JP2021503010A

JP2021503010A - 欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療のためのカルバメート化合物の使用

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Publication number: JP2021503010A
Application number: JP2020544727A
Authority: JP
Inventors: シン・ヘウォン
Original assignee: エスケーバイオファーマスティカルズカンパニーリミテッド
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Filing date: 2018-11-13
Publication date: 2021-02-04
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Abstract

本発明は、式（１）のカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療で使用するための使用に関する。

Description

本発明は、下記式（１）

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ａ_１及びＲ_２は、本明細書で定義された通りである）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を欠神発作（absence seizure）又は欠神発作を示すてんかん（epilepsy）の予防、軽減又は治療のために使用することに関する。

神経細胞の全体としての一時的及び不規則的な異常な興奮によって引き起こされる全ての症状は、発作（seizure）と呼ばれている。てんかんは、例えば、電解質の不均衡、酸塩基異常、尿毒症、アルコール離脱症、激しい睡眠不足などの発作を惹き起こす可能性のある身体の異常がなくても慢性発作が発生する一連の疾患をいう。２以上の発作場合、持続的な薬物治療が必要であることが知られている。

てんかん発作は、臨床症状と脳波記録（electroencephalography、ＥＥＧ）の所見に基づいて分類される。この分類によれば、てんかん発作は大きく部分発作と全身発作に分けられる。部分発作は、大脳皮質の一部分で始まる神経細胞の過興奮性発作を意味し、全身発作は、両方の大脳半球の広い範囲で始まる発作を意味する。全身発作の種類には、全身性強直間代発作、欠神発作（小発作）、ミオクローヌス発作及び無緊張発作などがあり、部分発作の種類には、単純な部分発作、複雑な部分発作、部分発作に起因する二次性全身発作がある（出典：韓国てんかん学会）。

これらのうち、欠神発作（小発作）は、行動を突然中止し、約５〜１０秒間にわたってぼにやりと見詰めるか、又は頭部を前屈させる症状を特徴としている。時折、目を、または口の周りを僅かに揺らすことが観察されることがある。これらの症状は、息を強く吸うときに発生する特徴がある（出典：韓国てんかん学会）。欠神発作の最も特徴的な２つの特徴は、意識障害の臨床症状と、棘・徐波発射（spike-and-wave discharges、ＳＷＤ）を示す脳波（ＥＥＧ）とである。欠神発作の症状を伴うてんかんの種類には、小児欠神てんかん（child absence epilepsy）、ミオクロニー欠神てんかん（epilepsy with myoclonic absence）、若年性欠神てんかん（juvenile absence epilepsy）、若年性ミオクローヌスてんかん（juvenile myoclonic epilepsy）等がある。

欠神発作は、定型欠神（typical absence）と非定型欠神（atypical absence）に分けることができる。定型欠神は、発作が通常２〜１０秒以内に終わり、３０秒以上続くことはほとんどない。従って、患者自身が、いわんや他人が、患者にて発作が起きたかどうかを分からない場合がある。発作後、患者は発作があったことに気付かずに、発作の直前に行っていた行動又は状況に戻る。非定型欠神は、意識の喪失、大きく開いた目で見つめる、まぶたの瞬き、唇をなめる、噛む行動、又は指に触れる症状が含まれる。これらの症状の頻度は、思春期の前後に減少することもあるが、ほとんどは大発作を惹き起こす傾向にある。

欠神発作の治療の種類には制限がある。バルプロ酸又はエトスクシミドが主に使用され、ラモトリジンも使用できるが、効果が低いことが知られている（非特許文献１）。しかし、カルバマゼピン（carbamazepine）、ビガバトリン（vigabatrin）、チアガビン（tiagabine）、オクスカルバゼピン（oxcarbazepine）、フェニトイン（phenytoin）、フェノバルビタール（phenobarbital）、ガバペンチン（gabapentin）、プレガバリン（pregabalin）等の抗てんかん薬は、欠神発作をかえって悪化させる可能性があるため、欠神発作の患者に使用が禁止されている（非特許文献２、３）。
カルボキサミドジベンザゼピン系薬物は、部分発作の治療に使用されるが、全身発作、特に欠神発作を悪化させることが知られている。

Glauserら（2010）「Ethosuximide, Valproic Acid, and Lamotrigine in Childhood Absence Epilepsy」, New England Journal of Medicine, 362 (9): 790-9 「NICE Guidelines」Retrieved November 3, 2014 Knakeら、（August 8, 1999）「Tiagabine-induced absence status in idiopathic generalized epilepsy」 European Journal of Epilepsy 8 (5): 314-317

本発明は、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを予防、軽減又は治療するための方法を提供することを目的とする。

また、本発明は、下記式（１）

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ａ_１及びＲ_２は、本明細書で定義された通りである）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物の、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療での使用を提供することを目的とする。

本発明は、治療有効量の下記式（１）

（式中、Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_８アルキル、ハロＣ_１−Ｃ_８アルキル、Ｃ_１−Ｃ_８チオアルコキシ及びＣ_１−Ｃ_８アルコキシからなる群から選ばれ、Ａ_１及びＡ_２の一方はＣＨであり、他方はＮである。）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を含む、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療のための医薬を提供する。

また、本発明は、治療有効量の前記式（１）のカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を含み、さらに薬学的に許容される担体を１種以上含む、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療のための医薬組成物を提供する。

さらに、本発明は、前記式（１）のカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を治療有効量で治療対象に投与することを含み、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを予防、軽減又は治療する方法を提供する。
また、本発明は、前記式（１）のカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物の、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを予防、軽減又は治療するための使用を提供する。

本発明の一実施形態によれば、前記式（１）において、Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン及びＣ１−Ｃ_８アルキルからなる群から選ばれる。
一実施形態において、ハロＣ_１−Ｃ_８アルキルは、ペルフルオロアルキルである。

本発明の別の実施形態によれば、前記式（１）のカルバメート化合物は、下記式（２）

で示されるカルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルである。

化合物を合成する分野における当業者であれば、前記式（１）及び（２）のカルバメート化合物を、既知の化合物又は該化合物より容易に製造できる化合物を使用して簡単に製造することができる。特に、前記式（１）化合物の製造方法は、国際公開特許ＷＯ２００６／１１２６８５Ａ１、ＷＯ２０１０／１５０９４６Ａ１及びＷＯ２０１１／０４６３８０Ａ２に詳細に記載されており、それらの内容は出典明示により本明細書に組み込まれる。前記式（１）化合物は、前記文献に記載されているいずれかの方法に従って化学的に合成することができるが、これらの方法は一例であり、必要に応じて単位操作の順序などを選択的に変換してもよい。従って、前記方法は本発明の範囲を制限することを意図しない。

前記式（１）のカルバメート化合物は、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療に用いることができる。

本発明の一実施形態によれば、前記欠神発作は、定型欠神と非定型欠神に大きく分けられる。定型欠神の場合、発作が通常２〜１０秒以内に終わり、３０秒以上続くことはほとんどない。従って、患者自身が、いわんや他人が、患者にて発作が起きたかどうかを分からない場合がある。発作後、患者は発作があったことに気付かずに、発作の直前に行っていた行動又は状況に戻る。非定型欠神は、意識の喪失、大きく開いた目で見つめる、まぶたの瞬き、唇をなめる、噛む行動、又は指に触れれる症状が含まれる。これらの症状の頻度は思春期の前後に減少する可能性があるが、ほとんどは大発作を惹き起こす傾向にある。

本発明の一実施形態によれば、欠神発作を示すてんかんは、小児欠神てんかん、ミオクロニー欠神てんかん、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん、ジーボンス症候群（欠神を伴う眼瞼ミオクロニー；eyelid myoclonia with absences）、ファントム欠神を伴う遺伝性全般てんかん（genetic generalized epilepsy with phantom absences）、及びレノックス・ガストー症候群（Lennox-Gastaut syndrome）から選ばれる一つ以上であってもよい。

本発明の一実施形態によれば、欠神発作は、定型欠神又は非定型欠神であってもよい。欠神発作には、ＥＥＧの特徴として棘・徐波発射（ＳＷＤ）を伴う全ての発作が含まれる。
前記式（１）のカルバメート化合物は、棘・徐波発射（ＳＷＤ）を抑制するそれらの能力により欠神発作又は欠神発作を示すてんかんに適用することができる。

前記式（１）のカルバメート化合物の、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんに対する効能は、既知のモデルを使用して確認することができる。例えば、ＧＡＥＲＳ（ストラスブールから由来の遺伝的欠神てんかんのラット（Genetic absence epilepsy rat from Strasbourg））モデルは、遺伝的な特徴により、自発的な棘・徐波発射（ＳＷＤ）を示し、欠神発作の行動を示すラットの一種であり、欠神発作の治療剤の効能を検証する手段として使用されている（Depaulis et al., The genetic absence epilepsy rat from Strasbourg as a model to decipher the neuronal and network mechanisms of generalized idiopathic epilepsies. J Neurosci Methods, 2016 Feb 15;260:159-74）。

この疾患モデルラットでは、ＳＷＤは大脳皮質の脳波記録（ＥＥＧ）を通じて特徴的に観察され、１回に付き約１７〜２５秒間持続し、１時間当り約４５〜６０回発生している。このＳＷＤは欠神発作の行動学的特徴である活動の一時停止とも関連付けられる。ＧＡＥＲＳモデルラットでのＳＷＤも、ヒト患者と同様にバルプロエート（valproate）、エトスクシミド（ethosuximide）等によって抑制されることが知られており、多数の薬物は抑制効果を示さないか、一部の薬物はＳＷＤをむしろ悪化させることが知られている（Dedeurwaerdere et al., Fluctuating and constant valproate administration gives equivalent seizure control in rats with genetic and acquired epilepsy. Seizure. 2011 Jan;20(1):72-9; Nehlig et al., Cerebral energy metabolism in rats with genetic absence epilepsy is not correlated with the pharmacological increase or suppression of spike-wave discharges. Brain Res. 1993 Jul 30;618(1):1-8; Wallengren et al., Aggravation of absence seizures by carbamazepine in a genetic rat model does not induce neuronal c-Fos activation. Clin Neuropharmacol. 2005 Mar-Apr;28(2):60-5; Gurbanova et al., Effect of systemic and intracortical administration of phenytoin in two genetic models of absence epilepsy. Br J Pharmacol. 2006 Aug;148(8):1076-82; Vartanian et al., Activity profile of pregabalin in rodent models of epilepsy and ataxia. Epilepsy Res. 2006 Mar;68(3):189-205）。

従って、この疾患モデルは、欠神発作に対する効果を予測する上で有用なモデルであると考えられる（Klitgaard et al., Use of epileptic animals for adverse effect testing. Epilepsy Res. 2002 Jun;50(1-2):55-65; van Luijtelaar EL, Drinkenburg WH, van Rijn CM, Coenen AM. Rat models of genetic absence epilepsy: what do EEG spike-wave discharges tell us about drug effects? Methods Find Exp Clin Pharmacol. 2002;24 Suppl D:65-70）。

前記疾患の予防、軽減又は治療のための式（１）のカルバメート化合物の投与量は、典型的には、疾患の重症度、治療対象の体重及び代謝状態に応じて変化し得る。個々の患者の「治療有効量」は、前記薬理学的効果、即ち、上記されるような治療効果を達成するのに十分な活性化合物の量を意味する。式（１）化合物の治療有効量は、遊離形態で、ヒトに１日一回投与することに基づいて、５０〜５００ｍｇ、５０〜４００ｍｇ、５０〜３００ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、５０〜２００ｍｇ、又は１００〜２００ｍｇである。

本発明の化合物は、経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下又は直腸投与などの治療剤の投与に使用される通常の方法で投与することができる。
本発明の一実施形態による医薬又は医薬組成物は、本発明のカルバメート化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれる化合物の治療有効量を含むことができる。

前記式（１）のカルバメート化合物の薬学的に許容される塩には、例えば、独立して、アセテート、ベンゼンスルホネート、ベンゾエート、ビタルトラート、酢酸カルシウム、カンシラート、カーボネート、シトラート、エデタート、エジシラート、エストレート、エシレート、フマレート、グルセプテート、グルコネート、グルタメート、グリコロイルアルサニレート、ヘキシルレゾルシネート、ヒドラバミン、ヒドロブロミド、ヒドロクロリド、ヒドロゲンカーボネート、ヒドロキシナフトアート、ヨージド、イセチオナート、ラクテート、ラクトビオナート、マレート、マレエート、マンデラート、メシレート、メチルニトラート、メチルスルフェート、ムカート、ナプシラート、ニトラート、パモアート（エンボナート）、パントテナート、ホスフェート／ジホスフェート、ポリガラクツロナート、サリチラート、ステアレート、サブアセテート、スクシナート又はヘミ−スクシナート、スルフェート又はヘミ−スルフェート、タンネート、タルトラート、オキサレート又はヘミ−タルトラート、テオクレート、トリエチオジド、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、プロカイン、アルミニウム、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛などが含まれる。

本発明の一実施形態による医薬又は医薬組成物は、経口又は非経口的に投与することができる。非経口投与には、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射、内皮投与、局所投与、鼻腔内投与、膣内投与、肺内投与及び直腸内投与などで投与することができる。経口投与の場合、本発明の一実施形態による医薬組成物は、素錠（非被覆錠剤）として、又は活性剤が被覆されているか、又は胃での分解から保護されるように製剤化することができる。また、前記組成物は、活性物質が標的細胞に移動できる任意のディバイスによって投与することができる。投与経路は、治療対象の一般的な条件及び年齢、治療条件の性質及び選ばれる有効成分に応じて変わる。

本発明の一実施形態による医薬又は医薬組成物の適した投与量は、製剤方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食餌、投与時間、投与経路、排せつ速度及び反応感受性などの要因によって変わり、通常の熟練技能を有した医師は、所望の治療又は予防に有効な投与量を容易に決定及び処方することができる。一実施形態による前記医薬組成物は、１回以上の投与量で、例えば、一日当たり１回〜４回投与することができる。一実施形態による前記医薬組成物は、式（１）の化合物を、遊離形に基づいて、５０〜５００ｍｇ、５０〜４００ｍｇ、５０〜３００ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、５０〜２００ｍｇ、又は１００〜２００ｍｇ含むことができる。

本発明の一実施形態による医薬又は医薬組成物は、当業者が容易に実施できる方法に従って、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を使用して製剤化することで、単位用量形態で製造されるか、又は多用量容器内に含ませて製造することができる。前記製剤は、油性または水性媒体中の溶液、懸濁液又は乳化液形態、抽出物剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤形態であってもよく、分散剤又は安定化剤を追加的に含むことができる。また、前記医薬組成物は、座薬、スプレー、軟膏、クリーム、ゲル、吸入剤又は皮膚パッチの形態で投与することができる。また、前記医薬組成物は、哺乳類投与のために、さらに好ましくはヒト投与のために製造することができる。

薬学的に許容される担体は、固体や液体であってもよく、賦形剤、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、分散剤、吸着剤、界面活性剤、結合剤、防腐剤、崩壊剤、甘味剤、香味剤、滑沢剤、放出調節剤、湿潤剤、安定化剤、懸濁化剤及び潤滑剤から選ばれる１種以上であってもよい。さらに、薬学的に許容される担体は、生理食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食生理塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール及びこれらの混合液から選ぶことができる。

一実施形態において、適切な賦形剤（filler）としては、糖（例えば、デキストロース、スクロース、マルトース及びラクトース）、デンプン（例えば、トウモロコシデンプン）、糖アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、エリトリトール及びキシリトール）、デンプン加水分解物（例えば、デキストリン及びマルトデキストリン）、セルロールロス又はセルロース誘導体（例えば、微晶質セルロース）又はこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。

一実施形態において、適切な結合剤には、ポビドン、コポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ゼラチン、ガム類、スクロース、デンプン又はこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態には、適切な防腐剤には、安息香酸、ナトリウムベンゾエート、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、クロルブトール、ガレート、ヒドロキシベンゾエート、ＥＤＴＡ又はこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。

一実施形態において、適切な崩壊剤には、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン、架橋カルボキシメチルセルロース、デンプン、微晶質セルロース又はこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、適切な甘味剤には、スクラロース、サッカリン、ナトリウム又はカリウム又はカルシウムサッカリン、アセスルファムカリウム又はナトリウムシクラメート、マンニトール、フルクトース、スクロース、マルトース又はこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。

一実施形態には、適切な滑沢剤には、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、タルクなどが含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、適切な潤滑剤には、長鎖脂肪酸及びその塩、例えば、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸、タルク、グリセリドワックス又はこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書に使用された用語「予防する」、「予防すること」及び「予防」は、疾患にかかる可能性を減少又は排除することをいう。
本明細書に使用された用語「軽減する」、「軽減すること」及び「軽減」は、疾患及び／又はこれに付随する症状を全部又は一部緩和することをいう。
本明細書に使用された用語「治療する」、「治療すること」及び「治療」は、疾患及び／又はこれに付随する症状を全部又は一部除去することをいう。

本明細書に使用された用語「対象」は、治療、観察又は実験の態様である動物、好ましくは、哺乳類（例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなど）、最も好ましくはヒトを意味する。
本明細書に使用された用語「治療有効量」は、治療される疾患又は障害の症状を軽減させることを含む、系、動物又はヒトにおける生物学的又は医学的反応を誘導する活性化合物又は医薬製剤の量を意味する。ここで、前記量は、研究者、獣医、医師（内科医）又は他の臨床医によって求められる。

本明細書に使用された用語「組成物」は、特定の量の特定成分を含む製品、及び特定量の特定成分の組み合わせから直接又は間接的に生成される任意の製品を含む。

本発明による医薬及び医薬組成物は、欠神発作及び欠神発作を示すてんかんを効率的に治療及び予防することができる。

実施例で使用されたＧＡＥＲＳモデルのベースライン条件で観察された脳波記録（ＥＥＧ）測定の結果を示す図であり、自発的なＳＷＤが発生していることが分かる。

ＧＡＥＲＳモデルで脳波記録（ＥＥＧ）分析を介して生成されたＳＷＤの発生回数に対する陽性対照群として使用されたバルプロエートの影響を分析した結果を示す図であり、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇの２つの用量での有効性が分析された。薬物投与直前の２０分間のベースライン期間のＳＷＤ発生回数と薬物投与後１０分から９０分までの合計８０分におけるＳＷＤ発生回数を示した。

ＧＡＥＲＳモデルで生成されたＳＷＤの発生回数に対する試験化合物の影響をＥＥＧ分析を介して分析した結果を示す図であり、５、１０、２０、３０ｍｇ／ｋｇの４つの用量における有効性が分析された。試験化合物投与直前の２０分間のベースライン期間のＳＷＤ発生回数と試験化合物投与後の１０分から９０分までの合計８０分間におけるＳＷＤ発生回数を示した。

薬物又は試験化合物投与後の１０分から７０分までの合計６０分間のＳＷＤの発生回数を示す図であり、ビヒクル投与群、試験化合物投与群、バルプロエート投与群間の効果の差を確認することができる。

ＧＡＥＲＳモデルで生成されたＳＷＤの累積持続時間に対する、陽性対照として使用されたバルプロエートの影響を経時的にＥＥＧ解析を介して分析した結果を示す図であり、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇの２つの用量における有効性が分析された。薬物投与直前の２０分間のベースライン期間におけるＳＷＤ累積持続時間、及び薬物投与後１０分から９０分までの２０分の単位区間におけるＳＷＤ累積持続時間が表示された。

ＧＡＥＲＳモデルで生成れたＳＷＤの累積持続時間に対する試験化合物の影響を経時的にＥＥＧ解析を介して分析した結果を示す図であり、５、１０、２０、および３０ｍｇ／ｋｇの４つ用量での有効性が分析された。試験化合物を投与する直前２０分間のベースライン期間におけるＳＷＤ累積持続期間と試験化合物を投与した後１０分から９０分までの２０分単位区間でのＳＷＤ累積持続時間を示した。

薬物又は試験化合物を投与した後１０分から７０分までの合計６０分の２０分単位区間でのＳＷＤの累積持続時間を示す図であり、ビヒクル投与群、試験化合物投与群、バルプロエート投与群間の効果の差を確認することができる。

以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。しかし、以下の実施例は、一つ以上の実施形態を例示することのみを意図しており、本発明の範囲を限定することを意図していない。

製造例：カルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルの製造
カルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステル（試験化合物）を、国際公開番号ＷＯ２０１０/１５０９４６号の製造例５０に記載された方法に従って製造した。

実施例：ＧＡＥＲＳ（ストラスブールから由来の遺伝的欠神てんかんラット）モデルを使用した欠神発作の予防及び治療の効能試験
ＧＡＥＲＳモデルは、遺伝的影響により自発的なＳＷＤを示すラットの１種である。ＧＡＥＲＳモデルは、欠神発作の典型的な行動的、電気生理学的、薬理学的特徴を備えており、かくして、約２０年間、欠神発作の疾患モデルとして使用されてきた（Depaulis et al., The genetic absence epilepsy rat from Strasbourg as a model to decipher the neuronal and network mechanisms of generalized idiopathic epilepsies. J Neurosci Methods. 2016 Feb 15;260:159-74）。

実験動物
５週齢ＧＡＥＲＳモデルのラット１２匹をフランス、Grenoble Institue of Neurosciencesから入手した。入手後、餌と水への自由なアクセス及び制御された光（午前８時から午後８時まで点灯）の条件下にて２１±２℃の温度でラットを飼育し、手術前２カ月間がこの状態を維持した。

ＥＥＧ測定のための電極移植
３カ月齢のＧＡＥＲＳラット１２匹にＥＥＧ電極を移植した。定位固定移植は、イソフルラン（酸素中濃度２％）麻酔下で行った。ラットを定位固定フレームに固定し、体温を観察しながら手術を行った。角膜の乾燥を防ぐために、眼科用ゲルを使用した。切開部位の毛を切った後、ポビドンで消毒し、切開後、開いた頭蓋骨の両方の半球の前頭骨（frontal）皮質と頭頂（parietal）皮質の位置にドリルを利用して４個の穴を開けた。単極電極をこれらの穴に配置し、ＥＥＧ記録のために頭蓋骨に固定された雌型コネクタに接続した。次に切開部位を縫合した。手術後、ブプレノルフィンを０．１ｍｇ／ｋｇの用量で皮下注射し、麻酔剤を除去し、意識回復するまで観察した。その後、回復のためにラットを１週間にわたってケージに入れた。

薬効試験のための動物の選別
電極移植の１週間後、１２匹の動物全てに対して１時間の予備ＥＥＧ測定を行い、ＳＷＤの発生を検出するのに適した十分なＳ／Ｎ比を示す１０匹を選別した。

薬物投与
試験化合物及び陽性対照薬物は投与直前に調製した。前記製造例で製造したカルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルを、３０％（容量／容量）ＰＥＧ３００（８１１６４−１４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）、及び陽性対照であるバルプロエート（Ｐ４５４３、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を０．９％滅菌生理食塩水（Ｃｏｏｐｅｒ社、フランス）に溶かした。両薬剤を５ｍＬ／ｋｇ用量で腹腔内投与した。陰性対照としてのビヒクル投与には３０％ＰＥＧ３００を使用した。

試験は、クロスオーバー（cross−over）法で行われ、薬物の洗浄のために各投与間に最低７１時間の区間を空いていた。第１期試験では、以下の条件を実施した。
−ビヒクル（３０％ＰＥＧ３００）
−バルプロエート２００ｍｇ／ｋｇ
−試験化合物５ｍｇ／ｋｇ
−試験化合物１０ｍｇ／ｋｇ
−試験化合物２０ｍｇ／ｋｇ
第２期試験では、以下の条件を実施た。
−バルプロエート１５０ｍｇ／ｋｇ
−試験化合物３０ｍｇ／ｋｇ

ＥＥＧ記録
ＥＥＧ記録では、１０匹のＧＡＥＲＳラットを記録チャンバーに入れ、ワイヤに接続してＥＥＧを記録した。１時間の馴化工程の後、自由に動く動物のＥＥＧ記録を行った。ベースライン相として、System Plus Evolution（Micromed）を使用して、薬物投与の２０分前に記録を行い、薬物を投与した後に、９０分間の記録を行った。記録中、動物は静かな覚醒状態に保持された。

ＥＥＧデータ分析
記録されたＥＥＧデータを利用して得られたＳＷＤを分析し、全てのデータ分析は盲検法によって行われた。ＳＷＤは、２０分のベースライン相、及び薬物投与後１０分から９０分までの合計８０分間の期間について分析された。８０分を２０分区間で分割して分析し、ＳＷＤの発生回数と蓄積されたＳＷＤ持続時間（ＳＷＤ累積持続時間）を分析した。

統計的分析
結果は平均値±標準誤差として表され、統計分析にはプリズム（グラフパッド）を利用した。ＳＷＤの発生回数とＳＷＤ累積持続時間を経時的に分析するのに、２元配置分散分析（２−ｗａｙＡＮＯＶＡ）を使用した。ボンフェローニ一対比較法を使用して、ベースライン期間との比較、ビヒクル投与の陰性対照群との比較、バルプロエート投与の陽性対照群との比較を行った。薬物投与後の１時間の総効果に対して、反復測定値には１元配置分散分析（１−ｗａｙＡＮＯＶＡ）を使用し、ビヒクル投与の陰性対照群との比較、バルプロエート投与の陽性対照群との比較には、ボンフェローニ一対比較法を使用した。統計的有意性の基準はｐ＜０．０５として定義された。

試験結果
ＥＥＧの記録に使用されたＧＡＥＲＳ１０匹のラットのうち１匹は、ベースラインで得られたＳＷＤの数が少なく、分析には不適切であり、その１匹のデータは最終分析から除外された。

１）ＳＷＤの発生回数に対する試験化合物の影響
２０分単位区間の測定値に対する２元配置分散分析した結果は以下の通りである。
・陰性対照としてのビヒクル投与群は、いかなる時点でもベースラインと比較して差を示さなかった。
・陽性対照としてのバルプロエート投与群は、バルプロエート投与によりＳＷＤ発生回数減少効果があった。１５０ｍｇ／ｋｇ投与群は、ビヒクル投与群と比較して、投与後１０〜３０分、３０〜５０分の区間でＳＷＤの発生回数の統計的に有意な減少を示した。さらに、２００ｍｇ／ｋｇ投与群では、投与後の全時間区間（１０分〜９０分間）で陰性対照と比較してＳＷＤ発生回数が大幅に減少した。
・１０、２０、および３０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物投与群は、ビヒクル投与群と比較して、ＳＷＤの発生回数の有意な減少を示した。１０ｍｇ／ｋｇ用量は投与後３０〜５０分区間で有意性を、２０ｍｇ／ｋｇ用量では３０〜９０分区間で有意性を、３０ｍｇ／ｋｇでは投与後全区間で有意性を示した。薬効持続時間に関して、試験化合物は、陽性対照としてバルプロエートよりも長い時間持続を示した。

薬物投与後１時間の総効果について、１元配置分散分析の結果は、２０、および３０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物投与群が、ビヒクル投与群と比較してＳＷＤ発生回数の有意な減少を示しており、バルプロエート投与群の１５０、および２００ｍｇ／ｋｇと同様の効果を示した。

２）ＳＷＤの累積持続時間に対する試験化合物の影響
２０分の単位区間ごとのＳＷＤ持続時間の累積値の２元配置分散分析の結果は以下の通りである。
・陰性対照としてのビヒクル投与群は、いかなる時点でもベースラインと比較して差を示さなかった。
・陽性対照群であるバルプロエート投与群は、バルプロエート投与によるＳＷＤ累積持続の減少効果を示した。１５０ｍｇ／ｋｇ投与群は、投与後、１０〜３０、３０〜５０、５０〜７０分区間で有意な減少を示し、２００ｍｇ／ｋｇ投与群は、投与後の全時間区間（１０分〜９０分間）で陰性対照と比較して有意な減少を示した。
・１０、２０、および３０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物投与群は、ビヒクル投与群と比較してＳＷＤの累積持続時間の有意な減少を示した。１０ｍｇ／ｋｇ用量は、投与後３０〜５０、５０〜７０分区間で有意な減少効果を、２０ｍｇ／ｋｇ用量は３０〜９０分区間で有意な減少効果を、３０ｍｇ／ｋｇは投与後全区間で有意な減少効果を示した。薬効持続時間に関して、試験化合物は、陽性対照としてバルプロエートよりも長い時間持続を示した。

薬物投与後１時間の総効果について、１元配置分散分析の結果は、２０、および３０ｍｇ／ｋｇ用量の試験化合物投与群が、ビヒクル投与群と比較してＳＷＤ累積持続時間を有意に減少させており、１５０、および２００ｍｇ／ｋｇ用量のバルプロエート投与群と同様の効果を示した。

Claims

治療有効量の下記式（１）

（式中、Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_８アルキル、ハロＣ_１−Ｃ_８アルキル、Ｃ_１−Ｃ_８チオアルコキシ及びＣ_１−Ｃ_８アルコキシからなる群から選ばれ、Ａ_１及びＡ_２の一方はＣＨであり、他方はＮである。）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を含む、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療のための医薬。
Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン及びＣ_１−Ｃ_８アルキルからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
式（１）のカルバメート化合物が、下記式（２）

で示されるカルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルであることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを患っている対象が、脳波記録（ＥＥＧ）において、棘・徐波発射（ＳＷＤ）を示すことを特徴とする請求項１に記載の医薬。
欠神発作を示すてんかんが、小児欠神てんかん、ミオクロニー欠神てんかん、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん、ジーボンス症候群（欠神を伴う眼瞼ミオクロニー）、ファントム欠神を伴う遺伝性全般てんかん、及びレノックス・ガストー症候群からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
欠神発作が、定型欠神発作であることを特徴とする医薬。
欠神発作が、非定型欠神発作であることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
哺乳動物投与用に製造されることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬。
式（１）のカルバメート化合物の治療有効量が、遊離形で１日１回の投与に基づいて、５０ｍｇ〜５００ｍｇであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬。
治療有効量の下記式（１）

（式中、Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_８アルキル、ハロＣ_１−Ｃ_８アルキル、Ｃ_１−Ｃ_８チオアルコキシ及びＣ_１−Ｃ_８アルコキシからなる群から選ばれ、Ａ_１及びＡ_２の一方はＣＨであり、他方はＮである。）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を含み、さらに薬学的に許容される担体を１種以上含む、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療のための医薬組成物。
Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン及びＣ_１−Ｃ_８アルキルからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
式（１）のカルバメート化合物が、下記式（２）

で示されるカルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルであることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを患っている対象が、脳波記録（ＥＥＧ）において、棘・徐波発射（ＳＷＤ）を示すことを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
欠神発作を示すてんかんが、小児欠神てんかん、ミオクロニー欠神てんかん、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん、ジーボンス症候群（欠神を伴う眼瞼ミオクロニー）、ファントム欠神を伴う遺伝性全般てんかん、及びレノックス・ガストー症候群からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
欠神発作が定型欠神発作であることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
欠神発作が非定型欠神発作であることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
哺乳動物投与用に製造されることを特徴とする請求項１０〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
式（１）のカルバメート化合物の治療有効量が、遊離形で１日１回の投与に基づいて、５０ｍｇ〜５００ｍｇであることを特徴とする請求項１０〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療のための医薬を製造するための、下記式（１）

（式中、Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_８アルキル、ハロＣ_１−Ｃ_８アルキル、Ｃ_１−Ｃ_８チオアルコキシ及びＣ_１−Ｃ_８アルコキシからなる群から選ばれ、Ａ_１及びＡ_２の一方はＣＨであり、他方はＮである。）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物の使用。
Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン及びＣ_１−Ｃ_８アルキルからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１９に記載の使用。
式（１）のカルバメート化合物が、下記式（２）

で示されるカルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルであることを特徴とする請求項１９に記載の使用。
欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを患っている対象が、脳波記録（ＥＥＧ）において、棘・徐波発射（ＳＷＤ）を示すことを特徴とする請求項１９に記載の使用。
欠神発作を示すてんかんが、小児欠神てんかん、ミオクロニー欠神てんかん、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん、ジーボンス症候群（欠神を伴う眼瞼ミオクロニー）、ファントム欠神を伴う遺伝性全般てんかん、及びレノックス・ガストー症候群からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１９に記載の使用。
欠神発作が定型欠神発作であることを特徴とする請求項１９に記載の使用。
欠神発作が非定型欠神発作であることを特徴とする請求項１９に記載の使用。
医薬が哺乳動物投与用であることを特徴とする請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の使用。
式（１）のカルバメート化合物の治療有効量が、遊離形で１日１回の投与に基づいて、５０ｍｇ〜５００ｍｇであることを特徴とする請求項１９〜２５のいずれか１項に記載の使用。
治療有効量の下記式（１）

（式中、Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_８アルキル、ハロＣ_１−Ｃ_８アルキル、Ｃ_１−Ｃ_８チオアルコキシ及びＣ_１−Ｃ_８アルコキシからなる群から選ばれ、Ａ_１及びＡ_２の一方はＣＨであり、他方はＮである。）で示されるカルバメート化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を、必要とする対象に投与することを含む、欠神発作又は欠神発作を示すてんかんの予防、軽減又は治療方法。
Ｒ_１及びＲ_２が、それぞれ独立して、水素、ハロゲン及びＣ_１−Ｃ_８アルキルからなる群から選ばれることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
式（１）のカルバメート化合物が、下記式（２）

で示されるのカルバミン酸（Ｒ）−１−（２−クロロフェニル）−２−テトラゾール−２−イル）エチルエステルであることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
欠神発作又は欠神発作を示すてんかんを患っている対象が、脳波記録（ＥＥＧ）において、棘・徐波発射（ＳＷＤ）を示すことを特徴とする請求項２８に記載の方法。
欠神発作を示すてんかんが、小児欠神てんかん、ミオクロニー欠神てんかん、若年性欠神てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん、ジーボンス症候群（欠神を伴う眼瞼ミオクロニー）、ファントム欠神を伴う遺伝性全般てんかん、及びレノックス・ガストー症候群からなる群から選ばれることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
欠神発作が定型欠神発作であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
欠神発作が非定型欠神発作であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
投与対象が哺乳類であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
式（１）のカルバメート化合物の治療有効量が、遊離形で１日１回の投与に基づいて、５０ｇｍｇ〜５００ｍｇであることを特徴とする請求項２８に記載の方法。