JP2021520402A - 核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体及びその用途 - Google Patents
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Abstract
本発明は、生物活性核酸を細胞内に導入可能な新しい構造の核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体及びこれを含む疾病の診断、予防又は治療用組成物に関し、より詳細には、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸が相補的に結合した核酸複合体を含有し、皮膚透過性及び皮膚残留性を有する皮膚透過性伝達体及びこれを含む疾病の診断、予防又は治療用組成物に関する。本発明によれば、構造式(1)の構造を持つ核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体は、大きい分子量の薬物を効果的に伝達するための皮膚透過機能と体内有効性を同時に有する。本発明に係る伝達体は、特に、生物活性核酸又は様々な化合物の皮膚表皮及び真皮通過を可能にし、皮膚表面に塗布する外用的処置を可能にする。【選択図】 図3
Description
本発明は、生物活性核酸を細胞内に導入可能な核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体及びこれを含む疾病の診断、予防又は治療用組成物に関し、より詳細には、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸が相補的に結合した核酸複合体を含有し、皮膚透過性及び皮膚残留性を有する皮膚透過性伝達体及びこれを含む疾病の診断、予防又は治療用組成物に関する。
伝統的な薬剤と違い、核酸薬剤は標的特異的伝令RNA(messenger RNA,mRNA)の発現を抑制するので、タンパク質を標的にする既存薬剤で治療が不可能だった研究領域を扱うことが可能になった(Kole R.等,Nature Rev.Drug Discov.2012;11;125−140.,Wilson C.等,Curr.Opin.Chem.Bio.2006;10:607−614.)。
オリゴ核酸(Oligo nucleic acid)ベースの遺伝子発現調節の優れた効果及び様々な用途にもかかわらず、核酸に基づく治療剤を開発するには克服すべき妨害物が多数存在する。例えば、オリゴ核酸は核酸分解酵素(nuclease)などによる損傷の危険があり、オリゴ核酸の電気的性質(電荷)と大きさによって受動拡散(passive diffusion)による細胞膜透過が不可能な点などがある。これらの問題点を解消するために、核酸の修飾を用いて生物学的安定性を確保しようとする努力が続いており、修飾された人工核酸(Artificial Nucleic Acid)の場合、生物学的な活性の損失無しで標的核酸との親和性を高めることが可能になった。
修飾された人工核酸の一種であるペプチド核酸(Peptide Nucleic Acid,PNA)は、(2−アミノエチル)−グリシンペプチドバックボーン((2−aminoethyl)−glycine peptide backbone)が導入された人工核酸であり、相補的な塩基配列を有するRNA及びDNAに強く結合する性質を持っている。特に、前記ペプチド核酸は核酸分解酵素に対して抵抗性があり、生物学的安定性が高いので、様々なオリゴ核酸に基づく治療剤関連研究が行われている。しかし、前記ペプチド核酸は電気的中性を有する特性から、細胞内導入が難しい短所がある(Joergensen M.等,Oligonucleotides2011,21;29−37.)。
オリゴ核酸自体の細胞膜透過能力は非常に低く、特に、DNA又はRNAは負電荷を帯びているので、細胞の疎水性リン脂質二重膜を通過できず、単純拡散による細胞内伝達が難しい。レトロウイルス(Retrovirus)或いはAAV(adeno−associated virus)などのウイルス運搬体の使用は、オリゴ核酸の細胞内導入を可能にするが、意図しない免疫活性と発癌遺伝子(oncogene)の組換え可能性などの危険性がある(Couto L.B.等,Curr.Opin.Pharmacol.2010,5;534−542.)。
このような理由から、細胞毒性が少なく、免疫活性が低い非ウイルス性オリゴ核酸に基づく核酸運搬体開発の重要性が一層増大しており、その結果として、陽電荷性脂質(cationic lipid)、リポソーム(liposome、安定した核酸脂質粒子(stable nucleic acid lipid particle,SNALP)、ポリマー及び細胞−透過粒子(cell−penetrating peptide)を用いた細胞導入手法が開発されている(Zhi D.等,Bioconjug.Chem.2013,24;487−519.,Buyens K.等,J.Control Release,2012,158;362−70.,ROSSI,J.J.等,Gene Ther.2006,13:583−584.,Yousefi A.等,J.Control Release,2013,170;209−18.,Trabulo S.等,Curr.Pharm.Des.2013,19;2895−923.)。
このような核酸伝達手法は、機能性残基を直接的な結合によって持っており、複合体形成のための段階を含み、リポソーム(liposome)構造のエンドソーム脱出(endosome escape)効率及び生体毒性などの問題点があり、オリゴ核酸導入機能の向上と製造手順及び副作用に関連した問題点の解消が必要である。
一方、皮膚は、ヒトの身体で表面積が最も大きい器官であり、適切な方法を用いれば効果的に薬物を伝達できる経路となる。したがって、通常、経皮伝達(transdermal delivery)と呼ばれる、皮膚を通じた治療用薬物などの生理的活性剤の投与は、相対的に簡単な薬物などの投与療法などの特徴から大きく関心を受けてきた。
構造的に皮膚は、2つの主要部分である、相対的に薄い最外層である表皮層(epidermis、epidermal layer)と、これよりも厚い、内側領域である真皮層(dermis、dermal layer)とからなる。特に、表皮層の最外層である角質層(stratum corneum)は、ケラチンで埋められた扁平な死んだ細胞からなる。角質層の扁平な死んだ細胞間の領域は、皮膚の天然障壁特性に寄与するラメラ相(lamellar phase)を形成する脂質で構成されている。皮膚の最外側に存在する角質層(stratum corneum)などが天然障壁として働き、治療用薬物などの外部物質の皮膚透過度は極端に低いため、大きい分子量且つ親水性の物質が伝達され難い。
このような皮膚への治療用薬物などの伝達時に皮膚障壁の外部物質に対する防御機序を克服するために様々な皮膚透過方法に関する研究が試みられてきたが、物理的に皮膚を損傷又は刺激せずに化学物質の特性を用いて薬物を伝達することは非常に難しいと考えられており、これを克服した素材に期待できる諸メリットから、開発の要求が続いている実情である。
このような要求に応じて、大きい分子量の薬物を効果的に伝達するためのリポソーム又はナノパーティクル、ペプチドリガンドなどの皮膚透過伝達素材に関連した研究が多数報告されており[Lademann et al.,2007(Eur J Pharm Biopharm.2007 May;66(2):159−64.)、Chen et al.,2006a(J Pharmacol Exp Ther.2006 Nov;319(2):765−75.)、Chen et al.,2006b(Nat Biotechnol.2006 Apr;24(4):455−60.)]、これを用いた実用化段階への開発費用が嵩むにもかかわらず、伝達しようとする薬物の効率及び安定性は保障できず、皮膚透過機能と体内有効性を同時に有する素材の開発が要求されている。皮膚表面に塗布する外用的処置素材の有効性は、表皮及び真皮を通過しなければならない技術的課題から、多くの努力が要求される。
これと関連して、本発明者らは、生物活性核酸と全体的に正電荷を有するように修飾されたキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)とが相補的に結合した核酸複合体において細胞透過性(cell permeability)が驚くほど向上し、これを用いて標的遺伝子の発現を非常に効率的に調節できることを確認し、このような細胞毒性が低く、生物活性核酸の細胞透過性及び遺伝子発現調節能力が向上した新しい構造体に対する特許を出願したことがある(PCT/KR2017/008636)。
前記構造体及び治療用薬物などの皮膚透過及び細胞伝達機能が向上した伝達体に関して研究し続けた結果、本発明者らは、前記のような生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)と全体的に正電荷を有するように修飾されたキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)とが相補的に結合した核酸複合体が皮膚、好ましくは角質層及び/又は表皮層を非常に効率よく通過する特性を有し、当該核酸複合体を皮膚透過性伝達体として利用できることを明らかにし、本発明を完成するに至った。
この背景技術に記載の前記情報は単に本発明の背景に関する理解を向上させるためのものであり、したがって、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者に既に周知である先行技術を形成する情報を含まなくてもよい。
本発明の目的は、生物活性核酸及び/又は治療用薬物を皮膚を通して投与できる新しい構造の核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記皮膚透過性伝達体を含む疾病の診断、予防又は治療用組成物を提供することにある。
前記目的を達成するために、下記構造式(1)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体を提供する。
構造式(1)
[A≡C(+)]
前記構造式(1)において、
Aは、目的とする遺伝子と結合可能な配列又は目的とする遺伝子配列を有する生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)であり、
Cは、生物活性核酸と結合可能なキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)であり、
‘≡’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸間の相補的な結合を意味し、
Aで表される生物活性核酸は、全体的に負電荷又は中性を有し、
C(+)は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を有するということを意味し、
キャリアペプチド核酸は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を帯びるように修飾されたペプチド核酸単量体を一つ以上含む。
構造式(1)
[A≡C(+)]
前記構造式(1)において、
Aは、目的とする遺伝子と結合可能な配列又は目的とする遺伝子配列を有する生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)であり、
Cは、生物活性核酸と結合可能なキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)であり、
‘≡’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸間の相補的な結合を意味し、
Aで表される生物活性核酸は、全体的に負電荷又は中性を有し、
C(+)は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を有するということを意味し、
キャリアペプチド核酸は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を帯びるように修飾されたペプチド核酸単量体を一つ以上含む。
本発明はまた、前記皮膚透過性伝達体を含む疾病の診断用組成物及び予防又は治療用組成物を提供する。
本発明はまた、前記皮膚透過性伝達体を投与する段階を含む疾病の予防又は治療方法を提供する。
本発明はまた、疾病の予防又は治療のための前記皮膚透過性伝達体の用途を提供する。
本発明はまた、疾病の予防又は治療用薬剤の製造のための前記皮膚透過性伝達体の使用を提供する。
図1A〜図1Eは、皮膚透過性伝達体内の生物活性核酸とキャリアペプチド核酸が結合した構造を図式化した図である。
(A)逆平行結合の形態で結合した構造、
(B)平行結合の形態で結合した構造、
(C)皮膚透過性伝達体に治療用薬物が結合した構造、
(D)皮膚透過性伝達体にエンドソーム脱出を助ける物質(m)が結合した構造、
(E)皮膚透過性伝達体にエンドソーム脱出を助ける物質(m)と治療用薬物がともに結合した構造。
図2は、皮膚角質層、表皮層及び真皮層を示す図である。
図3の(A)はsiRNA single及びduplexの皮膚伝達能力を示す図であり、siRNA単一では表皮から真皮への伝達が確認されなかったことを示し、(B)は核酸複合体の皮膚伝達能力を示す図であり、核酸複合体が表皮から真皮に伝達され、24時間後には真皮まで伝達されたことを確認したことを示す。
図4A〜図4Lは、cy3−標識されたsiRNAの皮膚伝達(transdermal)能力テスト結果を示す図である。
(A)キャリアペプチド核酸と同じ長さの相補的に結合する生物活性核酸のチャージ(charge)に変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して1時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(B)生物活性核酸よりも短いキャリアペプチド核酸に相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して1時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(C)キャリアペプチド核酸と同じ長さの相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して3時間後の核酸複合体の皮膚伝達、
(D)生物活性核酸よりも短いキャリアペプチド核酸に相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して3時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(E)キャリアペプチド核酸と同じ長さの相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して24時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(F)生物活性核酸よりも短いキャリアペプチド核酸に相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して24時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(G)全体的に負電荷を干支は生物活性核酸に様々なチャージを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して1時間後の皮膚伝達能力、
(H)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々なチャージを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して3時間後の皮膚伝達能力、
(I)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々なチャージを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して24時間後の皮膚伝達能力、
(J)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々な長さを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して1時間後の皮膚伝達能力、
(K)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々な長さを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して3時間後の皮膚伝達能力、
(L)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々な長さを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して24時間後の皮膚伝達能力。
図5A〜図5Cは、低分子物質を含む核酸複合体の皮膚伝達能力を示す図である。
(A)低分子物質を含む核酸複合体処理0時間後の皮膚伝達能力、
(B)低分子物質を含む核酸複合体処理3時間後の皮膚伝達能力、
(C)低分子物質を含む核酸複合体処理24時間後の皮膚伝達能力。
図6A〜図6Fは、IFI16を標的遺伝子とする核酸複合体の皮膚疾患である乾癬に対する実験管試験及び動物試験における治療効果を示す図である。
(A)IL−17Aによって誘導されたヒト由来角質細胞株で細胞生存率、
(B)IL−17Aによって誘導されたヒト由来角質細胞株で標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現、
(C)イミキモド(imiquimod)で誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてマウス耳の乾癬表現型が減少すること示す写真、
(D)イミキモドで誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてマウス耳の厚さが減少し、標的遺伝子の発現が減少することを示す図、
(E)イミキモドで誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてイミキモドによって増加したマウスの耳組織の表皮の厚さが核酸複合体によって減少することをH&E染色で示す図、
(F)イミキモドで誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてイミキモドによって増加したマウスの耳組織の乾癬マーカ−(Psoriasis marker)であるCD3、CD11cの発現が核酸複合体によって減少することを免疫染色法で示す図。
図7A及び図7Bは、TGFβR2を標的遺伝子とする核酸複合体の転移性皮膚黒色腫細胞株における細胞転移能力抑制効果を示す図である(Mechanism study of anti−metastatic effect with TGFβR2 targeted PNA in vitro)。
(A)TGFβ−2で誘導された皮膚転移性黒色腫細胞株で標的遺伝子発現及び下位経路遺伝子の発現、
(B)TGFβ−2で誘導された皮膚転移性黒色腫細胞株で細胞の転移能力。
図8A〜図8Jは、TLR2を標的遺伝子とする核酸複合体のアトピー皮膚炎誘導様細胞モデル及びアトピー皮膚炎誘導動物モデルにおける治療効果を示す図である。
(A)DNCBで誘導したヒト由来角質細胞株で細胞生存率変化、
(B)DNCBで誘導したヒト由来角質細胞株で標的遺伝子発現及び下位経路遺伝子の発現、
(C)NC/Ngaマウスで核酸複合体によってマウスのアトピー皮膚炎表現型が減少することを示す写真、
(D)イエダニ抽出物を用いてアトピー皮膚炎を誘発したNC/Ngaマウスで核酸複合体によって血清内IgE及びTARCの濃度が減少することを示す図、
(E)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したBalb/Cマウスで核酸複合体によってマウスのアトピー皮膚炎表現型が減少することを示す写真、
(F)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したBalb/Cマウスで核酸複合体によって血清内IgE及びTARCの濃度が減少することを示す図、
(G)イエダニ抽出物を用いてアトピー皮膚炎を誘発したNC/Ngaマウスで核酸複合体による表皮厚さの減少を示す図、
(H)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したBalb/Cマウスで核酸複合体による表皮厚さの減少を示す図、
(I)イエダニ抽出物を用いてアトピー皮膚炎を誘発したNV/Ngaマウスで核酸複合体による炎症性マーカーCD3が減少することを示す図、
(J)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したNV/Ngaマウスで核酸複合体による炎症性マーカーCD3が減少することを示す図。
図9A及び図9Bは、smad3を標的遺伝子とする核酸複合体のヒト由来角質細胞株における細胞損傷回復効果を示す図である。
(A)TGFβ−1で誘導されたヒト由来角質細胞株で怪我後回復能、
(B)TGFβ−1で誘導されたヒト由来角質細胞株で標的遺伝子発現。
図10A及び図10Bは、TIEG1を標的遺伝子とする核酸複合体のケロイド性線維芽細胞細胞における細胞成長抑制効果を示す図である。
(A)怪我後肥大症組織から分離した細胞株で細胞生存率、
(B)怪我後肥大症組織から分離した細胞株で標的遺伝子及び下位経路遺伝子の発現。
(A)逆平行結合の形態で結合した構造、
(B)平行結合の形態で結合した構造、
(C)皮膚透過性伝達体に治療用薬物が結合した構造、
(D)皮膚透過性伝達体にエンドソーム脱出を助ける物質(m)が結合した構造、
(E)皮膚透過性伝達体にエンドソーム脱出を助ける物質(m)と治療用薬物がともに結合した構造。
図2は、皮膚角質層、表皮層及び真皮層を示す図である。
図3の(A)はsiRNA single及びduplexの皮膚伝達能力を示す図であり、siRNA単一では表皮から真皮への伝達が確認されなかったことを示し、(B)は核酸複合体の皮膚伝達能力を示す図であり、核酸複合体が表皮から真皮に伝達され、24時間後には真皮まで伝達されたことを確認したことを示す。
図4A〜図4Lは、cy3−標識されたsiRNAの皮膚伝達(transdermal)能力テスト結果を示す図である。
(A)キャリアペプチド核酸と同じ長さの相補的に結合する生物活性核酸のチャージ(charge)に変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して1時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(B)生物活性核酸よりも短いキャリアペプチド核酸に相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して1時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(C)キャリアペプチド核酸と同じ長さの相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して3時間後の核酸複合体の皮膚伝達、
(D)生物活性核酸よりも短いキャリアペプチド核酸に相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して3時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(E)キャリアペプチド核酸と同じ長さの相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して24時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(F)生物活性核酸よりも短いキャリアペプチド核酸に相補的に結合する生物活性核酸のチャージに変化を与え、ヌードマウスの背中に処理して24時間後の核酸複合体の皮膚伝達能力、
(G)全体的に負電荷を干支は生物活性核酸に様々なチャージを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して1時間後の皮膚伝達能力、
(H)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々なチャージを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して3時間後の皮膚伝達能力、
(I)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々なチャージを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して24時間後の皮膚伝達能力、
(J)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々な長さを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して1時間後の皮膚伝達能力、
(K)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々な長さを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して3時間後の皮膚伝達能力、
(L)全体的に負電荷を帯びる生物活性核酸に様々な長さを有するキャリアペプチド核酸が結合した様々な複合体をヌードマウスの背中に処理して24時間後の皮膚伝達能力。
図5A〜図5Cは、低分子物質を含む核酸複合体の皮膚伝達能力を示す図である。
(A)低分子物質を含む核酸複合体処理0時間後の皮膚伝達能力、
(B)低分子物質を含む核酸複合体処理3時間後の皮膚伝達能力、
(C)低分子物質を含む核酸複合体処理24時間後の皮膚伝達能力。
図6A〜図6Fは、IFI16を標的遺伝子とする核酸複合体の皮膚疾患である乾癬に対する実験管試験及び動物試験における治療効果を示す図である。
(A)IL−17Aによって誘導されたヒト由来角質細胞株で細胞生存率、
(B)IL−17Aによって誘導されたヒト由来角質細胞株で標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現、
(C)イミキモド(imiquimod)で誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてマウス耳の乾癬表現型が減少すること示す写真、
(D)イミキモドで誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてマウス耳の厚さが減少し、標的遺伝子の発現が減少することを示す図、
(E)イミキモドで誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてイミキモドによって増加したマウスの耳組織の表皮の厚さが核酸複合体によって減少することをH&E染色で示す図、
(F)イミキモドで誘導した乾癬疾患動物モデルにおいてイミキモドによって増加したマウスの耳組織の乾癬マーカ−(Psoriasis marker)であるCD3、CD11cの発現が核酸複合体によって減少することを免疫染色法で示す図。
図7A及び図7Bは、TGFβR2を標的遺伝子とする核酸複合体の転移性皮膚黒色腫細胞株における細胞転移能力抑制効果を示す図である(Mechanism study of anti−metastatic effect with TGFβR2 targeted PNA in vitro)。
(A)TGFβ−2で誘導された皮膚転移性黒色腫細胞株で標的遺伝子発現及び下位経路遺伝子の発現、
(B)TGFβ−2で誘導された皮膚転移性黒色腫細胞株で細胞の転移能力。
図8A〜図8Jは、TLR2を標的遺伝子とする核酸複合体のアトピー皮膚炎誘導様細胞モデル及びアトピー皮膚炎誘導動物モデルにおける治療効果を示す図である。
(A)DNCBで誘導したヒト由来角質細胞株で細胞生存率変化、
(B)DNCBで誘導したヒト由来角質細胞株で標的遺伝子発現及び下位経路遺伝子の発現、
(C)NC/Ngaマウスで核酸複合体によってマウスのアトピー皮膚炎表現型が減少することを示す写真、
(D)イエダニ抽出物を用いてアトピー皮膚炎を誘発したNC/Ngaマウスで核酸複合体によって血清内IgE及びTARCの濃度が減少することを示す図、
(E)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したBalb/Cマウスで核酸複合体によってマウスのアトピー皮膚炎表現型が減少することを示す写真、
(F)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したBalb/Cマウスで核酸複合体によって血清内IgE及びTARCの濃度が減少することを示す図、
(G)イエダニ抽出物を用いてアトピー皮膚炎を誘発したNC/Ngaマウスで核酸複合体による表皮厚さの減少を示す図、
(H)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したBalb/Cマウスで核酸複合体による表皮厚さの減少を示す図、
(I)イエダニ抽出物を用いてアトピー皮膚炎を誘発したNV/Ngaマウスで核酸複合体による炎症性マーカーCD3が減少することを示す図、
(J)DNCBを用いてアトピー皮膚炎を誘発したNV/Ngaマウスで核酸複合体による炎症性マーカーCD3が減少することを示す図。
図9A及び図9Bは、smad3を標的遺伝子とする核酸複合体のヒト由来角質細胞株における細胞損傷回復効果を示す図である。
(A)TGFβ−1で誘導されたヒト由来角質細胞株で怪我後回復能、
(B)TGFβ−1で誘導されたヒト由来角質細胞株で標的遺伝子発現。
図10A及び図10Bは、TIEG1を標的遺伝子とする核酸複合体のケロイド性線維芽細胞細胞における細胞成長抑制効果を示す図である。
(A)怪我後肥大症組織から分離した細胞株で細胞生存率、
(B)怪我後肥大症組織から分離した細胞株で標的遺伝子及び下位経路遺伝子の発現。
特に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的及び科学的用語は、本発明の属する技術の分野における熟練した専門家によって通常理解されるのと同じ意味を有する。一般に、本明細書における命名法は、本技術分野に周知されており、通常用いられるものである。
本発明の一実施例において、生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸が相補的に結合した核酸複合体が、皮膚透過性及び皮膚残留性があることを確認し、皮膚表面塗布によって疾病の治療に活用できることを確認した。
したがって、本発明は一観点において、下記構造式(1)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体に関する。
構造式(1)
[A≡C(+)]
前記構造式(1)において、
Aは、目的とする遺伝子と結合可能な配列又は目的とする遺伝子配列を有する生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)であり、
Cは、生物活性核酸と結合可能なキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)であり、
‘≡’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸間の相補的な結合を意味し、
Aで表される生物活性核酸は、全体的に負電荷又は中性を有し、
C(+)は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を有するということを意味し、
キャリアペプチド核酸は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を帯びるように修飾されたペプチド核酸単量体を一つ以上含む。
構造式(1)
[A≡C(+)]
前記構造式(1)において、
Aは、目的とする遺伝子と結合可能な配列又は目的とする遺伝子配列を有する生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)であり、
Cは、生物活性核酸と結合可能なキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)であり、
‘≡’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸間の相補的な結合を意味し、
Aで表される生物活性核酸は、全体的に負電荷又は中性を有し、
C(+)は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を有するということを意味し、
キャリアペプチド核酸は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を帯びるように修飾されたペプチド核酸単量体を一つ以上含む。
本発明において構造式(1)による核酸複合体における生物活性核酸とキャリアペプチド核酸は逆平行結合(anti−parallel binding)又は平行結合(parallel binding)形態を有することができる(図1A及び図1B参照)。
本発明において“皮膚透過性伝達体”とは、生物活性物質を細胞内に伝達するための手段であり、皮膚との接触によって生物活性物質を体内、窮極的に細胞内に浸透させることができる伝達物質を意味し、具体的には、皮膚の表皮層の最外層である角質層及び/又は表皮層を通過して、表皮層や真皮層に目的する薬物を伝達したり、或いは真皮層も通過して体内に目的する薬物を伝達できる能力を有する物質を意味する。
本発明に係る皮膚透過性伝達体は、構造式(1)による核酸複合体における全体的な電荷量(net charge)及び/又は核酸複合体における生物活性核酸及び/又はキャリアペプチド核酸の個数などによって角質層、表皮層又は真皮層に残留したり、或いは真皮層まで通過して体内に目的する薬物を伝達することができる。
これによって、本発明において、前記核酸複合体を含む皮膚透過伝達体は、皮膚残留性を有することを特徴とし得る。本発明の一実施例において、皮膚角質層、表皮層及び真皮層に前記生物活性核酸が存在することを確認した。
本発明において、“皮膚透過性伝達体”において生物活性核酸自体が治療用薬物として働いてもよく(図1A及び図1B参照)、また“皮膚透過性伝達体”に疾病の治療のための治療用薬物などがさらに結合した形態であってもよい(図1C参照)。
すなわち、構造式1による核酸複合体自体が皮膚透過性伝達体でありながら治療剤として用いられてもよく、核酸複合体に治療用薬物が結合した形態で用いられてもよい。
特に、本発明に係る“皮膚透過性伝達体”は、皮膚を通して体内に経皮伝達(transdermal delivery)された後、目的する細胞内に伝達され得る特性を有し、前記核酸複合体を含有するいかなる形態でも利用可能である。
本発明において、“生物活性核酸”は、発現を減少させようとする目的する標的遺伝子と結合できる相補的な配列、特に当該目的する標的遺伝子のmRNAに結合できる相補的な配列を有するか、発現させようとする標的遺伝子の発現を促進する配列を含む核酸を含む核酸であり、当該遺伝子の発現を抑制又は促進するなどの遺伝子発現調節に関与する核酸を意味し、発現を減少又は増加させようとする標的遺伝子に相補的な配列を有する核酸であるか、pre−mRNA、miRNA、mRNAなどの一本鎖RNA配列に相補的な配列の核酸であり得る。
特に、本発明における“生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)”は、生体外(in vitro)又は生体内(in vivo)で標的遺伝子及びこれを含む塩基配列と結合して当該遺伝子の固有機能(例えば、転写体(transcript)発現又はタンパク質発現)を活性化又は阻害させたり、或いはpre−mRNAのスプライシング(splicing)を調節(例えば、エクソンスキッピング(exon skipping))するなどの機能を果たすことを特徴とし得る。前記塩基配列は、遺伝子調節部位(gene regulatory sequence)又は遺伝子部位(gene coding sequence)又はスプライシング調節部位(splicing regulatory sequence)であることを特徴とし得る。前記遺伝子調節部位は、プロモーター、転写エンハンサー、5’非翻訳領域、3’非翻訳領域、ウイルスパッケージング配列、及び選択マーカーから選択されることを特徴とし得る。前記遺伝子部位はエクソン又はイントロンであり得、前記遺伝子部位は遺伝子の転写開始部位の10、5、3、1kb又は500、300、200bp内に、例えば、開始部位の上流(upstream)又は下流(downstream)に存在できる。また、前記スプライシング調節部位は、エクソンスキッピング、 隠されたスプライシング(cryptic splicing)、擬似スプライス部位活性化(pseudo−splice site activation)、イントロン保持(intron retention)、選択的スプライシングディレギュレーション(alternative splicing deregulation)関連配列を含むことができる。
本発明において“キャリアペプチド核酸”は、生物活性核酸と一部或いは全部の塩基が相補的に結合して機能性を付与する核酸を意味し、本発明で用いられるキャリアペプチド核酸は、ペプチド核酸(PNA:Peptide Nucleic Acid)だけでなく、これと類似な修飾された核酸を使用することもでき、ペプチド核酸が好ましいが、これに限定されるものではない。
本発明において、前記皮膚透過伝達体に含まれる核酸複合体は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸のエンドソーム脱出(endosome escape)を助ける物質をさらに含み、下記構造式(2)の構造を有することを特徴とし得る。
すなわち、本発明に係る“皮膚透過性伝達体”は、エンドソーム脱出(endosome escape)を助ける物質が結合した形態であり得る(構造式(2)、図1D及び図1E参照)。
構造式(2)
[mA≡mC(+)]
前記構造式(2)において、
‘m’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸のエンドソーム脱出(endosome escape)を助ける物質を意味する。
[mA≡mC(+)]
前記構造式(2)において、
‘m’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸のエンドソーム脱出(endosome escape)を助ける物質を意味する。
本発明において、前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸は、それぞれの核酸の5’末端と3’末端にエンドソーム脱出を助ける物質を含むことを特徴とし得る。
本発明において、“エンドソーム脱出を助ける物質”は、エンドソーム内部の浸透圧を増加させたり、エンドソームの膜を不安定化させる方法によって生物活性核酸のエンドソームで脱出を助けることを特徴とし得る。生物活性核酸がより効率的で迅速に核や細胞質に移動して標的遺伝子に出会って作用するように助けることを意味する(D.W.Pack,A.S.Hoffman,S.Pun,P.S.Stayton,“Design and development of polymers for gene delivery,” Nat.Rev.Drug.Discov.,4,581−593(2005))。
前記エンドソーム脱出を助ける物質として生物活性核酸にはGLFDIIKKIAESF(配列番号49)の配列を有するペプチドがリンカー媒介で連結可能であり、キャリアペプチド核酸もヒスチジン(Histidine)(10)をリンカー媒介で連結する方法で結合することを特徴とし得るが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記エンドソーム脱出を助ける物質は、ペプチド、脂質ナノ物質(lipid nanoparticles)、接合体ナノ物質(polyplex nanoparticles)、高分子ナノ球(polymer nanospheres)、無機物ナノ物質(inorganic nanoparticles)、陽イオン脂質ナノ物質(cationic lipid−based nanoparticles)、陽イオン高分子(cationic polymer)及びpH感応性高分子(pH sensitive polymers)からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とし得る。
本発明において、前記ペプチドは、GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ(配列番号48)、GLFDIIKKIAESF(配列番号49)及びヒスチジン(Histidine)(10)からなる群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記脂質ナノ物質(lipid nanoparticles)は、脂質(Lipid)、リン脂質(phospholipids)、パルミチン酸セチル(cetyl palmitate)、ポロキサマー18(poloxamer 18)、Tween 85、トリステアリングリセリド(tristearin glyceride)及びTween 80からなる群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記接合体ナノ物質(polyplex nanoparticles)は、ポリ(アミドアミン)(poly(amidoamine))又はPEI(polyethylenimine)であることを特徴とし得る。
本発明において、前記高分子ナノ球(polymer nanospheres)は、ポリカプロラクトン(polycaprolactone)、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)(poly(lactide−co−glycolide))、ポリ乳酸(polylactide)、ポリグリコール酸(polyglycolide)、ポリ(d,l−ラクチド)(poly(d,l−lactide))、キトサン(chitosan)及びPLGA−ポリエチレングリコール(PLGA−polyethylene glycol)からなる群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記無機物ナノ物質(inorganic nanoparticles)はFe2O3Fe3O4、WO3及びWO2.9からなる群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記陽イオン脂質ナノ物質(cationic lipid−based nanoparticles)は、1−(aminoethyl)iminobis[N−(oleicylcysteinyl−1−amino−ethyl)propionamide]、PTAのN−アルキル化誘導体(N−alkylated derivative of PTA)及び3,5−ジドデシルオキシベンズアミジン(3,5−didodecyloxybenzamidine)からなる群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記陽イオン高分子(cationic polymer)は、ビニルピロリドン−N,N−ジメチルアミノエチルメタクリル酸共重合体ジエチル硫酸塩(vinylpyrrolidone−N,N−dimethylaminoethyl methacrylate acid copolymer diethyl sulphate)、ポリイソブチレン(polyisobutylene)及びポリ(N−ビニルカルバゾール)(poly(N−vinylcarbazole))から構成される群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記pH感応性高分子(pH sensitive polymers)は、ポリ酸(polyacids)、ポリ(アクリル酸)(poly(acrylic acid))、ポリ(メタクリル酸)(poly(methacrylic acid))及び加水分解されたポリアクリルアミド(hydrolyzed polyacrylamide)からなる群から選ばれることを特徴とし得る。
本発明において、前記皮膚透過性伝達体に含まれる核酸複合体は、前述したように、治療用薬物、例えば治療用タンパク質、治療用化合物、癌化学治療剤、トキシン、細胞毒性物質、消炎剤、関節炎治療剤、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、抗体、siRNA又はmiRNAのようなRNAi、アンチセンス、核酸、核酸類似体、細胞、ウイルス、ファージ、ウイルス粒子、ファージ粒子、ウイルスカプシド、ファージカプシド、ウイルス様粒子、リポソーム、マイセル、ビーズ、ナノ粒子、マイクロ粒子、化学治療剤、造影剤、映像剤、標識(label)、標識化剤又はその配合物からなる群から選ばれるいずれか一つ以上をさらに含むことを特徴とし得る。
本発明に係る皮膚透過性伝達体に含まれる核酸複合体と治療用薬物は共有結合又はリンカー−媒介された形態で結合され得る。
本発明において、前記生物活性核酸とキャリアペプチド核酸はそれぞれ2〜50個、好ましくは5〜30個、より一層好ましくは10〜25個、最も好ましくは15〜17個の核酸単量体を含むことを特徴とし得る。
前記生物活性核酸は天然(natural)核酸塩基及び/又は修飾された核酸単量体からなっていることを特徴とし得る。
本発明において、前記生物活性核酸は、DNA、RNA又は修飾された核酸であるPNA(peptide nucleic acid)、PMO(phosphorodiamidate morpholino oligonucleotide)、LNA(locked nucleic acid)、GNA(glycol nucleic acid)、TNA(threose nucleic acid)、アンチセンスオリゴヌクレオチド(antisense oligonucleotide)、アプタマー(aptamer)、siRNA(small interfering RNA)、shRNA(short hairpin RNA)、リボザイム(ribozyme)及びDNAzymeからなる群から選ばれることを特徴とし、好ましくはDNA、RNA又は修飾された核酸であるPNA、PMO、LNA、GNA及びTNAからなる群から選ばれることを特徴とし得るが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記生物活性核酸に使用された単量体がPNAの場合、生物活性ペプチド核酸といい、他の単量体が使用された場合にも同じ方式で呼ぶ。
本発明において、前記生物活性核酸とキャリアペプチド核酸は、ホスホジエステル(phosphodiester)、2’0−メチル(2’0−methyl)、2’メトキシ−エチル(2’ methoxy−ethyl)、ホスホルアミデート(phosphoramidate)、メチルホスホネート(methylphosphonate)及びホスホロチオエート(phosphorothioate)から構成される群から選ばれるいずれか一つ以上の官能基をさらに含むことを特徴とし得る。
本発明において、前記キャリアペプチド核酸は、前記生物活性核酸と塩基配列の一部或いは全部が相補的な配列で構成されることを特徴とし得る。特に、キャリアペプチド核酸は、ユニバーザル塩基(universal base)を一つ以上含むことができ、キャリアペプチド核酸の全てがユニバーザル塩基からなってもよい。
本発明において、前記皮膚透過性伝達体に含まれる核酸複合体内の前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸のそれぞれは、電気的特性が全体的に、正電荷(陽性)、負電荷(陰性)又は中性電荷を有することを特徴とする複合体であり得る。
前記電気的特性の表現において、“全体的に”との意味は、個別塩基の電気的特性ではなく全体的な生物活性核酸又はキャリアペプチド核酸のそれぞれの電荷が外部から見て全体的な電気的特性であることを意味し、例えば、生物活性核酸内の一部単量体が陽性を有しても、陰性を有する単量体の個数が相対的に多く存在する場合には、生物活性核酸は“全体的に”電気的特性からして負電荷を有するものであり、キャリアペプチド核酸内の一部塩基及び/又はバックボーン(backbone)が陰性を有しても、陽性を有する塩基及び/又はバックボーンの個数が相対的に多く存在する場合には、キャリアペプチド核酸は“全体的に”電気的特性からして正電荷を有するものである。
このような観点で、本発明の構造式(1)の構造を有する核酸複合体は、全体的に正電荷を有することを特徴とし得る。前記構造式(1)による核酸複合体において、好ましくは前記生物活性核酸は全体的に電気的特性からして負電荷又は中性の特性を有し、前記キャリアペプチド核酸は全体的に電気的特性からして正電荷特性を有することを特徴とし得るが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記生物活性核酸とキャリアペプチド核酸の電気的特性の付与は、修飾されたペプチド核酸単量体を使用することができ、修飾されたペプチド核酸単量体は、正電荷を有するキャリアペプチド核酸として、リシン(Lysine,Lys,K)、アルギニン(Arginine,Arg,R)、ヒスチジン(Histidine,His,H)、ジアミノ酪酸(Diamino butyric acid,DAB)、オルニチン(Ornithine,Orn)及びアミノ酸類似体からなる群から選ばれるいずれか一つ以上の正電荷のアミノ酸を含み、負電荷を有するキャリアペプチド核酸として、負電荷のアミノ酸であるグルタミン酸(Glutamic acid,Glu,E)又はアミノ酸類似体の負電荷のアミノ酸を含むことを特徴とし得る。
本発明において、前記キャリアペプチド核酸は全体的に正電荷を有するように1個以上のガンマ−又はアルファ−バックボーン修飾ペプチド核酸単量体を含むことを特徴とし得る。
前記ガンマ−或いはアルファ−バックボーン修飾ペプチド核酸単量体は、電気的陽性を有するように、リシン(Lysine,Lys,K)、アルギニン(Arginine,Arg,R)、ヒスチジン(Histidine,His,H)、ジアミノ酪酸(Diamino butyric acid,DAB)、オルニチン(Ornithine,Orn)及びアミノ酸類似体からなる群から選ばれるいずれか一つ以上の正電荷を有するアミノ酸をバックボーンに含むことを特徴とし得る。
本発明において、電荷付与のためのペプチド核酸単量体の修飾は、前記バックボーン修飾の他にも、ヌクレオ塩基(nucleobase)が修飾されたペプチド核酸単量体を使用することができる。好ましくは、電気的陽性を有するようにアミン、トリアゾール、イミダゾール残基をヌクレオ塩基に含んだり、或いは電気的陰性を有するようにカルボン酸を塩基に含むことを特徴とし得る。
本発明において、前記キャリアペプチド核酸の修飾ペプチド核酸単量体は、負電荷をバックボーン或いはヌクレオ塩基にさらに含んでもよいが、修飾ペプチド核酸単量体は、正電荷を有する単量体が負電荷を有する単量体に比べて多く含まれ、全体的にキャリアペプチド核酸の電荷が陽性になることが好ましい。
好ましくは、本発明に係る前記構造式(1)の核酸複合体は、全体的に陽の電荷を有することを特徴とする。
本発明に係る前記構造式(1)の核酸複合体において、疎水性残基(hydrophobic moiety)、親水性残基(hydrophilic moiety)、標的抗原特異的抗体、アプタマー又は蛍光/発光マーカーなどからなる群から選ばれる一つ以上の物質が生物活性核酸及び/又はキャリアペプチド核酸に結合していることを特徴とし、好ましくは、前記疎水性残基(hydrophobic moiety)、親水性残基(hydrophilic moiety)、標的抗原特異的抗体、アプタマー及びイメージングのための蛍光/発光マーカーなどからなる群から選ばれる一つ以上の物質は、前記キャリアペプチド核酸に結合したものであり得る。
本発明において前記疎水性残基(hydrophobic moiety)、親水性残基(hydrophilic moiety)、標的抗原特異的抗体、アプタマー、クエンチャー、蛍光マーカー及び発光マーカーからなる群から選ばれる一つ以上の物質と生物活性核酸及び/又はキャリアペプチド核酸の結合は、単純共有結合又はリンカーで媒介した共有結合であることを特徴とし得るが、これに限定されるものではない(表1参照)。好ましくは、前記核酸運搬体に結合した細胞透過、溶解度、安定性、運搬及びイメージング関連物質(例えば、疎水性残基など)は、標的遺伝子の発現を調節する生物活性核酸と独立して存在する。
本発明において、前述したように、前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸の相補的な結合形態は、大きく、逆平行結合(antiparallel binding)と平行結合(parallel binding)の形態を有することを特徴とし得る。前記相補的な結合形態は、生物活性核酸の目的配列(生物活性核酸と相補的な配列)の存在下で分離される構造を有する。
前記逆平行結合と平行結合は、DNA−DNA又はDNA−PNAの結合方式において、5’−方向性と3’−方向性によって決定される。逆平行結合は一般的なDNA−DNA又はDNA−PNAの結合方式であり、本発明に係る構造式(1)の核酸複合体を取り上げて説明すると、生物活性核酸は5’から3’方向に、キャリアペプチド核酸は3’から5’方向に互いに結合する形態を意味する。平行結合は逆平行結合に比べては結合力が多少劣る形態であり、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸の両方とも5’から3’方向に又は3’から5’方向に互いに結合する形態を意味する。
本発明に係る構造式(1)の核酸複合体において、好ましくは前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸の結合力は、生物活性核酸と生物活性核酸の目的とする遺伝子、特に目的遺伝子のmRNAとの結合力よりも低いことを特徴とし得る。前記結合力は、融解温度、melting temperature又はTmによって決定される。
前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸の結合力(融解温度、melting temperature,Tm)を生物活性核酸と生物活性核酸の目的とする遺伝子、特に目的遺伝子のmRNAとの結合力よりも低くするための具体的な方法は、例えば、前記生物活性核酸とキャリアペプチド核酸が平行結合(Parallel binding)又は部分特異結合(Partial specific binding)することを特徴とし得るが、これに限定されるものではない。
他の例として、前記キャリアペプチド核酸がリンカー、ユニバーザル塩基(universal base)及び生物活性核酸の対応する塩基と相補的でない塩基を有するペプチド核酸塩基から構成された群から選ばれる一つ以上のペプチド核酸塩基を有することを特徴とし得るが、これに限定されるものではない(表1参照)。
本発明において、前記ユニバーザル塩基(universal base)は、アデニン(adenine)、グアニン(guanine)、シトシン(cytosine)、チミン(thymine)、ウラシル(Uracil)などの天然塩基と選択性無しで結合し、相補的な結合力よりも低い結合力を有する塩基としてイノシンPNA(inosine PNA)、インドールPNA(indole PNA)、ニトロインドールPNA(nitroindole PNA)及び無塩基(abasic)からなる群から選ばれる一つ以上を使用でき、好ましくはイノシンPNAを使用することを特徴とし得る。
前記表1で、Nは核酸の塩基(ATGC)で、*はアンチセンス核酸(antisense nucleic acid)配列と相補的でない配列で、$はユニバーザル塩基(universal base)で、=はリンカーであり、5’−、3’−は核酸(塩基)の方向性を表す。
本発明において、前記核酸複合体の機能調節のための核酸の結合形態と電気的性質組合せを提供し、前記核酸の結合形態と電気的性質組合せで粒子サイズ及び作用時点を調節し、細胞透過性、溶解度及び特異度を向上させることを特徴とし得る。
本発明において、前記生物活性ペプチド核酸とキャリアペプチド核酸の結合力調節により、目的遺伝子の存在下で、生物活性ペプチド核酸が目的配列と結合する時点(生物活性核酸の目的配列への置換される時点、標的特異的分離及び結合時点)などの調節が可能である。
本発明に係る構造式(1)の核酸複合体において、生物活性核酸の目的遺伝子への置換(strand displacement)時点、標的特異的分離及び結合(target specific release and bind)時点の調節は、複合体の非特異結合のためのキャリアペプチド核酸の非特異塩基、ユニバーザル塩基及びリンカーの有無、個数及び位置によって調節が可能であることを特徴とし得る。前記ペプチド複合体の相補的な結合の形態である平行(parallel)又は逆平行(antiparallel)形態の結合などと前記条件の組合せによって調節が可能であることを特徴とし得る。
本発明において、前記構造式(1)の核酸複合体の粒子は5nm〜300nm、好ましくは10nm〜80nm、最も好ましくは15nm〜70nmの大きさを有することを特徴とし得る。
本発明において、前記核酸複合体の粒子サイズは、生物活性ペプチド核酸とキャリアペプチド核酸の電荷バランス(charge balance)を調節することによって調節されることを特徴とし得る。具体的には、キャリアペプチド核酸の正電荷が増加すると粒子のサイズが小さくなるが、キャリアペプチド核酸の正電荷が一定レベルを超えると粒子のサイズが大きくなる特徴を有する。また、粒子サイズを決定する他の重要な要素として、複合体をなす生物活性ペプチド核酸電荷による全般的なキャリアペプチド核酸との適切な電荷バランスによって粒子サイズが決定される。
本発明に係るキャリアペプチド核酸の正電荷は、1個〜7個(正電荷を有する単量体が1個〜7個含まれることを意味する。)、好ましくは2個〜5個、最も好ましくは2個〜3個であり、生物活性核酸の電荷は電荷バランスのネットチャージ(net charge)が負電荷0個〜5個、好ましくは0個〜3個である。
本発明において、前記構造式(1)の核酸複合体は、生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸が適切な条件で混成化されることによって製造され得る。
本発明の“混成化”は、相補的な一本鎖核酸二本鎖核酸を形成することを意味する。混成化は、2本の核酸鎖間の相補性が完全な場合(perfect match)に起こったり又は一部の不整合(mismatch)塩基が存在しても起こることができる。混成化に必要な相補性の程度は混成化条件によって変わり、特に結合温度によって調節可能である。
本発明は、他の観点において、前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を持つ核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体を含む疾病の診断用組成物に関する。
好ましくは、本発明に係る皮膚透過性伝達体が疾病の診断目的に用いられる場合、構造式(1)による前記生物活性核酸又はキャリアペプチド核酸の両末端には、レポーター(reporter)とレポーター蛍光を消光(quenching)可能なクエンチャー(quencher)が結合できる。前記レポーター(reporter)はFAM(6−carboxyfluorescein)、Texas red、HEX(2’,4’,5’,7’,−tetrachloro−6−carboxy−4,7−dichlorofluorescein)及びCY5から構成される群から選ばれる一つ以上であり得、好ましくは、CY5を使用する。前記クエンチャーはTAMRA(6−carboxytetramethyl−rhodamine)、BHQ1、BHQ2及びDabcylから構成される群から選ばれるいずれか一つ以上であり得るが、これに限定されるものではない。
本発明は、さらに他の観点において、前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体を含む疾病の予防又は治療用組成物に関する。
本発明は、さらに他の観点において、前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体を、予防又は治療が必要な患者に投与することを特徴とする疾病の予防又は治療方法を提供する。
本発明は、さらに他の観点において、疾病の予防又は治療のための前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体の用途に関する。
本発明は、さらに他の観点において、疾病の予防又は治療用薬剤の製造のための前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体の使用に関する。
本発明の“標的遺伝子”は、活性、抑制又は標識しようとする核酸配列(塩基配列)を意味し、用語“標的核酸”と同一のものであり、本明細書で同じ意味で使われる。
前記標的遺伝子を含む標的核酸(塩基配列)が生体外(in vitro)又は生体内(in vivo)で前記複合体と接触(結合)すると、キャリアペプチド核酸から生物活性核酸が分離され、生物学的活性を示す。
本発明において、前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を有する核酸複合体を用いて診断又は予防、治療可能な疾病は、前記核酸複合体内の生物活性核酸が結合する標的遺伝子又は核酸複合体と結合した治療用薬物によって決定され得、
好ましくは、皮膚疾患、例えば乾癬(psoriasis)、アトピー皮膚炎(atopic dermatitis)を含むアトピー疾患(atopic disease)、黒色腫(melanoma)などの皮膚癌(skin cancer)、ケロイド(Keloid)性疾患、皮膚損傷及び色素沈着などの疾患、腫瘍又は癌、炎症性疾患、老人性黄斑変性、糖尿病性網膜症、希少疾患及び重症疾患、心血管疾患、代謝性疾患などの治療に用いられ得るが、これに限定されるものではない。
一方、本発明において、用語“治療用組成物”は、“医薬(薬剤学的、薬学的)組成物(pharmaceutical composition)”と同じ意味で使用でき、本発明の生物活性核酸及び前記核酸と結合するキャリアペプチド核酸を含む核酸複合体を有効成分として含み、前記核酸複合体に目的する疾患を治療するための治療用薬物がさらに結合した形態であり得る。
これによって、本発明において、前記皮膚通過伝達体を含む治療用組成物を用いて予防又は治療可能な疾病は、皮膚疾患、例えば乾癬(psoriasis)、アトピー皮膚炎(atopic dermatitis)を含むアトピー疾患(atopic disease)、黒色腫(melanoma)などの皮膚癌(skin cancer)、ケロイド(ケロイド)性疾患、皮膚損傷及び色素沈着などの疾患、腫瘍又は癌、炎症性疾患、老人性黄斑変性、糖尿病性網膜症、希少疾患及び重症疾患、心血管疾患、代謝性疾患などを挙げることができるが、これに限定されるものではない。
本発明の治療用組成物は、標準医薬実施にしたがって皮膚伝達形態の剤形に剤形化できる。それらの剤形は、有効成分の他に、薬学的に許容される、特に皮膚に適用可能な形態の剤形に適した担体、賦形剤、補助剤又は希釈剤などの添加物を含有することもできる。
好ましくは、本発明に係る治療用組成物は、水性液、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、塗抹剤又はパッチの形態に剤形化できる。
最も好ましくは、水性液の形態に剤形化でき、このとき、水性液は蒸留水及びバッファー溶液の形態が用いられ得る。
用語“薬学的に許容される(physiologically acceptable)”とは、化合物の生物学的活性と物性を損傷させない特性を意味する。
用語“担体(carrier)”とは、細胞又は組織内への核酸複合体の付加を容易にする化合物と定義される。例えば、ジメチルスルホキシド(DMSO)は、生物体の細胞又は組織内への多くの有機化合物の投入を容易にする通常の担体である。
用語“希釈剤(diluent)”とは、対象化合物の生物学的活性形態を安定化させるだけでなく、化合物を溶解させる水で希釈される化合物と定義される。バッファー溶液に溶解されている塩は、当該分野で希釈剤として用いられる。通常用いられるバッファー溶液は、リン酸塩バッファー食塩水であり、これはヒト溶液の塩状態を摸倣しているためである。バッファー塩は低い濃度で溶液のpHを制御できるので、バッファー希釈剤が化合物の生物学的活性を変形することは稀である。
本発明における核酸複合体を含有する物質は、患者に、それ単独で又は併用療法(combination therapy)のように他の活性成分と併用して又は適当な担体や賦形剤と共に混合された医薬組成物として投与できる。
本発明における使用に適した医薬組成物には、活性成分がそれらの意図した目的を達成するのに有効な量で含まれている組成物が含まれる。より具体的に、治療的有効量は、治療される客体の生存を延長したり、疾患の症状を防止、軽減又は緩和させるのに有効な化合物の量を意味する。治療的有効量の決定は、特に、ここに提供された詳細な開示内容の側面において、通常の技術者の能力範囲内にある。
本発明で用いられる用語“予防”は、前記皮膚透過性伝達体を含む治療用組成物の投与(又は塗布)により疾患の発病を予防したり、その進行を抑制させる全ての行為を意味する。
また、本発明で用いられる用語“治療”は、前記皮膚透過性伝達体を含む治療用組成物の投与(又は塗布)により疾患の症状が好転又は完治する全ての行為を意味する。
本発明において、前記皮膚透過性伝達体を含む疾病の予防又は治療用組成物は、好ましくは皮膚疾患の予防又は治療用組成物であることを特徴とし得る。前記核酸複合体内に含まれた生物活性核酸が結合する標的遺伝子は、IFI16、TGFβR2、TLR2、smad3及びTIEG1からなる群から選ばれるいずれか一つ以上を挙げることができるが、これに限定されない。前記皮膚疾患は、乾癬、皮膚癌、アトピー疾患又はケロイド性疾患及び色素沈着などがあるが、これに限定されるものではない。
好ましくは、本発明は乾癬(psoriasis)治療用組成物を提供する。本発明に係る乾癬治療用組成物は、配列番号22で表されるIFI16特異的生物活性ペプチド核酸及びこれに相補的なキャリアペプチド核酸を含む。キャリアペプチド核酸は、好ましくは、配列番号23又は24の配列を有することができ、前記配列の一部がユニバーザル塩基に置換されて用いられてもよい。
本発明はまた、悪性黒色腫(malignant melanoma)治療用組成物を提供する。本発明に係る悪性黒色腫(malignant melanoma)治療用組成物は、配列番号25又は26の配列であるTGFRβ2特異的生物活性ペプチド核酸又はそれぞれこれに相補的なキャリアペプチド核酸を含む。キャリアペプチド核酸は、好ましくは、配列番号27〜30の配列を有することができ、前記配列の一部がユニバーザル塩基に置換されて用いられてもよい。
本発明はまた、アトピー皮膚炎(atopic dermatitis)治療用組成物を提供する。本発明に係るアトピー皮膚炎(atopic dermatitis)治療用組成物は、配列番号31又は32の配列であるTLR2特異的生物活性ペプチド核酸及びこれに相補的なキャリアペプチド核酸を含む。キャリアペプチド核酸は、好ましくは、配列番号33〜35の配列を有することができ、前記配列の一部がユニバーザル塩基に置換されて用いられてもよい。
本発明はまた、皮膚損傷治療用組成物を提供する。前記治療用組成物は皮膚創傷治療(skin wound healing)を含む皮膚再生(skin regeneration)のためのものであるが、これに制限されるものではない。本発明に係る皮膚損傷治療用組成物は、配列番号36又は37の配列であるsmad3特異的生物活性ペプチド核酸及びこれに相補的なキャリアペプチド核酸を含む。キャリアペプチド核酸は、好ましくは、配列番号38〜41の配列を有することができ、前記配列の一部がユニバーザル塩基に置換されて用いられてもよい。
本発明はまた、ケロイド(keloid)治療用組成物を提供する。本発明に係るケロイド(keloid)治療用組成物は、配列番号42又は43の配列であるTIEG1特異的生物活性ペプチド核酸及びこれに相補的なキャリアペプチド核酸を含む。キャリアペプチド核酸は、好ましくは、配列番号44〜47の配列を有することができ、前記配列の一部がユニバーザル塩基に置換されて用いられてもよい。
本発明において、前記皮膚透過性伝達体に含まれた核酸複合体は、リポソーム(liposome)などの伝達体を用いて投与(又は塗布)しもてよい。前記リポソームは、リンパ組織のような特定組織に対して前記複合体を標的化したり、或いは感染細胞に対して選択的に標的化することに役立てることができ、また、前記複合体が含まれた組成物の半減期を増加させることに役立てることができる。リポソームにはエマルジョン、フォーム(foam)、マイセル(micelle)、不溶性単層、液晶、リン脂質分散物、ラメラ層(lamellar layer)などがある。このような製剤において、送達される前記複合体は、単独で又は特定細胞を対象に、CD45抗原に結合するモノクローナル抗体のようなリンパ細胞のうち優勢な受容体に結合する分子と共に又はその他治療組成物と共に、リポソームの一部として混入させる。したがって、本発明の所定複合体で充填又は塗布されて(decorated)前記核酸複合体組成物を送達するリポソームは、リンパ細胞の前記部位に指向され得る。
本発明によって使用するためのリポソームは一般に、中性及び負電荷リン脂質及びコレステロールなどのステロールをはじめとする標準ベシクル(vesicle)−形成脂質から形成される。一般に、例えば、血流中のリポソームの安定性、酸不安定性(acid lability)及びリポソームのサイズなどを考慮して脂質を選択する。リポソーム製造には様々な方法を用いることができる。例えば、文献[Szoka,et al.,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.,9:467,1980)、及び米国特許第4,235,871号、第4,501,728号、第4,837,028号及び第5,019,369号]に記載のような方法を用いることができる。
本発明は、さらに他の観点において、前記構造式(1)又は構造式(2)の構造を有する核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体を個体に投与(又は塗布)して疾病を治療し抑制(又は緩和)する方法を提供する。
本発明に係る伝達体を用いて治療可能な疾患は、使用される生物活性核酸の特性によって決定され得るが、特に制限されない。
本発明に係る伝達体を含む組成物は、上記の疾患を治療するために又は前記疾患の症状を抑制(又は緩和)するために医薬として効果的な量で皮膚に適用され得る。皮膚疾患の種類、患者の年齢、体重、症状の特性及び程度、現在治療法の種類、治療回数、適用形態及び経路などの様々な要因によって変わり得るが、当該分野における専門家によって容易に決定され得る。本発明の組成物は、上述した薬理学的又は生理学的成分を共に適用したり順次に適用でき、また、追加の従来の治療剤と併用して適用されてもよく、従来の治療剤とは順次に又は同時に適用され得る。このような適用は単一又は多重適用であり得る。
本発明において、“個体”は、本発明に係る皮膚透過性伝達体を投与(塗布)して軽減、抑制又は治療可能な状態又は疾患を病んでいるかその危険がある哺乳動物を意味し、好ましくはヒトを意味する。
また、本発明の化合物の人体に対する投与量(塗布量)は、患者の年齢、体重、性別、投与(塗布)形態、健康状態及び疾患程度によって変わってもよく、体重が70kgである成人患者を基準にする時、一般に0.001〜1,000mg/日であり、好ましくは0.01〜500mg/日であり、医師又は薬剤師の判断によって一定時間間隔で1日1回又は数回分割投与(塗布)してもよい。
本明細書に記載されている皮膚透過性伝達体又はこれを含む組成物の毒性と治療効率性は、例えば、LD50(群集の50%に対する致死量)、ED50(群集の50%に対して治療効果を有する線量)、IC50(群集の50%に対して治療抑制効果を有する線量)を決定するために、細胞培養又は実験動物における標準製薬過程によって算定され得る。毒性と治療効果間の線量比が治療指数であり、これはLD50とED50(又は、IC50)間の比率として表現され得る。高い治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養分析から得られたデータは、ヒトに使用する線量の範囲を算定するために用いることができる。当該化合物の投与量(dosage)又は塗布量は、好ましくは、毒性がないか或いは殆どない状態でED50(又は、IC50)を含む循環濃度の範囲内にある。
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は単に本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されるものとして解釈されないことは、当業界で通常の知識を有する者にとって明らかであろう。
実施例1:生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)及びキャリアペプチド核酸、及びそれらを用いた複合体の製造
本発明に係る構造式(1)の核酸複合体の皮膚透過効果及び皮膚残留効果の検証のために、標的遺伝子として乾癬疾患標的遺伝子であるIFI16を使用した。IFI16は、乾癬疾患を持つ患者の皮膚で共通に発現するタンパク質であり、乾癬治療において主要標的になると予測されている(Up−regulation of Interferon−inducible protein 16 contributes to psoriasis by modulating chemokine production in keratinocytes6:25381)。
本発明に係る構造式(1)の核酸複合体の皮膚透過効果及び皮膚残留効果の検証のために、標的遺伝子として乾癬疾患標的遺伝子であるIFI16を使用した。IFI16は、乾癬疾患を持つ患者の皮膚で共通に発現するタンパク質であり、乾癬治療において主要標的になると予測されている(Up−regulation of Interferon−inducible protein 16 contributes to psoriasis by modulating chemokine production in keratinocytes6:25381)。
皮膚透過効果及び皮膚残留効果を確認するために、IFI16に対する生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)としてアンチセンスペプチド核酸(antisense PNA)及びRNAを使用した。
本発明の生物活性核酸(antisense PNA及びRNA)は、配列番号1〜9に記載される配列で構成されている。本実施例で用いられたペプチド核酸ベース生物活性核酸はイメージングのための蛍光(Cy3)を3’末端に結合させた。その塩基配列、単量体修飾及び構造は、下記表2の通りである。
本発明で使用した全てのペプチド核酸は、パナジン(PANAGENE、韓国)でHPLC精製方法によって合成した。本発明の実施例による全てのキャリアペプチド核酸は、配列番号10〜21に記載される配列で構成されている(表2)。
単量体の修飾は、電気的な性質を付与するためにペプチド核酸のバックボーンを、電気的陽性はリシン(Lysine,Lys,K,(+)と表記)で、電気的陰性はグルタミン酸(Glutamic acid,Glu,E,(−)と表記)で修飾されたペプチドバックボーンを有するように作製した。
それぞれの生物活性核酸とキャリアペプチド核酸の組合せは、DMSO下で混成化され、その結果、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸で構成された複合体が作製された。
実施例2:生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む核酸複合体の皮膚透過効果分析
実施例1で製造された複合体の皮膚透過効果を確認するために、ヌードマウスの背中に一定量を塗布して1、3、24時間放置した後、塗布した部位の組織を生検した。生検した組織を4%ホルマリン溶液に固定して1日間放置した後、凍結切片機を用いてマウスの背中組織を20μmに切片し、スライドにマウンティングした。マウンティングした組職に対して蛍光顕微鏡を用いて複合体の皮膚透過の有無を確認した。
実施例1で製造された複合体の皮膚透過効果を確認するために、ヌードマウスの背中に一定量を塗布して1、3、24時間放置した後、塗布した部位の組織を生検した。生検した組織を4%ホルマリン溶液に固定して1日間放置した後、凍結切片機を用いてマウスの背中組織を20μmに切片し、スライドにマウンティングした。マウンティングした組職に対して蛍光顕微鏡を用いて複合体の皮膚透過の有無を確認した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表3の通りである。
その結果、図3及び図4A〜図4Lに示すように、核酸複合体の様々な組合せにおいて1、3、24時間で組合せ別皮膚伝達効果を確認した。
実施例3:構造式(1)の構造を持つ複合体を含有し、低分子物質をリンカー媒介で連結した皮膚透過性伝達体を用いた皮膚透過効果分析
実施例1で製造された複合体と比較して複合体に低分子物質をリンカー媒介で連結した皮膚透過性伝達体の皮膚透過効果を確認するために、ヌードマウスの背中に一定量塗布して0、3、24時間放置した後、塗布した部位の組織を生検した。生検した組織を4%ホルマリン溶液に固定して1日間放置した後、凍結切片機を用いてマウスの背中組織を20μmに切片し、スライドにマウンティングした。マウンティングした組職に対して、蛍光顕微鏡を用いて、皮膚透過性伝達体である核酸複合体に低分子物質を連結した時の皮膚伝達効果を確認した。
実施例1で製造された複合体と比較して複合体に低分子物質をリンカー媒介で連結した皮膚透過性伝達体の皮膚透過効果を確認するために、ヌードマウスの背中に一定量塗布して0、3、24時間放置した後、塗布した部位の組織を生検した。生検した組織を4%ホルマリン溶液に固定して1日間放置した後、凍結切片機を用いてマウスの背中組織を20μmに切片し、スライドにマウンティングした。マウンティングした組職に対して、蛍光顕微鏡を用いて、皮膚透過性伝達体である核酸複合体に低分子物質を連結した時の皮膚伝達効果を確認した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表4の通りである。
その結果、図5A〜図5Cに示すように、低分子物質をリンカー媒介で連結した皮膚透過性核酸複合体でも既存核酸複合体と同様に3時間以降から皮膚伝達効果が現れることを蛍光顕微鏡で確認した。
実施例4:構造式(1)の構造を持つ複合体を含有する皮膚透過性伝達体を用いた乾癬(psoriasis)治療効果分析
実施例1によって下記表5の構造で製造されたIFI16を標的遺伝子とする生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む皮膚透過性伝達体を用いて乾癬治療効果を分析した。
実施例1によって下記表5の構造で製造されたIFI16を標的遺伝子とする生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む皮膚透過性伝達体を用いて乾癬治療効果を分析した。
実施例4−1:細胞培養
CLS(CLS Cell Lines Service、ドイツ)から入手したヒト角質細胞(HaCaT)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。乾癬様細胞モデルを作るためにIL−17Aを10ng/mLで処理して培養した。
CLS(CLS Cell Lines Service、ドイツ)から入手したヒト角質細胞(HaCaT)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。乾癬様細胞モデルを作るためにIL−17Aを10ng/mLで処理して培養した。
実施例4−2:MTT(MTT assay)を用いて角質細胞株で細胞生存率分析
実施例1によって表5の構造で製造された生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を用いて96ウェルプレートに6×103に細胞をシードし、24時間培養後に、実施例4−1の条件で培養されたヒト由来角質細胞株にMTT(3−(4,5−Dimethylthiazol−2−yl)−2,5−Diphenyltetrazolium Bromide)溶液を1X PBSに5mg/mL濃度で製造し、ウェル当たり20μLで処理して4時間培養後、OD(optical density)をスペクトロフォトメータで測定して分析した。
実施例1によって表5の構造で製造された生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を用いて96ウェルプレートに6×103に細胞をシードし、24時間培養後に、実施例4−1の条件で培養されたヒト由来角質細胞株にMTT(3−(4,5−Dimethylthiazol−2−yl)−2,5−Diphenyltetrazolium Bromide)溶液を1X PBSに5mg/mL濃度で製造し、ウェル当たり20μLで処理して4時間培養後、OD(optical density)をスペクトロフォトメータで測定して分析した。
配列番号22及び配列番号23の核酸複合体を用いた(PNA4)。その結果、図6Aに示すように、IL−17Aで誘導された乾癬様細胞モデルにおいて核酸複合体によって細胞生存率が濃度依存的に減少することを確認した。
実施例4−3:ウェスタンブロット分析(Western blot assay)で遺伝子発現の分析
ヒト由来角質細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例4−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物(protein lysate)を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜(PVDF membrane)にタンパク質を移した後、1次抗体であるIFI16(Cell signaling Technology、米国)、p−NFkB(Cell signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ(Goat Anti−Rabbit)(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(SupersignalTM West Femto Maximum Sensitivity Substrate)(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて角質細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
ヒト由来角質細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例4−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物(protein lysate)を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜(PVDF membrane)にタンパク質を移した後、1次抗体であるIFI16(Cell signaling Technology、米国)、p−NFkB(Cell signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ(Goat Anti−Rabbit)(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(SupersignalTM West Femto Maximum Sensitivity Substrate)(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて角質細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
表5の配列番号22及び配列番号23の核酸複合体に対して角質細胞株におけるIFI16タンパク質及び下位経路遺伝子の発現パターン分析した。その結果、図6Bに示すように、核酸複合体を通して濃度依存的に標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現が時間によって抑制されることを確認した。
実施例4−4:イミキモド(Imiquimod)を用いた乾癬誘導動物モデルにおける乾癬表現型効果分析
Balb/Cマウスの右耳に毎日62.5mgの5%イミキモドを塗布して7日間乾癬誘導動物モデルを作り、表5の配列番号22及び配列番号23の核酸複合体に対して乾癬モデル表現型を写真で分析し、耳の厚さをマイクロメーターで測定した。
Balb/Cマウスの右耳に毎日62.5mgの5%イミキモドを塗布して7日間乾癬誘導動物モデルを作り、表5の配列番号22及び配列番号23の核酸複合体に対して乾癬モデル表現型を写真で分析し、耳の厚さをマイクロメーターで測定した。
その結果、乾癬表現型が核酸複合体グループで減少することを確認し(図6C)、耳の厚さの測定から、乾癬を誘導した動物グループと比較した時、核酸複合体を塗布したグループで耳の厚さが減少することが確認できた(図6D;PNA1は剤形を含んでいない核酸複合体であり、PNA2はクリーム剤形を含む核酸複合体)。
実施例4−5:H&E染色で乾癬誘導動物モデルにおける表現型分析
実施例4−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの耳組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して組織を5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職をヘマトキシリン:エオイン染色溶液に一定時間染色し、1X PBSで水洗した後、顕微鏡で分析した。
実施例4−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの耳組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して組織を5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職をヘマトキシリン:エオイン染色溶液に一定時間染色し、1X PBSで水洗した後、顕微鏡で分析した。
その結果、図6Eに示すように、乾癬を誘導した対照群に比べて核酸複合体を処理したグループにおいて皮膚の表皮の異常増殖が減少したことが確認できた。
実施例4−6:免疫染色で乾癬誘導動物モデルにおける組織内炎症性マーカー分析
実施例4−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの耳組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職を0.5% BSA溶液に1時間ブロッキングし、CD3、CD11cの1次抗体溶液を処理して1日間処理した。次いで、1次抗体溶液を除去し、1X PBSで洗浄した後に2次抗体溶液を処理して常温で2時間処理し、DAB染色により分析した。
実施例4−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの耳組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職を0.5% BSA溶液に1時間ブロッキングし、CD3、CD11cの1次抗体溶液を処理して1日間処理した。次いで、1次抗体溶液を除去し、1X PBSで洗浄した後に2次抗体溶液を処理して常温で2時間処理し、DAB染色により分析した。
その結果、図6Fに示すように、組織内炎症性マーカーであるCD3とCD11cが、乾癬誘導した対照群に比べて核酸複合体グループにおいて減少することを確認した。
実施例5:構造式(1)の構造を持つ複合体を含有する皮膚透過性伝達体を用いた悪性黒色腫(malignant melanoma)治療効果分析
核酸複合体の悪性黒色腫治療効果分析のために標的遺伝子としてTGFβR2を使用した。癌転移作用機序のうちTGFβ−2によって活性化される機序を抑制するRNAベース治療剤の開発が確認されたので、ペプチド核酸複合体を用いた治療効果を検証しようとした。
核酸複合体の悪性黒色腫治療効果分析のために標的遺伝子としてTGFβR2を使用した。癌転移作用機序のうちTGFβ−2によって活性化される機序を抑制するRNAベース治療剤の開発が確認されたので、ペプチド核酸複合体を用いた治療効果を検証しようとした。
実施例5−1:細胞培養
ATCC(American Type Culture Collection、米国)から入手した皮膚転移性黒色腫(A375SM)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。細胞の転移性確認のためにTGFβ−2を5ng/mLで処理して培養した。
ATCC(American Type Culture Collection、米国)から入手した皮膚転移性黒色腫(A375SM)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。細胞の転移性確認のためにTGFβ−2を5ng/mLで処理して培養した。
実施例5−2:ウェスタンブロット分析(Western blot assay)で遺伝子発現の分析
転移性皮膚黒色腫細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例5−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるTGFβR2(Abcam、米国)、MMP9(SantaCruz Biotech.、米国)、p−Akt1(Cell signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス(Goat Anti−mouse)(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて転移性皮膚黒色腫細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
転移性皮膚黒色腫細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例5−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるTGFβR2(Abcam、米国)、MMP9(SantaCruz Biotech.、米国)、p−Akt1(Cell signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス(Goat Anti−mouse)(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて転移性皮膚黒色腫細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
転移性皮膚黒色腫細胞株におけるTGFβR2タンパク質及び下位経路遺伝子の発現パターン分析した。本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表7の通りである。
その結果、図7Aに示すように、核酸複合体によって濃度依存的に標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現が時間によって抑制されることを確認した。
実施例5−3:細胞移動能力分析(Cell migration assay)で核酸複合体を用いた細胞移動能力抑制効果分析
転移性皮膚黒色腫細胞株は、24ウェルのトランスウェルプレートに2×104で細胞を上チャンバーにシードし、全てのチャンバーにはウシ胎児血清のない培地を処理して24時間培養後、実施例5−1の条件で実験を行い、生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を上チャンバーに処理し、下チャンバーにTGFβ−2を20ng/mLで処理して24、48、72時間培養した後、細胞の移動能力を0.5%クリスタルバイオレットで染色した。染色した細胞をメタノールで処理してクリスタルバイオレットを溶かした後、450nmで吸光度を測定した。
転移性皮膚黒色腫細胞株は、24ウェルのトランスウェルプレートに2×104で細胞を上チャンバーにシードし、全てのチャンバーにはウシ胎児血清のない培地を処理して24時間培養後、実施例5−1の条件で実験を行い、生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を上チャンバーに処理し、下チャンバーにTGFβ−2を20ng/mLで処理して24、48、72時間培養した後、細胞の移動能力を0.5%クリスタルバイオレットで染色した。染色した細胞をメタノールで処理してクリスタルバイオレットを溶かした後、450nmで吸光度を測定した。
前記表7の核酸複合体に対して転移性皮膚黒色腫細胞株における細胞移動力抑制効果を分析した。その結果、図7Bに示すように、核酸複合体によって時間別に細胞移動能力が抑制されることを確認した。
実施例6:構造式(1)の構造を持つ複合体を含有する皮膚透過性伝達体を用いたアトピー皮膚炎(atopic dermatitis)治療効果分析
核酸複合体のアトピー皮膚炎治療効果分析のために標的遺伝子としてTLR2(Toll−Like Receptor 2)を使用した。アレルギー誘発物質や細菌が皮膚に浸透する時に発現する遺伝子であるTLR2はアトピー皮膚炎患者には過発現しており、皮膚内炎症性サイトカインによる炎症増加によってアトピー皮膚炎を悪化させる。このため、TLR2はアトピー皮膚炎において主要標的になると予測されている。
核酸複合体のアトピー皮膚炎治療効果分析のために標的遺伝子としてTLR2(Toll−Like Receptor 2)を使用した。アレルギー誘発物質や細菌が皮膚に浸透する時に発現する遺伝子であるTLR2はアトピー皮膚炎患者には過発現しており、皮膚内炎症性サイトカインによる炎症増加によってアトピー皮膚炎を悪化させる。このため、TLR2はアトピー皮膚炎において主要標的になると予測されている。
実施例6−1:細胞培養
CLS(CLS Cell Lines Service、ドイツ)から入手したヒト角質細胞(HaCaT)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。アトピー皮膚炎様細胞モデルを作るためにイエダニ抽出液5ng/mLとDNCB(2−dinitrochlorobenzene)5μMを処理して24時間培養した。
CLS(CLS Cell Lines Service、ドイツ)から入手したヒト角質細胞(HaCaT)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。アトピー皮膚炎様細胞モデルを作るためにイエダニ抽出液5ng/mLとDNCB(2−dinitrochlorobenzene)5μMを処理して24時間培養した。
実施例6−2:MTT(MTT assay)で角質細胞株における細胞生存率分析
実施例6−1の実験条件で96ウェルにヒト由来角質細胞株を6×103でシードし、24時間培養した後、表5の構造で製造された生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を用いて処理された細胞株にMTT(3−(4,5−Dimethylthiazol−2−yl)−2,5−Diphenyltetrazolium Bromide)溶液を1X PBSに5mg/mL濃度に製造し、ウェル当たり20μLで処理して4時間培養後、OD(optical density)をスペクトロフォトメータで測定して分析した。
実施例6−1の実験条件で96ウェルにヒト由来角質細胞株を6×103でシードし、24時間培養した後、表5の構造で製造された生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を用いて処理された細胞株にMTT(3−(4,5−Dimethylthiazol−2−yl)−2,5−Diphenyltetrazolium Bromide)溶液を1X PBSに5mg/mL濃度に製造し、ウェル当たり20μLで処理して4時間培養後、OD(optical density)をスペクトロフォトメータで測定して分析した。
その結果、図8Aに示すように、イエダニ抽出物又はDNCBで誘導されたアトピー皮膚炎様細胞モデルにおいて核酸複合体によって細胞生存率が濃度依存的に減少することを確認した。
実施例6−3:ウェスタンブロット分析(Western blot assay)で遺伝子発現の分析
ヒト由来角質細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例6−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物をBCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるTLR2(SantaCruz Biotech.、米国)、MMP9(SantaCruz Biotech.、米国)、p−NFkB(Cell signaling Technology、米国)、MyD88(Cell signaling Technology、米国)、TARC(Abcam、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて角質細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
ヒト由来角質細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例6−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物をBCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるTLR2(SantaCruz Biotech.、米国)、MMP9(SantaCruz Biotech.、米国)、p−NFkB(Cell signaling Technology、米国)、MyD88(Cell signaling Technology、米国)、TARC(Abcam、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて角質細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表9の通りである。
その結果、図8Bに示すように、核酸複合体によって濃度依存的に標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現が時間によって抑制されることを確認した。
実施例6−4:イエダニ抽出物及びDNCBを用いたアトピー皮膚炎誘導動物モデルにおけるアトピー皮膚炎表現型効果分析
NC/Ngaマウスの背中を除毛し、ADクリーム(イエダニ抽出物クリーム、Biostir、日本)を100mgずつ1週に2回で総3週間塗布し、イエダニによるアトピー皮膚炎誘発動物モデルを構築した。また、Balb/Cマウスの背中を除毛し、1週に2回で総3週間50μMのDNCBを塗布し、新居症候群によるアトピー皮膚炎誘発動物モデルを構築した。1週間総3回クリーム剤形の核酸複合体を処理し、アトピー皮膚炎動物モデル表現型を写真で分析し、背中部位の育毛程度をImageJで測定した。
NC/Ngaマウスの背中を除毛し、ADクリーム(イエダニ抽出物クリーム、Biostir、日本)を100mgずつ1週に2回で総3週間塗布し、イエダニによるアトピー皮膚炎誘発動物モデルを構築した。また、Balb/Cマウスの背中を除毛し、1週に2回で総3週間50μMのDNCBを塗布し、新居症候群によるアトピー皮膚炎誘発動物モデルを構築した。1週間総3回クリーム剤形の核酸複合体を処理し、アトピー皮膚炎動物モデル表現型を写真で分析し、背中部位の育毛程度をImageJで測定した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表10の通りである。
図8C及び8Eに示すように、アトピー皮膚炎表現型が核酸複合体グループで減少することを確認した。
実施例6−5:血清内IgE及びTARC濃度変化分析
実施例6−4の条件で行った動物実験において最終実験終了日にマウス血液を眼窩採血によって収集して常温で2時間以上放置し、遠心分離機(14,000rpm,15min)を用いて血清を収集した。収集した血清をIgE ELISAキット(ゴマバイオテック、韓国)及びTARC ELISAキット(R&D system、米国)から提供する実験方法に従って血清内IgE及びTARCの濃度を測定した。
実施例6−4の条件で行った動物実験において最終実験終了日にマウス血液を眼窩採血によって収集して常温で2時間以上放置し、遠心分離機(14,000rpm,15min)を用いて血清を収集した。収集した血清をIgE ELISAキット(ゴマバイオテック、韓国)及びTARC ELISAキット(R&D system、米国)から提供する実験方法に従って血清内IgE及びTARCの濃度を測定した。
その結果、図8D及び図8Fに示すように、アトピー皮膚炎を誘導した対照群に比べて核酸複合体を処理したグループにおいてIgE及びTARCの濃度が陰性対照群と類似なレベルに減少したことが確認できた。
実施例6−6:H&E染色でアトピー皮膚炎誘導動物モデルにおける組織内表現型分析
実施例6−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの耳組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して組織を5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職をヘマトキシリン:エオイン染色溶液に一定時間染色し、1X PBSで水洗した後、顕微鏡で分析した。
実施例6−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの耳組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して組織を5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職をヘマトキシリン:エオイン染色溶液に一定時間染色し、1X PBSで水洗した後、顕微鏡で分析した。
その結果、図8G及び図8Hに示すように、アトピー皮膚炎を誘導した対照群に比べて核酸複合体を処理したグループにおいて皮膚の表皮の異常増殖が減少したことが確認できた。
実施例6−7:免疫染色で乾癬誘導動物モデルにおける組織内炎症性マーカー分析
実施例6−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの背中組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職を0.5% BSA溶液に1時間ブロッキングし、CD3、CD11cの1次抗体溶液を処理して1日間処理した。次いで、1次抗体溶液を除去し、1X PBSで洗浄した後、2次抗体溶液を処理して常温で2時間処理し、DAB染色により分析した。
実施例6−4の条件で実験を行い、最終実験終了日にマウスの背中組織を生検して4%ホルマリン溶液に1日間固定し、固定した組織をパラフィン包埋して5μmにセクションし、スライドガラスにマウンティングした。マウンティングした組職を0.5% BSA溶液に1時間ブロッキングし、CD3、CD11cの1次抗体溶液を処理して1日間処理した。次いで、1次抗体溶液を除去し、1X PBSで洗浄した後、2次抗体溶液を処理して常温で2時間処理し、DAB染色により分析した。
その結果、図8I及び8Jに示すように、組織内炎症性マーカーであるCD3が、アトピー皮膚炎を誘導した対照群に比べて核酸複合体グループにおいて減少することを確認した。
実施例7:構造式(1)の構造を持つ複合体を含有する皮膚透過性伝達体を用いた皮膚再生(skin regeneration)効果分析
核酸複合体の皮膚再生効果分析のために標的遺伝子としてsmad3を使用した。smad3は怪我した皮膚で過発現するタンパク質であり、皮膚再生において主要標的になると予測されている
核酸複合体の皮膚再生効果分析のために標的遺伝子としてsmad3を使用した。smad3は怪我した皮膚で過発現するタンパク質であり、皮膚再生において主要標的になると予測されている
実施例7−1:細胞培養
CLS(CLS Cell Lines Service、ドイツ)から入手したヒト角質細胞(HaCaT)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。細胞の移動能力を確認するために、TGFβ−1を5ng/mLで処理して培養した。
CLS(CLS Cell Lines Service、ドイツ)から入手したヒト角質細胞(HaCaT)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。細胞の移動能力を確認するために、TGFβ−1を5ng/mLで処理して培養した。
実施例7−2:怪我後再生分析(Wound−Healing assay)で核酸複合体を用いた細胞移動能力向上効果分析
ヒト由来角質細胞株は、12ウェルプレートに2×104で細胞をシードし、ウシ胎児血清のない培地を処理して24時間培養後、実施例7−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、TGFβ−1を5ng/mLで処理して24、48時間培養した後、細胞の移動能力を顕微鏡で分析した。
ヒト由来角質細胞株は、12ウェルプレートに2×104で細胞をシードし、ウシ胎児血清のない培地を処理して24時間培養後、実施例7−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、TGFβ−1を5ng/mLで処理して24、48時間培養した後、細胞の移動能力を顕微鏡で分析した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表12の通りである。
その結果、図9Aに示すように、TGFβ−1を処理した陽性対照群に比べて核酸複合体を処理したグループにおいて細胞の移動能力が向上することを確認した。
実施例7−3:ウェスタンブロット分析(Western blot assay)で遺伝子発現分析
ヒト由来角質細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例7−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるp−smad3(Cell signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて角質細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
ヒト由来角質細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例7−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるp−smad3(Cell signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tを用いて洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いて角質細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表13の通りである。
その結果、図9Bに示すように、核酸複合体によって濃度別に標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現が時間によって抑制されることを確認した。
実施例8:構造式(1)の構造を持つ複合体を含有する皮膚透過性伝達体を用いたケロイド(keloid)治療効果分析
核酸複合体の怪我後肥大症(ケロイド、keloids)治療効果分析のために標的遺伝子としてTIEG1を使用した。TIEG1はケロイド患者の皮膚組織で過発現するタンパク質であり、ケロイド治療において主要標的になると予測されている。
核酸複合体の怪我後肥大症(ケロイド、keloids)治療効果分析のために標的遺伝子としてTIEG1を使用した。TIEG1はケロイド患者の皮膚組織で過発現するタンパク質であり、ケロイド治療において主要標的になると予測されている。
実施例8−1:細胞培養
ATCC(American Type Culture Collection、米国)から入手したケロイド線維芽細胞細胞(KEL FIB)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。
ATCC(American Type Culture Collection、米国)から入手したケロイド線維芽細胞細胞(KEL FIB)を、DMEM培養培地(Dulbecco Modified Eagle Medium、ウェルジン、韓国)に10%(v/v)ウシ胎児血清、ペニシリン100units/ml、ストレプトマイシン100μg/mlを添加し、37℃、5%(v/v)CO2の条件下で培養した。
実施例8−2:MTT(MTT assay)でケロイド線維芽細胞細胞株における細胞生存率分析
実施例8−1の実験条件で96ウェルにケロイド線維芽細胞細胞株を6×103でシードし、24時間培養した後、表5の構造で製造された生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を用いて処理された細胞株に、MTT(3−(4,5−Dimethylthiazol−2−yl)−2,5−Diphenyltetrazolium Bromide)溶液を1X PBSに5mg/mL濃度に製造し、ウェル当たり20μLで処理して4時間培養後、OD(optical density)をスペクトロフォトメータで測定して分析した。
実施例8−1の実験条件で96ウェルにケロイド線維芽細胞細胞株を6×103でシードし、24時間培養した後、表5の構造で製造された生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を用いて処理された細胞株に、MTT(3−(4,5−Dimethylthiazol−2−yl)−2,5−Diphenyltetrazolium Bromide)溶液を1X PBSに5mg/mL濃度に製造し、ウェル当たり20μLで処理して4時間培養後、OD(optical density)をスペクトロフォトメータで測定して分析した。
本実施例で使用した核酸複合体の組合せは、下記表15の通りである。
その結果、図10Aに示すように、ケロイド線維芽細胞細胞株において核酸複合体によって細胞生存率が濃度依存的に減少することを確認した。
実施例8−3:ウェスタンブロット分析(Western blot assay)で遺伝子発現の分析
ケロイド線維芽細胞細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例8−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるTIEG1(SantaCruz Biotech.、米国)、p−smad2(SantaCruz Biotech.、米国)、smad7(Cell Signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tで洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いてケロイド線維芽細胞細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
ケロイド線維芽細胞細胞株は、6ウェルプレートに1×105で細胞をシードし、24時間培養後、実施例8−1の条件で実験を行って生物活性ペプチド核酸及びキャリアペプチド核酸を含む複合体を処理し、24、48、72時間培養した後、RIPAバッファーを各ウェルに30μLずつ添加してタンパク溶解物を得た。タンパク溶解物は、BCA分析キット(Thermo Fisher、米国)を用いてタンパク質の量を定量し、タンパク質30μgを電気泳動してサイズ別に分離し、PVDF膜にタンパク質を移した後、1次抗体であるTIEG1(SantaCruz Biotech.、米国)、p−smad2(SantaCruz Biotech.、米国)、smad7(Cell Signaling Technology、米国)を1:1000に処理し、4℃で1日間放置した。1X TBS−Tで洗浄し、2次抗体であるヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス(SantaCruz Biotech.、米国)を1:2000に処理し、常温で2時間放置した。SupersignalTMウェストフェムト最大感度基質(Thermo Fisher、米国)を処理し、Image600(Amersham、ドイツ)装備を用いてケロイド線維芽細胞細胞株において標的遺伝子の発現抑制効率を分析した。
前記表14の核酸複合体に対して角質細胞株におけるTIEG1タンパク質及び下位経路遺伝子の発現パターン分析した。その結果、図10Bに示すように、核酸複合体によって濃度依存的に標的遺伝子の発現及び下位経路遺伝子の発現が時間によって抑制されることを確認した。
本発明によれば、構造式(1)の構造を持つ核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体は、大きい分子量の薬物を効果的に伝達するための皮膚透過機能と体内有効性を同時に有する。
本発明に係る伝達体は、特に、生物活性核酸又は様々な化合物の皮膚角質層、表皮層及び/又は真皮層通過を可能にし、皮膚表面に塗布される治療用薬物の外用的処置及び血液などの体内循環系に目的する薬物が伝達されることを可能にする。
以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者にとって、このような具体的記述は単に好ましい実施態様であるだけで、これによって本発明の範囲が制限されるものでない点は明らかであろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付する請求項及びそれらの等価物によって定義されるといえよう。
Claims (23)
- 下記構造式(1)の構造を持つ核酸複合体を含有する皮膚透過性伝達体:
構造式(1)
[A≡C(+)]
前記構造式(1)において、
Aは、目的とする遺伝子と結合可能な配列又は目的とする遺伝子配列を有する生物活性核酸(Bioactive Nucleic Acid)であり、
Cは、生物活性核酸と結合可能なキャリアペプチド核酸(Carrier Peptide Nucleic Acid)であり、
‘≡’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸間の相補的な結合を意味し、
Aで表される生物活性核酸は全体的に負電荷又は中性を有し、
C(+)は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を有するということを意味し、
キャリアペプチド核酸は、キャリアペプチド核酸が全体的に正電荷を帯びるように修飾されたペプチド核酸単量体を一つ以上含む。 - 前記核酸複合体は皮膚残留性を有することを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記核酸複合体は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸のエンドソーム脱出(endosome escape)を助ける物質をさらに含み、下記構造式(2)の構造を有することを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体:
構造式(2)
[mA≡mC(+)]
前記構造式(2)において、
‘m’は、生物活性核酸とキャリアペプチド核酸のエンドソーム脱出(endosome escape)を助ける物質を意味する。 - 前記生物活性核酸又はキャリアペプチド核酸は、それぞれの核酸の5’末端又は3’末端にエンドソーム脱出を助ける物質が結合していることを特徴とする、請求項3に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記エンドソーム脱出を助ける物質は、ペプチド、脂質ナノ物質(lipid nanoparticles)、接合体ナノ物質(polyplex nanoparticles)、高分子ナノ球(polymer nanospheres)、無機物ナノ物質(inorganic nanoparticles)、陽イオン脂質ナノ物質(cationic lipid−based nanoparticles)、陽イオン高分子(cationic polymer)及びpH感応性高分子(pH sensitive polymers)からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項3に記載の核酸複合体。
- 前記ペプチドは、GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ(配列番号48)、GLFDIIKKIAESF(配列番号49)及びヒスチジン(Histidine)(10)からなる群から選ばれ、
前記脂質ナノ物質(lipid nanoparticles)は、脂質(Lipid)、リン脂質(phospholipids)、パルミチン酸セチル(cetyl palmitate)、ポロキサマー18(poloxamer 18)、Tween 85、トリステアリングリセリド(tristearin glyceride)及びTween 80からなる群から選ばれ、
前記接合体ナノ物質(polyplex nanoparticles)は、ポリ(アミドアミン)(poly(amidoamine))又はポリエチレンイミン(PEI(polyethylenimine)であり、
前記高分子ナノ球(polymer nanospheres)は、ポリカプロラクトン(polycaprolactone)、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)(poly(lactide−co−glycolide))、ポリ乳酸(polylactide)、ポリグリコール酸(polyglycolide)、ポリ(d,l−ラクチド)(poly(d,l−lactide))、キトサン(chitosan)及びPLGA−ポリエチレングリコール(PLGA−polyethylene glycol)からなる群から選ばれ、
前記無機物ナノ物質(inorganic nanoparticles)は、Fe2O3、Fe3O4、WO3及びWO2.9からなる群から選ばれ、
前記陽イオン脂質ナノ物質(cationic lipid−based nanoparticles)は、1−(アミノエチル)イミノビス[N−(オレイックイルシステイニル−1−アミノ−エチル)プロピオンアミド](1−(aminoethyl)iminobis[N−(oleicylcysteinyl−1−amino−ethyl)propionamide])、PTAのN−アルキル化誘導体(N−alkylated derivative of PTA)及び3,5−ジドデシルオキシベンズアミジン(3,5−didodecyloxybenzamidine)からなる群から選ばれ、
前記陽イオン高分子(cationic polymer)は、ビニルピロリドン−N,N−ジメチルアミノエチルメタクリル酸共重合体ジエチル硫酸塩(vinylpyrrolidone−N,N−dimethylaminoethyl methacrylate acid copolymer diethyl sulphate),ポリイソブチレン(polyisobutylene)及びポリ(N−ビニルカルバゾール)(poly(N−vinylcarbazole))からなる群から選ばれ、
前記pH感応性高分子(pH sensitive polymers)は、ポリ酸(polyacids)、ポリ(アクリル酸)(poly(acrylic acid))、ポリ(メタクリル酸)(poly(methacrylic acid))及び加水分解されたポリアクリルアミド(hydrolyzed polyacrylamide)からなる群から選ばれることを特徴とする、請求項5に記載の核酸複合体。 - 前記核酸複合体は、治療性タンパク質、治療性化合物、治療性組成物、癌化学治療剤、トキシン、細胞毒性物質、消炎剤、関節炎治療剤、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、一つ以上の信号伝達経路を調節する化合物、抗体、核酸、核酸類似体、細胞、ウイルス、ファージ、ウイルス粒子、ファージ粒子、ウイルスカプシド、ファージカプシド、ウイルス様粒子、リポソーム、マイセル、ビーズ、ナノ粒子、マイクロ粒子、化学治療剤、造影剤、映像剤、標識(label)、標識化剤又はその混合物からなる群から選ばれるいずれか一つ以上をさらに含むことを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記生物活性核酸は、DNA、RNA、LNA、PNA及び修飾されたペプチド核酸からなる群から選ばれる核酸単量体を含むことを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記キャリアペプチド核酸は、前記生物活性核酸と塩基配列の一部或いは全部が相補的な配列で構成されることを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 全体的に正電荷を有することを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記キャリアペプチド核酸は、全体的に正電荷を有するように1個以上のガンマ−又はアルファ−バックボーン修飾ペプチド核酸単量体を含むことを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記ガンマ−或いはアルファ−バックボーン修飾ペプチド核酸単量体は、正電荷を持つアミノ酸を有する単量体が負電荷を持つアミノ酸を有する単量体に比べてより多く含まれ、全体的なキャリアペプチド核酸の電荷が陽性になることを特徴とする、請求項11に記載の皮膚透過性伝達体。
- 疎水性残基(hydrophobic moiety)、親水性残基(hydrophilic moiety)、標的抗原特異的抗体、アプタマー、クエンチャー、蛍光マーカー及び発光マーカーからなる群から選ばれる一つ以上の物質が生物活性核酸及び/又はキャリアペプチド核酸に結合していることを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸は、それぞれの核酸の5’−方向性及び3’−方向性によって平行(parallel)又は逆平行(antiparallel)に結合していることを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸の結合力は、生物活性核酸と生物活性核酸の目的とする遺伝子との結合力よりも低いことを特徴とする、請求項1に記載の皮膚透過性伝達体。
- 前記生物活性核酸とキャリアペプチド核酸は平行結合(Parallel binding)又は部分特異結合(Partial specific binding)することにより、生物活性核酸及びキャリアペプチド核酸の結合力が生物活性核酸と生物活性核酸の目的とする遺伝子との結合力よりも低いことを特徴とする、請求項15に記載の皮膚透過性伝達体。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の皮膚透過性伝達体を含む疾病の診断用組成物。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の皮膚透過性伝達体を含む疾病の予防又は治療用組成物。
- 前記疾病は、皮膚疾患、癌、炎症性疾患、老人性黄斑変性、糖尿病性網膜症、希少疾患及び重症疾患、心血管疾患、又は代謝性疾患であることを特徴とする、請求項18に記載の組成物。
- 前記皮膚透過性伝達体内に含まれた生物活性核酸が結合する標的遺伝子は、IFI16、TGFβR2、ERBB3、TLR2、smad3及びTIEG1からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であり、前記疾病は皮膚疾患であることを特徴とする、請求項19に記載の組成物。
- 前記皮膚疾患は、乾癬、皮膚癌、アトピー皮膚炎、皮膚損傷、色素沈着及びケロイド性疾患からなる群から選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項19に記載の組成物。
- 請求項18に記載の組成物を含む剤形。
- 剤形は、水性液、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、塗抹剤、パッチから選ばれるいずれか一つであることを特徴とする、請求項22に記載の剤形。
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000503671A (ja) * | 1996-07-24 | 2000-03-28 | ブヒャルト,ドルテ | 増加した結合親和性、配列特異性および溶解性を有するペプチド核酸 |
WO2018030789A1 (ko) * | 2016-08-09 | 2018-02-15 | 주식회사 시선바이오머티리얼스 | 세포투과성이 향상된 펩티드 핵산 복합체 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
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US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5719262A (en) * | 1993-11-22 | 1998-02-17 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having amino acid side chains |
JP2008220366A (ja) * | 2007-02-16 | 2008-09-25 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 修飾型pna/rna複合体 |
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KR101228106B1 (ko) * | 2010-01-21 | 2013-02-01 | 광주과학기술원 | 피부투과도, 세포유입 및 종양전달성이 증가된 나노운반체 |
WO2012101638A2 (en) * | 2011-01-24 | 2012-08-02 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Nanoparticles for cosmetic applications |
CN105463002B (zh) * | 2014-08-08 | 2020-06-26 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 多肽类核酸载体、其制备方法及用途 |
WO2020096234A1 (ko) * | 2018-11-07 | 2020-05-14 | 주식회사 시선테라퓨틱스 | 피부 투과성 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 |
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---|---|---|---|---|
JP2000503671A (ja) * | 1996-07-24 | 2000-03-28 | ブヒャルト,ドルテ | 増加した結合親和性、配列特異性および溶解性を有するペプチド核酸 |
WO2018030789A1 (ko) * | 2016-08-09 | 2018-02-15 | 주식회사 시선바이오머티리얼스 | 세포투과성이 향상된 펩티드 핵산 복합체 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
JP6818889B2 (ja) * | 2016-08-09 | 2021-01-20 | シーサン・セラピューティクス | 細胞透過性が向上したペプチド核酸複合体およびそれを含む薬学的組成物 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
MOLECULES, vol. 18, JPN6020014580, 2013, pages 287 - 310, ISSN: 0004768631 * |
外石 昇, ファルマシア, vol. 49, no. 8, JPN6022017316, 2013, pages 774 - 779, ISSN: 0004768632 * |
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