JP2021532164A - ウイルス送達用ポリマーナノ粒子組成物及びその製造方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、有効成分として、疾患を治療または予防するためのウイルスを含むウイルス含有医薬組成物とその製造方法に関するものである。【選択図】図１

Description

本発明は、有効成分として、疾患を治療又は予防するためのウイルスを含むウイルス含有医薬組成物とその製造方法に関するものである。
ベクターは、ヒト細胞への治療のための遺伝子の効率的な送達の手段として一般に使用されている。ベクターは、ウイルスベクターと非ウイルスベクターに分けられる。
ウイルスベクターは、ヒト細胞でよく発現し、浸透力と付着力が良好であるという利点があるため、バイオ医薬品製造業者によって広く使用しているが、安全性に潜在的なリスクがある。代表的なウイルスベクターは、レトロウイルスとアデノウイルスであり、癌や様々な難病の治療に効率的に利用するために、ベクターは改変されているか、主にアデノウイルスに基づいてキメラウイルスが開発されている。ベクターの改変には、ウイルス自体のタンパク質の改変又はベクターへの免疫調節物質の取り込みが含まれ得る。しかし、静脈投与の場合、ウイルスベクターは肝臓への蓄積により肝毒性を引き起こし、さらに血液から迅速に除去されて腫瘍への送達率が低下するため、主に局所投与にのみ使用されている。
対照的に、非ウイルスベクターは、ウイルス性ベクターよりも効率が低いが、インビボでの安全性の点で副作用が少なく、経済性の点で製造コストが低いという利点がある。非ウイルスベクターの中で最も代表的なものは、カチオン性脂質と核酸の複合体（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）及びポリカチオン性（ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ）ポリマーと核酸の複合体（ｐｏｌｙｐｌｅｘ）である。このようなカチオン性脂質又はポリカチオン性ポリマーは、核酸との静電相互作用により複合体を形成することによって、核酸を安定化し、細胞内送達を増加させるため、その様々な研究が行われてきた。しかし、結果は、そのような非ウイルスベクターは、十分な効果を得るために必要な量で使用した場合、ウイルスベクターよりも毒性は低いものの、深刻な毒性を引き起こすため、医薬品としての使用には適していないことが示された。
現在、ウイルスと非ウイルス成分の利点を組み合わせたハイブリッドベクターが開発されている。アデノウイルスのＣＡＲ−依存性及び免疫原性の制限を克服するために提示された一つの戦略は、ＣＡＲ−媒介のエンドサイトーシスを必要とせずにアデノウイルスの表面を通過できるポリマーによる改質である。カチオン性ポリマー又は脂質によるアデノウイルスの改質は、ウイルス−媒介の遺伝子送達を強化させる。しかし、このような戦略は、注入されたポリマー／脂質改質ウイルスは、非標的末梢組織に迅速に移動するため、標的となる腫瘍−特異的ウイルス−媒介の遺伝子送達は行わない。さらに、ウイルス薬は、カチオン性非ウイルスベクターを使用して体内に導入されると、腫瘍への送達効率が著しく低下するという特徴がある。それは、カチオン性ポリマーとの非特異的結合のために、ウイルスが目的の組織に移動できないためである。したがって、ウイルスの送達能及び安定性を強化するための製剤及びその製造方法を開発する必要がある。
一方、特許文献１は、多量の難溶性薬物を可溶化し、水溶液中で良好な安定性有する混合ポリマーナノ粒子組成物を提供するために、親水性ブロックと疎水性ブロックからなる両親媒性ブロック共重合体と、カルボン酸末端基を含有するポリ乳酸誘導体とを含み、体液又は水溶液中でポリマーナノ粒子を形成できる混合ポリマーナノ粒子組成物、及び前記混合ポリマーナノ粒子組成物からなるポリマーナノ粒子内部に難溶性薬物が含まれた薬学的組成物を開示している。
韓国公開特許公報第２００３−００３２８９７号
本発明者らは、腫瘍溶解性ウイルスとしてのアデノウイルスなどウイルスの送達効率を高めるために鋭意研究した結果、野生型のアデノウイルスを有機溶媒に溶解させて両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩と混合して、単相システム下で、エマルジョン化させて複合体を形成することで、アデノウイルスをポリマーナノ粒子内に封入する場合、アデノウイルスの安定性、安全性及び目的とした生体組織内発現効率を高めることができることを確認し、本発明を完成した。
したがって、本発明の目的は、ウイルスを体内に効果的に送達することができる医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、ウイルスを体内に効果的に送達することができる医薬組成物の製造方法を提供することである。
本発明の一実施形態による組成物は、ナノ粒子構造体を含むウイルス送達用組成物として、有効成分としてウイルス；両親媒性ブロック共重合体；及びポリ乳酸塩を含み、前記ウイルスは、前記両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩が形成するナノ粒子構造体内に封入されていることを特徴とする。
また、本発明の一実施形態による組成物の製造方法は、以下の工程を含むことができる：
（ａ）ウイルスを水性溶媒に溶解させる工程；
（ｂ）両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩を、それぞれ有機溶媒に溶解させる工程；及び
（ｃ）工程（ａ）及び（ｂ）の溶液を混合して、エマルジョンを形成する工程
本発明による組成物は、体内に投与されると、ポリ乳酸塩と両親媒性ブロック共重合体を使用することによって、外部からウイルスを単離し、これにより、血液又は検液中のウイルスの安全性を高めることができる。また、本発明による組成物は、ウイルスを目標の生体組織内に効率的に送達することができる。さらに、前記両親媒性ブロック共重合体は、良好な生分解性及び生体適合性を有する。
本発明の一実施形態による製造方法によって製造されたポリマーナノ粒子送達体の概略的な構造を図式化した図である。 本発明の一実施形態によるポリマーナノ粒子送達体の肝組織における遺伝子吸収率を確認するために、発光測定イメージングシステムによってルシフェラーゼ遺伝子の発現を測定した写真である。 本発明の一実施形態によるポリマーナノ粒子送達体の標的生体組織における発現効率を確認するために、Ｅｘ ｖｉｖｏ形態の発光測定イメージングシステムによってルシフェラーゼ遺伝子の発現で生成される発光を測定した写真である。 本発明の一実施形態によるポリマーナノ粒子送達体の肝組織における毒性を比較したグラフである。 本発明の一実施形態によるポリマーナノ粒子送達体の肝組織における抗癌効果を比較したグラフである。
以下、本発明を詳細に説明する。
ウイルス
本発明のウイルス送達用組成物に使用される前記ウイルスは、疾患を治療又は予防するためのウイルスであり、最終的に製造される組成物の有効成分である。
一実施形態では、前記疾患の治療用ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルス（ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ｖｉｒｕｓ）であってもよい。腫瘍溶解性ウイルスの例は、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）及び水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）からなる群から選ばれた一つ以上である。一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルスである。本発明の一実施形態で使用されたアデノウイルスは、ルシフェラーゼを含み、それは画像化によって確認することができる。
前記治療用ウイルスは、対象の体内で数種類の治療遺伝子を発現することができ、特定の分子量、タンパク質、生物活性又は治療分野に関して制限されない。前記予防用ウイルスは、対象の体内で標的疾患に対する免疫を誘発することができる。本発明の一例による疾患予防用ウイルスを含む組成物は、ウイルス自体による免疫誘発を低減し、標的細胞を指定又は拡大し、再投与時にウイルスに対する過免疫反応を低減し、それにより、数回の接種によって有効な効果を得るという利点を提供することができる。
本発明の一例では、ウイルスは、最終的に製造される組成物の全重量に対して、好ましくは０．００１〜１０重量％、より具体的には０．０１〜５重量％で含まれる方が良い。前記ウイルスの量が０．００１重量％未満の場合、薬物に比べて送達体の使用量が多くなりすぎて、送達体による副作用が生じる可能性があり、１０重量％を超えると、ナノ粒子径が大きくなりすぎて、ナノ粒子の安定性が低下し、フィルター滅菌時の損失率が高くなる可能性がある。
両親媒性ブロック共重合体
本発明のウイルス送達用組成物に使用される前記両親媒性ブロック共重合体は、親水性Ａブロック及び疎水性Ｂブロックを含むＡ−Ｂ型ブロック共重合体であってもよい。前記Ａ−Ｂ型ブロック共重合体は、水相で疎水性Ｂブロックがコア（内壁）を形成し、親水性Ａブロックがシェル（外壁）を形成するコア−シェルタイプであり、ポリマーの生体内分布を制御するか、前記送達体が細胞内への送達効率を高めることができる。
前記親水性Ａブロックは、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド及びその誘導体からなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。より具体的には、親水性Ａブロックは、モノメトキシポリエチレングリコール、モノアセトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリエチレンとプロピレングリコールの共重合体及びポリビニルピロリドンからなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。一実施形態では、前記親水性Ａブロックは、数平均分子量が２００〜５０，０００ダルトンであり、より具体的には１，０００〜２０，０００ダルトン、さらにより具体的には１，０００〜５，０００ダルトンであってもよい。
また、必要に応じて、両親媒性ブロック共重合体とポリ乳酸塩で形成されたポリマーナノ粒子送達体の体内分布を制御するか、前記ナノ粒子送達体の細胞への送達効率を高めるために、親水性Ａブロックの末端に、特定組織や細胞に到達することができる官能基、リガンド、又は細胞内送達を促進することができる官能基を化学的に結合することができる。前記官能基やリガンドは、単糖類、多糖類、ビタミン、ペプチド、タンパク質及び細胞表面受容体に対する抗体からなる群から選ばれる１種以上であってもよい。より具体的には、前記官能基又はリガンドは、アニスアミド（ａｎｉｓａｍｉｄｅ）、ビタミンＢ９（葉酸）、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ガラクトース、ラクトース、マンノース、ヒアルロン酸、ＲＧＤペプチド、ＮＧＲペプチド、トランスフェリン、トランスフェリン受容体に対する抗体などからなる群から選ばれた１種以上であってもよい。
前記疎水性Ｂブロックは、生体適合性及び生分解性ポリマーであり、一実施例で、ポリエステル、ポリ無水物、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル及びポリホスファゼンからなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。より具体的には、前記疎水性Ｂブロックは、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリラクチドとグリコリドの共重合体、ポリラクチドとポリジオキサン−２−オンの共重合体、ポリラクチドとポリカプロラクトンの共重合体及びポリグリコリドとポリカプロラクトンの共重合体からなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。別の実施形態では、前記疎水性Ｂブロックは、数平均分子量が５０〜５０，０００ダルトン、より具体的には２００〜２０，０００ダルトン、さらにより具体的には１，０００〜５，０００ダルトンを有していてもよい。また、別の実施形態では、疎水性Ｂブロックの疎水性を増加させることによってナノ粒子の安定性を向上させるために、前記疎水性Ｂブロックの末端ヒドロキシ基をトコフェロール、コレステロール、及びＣ10-24脂肪酸からなる群から選ばれる一つ以上で修飾することができる。
前記親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）を含む両親媒性ブロック共重合体の含量は、組成物全体乾燥重量に対して、１〜９９．９８重量％であり、具体的には、１０〜９９．８重量％、さらに具体的には２０〜８０重量％である。前記両親媒性ブロック共重合体の含量が１重量％未満のとき、ナノ粒子径が大きくなりすぎて、ナノ粒子の安定性が低下され、フィルター滅菌時損失率が大きくなる可能性があり、含量が９９．９８重量％を超えると、組み込むことができるウイルスの含量が少なくなりすぎる可能性がある。
さらに、前記両親媒性ブロック共重合体における親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）の組成比は、共重合体重量に対して、親水性ブロック（Ａ）が３０〜８０重量％、具体的には４０〜７０重量％範囲であってもよい。親水性ブロック（Ａ）の割合が３０重量％未満のとき、ポリマーの水への溶解度が低く、ナノ粒子の形成が困難になることがある。したがって、共重合体がナノ粒子を形成するのに十分な水への溶解性を有することができるように、親水性ブロック（Ａ）の量が３０重量％以上であることが有利である。親水性ブロック（Ａ）の量が８０重量％を超えると、ポリマーナノ粒子の安定性が低下し、複合体を可溶化するための組成物として使用することが困難になる場合がある。したがって、ナノ粒子の安定性を考慮すると、親水性ブロック（Ａ）の量が８０重量％以下であることが有利である。
ポリ乳酸塩
本発明のウイルス送達用組成物に使用される前記ポリ乳酸塩（例：ＰＬＡＮａ）は、ナノ粒子のコア（内壁）に分布し、コアの疎水性を強化することによってナノ粒子を安定化するように作用し、同時に、体内の細網内皮系（ＲＥＳ）を効果的に回避する。つまり、ポリ乳酸塩に含まれるカルボン酸アニオンは、ポリ乳酸よりも効果的にウイルスと結合し、ポリマーナノ粒子の表面電位を低下させる。それにより、ポリ乳酸塩を含まないポリマーナノ粒子に比べて、表面電位の正電荷が低下され、細網内皮系によってあまり捕捉されず、標的部位（例えば、癌細胞、炎症細胞など）に効率的に送達され得る。
前記両親媒性ブロック共重合体とは別の成分として含まれているポリ乳酸塩は、ナノ粒子の内壁の成分であり、数平均分子量が５００〜５０，０００ダルトン、具体的に１，０００〜１０，０００ダルトンであってもよい。ポリ乳酸塩の分子量が５００ダルトン未満のとき、疎水性が低くなりすぎて、ポリ乳酸塩がナノ粒子のコア（内壁）に容易に存在しにくくなる可能性がある。ポリ乳酸塩の分子量が５０，０００ダルトンを超えると、ポリマーナノ粒子の粒径が多くなりすぎる可能性がある。
前記ポリ乳酸塩は、両親媒性ブロック共重合体１００重量部に対して、１〜５００重量部、具体的には２０〜４００重量部、より具体的には４０〜３００重量部で使用することができる。ポリ乳酸塩の含量が両親媒性ブロック共重合体１００重量部に対して５００重量部を超えると、ナノ粒子の粒径が大きくなり、滅菌膜によるろ過が困難になる場合があり、１重量部未満のとき、目的とする効果を得ることが困難である。
一実施形態では、本発明の組成物は、ウイルス１重量部に対して、両親媒性ブロック共重合体を１〜２，０００重量部、ポリ乳酸塩を１〜１，０００重量部で含有することができる。好ましくは、両親媒性ブロック共重合体を５〜１，０００重量部、より好ましくは１０〜５００重量部で含有することができる。好ましくは、ポリ乳酸塩を５〜５００重量部、より好ましくは１０〜２５０重量部で含有することができる。
一実施形態では、カルボン酸−金属（例：ナトリウム）の末端と反対側の前記ポリ乳酸塩の末端を、ヒドロキシ、アセトキシ、ベンゾイルオキシ、デカノイルオキシ、パルミトイルオキシ及びＣ1-2アルコキシからなる群から選ばれた一つで置換されていてもよい。
好ましい一実施形態として、本発明のポリ乳酸塩は、下記式（１）〜（６）の化合物からなる群から選ばれる一つ以上であってもよい：
ＲＯ−ＣＨＺ−［Ａ］n−［Ｂ］m−ＣＯＯＭ （１）
（式中、Ａは、−ＣＯＯ−ＣＨＺ−であり；Ｂは、−ＣＯＯ−ＣＨＹ−、−ＣＯＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−又は−ＣＯＯ−ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2−であり；Ｒは、水素原子、アセチル、ベンゾイル、デカノイル、パルミトイル、メチル、又はエチル基であり；ＺとＹは、それぞれ、水素原子、メチル又はフェニル基であり；Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉで；ｎは１〜３０の整数であり；ｍは０〜２０の整数である。）
ＲＯ−ＣＨＺ−［ＣＯＯ−ＣＨＸ］p−［ＣＯＯ−ＣＨＹ’］q−ＣＯＯ−ＣＨＺ−ＣＯＯＭ （２）
（式中、Ｘは、メチル基であり；Ｙ’は、水素原子又はフェニル基であり；ｐは、０〜２５の整数、ｑは０〜２５の整数であるが、ｐ＋ｑは、５〜２５の整数であり；Ｒは、水素原子、アセチル、ベンゾイル、デカノイル、パルミトイル、メチル又はエチル基であり；Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉであり；Ｚは、水素原子、メチル又はフェニル基である。）
ＲＯ−ＰＡＤ−ＣＯＯ−Ｗ−Ｍ’ （３）
（式中、Ｗ−Ｍ’は、
Figure 2021532164
 であり；ＰＡＤは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体及びＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群から選ばれるものであり；Ｒは、水素原子、又はアセチル、ベンゾイル、デカノイル、パルミトイル、メチル又はエチル基であり；Ｍは、独立してＮａ、Ｋ、又はＬｉである。）
Ｓ−Ｏ−ＰＡＤ−ＣＯＯ−Ｑ （４）
（式中、Ｓは
Figure 2021532164
 であり；Ｌは−ＮＲ1−又は−Ｏ−（ここで、Ｒ1は、水素原子又はＣ1-10アルキルである）であり；Ｑは、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、又は−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5であり；ａは、０〜４の整数であり；ｂは、１〜１０の整数であり；Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉであり；ＰＡＤは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、及びＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群から選ばれる一つ以上である。）
Figure 2021532164
 （式中、Ｒ’は、−ＰＡＤ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−ＯＭ（ここで、ＰＡＤは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群から選ばれるものであり、Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉである）であり；ａは１〜４の整数である。）
ＹＯ−［−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＸ）a−Ｏ−］m−Ｃ（Ｏ）−Ｒ−Ｃ（Ｏ）−［−Ｏ−（ＣＨＸ’）b−Ｃ（Ｏ）−］n−ＯＺ （６）
（式中、Ｘ及びＸ’は、独立して、水素、Ｃ1-10アルキル又はＣ6-20アリールであり；Ｙ及びＺは、独立して、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉであり；ｍ及びｎは、独立して、０〜９５の整数であるが、５＜ｍ＋ｎ＜１００であり；ａ及びｂは、独立して、１〜６の整数であり；Ｒは、−（ＣＨ2）k−、Ｃ2-10二価アルケニル、Ｃ6-20二価アリール又はこれらの組み合わせであり、ここで、ｋは、０〜１０の整数である。）
前記ポリ乳酸塩は、式（１）又は式（２）の化合物であることが好ましい。
カチオン性化合物
一実施形態では、本発明のウイルス送達用組成物は、カチオン性化合物をさらに含むことができる。
即ち、本発明において、前記両親媒性ブロック共重合体及び前記ポリ乳酸塩は、ウイルスが内部に封入されたナノ粒子構造体を形成し、一実施形態によれば、このナノ粒子構造体は、カチオン性化合物をさらに含んでもよい。
前記カチオン性化合物は、静電気的作用にウイルスの負電荷である外皮と結合し、それによってナノ粒子構造体内のウイルスの安定化に寄与することができる。前記ウイルスは、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩の疎水性部分と同時に結合することができる。
前記カチオン性化合物は、静電相互作用によってウイルスと複合体を形成できる任意のタイプの化合物を含み、例えば、カチオン性脂質及びポリマーの種類であってもよい。
前記カチオン性脂質は、例えば、それに限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジアシル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＴＡＰ）、１，２−ジアシル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＡＰ）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’，Ｎ’−トリメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＴＣ−コレステロール）、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、３β−［Ｎ−（Ｎ’−モノメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＭＣ−コレステロール）、３β−［Ｎ−（アミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＡＣ−コレステロール）、コレステリルオキシプロパン−１−アミン（ＣＯＰＡ）、Ｎ−（Ｎ’−アミノエタン）カルバモイルプロパン酸トコフェロール（ＡＣ−トコフェロール）及びＮ−（Ｎ’−メチルアミノエタン）カルバモイルプロパン酸トコフェロール（ＭＣ−トコフェロール）からなる群から選ばれた一つ又は二つ以上の組み合わせであってもよい。このようなカチオン性脂質を使用する場合、カチオン性脂質によって誘発される毒性を低減するために、分子内のカチオン密度が可能な限り低いポリカチオン性脂質を使用することが好ましく、より具体的には、水溶液中で正電荷を示すことができる分子内の官能基の数は一つであってもよい。
より好ましい一実施形態では、前記カチオン性脂質は、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’，Ｎ’−トリメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＴＣ−コレステロール）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、３β［Ｎ−（Ｎ’−モノメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＭＣ−コレステロール）、３β［Ｎ−（アミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＡＣ−コレステロール）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、及びＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＴＭＡ）からなる群から選ばれた１種以上であってもよい。
また、前記カチオン性脂質は、水溶液中で正電荷を示すことができるいくつかの官能基を有する脂質であってもよい。具体的には、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、１，２−ジアシル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＴＡＰ）、１，２−ジアシル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＡＰ）からなる群から選ばれた一つ以上であってもよい。
具体的な実施形態では、前記カチオン性脂質は、以下の式（Ａ）で表すことができる。
Figure 2021532164
 （式中、ｎとｍ及びｌは、それぞれ０〜１２であるが、１≦ｎ＋ｍ＋ｌ≦１２であり、ａ、ｂ及びｃは、それぞれ１〜６であり、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、それぞれ独立して、水素又はＣ11-25の飽和及び不飽和炭化水素であるが、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の少なくとも一つが、Ｃ11-25の飽和及び不飽和炭化水素である。）
好ましくは、ｎ、ｍ及びｌは、独立して０〜７であり、１≦ｎ＋ｍ＋ｌ≦７であってもよい。
好ましくは、ａ、ｂ及びｃは、２〜４であってもよい。
好ましくは、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、それぞれ独立して、ラウリル（ｌａｕｒｙｌ）、ミリスチル（ｍｙｒｉｓｔｙｌ）、パルミチル（ｐａｌｍｉｔｙｌ）、ステアリル（ｓｔｅａｒｙｌ）、アラキジル（ａｒａｃｈｉｄｙｌ）、ベヘニル（ｂｅｈｅｎｙｌ）、リグノセリル（ｌｉｇｎｏｃｅｒｙｌ）、セロチル（ｃｅｒｏｔｙｌ）、ミリストレイル（ｍｙｒｉｓｔｏｌｅｙｌ）、パルミトレイル（ｐａｌｍｉｔｏｌｅｙｌ）、サピエニル（ｓａｐｉｅｎｙｌ）、オレイル（ｏｌｅｙｌ）、リノレイル（ｌｉｎｏｌｅｙｌ）、アラキドニル（ａｒａｃｈｉｄｏｎｙｌ）、エイコサペンタエニル（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｙｌ）、エルシル（ｅｒｕｃｙｌ）、ドコサヘキサエニル（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｙｌ）、及びセロチル（ｃｅｒｏｔｙｌ）からなる群から選ばれたものであってもよい。
前記カチオン性脂質の具体的な例には、１，６−ジオレオイルトリエチレンテトラアミド（Ｎ，Ｎ’−（（エタン−１，２−ジイルビス（アザンジイル））ビス（エタン−２，１−ジイル））ジオレアミド）、１，８−ジリノレオイルテトラエチレンペンタアミド（（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−Ｎ、Ｎ’−（（（アザンジイルビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（アザンジイル））ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オクタデカ−９，１２−ジエナミド））、１，４−ジミリストイルジエチレントリアミド（（９Ｚ，９’Ｚ）−Ｎ、Ｎ’−（アザンジイルビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（テトラデカ−９−エナミド））、１，１０−ジステアロイルペンタエチレンヘキサミド（Ｎ，Ｎ’−（３，６，９,１２−テトラアザテトラデカン−１，１４−ジイル）ジステアロアミド）、及び１，１０−ジオレオイルペンタエチレンヘキサミド（Ｎ，Ｎ’−（３，６，９,１２−テトラアザテトラデカン−１，１４−ジイル）ジオレアミド）からなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。
一方、カチオン性ポリマーは、キトサン、グリコールキトサン、プロタミン、ポリリシン、ポリアルギニン、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）、ポリエチレンイミン、デキストラン、ヒアルロン酸、アルブミン、ポリマーポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリアミン及びポリビニルアミン（ＰＶＡｍ）からなる群から選ばれてもよく、好ましくは、ポリマーポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリアミン及びポリビニルアミン（ＰＶＡ）からなる群から選ばれる１種以上のことであってもよい。
本発明で使用されるカチオン性化合物は、最終的に製造される全組成物の重量に対して、０．０１〜５０重量％、具体的には０．１〜２０重量％で使用され得る。前記カチオン性化合物の含量が０．０１重量％未満のとき、ウイルスを封入するのに十分ではない可能性がある。前記カチオン性化合物の含量が５０重量％を超えると、ナノ粒子の粒径が大きくなりすぎて、ナノ粒子の安定性が低下し、フィルター滅菌時の損失率が高くなる可能性がある。
具体的な実施形態では、前記カチオン性化合物の使用される量は、ウイルス１×１０10ＶＰに対して、０．１〜４０μｇであり、具体的には０．５〜３５μｇ、より具体的には１〜３０μｇで、さらに具体的には１〜２５μｇ、最も具体的には６〜２４μｇである。前記カチオン性化合物の量が０．１μｇ未満のとき、カチオン性化合物がウイルスを十分に封入できない可能性があるので、カチオン性化合物とウイルスとの静電結合により十分な量のウイルスを含む複合体を形成できるように、カチオン性化合物の量が０．１μｇ以上であることが有利である。反面、量が４０μｇを超えると、毒性を生じる可能性があるため、４０μｇ以下にした方が良い。
二価又は三価金属イオン
一実施形態では、本発明のウイルス送達用組成物は二価又は三価金属イオンをさらに含むことができる。
前記二価又は三価の金属イオンは、好ましくは、カルシウム（Ｃａ2+）、マグネシウム（Ｍｇ2+）、バリウム（Ｂａ2+）、クロム（Ｃｒ3+）、鉄（Ｆｅ3+）、マンガン（Ｍｎ2+）、ニッケル（Ｎｉ2+）、銅（Ｃｕ2+）、亜鉛（Ｚｎ2+）又はアルミニウム（Ａｌ3+）などから選ばれることができる。
前記二価又は三価の金属イオンは、硫酸塩、塩酸塩、炭酸塩、リン酸塩及び水酸化物の形態でポリマーナノ粒子組成物に添加されてもよい。好ましくは、塩化カルシウム（ＣａＣｌ2）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、塩化亜鉛（ＺｎＣｌ2）、塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ3）、塩化鉄（ＦｅＣｌ3）、炭酸カルシウム（ＣａＣＯ3）、炭酸マグネシウム（ＭｇＣＯ3）、リン酸カルシウム（Ｃａ3（ＰＯ4）2）、リン酸マグネシウム（Ｍｇ3（ＰＯ4）2）、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ4）、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ4）、水酸化カルシウム（Ｃａ（ＯＨ）2）、水酸化マグネシウム（Ｍｇ（ＯＨ）2）、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）3）、水酸化亜鉛（Ｚｎ（ＯＨ）2）又はこれらの混合物が添加されてもよい。
前記二価又は三価の金属イオンの当量を調節することにより、ポリマーナノ粒子内部に封入されている薬物の放出速度を調節することができる。具体的に、二価又は三価の金属イオンが、ポリ乳酸塩のカルボキシル基に相当する量と１当量以下の量でポリマーナノ粒子組成物に含まれる場合、ポリ乳酸塩のカルボキシル末端基と結合される数が少なく、薬物の放出速度が速くなり、１当量以上含まれていると、ポリ乳酸塩のカルボキシル末端基と結合されるその数が多く、薬物の放出速度が遅くなる。従って、血液内の薬物の放出速度を増大させるために、より少ない当量の金属イオンを使用することができ、薬物の放出速度を遅延させるために、より多くの当量の金属イオンを使用することができる。
また、二価又は三価金属イオンは、前記ポリ乳酸塩のカルボキシル末端基の当量に対して、０．０１〜１０当量、０．１〜５当量、０．２〜２当量で含まれてもよい。
ウイルス送達用組成物の製造方法
本発明の別の側面によれば、（ａ）ウイルスを水性溶媒に溶解させる工程；（ｂ）両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩をそれぞれ有機溶媒に溶解させる工程；及び（ｃ）工程（ａ）及び（ｂ）の溶液を混合して、エマルジョンを形成する工程；を含むウイルス送達用組成物の製造方法が提供される。
前記工程（ａ）〜（ｃ）は、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩の複合体を製造するために、ウイルスを水性溶媒に、そして、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩を有機溶媒に溶解し、これらを混合して、単相系（ｍｏｎｏｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｅｍ）のエマルジョンを製造する工程である。
前記工程（ａ）において、使用される水性溶媒は、蒸留水、注射用水、又は緩衝液であってもよく、好ましい緩衝液は、リン酸緩衝液であってもよい。
前記工程（ｂ）において、使用される有機溶媒は、水混和性有機溶媒であってもよく、例えば、Ｃ1〜Ｃ5の低級アルコール（メタノール、エタノール、プロパノールなどを含むが、これらに限定されない）、アセトン、酢酸エチル又はこれの混合物であってもよい。
前記工程（ｂ）において、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩のそれぞれを有機溶媒に溶解し、この時点で使用される有機溶媒は、アセトン、エタノール、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、酢酸エチル及び酢酸からなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。好ましくは、エタノール、酢酸エチル及び酢酸からなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。前記有機溶媒の使用量は特に制限がなく、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩の溶解のために適切に調節して使用することができる。
本発明の一実施形態では、前記工程（ｂ）はカチオン性化合物を前記有機溶媒に溶解させる工程をさらに含むことができる。
前記工程（ｃ）において、工程（ａ）で得られたウイルス水溶液、工程（ｂ）で得られた両親媒性ブロック共重合体有機溶液及びポリ乳酸塩有機溶液、並びに任意にカチオン性化合物有機溶液を混合して、エマルジョンを形成する。前記ウイルスの水溶液と両親媒性ブロック共重合体、ポリ乳酸塩及び任意にカチオン性化合物との間の混合比は特別な制限がない。例えば、体積に基づいて、ウイルス水溶液対比両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩、及び任意にカチオン性化合物有機溶液の割合（両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩、及び任意にカチオン性化合物有機溶液／ウイルス水溶液）が１〜３０、より具体的に２〜１０であってもよいが、これに限定されない。前記溶液は、当業界に知らされた適切な混合手段を介して混合され、そのような方法の例は、超音波処理装置などであってもよい。
更なる実施形態として、本発明によるウイルス送達用組成物の製造方法は、（ｄ）工程（ｃ）で得られた混合物から有機溶媒を除去する工程をさらに含むことができる。
好ましくは、前記工程（ｄ）において、有機溶媒は、ポリマーナノ粒子の水溶液を得るために、様々な除去方法、例えば、有機溶媒の蒸発などによって、工程（ｃ）で製造された安定化されたナノ粒子を含む混合物から除去される。また、浸透圧膜を使用する透析によって、有機溶媒を希釈及び除去することができる。
好ましい実施様態として、本発明の製造方法は、（ｅ）前記工程（ｄ）の後に、二価又は三価金属イオンを添加する工程をさらに含むことができる。
さらに、好ましい実施形態として、本発明の製造方法は、（ｆ）前記工程（ｅ）の後に、凍結乾燥補助剤を加えて凍結乾燥する工程をさらに含むことができる。
更なる追加の実施形態として、本発明の製造方法は、前記工程（ｆ）の凍結乾燥前に、前記工程（ｅ）で得られたポリマーナノ粒子水溶液を滅菌フィルターで滅菌する工程をさらに含むことができる。
本発明で使用される凍結乾燥補助剤は、凍結乾燥された組成物がケーキ形態を維持することを可能にするため、又は両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩などの組成物を凍結乾燥後、再溶解（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）する過程で短時間に均一に溶解することを助けるために添加する。具体的には、ラクトース、マンニトール、ソルビトール及びスクロースからなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。前記凍結乾燥補助剤の含量は、凍結乾燥組成物全乾燥重量に対して、１〜９０重量％、より具体的には４〜２０重量％である。
本発明の一実施形態による製造方法により、ウイルス、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩は、単相系である水相にエマルジョン化される。単相系とは、製造工程上、一つの溶媒又は混合可能な溶媒を使用することにより相分離を含まない系を意味する。単相系を用いた場合、疎水性結合によりナノ粒子状の複合体が効果的に形成され、凍結乾燥により水溶液を除去する過程で結合力が高まり、最終的に製造されるポリマーナノ粒子の収率が大幅に向上される。また、このような製造方法は有機溶媒の使用量が比較的少ないため、環境に優しく、再現性が高く、製造が容易であり、ウイルス複合体形成により疎水性薬物粒子に変化することにより、大量生産に有利である。さらに、有機溶媒の量が比較的少ないため、生体内適用時、有機溶媒による毒性を低減する効果が期待できる。
また、本発明の一実施形態により製造された組成物において、ウイルスは、前記両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩によって形成されるナノ粒子構造体内に封入された状態を維持するので、血中又は体液内における安全性及び安定性が向上された。
別の実施形態として、本発明は、前記製造方法によって製造することができるポリマーナノ粒子を含むウイルス送達用組成物に関するものである。本発明の一実施形態の製造方法によれば、前記ウイルスとポリ乳酸塩は、疎水性相互作用を介して結合して複合体を形成し、この複合体が両親媒性ブロック共重合体によって形成されたナノ粒子構造内部に封入されたポリマーナノ粒子構造体が製造される。このように本発明の一実施形態による製造方法によって製造されたポリマーナノ粒子送達体の概略的な構造を図１に示した。前記組成物の構成成分としてのウイルス、両親媒性ブロック共重合体などに関する事項は前記記載と同じである。
本発明の一実施形態は、前記ポリマーナノ粒子が水溶液中でより向上された安定性を有するために、二価又は三価金属イオンをさらに含むことができる。二価又は三価金属イオンは、ポリマーナノ粒子内のポリ乳酸塩のカルボキシル末端基と結合する。前記二価又は三価金属イオンは、ポリマーナノ粒子内のポリ乳酸カルボキシル末端基の一価金属カチオンとの置換反応によって金属イオン結合を形成する。前記形成された金属イオン結合は、より強い結合力を持ち、より安定したポリマーナノ粒子を形成させる。
好ましい一実施形態では、前記組成物中のナノ粒子の粒径は、好ましくは１０〜３００ｎｍであり、より一層具体的には１０〜１５０ｎｍである。また、前記ナノ粒子の標準電荷は、好ましくは−４０〜１０ｍＶであり、より一層具体的に−３０〜０ｍＶである。前記粒径及び標準電荷は、ナノ粒子構造の安定性及び構成成分の含量、並びにウイルスのインビボ吸収度及び安定性の観点から最も好ましい。
本発明による両親媒性ブロック共重合体ナノ粒子構造体に封入されたウイルス−ポリ乳酸塩を含む組成物は、血管、筋肉、皮下、経口、骨、経皮又は局所組織などの経路で投与することができ、このような投与経路に適した経口又は非経口投与のための様々な製剤に製剤化することができる。前記経口投与製剤の例には、錠剤、カプセル、粉末、液剤などが含まれ得、非経口投与製剤の例には、点眼剤、注射剤などが含まれ得る。好ましい一実施形態として、前記組成物は、注射用の製剤、より好ましくは静脈注射用の製剤であってもよい。例えば、本発明による組成物を凍結乾燥する場合、注射用蒸留水、０．９％の生理食塩水及び５％デキストロース水溶液などで再構成することにより、注射用製剤の形態で製造することができる。
本発明の一実施形態は、ウイルスを、両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩が形成するナノ粒子構造体内部に封入し、これを必要とする対象に投与する工程を含む、対象の疾患を予防又は治療する方法を提供する。
本発明は、以下の実施例を参照して、より詳細に説明される。しかし、実施例は、本発明を設目するためだけのものであり、本発明の範囲は、それによっていかなる方法でも限定されない。
比較例１ アデノウイルスベクター
配列番号１のルシフェラーゼ遺伝子を発現する野生型のアデノウイルス１×１０10ＶＰをＰＢＳ１０μＬに溶解して、組成物（以下、‘Ｎａｋｅｄ Ａｄ’という）を製造した。比較例１で得られた組成物は、下記表１に示す組成物の通りである。
Figure 2021532164
比較例２ アデノウイルスプラスミドＤＮＡ（ＡｄｐＤＮＡ）／１，６−ジオレオイルトリエチレンテトラミド（ｄｉｏ−ＴＥＴＡ）／ｍＰＥＧ−ＰＬＡトコフェロール（２ｋ−１．７ｋ）／ジオレイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む組成物の製造
配列番号１のルシフェラーゼ遺伝子を発現する３５，０００塩基対を有するプラスミドＤＮＡ１μｇを蒸留水４．３５μＬに溶解した溶液、ｄｉｏＴＥＴＡ１０．４μｇをエタノール１０．４μＬに溶解した溶液、ＤＯＰＥ１０．４μｇをエタノール１０．４μＬに溶解した溶液、ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−トコフェロール（２ｋ−１．７ｋ）２０μｇをエタノール０．２μＬに溶解した溶液、ＰＬＡ−Ｎａ２０μｇをエタノール２μＬに溶解した溶液を順に混合し、さらに超音波装置（バースタイプ）で１０分間混合した。製造された複合乳濁液を１口丸底フラスコに入れ、ロータリーエバポレーターで減圧蒸留して、エタノールを選択的に除去し、ＡｄｐＤＮＡ／ｄｉｏＴＥＴＡ／ＤＯＰＥ／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−トコフェロール（２ｋ−１．７ｋ）／ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋを含む組成物（以下、‘ＡｄＤＮＡ／ＳＥＮＳ’という）を製造した。製造された組成物を０．４５μｍの親水性フィルターでろ過した後、４℃で保管し、その後の実験手順では、１０×ＰＢＳを最終体積の１倍とした。比較例２で得られた組成物は、下記表２の組成物の通りである。
Figure 2021532164
実施例１ アデノウイルス／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ（２ｋ−１．７ｋ）／ＰＬＡ−Ｎａ（１．７ｋ）を含む組成物の製造
配列番号１のルシフェラーゼ遺伝子を発現する野生型のアデノウイルス１×１０10ＶＰをＰＢＳ１０μＬに溶解し、ｍＰＥＧ−ＰＬＡ（２ｋ−１．７ｋ）４０μｇをエタノール０．４μＬに溶解した溶液、ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋ１００μｇをエタノール１０μＬに溶解した溶液を順に混合した後、さらに超音波装置（バースタイプ）で１０分間混合した。製造した複合乳濁液を１口丸底フラスコに入れ、ロータリーエバポレーターで減圧蒸留して、エタノールを選択的に除去し、Ａｄ／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ（２ｋ−１．７ｋ）／ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋを含む組成物（以下、‘Ａｄ−ｖＳＥＮＳ’という）を製造した。製造された組成物を０．４５μｍの親水性フィルターでろ過した後、４℃で保管し、その後の実験手順では、１０×ＰＢＳを最終体積の１倍とした。実施例１で得られた組成物は、下記表３の組成物の通りである。
Figure 2021532164
実施例２ アデノウイルス／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ（２ｋ−１．７ｋ）／ＰＬＡ−Ｎａ（１．７ｋ）／ＣａＣｌ2を含む組成物の製造
配列番号１のルシフェラーゼ遺伝子を発現する野生型のアデノウイルス１×１０10ＶＰをＰＢＳ１０μＬに溶解し、ｍＰＥＧ−ＰＬＡ（２ｋ−１．７ｋ）４０μｇをエタノール０．４μＬに溶解した溶液、ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋ１００μｇをエタノール１０μＬに溶解した溶液を順に混合した後、さらに超音波装置（バースタイプ）で１０分間混合した。製造した複合乳濁液を１口丸底フラスコに入れ、ロータリーエバポレーターで減圧蒸留して、エタノールを選択的に除去し、Ａｄ／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ（２ｋ−１．７ｋ）／ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋ含有組成物を製造した。以後、ＣａＣｌ2 ３．３μｇをＰＢＳ１．７μＬに溶解した溶液を加えた（以下、‘Ａｄ−ｖＳＥＮＳ＋ＣａＣｌ2’という）。製造された組成物を０．４５μｍの親水性フィルターでろ過した後、４℃に保管し、その後の実験手順では、１０×ＰＢＳを最終体積の１倍とした。比較例２で得られた組成物は、下記表４の組成物の通りである。
Figure 2021532164
実施例３ アデノウイルス／１，６−ジオレオイルトリエチレンテトラミド（ｄｉｏ−ＴＥＴＡ）／ＰＬＡ−Ｎａ（１．７ｋ）／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−トコフェロール（２ｋ−１．７ｋ）を含む組成物の製造
配列番号１のルシフェラーゼ遺伝子を発現する野生型のアデノウイルス１×１０10ＶＰをＰＢＳ１００μＬに溶解し、ｄｉｏ−ＴＥＴＡ２０μｇを２μＬに溶解した溶液、ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋ１００μｇをエタノール２μＬに溶解した溶液、ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−トコフェロール（２ｋ−１．７ｋ）１００μｇをエタノール２μＬに溶解した溶液を順に混合した後、ウイルスが含まれた１００μＬＰＢＳと最終的に混合して、Ａｄ／ｄｉｏ−ＴＥＴＡ／ＰＬＡ−Ｎａ_１．７ｋ／ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−トコフェロール（２ｋ−１．７ｋ）を含む組成物（以下、‘Ａｄ−ｖＳＥＮＳ＿２’という）を製造した。実施例３で得られた組成物は下記表５の通りである。
Figure 2021532164
実験例１ 剤形化による組成物のサイズ及び表面電荷の比較
剤形によるナノ粒子形成の有無を確認するために、サイズ及び表面電荷を測定した。動的光散乱（ＤＬＳ）方法を使用して粒子径と表面電荷を測定した。具体的には、Ｈｅ−Ｎｅレーザーを光源とし、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ９０（ＭＡＬＶＥＲＮ社製）を取扱説明書に従って操作した。剤形化による比較例１〜２、実施例１〜３のナノ粒子径及び表面電荷を下記表６に示した。
Figure 2021532164
実験例２ 剤形化による肝組織への取り込み率の比較
ルシフェラーゼ発現遺伝子を用いてインビボ遺伝子発現レベルを測定した。インビボ生物発光値は、ＩＶＩＳスペクトルインビボイメージングシステム方法を利用して測定した。ＩＶＩＳ ＬＵＭＩＮＡ ＩＩＩ機器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）を取扱説明書に従って操作した。剤形化による比較例１、実施例１〜３の肝臓取り込み値と比率を下記表７及び図２に示した。
Figure 2021532164
実験例３ 剤形化による組織内発現効率の比較
ルシフェラーゼ発現遺伝子を用いてエクスビボ遺伝子発現レベルを測定した。エクスビボ生物発光値は、ＩＶＩＳスペクトルインビボイメージングシステム方法を利用して測定した。ＩＶＩＳ ＬＵＭＩＮＡ ＩＩＩ機器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）を取扱説明書に従って操作した。比較例１〜２及び実施例１の各器官の遺伝子発現の分布を剤形化に従って図３に示した。
実験例４ 剤形化による肝組織内の毒性の比較
すべての試験物質は、静脈投与（ｉ．ｖ．）によって１回投与された。肝組織内の毒性の比較試験の場合、投与７２時間後に血清を抽出して分析した。剤形による比較例１及び実施例３の肝組織内の毒性の比較値を図４に示した。
実験例５ 剤形化による免疫化後の抗癌効能の比較
すべての試験物質は、静脈投与（ｉ．ｖ．）により１回投与された。免疫化による比較のために、実験を分割し、免疫化された試験群と免疫化されていない対照群について実施した。免疫化反応のために、ウイルスを２週間間隔で４週間合計２回投与した。比較例１及び実施例３の場合、２日間隔で１１日間合計５回投与した。陰性対照物質の場合、同じ用量及び用法で投与した。静脈投与の場合、動物を慎重に保定装置に入れた後、２６ゲージ針付き注射器を用いて尾静脈に静脈内投与した。剤形化による比較例１及び実施例３の抗癌効能を示す腫瘍サイズの変化値を下記図５に示した。
Figure 2021532164

Claims (15)

  1. 有効成分として、ウイルス；両親媒性ブロック共重合体；及びポリ乳酸塩；を含み、
    前記ウイルスは、前記両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩が形成するナノ粒子構造体内部に封入されていることを特徴とするウイルス送達用組成物。
  2. 前記ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルス（ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ｖｉｒｕｓ）であることを特徴とする請求項１に記載のウイルス送達用組成物。
  3. 前記腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）及び水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）からなる群から選ばれた一つ以上である請求項２に記載のウイルス送達用組成物。
  4. 前記両親媒性ブロック共重合体は、親水性Ａブロック及び疎水性Ｂブロックを含むＡ−Ｂ型ブロック共重合体であり、
    前記親水性Ａブロックは、モノメトキシポリエチレングリコール、モノアセトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリエチレンとプロピレングリコールとの共重合体及びポリビニルピロリドンからなる群から選ばれる一つ以上であり、
    前記疎水性Ｂブロックは、ポリエステル、ポリ無水物、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル及びポリホスファゼンからなる群から選ばれる一つ以上である請求項１に記載のウイルス送達用組成物。
  5. 前記疎水性Ｂブロックの末端ヒドロキシ基が、トコフェロール、コレステロール、及びＣ10-24の脂肪酸からなる群から選ばれる一つ以上で修飾されている請求項４に記載のウイルス送達用組成物。
  6. 前記ポリ乳酸塩が、下記式（１）〜（６）の化合物からなる群から選ばれる一つ以上である請求項１に記載のウイルス送達用組成物：
    ＲＯ−ＣＨＺ−［Ａ］n−［Ｂ］m−ＣＯＯＭ （１）
    （式中、Ａは、−ＣＯＯ−ＣＨＺ−であり；Ｂは、−ＣＯＯ−ＣＨＹ−、−ＣＯＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−又は−ＣＯＯ−ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2−であり；Ｒは、水素原子、又はアセチル、ベンゾイル、デカノイル、パルミトイル、メチル、又はエチル基であり；ＺとＹは、それぞれ、水素原子、メチル又はフェニル基であり；Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉで；ｎは１〜３０の整数であり；ｍは、０〜２０の整数である。）
    ＲＯ−ＣＨＺ−［ＣＯＯ−ＣＨＸ］p−［ＣＯＯ−ＣＨＹ’］q−ＣＯＯ−ＣＨＺ−ＣＯＯＭ （２）
    （式中、Ｘは、メチル基であり；Ｙ’は、水素原子又はフェニル基であり；ｐは、０〜２５の整数、ｑは、０〜２５の整数であるが、ｐ＋ｑは、５〜２５の整数であり；Ｒは、水素原子、アセチル、ベンゾイル、デカノイル、パルミトイル、メチル又はエチル基であり；Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉであり；Ｚは、水素原子、メチル又はフェニル基である。）
    ＲＯ−ＰＡＤ−ＣＯＯ−Ｗ−Ｍ’ （３）
    （式中、Ｗ−Ｍ’は、
    Figure 2021532164
     であり；ＰＡＤは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体及びＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群から選ばれるものであり；Ｒは、水素原子、アセチル、ベンゾイル、デカノイル、パルミトイル、メチル又はエチル基であり；Ｍは、独立して、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉである。）
    Ｓ−Ｏ−ＰＡＤ−ＣＯＯ−Ｑ （４）
    （式中、Ｓは、
    Figure 2021532164
     であり；Ｌは−ＮＲ1−又は−Ｏ−（ここで、Ｒ1は、水素原子又はＣ1-10アルキルである）であり；Ｑは、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、又は−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5であり；ａは０〜４の整数であり；ｂは、１〜１０の整数であり；Ｍは、ａ、Ｋ、又はＬｉであり；ＰＡＤは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、及びＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群から選ばれる一つ以上である。）
    Figure 2021532164
     （式中、Ｒ’は、ＰＡＤ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2Ｈ2Ｃ（Ｏ）−ＯＭ（ここで、ＰＡＤは、Ｄ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群から選ばれるものであり、Ｍは、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉである）であり；ａは１〜４の整数である。）
    ＹＯ−［−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＸ）a−Ｏ−］m−Ｃ（Ｏ）−Ｒ−Ｃ（Ｏ）−［−Ｏ−（ＣＨＸ’）b−Ｃ（Ｏ）−］n−ＯＺ （６）
    （式中、Ｘ及びＸ’は、独立して、水素、Ｃ1-10アルキル又はＣ6-20アリールであり；Ｙ及びＺは、独立して、Ｎａ、Ｋ、又はＬｉであり；ｍ及びｎは、独立して、０〜９５の整数であるが、５＜ｍ＋ｎ＜１００であり；ａ及びｂは、独立して、１〜６の整数であり；Ｒは、−（ＣＨ2）k−、Ｃ2-10二価アルケニル、Ｃ6-20二価アリール又はこれらの組み合わせであり、ここで、ｋは、０〜１０の整数である。）
  7. 前記ポリ乳酸塩が、式（１）又は（６）の化合物である請求項６に記載のウイルス送達用組成物。
  8. カチオン性化合物をさらに含む請求項１に記載のウイルス送達用組成物。
  9. 二価又は三価金属イオンをさらに含む請求項１に記載のウイルス送達用組成物。
  10. 前記二価又は三価金属イオンが、カルシウム（Ｃａ2+）、マグネシウム（Ｍｇ2+）、バリウム（Ｂａ2+）、クロム（Ｃｒ3+）、鉄（Ｆｅ3+）、マンガン（Ｍｎ2+）、ニッケル（Ｎｉ2+）、銅（Ｃｕ2+）、亜鉛（Ｚｎ2+）及びアルミニウム（Ａｌ3+）からなる群から選ばれる１種以上である請求項９に記載のウイルス送達用組成物。
  11. 前記二価又は三価金属イオンが、硫酸塩、塩酸塩、炭酸塩、リン酸塩又は水酸化物の形態で含まれる請求項９に記載のウイルス送達用組成物。
  12. 請求項１に記載のウイルス送達用組成物の製造方法であって、
    （ａ）ウイルスを水性溶媒に溶解させる工程；
    （ｂ）両親媒性ブロック共重合体及びポリ乳酸塩を、それぞれ有機溶媒に溶解させる工程；及び
    （ｃ）工程（ａ）及び（ｂ）の溶液を混合して、エマルジョンを形成する工程；
    を含むウイルス送達用組成物の製造方法。
  13. 工程（ｂ）が、カチオン性化合物を有機溶媒に溶解させる工程をさらに含む請求項１２に記載のウイルス送達用組成物の製造方法。
  14. 工程（ｃ）で得られたエマルジョンから有機溶媒を選択的に除去する工程（ｄ）をさらに含む請求項１２に記載のウイルス送達用組成物の製造方法。
  15. 工程（ｄ）の後に、二価又は三価金属イオンを添加する工程（ｅ）をさらに含む請求項１４に記載のウイルス送達用組成物の製造方法。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102232002B1 (ko) 2019-05-24 2021-03-25 박정욱 구리 나노분말을 포함하는 항균 기능성 섬유 원사 및 그 제조방법
KR20220149460A (ko) * 2021-04-30 2022-11-08 주식회사 삼양홀딩스 약물을 함유하고 양친성 고분자를 포함하지 않는 나노입자 제조용 키트

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007536219A (ja) * 2004-05-06 2007-12-13 サムヤン コーポレーション 両親性ブロック共重合体及びポリ乳酸誘導体を含む高分子薬物担体に基づいた生物活性剤の細胞内伝達システム
WO2018085658A1 (en) * 2016-11-03 2018-05-11 Case Western Reserve University Melt processed viral nanoparticle constructs

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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KR101508275B1 (ko) * 2011-12-16 2015-04-08 주식회사 삼양바이오팜 고분자 나노입자 수용액 조성물 및 그 제조방법
EP3718539A1 (en) * 2013-04-18 2020-10-07 The Regents of the University of California Nanoscale coatings for encapsulation of biological entities
AU2016372321B2 (en) * 2015-12-18 2019-01-24 Samyang Holdings Corporation Method for preparing polymeric micelle containing anionic drug

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007536219A (ja) * 2004-05-06 2007-12-13 サムヤン コーポレーション 両親性ブロック共重合体及びポリ乳酸誘導体を含む高分子薬物担体に基づいた生物活性剤の細胞内伝達システム
WO2018085658A1 (en) * 2016-11-03 2018-05-11 Case Western Reserve University Melt processed viral nanoparticle constructs

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MOL. MED. REP., (2015), 12, [2], P.2336-2342, JPN6022011921, ISSN: 0004737942 *

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