JP2021536570A - タンパク質検出のための組成物及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
配列表の正式な写しは、2018年8月7日に作成された94キロバイトのサイズを有するファイル名「81319−US−L−ORG−NAT−1_SeqList_ST25.txt」のASCII形式の配列表として、EFS−Webを介して電子的に提出され、本明細書と同時に出願される。このASCII形式の文書に含まれる配列表は本明細書の一部であり、参照によってその全体が本明細書中に援用される。
配列番号1〜26は、トランスジェニックCry1Abタンパク質の選択的な検出及び定量化のための安定同位体標識サロゲートペプチドのアミノ酸配列である。
この説明は、本発明が実施され得る種々の方法の全て、又は本発明に追加され得る特徴の全ての詳細な一覧であることを意図しない。例えば、1つの実施形態に関して説明される特徴を他の実施形態に組み込むことができ、特定の実施形態に関して説明される特徴をその実施形態から削除することができる。したがって、本発明は、本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載される任意の特徴又は特徴の組合わせが排除又は省略され得ることを企図する。さらに、本明細書で示唆される種々の実施形態に対する多数の変化及び追加は、本開示に照らして当業者には明らかであり、本発明から逸脱するものではない。そのため、以下の記載は本発明のいくつかの特定の実施形態を説明することが意図され、それらの置換、組合わせ及び変化の全てを徹底的に特定することは意図されない。
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「a」、「an」及び「the」は、1つ又は2つ以上を意味することができる。したがって、例えば、「植物」への言及は、単一の植物又は複数の植物を意味することができる。
MRMベースのアッセイは予め決定されたペプチドセットの選択に頼り、選択された各サロゲートペプチドに対して特異的な断片化/遷移イオンに依存する。適切なサロゲート又はシグネチャーペプチドを選択するためにいくつかの基準が必要とされる。第1に、標的タンパク質カセットを構成するタンパク質を選択しなければならない。第2に、各標的タンパク質に対して、良好な質量分析応答を提示し、標的タンパク質又はその特異的な修飾(すなわち、翻訳後修飾)を独特に同定するペプチドを同定しなければならない。第3に、質量分析に適した各ペプチドに対して、最適なシグナル強度を提供し、サロゲートペプチドを、サンプル中に存在する他のペプチド種から独特に区別する遷移イオンを同定しなければならない。これらの基準は、MRMベースのアッセイを実施するのに不可欠である。
標的タンパク質を直接モニターするための高感度の方法の構築は、トランスジェニック植物の組織、例えば、葉、穀粒、根及び花粉組織などからの生体マトリックスにおける定量的評価のために非常に望ましい。多重反応モニタリング(MRM)質量分析は、タンデム質量分析(MS/MS/)と連結された液体クロマトグラフィ(LC)によって所与のサンプル内の複数のタンパク質を定量化するために有望なプラットフォームとして出現した。MRMアッセイはタンパク質分解性ペプチドの配列特異的なタンデムMS断片化を利用し、そのため、別個の標的タンパク質に対する高度に選択性及び特異的な測定を提供する。これらの進歩にもかかわらず、低含量のタンパク質又は分離に影響を与える特異的な物理化学特性を有するものにおいて正確な定量的測定を得ることは依然として困難なままである。
Claims (55)
- 1つ又は複数のトランスジェニック植物からの1つ又は複数の生体サンプル中のトランスジェニックタンパク質及び非トランスジェニックタンパク質の混合物において、Cry1Abタンパク質、eCry3.1Abタンパク質、mCry3Aタンパク質、Vip3タンパク質、二重突然変異体5−エノールピルビルシキミ酸−3−リン酸シンターゼ(dmEPSPS)タンパク質、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(PAT)タンパク質及びホスホマンノースイソメラーゼ(PMI)タンパク質からなる群から選択される標的トランスジェニックタンパク質を、質量分析アッセイで選択的に検出又は定量化する機能を果たす標識サロゲートペプチドであって、前記サロゲートペプチドが、標識と、GSAQGIEGSIR(配列番号1)、IVAQLGQGVYR(配列番号2)、TLSSTLYR(配列番号3)、DVSVFGQR(配列番号4)、TYPIR(配列番号5)、TVSQLTR(配列番号6)、WYNTGLER(配列番号7)、EWEADPTNPALR(配列番号8)、VWGPDSR(配列番号9)、APMFSWIHR(配列番号10)、WGFDAATINSR(配列番号11)、NQAISR(配列番号12)、IEEFAR(配列番号13)、SGFSNSSVSIIR(配列番号14)、LSHVSMFR(配列番号15)、EIYTNPVLENFDGSFR(配列番号16)、LEGLSNLYQIYAESFR(配列番号17)、YNQFR(配列番号18)、YNDLTR(配列番号19)、SPHLMDILNSITIYTDAHR(配列番号20)、SAEFNNIIPSSQITQIPLTK(配列番号21)、QGFSHR(配列番号22)、MDNNPNINECIPYNCLSNPEVEVLGGER(配列番号23)、ELTLTVLDIVSLFPNYDSR(配列番号24)、RPFNIGINNQQLSVLDGTEFAYGTSSNLPSAVYR(配列番号25)、SGTVDSLDEIPPQNNNVPPR(配列番号26)、TDVTDYHIDQV(配列番号27)、AVNELFTSSNQIGLK(配列番号28)、ITQLPLTK(配列番号29)、GLDSSTTK(配列番号30)、QCAGIRPYDGR(配列番号31)、IEFVPAEVTFEAEYDLER(配列番号32)、ITQLPLVK(配列番号33)、MTADNNTEALDSSTTK(配列番号34)、VYIDK(配列番号35)、DGGISQFIGDK(配列番号36)、LITLTCK(配列番号37)、ELLLATDLSNK(配列番号38)、FEELTFATETSSK(配列番号39)、EVLFEK(配列番号40)、TASELITK(配列番号41)、DVSEMFTTK(配列番号42)、LLGLADIDYTSIMNEHLNK(配列番号43)、IDFTK(配列番号44)、TDTGGDLTLDEILK(配列番号45)、DIMNMIFK(配列番号46)、ALYVHK(配列番号47)、VNILPTLSNTFSNPNYAK(配列番号48)、ITSMLSDVIK(配列番号49)、QNLQLDSFSTYR(配列番号50)、DSLSEVIYGDMDK(配列番号51)、MIVEAKPGHALIGFEISNDSITVLK(配列番号52)、VYFSVSGDANVR(配列番号53)、NQQLLNDISGK(配列番号54)、VESSEAEYR(配列番号55)、YMSGAK(配列番号56)、DGSPADILDELTELTELAK(配列番号57)、VYEAK(配列番号58)、LDAINTMLR(配列番号59)、GKPSIHLK(配列番号60)、DENTGYIHYEDTNNNLEDYQTINK(配列番号61)、DNFYIELSQGNNLYGGPIVHFYDVSIK(配列番号62)、LLCPDQSEQIYYTNNIVFPNEYVITK(配列番号63)、SQNGDEAWGDNFIILEISPSEK(配列番号64)、NAYVDHTGGVNGTK(配列番号65)、LDGVNGSLNDLIAQGNLNTELSK(配列番号66)、IANEQNQVLNDVNNK(配列番号67)、YEVTANFYDSSTGEIDLNK(配列番号68)、QNYALSLQIEYLSK(配列番号69)、QLQEISDK(配列番号70)、LLSPELINTNNWTSTGSTNISGNTLTLYQGGR(配列番号71)、YVNEK(配列番号72)、QNYQVDK(配列番号73)、MAGAEEIVLQPIK(配列番号74)、FPVEDAK(配列番号75)、EISGTVK(配列番号76)、ILLLAALSEGTTVVDNLLNSEDVHYMLGALR(配列番号77)、DFELPAPPRPVRPVTQI(配列番号78)、LGLGSTLYTHLLK(配列番号79)、MSPER(配列番号80)、HGGWHDVGFWQR(配列番号81)、NAYDWTVESTVYVSHR(配列番号82)、TEPQTPQEWIDDLER(配列番号83)、AAGYK(配列番号84)、YPWLVAEVEGVVAGIAYAGPWK(配列番号85)、RPVEIRPATAADMAAVCDIVNHYIETSTVNFR(配列番号86)、ENAAGIPMDAAER(配列番号87)、ALAILK(配列番号88)、SALDSQQGEPWQTIR(配列番号89)、GSQQLQLKPGESAFIAANESPVTVK(配列番号90)、FEAKPANQLLTQPVK(配列番号91)、STLLGEAVAK(配列番号92)、LINSVQNYAWGSK(配列番号93)、HNSEIGFAK(配列番号94)、VLCAAQPLSIQVHPNK(配列番号95)、TALTELYGMENPSSQPMAELWMGAHPK(配列番号96)、LSELFASLLNMQGEEK(配列番号97)及びQGAELDFPIPVDDFAFSLHDLSDK(配列番号98)からなる群から選択されるアミノ酸配列とを含む、標識サロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、安定同位体標識(SIL)アミノ酸の取込みによって標識化される、請求項1に記載の標識サロゲートペプチド。
- 前記SILアミノ酸が、リジン、イソロイシン、バリン又はアルギニンである、請求項2に記載の標識サロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが前記混合物中のCry1Abタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、GSAQGIEGSIR(配列番号1)、IVAQLGQGVYR(配列番号2)、TLSSTLYR(配列番号3)、DVSVFGQR(配列番号4)、TYPIR(配列番号5)、TVSQLTR(配列番号6)、WYNTGLER(配列番号7)、EWEADPTNPALR(配列番号8)、VWGPDSR(配列番号9)、APMFSWIHR(配列番号10)、WGFDAATINSR(配列番号11)、NQAISR(配列番号12)、IEEFAR(配列番号13)、SGFSNSSVSIIR(配列番号14)、LSHVSMFR(配列番号15)、EIYTNPVLENFDGSFR(配列番号16)、LEGLSNLYQIYAESFR(配列番号17)、YNQFR(配列番号18)、YNDLTR(配列番号19)、SPHLMDILNSITIYTDAHR(配列番号20)、SAEFNNIIPSSQITQIPLTK(配列番号21)、QGFSHR(配列番号22)、MDNNPNINECIPYNCLSNPEVEVLGGER(配列番号23)、ELTLTVLDIVSLFPNYDSR(配列番号24)、RPFNIGINNQQLSVLDGTEFAYGTSSNLPSAVYR(配列番号25)及びSGTVDSLDEIPPQNNNVPPR(配列番号26)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の標識サロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、GIEGSIR(配列番号99)、EGSIR(配列番号100)、AQLGQGVYR(配列番号101)、GQGVYR(配列番号102);SSTLYR(配列番号103)、STLYR(配列番号104)、SVFGQR(配列番号105)、FGQR(配列番号106)、PIR、TY、SQLTR(配列番号107)、QLTR(配列番号108)、NTGLER(配列番号109)、YNTGLER(配列番号110)、PTNPALR(配列番号111)、DPTNPALR(配列番号112)、GPDSR(配列番号113)、VW、HR、SWIHR(配列番号114)、ATINSR(配列番号115)、DAATINSR(配列番号116)、AISR(配列番号117)、ISR、EFAR(配列番号118)、EEFAR(配列番号119)、SNSSVSIIR(配列番号120)、SSVSIIR(配列番号121)、SMFR(配列番号122)、VSMFR(配列番号123)、ENFDGSFR(配列番号124)、GSFR(配列番号125)、YAESFR(配列番号126)、LEG、NQFR(配列番号127)、QFR、DLTR(配列番号128)、NDLTR(配列番号129)、TIYTDAHR(配列番号130)、YTDAHR(配列番号131)、PLTK(配列番号132)、SAEFNNII(配列番号133)、FSHR(配列番号134)、GFSHR(配列番号135)、EVLGGER(配列番号136)、GGER(配列番号137)、FPNYDSR(配列番号138)、PNYDSR(配列番号139)、PSAVYR(配列番号140)、YR、PPR、及びSGTVDSLDE(配列番号141)からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項4に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがアミノ酸配列SAEFNNIIPSSQITQIPLTK(配列番号21)を含み、且つ、アミノ酸配列PLTK(配列番号132)又はSAEFNNII(配列番号133)からなる遷移イオンを生成する、請求項4に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがeCry3.1Abタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、TDVTDYHIDQV(配列番号27)、AVNELFTSSNQIGLK(配列番号28)、ITQLPLTK(配列番号29)、GLDSSTTK(配列番号30)、QCAGIRPYDGR(配列番号31)及びIEFVPAEVTFEAEYDLER(配列番号32)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、TDYHIDQV(配列番号142)、DYHIDQV(配列番号143)、TSSNQIGLK(配列番号144)、SSNQIGLK(配列番号145)、QLPLTK(配列番号146)、TQLPLTK(配列番号147)、DSSTTK(配列番号148)、SSTTK(配列番号149)、PYDGR(配列番号150)、DGR、IEF、及びLERからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項7に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがアミノ酸配列TDVTDYHIDQV(配列番号27)を含み、且つ、アミノ酸配列TDYHIDQV(配列番号142)又はDYHIDQV(配列番号143)からなる遷移イオンを生成する、請求項7に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがmCry3Aタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、ITQLPLVK(配列番号33)、MTADNNTEALDSSTTK(配列番号34)及びVYIDK(配列番号35)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、QLPLVK(配列番号151)、TQLPLVK(配列番号152)、ALDSSTTK(配列番号153)、EALDSSTTK(配列番号154)、YIDK(配列番号155)及びIDKからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項10に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがVip3Aタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、DGGISQFIGDK(配列番号36)、LITLTCK(配列番号37)、ELLLATDLSNK(配列番号38)、FEELTFATETSSK(配列番号39)、EVLFEK(配列番号40)、TASELITK(配列番号41)、DVSEMFTTK(配列番号42)、LLGLADIDYTSIMNEHLNK(配列番号43)、IDFTK(配列番号44)、TDTGGDLTLDEILK(配列番号45)、DIMNMIFK(配列番号46)、ALYVHK(配列番号47)、VNILPTLSNTFSNPNYAK(配列番号48)、ITSMLSDVIK(配列番号49)、QNLQLDSFSTYR(配列番号50)、DSLSEVIYGDMDK(配列番号51)、MIVEAKPGHALIGFEISNDSITVLK(配列番号52)、VYFSVSGDANVR(配列番号53)、NQQLLNDISGK(配列番号54)、VESSEAEYR(配列番号55)、YMSGAK(配列番号56)、DGSPADILDELTELTELAK(配列番号57)、VYEAK(配列番号58)、LDAINTMLR(配列番号59)、GKPSIHLK(配列番号60)、DENTGYIHYEDTNNNLEDYQTINK(配列番号61)、DNFYIELSQGNNLYGGPIVHFYDVSIK(配列番号62)、LLCPDQSEQIYYTNNIVFPNEYVITK(配列番号63)、SQNGDEAWGDNFIILEISPSEK(配列番号64)、NAYVDHTGGVNGTK(配列番号65)、LDGVNGSLNDLIAQGNLNTELSK(配列番号66)、IANEQNQVLNDVNNK(配列番号67)、YEVTANFYDSSTGEIDLNK(配列番号68)、QNYALSLQIEYLSK(配列番号69)、QLQEISDK(配列番号70)、LLSPELINTNNWTSTGSTNISGNTLTLYQGGR(配列番号71)、YVNEK(配列番号72)及びQNYQVDK(配列番号73)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、SQFIGDK(配列番号156)、GDK、TLTCK(配列番号157)、TCK、ATDLSNK(配列番号158)、LATDLSNK(配列番号159)、TFATETSSK(配列番号160)、FATETSSK(配列番号161)、FEK、LFEK(配列番号162)、SELITK(配列番号163)、ASELITK(配列番号164)、SEMFTTK(配列番号165)、DVS、IMNEHLNK(配列番号166)、MNEHLNK(配列番号167)、DFTK(配列番号168)、FTK、TLDEILK(配列番号169)、LTLDEILK(配列番号170)、MNMIFK(配列番号171)、NMIFK(配列番号172)、YVHK(配列番号173)、HK、VNI、VNIL(配列番号174)、SMLSDVIK(配列番号175)、TSMLSDVIK(配列番号176)、DSFSTYR(配列番号177)、LDSFSTYR(配列番号178)、IYGDMDK(配列番号179)、VIYGDMDK(配列番号180)、SNDSITVLK(配列番号181)、MIV、SGDANVR(配列番号182)、SVSGDANVR(配列番号183)、LLNDISGK(配列番号184)、LNDISGK(配列番号185)、SSEAEYR(配列番号186)、ESSEAEYR(配列番号187)、SGAK(配列番号188)、MSGAK(配列番号189)、TELTELAK(配列番号190)、DGSPADI(配列番号191)、YEAK(配列番号192)、EAK、NTMLR(配列番号193)、AINTMLR(配列番号194)、PSIHLK(配列番号195)、HLK、DYQTINK(配列番号196)、NK、DNF、DNFY(配列番号197)、PNEYVITK(配列番号198)、LLC、SPSEK(配列番号199)、LEISPSEK(配列番号200)、NAY、DHTGGVNGTK(配列番号201)、GNLNTELSK(配列番号202)、NTELSK(配列番号203)、LNDVNNK(配列番号204)、NDVNNK(配列番号205)、YE、DLNK(配列番号206)、QIEYLSK(配列番号207)、LQIEYLSK(配列番号208)、SDK、QEISDK(配列番号209)、YQGGR(配列番号210)、TLYQGGR(配列番号211)、NEK、VNEK(配列番号212)、DK、及びVDKからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項12に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがdmEPSPSタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、MAGAEEIVLQPIK(配列番号74)、FPVEDAK(配列番号75)、EISGTVK(配列番号76)及びILLLAALSEGTTVVDNLLNSEDVHYMLGALR(配列番号77)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、PIK、EIVLQPIK(配列番号213)、PVEDAK(配列番号214)、VEDAK(配列番号215)、SGTVK(配列番号216)、GTVK(配列番号217)、ILLLAA(配列番号218)、及びHYMLGALR(配列番号219)からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項14に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがPATタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、DFELPAPPRPVRPVTQI(配列番号78)、LGLGSTLYTHLLK(配列番号79)、MSPER(配列番号80)、HGGWHDVGFWQR(配列番号81)、NAYDWTVESTVYVSHR(配列番号82)、TEPQTPQEWIDDLER(配列番号83)、AAGYK(配列番号84)、YPWLVAEVEGVVAGIAYAGPWK(配列番号85)及びRPVEIRPATAADMAAVCDIVNHYIETSTVNFR(配列番号86)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、DFE、DF、YTHLLK(配列番号220)、THLLK(配列番号221)、PER、SPER(配列番号222)、GFWQR(配列番号223)、VGFWQR(配列番号224)、STVYVSHR(配列番号225)、SHR、TEPQT(配列番号226)、DLER(配列番号227)、GYK、AGYK(配列番号228)、GPWK(配列番号229)GIAYAGPWK(配列番号230)、TSTVNFR(配列番号231)、及びNFRからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項16に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがアミノ酸配列LGLGSTLYTHLLK(配列番号79)を含み、且つ、アミノ酸配列YTHLLK(配列番号220)又はTHLLK(配列番号221)からなる遷移イオンを生成する、請求項16に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがPMIタンパク質を選択的に検出又は定量化し、且つ、ENAAGIPMDAAER(配列番号87)、ALAILK(配列番号88)、SALDSQQGEPWQTIR(配列番号89)、GSQQLQLKPGESAFIAANESPVTVK(配列番号90)、FEAKPANQLLTQPVK(配列番号91)、STLLGEAVAK(配列番号92)、LINSVQNYAWGSK(配列番号93)、HNSEIGFAK(配列番号94)、VLCAAQPLSIQVHPNK(配列番号95)、TALTELYGMENPSSQPMAELWMGAHPK(配列番号96)、LSELFASLLNMQGEEK(配列番号97)及びQGAELDFPIPVDDFAFSLHDLSDK(配列番号98)からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドが、PMDAAER(配列番号232)、GIPMDAAER(配列番号233)、AILK(配列番号234)、LK、PWQTIR(配列番号235)、GEPWQTIR(配列番号236)、ANESPVTVK(配列番号237)、PVTVK(配列番号238)、LTQPVK(配列番号239)、PVK、GEAVAK(配列番号240)、LGEAVAK(配列番号241)、QNYAWGSK(配列番号242)、NYAWGSK(配列番号243)、NSEIGFAK(配列番号244)、HN、VLCAAQ(配列番号245)、PNK、WMGAHPK(配列番号246)、TALTE(配列番号247)、NMQGEEK(配列番号248)LNMQGEEK(配列番号249)、SLHDLSDK(配列番号250)、及びHDLSDK(配列番号251)からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する遷移イオンを生成する、請求項19に記載のサロゲートペプチド。
- 前記ペプチドがアミノ酸配列SALDSQQGEPWQTIR(配列番号89)を含み、且つ、アミノ酸配列PWQTIR(配列番号235)又はGEPWQTIR(配列番号236)からなる遷移イオンを生成する、請求項19に記載のサロゲートペプチド。
- 前記Cry1Abタンパク質が配列番号259のアミノ酸配列を含む、請求項4に記載のサロゲートペプチド。
- 前記Cry1Abタンパク質がイベントBt11からのものである、請求項22に記載のサロゲートペプチド。
- 前記eCry3.1Abタンパク質が配列番号260のアミノ酸配列を含む、請求項7に記載のサロゲートペプチド。
- 前記eCry3.1Abタンパク質がイベント5307からのものである、請求項24に記載のサロゲートペプチド。
- 前記mCry3Aタンパク質が配列番号261のアミノ酸配列を含む、請求項10に記載のサロゲートペプチド。
- 前記mCry3Aタンパク質がイベントMIR604からのものである、請求項26に記載のサロゲートペプチド。
- 前記Vip3Aタンパク質が配列番号262のアミノ酸配列を含む、請求項12に記載のサロゲートペプチド。
- 前記Vip3Aタンパク質がイベントMIR162からのものである、請求項28に記載のサロゲートペプチド。
- 前記dmEPSPSタンパク質が配列番号263のアミノ酸配列を含む、請求項14に記載のサロゲートペプチド。
- 前記dmEPSPSタンパク質がイベントGA21からのものである、請求項30に記載のサロゲートペプチド。
- 前記PATタンパク質が配列番号264のアミノ酸配列を含む、請求項16に記載のサロゲートペプチド。
- 前記PATタンパク質がイベントBt11、59122、TC1507、DP4114又はT25からのものである、請求項32に記載のサロゲートペプチド。
- 前記PMIタンパク質が配列番号265又は配列番号266のアミノ酸配列を含む、請求項19に記載のサロゲートペプチド。
- 前記PMIタンパク質がイベントMIR162、イベントMIR604、イベント5307又はイベント3272からのものである、請求項34に記載のサロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニックタンパク質の混合物が、Cry1Abタンパク質、eCry3.1Abタンパク質、mCry3Aタンパク質、Vip3Aタンパク質、dmEPSPSタンパク質、PATタンパク質及びPMIタンパク質からなる群から選択される少なくとも2つのトランスジェニックタンパク質を含む、請求項1〜35のいずれか一項に記載のサロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニックタンパク質の混合物が、Cry1Abタンパク質、eCry3.1Abタンパク質、mCry3Aタンパク質、Vip3Aタンパク質、dmEPSPSタンパク質、PATタンパク質及びPMIタンパク質を含む、請求項36に記載の標識サロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニックタンパク質の混合物がさらに、Cry1A.105タンパク質(配列番号267)、Cry2Abタンパク質(配列番号268)、Cry1Fタンパク質(配列番号269)、Cry34タンパク質(配列番号270)及びCry35タンパク質(配列番号271)からなる群から選択される少なくとも1つのトランスジェニックタンパク質を含む、請求項37に記載の標識サロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニック植物が、コーン、大豆、綿、米、小麦、キャノーラ及びナスからなる群から選択される、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニックコーン植物が、イベントBt11、イベント5307、イベントMIR604及びイベントGA21からなる群から選択されるトランスジェニックコーンイベントを含む、請求項39に記載のサロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニックコーン植物が、イベントBt11、イベント5307、MIR604及びイベントGA21を含む、請求項40に記載のサロゲートペプチド。
- 前記トランスジェニックコーン植物がさらに、イベント3272、イベントMON89034、イベントDP4114、イベント1577又はイベント59122を含む、請求項41に記載のサロゲートペプチド。
- 前記生体サンプルが、葉組織、種子、子実、花粉、又は根組織からのものである、請求項1に記載のサロゲートペプチド。
- 前記生体サンプルが、イベントBt11からのCry1Abタンパク質、イベント5307からのeCry3.1Abタンパク質、イベントMIR604からのmCry3Aタンパク質、イベントGA21からのEPSPSタンパク質、Bt11、59122、DP4114、TC1507若しくはT25からのPATタンパク質、又はイベントMIR162、イベントMIR604、イベント5307若しくはイベント3272からのPMIタンパク質を含む、請求項43に記載のサロゲートペプチド。
- 前記生体サンプルがさらに、イベントMON89034からのCry1A.105タンパク質、イベント1507からのCry1Fタンパク質又はイベント59122からのCry34及びCry35タンパク質を含む、請求項44に記載のサロゲートペプチド。
- 請求項1に記載の少なくとも2つの標識サロゲートペプチドを含むアッセイカセット。
- 標的トランスジェニックタンパク質及び非トランスジェニックタンパク質の混合物を含むトランスジェニック植物からの複合生体サンプル中の1つ又は複数の標的トランスジェニックタンパク質を同時に検出又は定量化する方法であって、
a.トランスジェニック植物から生体サンプルを得るステップと、
b.前記生体サンプルからタンパク質を抽出し、タンパク質の混合物を含む抽出物をもたらすステップと、
c.前記ステップbの抽出物中の非トランスジェニック不溶性タンパク質の量を低減し、濃縮可溶性タンパク質の抽出物をもたらすステップと、
d.前記ステップcの抽出物中の前記可溶性タンパク質を消化して、ペプチド断片を含む抽出物をもたらすステップであって、前記ペプチド断片が、各標的トランスジェニックタンパク質に特異的な少なくとも1つのサロゲートペプチドを含む、ステップと、
e.前記ステップdの抽出物中の前記ペプチド断片を濃縮するステップと、
f.請求項1に記載の1つ又は複数の標識サロゲートペプチドを添加するステップであって、各標識サロゲートペプチドが、前記標的トランスジェニックタンパク質の各サロゲートペプチドと同じアミノ酸配列を有し、添加される標識サロゲートペプチドの数が、前記混合物中の標的トランスジェニックタンパク質の数に等しい、ステップと、
g.前記混合物中の非サロゲートペプチドの量を低減することによって、前記サロゲートペプチド及び前記標識サロゲートペプチドを濃縮するステップと、
h.前記ステップgからのペプチド断片混合物を液体クロマトグラフィにより分離するステップと、
i.前記ステップhから得られたペプチド断片混合物を質量分析により分析するステップであって、標識サロゲートペプチドの遷移イオン断片の検出が、前記サロゲートペプチドが由来する標的トランスジェニックタンパク質の存在を示す、ステップと、任意選択的に、
j.前記ステップiの遷移イオン断片から発生された質量分析シグナルと、標識サロゲートペプチドの遷移イオンにより発生された質量分析シグナルとを比較することによって、前記生体サンプル中の標的トランスジェニックタンパク質の量を計算するステップと
を含む方法。 - 前記標的トランスジェニックタンパク質が、Cry1Abタンパク質、eCry3.1Abタンパク質、mCry3Aタンパク質、Vip3タンパク質、二重突然変異体5−エノールピルビルシキミ酸−3−リン酸シンターゼ(dmEPSPS)タンパク質、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(PAT)タンパク質又はホスホマンノースイソメラーゼ(PMI)タンパク質である、請求項47に記載の方法。
- 前記標的トランスジェニックタンパク質がCry1Abであり、前記標識サロゲートペプチドがアミノ酸配列SAEFNNIIPSSQITQIPLTK(配列番号21)を含み、且つ、アミノ酸配列PLTK(配列番号132)又はSAEFNNII(配列番号133)からなる遷移イオンを生成する、請求項48に記載の方法。
- 前記Cry1Ab標的タンパク質が、アミノ酸配列PLTK(配列番号132)からなる遷移イオン断片から発生される質量分析シグナルを比較することによって前記生体サンプル中で定量化される、請求項49に記載の方法。
- 前記標的トランスジェニックタンパク質がeCry3.1Abタンパク質であり、前記標識サロゲートペプチドがアミノ酸配列TDVTDYHIDQV(配列番号27)を含み、且つ、アミノ酸配列TDYHIDQV(配列番号142)又はDYHIDQV(配列番号143)からなる遷移イオンを生成する、請求項47に記載の方法。
- 前記eCry3.1Abトランスジェニックタンパク質が、アミノ酸配列からなる遷移イオン断片から発生される質量分析シグナルを比較することによって前記生体サンプル中で定量化される、請求項51に記載の方法。
- 前記標識サロゲートペプチドがアミノ酸配列DGGISQFIGDK(配列番号36)を含み、且つ、アミノ酸配列SQFIGDK(配列番号156)又はGDKからなる遷移イオンを生成する、請求項38に記載の方法。
- 前記標識サロゲートペプチドがアミノ酸配列LGLGSTLYTHLLK(配列番号79)を含み、且つ、アミノ酸配列YTHLLK(配列番号220)又はTHLLK(配列番号221)からなる遷移イオンを生成する、請求項38に記載の方法。
- 前記標識サロゲートペプチドがアミノ酸配列SALDSQQGEPWQTIR(配列番号89)を含み、且つ、アミノ酸配列PWQTIR(配列番号235)又はGEPWQTIR(配列番号236)からなる遷移イオンを生成する、請求項38に記載の方法。
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