む、請求項１に記載の方法。
3. アセトン又は低級アルコール抽出は、無色のアセトン可溶性画分が得られるまで複数回行う、請求項２に記載の方法。
4. ウルシオールの組成の分析は、炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖を有するウルシオールの定量を少なくとも含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
5. 炭素原子数１５の炭化水素基である側鎖は、不飽和二重結合を３つ有する、請求項４に記載の方法。
6. 全タンパク質量の分析は、漆をアセトン又は低級アルコール抽出すること、得られる不溶性画分中の全タンパク質量を分析すること、を少なくとも含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
7. アセトン又は低級アルコール抽出は、無色のアセトン可溶性画分が得られるまで複数回行う、請求項６に記載の方法。
8. 前記不溶性画分をさらに水抽出し、水溶性画分を超遠心分離し、得られる水可溶性画分中の全タンパク質量を分析すること、をさらに含む、請求項６又は７に記載の方法。
9. 水分含量の分析は、カールフィッシャー法により行う、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

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