JP2021504475A - ボルテゾミブを含むポリマーナノ粒子 - Google Patents

Abstract

本発明は、ボルテゾミブを含むポリマーナノ粒子、およびこれらのポリマーナノ粒子を、特定の疾患の治療を必要とする対象に投与することを含む、特定の疾患を治療する方法に関する。

Description

関連出願
この出願は、２０１７年１１月２２日に提出されたＵＳＳＮ第６２／５９０，２２６号の優先権を主張している。この出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、ナノテクノロジーの分野に関し、より詳細には、ボルテゾミブなどの治療剤の送達のための生分解性ポリマーナノ粒子の使用に関する。

Ｌ−ロイシン部分およびＬ−フェニルアラニン部分を有するホウ素化ジペプチド化合物である、ボルテゾミブ（Ｎ−２−ピラジンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン−Ｌ−ロイシンボロン酸）は、選択的プロテアソーム阻害剤である。ボルテゾミブによるプロテアソームの阻害は、細胞周期の停止やアポトーシスを引き起こすことを含む、いくつかの方法で癌細胞に影響を与える。この化合物は、再発性多発性骨髄腫を含む多発性骨髄腫、およびマントル細胞リンパ腫を含む特定のリンパ腫を治療するための規制当局の承認を受けている。アミロイドーシスの治療を含む、ボルテゾミブの他の潜在的な使用も報告されてきた。

本開示は、多発性骨髄腫（ＭＭ）の治療において、ボルテゾミブを含むナノ粒子がボルテゾミブ単独よりも効果的であるという発見に一部基づいている。したがって、一態様では、本発明は、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含むブロックコポリマーを含むポリマーナノ粒子、およびボルテゾミブを含む組成物を提供する。

本開示は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブとを含むポリマーナノ粒子を含む組成物を提供する。

組成物の様々な実施形態では、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーは、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧトリブロックコポリマーとＰＬＡとの結合から形成される。例えば、結合は化学的結合である。

組成物の様々な実施形態では、ＰＬＡの分子量は、約１０，０００〜約１００，０００ダルトン、約２０，０００〜９０，０００ダルトン、約３０，０００〜８０，０００ダルトン、約８，０００ダルトン〜１８，０００ダルトン、または約１０，０００ダルトン〜１５，０００である。例えば、ＰＬＡの分子量は、約１０，０００、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００、または１００，０００ダルトンである。さらなる実施形態では、ＰＬＡの分子量は、約１２，５００ダルトン（すなわち、１２．５ｋＤＡ）または約７２，０００ダルトン（すなわち、７２ｋＤＡ）である。一実施形態では、Ａ−Ｂ構造でテトラブロックを生成するためのＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ、すなわち、規則的な交互のＡおよびＢサブユニットを有する交互コポリマーの分子量は、１２．５ｋＤａである。

様々な実施形態では、組成物は、レナリドマイド、クリゾチニブ、グリベック、ハーセプチン、アバスチン、ＰＤ−１チェックポイント阻害剤、ＰＤＬ−１チェックポイント阻害剤、およびＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される化学療法剤または標的化抗癌剤をさらに含む。

組成物の様々な実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ）ジブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

組成物の様々な実施形態において、ポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

組成物の様々な実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリマーナノ粒子の外側に結合した標的化部分をさらに含み、標的化部分は、抗体、ペプチド、またはアプタマーである。様々な実施形態では、標的化部分は、免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびジスルフィド結合Ｆｖを含む。

本明細書で提供される組成物または方法のいずれかの様々な実施形態では、ナノ粒子は、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含むブロックコポリマーと、ボルテゾミブと、から形成される。一実施形態では、ナノ粒子は、ボルテゾミブをある期間にわたって放出する。さらなる実施形態では、期間は少なくとも１日〜２０日である。この方法の様々な実施形態では、期間は約５日〜１０日である。

本開示はまた、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブと、薬学的に許容される担体と、を含むポリマーナノ粒子を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリマーナノ粒子の外側に結合した標的化部分をさらに含む。

本開示はまた、細胞を、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブとを含むポリマーナノ粒子を含む治療有効量の組成物と接触させることを含む、癌の症状を示す細胞を治療する方法も提供する。特定の実施形態では、細胞は、対象由来の細胞または培養細胞の１つ以上である。特定の実施形態では、対象由来の細胞は、骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛包、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来の腫瘍細胞、正常または癌性の造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、または星状細胞のうちの１つ以上である。

本開示はまた、血液悪性腫瘍またはそれに関連する障害のリスクがあるかまたは有する対象を治療する方法を提供し、この方法は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブと、薬学的に有効な担体とを含むポリマーナノ粒子を含む組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。

特定の実施形態では、血液悪性腫瘍または障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）またはリンパ腫である。他の実施形態では、血液悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病またはＢ細胞リンパ腫である。他の実施形態では、対象は、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ、または症候性ＭＭのリスクがある。任意選択で、症候性ＭＭは、新たに診断されたＭＭまたは後期再発性／難治性ＭＭである。

特定の実施形態では、方法はまた、対象に追加の抗癌療法を施すことも含む。特定の実施形態では、追加の抗癌療法は、外科手術、化学療法、放射線、ホルモン療法、免疫療法、またはそれらの組み合わせである。任意選択で、追加の抗癌療法は、骨吸収を減少させるか、または破骨細胞媒介骨吸収を減少させる。特定の実施形態では、追加の抗癌療法はビスホスホネートである。他の実施形態では、対象はヒトである。

特定の実施形態では、投与は、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群より選択される経路を介する。別の実施形態では、組成物の投与は、対象の体重減少を誘発しない。

本開示はまた、多発性骨髄腫を有する対象における多発性骨髄腫細胞の増殖、生存、遊走、またはコロニー形成能を低下させる方法を提供し、この方法は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブと、薬学的に有効な担体とを含むポリマーナノ粒子を含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。

特定の実施形態では、血液悪性腫瘍または障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）またはリンパ腫である。他の実施形態では、血液悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、またはＢ細胞リンパ腫である。他の実施形態では、対象は、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ、または症候性ＭＭのリスクがある。任意選択で、症候性ＭＭは新たに診断されたＭＭまたは後期再発性／難治性ＭＭである。特定の実施形態では、投与は、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する。

特定の実施形態では、方法はまた、対象に追加の抗癌療法を施すことも含む。特定の実施形態では、追加の抗癌療法は、外科手術、化学療法、放射線、ホルモン療法、免疫療法、またはそれらの組み合わせである。特定の実施形態では、追加の抗癌療法は骨吸収を減少させる。他の実施形態では、追加の抗癌療法は、破骨細胞が媒介する骨吸収を減少させる。特定の実施形態では、追加の抗癌療法はビスホスホネートである。特定の実施形態では、対象はヒトである。特定の実施形態では、投与は、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する。

本開示はまた、多発性骨髄腫を有する対象における多発性骨髄腫細胞の増殖、生存、遊走、またはコロニー形成能を低下させる方法を提供し、この方法は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブと、薬学的に有効な担体とを含むポリマーナノ粒子を含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、投与は、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する。

本開示はまた、対象における骨髄腫の転移を阻害する方法を提供し、この方法は、骨髄腫を有する対象に、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（ポリプロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーと、ボルテゾミブと、薬学的に有効な担体とを含むポリマーナノ粒子を含む組成物の治療有効量を投与することを含む。特定の実施形態では、投与は、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する。

この方法の様々な実施形態では、癌は血液癌または関連する状態である。

この方法の様々な実施形態では、癌は、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、転移性結腸癌、膵臓癌、または悪性腫瘍である。例えば、癌はＰＤ−１難治性腫瘍を含む。

当業者は、本明細書に記載された本発明が、具体的に記載されたもの以外に変更および修正されることを認識するであろう。本明細書に記載される本発明は、そのようなすべての変更および修正を含むことを理解されたい。本発明はまた、本明細書で個別にまたは集合的に参照されまたは示されるそのようなすべての工程、特徴、組成物および化合物、ならびに任意の２つ以上の工程または特徴のあらゆる組み合わせも含む。

以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明の態様をさらに示すために含まれている。

ボルテゾミブ含有ナノ粒子の濃度（図１Ａ）または用量（図１Ｂ）を増加させた場合のＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫細胞の生存率を示すグラフである。 ボルテゾミブ含有ナノ粒子の濃度（図２Ａ）または用量（図２Ｂ）を増加させた場合のＯＰＭ−２多発性骨髄腫細胞の生存率を示すグラフである。 ボルテゾミブ含有ナノ粒子（丸）またはビヒクル（四角）で処理された移植ＲＰＭＩ−８２２６ ＭＭ動物異種移植片の経時的な腫瘍体積を示すグラフである。 ボルテゾミブ含有ナノ粒子またはビヒクルで処理されたＭＭ ＲＰＭＩ−８２２６異種移植マウスの経時的な体重を示すグラフである。 １．５ｍｇ／ｋｇボルテゾミブ単独またはボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理された野生型マウスの経時的な体重変化を示すグラフである。 ３．０ｍｇ／ｋｇボルテゾミブ単独またはボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理された野生型マウスの経時的な体重変化を示すグラフである。 ６．０ｍｇ／ｋｇボルテゾミブ単独またはボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理された野生型マウスの経時的な体重変化を示すグラフである。 ９．０ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ単独またはボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理された野生型マウスの経時的な体重変化を示すグラフである。 １２．０ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ単独またはボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理された野生型マウスの経時的な体重変化を示すグラフである。 ボルテゾミブのテトラブロックポリマーナノ粒子の透過型電子顕微鏡写真である。 ボルテゾミブのテトラブロックポリマーナノ粒子の透過型電子顕微鏡写真である。 無細胞緩衝系におけるボルテゾミブのインビトロでの緩慢で持続的な放出を示すグラフである。 ボルテゾミブ（青、下線）とボルテゾミブナノ粒子（赤、上線）のさまざまな濃度に曝露したときのＭＣＦ−７ホルモン依存性乳癌細胞株の増殖率を示すグラフである。 ｎｕ／ｎｕマウスにおける皮下異種移植片として増殖させたＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫細胞の経時的な腫瘍体積（ｍｍ^３）を示すグラフである。

とりわけ、血液癌を含む癌の治療または予防に有用である、ボルテゾミブ（製品名ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））を含むナノ粒子が提供される。血液癌には、例えば、多発性骨髄腫およびリンパ腫ならびにそれらに関連する状態が含まれる。

定義
便宜上、本発明をさらに説明する前に、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で使用される特定の用語をここに集める。これらの定義は、残りの開示に照らして読まれるべきであり、当業者によって理解されるべきである。他に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書を通して使用される用語は、特定の場合に特に限定されない限り、以下のように定義される。

冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、冠詞の文法上の目的語の１つまたは複数（つまり、少なくとも１つ）を指すために使用される。

「抗癌療法」とは、腫瘍の増殖もしくは転移または腫瘍の転移を遅らせるあらゆる治療を意味する。

「吸収」とは、何かを吸収するプロセス（例えば、抗癌療法）または吸収されるプロセスを意味する。

「免疫療法」は、身体が癌、感染症、および他の疾患と戦うことを助けるために免疫系を刺激または抑制する物質を使用する療法である。一部の種類の免疫療法は、免疫系の特定の細胞のみを標的とする。その他は一般的な方法で免疫系に影響を与える。免疫療法の種類には、サイトカイン、ワクチン、カルメットゲラン菌（ＢＣＧ）、およびいくつかのモノクローナル抗体が含まれる。

「備える」、「包含する」、「含む」、「含有する」、「によって特徴付けられる」、およびそれらの文法上の同等物は、包括的でオープンな意味で使用され、追加の要素が含まれる場合があることを意味する。「のみからなる」と解釈することを意図するものではない。

本明細書で使用される場合、「からなる」およびその文法上の同等物は、特許請求の範囲において特定されていない任意の要素、工程、または成分を除外する。

本明細書で使用する場合、「約」または「およそ」という用語は、通常、所与の値または範囲の２０％以内、より好ましくは１０％以内、最も好ましくはさらに５％以内を意味する。

本明細書で使用される場合、「生分解性」という用語は、ポリマー構造の酵素的分解と非酵素的分解の両方を指す。

「カチオン性」という用語は、それぞれの環境条件下で正味の正電荷または正のゼータ電位を有する任意の薬剤、組成物、分子または材料を指す。様々な実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、カチオン性ポリマー、ペプチド、タンパク質担体、または脂質を含む。

「ホルモン療法」とは、ホルモンを追加、遮断、または除去する治療を意味する。

「免疫療法」とは、免疫系を刺激または抑制して、身体が癌、感染症、および他の疾患と戦うのを助ける物質を使用する療法を意味する。一部の種類の免疫療法は、免疫系の特定の細胞のみを標的とする。その他は一般的な方法で免疫系に影響を与える。免疫療法の種類には、サイトカイン、ワクチン、カルメットゲラン菌（ＢＣＧ）、およびいくつかのモノクローナル抗体が含まれる。

「破骨細胞」とは、大きく、多核であり、骨吸収に関連する骨細胞を意味する。

骨組織の吸収とは、破骨細胞が骨の組織を分解してミネラルを放出し、骨組織から血液へのカルシウムの移動を生じるプロセスを意味する。

「リンパ腫」とは、場合によりホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む、リンパ系におけるＢ細胞またはＴ細胞の悪性増殖を意味する。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、以下、侵襲性ＮＨＬ、形質転換ＮＨＬ、無痛性ＮＨＬ、再発性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、低悪性度非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、大細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫。ＮＫ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、および菌状息肉腫／セズリー症候群を含む皮膚Ｔ細胞癌からなる群から選択される。「無痛性」の非ホジキンリンパ腫は、ゆっくりと成長する形態のリンパ腫を含む分類である。それらは、Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎにおける低悪性度と呼ばれるものと中悪性度のＮＨＬのいくつかのカテゴリーを含む。無痛性ＮＨＬは、化学療法や放射線療法などの従来の癌治療に反応しない場合がある。無痛性ＮＨＬおよび他の前悪性型のＮＨＬもまたＮＨＬに進行する場合がある。疾患の前悪性型または良性型に関して、任意選択により本発明の組成物および方法を、治療に加えてまたは治療の代わりに、例えば、任意選択により悪性型のＮＨＬへの疾患の進行を止めるために、予防に適用することができる。「形質転換した」非ホジキンリンパ腫は、侵襲性の側面を獲得し、標準的な化学療法に対してより反応性になる無痛性ＮＨＬを説明するために時々利用される分類である。

「多発性骨髄腫」とは、骨髄における最終分化Ｂ細胞（形質細胞）の蓄積を特徴とするあらゆるタイプのＢ細胞悪性腫瘍を意味する。多発性骨髄腫癌は、カッパ型の軽鎖および／もしくはラムダ型の軽鎖を生じるいくつかの癌の１つ、ならびに／または原発性形質細胞白血病（ＰＣＬ）を含む侵襲性の多発性骨髄腫、ならびに／または多発性骨髄腫に進行する場合のあるＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症）および／もしくはワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ、リンパ形質細胞性リンパ腫としても知られる）などの良性形質細胞障害を任意選択により含み、ならびに／またはくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、および／もしくは無痛性多発性骨髄腫、および／もしくは多発性骨髄腫の再治療、多発性骨髄腫に進行する場合もある前悪性型の多発性骨髄腫、ならびに／または原発性アミロイドーシスである可能性がある。疾患の前悪性型または良性型に関して、任意選択により、本発明の組成物および方法は、治療に加えて、または治療の代わりに、例えば、任意選択により、悪性型の多発性骨髄腫への疾患の進行を止めるために、予防に適用され得る。

本明細書で使用される場合、「難治性骨髄腫」は、積極的な治療にもかかわらず進行している疾患である。難治性多発性骨髄腫には２種類の患者が含まれ得る。１．導入療法（化学療法を含む）を継続している間、反応および進行を達成しないか、または骨髄腫が最初に治療に反応しなかった一次難治性患者。２．導入化学療法に反応するが、再発後の治療には反応しない二次難治性患者。これには、骨髄腫の薬剤が最初は機能したが、再発した疾患が再発した後に機能しなくなった状況も含まれる。

本明細書で使用する場合、「ナノ粒子」という用語は、直径が１０ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲の粒子を指し、直径は、粒子と同じ体積を有する完全な球の直径を指す。「ナノ粒子」という用語は、「ナノ粒子（複数可）」と交換可能に使用される。いくつかの場合において、粒子の直径は約１〜１０００ｎｍ、１０〜５００ｎｍ、２０〜３００ｎｍ、または１００〜３００ｎｍの範囲である。様々な実施形態では、直径は約３０〜１７０ｎｍである。実施形態では、ナノ粒子の直径は、１、５、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、または１０００ｎｍである。

いくつかの場合において、粒子の集団が存在することがある。本明細書で使用される場合、ナノ粒子の直径は、特定の集団における分布の平均である。

本明細書で使用される場合、「ポリマー」という用語には、当技術分野で使用されるその通常の意味が与えられ、すなわち、共有結合によって接続された１つ以上の繰り返し単位（モノマー）を含む分子構造のことである。繰り返し単位はすべて同一である場合もあれば、ポリマー内に２つ以上のタイプの繰り返し単位が存在する場合もある。

本明細書で使用する場合、「化学療法剤」、「治療剤」および「薬物」という用語は互換的に使用され、本質的に薬学的または生物学的に活性である化合物または種だけでなく、これらの１つ以上の活性化合物または種を含む材料、ならびにその結合物、修飾物、および薬理学的に活性なフラグメント、ならびにそれらの抗体誘導体を包含することも意図される

「標的化部分」は、標的化された細胞の表面に選択的に結合する分子である。例えば、標的化部分は、特定の種類の細胞上に見られるか、または他の細胞上よりも標的細胞上でより高い頻度で発現される細胞表面受容体に結合するリガンドであり得る。

標的化部分または治療剤は、ペプチドまたはタンパク質であり得る。「タンパク質」および「ペプチド」は、当技術分野で周知の用語であり、本明細書で使用される場合、これらの用語には、当技術分野でのそれらの通常の意味が与えられる。一般に、ペプチドは長さが約１００アミノ酸未満のアミノ酸配列であるが、最大３００のアミノ酸を含むことができる。タンパク質は一般に少なくとも１００アミノ酸の分子であると考えられている。アミノ酸はＤ−配置またはＬ−配置であり得る。タンパク質は、例えば、タンパク質薬物、抗体、組換え抗体、組換えタンパク質、酵素などであり得る。いくつかの場合において、例えば、炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基などの化学物質、結合のためのリンカー、官能化、または環化などのその他の修飾、ペプチドやタンパク質にさらに有利な特性を付与することを意図した環化によるものおよび多数のその他の修飾のいずれかの追加により、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸の１つ以上を修飾することができる。他の例では、ペプチドまたはタンパク質の１つ以上のアミノ酸は、１つ以上の天然に存在しないアミノ酸で置換することにより修飾することができる。ペプチドまたはタンパク質は、ファージライブラリー、酵母ライブラリー、またはインビトロコンビナトリアルライブラリーなどのコンビナトリアルライブラリーから選択することができる。

本明細書で使用される場合、「組み合わせ」、「治療の組み合わせ」、または「医薬の組み合わせ」という用語は、２つ以上の治療剤の組み合わせ投与（例えば、同時送達）を指す。併用療法の成分は、同時にまたは逐次的に投与することができ、すなわち、併用の少なくとも１つの成分は、他の成分（複数可）と時間的に異なる時間に投与される。実施形態では、成分（複数可）は、他の成分（複数可）の１ヶ月、１週間、１〜６日、１８、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１時間、または３０、２０、１５、１０、もしくは５分以内に投与される。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激性アレルギー反応、および合理的な利益／リスク比に見合った他の問題の合併症を伴うことなく、温血動物、例えば、哺乳動物またはヒトの組織との接触に適した化合物、材料、組成物および／または剤形を指す。

１つ以上の治療剤を含むポリマーナノ粒子の「治療有効量」は、組み合わせで治療される障害のベースラインの臨床的に観察可能な徴候および症状に対して観察可能なまたは臨床的に有意な改善をもたらすのに十分な量である。

本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」という用語は、癌または癌に直接的にもしくは間接的に関与する任意の障害に苦しむかまたは罹患する可能性がある動物を含むことが意図される。対象の例には、哺乳動物、例えば、ヒト、類人猿、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、およびトランスジェニック非ヒト動物が含まれる。一実施形態では、対象はヒト、例えば、癌に罹患しているか、罹患するリスクがあるか、または潜在的に癌に罹患する可能性があるヒトである。

本明細書で使用する場合、「治療する」または「治療」という用語は、対象の少なくとも１つの症状を除去、軽減もしくは緩和するか、または疾患の進行を遅らせる治療を含む。例えば、治療は、障害の１つもしくはいくつかの症状の減少、または癌などの障害の完全な根絶であり得る。本開示の意味の範囲内で、用語「治療する」はまた、疾患を悪化させるリスクを阻止および／または低減することを示す。本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」または「予防」という用語は、予防される状態、疾患もしくは障害に関連するか、またはそれによって引き起こされる少なくとも１つの症状の予防を含む。

本明細書で使用される場合、「血液障害」という用語は、骨髄などの造血組織、または免疫系の細胞で開始する、血液癌において見られる細胞の癌性状態または前癌性状態によって表される疾患または状態を意味する。例としては、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫（血液癌とも呼ばれる）およびそれらに関連する疾患または状態が含まれる。さらなる疾患または状態は、例えば、白血病、例えば、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血病性白血病、白血球性白血病、好塩基球性白血病、芽細胞白血病、牛白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胚性白血病、好酸球性白血病、肉眼白血病、有毛細胞白血病、血球性白血病、血球芽球性白血病、組織球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ肉腫細胞白血病、肥満細胞白血病、巨核球性白血病、微小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄性白血病、骨髄性顆粒性白血病、骨髄単球性白血病、Ｎａｅｇｅｌｉ白血病、形質細胞白血病、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞白血病、シリング白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病、および未分化細胞白血病を含み得る。

いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、反復性または再発性の多発性骨髄腫、すなわち、制御期間の後、例えば、治療処置後に再発する多発性骨髄腫を有する個体における疾患を病期分類または再病期分類するために使用することができる。

再発性および／または難治性の状況では、患者の３つのグループが存在する。１つ目は、「再発」した疾患を有するグループであり、これには、具体的には、最初の治療が成功した後、いかなる治療も行わずに最初の進行が起こった患者が含まれる。再発した疾患の定義は、血清または尿タンパク質が２５％以上増加し、０．５ｍｇ／ｄＬ以上を要求するが、「生化学的」再発のみの存在は、追加の全身療法の指標ではない。患者の再発までの時間は非常に変動しやすい可能性があり（数週間から数か月）、多くの患者は生化学的進行を伴ってある期間生存し、注意深いモニタリングを超えて追加の治療を必要としないこともあるため、患者は治療開始前に何らかの症状の再発を起こすはずである。次のカテゴリーには、特定の治療法で進行した、または所与の治療法の完了から６０日以内に定義された、再発性難治性疾患の患者が含まれる（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｐａｎｅｌ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００９）。

歴史的に、これはステロイドまたはアルキル化剤ベースのアプローチに限定されていた。したがって、「難治性」は一般的な用語であった。しかし、最近では、これは、ボルテゾミブやレナリドマイド難治性再発などの特定の薬剤と関連するようになってきている。ボルテゾミブに対して難治性の患者でもレナリドマイドに反応する場合があり、またはその逆の場合があるため、これは明らかに重要であり、この薬剤固有の耐性は、再発の状況で開発中の新しい薬剤の逐次評価および統合に引き続き関連する場合がある。このグループの患者は、以前に複数の一連の治療を受けており、臨床試験以外では治療の選択肢がほとんどない患者のグループの中でとりわけ難易度が高い場合がある。

最後のカテゴリーは一次難治性であり、これはまた、導入療法後に反応を達成しなかった患者の潜在的に難易度の高いグループを表す。難治性疾患と同様に、このカテゴリーは特定の薬剤または組み合わせの状況で説明される場合に最も有用である。また、初期の耐性にもかかわらず疾患の進行がより遅い変動的な経過を有することができる患者のグループを区別することが特に重要である。

ボルテゾミブを含むポリマーナノ粒子
ボルテゾミブは、当技術分野で周知であり、例えば、米国特許第６，７１３，４４６号、Ａｌｂａｎｅｌｌ ａｎｄ Ａｄａｍｓ，Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ ２７：１０７９−１０９２（２００２）に開示されており、これは、ボルテゾミブ（Ｎ−２−ピラジンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン）−Ｌ−ロイシンボロン酸）がヒト腫瘍異種移植モデルにおいて有意な抗腫瘍活性を示すことを報告している。Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４８：２６０９（２００３）も参照のこと。これは、ボルテゾミブの第２相試験の結果を報告しており、再発性および難治性の多発性骨髄腫の治療におけるその有効性を示している。

ボルテゾミブの送達のための生分解性ポリマーナノ粒子が本明細書で提供される。ボルテゾミブを含むナノ粒子は、例えば、ＵＳ ２０１５−０３５３６７６ Ａ１；ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０２７６（２０１７年５月１１日公開）、および２０１７年１１月１日出願、２０１８年５月１１日公開のＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５９５４２に記載されている方法を使用して調製することができる。

一実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含むブロックコポリマーを含む。ポリ乳酸（ＰＬＡ）は疎水性ポリマーであり、ポリマーナノ粒子の合成のために好ましいポリマーである。しかし、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）およびポリ乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）のブロックコポリマーもまた使用することができる。疎水性ポリマーはまた、生物学的に誘導されたものまたはバイオポリマーであり得る。使用されるＰＬＡの分子量は、一般に約２，０００ｇ／ｍｏｌ〜８０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲である。したがって、一実施形態では、使用されるＰＬＡは、約１０，０００ｇ／ｍｏｌ〜８０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲である。ＰＬＡの平均分子量はまた、約７０，０００ｇ／ｍｏｌであってもよい。

ＰＥＧは、親水性、マクロファージに対する抗食作用、および免疫学的認識に対する耐性を付与するので、ポリマーナノ粒子を形成するために使用されるポリマーの別の好ましい成分である。ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）のようなブロックコポリマーは、本発明で使用できる親水性または親水性−疎水性コポリマーである。ブロックコポリマーは、２、３、４、またはそれ以上の個別のブロックを有することができる。

本明細書で使用される場合、１ｇ／モルは１「ダルトン」と等価である（すなわち、ポリマーの分子量に言及する場合、ダルトンとｇ／ｍｏｌは交換可能である）。本明細書で使用される「キロダルトン」は、１，０００ダルトンを指す。

さらなる実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ）ジブロックコポリマーを含む。

なおさらなる実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーを含む。様々な実施形態では、ナノ粒子は、生分解性であり、血液循環が長く、ステルス型テトラブロックポリマーナノ粒子プラットフォームであるＮＡＮＯＰＲＯ（登録商標）（ＮａｎｏＰｒｏｔｅａｇｅｎ Ｉｎｃ．、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を含む。ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーは、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧトリブロックコポリマーとＰＬＡの化学的結合から形成できる。

ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーを構成するナノ粒子の合成および特性評価は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／１６０７７３号に記載されている。ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーを含むポリマーナノ粒子は、安全で、安定しており、および無毒であることが示されている。

このテトラブロックコポリマーを形成するために使用されるプロセスは、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧをポリ乳酸（ＰＬＡ）マトリックスに共有結合し、その結果、ブロックコポリマーがマトリックスの一部、つまりナノ粒子送達システムになることを含む。これは、乳化剤の培地への浸出を防ぐ。

いくつかの実施形態では、親水性−疎水性ブロックコポリマー（例えば、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）の平均分子量（Ｍｎ）は、一般に、１，０００〜２０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲である。さらなる実施形態では、親水性−疎水性ブロックコポリマーの平均分子量（Ｍｎ）は、約４，０００ｇ／ｍｏｌ〜１５，０００ｇ／ｍｏｌである。場合によっては、親水性−疎水性ブロックコポリマーの平均分子量（Ｍｎ）は、４，４００ｇ／ｍｏｌ、８，４００ｇ／ｍｏｌ、または１４，６００ｇ／ｍｏｌである。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧのＭｎは、１，１００〜１５，０００ｇ／ｍｏｌ、例えば、４，０００〜１３，０００ｇ／ｍｏｌである。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧのＭｎは、１０，０００〜１３，０００ｇ／ｍｏｌである。他の実施形態では、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧのＭｎは約１２，５００ｇ／ｍｏｌである。

いくつかの実施形態では、本発明のブロックコポリマーは、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）のセグメントおよびポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）のセグメントから本質的になる。

一実施形態において、特定の生分解性ポリマーナノ粒子は、ブロックコポリマー、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）から形成される。

本発明の別の特定の生分解性ポリマーナノ粒子は、ブロックコポリマー、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（乳酸）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ−ＰＬＡ）から形成される。

実施形態では、ボルテゾミブ含有ナノ粒子は、ＮｕＢＣＰ−９ペプチド、ＭＵＣ−１ペプチド、および／または腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）を含まない。

本発明の生分解性ポリマーは、共有結合を使用して親水性−疎水性ブロックコポリマーでＰＬＡを化学的に修飾することにより形成することができる。

本発明の生分解性ポリマーナノ粒子は、様々な実施形態において、約１〜１０００ｎｍの範囲のサイズ、約３０〜３００ｎｍの範囲のサイズ、約１００〜３００ｎｍの範囲のサイズ、または、約１００〜２５０ｎｍの範囲のサイズ、または少なくとも約１００ｎｍのサイズを有する。

本発明の生分解性ポリマーナノ粒子は、様々な実施形態において、約３０〜１２０ｎｍの範囲のサイズ、約１２０〜２００ｎｍのサイズ、または約２００〜２６０ｎｍのサイズ、または少なくとも約２６０ｎｍのサイズを有する。

一実施形態では、本発明の生分解性ポリマーは、実質的に乳化剤を含まないか、または約０．５重量％〜５重量％の量で外部乳化剤を含み得る。

一実施形態では、本発明の生分解性ポリマーナノ粒子はＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧであり、ポリ（乳酸）ブロックの平均分子量は約６０，０００ｇ／ｍｏｌであり、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックの平均分子量は約８，４００または約１４，６００ｇ／ｍｏｌであり、外部乳化剤は約０．５重量％〜５重量％である。

別の実施形態では、本発明の生分解性ポリマーナノ粒子はＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧであり、ポリ（乳酸）ブロックの平均分子量は約１６，０００ｇ／ｍｏｌ以下であり、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックの平均重量は約８，４００ｇ／ｍｏｌまたは約１４，６００ｇ／ｍｏｌであり、組成物は実質的に乳化剤を含まない。

一実施形態では、生分解性ポリマーナノ粒子はＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧであり、ポリ（乳酸）ブロックの平均分子量は約７２，０００ｇ／ｍｏｌ（または７２ｋＤａ）であり、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックの平均重量は約８，４００または約１４，６００ｇ／ｍｏｌであり、外部乳化剤は約０．５重量％〜５重量％である。

別の実施形態では、生分解性ポリマーナノ粒子はＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧであり、ポリ（乳酸）ブロックの平均分子量は約１２，０００ｇ／ｍｏｌ（または１２ｋＤａ）以下、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックの平均重量は約８，４００ｇ／ｍｏｌまたは約１４，６００ｇ／ｍｏｌであり、組成物は実質的に乳化剤を含まない。

別の実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、カチオン性ペプチドをさらに含む。

別の態様では、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーまたはＰＬＡ−ＰＥＧジブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成されるポリマーナノ粒子が本明細書で提供され、ポリマーナノ粒子には、ボルテゾミブ、および、任意で、第２の治療剤がロードされている。

ナノ粒子（本明細書では「ＮＰ」とも呼ばれる）は、ナノカプセルまたはナノスフィアとして製造することができる。ナノ粒子へのボルテゾミブのロードは、吸着プロセスまたはカプセル化プロセスのいずれかで実行できる（Ｓｐａｄａら，２０１１；Ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ；Ｗｏｒｌｄ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：７６）。ナノ粒子は、受動的と能動的の両方の標的化戦略を使用することにより、正常細胞における毒性を回避しながら、癌細胞中での薬物の細胞内濃度を増強することができる。ナノ粒子が特定の受容体に結合して細胞に入ると、これらは、通常、受容体を介したエンドサイトーシスを介してエンドソームに覆われ、それにより、主要な薬物耐性メカニズムの１つであるＰ糖タンパク質の認識を回避する（Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００８，１４：１３１０−１３１６）。ナノ粒子はオプソニン化と食作用によって身体から取り除かれる（Ｓｏｓｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ：Ｎｅｗ Ｅｎｄｅａｖｏｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ；Ｒｅｃｅｎｔ Ｐａｔｅｎｔｓ ｏｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１：４３−５９）。ナノキャリアベースのシステムは、細胞内浸透の改善、局所送達、早期分解からの薬物の保護、薬物動態および薬物組織分布プロファイルの制御、より低い用量要件および費用対効果の利点を備えた効果的な薬物送達のために使用できる（Ｆａｒｏｋｈｚａｄ ＯＣ，ｅｔ ａｌ．；Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ−ａｐｔａｍｅｒ ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００６，１０３（１６）：６３１５−２０；Ｆｏｎｓｅｃａ Ｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ｌｏａｄｅｄ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ： ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２００２；８３（２）：２７３−８６；Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１１，６（７）：１２５７−１２７２）。

ナノ粒子の取り込みは、その小さな寸法に間接的に比例する。それらの小さいサイズのために、ポリマーナノ粒子は、細網内皮系（ＲＥＳ）による認識および取り込みを回避することが見出されており、したがって、長期間、血液中を循環することができる（Ｂｏｒｃｈａｒｄら，１９９６，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．７：１０５５−１０５８）．ナノ粒子はまた、固形腫瘍の漏出性血管系のような病理部位に血管外漏出することができ、受動的な標的化メカニズムを提供する。表面積が大きいため可溶化率がより早くなり、ナノサイズの構造は、通常、より高い血漿濃度および曲線下面積（ＡＵＣ）値を示す。粒子サイズが小さいほど、宿主の防御メカニズムを回避し、血液循環時間を増加させる助けとなる。ナノ粒子のサイズは薬物放出に影響を与える。粒子が大きいほど、システムへの薬物の拡散が遅くなる。粒子が小さいほど表面積は大きくなるが、薬物の放出は速くなる。粒子が小さいほど、ナノ粒子分散液の保管および輸送中に凝集する傾向がある。したがって、ナノ粒子の小さなサイズと最大の安定性との間の妥協が望まれる。薬物送達システムで使用されるナノ粒子のサイズは、毛細血管への急速な漏出を防ぐのに十分大きくなければならないが、肝臓や脾臓などの細網内皮系に留まっている固定マクロファージによる捕捉を逃れるために十分小さい必要がある。

それらのサイズに加えて、ナノ粒子の表面特性もまた、循環中の寿命と運命を決定する際の重要な要素である。ナノ粒子は、マクロファージの捕捉を回避するために、理想的には親水性の表面を有するべきである。親水性ドメインおよび疎水性ドメインを有するブロックコポリマーから形成されたナノ粒子は、これらの基準を満たす。制御されたポリマー分解はまた、病状への薬剤送達のレベルの増加を可能にする。ポリマーの分解もまた、粒子サイズによって影響を受ける可能性がある。インビトロでの粒子サイズの増加に伴い、分解率は増加する（Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ；Ｓｕｎｄａｒら，２０１０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ；ｄｏｉ：１０．１０８８／１４６８−６９９６／１１／１／０１４１０４）。

ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）は、組織工学、医療材料、および薬物担体の用途に米国ＦＤＡによって承認されており、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）ＰＬＡ−ＰＥＧベースの薬物送達システムは、当技術分野で知られている。ＵＳ２００６／０１６５９８７Ａ１は、ポリ（エステル）−ポリ（エチレン）マルチブロックコポリマーと、ナノスフィアに剛性を付与し、医薬化合物を組み込むためのオプションの成分を含むステルスポリマー生分解性ナノスフィアを記載している。ＵＳ２００８／００８１０７５Ａ１は、グラフト高分子および１つ以上のブロックコポリマーから自己組織化された、機能的な内部コアおよび親水性の外部シェルを備えた新規混合ミセル構造を開示している。ＵＳ２０１０／０００４３９８Ａ１は、相間領域を有するシェル／コア構成のポリマーナノ粒子およびそれを製造するためのプロセスを記載している。

様々な実施形態では、本発明は、治療分子と相互作用して安定なナノ複合体を形成し、かつ／または細胞透過性ペプチドとして機能するカチオン性分子をさらに含む。様々な実施形態では、カチオン性分子細胞は、透過性ペプチドを含むか、またはタンパク質形質導入ドメインを含む。様々な実施形態では、カチオン性分子は、治療剤の核への形質導入を容易にするカチオン性ペプチドである。

本明細書では、ボルゾンまたはそれ以上の治療薬を含むポリマーナノ粒子を調製する方法が提供される。得られる高分子ナノ粒子は、非毒性、安全、かつ生分解性であるだけでなく、高い貯蔵安定性でインビボでも安定しており、医療分野におけるナノキャリアシステムまたは薬物送達システムにおいて安全に使用できる。実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、インビボで送達可能な薬物または治療剤の半減期を増加させることができる。

調製プロセスは、ボルテゾミブを供給すること、ブロックポリマーを溶媒に溶解してブロックコポリマー溶液を形成すること、およびブロックコポリマー溶液に複合体を添加して、複合体およびブロックコポリマーを含む溶液を形成することを含み得る。

一実施形態では、ブロックコポリマーは、ＰＬＡ−ＰＥＧジブロックコポリマーである。

一実施形態では、ブロックコポリマーは、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーである。

一実施形態では、ブロックコポリマー溶液は、約２ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で調製される。さらなる実施形態では、ブロックコポリマー溶液は、約６ｍｇ／ｍｌの濃度で調製される。

一実施形態では、プロセスは、界面活性剤を含む溶液にボルテゾミブを含む溶液を加えることをさらに含む。さらなる実施形態では、ボルテゾミブとブロックポリマー溶液とを組み合わせることから得られる溶液は、安定したナノ粒子が形成されるまで攪拌される。

様々な実施形態では、ポリマーナノ粒子は、膨潤または収縮すると非球形構成を採用することができる。

様々な実施形態におけるナノ粒子は、本質的に両親媒性である。

ナノ粒子のゼータ電位およびＰＤＩ（多分散性指数）を計算できる（米国特許第９，１４９，４２６号を参照）。

ポリマーナノ粒子は、透過型電子顕微鏡を使用して測定できる寸法を有する。適切な実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子の直径は、直径約１００〜３５０ｎｍ、または直径約１００〜３０ｎｍ、または約１００〜２５０ｎｍである。さらなる実施形態では、本明細書で提供されるポリマーナノ粒子の直径は、約１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、１６０ｎｍ、１７０ｎｍ、１８０ｎｍ、１９０ｎｍ、２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、または２５０ｎｍである。

一実施形態では、複合体を含むポリマーナノ粒子は、約＋５〜−９０ｍＶ、例えば、＋４〜−７５ｍＶ、＋３〜−３０ｍＶ、＋２〜−２５ｍＶ、＋１〜−４０ｍＶのゼータ電位を有する。さらなる実施形態では、複合体は約−３０ｍＶのゼータ電位を有する。

ポリマーナノ粒子形成のための特定のプロセスおよび医薬組成物における使用は、参照の目的で本明細書に提供されている。これらのプロセスおよび使用は、当業者に明らかな様々な方法を通じて実行され得る。

医薬組成物
また、本明細書では、医療における使用、およびナノ粒子のキャリアシステムまたはリザーバーまたはデポーを使用する他の分野で使用するためのボルテゾミブポリマーナノ粒子を含む医薬組成物が提供される。ナノ粒子は、予後、治療、診断および／またはセラノスティック組成物に使用することができる。適切には、本発明のナノ粒子は、薬物および薬剤送達（例えば、腫瘍細胞内）、ならびにヒトおよび動物における疾患診断および医療画像化のために使用される。したがって、本発明は、本明細書に記載の治療剤をさらに含むナノ粒子を使用して疾患を治療する方法を提供する。本発明のナノ粒子はまた、リザーバーまたはデポーが必要とされる化学反応または生物学的反応などの他の用途において、バイオセンサーとして、固定化酵素の薬剤などとして使用することができる。

したがって、一態様では、
ａ）ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含むブロックコポリマーを含むポリマーナノ粒子、および
ｂ）ボルテゾミブを含む医薬組成物が本明細書で提供される。

一実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ）ジブロックコポリマーを含む。

一実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーを含む。

さらなる実施形態では、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーは、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧトリブロックコポリマーとＰＬＡとの化学的結合から形成される。

一実施形態では、ＰＬＡの分子量は、約１０，０００〜約１００，０００ダルトンである。

本明細書で提供される組成物の一実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ）ジブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

本明細書で提供される組成物の実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

本明細書で提供される組成物の一実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ポリマーナノ粒子の外側に結合した標的化部分をさらに含み、標的化部分は、抗体、ペプチド、またはアプタマーである。

適切な医薬組成物または製剤は、例えば、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の活性成分（複数可）を含むことができる。経腸または非経口投与用の医薬製剤は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤または坐剤、またはアンプルなどの単位剤形の製剤である。特に明記しない限り、これらは、それ自体既知の様式で、例えば、従来の混合、造粒、糖衣、溶解または凍結乾燥プロセスによって調製される。各剤形の個々の用量に含まれる組み合わせパートナーの単位含量は、複数の用量単位の投与により必要な有効量に達し得るため、それ自体で有効量を構成する必要がないことが理解される。

医薬組成物は、有効成分として、１つ以上の医学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせた１つ以上のナノ粒子を含むことができる。本発明の組成物の製造において、活性成分は、典型的には、賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈されるか、または例えば、カプセル、サシェ、紙、もしくは他の容器の形態でそのような担体内に封入される。賦形剤が希釈剤として機能する場合、それは、活性成分のためのビヒクル、担体または媒体として作用する、固体、半固体、または液体の材料であり得る。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、ロゼンジ、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ、エアロゾル（固体または液体媒体中）、例えば、最大１０重量％の活性化合物を含む軟膏、軟質および硬質ゼラチンカプセル、坐剤、無菌注射液、ならびに無菌包装粉末の形態であり得る。

適切な賦形剤のいくつかの例には、ラクトース（例えば、ラクトース一水和物）、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム）、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、コロイド状二酸化ケイ素、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン（例えば、ポビドン）、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースが含まれる。製剤は、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油などの潤滑剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、安息香酸メチルおよびプロピルヒドロキシ安息香酸などの防腐剤、甘味料、ならびに香料をさらに含むことができる。

本発明の化合物および組成物を経口投与または注射により組み込むことができる液体形態には、水溶液、適切に風味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、および綿実油、ゴマ油、ココナッツオイル、またはピーナッツオイルなどの食用油を有する風味付けされた乳濁液、ならびにエリキシル、および同様の製薬ビヒクルが含まれる。

治療法
本明細書に開示されるナノ粒子は、ボルテゾミブを用いる治療が有益であることが知られているか、またはその疑いがあるあらゆる状態または障害、例えば、プロテアソームの選択的阻害が望まれる状態または障害を治療または予防するために使用できる。

一態様では、ボルテゾミブ含有ナノ粒子は、癌または前癌状態を治療または予防するために使用される。実施形態では、疾患は血液疾患である。血液疾患の例には、例えば、急性前骨髄球性白血病、Ｔ細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、神経芽細胞腫、腺癌、ユーイング肉腫、神経膠芽腫、上皮癌種、子宮頸部腺癌、または高分化型脂肪肉腫の癌などの造血器悪性腫瘍が含まれる。

実施形態では、治療される状態には、多発性骨髄腫、リンパ腫、または関連する状態、例えば、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ、症候性ＭＭ、新たに診断された段階から後期の再発性／難治性の範囲が含まれる。リンパ腫関連状態の例には、例えば、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）が含まれる。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、侵襲性ＮＨＬ、形質転換ＮＨＬ、無痛性ＮＨＬ、再発性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、低悪性度非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、大細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫。ＮＫ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、および菌状息肉腫／セズリー症候群を含む皮膚Ｔ細胞癌からなる群から選択される。

さらに、本明細書に開示される組成物は、自己免疫疾患、炎症性疾患、アミロイド疾患、代謝障害、発達障害、心血管疾患、肝疾患、腸疾患、感染症、内分泌疾患、および神経障害を治療または予防するために使用できる。実施形態では、対象に対する医薬組成物は、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）およびボルテゾミブを含むブロックコポリマーを含むポリマーナノ粒子を含む。

炎症性疾患には、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）線維症、および移植、例えば、心臓、肺、腎臓または肝臓移植における抗体媒介拒絶反応が含まれる。

アミロイド疾患には、例えば、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、２型糖尿病、ハンチントン病、パーキンソン病、腎不全の血液透析に関連するアミロイドーシス、ダウン症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、クル、クロイツフェルト−ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、致命的な家族性不眠症、英国家族性認知症、デンマーク家族性認知症、家族性角膜アミロイドーシス、家族性角膜ジストロフィー、甲状腺髄様癌、インスリノーマ、孤立性心房性アミロイドーシス、下垂体アミロイドーシス、大動脈アミロイドーシス、形質細胞障害、家族性アミロイドーシス、老人性心臓アミロイドーシス、炎症関連アミロイドーシス、家族性地中海性熱病、全身性アミロイドーシス、および家族性全身性アミロイドーシス、またはタウオパチー（例えば、前頭側頭型認知症、慢性外傷性脳症、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症）が挙げられる。

一態様では、治療を必要とする対象の疾患を治療する方法であって、ａ）ＰＬＡ−ＰＥＧジブロックコポリマーを含むポリマーから形成されるポリマーナノ粒子およびボルテゾミブを含む医薬組成物の治療有効量を、その対象に投与することを含む方法が本明細書で提供される。

本明細書で提供される方法の一実施形態では、医薬組成物は、レナリドマイド、クリゾチニブ、グリベック、ハーセプチン、アバスチン、ＰＤ−１チェックポイント阻害剤、ＰＤＬ−１チェックポイント阻害剤、ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤、ドキソルビシン、ダウノルビシン、デシタビン、イリノテカン、ＳＮ−３８、シタラビン、ドセタキセル、トリプトリド、ゲルダナマイシン、１７−ＡＡＧ、５−ＦＵ、オキサリプラチン、カルボプラチン、タキソテール、メトトレキサート、パクリタキセル、およびインデノイソキノリンからなる群から選択される化学療法剤または標的化抗癌剤をさらに含む。

本明細書で提供される方法の一実施形態では、疾患は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝障害、発達障害、心血管疾患、肝疾患、腸疾患、感染症、内分泌疾患および神経障害である。

別の実施形態では、疾患は癌である。

さらに別の実施形態では、癌は、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、転移性結腸癌、または膵臓癌である。

別の実施形態では、癌は、ＰＤ−１難治性腫瘍を含む。

本明細書で提供される方法の一実施形態では、ナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧジブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

本明細書で提供される方法の一実施形態では、ナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

一実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧジブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

一実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーから本質的になるポリマーから形成される。

本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、ポリマーナノ粒子を含む薬物、プロドラッグ、抗体、または他の薬剤を生理学的系（例えば、対象、またはインビボ、インビトロ、またはエキソビボの細胞、組織、および臓器）に与える行為を指す。人体への例示的な投与経路は、眼（点眼）、口（経口）、皮膚（経皮）、鼻（経鼻）、肺（吸入）、口腔粘膜（頬）、耳、注射による（例えば、静脈内、皮下、腫瘍内、腹腔内など）、などを介することができる。

実施形態では、ポリマー粒子は、静脈内（ＩＶ）、皮下（Ｓｕｂ−Ｃｕ）または腹腔内（ＩＰ）に投与される。

本明細書で提供される医薬組成物の投与は、症状の緩和、症状の進行の遅延、または症状の阻害に関して有益な効果をもたらすだけでなく、さらに驚くべき有益な効果、例えば、本明細書に記載のポリマーナノ粒子系を使用せずに、または他の従来の手段によって薬剤を送達することと比較して、例えば、より少ない副作用、より長続きする反応、改善された生活の質、または罹患率の低下をもたらし得る。

本明細書で提供されるポリマーナノ粒子の有効用量は、使用される特定のタンパク質、核酸、および／または他の治療剤、投与の様式、治療される状態、および治療される状態の重症度に応じて異なり得るしたがって、ポリマーナノ粒子の投与計画は、投与経路ならびに患者の腎機能および肝機能を含む様々な要因に従って選択される。

有効性を決定するために、治療は、１つ以上の治療前または治療後の表現型を標準の表現型と比較することをさらに含み得る。標準の表現型は、参照細胞または細胞の集団の対応する表現型である。参照細胞は、タンパク質分解障害の疑いがない人または対象からの細胞、対象からの細胞、培養細胞、対象からの培養細胞、または対象の前処理からの細胞のうちの１つ以上である。対象由来の細胞には、例えば、骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛包、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来の腫瘍細胞、正常または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、星状細胞などが含まれ得る。

併用治療
本明細書で提供される組成物は、任意選択で、ボルテゾミブと共に対象に投与される追加の治療様式、例えば、治療剤（例えば、化学療法剤）、放射線剤、ホルモン剤、生物学的剤または抗炎症剤をさらに含む。

ボルテゾミブとの併用療法で使用できる治療剤には、例えば、レナリドマイド、クリゾチニブ、または米国特許第８，８８３，８４２号に開示されているようなヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）が含まれ得る。追加の治療剤には、例えば、グリベック、ハーセプチン、アバスチン、ＰＤ−１チェックポイント阻害剤、ＰＤＬ−１チェックポイント阻害剤、ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤、タモキシフェン、トラスツザマブ、ラロキシフェン、ドキソルビシン、フルオロウラシル／５−ｆｕ、パミドロネート二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、レトロゾール、トレミフェン、フルベストラント、フルオキシメスターオン、トラスツズマブ、メトトレキサート、酢酸メガストロール、ドセタキセル、パクリタキセル、テストラクトン、アジリジン、ビンブラスチン、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、ゾレドロン酸、タキソール、ビンブラスチン、および／またはビンクリスチンが含まれる。有用な非ステロイド系抗炎症剤には、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、フルブフェン、ケトプロフェン、インドプロフェン、ピロプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラモプロフェン、ムロプロフェン、トリオキサプロフェン、スプロフェン、アミノプロフェン、チアプロフェン酸、フルプロフェン、ブクロキシン酸、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、ゾメピラク、チオピナク、ジドメタシン、アセメタシン、フェンタアザク、クリダナク、オキシピナク、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸、トルフェナム酸、ジフルリサール、フルフェニサール、ピロキシカム、スドキシカム、イソキシカム；アスピリン、サリチル酸ナトリウム、トリサリチル酸コリンマグネシウム、サルサレート、ジフルニサル、サリチルサリチル酸、スルファサラジン、およびオルサラジンを含むサリチル酸誘導体；アセトアミノフェンおよびフェナセチンを含むパラアミノフェノール誘導体；インドメタシン、スリンダク、およびエトドラクを含むインドール酢酸とインデン酢酸；トルメチン、ジクロフェナク、およびケトロラクを含むヘテロアリール酢酸；メフェナム酸およびメクロフェナム酸を含むアンスラニル酸（フェナム酸）；オキシカム（ピロキシカム、テノキシカム）、およびピラゾリジンジオン（フェニルブタゾン、オキシフェンタルタゾン）を含むエノール酸；ならびにナブメトンを含むアルカノン、ならびにその薬学的に許容される塩およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ＮＳＡＩＤの詳細な説明については、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐａｕｌ Ａ．Ｉｎｓｅｌ，Ａｎａｌｇｅｓｉｃ−Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ ａｎｄ Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇｓ Ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｏｕｔ，ｉｎ Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ６１７−５７（Ｐｅｒｒｙ Ｂ．Ｍｏｌｉｎｈｏｆｆ ａｎｄ Ｒａｙｍｏｎｄ Ｗ．Ｒｕｄｄｏｎ ｅｄｓ．，９．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄ １９９６）およびＧｌｅｎ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ａｎａｌｇｅｓｉｃ，Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ ａｎｄ Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｖｏｌ ＩＩ １１９６−１２２１（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄ．１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）を参照のこと。

一実施形態では、追加の化学療法剤または標的化抗癌剤は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、デシタビン、イリノテカン、ＳＮ−３８、シタラビン、ドセタキセル、トリプトライド、ゲルダナマイシン、１７−ＡＡＧ、５−ＦＵ、オキサリプラチン、カルボプラチン、タキソテール、メトトレキサート、パクリタキセル、およびインデノイソキノリンからなる群から選択される。

本主題は、その特定の実施形態を参照してかなり詳細に説明されてきたが、他の実施形態も可能である。このようなものとして、添付の特許請求の範囲の主旨および範囲は、そこに含まれる特定の実施形態の説明に限定されるべきではない。

ここで、実施例を用いて本開示を例解するが、これは、本開示の働きを説明することを意図したものであり、本開示の範囲に対していかなる制限的な限定も意図していない。特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、この開示が属する技術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様のまたは等価な方法および材料を、開示された方法および組成物の実施において使用することができるが、例示的な方法、デバイスおよび材料が本明細書に記載されている。

実施例１．ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックコポリマーのポリマーナノ粒子の調製
ポリ（乳酸）（分子量−４５，０００−６０，０００ｇ／ｍｏｌ）、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ（表１）、および組織培養試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。特に明記しない限り、すべての試薬は分析グレード以上であり、受け取ったままの状態で使用した。細胞株はＮＣＣＳ Ｐｕｎｅ，ＩｎｄｉａまたはＡＴＣＣ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡから入手した。

平均分子量が６０，０００ｇ／ｍｏｌのポリ（乳酸）（ＰＬＡ）５ｇを、２５０ｍｌの丸底フラスコ内のＣＨ_２Ｃｌ_２（ジクロロメタン）１００ｍｌに溶解した。この溶液に、０．７ｇのＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧポリマー（分子量範囲１１００〜８４００Ｍｎ）を加えた。この溶液を０℃で１０〜１２時間攪拌した。この反応混合物に、５ｍｌの１％Ν，Ν−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）溶液を加えた後、５ｍｌの０．１％４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を−４℃〜０℃／氷点下の温度でゆっくりと加えた。反応混合物を次の２４時間撹拌し、続いてＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックコポリマーをジエチルエーテルを用いて沈殿させ、ワットマン濾紙Ｎｏ．１を使用して濾過した。そのようにして得られたＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧブロックコポリマー沈殿物を低真空下で乾燥させ、後で使用するまで２℃〜８℃で保存した。

ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧナノ粒子は、乳化沈殿法によって調製された。上記のプロセスで得られたＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧコポリマー１００ｍｇを、別途、例えば、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、またはジクロロメタンなどの有機溶媒に溶解し、ポリマー溶液を得た。

このポリマー溶液を２０ｍｌの蒸留水の水相に滴加することにより、ナノ粒子を調製した。溶液を室温で１０〜１２時間磁気攪拌して、残留溶媒の蒸発およびナノ粒子の安定化を可能にした。次いで、ナノ粒子を、２５，０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によって収集し、蒸留水を使用して３回洗浄した。ナノ粒子をさらに凍結乾燥し、後で使用するまで２℃〜８℃で保存した。

上述のプロセスによって得られるナノ粒子の形状は、本質的に球形である。粒子サイズの範囲は約３０〜１２０ｎｍであった。ナノ粒子の流体力学的半径は、動的光散乱（ＤＬＳ）装置を使用して測定され、１１０〜１２０ｎｍの範囲である。

実施例２．ボルテゾミブでカプセル化されたナノ粒子の調製
本発明のナノ粒子は、本質的に両親媒性であり、ボルテゾミブのような両方の疎水性薬物をロードすることができる。

実施例１のプロセスを使用して調製した１００ｇのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧナノ粒子を、アセトニトリル（ＣＨ_３ＣＮ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、Ｃ_３Ｈ_７ＮＯ）、アセトンまたはジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）のような有機溶媒５ｍｌに溶解した。

１〜５ｍｇのボルテゾミブを水溶液に溶解し、上記のポリマー溶液に添加する。ボルテゾミブは、通常、ポリマーの約１０〜２０重量％の重量範囲で摂取される。この溶液を２５０〜４００ｒｐｍで１０〜１５秒間、短時間超音波処理すると、微細な一次乳濁液が生成される。

溶媒の蒸発およびナノ粒子の安定化を可能にするために、細細な一次乳濁液をシリンジ／マイクロピペットを使用して２０ｍｌの蒸留水の水相に滴加し、２５０〜４００ｒｐｍで２５℃〜３０℃にて１０〜１２時間磁気攪拌した。水相はさらに糖添加物を含む。得られたナノ粒子懸濁液を、開放された覆われていない状態で一晩撹拌して、残留有機溶媒を蒸発させた。ボルテゾミブでカプセル化されたポリマーナノ粒子は、１０，０００ｇで１０分間の遠心分離によって、または３０００ｇで１５分間限外濾過することによって収集した。（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ，Ｕｌｔｒａｃｅｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｗｉｔｈ １００，０００ ＮＭＷＬ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）．ナノ粒子を蒸留水に再懸濁し、３回洗浄し、凍結乾燥した。これらは、後で使用するまで２℃〜８℃で保管した。ポリマーナノ粒子は非常に安定していた。異なる重量のコポリマーを使用して調製されたポリマーナノ粒子のローディング効率の比較。

実施例３．多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ−８２２６およびＯＰＯＭ−２の細胞増殖／生存率に対するボルテゾミブ含有ナノ粒子の効果
多発性骨髄腫の細胞生存率に対するボルテゾミブ含有ナノ粒子の効果を、アラマーブルー試薬を使用して評価した。それらの増殖速度に基づいて、１５００〜４０００細胞／ウェルのＲＰＭＩ−８２２６とＯＰＯＭ−２を９６ウェルプレートにプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で一晩増殖させた。細胞を異なる濃度のボルテゾミブ含有ナノ粒子で５日間、８種類の濃度の３倍連続希釈で処理した。

次にアラマーブルー試薬（培地で１：１０希釈）をウェルに加え、２〜４時間インキュベートした。吸収の変化は、５７０ｎＭの励起と６００ｎＭの発光で測定した。生存率は、未処理の対照を１００％として比較して計算した。用量反応曲線は、２つの異なるソフトウェア（左と右）を使用してプロットした。

結果を図１（ＲＰＭＩ−８２２６）および図２（ＯＰＯＭ−２）に示す。両方のグラフに示されているのは、ナノ粒子濃度（ｘ軸）の関数としての生存率（ｙ軸）である。

ＲＰＭＩ−８２２６細胞株については、ＩＣ５０は４．９２ｎＭおよび５．６ｎＭであった（図１）。ＯＰＯＭ−２細胞株については、ＩＣ５０は６．１２ｎＭおよび７．２３ｎＭであった（図２）。値は２つの細胞株で同等であった。

実施例４マウスに移植されたＲＰＭＩ−８２２６細胞に対するボルテゾミブ含有ナノ粒子の抗腫瘍活性の評価
ボルテゾミブ含有ナノ粒子がマウスに移植されたＲＰＭＩ−８２２腫瘍細胞の増殖を阻害する能力を調べた。

４〜６週齢のＢａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの左脇腹に５×１０^６ＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫細胞を皮下注射した。確立されたＲＰＭＩ−８２２６腫瘍（９０〜１２０ｍｍ^３）を有するマウスをランダムに各６匹のマウスのグループに分け、（ｉ）ビヒクル対照で毎日、または（ｉｉ）１ｍｇ／ｋｇのＶＥＬナノ粒子を１週間に１回で３週間、腹腔内投与した。。腫瘍はキャリパーで隔日で測定され、腫瘍体積は式（Ａ×Ｂ^２）／０．５を使用して計算され、ここで、ＡおよびＢはそれぞれ最長と最短の腫瘍径である。腫瘍体積の統計分析は、一元ＡＮＯＶＡおよびＯｒｉｇｉｎ ８．０（Ｏｒｉｇｉｎ Ｌａｂ）を使用するダネット検定によって行った。

結果を図３に示す。時間（ｘ軸）に対する腫瘍体積（ｙ軸）を示す。ビヒクル対照で処理されたマウスの腫瘍体積は５０００ｍｍ^３に達した。対照的に、ボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理したマウスの腫瘍体積は、１０００ｍｍ^３を超えなかった。

実施例５．ボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理したＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫（ＭＭ）異種移植片マウスにおける体重の評価
上記の実施例２で議論したボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理したＲＰＭＩ−８２２６ＭＭ異種移植マウスと対照マウスの体重を２１日間調べ、ビヒクルで処理したマウスの同じ時間にわたる体重と比較した。

結果を図４に示す。試験期間中、両方のグループで体重は安定していたか、またはわずかに増加した。これらの結果は、ボルテゾミブ含有ナノ粒子が体重に悪影響を及ぼさないことを実証する。

実施例６．さまざまな用量のボルテゾミブおよびボルテゾミブ含有ナノ粒子の野生型マウスにおける比較毒性
ボルテゾミブの毒性を緩和する際のナノ粒子の効果を野生型マウスで調べた。異なる用量のボルテゾミブ単独（１．５、３、６、９、および１２ｍｇ／ｋｇ）またはボルテゾミブナノ粒子（ＮＰ）（０．９、１．８、３．６、５．４、および７．２ｍｇ／ｋｇ）をＣＤ１野生型に注射した。ボルテゾミブ単独のグループおよびボルテゾミブＮＰグループの各々で３匹のマウスを使用し、体重、摂餌量、および水分摂取量を毎日、２２日間測定した。

結果を図５〜図９に示す。結果は、ボルテゾミブ単独およびボルテゾミブ−ＮＰで処理されたマウスの体重変化または致死率を示す。試験されたボルテゾミブの最低用量では、ボルテゾミブ単独で処理されたマウスと比較して、ボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理されたマウスの試験終了時の体重は有意により高かった（図５、１．５ｍｇ／ｋｇ用量のボルテゾミブおよび０．９ｍｇ／ｋｇ用量のボルテゾミブ−ＮＰ）。

試験された次の２つの高用量で、ボルテゾミブ単独で処理されたマウスで試験された致死率が観察され、ボルテゾミブ単独で処理したマウスは、５日（図６、３ｍｇ／ｋｇ用量）または２日（（図７、６ｍｇ／ｋｇ用量）より長く生存しなかった。対照的に、１．８および３．６ｍｇ／ｋｇ濃度のボルテゾミブ含有ナノ粒子で処理されたマウスは、試験期間中、体重は基本的に変化せずに生存した。

試験したボルテゾミブの最高濃度で両方のグループに致死性が観察された（図８、９ｍｇ／ｋｇ）。しかし、ボルテゾミブ含有ナノ粒子グループのマウスは、試験の１０日目まで５．４ｍｇ／ｋｇの用量で生存したが、ナノ粒子の非存在下でボルテゾミブで処理したグループのメンバーはすべて１日目で死亡した。

これらの結果は、ナノ粒子がマウスにおけるボルテゾミブの用量の増加による毒性効果を軽減することを示す。

実施例７．ボルテゾミブ含有ナノ粒子の特性評価
図１０Ａおよび図１０Ｂは、上記の実施例で使用されるボルテゾミブ含有ナノ粒子のサイズおよび形状を提供する透過型電子顕微鏡写真を提供する。図１０Ｂの２つのＮＰにおいて赤い線で示される直径は１３０ｎｍである。図１１は、インビトロ無細胞緩衝系におけるナノ粒子からのボルテゾミブの１０日間にわたる緩慢で持続的な放出を示すグラフである。

図１２は、ボルテゾミブナノ粒子がＭＣＦ−７ホルモン依存性乳癌細胞株の増殖を低下させることを示す予備的な初期データを提供する。ＭＣＦ−７乳癌細胞を、さまざまな濃度のボルテゾミブ（下部の青い曲線）またはボルテゾミブ−ＮＰ（上部の赤い曲線）で４８時間処理した。細胞増殖は、トリパンブルー色素排除により測定した。ボルテゾミブ−ＮＰのＩＣ５０は２０ｎＭ未満である。

実施例８．異なる投与の経路によるＶＥＬ−ＮＰのインビボ有効性の比較
ＶＥＬ−ＮＰが異なる投与の経路で有効であるかどうかを調査するために、確立された皮下ＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫腫瘍を有するｎｕ／ｎｕマウスでインビボ試験を実施した。７日間にわたるＮＰからのボルテゾミブ放出の動態に基づき、ＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫腫瘍を有するマウス、腹腔内（ｉ．ｐ．）１週間に１回、１ｍｇ／ｋｇを３週間。

結果は図１３に示されており、図１３は、ＳＣ（菱形記号）、ＩＰ（三角形記号）またはＩＶ（正方形記号）を投与したｎｕ／ｎｕマウスの皮下異種移植片として増殖したＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫細胞の経時的な腫瘍体積（ｍｍ^３）を示すグラフである。ボルテゾミブを欠くＮＰ（「空のＮＰ」）を投与された対照マウスは、円形の記号で示す。ボルテゾミブを含まないナノ粒子（空のＮＰ）で処理したマウスと比較して、１ｍｇ／ｋｇのＶＥＬ−ＮＰでの処理は、腫瘍の実質的な退縮と関連していた（図１３）。興味深いことに、静脈内（ＩＶ）、皮下（Ｓｕｂ−Ｃｕ）、または腹腔内（ＩＰ）のいずれかで、１ｍｇ／ｋｇのＶＥＬ−ＮＰを用いるマウスの処理は、腫瘍の同様の退縮と関連していた（図１３）。

生存の分析はさらに、３つの投与経路すべてでＶＥＬ−ＮＰを投与したマウスが、空のＮＰを投与したマウスよりも有意に長く生存したことを実証した。重要なことに、ＶＥＬ−ＮＰで処理したマウスでは体重減少や他の明白な毒性は観察されなかった（データ示さず）。広範囲の組織壊死をＶＥＬ−ＮＰ処理群で観察した。

Claims (33)

1. ａ）ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）−ポリ（プロピレングリコール）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ）テトラブロックコポリマーを含むポリマーナノ粒子と、
   ｂ）ボルテゾミブと、を含む組成物。
2. 前記ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧテトラブロックコポリマーが、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧトリブロックコポリマーとＰＬＡとの化学的結合から形成される、請求項１に記載の組成物。
3. ＰＬＡの分子量が約１０，０００〜約１００，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
4. ＰＬＡの分子量が約２０，０００〜９０，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
5. ＰＬＡの分子量が約３０，０００〜８０，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
6. ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧの分子量が約８，０００ダルトン〜１８，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
7. ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧの分子量が約１０，０００ダルトン〜１５，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
8. 前記コポリマー中のＰＬＡの分子量が１７，０００ダルトン〜７２，０００ダルトンであり、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧの分子量が１２，５００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
9. 第２の治療剤または標的化抗癌剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
10. 前記第２の治療剤が、クリゾチニブ、レナリドマイド、グリベック、ハーセプチン、アバスチン、ＰＤ−１チェックポイント阻害剤、ＰＤＬ−１チェックポイント阻害剤、およびＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤からなる群より選択される、請求項９に記載の組成物。
11. 請求項１に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
12. 前記ポリマーナノ粒子が、前記ポリマーナノ粒子の外側に付着した標的化部分をさらに含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 癌の症状を示す細胞を治療する方法であって、前記細胞を治療有効量の請求項１に記載の化合物と接触させることを含む、方法。
14. 前記細胞が、対象由来の細胞または培養細胞のうちの１つ以上である、請求項１３に記載の方法。
15. 前記対象由来の細胞が、骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛包、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来の腫瘍細胞、正常もしくは癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、または星状細胞のうちの１つ以上である、請求項１４に記載の方法。
16. 血液悪性腫瘍またはそれに関連する障害の危険性があるかまたはそれを有する対象を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の請求項１に記載の化合物および薬学的に有効な担体を投与することを含む、方法。
17. 前記血液悪性腫瘍または障害が多発性骨髄腫（ＭＭ）またはリンパ腫である、請求項１６に記載の方法。
18. 前記血液悪性腫瘍が骨髄異形成症候群、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病またはＢ細胞リンパ腫である、請求項１６に記載の方法。
19. 前記対象が、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型骨髄腫、無症候性ＭＭ、または症候性ＭＭのリスクがある、請求項１７に記載の方法。
20. 前記症候性ＭＭが新たに診断されたＭＭである、請求項１９に記載の方法。
21. 前記症候性ＭＭが後期再発／難治性ＭＭである、請求項１９に記載の方法。
22. 追加の抗癌療法を前記対象に施すことをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
23. 前記追加の抗癌療法が、外科手術、化学療法、放射線、ホルモン療法、免疫療法、またはそれらの組み合わせである、請求項２２に記載の方法。
24. 前記追加の抗癌療法が骨吸収を減少させる、請求項２２に記載の方法。
25. 前記追加の抗癌療法が破骨細胞媒介骨吸収を減少させる、請求項２２に記載の方法。
26. 前記追加の抗癌療法がビスホスホネートである、請求項２４に記載の方法。
27. 前記対象がヒトである、請求項１７に記載の方法。
28. 投与が、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する、請求項１７に記載の方法。
29. 前記組成物の投与が前記対象の体重減少を誘発しない、請求項１７に記載の方法。
30. 多発性骨髄腫の対象における多発性骨髄腫細胞の増殖、生存、遊走、またはコロニー形成能を低下させる方法であって、治療有効量の請求項１に記載の化合物および薬学的に有効な担体を前記対象に投与することを含む、方法。
31. 投与が、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する、請求項３０に記載の方法。
32. 対象における骨髄腫の転移を阻害する方法であって、骨髄腫を有する対象に、治療有効量の請求項１に記載の組成物および薬学的に有効な担体を投与することを含む、方法。
33. 投与が、皮下、静脈内、および腹腔内送達からなる群から選択される経路を介する、請求項３２に記載の方法。