JP2021517172A - 活性成分としてlrit2阻害剤を含む、がんを予防又は治療するための医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
技術的問題
したがって、免疫細胞の活性を阻害又は増大させることができる物質を研究する過程において、本発明者らは、LRIT2細胞シグナル伝達系は、T細胞の活性を調節することができ、したがって、本発明を成し遂げたことを特定した。
一実施形態では、活性成分としてLRIT2タンパク質に結合する物質、又はLRIT2遺伝子の発現を阻害する物質を含む免疫賦活薬が提供される。
本発明によるLRIT2阻害剤は、免疫細胞の活性を増大させることができ、したがって、免疫賦活薬として使用することができる。加えて、本発明によるLRIT2阻害剤は、個体の免疫を増強することができ、したがって、がんを有効に予防又は治療するために使用することができる。
一実施形態では、活性成分としてロイシンリッチ反復免疫グロブリン様ドメイン及び膜貫通ドメイン含有タンパク質2(LRIT2:leucine−rich repeat,immunoglobulin−like domain and transmembrane domain−containing protein 2)タンパク質に結合する物質、又はLRIT2遺伝子の発現を阻害する物質を含む免疫賦活薬が提供される。
以下に、本発明は、以下の実施例によってより詳細に説明される。しかしながら、以下の実施例は、本発明を単に例示することを意図し、本発明の範囲はそれに限定されない。
実施例で使用される緩衝液を、以下の通り調製した。
本実施例では、LRIT2タンパク質が、T細胞の増殖及び活性を阻害するかどうか、したがってがん細胞のT細胞媒介性免疫系の回避をもたらすかどうかを特定することが意図された。
ヒト血液を回収し、EDTA(又はヘパリン)でコーティングした10mL管に入れた。ヒト血液を、PBSと1:1の比で混合した。次いで、フィコール−パックプラス(Ficoll−Paque PLUS)を50mL管に入れ、上記の血液試料をそれに添加した。遠心分離後、ヒトPBMCを回収した。回収した生成物を遠心分離して、上清を除去した。続いて、RBC溶解(1x)緩衝液をそれに添加し、ピペッティングを行い、次いで、結果として生じたものを氷上で3分間維持した。続いて、50mlの10%FBS RPMI1640をそれに添加し、混合物を遠心分離して、上清を除去した。次いで、FACS緩衝液をそれに添加し、遠心分離を行って、上清を除去した。その後、50mlのMACS緩衝液(0.5%BSA及び2mM EDTAを含有するPBS)をそれに添加し、細胞数をカウントし、遠心分離を行って、上清を除去した。
組換えヒトIgG1タンパク質(カタログ番号110−HG)及び組換えヒトPD−L1/B7−H1タンパク質(カタログ番号156−B7)を、R&D Systemsから購入した。加えて、組換えヒトLRIT2タンパク質(カタログ番号8388−LR−050)を、Sino Biological Incから購入した。
本実施例では、LRIT2を、LRIT2阻害剤を使用して中和した場合、PBMCが、がん細胞に対する細胞傷害性(殺滅能力)を増大することができるかどうかを特定することを意図した。
ヒト血液を回収し、EDTA(又はヘパリン)でコーティングした10mL管に入れた。ヒト血液を、PBSと1:1の比で混合した。次いで、フィコール−パックプラスを50mL管に入れ、上記の血液試料をそれに添加した。遠心分離後、ヒトPBMCを回収した。
肺がん細胞株A549(ATCC(登録商標)CCL−185)、結腸がん細胞株HCT−116(ATCC(登録商標)CCL−247)、乳がん細胞株MDA−MB−231(ATCC(登録商標)HTB−26)、胃がん細胞株MKN−74(KCLB80104番)及び白血病細胞株U937(ATCC(登録商標)CRL−1593.2)を、各々、5μMのCFSEと混合し、37℃で5分間維持した。その後、各細胞株を含有する各管にFBSを添加し、各管を氷上で10分間維持した。続いて、遠心分離を行って、上清を除去した。このようにして得た生成物に、30mlのFACS緩衝液を添加した。次いで、ピペッティングを行い、遠心分離を行って、上清を除去した。次いで、10%FBS RPMI1640をそれに添加した。次いで、ピペッティングを行い、遠心分離を行って、上清を除去した。このようにして得た生成物を、10mlの10%FBS RPMI1640と混合し、次いで、細胞数をカウントした。
10μg/mLの抗ヒトLRIT2抗体又は50nMのLRIT2 siRNAを、96ウェルプレートの各ウェルに添加し、インキュベーションを24時間行った。以下の表1は、LRIT2を遮断するために4種類の中和抗体を使用する実験群、及び非処理対照群を示し;以下の表2は、LRIT2をノックダウンするために3種類のsiRNAを使用する実験群、及び非処理対照群を示す。
本実施例では、LRIT2を、LRIT2阻害剤を使用して中和した場合、マウスにおける腫瘍の増殖が、阻害されるかどうかをインビボで特定することを意図した。
Claims (16)
- 活性成分として、
ロイシンリッチ反復免疫グロブリン様ドメイン及び膜貫通ドメイン含有タンパク質2(LRIT2)タンパク質に結合する物質、又は
LRIT2遺伝子の発現を阻害する物質
を含む免疫賦活薬。 - LRIT2タンパク質に結合する前記物質が、前記LRIT2タンパク質に特異的に結合する化合物、アプタマー、ペプチド又は抗体若しくはその断片である、請求項1に記載の免疫賦活薬。
- 前記LRIT2タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列を有する、請求項2に記載の免疫賦活薬。
- 前記抗体又はその断片が、モノクローナル抗体、scFv、Fab、Fab’及びF(ab)’からなる群から選択されるいずれか1つである、請求項2に記載の免疫賦活薬。
- LRIT2遺伝子の発現を阻害する前記物質が、前記LRIT2遺伝子のDNA又はmRNAに相補的に結合するアンチセンス核酸、siRNA、shRNA、miRNA又はリボザイムである、請求項1に記載の免疫賦活薬。
- 前記LRIT2遺伝子の前記DNAが、配列番号2のヌクレオチド配列を有する、請求項5に記載の免疫賦活薬。
- 前記siRNAが、配列番号3〜14のヌクレオチド配列のうちのいずれか1つである、請求項5に記載の免疫賦活薬。
- 活性成分として、
LRIT2タンパク質に結合する物質、又は
LRIT2遺伝子の発現を阻害する物質
を含む、がんを予防又は治療するための医薬組成物。 - LRIT2タンパク質に結合する前記物質が、前記LRIT2タンパク質に特異的に結合する化合物、アプタマー、ペプチド又は抗体若しくはその断片である、請求項8に記載の医薬組成物。
- 前記LRIT2タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列を有する、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記抗体又はその断片が、モノクローナル抗体、scFv、Fab、Fab’及びF(ab)’からなる群から選択されるいずれか1つである、請求項9に記載の医薬組成物。
- LRIT2遺伝子の発現を阻害する前記物質が、前記LRIT2遺伝子のDNA又はmRNAに相補的に結合するアンチセンス核酸、siRNA、shRNA、miRNA又はリボザイムである、請求項8に記載の医薬組成物。
- 前記LRIT2遺伝子の前記DNAが、配列番号2のヌクレオチド配列を有する、請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記siRNAが、配列番号3〜14のヌクレオチド配列のうちのいずれか1つである、請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記がんが、膀胱がん、骨がん、血液のがん、乳がん、黒色腫、甲状腺がん、副甲状腺がん、骨髄がん、直腸がん、咽頭がん、喉頭がん、肺がん、食道がん、膵がん、結腸直腸がん、胃がん、舌がん、皮膚がん、脳腫瘍、子宮がん、頭部又は頸部のがん、胆嚢がん、口腔がん、結腸がん、肛門周囲がん、中枢神経系腫瘍及び肝がんからなる群から選択されるいずれか1つである、請求項8に記載の医薬組成物。
- 請求項8〜15のいずれか一項に記載の医薬組成物を個体に投与するステップ
を含む、がんを治療するための方法。
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