JP2021518152A - 標的タンパク質を安定して発現できる組換えウイルス - Google Patents
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Abstract
Description
FMDが流行している地域では、ワクチン接種が、疾患を制御するための有効かつ主要な手段である。現在の商業的なFMDVに対するワクチンは、主として、不活性化された全FMDVワクチンである。このようなワクチンの生産は、高度な封じ込め施設における大量の毒性FMDVの増殖を必要とするが、これは、維持に費用がかかり、生きたFMDVを放出する潜在的なリスクを有する。加えて、一部の野外株は、浮遊BHK細胞に適合させ、高い力価を達成することが難しい。全不活性化ワクチンの別の問題は、このようなワクチンは、特にブタにおいて、免疫応答を効果的に刺激できないことがあり、したがって定期的なブースター注射を必要とすることである。
インビトロでのその連続的な継代中に、組換えウイルス中でVLPをコードする遺伝子を安定して維持することを可能にする、VLPをコードする遺伝子を含有する組換えウイルスを開発する必要がある。
一般的に、本発明は、標的遺伝子の発現安定性を増加させるための、組換えウイルスおよび関連方法を提供する。
本発明はまた、本発明の組換えウイルスを含む宿主細胞、およびその調製方法も提供する。
本発明はまた、本発明の組換えウイルスおよび/または本発明の組換えウイルスによって発現される目的のポリペプチドを含む、免疫原性組成物、医薬組成物、もしくはワクチン組成物、ならびにその調製方法も提供する。本発明はまた、免疫原性/医薬/ワクチン組成物の調製における本発明の組換えウイルスの使用も提供する。
本発明はまた、動物に、本発明の組換えウイルスまたは本発明の免疫原性/医薬/ワクチン組成物を投与することによる、動物におけるウイルスによって引き起こされる臨床徴候の処置および/または予防のための方法も提供する。
本発明はさらに、動物、例えばブタなどの食物生産動物を免疫化するための方法であって、このような動物に、本発明の組換えウイルスまたは本発明の免疫原性/医薬/ワクチン組成物を投与することを含む方法に関する。
本発明はまた、組換えウイルスを調製するための方法であって、組換えウイルスのゲノム中に発現カセットを構築することを含み、発現カセットは、少なくとも1つの目的のポリペプチドをコードする第1のポリヌクレオチド、および組換えウイルスの必須の遺伝子またはその機能的な断片である第2のポリヌクレオチドを含み、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドに機能的に連結されており、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドの上流に位置しており、前記第2のポリヌクレオチドは、組換えウイルス中で活性な、前記必須の遺伝子またはその機能的な断片の唯一のコピーである、方法にも関する。
標的遺伝子の必須の遺伝子への機能的な連結を達成するための2つの例示的な選択肢がある。第1の選択肢は、組換えウイルスの内因性の必須の遺伝子(すなわち組換えウイルスのゲノム中に天然に存在する必須の遺伝子)を欠失させるかまたはサイレンシングし、標的遺伝子が必須の遺伝子に機能的に連結されるように、標的遺伝子の下流に外因的に導入される同じ必須の遺伝子を挿入することである。したがって、一実施形態において、第2のポリヌクレオチドは、外因性であり、組換えウイルスの内因性の必須の遺伝子は、サイレンシングされている。第2の選択肢は、標的遺伝子が必須の遺伝子に機能的に連結されるように、ウイルスの内因性の必須の遺伝子の上流に標的遺伝子を挿入することである。したがって、一実施形態において、第2のポリヌクレオチドは、組換えウイルスの内因性の必須の遺伝子である。
一実施形態において、第1のポリヌクレオチドは、抗原性のポリペプチドまたは治療用ポリペプチドをコードする。抗原性のポリペプチドは、例えば、FMDV抗原、PRRSV抗原、DEV抗原、およびPRV抗原からなる群から選択することができ、好ましくはFMDV抗原である。一実施形態において、第1のポリヌクレオチドは、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含む。一実施形態において、P1遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号1によって示される。一実施形態において、2A遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号2によって示される。一実施形態において、3C遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号3によって示される。一実施形態において、P1−2A−3C遺伝子カセットのヌクレオチド配列は、配列番号4によって示される。
一実施形態において、第1のポリヌクレオチドは、リンカーを介して第2のポリヌクレオチドに連結されている。一実施形態において、リンカーは、フレキシブルなリンカー、例えば(GGGGS)nリンカー、または2A遺伝子であってもよく、好ましくは2A遺伝子である。一実施形態において、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドに直接連結されている。一実施形態において、発現カセットは、「第1のポリヌクレオチド−リンカー−第2のポリヌクレオチド」の構造により示されるコンストラクトを含む。
本発明はさらに、宿主細胞を調製する方法であって、以下:a).真核宿主細胞株を本発明の組換えウイルスに感染させる工程;およびb).感染細胞を、好適な条件下で培養する工程を特徴とし、c).前記宿主細胞を回収する工程を特徴としてもよい方法に関する。
上記で列挙したような哺乳類宿主細胞株は、一般的に、イーグル塩類およびウシ胎児血清が補充された最小必須培地(MEM)などの哺乳類細胞培養のための培地中に浸されたプラスチック組織培養容器中で培養される。哺乳類細胞株は、37℃で、5%CO2が補充された通例の雰囲気およびおよそ80%の湿度中で、インキュベーター中で維持される。昆虫細胞株は、昆虫細胞培養培地中に浸されたプラスチック組織培養容器中で培養され、27℃で、通例の雰囲気中、インキュベーター中で維持される。
本発明はさらに、免疫原性/医薬/ワクチン組成物を生産するための方法であって、以下:a).本発明の宿主細胞株を、本発明の組換えウイルスに感染させる工程;b).感染細胞を、好適な条件下で培養する工程;およびc).感染細胞を回収する工程を含み;d).工程c)の回収物を精製する工程を含んでいてもよく;e).前記回収物を、医薬的に許容される担体と混合する工程を含む方法に関する。一実施形態において、回収物は、感染細胞によって生産された組換えウイルスであるか、または回収物は、組換えウイルスによって発現された目的のポリペプチドである。
本発明はさらに、免疫原性/医薬/ワクチン組成物の調製における本発明の組換えウイルスの使用に関する。一実施形態において、免疫原性/医薬/ワクチン組成物は、動物における病原体の感染によって引き起こされる臨床徴候または疾患を防止および/もしくは処置するために、または動物における病原体の感染を処置もしくは防止する方法で使用するために使用され、好ましくは、前記動物は、食物生産動物、例えばブタである。
本発明はさらに、動物における病原体の感染によって引き起こされる臨床徴候または疾患を低減もしくは防止する方法で使用するための、または動物における病原体の感染を処置もしくは防止する方法で使用するための、本発明の組換えウイルスまたは本発明の免疫原性/医薬/ワクチン組成物に関し、好ましくは、前記動物は、食物生産動物、例えばブタである。
本発明はさらに、動物、例えばブタなどの食物生産動物を、前記動物における病原体によって引き起こされる臨床疾患に対して免疫化する方法であって、動物に、本発明の組換えウイルスまたは本発明の免疫原性/医薬/ワクチン組成物を投与する工程を含み、それによって、前記組換えウイルスまたは前記免疫原性/医薬/ワクチンは、感染の臨床徴候を引き起こさず、しかし前記病原体の病原性の形態に対して動物を免疫化する免疫応答を誘導することが可能である、方法に関する。
さらに、その必要がある食物生産動物の、本明細書で提供される免疫原性組成物での免疫化は、食物生産動物のウイルス感染の防止をもたらす。さらにより好ましくは、免疫化は、前記ウイルス感染に対する有効な長期にわたる免疫応答をもたらす。その期間は、2カ月より長く、好ましくは3カ月より長く、より好ましくは4カ月より長く、より好ましくは5カ月より長く、より好ましくは6カ月より長く続くことが理解されると予想される。免疫化は、免疫化された全ての動物/対象で有効ではない可能性があることが理解されると予想される。しかしながら、この用語は、獣群の動物/対象のかなりの部分が効果的に免疫化されることを必要とする。
好ましくは、臨床徴候は、処置または防止されていない(免疫化されていない)が、その後ウイルスに感染させた動物と比較して、少なくとも50%、さらにより好ましくは少なくとも60%、さらにより好ましくは少なくとも70%、さらにより好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも90%、さらにより好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは100%低減される。
一実施形態において、上述したような臨床徴候または疾患は、アフトウイルス属およびアルファヘルペスウイルス属のウイルスによって引き起こされる、好ましくはFMDVによって引き起こされる。
別段の指定がない限り、本明細書において使用される全ての専門用語や科学用語は、出願時において本発明が属する分野の当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。用語の意味および範囲は明確であるべきであるが、何らかの潜在的なあいまいさがある場合、本明細書で提供される定義が、いずれの辞書または外部の定義より優先される。さらに、文脈上別段の要求がなされない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。本明細書において、「または」の使用は、別段の指定がない限り「および/または」を意味する。さらに、用語「含むこと」、加えて「含む」および「含まれる」などの他の形態の使用は、非限定的である。本明細書で言及された全ての特許および公報は、参照により本明細書に組み入れられる。
用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド配列」、「RNA配列」または「DNA配列」は、本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチドまたはポリヌクレオチドならびにそれらの断片および部分、ならびにゲノムまたは合成起源のDNAまたはRNAを指し、これらは、一本鎖または二本鎖であってもよく、センスまたはアンチセンス鎖を表す。配列は、非コード配列、コード配列またはその両方の混合物であってもよい。本発明の核酸配列は、当業者周知の標準的な技術を使用して調製することができる。
用語「核酸」および「ポリヌクレオチド」はまた、5種の生物学的に存在する塩基(アデニン、グアニン、チミン、シトシンおよびウラシル)以外の塩基で構成される核酸を含む場合もある。
用語「目的のポリペプチド」は、目的の生成物をコードするあらゆる長さのポリヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチドを指す。具体的な態様において、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、外因性である。定義によれば、組換えウイルスに含有される全てのポリヌクレオチド配列または全ての遺伝子、およびそれによってコードされたそれぞれのタンパク質またはRNAは、特にそれが異なる(ウイルス)種に由来する場合、「外因性」、「外因性配列」、「外因性遺伝子」、「外因性コード配列」または「導入遺伝子」と称される。具体的な態様において、目的のポリペプチドは、抗原性のポリペプチドまたは治療用ポリペプチドである。具体的な態様において、目的のポリペプチドは、FMDV抗原である。本発明の文脈において、指定がない限り、用語「目的のポリペプチド」および「標的タンパク質」は、交換可能である。
ウイルスベクターの生成は、当業界において周知のあらゆる好適な遺伝子工学技術、例えば、これらに限定されないが、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製、DNAシーケンシング、細胞培養でのトランスフェクションの標準的な技術など、例えばSambrook et al.(Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y. (1989))またはK. MaramoroschおよびH. Koprowski(Methods in Virology Volume VIII, Academic Press Inc. London, UK (2014))に記載されたようなものを使用して達成することができる。
組換えウイルスを調製するための組換えDNA技術は、当業者周知であり、通常、ウイルスゲノムの全長の相補的なDNAコピー(感染性クローン)の構築を採用し、次いでこれは、DNA組換えおよび操作方法によって改変することができる。
さらに、本発明の説明の文脈において、用語「機能的な連結」、「機能的に連結した」、「作動可能に連結した」または「作動可能に連結した」は、2つまたはそれより多くの核酸配列が、所望の方式での正しい形態および機能でそれらそれぞれの発現が許容されるように配置されていることを意味する。例えば、必須の遺伝子配列の転写または翻訳がポリヌクレオチドの正しい発現に依存する場合、ポリヌクレオチドは、必須の遺伝子配列に機能的に連結されている。
「2つのポリヌクレオチドは、同じORF内である」は、2つのポリヌクレオチドが同じ転写分子内であり、同じ翻訳開始シグナルまたは開始コドンおよび同じ終止コドンを共有していることを意味することを指す。具体的な態様において、標的遺伝子および必須の遺伝子は、同じ転写分子内であり、同じ翻訳開始シグナルまたは開始コドンおよび同じ終止コドンを共有する。
用語「発現カセット」または「転写単位」は、転写しようとする1つまたは複数の遺伝子を含有する組換えウイルスのゲノム内の領域を定義する。具体的な態様において、発現カセットに含有される遺伝子は、組換えウイルスの標的遺伝子および内因性の必須の遺伝子であり得る。具体的な態様において、発現カセットに含有される遺伝子は、標的遺伝子および外因性の必須の遺伝子であり得る。転写された遺伝子に加えて、発現カセット内に含有される調節エレメントを含有するポリヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列は、互いに作動可能に連結されている。これらは、プロモーターから転写され、転写は、少なくとも1つのポリアデニル化シグナルによって終結される。1つの具体的な態様において、これらは、1つの単一のプロモーターから転写される。結果として、異なる遺伝子が、少なくとも転写により連結される。1種より多くのタンパク質または生成物は、各転写単位(多シストロン性転写単位)から転写および発現させることができる。各転写単位は、単位内に含有される選択された配列のいずれかの転写および翻訳に必要な調節エレメントを含むと予想される。さらに各転写単位は、同一または異なる調節エレメントを含有していてもよい。例えば、各転写単位は、同じターミネーターを含有していてもよく、またはIRESエレメントもしくはイントロンを、転写単位内の遺伝子の機能的な連結に使用することもできる。
用語「外因性」は、本明細書で使用される場合、ポリヌクレオチドまたはタンパク質が、外来の種に由来するかもしくはそれから生産されたものであることを指し、または同じ種由来の場合、その元の形態から操作されていることを指す。具体的な態様において、組換えウイルスの内因性の必須の遺伝子は、サイレンシングされており、同じ外因性の必須の遺伝子は、標的遺伝子の下流に挿入され、それに機能的に連結されている。
用語「転写開始部位」は、一次転写物、すなわちmRNA前駆体に取り込まれる第1の核酸に対応するコンストラクト中の核酸を指す。転写開始部位は、プロモーター配列とオーバーラップしていてもよい。
用語「遺伝子サイレンシング」は、遺伝子を「オフ」にし、それによってタンパク質生産の形態で、または他の発現形態でそれが発現されることを防止するプロセスである。遺伝子を無効にすることが、その遺伝子の目的を決定する極めて有効な方法であるため、遺伝子サイレンシングは重要な実験技術である。遺伝子は、様々な方法で、多くの様々なメカニズムの1つを介してサイレンシングすることができる。遺伝子サイレンシングはしばしば、遺伝子ノックアウトと同じとみなされる。すなわち、遺伝子がノックアウトされると、それらは生物のゲノムから完全に消去され、したがって発現は起こらない。本発明の文脈において、遺伝子サイレンシングはまた、遺伝子の残りの活性がその機能を達成するには不十分であるようなレベルに遺伝子発現を低減させることも含む。例えば、具体的な態様において、ウイルスの内因性の必須の遺伝子は、必須の遺伝子の残りの活性が、外因的に導入され標的遺伝子に機能的に連結されている必須の遺伝子の標的遺伝子による制御に影響を与えることができないようなレベルにサイレンシングされている。
「宿主細胞」は、組換えウイルスが複製できる細胞を指す。具体的な態様において、宿主細胞は、真核宿主細胞株であってもよく、好ましくは哺乳類細胞株または昆虫細胞株である。宿主細胞は、これらに限定されないが、RK13細胞株、MDBK細胞株、ST細胞株、AI−ST細胞株、VERO細胞株、Sf9細胞株、Sf21、MDCK細胞株、および/またはそれらの派生株を含む。
外因性ポリヌクレオチドの発現は、様々な方法によって、例えばELISAによって、ウェスタンブロッティングによって、ラジオイムノアッセイによって、免疫沈降によって、タンパク質の生物学的活性をアッセイすることによって、またはタンパク質の免疫染色とそれに続くFACS分析によって決定することができる。具体的な態様において、外因性ポリヌクレオチドの発現は、ウェスタンブロッティングによって決定される。
「ヘルペスウイルス」または「ヘルペスウイルスベクター」は、ヘルペスウイルス目ヘルペスウイルス科の種を指す。
用語「ウマヘルペスウイルスベクター」または「ウマヘルペスウイルス」または「EHV」は、ウマに影響を及ぼすヘルペスウイルス科のメンバーを意味する。これまで、ウマヘルペスウイルスの8つの異なる種が同定され、そのうち5つは、アルファヘルペスウイルス亜科(EHV−1、EHV−3、EHV−4、EHV−8およびEHV−9)に属し、3つはガンマヘルペスウイルス亜科に属する。(http://www.ictvonline.org/virustaxonomy.asp Virus Taxonomy:2015 Release EC 47, London, UK, July 2015; Email ratification 2016 (MSL #30)。
用語「ウマ科動物」または「ウマ科の」または「ウマ科」は、ウマ科であることを意味するか、またはウマ科に属することを意味し、その例としては、ウマ、ロバ、およびシマウマが挙げられ、好ましくはウマである。加えて、用語「ウマ科動物」または「ウマ科の」または「ウマ科」は、ウマ科のメンバーの交雑種(例えばラバ、ケッテイなど)も包含する。
EHV−1 ORF43遺伝子は、カプソメア間の三重鎖の成分であるVP23として公知のキャプシドタンパク質をコードする(Elizabeth A. R. Telford, et al, Journal of General Virology, 1998, 79, 1197-1203)。一実施形態において、EHV−1 ORF43遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号5によって示される。
EHV−1 ORF54遺伝子は、DNAヘリカーゼ−プライマーゼ複合体の成分であるタンパク質をコードする(Elizabeth A. R. Telford, et al, Journal of General Virology, 1998, 79, 1197-1203)。一実施形態において、EHV−1 ORF54遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号6によって示される。
「口蹄疫ウイルス」または「FMDV」は、ピコルナウイルス科アフトウイルス属の種を指す。
用語「P1タンパク質」または「タンパク質P1」は、4つのキャプシドタンパク質、VP4、VP2、VP3およびVP1を含有する前駆タンパク質を意味する。成熟プロセス中、タンパク質P1は、プロテアーゼ3CによってVP0、VP1およびVP3として公知の3つのタンパク質に切断される。ビリオンにおいて、タンパク質VP0は次いで、2つのタンパク質、VP4およびVP2に切断される。一実施形態において、P1遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号1によって示される。
用語「プロテアーゼ3C」または「3Cプロテアーゼ」は、ピコルナウイルスに見出されるプロテアーゼおよびエンドペプチダーゼ酵素であって、非末端配列のペプチド結合を切断するものを意味する。3Cプロテアーゼは、P3前駆体中に位置し、P1前駆タンパク質をVP0(VP4およびVP2の前駆体)、VP3およびVP1にプロセシングすることができる。一実施形態において、3C遺伝子のヌクレオチド配列は、配列番号3によって示される。
P1−2A−3Cカセットは、2Aペプチド遺伝子を含有する配列によって連結されたP1遺伝子および3C遺伝子を含有する単一のORFを意味する。一実施形態において、P1−2A−3C遺伝子カセットのヌクレオチド配列は、配列番号4によって示される。
「免疫原性または免疫学的な組成物」は、細胞の宿主における免疫応答または組成物に対する抗体媒介性免疫応答を惹起する、少なくとも1つの抗原、またはその免疫原性部位を含む、物質の組成物を指す。
本明細書において使用される用語「抗原」は、当業界においてよく理解されており、免疫原性の物質、すなわち免疫原、加えて免疫学的な不応答、またはアネルギー、すなわち外来物質に対する体の防御機構による反応の欠如を誘発する物質を含む。用語「抗原」は、本明細書で使用される場合、全長タンパク質に加えて、エピトープを含有するかまたは含むそのペプチド断片を意味することが意図される。
アジュバントは、1用量当たり約100μg〜約10mgの量、好ましくは1用量当たり約100μg〜約10mgの量、より好ましくは1用量当たり約500μg〜約5mgの量、さらにより好ましくは1用量当たり約750μg〜約2.5mgの量、最も好ましくは1用量当たり約1mgの量で添加することができる。代替として、アジュバントは、最終産物の体積に対して、約0.01〜50%の濃度、好ましくは約2%〜30%の濃度、より好ましくは約5%〜25%の濃度、さらにより好ましくは約7%〜22%の濃度、最も好ましくは10%〜20%の濃度であってもよい。
「単離された」は、「人の手によって」その天然状態から変更されていることを意味し、すなわち、それが天然に存在する場合、その元の環境から変化または除去されている、またはその両方であることを意味する。例えば、この用語が本明細書で採用される場合、生物中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離されていない」が、その天然状態の共存する物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離されている」。
組成物が投与される対象は、好ましくは、これらに限定されないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、トリ(例えばニワトリ)、ヤギ、ネコ、イヌ、ハムスター、マウスおよびラットなどの動物であり、最も好ましくは、哺乳動物は、ブタである。
本発明の製剤は、有効な免疫化量の1種または複数の免疫原性組成物および生理学的に許容されるビヒクルを含む。ワクチンは、有効な免疫化量の1種または複数の免疫原性組成物および生理学的に許容されるビヒクルを含む。製剤は、投与様式に合ったものであるべきである。
免疫原性組成物はまた、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはpH緩衝剤を含有していてもよい。免疫原性組成物は、液状溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、持続放出製剤、または粉剤であり得る。経口製剤は、標準的な担体、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含んでいてもよい。
好ましい投与経路としては、これらに限定されないが、鼻腔内、経口、皮内、および筋肉内が挙げられる。飲用水での、最も好ましくは単回用量での投与が望ましい。当業者であれば、本発明の組成物はまた、1つ、2つまたはそれより多くの用量で、加えて他の投与経路によっても投与できることを認識していると予想される。例えば、このような他の経路としては、皮下、皮内、腹腔内、皮内が挙げられ、本発明による組成物は、処置の所望の持続時間および有効性に応じて、1回または数回で、また間欠的に、例えば数日間、数週間または数カ月にわたり毎日、異なる投薬量で、例えば約103〜108TCID50(上記のウイルス力価を参照)で投与してもよい。
本発明において、以下の配列を詳述し、ここに開示する:
配列番号1 P1遺伝子のヌクレオチド配列、
配列番号2 2A遺伝子のヌクレオチド配列、
配列番号3 3C遺伝子のヌクレオチド配列、
配列番号4 P1−2A−3C遺伝子発現カセットのヌクレオチド配列、
配列番号5 EHV−1 ORF43遺伝子のヌクレオチド配列、
配列番号6 EHV−1 ORF54遺伝子のヌクレオチド配列、
配列番号7 BGHポリAシグナルのヌクレオチド配列、
配列番号8 CMV5−P12A3C2AORF43−BGHカセットのヌクレオチド配列、
配列番号9 CMV5−P12A3C2AORF54−BGHカセットのヌクレオチド配列、
配列番号10 プライマー配列、および
配列番号11 プライマー配列。
研究において、何らかの例外が特記されない限り、全ての材料が商業的に入手可能であり、それらはQIAGEN、Promega、thermo FisherおよびBIO−RADから購入した。
FMDV抗原を安定して発現できる本発明の組換えEHV−1の構築
1.1 FMDV P1−2A−3C遺伝子発現カセットの構築
FMDV VLPを発現させるため、FMDV血清型O株(GenBank番号:JN998085)由来の遺伝子発現カセットP1−2A−3Cを設計した。この研究において、FMDV P1−2A−3C遺伝子発現カセットは、P1遺伝子(配列番号1)、2A遺伝子(配列番号2)および3C遺伝子(配列番号3)のヌクレオチド配列に基づき、Genscriptによって化学合成された。研究で使用した合成P1−2A−3C遺伝子発現カセットのヌクレオチド配列は、配列番号4によって示される。P1−2A−3Cカセットの設計を、図2に例示した。
2工程のRed媒介組換えのための相同なフランキング領域、カナマイシン耐性遺伝子、加えてプロモーターおよびBGHポリAシグナルを含有するトランスファーベクターpUC19−CMV5−ORF1/3−リンカー(Genscript)を、研究に使用した。
トランスファープラスミドを生成するために、P1−2A−3C遺伝子(配列番号4)を、ORF1/3の部位でトランスファーベクターに挿入した。次いで、ORF43遺伝子(配列番号5)およびORF54遺伝子(配列番号6)を化学合成し、P1−2A−3C遺伝子(配列番号4)の下流にクローニングして、それぞれトランスファープラスミドpUC19−CMV5−P12A3C2AORF43およびpUC19−CMV5−P12A3C2AORF54を得た。トランスファープラスミドpUC19−CMV5−P12A3C2AORF43の構築手順を、図3に例示した。
トランスファープラスミドを制限酵素I−CeuI(NEB)によって消化して、それぞれCMV5−P12A3C2AORF43−BGH(配列番号8)およびCMV5−P12A3C2AORF54−BGH(配列番号9)を含有する約7kbの2つの断片を放出させ、これらを次いでゲル精製し(Invitrogen)、ゲル電気泳動によって確認した。さらなる組換えに、放出された断片を使用した。CMV5−P12A3C2AORF43−BGHのゲル電気泳動結果を、図4に例示した。
この研究において、EHV−1ワクチン株RacH(Patel, JR and Heldens, J, 2005)を、血清型OのFMDV遺伝子P12A3Cを発現させるためのウイルスベクターとして使用した。RacH株は、天然宿主、すなわちウマにおけるその毒性を喪失させたものであり、それ以降、欧州と米国の両方で改変生ワクチン(MLV)として使用されている(Patel, JR and Heldens, J, 2005)。RacHウイルスゲノムを、ORF71遺伝子の大部分(gp2をコードする)をミニ−Fレプリコン配列で置き換えることによって細菌人工染色体(BAC)として構築し、バクミドをpRacHと名付けた(Rudolph and Osterrieder, 2002, Virology 293, 2002, 356-367;US7482441B2)。
EHV−1−delORF43P1およびEHV−1−delORF54P1をMDBK細胞にトランスフェクトすることによって、欠失突然変異体が細胞培養中に複製できないことが確認された。以下の図5に結果を示す。
本発明の組換えEHV−1を、2工程のRed媒介組換え戦略を介して構築した(Tischer BK et al, BioTechniques 2006 (40), 191-197)。特に、工程1.2で得られたトランスファープラスミドを消化して、それぞれCMV5−P12A3C2AORF43−BGH(配列番号8)およびCMV5−P12A3C2AORF54−BGH(配列番号9)の断片を放出させた。2つの放出された断片を、それぞれEHV−1−delORF43P1およびEHV−1−delORF54P1を含有するE.coliコンピテント細胞にエレクトロポレーションした。図6に、組換えウイルスの遺伝子構造を例示した。次いでクロラムフェニコールおよびカナマイシンの二重耐性LB寒天プレート上で組換えクローンを選択した。組換えバクミドDNAを抽出し、PCRおよびRFLP方法の両方によって分析した。Red組換えの第2の工程において、1%アラビノースを使用して、ホーミングエンドヌクレアーゼI−SceIの発現を誘導し、カナマイシン遺伝子の上流におけるI−SceI制限部位の切断を起こし、最終的にカナマイシンカセットを切り出した。
組換えEHV−1を救出するために、組換えバクミドDNAを抽出し、リポフェクトアミン3000(Thermo Fisher)を使用して6−ウェルプレート中のMDBK細胞(Sigma)にトランスフェクトした。トランスフェクションの後、細胞を毎日観察して、GFP陽性および陰性プラークの両方の形成をチェックした。トランスフェクトされた細胞を、培養上清と共に凍結および融解を2回行い、遠心分離によって清澄化し、継代1と定義された組換えウイルスを後の分析のために−80℃で貯蔵した。限界希釈またはプラーク精製を実行して、GFP陰性組換えウイルスを分離し、そこでEGFP遺伝子を含有するミニ−Fを除去し、分子内相同組換えメカニズムを介して失われたORF71を回復した。限界希釈の各ラウンドは、1継代として認識された。
FMDVタンパク質の発現および検出
2.1 IFA、スクロース勾配遠心分離およびウェスタンブロット
FMDVタンパク質の発現を確認するために、間接蛍光アッセイ(IFA)を、FMDV VP1に対するモノクローナル抗体(Jeno−Biotech、カタログ番号9172)を使用して実行した。MDBK細胞を感染させ、1.5%のメチルセルロース上に載せた。感染から3日後に、細胞を1×PBSで洗浄し、4%ホルムアルデヒドで固定し、0.1%Trition X−100によって透過化し、対応する抗体で染色した。FMDVタンパク質の発現をIFAによって確認した(図7)。
FMDV VLPの形成を確認するために、感染細胞の培養物を遠心分離によって前もって清澄化し、Amicon Ultra−15mL遠心分離フィルター(Merk、Ultracel−100KDa)を使用した限外ろ過によって濃縮し、次いで、10%〜60%スクロース勾配超遠心分離に、10℃で、53,720gで22時間適用した。スクロース勾配を、上から下に14画分に分離した。各画分中のタンパク質を、上述したように抗FMDV VP1 mAbを使用したウェスタンブロットによって分析した。
FMDVタンパク質発現の安定性の研究
3.1 FMDV P1−2A−3C遺伝子は標準的な設計で安定して発現させることができない
EHV−1ウイルスベクターにFMDV P1−2A−3C遺伝子を直接導入する標準的な設計を用いて、対照としての異なる組換えEHV−1(異なるプロモーターおよび挿入部位を有する)を構築した。以下の表に、異なる組換えEHV−1の遺伝学的安定性試験の結果を要約する。
二重のIFAによって示された通り(図8A)、標準的な設計を使用することによって、連続的な継代中に、FMDV P1−2A−3C遺伝子は安定した維持が可能ではなく、標的タンパク質発現を喪失する傾向があったことがわかる。またシーケンシング分析は、挿入物中にランダムな欠失があったことも示した(図8B)。
本発明の組換えEHV−1によってFMDVタンパク質が安定して発現され得るかどうかを評価するために、本発明の組換えEHV−1を、0.01のMOIで、MDBK細胞で連続的に継代した。各継代の後、新しいMDBK細胞単層を、適切に希釈した組換えウイルスに感染させ、1.5%メチルセルロースを上に載せた。感染から3日後、二重のIFAを、抗FMDV VP1 mAbおよびヤギ抗EHV−1 pAb(VMRD)の混合物を使用して実行した。個々のプラークを蛍光顕微鏡法下で検査した。FMDV VP1およびEHV−1抗体の両方で染色されるプラークを陽性として認識し、一方でEHV−1染色のみを示すものは、陰性である。陽性プラーク率を計算し、異なる継代レベル間で比較した。図9に、代表的な二重のIFAの結果を示す。
5回の継代毎に(P5、P10、P15およびP20)、ウイルスDNAを感染細胞から抽出し、全挿入物を、高忠実度Accuprime pfx DNAポリメラーゼ(Invitrogen)を使用してPCR増幅した(フォワードプライマー:taacaccatggcaggcctgttg(配列番号10)、リバースプライマー:gagcgattcgcacctcatctcc(配列番号11))。次いでPCR産物をシーケンシングした。加えて、VLPの発現を、5回の継代毎にスクロース勾配遠心分離およびウェスタンブロットを使用して検出した(Rational Engineering of Recombinant Picornavirus Capsids to Produce Safe, Protective Vaccine Antigen. PLOS Pathogens.2013 Mar; 9(3):e1003255)。図10に、組換えEHV−1の異なる継代レベルからのFMDV VLPの結果を示す。
5つの継代それぞれからのウイルスDNAを組換えEHV−1から抽出し、PCRを使用して、全挿入物を増幅した。結果から、全挿入物は、断片長さの明白な差を生じることなく増幅できることが示され(図11)、これは、連続的なウイルス継代中に遺伝学的変化が起こらなかったことを示す。PCR産物もシーケンシングし、遺伝学的変化がないことが解明された。
インビトロにおける組換えウイルスの増殖速度論
インビトロにおける組換えウイルスの増殖特性を評価するために、24−ウェルプレート中のMDBK細胞を、5のMOIで親ウイルスおよび組換えウイルスに感染させた。37℃で2時間接触させた後、細胞をクエン酸緩衝液(pH3.0)で洗浄した。異なるタイムポイントで、培養上清を回収し、滴定した。
ORF43またはORF54がトランスロケーションした組換えウイルスの両方での一段階の増殖速度論を決定し、親ウイルスと比較した。図12からわかるように、組換えウイルスは、親ウイルスと類似の増殖速度論を有し、感染後36時間でピーク力価に到達することができるが、ピークが親ウイルスより約1logTCID50/mL低く、これは、外来タンパク質の発現はウイルスの増殖に影響を与えるはずなので、予測されたものであった。
Claims (44)
- 組換えウイルスのゲノム中に発現カセットを含む組換えウイルスであって、発現カセットは、少なくとも1つの目的のポリペプチドをコードする第1のポリヌクレオチド、および組換えウイルスの必須の遺伝子またはその機能的な断片である第2のポリヌクレオチドを含み、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドに機能的に連結されており、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドの上流に位置しており、前記第2のポリヌクレオチドは、組換えウイルス中で活性な、前記必須の遺伝子またはその機能的な断片の唯一のコピーである、組換えウイルス。
- 第1のポリヌクレオチドおよび第2のポリヌクレオチドが、同じORF内である、請求項1に記載の組換えウイルス。
- 第2のポリヌクレオチドが、組換えウイルスの内因性の必須の遺伝子である、請求項1または2に記載の組換えウイルス。
- 第2のポリヌクレオチドが、外因性であり、組換えウイルスの内因性の必須の遺伝子が、サイレンシングされている、請求項1または2に記載の組換えウイルス。
- 第1のポリヌクレオチドが、抗原性のポリペプチドまたは治療用ポリペプチドをコードする、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- 抗原性のポリペプチドが、FMDV抗原、PRRSV抗原、DEV抗原、およびPRV抗原からなる群から選択され、好ましくはFMDV抗原である、請求項5に記載の組換えウイルス。
- 第1のポリヌクレオチドが、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- 組換えウイルスが、ヘルペスウイルス科、例えばウマアルファヘルペスウイルス1(EHV−1)、ウマアルファヘルペスウイルス4(EHV−4)、ならびに他のワリセロウイルス属、例えば仮性狂犬病ウイルス(PrV)およびウシヘルペスウイルス1(BHV−1)、アデノウイルス科(AdV)、例えばイヌアデノウイルス(CAdV)、アデノ随伴ウイルス科、レンチウイルス科、例えばレトロウイルス、ならびにポックスウイルス科からなる群から選択されるウイルス由来である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- ウイルスが、ヘルペスウイルス科のメンバー、好ましくはアルファヘルペスウイルス属のメンバー、より好ましくはワリセロウイルス亜属のメンバー、最も好ましくはウマアルファヘルペスウイルス1(EHV−1)のメンバーである、請求項8に記載の組換えウイルス。
- 組換えウイルスが、EHV−1由来であり、第1のポリヌクレオチドが、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含む、請求項1に記載の組換えウイルス。
- 必須の遺伝子が、キャプシドタンパク質、DNA複製関連のタンパク質、DNAヘリカーゼ、DNAレプリカーゼ、受容体結合タンパク質、およびEgress関連タンパク質からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項1〜10のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- 組換えウイルスが、EHV−1由来であり、第1のポリヌクレオチドが、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含み、必須の遺伝子が、EHV−1 ORF43遺伝子またはEHV−1 ORF54遺伝子である、請求項11に記載の組換えウイルス。
- 第1のポリヌクレオチドが、リンカーを介して第2のポリヌクレオチドに連結されている、請求項1〜12のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- リンカーが、フレキシブルなリンカー、または2A遺伝子であってもよく、好ましくは2A遺伝子である、請求項13に記載の組換えウイルス。
- 第1のポリヌクレオチドが、第2のポリヌクレオチドに直接連結されている、請求項1〜13のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- 発現カセットが、調節エレメント、例えばプロモーター、好ましくはCMV5プロモーターをさらに含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- 発現カセットが、P1−2A−3C−2A−ORF43コンストラクトまたはP1−2A−3C−2A−ORF54コンストラクト、好ましくは、CMV−P1−2A−3C−2A−ORF43−BGHコンストラクトまたはCMV−P1−2A−3C−2A−ORF54−BGHコンストラクト、より好ましくは、配列番号8で示されるCMV−P1−2A−3C−2A−ORF43−BGHコンストラクトまたは配列番号9で示されるCMV−P1−2A−3C−2A−ORF54−BGHコンストラクトを含む、請求項1〜16のいずれか1項に記載の組換えウイルス。
- 請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスを調製するための方法であって、組換えウイルスのゲノム中に発現カセットを構築することを含み、発現カセットは、少なくとも1つの目的のポリペプチドをコードする第1のポリヌクレオチド、および組換えウイルスの必須の遺伝子またはその機能的な断片である第2のポリヌクレオチドを含み、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドに機能的に連結されており、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドの上流に位置しており、前記第2のポリヌクレオチドは、組換えウイルス中で活性な、前記必須の遺伝子またはその機能的な断片の唯一のコピーである、方法。
- 組換えウイルス内の目的のポリペプチドの発現安定性を増加させるための方法であって、組換えウイルスのゲノム中に発現カセットを構築することを含み、発現カセットは、少なくとも1つの目的のポリペプチドをコードする第1のポリヌクレオチド、および組換えウイルスの必須の遺伝子またはその機能的な断片である第2のポリヌクレオチドを含み、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドに機能的に連結されており、第1のポリヌクレオチドは、第2のポリヌクレオチドの上流に位置しており、前記第2のポリヌクレオチドは、組換えウイルス中で活性な、前記必須の遺伝子またはその機能的な断片の唯一のコピーである、方法。
- 第1のポリヌクレオチドおよび第2のポリヌクレオチドが、同じORF内である、請求項19に記載の方法。
- 第2のポリヌクレオチドが、組換えウイルスのゲノム中に天然に存在する必須の遺伝子である、請求項19または20に記載の方法。
- 第2のポリヌクレオチドが、外因性であり、組換えウイルスのゲノム中に天然に存在する必須の遺伝子が、サイレンシングされている、請求項19または20に記載の方法。
- 第1のポリヌクレオチドが、抗原性のポリペプチドまたは治療用ポリペプチドをコードする、請求項19〜22のいずれか1項に記載の方法。
- 抗原性のポリペプチドが、FMDV抗原、PRRSV抗原、DEV抗原、およびPRV抗原からなる群から選択され、好ましくはFMDV抗原である、請求項23に記載の方法。
- 第1のポリヌクレオチドが、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含む、請求項19〜22のいずれか1項に記載の方法。
- 組換えウイルスが、ヘルペスウイルス科、例えばウマアルファヘルペスウイルス1(EHV−1)、ウマアルファヘルペスウイルス4(EHV−4)、ならびに他のワリセロウイルス属、例えば仮性狂犬病ウイルス(PrV)およびウシヘルペスウイルス1(BHV−1)、アデノウイルス科(AdV)、例えばイヌアデノウイルス(CAdV)、アデノ随伴ウイルス科、レンチウイルス科、例えばレトロウイルス、ならびにポックスウイルス科からなる群から選択されるウイルス由来である、請求項19〜22のいずれか1項に記載の方法。
- ウイルスが、ヘルペスウイルス科のメンバー、好ましくはアルファヘルペスウイルス属のメンバー、より好ましくはワリセロウイルス亜属のメンバー、最も好ましくはウマアルファヘルペスウイルス1(EHV−1)のメンバーである、請求項26に記載の方法。
- 組換えウイルスが、EHV−1由来であり、第1のポリヌクレオチドが、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含む、請求項19に記載の方法。
- 必須の遺伝子が、キャプシドタンパク質、DNA複製関連のタンパク質、DNAヘリカーゼ、DNAレプリカーゼ、受容体結合タンパク質、およびEgress関連タンパク質からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項19〜28のいずれか1項に記載の方法。
- 組換えウイルスが、EHV−1由来であり、第1のポリヌクレオチドが、FMDVのP1遺伝子、2A遺伝子および3C遺伝子を含み、必須の遺伝子が、EHV−1 ORF43遺伝子またはEHV−1 ORF54遺伝子である、請求項29に記載の方法。
- 第1のポリヌクレオチドが、リンカーを介して第2のポリヌクレオチドに連結されている、請求項19〜30のいずれか1項に記載の方法。
- リンカーが、フレキシブルなリンカー、または2A遺伝子であってもよく、好ましくは2A遺伝子である、請求項31に記載の方法。
- 第1のポリヌクレオチドが、第2のポリヌクレオチドに直接連結されている、請求項19〜30のいずれか1項に記載の方法。
- 発現カセットが、他の調節エレメント、例えばプロモーター、ポリAなど、好ましくはプロモーター、より好ましくはCMV5プロモーターをさらに含む、請求項19〜30のいずれか1項に記載の方法。
- 発現カセットが、P1−2A−3C−2A−ORF43コンストラクトまたはP1−2A−3C−2A−ORF54コンストラクト、好ましくは、CMV−P1−2A−3C−2A−ORF43−BGHコンストラクトまたはCMV−P1−2A−3C−2A−ORF54−BGHコンストラクト、好ましくは、配列番号8で示されるCMV−P1−2A−3C−2A−ORF43−BGHコンストラクトまたは配列番号9で示されるCMV−P1−2A−3C−2A−ORF54−BGHコンストラクトを含む、請求項19〜31のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスを含む宿主細胞であって、好ましくは、宿主細胞は、真核宿主細胞株であり;より好ましくは、宿主細胞株は、哺乳類細胞株または昆虫細胞株であり;最も好ましくは、宿主細胞株は、RK13細胞株、MDBK細胞株、ST細胞株、AI−ST細胞株、VERO細胞株、Sf9細胞株、Sf21、MDCK細胞株、および/またはそれらの派生株である、宿主細胞。
- 請求項36に記載の宿主細胞を調製する方法であって、以下:
a.宿主細胞株を、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスに感染させる工程、および
b.感染細胞を、好適な条件下で培養する工程
を特徴とし、
c.前記宿主細胞を回収する工程
を特徴としてもよい方法。 - a.請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルス、および/または
b.請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスによって発現された目的のポリペプチド
を含み、
b.医薬的または獣医学的な許容できる担体または賦形剤
を含んでいてもよい免疫原性組成物、医薬組成物またはワクチン組成物であって、好ましくは、前記担体は、経口、皮内、筋肉内または鼻腔内適用に好適である、組成物。 - 免疫原性組成物、医薬組成物またはワクチン組成物を調製するための方法であって、以下:
a.請求項36に記載の宿主細胞を、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスに感染させる工程、
b.感染細胞を、好適な条件下で培養する工程、および
c.感染細胞を回収する工程
を含み、
d.工程c)の回収物を精製する工程
を含んでいてもよく、
e.前記回収物を、医薬的に許容される担体と混合する工程
を含んでいてもよい方法。 - 回収物が、感染細胞によって生産された組換えウイルスであるか、または回収物が、組換えウイルスによって発現された目的のポリペプチドである、請求項39に記載の方法。
- 動物における病原体の感染によって引き起こされる臨床徴候または疾患を防止および/もしくは処置するための、または動物における病原体の感染を処置もしくは防止する方法で使用するための、免疫原性組成物、医薬組成物またはワクチン組成物の調製における請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスの使用であって、好ましくは、前記動物は、食物生産動物、例えばブタである、使用。
- 動物における病原体の感染によって引き起こされる臨床徴候または疾患を低減もしくは防止する方法で使用するための、または動物における病原体の感染を処置もしくは防止する方法で使用するための、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスまたは請求項38に記載の免疫原性組成物、医薬組成物もしくはワクチン組成物であって、好ましくは、前記動物は、食物生産動物、例えばブタである、組換えウイルスまたは組成物。
- 動物、例えば食物生産動物、例えばブタまたはウシを、前記動物における病原体によって引き起こされる疾患に対して免疫化、処置または防止する方法であって、動物に、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスまたは請求項38に記載の免疫原性組成物、医薬組成物もしくはワクチン組成物を投与する工程を含む方法。
- 動物、好ましくは食物生産動物、例えばブタまたはウシに、動物における病原体に関連する疾患に対してワクチン接種をするための、および/または動物における病原体に関連する、またはそれによって引き起こされる1つまたは複数の臨床徴候の発生率または重症度を低減させるためのキットであって、
a.前記動物に、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスまたは請求項38に記載の免疫原性組成物、医薬組成物もしくはワクチン組成物を投与することが可能なディスペンサー;および
b.請求項1〜17のいずれか1項に記載の組換えウイルスまたは請求項38に記載の免疫原性組成物、医薬組成物もしくはワクチン組成物
を含み、
c.指示リーフレット
を含んでいてもよいキット。
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Citations (3)
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---|---|---|---|---|
JPH05207877A (ja) * | 1991-04-05 | 1993-08-20 | Bayer Ag | 外来dnaを含有するウマのヘルペスウイルス(ehv)、その調製方法およびワクチンにおけるその使用 |
JPH07502403A (ja) * | 1991-12-06 | 1995-03-16 | ホワイトヘツド・インスチチユート・フオー・バイオメデイカル・リサーチ | 人工タンパク質分解切断部位を含む組み換えウィルス |
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JPH07502403A (ja) * | 1991-12-06 | 1995-03-16 | ホワイトヘツド・インスチチユート・フオー・バイオメデイカル・リサーチ | 人工タンパク質分解切断部位を含む組み換えウィルス |
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AIDS RESEARCH AND HUMAN RETROVIRUSES, vol. 26, JPN6023003462, 2010, pages 122, ISSN: 0004975922 * |
ANTIVIRAL RESEARCH, vol. 96, JPN6023003456, 2012, pages 288 - 295, ISSN: 0004975923 * |
ARCHIVES OF VIROLOGY, vol. 155, JPN6023003461, 2010, pages 723 - 731, ISSN: 0004975921 * |
JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, vol. 123, JPN6023003460, 2006, pages 13 - 21, ISSN: 0004975920 * |
JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 77, JPN6023003459, 2003, pages 5598 - 5606, ISSN: 0004975919 * |
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