JP2021502799A - レトロウイルスベクター - Google Patents
レトロウイルスベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021502799A JP2021502799A JP2020515093A JP2020515093A JP2021502799A JP 2021502799 A JP2021502799 A JP 2021502799A JP 2020515093 A JP2020515093 A JP 2020515093A JP 2020515093 A JP2020515093 A JP 2020515093A JP 2021502799 A JP2021502799 A JP 2021502799A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- retrovirus
- double
- acid molecule
- stranded nucleic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4747—Apoptosis related proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16051—Methods of production or purification of viral material
- C12N2740/16052—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20211—Vesiculovirus, e.g. vesicular stomatitis Indiana virus
- C12N2760/20221—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
- C12N2810/6072—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses negative strand RNA viruses
- C12N2810/6081—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses negative strand RNA viruses rhabdoviridae, e.g. VSV
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
(a)env遺伝子を含む第1の核酸;および
(b)gag−pol遺伝子を含む第2の核酸を含み;
第1および第2の核酸のコード配列が二重鎖核酸分子の対向鎖上にあり、envおよびgag−pol遺伝子が、その間のヌクレオチド配列同一性が95%未満である第1および第2の誘導可能プロモーターと独立して機能的に関連し、且つ二重鎖核酸分子がアポトーシス阻害物質をコードするヌクレオチド配列を1つ以上含む二重鎖核酸分子を提供する。
RSV−ヒトアポトーシス阻害物質(IAP)1
RSV−エプスタインバーEBNA5
RSV−BCL−XL
SV40−ヒトアポトーシス阻害物質(IAP)1
SV40−エプスタインバーEBNA5
SV40−BCL−XL
PGK−ヒトアポトーシス阻害物質(IAP)1
PGK−エプスタインバーEBNA5
PGK−BCL−XL
ユビキチン−ヒトアポトーシス阻害物質(IAP)1
ユビキチン−エプスタインバーEBNA5
ユビキチン−BCL−XL
ワードサイズ:11または12;テンプレート:16、18、または21;テンプレートタイプ:コーディング(0)、非コーディング(1)、または両方(2)である。
(i)本発明の二重鎖核酸を含むレトロウイルスパッケージングベクターを、
以下のうち1つ以上と共に含むキットも提供する:
(ii)導入遺伝子およびレトロウイルスrev遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクター;
(iii)ウイルス粒子の産生に適した細胞株の細胞。
(i)rev遺伝子を追加的に含む本発明の二重鎖核酸を含むレトロウイルスパッケージングベクターを、
以下のうち1つ以上と共に含むキットも提供する:
(ii)導入遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクター;
(iii)ウイルス粒子の産生に適した細胞株の細胞。
(i)本発明の二重鎖核酸分子を哺乳類細胞に安定的に組込み、
それによりレトウイルスenvおよびgag−pol遺伝子、および任意にrev遺伝子を発現する哺乳類細胞を生成する段階を含むプロセスが提供される。
(a)5’および3’レトロウイルスLTRおよびレトロウイルスパッケージングシグナルおよびレトロウイルスrev遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクターを本発明のレトロウイルスパッケージング細胞に導入する段階であって、レトロウイルスパッケージング細胞がそのゲノムに安定的に組込まれたレトロウイルスenvおよびgag−pol遺伝子を含む段階;
(b)レトロウイルスが構成されて細胞から分泌される条件下で細胞を培養する段階;および
(c)上清からパッケージングされたレトロウイルスを回収する段階を含むプロセスも提供する。
(a)導入遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクターを本発明のレトロウイルスパッケージング細胞に導入する段階であって、レトロウイルスパッケージング細胞がそのゲノムに安定的に組込まれたレトロウイルスenv、gag−polおよびrev遺伝子を含む段階;
(b)レトロウイルスが構成されて細胞から分泌される条件下で細胞を培養する段階;および
(c)上清からパッケージングされたレトロウイルスを回収する段階を含むプロセスも提供する。
好ましくは、ウイルスベクターは複製欠損または複製不全である。
水疱性口内炎ウイルスに由来するウイルス糖タンパク質VSV−Gを、アポトーシス阻害物質パネルと共発現させた。我々は、VSV−Gの構成的発現を支持した数種類の分子を同定し、さらに抗生物質選択により安定細胞株を確立することができた。続いて、このデータを用いて、後述の実施例に記載する、最終レンチウイルスパッケージングおよびプロデューサー細胞株に含める好ましいアポトーシス阻害物質を選択した。
図3に示すように、4つの構築物が産生される。構築物では、ピューロマイシン選択マーカーを用いてVSV−G遺伝子とgag−pol遺伝子を合わせて対とし、G418またはブラストサイジン選択マーカーを用いてrevとゲノムを合わせて対とした。
・誘導可能プロモーター(2つのTetO部位を戦略的位置に付加することにより誘導可能プロモーターに変換されたPGK CMV融合プロモーター)または構成的プロモーター(PGK CMV融合プロモーター)
・5’UTR = ヒトトリオースリン酸イソメラーゼ(TPI)イントロン
・CDS(HEK293細胞における発現に最適化されたVSV−Gコドン)
・ウサギβ−グロビンpolyAシグナル
・誘導可能プロモーター(2つのTetO部位を戦略的位置に付加することにより誘導可能プロモーターに変換されたCMV)または構成的プロモーター(CMV)
・5’UTR(ヒトβ−グロビンイントロン)
・CDS(野生型HIV1 GagPol)
・HIV−1由来RRE
・ヒトβ−グロビンpolyAシグナル
・プロモーター(CMV)
・TetR配列(HEK293細胞における発現に最適化されたコドン)
・PolyA
・Puro(IRES−PuroまたはEF1−α−puroのいずれか)
・IAP1およびEBNA5
Rev/ゲノムベクターは、レンチウイルス粒子産生に必要な全ての因子を含むプロデューサー細胞株を生成するために、VSV−G/GagPol安定細胞株に安定的に組込まれるよう設計された。Rev/ゲノム構築物を示す模式図を図4に示す。
・第3世代レンチウイルスゲノム
・レンチウイルスゲノムの転写を駆動する異種CMVプロモーターと融合したキメラ5’−LTR
・導入遺伝子は緑色蛍光タンパク質(GFP)または抗CD19キメラ抗原受容体(CAR)である。
・導入遺伝子は脾フォーカス形成ウイルス(SFFV)プロモーターから発現される。
・構成的RSVプロモーター
・Rev CDS
・PGK−G418またはPGK−Blast
安定細胞株において用いようとするベクターの機能性を評価するために、始めに接着細胞を対象とした一過性の実験においてレンチウイルス粒子を産生するために用いた。これにより、標準的4ベクター一過性発現ベクターに対するベンチマーキングが可能となった。
・レンチウイルスベクター内の全てのコンポーネントは完全に機能的である。
・2プラスミド系は高いレンチウイルス力価をもたらすことが可能であり、また多くの場合3または4プラスミド系よりも優れているか、または同等である。
・2プラスミド系でアポトーシス阻害物質もコードする構成的VSV−G/GagPol構築物は、これらのカセットを欠いた同一の構築物と比較したとき、レンチウイルス産生の増強を示した(図5,BoxAとBoxB)。
・誘導可能VSV−G/GagPol構築物は、アポトーシス阻害物質の有無に関わらず、構成的構築物をわずかにのみ下回る高レベルウイルス粒子発現を示した(図5,ボックスCおよびボックスB)。
・誘導可能構築物(ボックスC)は、Dox不在下における発現レベルによって示されるように、非常に厳格な遺伝子調節を示す。
・全般的に、ドキシサイクリン処理は誘導系に関わらずウイルス粒子発現を上昇させた。
懸濁HEK293細胞を、アポトーシス阻害物質を用いるか、またはこれを用いずに、VSV−GまたはVSV−GおよびGalPolのいずれかをコードする直鎖状誘導可能パッケージング構築物で、直鎖PEIを用いてトランスフェクトした(表2に詳述)。続いて、遺伝子が安定的に組込まれた細胞を、宿主細胞株と同様の増殖特性で生存度≧90%が得られるまでピューロマイシン処理により選択した(図1)。VSV−G/GagPol細胞プールを単一細胞クローニングに進め、モノクローナル高度発現細胞株を得た。これは、ソニーSH800セルソーターを用いて、96ウェルプレート内の調製済みクローニング培地に細胞をソーティングして実施した。次に、コロニーを形成する単一細胞を、VSV−Gタンパク質発現の評価に十分な数の細胞を得るまで、数回のスケールアップステージを経て選択した。この目的のために、細胞クローンを媒体対照(DMSO)またはドキシサイクリンで24時間インキュベートし、VSV−G/Gal−Pol発現を誘導した。細胞を抗VSV−Gおよび対応する二次FITCコンジュゲート抗体で染色し、フローサイトメトリーでFITC陽性細胞を分析した。結果を図6に示す。
モノクローナルVSV−G/GagPol懸濁HEK293細胞株(実施例4に詳述)を、Rev単独またはRevとウイルスゲノム(eGFPまたはCD19)の組み合わせをコードする直線化構成的構築物により、直鎖PEIを用いてトランスフェクトする(構築物の詳細は表3を参照)。続いて、遺伝子が安定的に組込まれた細胞を、宿主細胞株と同様の増殖特性で生存度≧90%が得られるまでブラストサイジン選択により選択する。生成したプロデューサー細胞をドキシサイクリンで誘導し、設定した産生期間後に培養上清を回収し、細胞デブリを除去して清澄化する。続いて、このウイルス上清を連続希釈し、これを用いてJurkat細胞(eGFPおよびCD19)または接着293細胞(eGFPのみ)に72時間感染させる。eGFPレンチウイルスに感染したJurkatおよび293細胞をフローサイトメトリーで直接分析し、これにより10〜20%eGFP陽性(すなわち形質導入された)細胞を得る希釈を用いて、感染性粒子濃度を算出する。
レトロウイルスベクターの使用により推測される主な安全上の問題は、複製可能レトロウイルスを生成するリスクである。これは、パッケージング因子に対して個別のベクターを組み入れると共に、LTR領域内部で削除してプロモーター活性を切除し、導入遺伝子の転写を内部プロモーターに依存させる、第3世代系による一過性レンチウイルス発現の状況で言及されている。
実施例4に記載のものと同一の方法により、追加的なパッケージング細胞株を産生した。パッケージング細胞株は、産生パラメーターを分析および最適化するために、振盪フラスコ系およびミニチュアバイオリアクター系(AMBR15)の双方で増殖させた。本願に例示するものは、直線化Q1850プラスミドの安定的な組込みによって産生された。
好ましいパッケージング細胞株(CV170)を、完全に安定なプロデューサー細胞株の生成の出発点として用いた。安定プールは、直線化Q3928プラスミドの安定的な組込みによって作製し、その後FACSソーティングによってクローニングした。その後、クローン株を拡張し、ディープウェル振盪プレートで分析した。このデータに基づき、選択したクローン細胞株を振盪フラスコ培養にスケールアップした。
ATGAGAGTGAAGGAGAAATATCAGCACTTGTGGAGATGGGGGTGGAGATGGGGCACCATG
CTCCTTGGGATGTTGATGATCTGTAGTGCTACAGAAAAATTGTGGGTCACAGTCTATTAT
GGGGTACCTGTGTGGAAGGAAGCAACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCA
TATGATACAGAGGTACATAATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAAC
CCACAAGAAGTAGTATTGGTAAATGTGACAGAAAATTTTAACATGTGGAAAAATGACATG
GTAGAACAGATGCATGAGGATATAATCAGTTTATGGGATCAAAGCCTAAAGCCATGTGTA
AAATTAACCCCACTCTGTGTTAGTTTAAAGTGCACTGATTTGAAGAATGATACTAATACC
AATAGTAGTAGCGGGAGAATGATAATGGAGAAAGGAGAGATAAAAAACTGCTCTTTCAAT
ATCAGCACAAGCATAAGAGGTAAGGTGCAGAAAGAATATGCATTTTTTTATAAACTTGAT
ATAATACCAATAGATAATGATACTACCAGCTATAAGTTGACAAGTTGTAACACCTCAGTC
ATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCG
GCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGTAATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACA
AATGTCAGCACAGTACAATGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTG
TTAAATGGCAGTCTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGTCAATTTCACGGACAAT
GCTAAAACCATAATAGTACAGCTGAACACATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAAC
AACAATACAAGAAAAAGAATCCGTATCCAGAGAGGACCAGGGAGAGCATTTGTTACAATA
GGAAAAATAGGAAATATGAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAAC
ACTTTAAAACAGATAGCTAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACAATAATC
TTTAAGCAATCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGG
GAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGG
AGTACTGAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATA
AAACAAATTATAAACATGTGGCAGAAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGT
GGACAAATTAGATGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAAT
AGCAACAATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGA
AGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAG
GCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTT
GGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCCTCAATGACGCTGACGGTACAG
GCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAG
GCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATC
CTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGA
AAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAA
CAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGC
TTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTA
TTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGG
TATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCT
GTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCAC
CTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGA
GACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCCTTGGCACTTATCTGGGACGATCTG
CGGAGCCTGTGCCTCTTCAGCTACCACCGCTTGAGAGACTTACTCTTGATTGTAACGAGG
ATTGTGGAACTTCTGGGACGCAGGGGGTGGGAAGCCCTCAAATATTGGTGGAATCTCCTA
CAGTATTGGAGTCAGGAACTAAAGAATAGTGCTGTTAGCTTGCTCAATGCCACAGCCATA
GCAGTAGCTGAGGGGACAGATAGGGTTATAGAAGTAGTACAAGGAGCTTGTAGAGCTATT
CGCCACATACCTAGAAGAATAAGACAGGGCTTGGAAAGGATTTTGCTATAA
MRVKEKYQHLWRWGWRWGTMLLGMLMICSATEKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDAKA
YDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVLVNVTENFNMWKNDMVEQMHEDIISLWDQSLKPCV
KLTPLCVSLKCTDLKNDTNTNSSSGRMIMEKGEIKNCSFNISTSIRGKVQKEYAFFYKLD
IIPIDNDTTSYKLTSCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGTGPCT
NVSTVQCTHGIRPVVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSVNFTDNAKTIIVQLNTSVEINCTRPN
NNTRKRIRIQRGPGRAFVTIGKIGNMRQAHCNISRAKWNNTLKQIASKLREQFGNNKTII
FKQSSGGDPEIVTHSFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNSTWSTEGSNNTEGSDTITLPCRI
KQIINMWQKVGKAMYAPPISGQIRCSSNITGLLLTRDGGNSNNESEIFRPGGGDMRDNWR
SELYKYKVVKIEPLGVAPTKAKRRVVQREKRAVGIGALFLGFLGAAGSTMGAASMTLTVQ
ARQLLSGIVQQQNNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAVERYLKDQQLLGIWGCSG
KLICTTAVPWNASWSNKSLEQIWNHTTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQEL
LELDKWASLWNWFNITNWLWYIKLFIMIVGGLVGLRIVFAVLSIVNRVRQGYSPLSFQTH
LPTPRGPDRPEGIEEEGGERDRDRSIRLVNGSLALIWDDLRSLCLFSYHRLRDLLLIVTR
IVELLGRRGWEALKYWWNLLQYWSQELKNSAVSLLNATAIAVAEGTDRVIEVVQGACRAI
RHIPRRIRQGLERILL
atgaagtgtctgctgtacctggcgttcctgtttatcggggtgaactgcaagttcactatcgtgtttccgcacaaccaaaagggcaactggaaaaacgtgccttcaaattaccattattgccccagcagctcggacctgaactggcacaatgacctcattggaaccgcgctgcaggtgaagatgccaaagagccacaaggctatccaggctgacggatggatgtgccacgcgtcaaaatgggtgactacctgcgatttccgctggtacggaccaaaatacatcacgcacagcatcagatcattcaccccgtcagtggaacaatgcaaagaatccatcgaacagactaagcagggaacctggctgaaccctggatttccgccgcagtcgtgtgggtacgcaaccgtgaccgatgcagaggccgtgatcgtgcaagtcacgccgcatcacgtgcttgtggacgagtacaccggagaatgggtcgattcccagttcatcaacggcaagtgctccaactacatttgcccaaccgtgcacaacagcactacttggcacagcgactacaaagtgaagggtctgtgtgattccaacctgatctccatggatatcactttcttctcggaagacggcgaactgtcctcactgggcaaagaaggaactgggtttcgctcaaattacttcgcctacgaaactggaggaaaagcctgcaagatgcagtactgcaagcactggggcgtgagactacccagcggtgtctggttcgagatggccgataaggacctgtttgcagcagcgagattcccggaatgccctgagggatcgagcatctccgctccaagccaaacttcagtggacgtgagcctgatccaggacgtggaacggattctcgactactcgctgtgccaggagacctggtcgaagatcagagcgggactgcccatctcaccggtggacctgtcctacctggcgccaaagaatccgggcactggaccggcgttcaccatcatcaacggcaccctcaaatacttcgagacgcggtacatccgggtggacatcgcagctccgatcctctcccggatggtgggaatgatctcggggactactaccgaacgcgagctctgggacgactgggcaccttacgaggatgtcgagatcggacctaacggagtgctccggacctcctccgggtacaagttccctctgtacatgatcggccatggcatgctggactcggatctgcatctgtcgtccaaagcacaggtgtttgaacacccacacattcaagacgccgccagccagctgccggacgatgagtcgctgttcttcggagacacgggcttgtcaaagaatcccatcgagctggtggaaggatggttttcatcctggaaaagcagcatcgcttcattcttcttcatcattggcctgatcatcggcctatttctagtcctgcgggtgggaattcatctgtgcatcaagctcaagcacactaagaagcggcaaatctacactgatatcgagatgaatcgcctgggcaag
MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK
atgggtgcgagagcgtcagtattaagcgggggagaattagatcgatgggaaaaaattcggttaaggccagggggaaagaaaaaatataaattaaaacatatagtatgggcaagcagggagctagaacgattcgcagttaatcctggcctgttagaaacatcagaaggctgtagacaaatactgggacagctacaaccatcccttcagacaggatcagaagaacttagatcattatataatacagtagcaaccctctattgtgtgcatcaaaggatagagataaaagacaccaaggaagctttagacaagatagaggaagagcaaaacaaaagtaagaaaaaagcacagcaagcagcagctgacacaggacacagcaatcaggtcagccaaaattaccctatagtgcagaacatccaggggcaaatggtacatcaggccatatcacctagaactttaaatgcatgggtaaaagtagtagaagagaaggctttcagcccagaagtgatacccatgttttcagcattatcagaaggagccaccccacaagatttaaacaccatgctaaacacagtggggggacatcaagcagccatgcaaatgttaaaagagaccatcaatgaggaagctgcagaatgggatagagtgcatccagtgcatgcagggcctattgcaccaggccagatgagagaaccaaggggaagtgacatagcaggaactactagtacccttcaggaacaaataggatggatgacacataatccacctatcccagtaggagaaatctataaaagatggataatcctgggattaaataaaatagtaagaatgtatagccctaccagcattctggacataagacaaggaccaaaggaaccctttagagactatgtagaccgattctataaaactctaagagccgagcaagcttcacaagaggtaaaaaattggatgacagaaaccttgttggtccaaaatgcgaacccagattgtaagactattttaaaagcattgggaccaggagcgacactagaagaaatgatgacagcatgtcagggagtggggggacccggccataaagcaagagttttggctgaagcaatgagccaagtaacaaatccagctaccataatgatacagaaaggcaattttaggaaccaaagaaagactgttaagtgtttcaattgtggcaaagaagggcacatagccaaaaattgcagggcccctaggaaaaagggctgttggaaatgtggaaaggaaggacaccaaatgaaagattgtactgagagacaggctaattttttagggaagatctggccttcccacaagggaaggccagggaattttcttcagagcagaccagagccaacagccccaccagaagagagcttcaggtttggggaagagacaacaactccctctcagaagcaggagccgatagacaaggaactgtatcctttagcttccctcagatcactctttggcagcgacccctcgtcacaataaagataggggggcaattaaaggaagctctattagatacaggagcagatgatacagtattagaagaaatgaatttgccaggaagatggaaaccaaaaatgatagggggaattggaggttttatcaaagtaagacagtatgatcagatactcatagaaatctgcggacataaagctataggtacagtattagtaggacctacacctgtcaacataattggaagaaatctgttgactcagattggctgcactttaaattttcccattagtcctattgagactgtaccagtaaaattaaagccaggaatggatggcccaaaagttaaacaatggccattgacagaagaaaaaataaaagcattagtagaaatttgtacagaaatggaaaaggaaggaaaaatttcaaaaattgggcctgaaaatccatacaatactccagtatttgccataaagaaaaaagacagtactaaatggagaaaattagtagatttcagagaacttaataagagaactcaagatttctgggaagttcaattaggaataccacatcctgcagggttaaaacagaaaaaatcagtaacagtactggatgtgggcgatgcatatttttcagttcccttagataaagacttcaggaagtatactgcatttaccatacctagtataaacaatgagacaccagggattagatatcagtacaatgtgcttccacagggatggaaaggatcaccagcaatattccagtgtagcatgacaaaaatcttagagccttttagaaaacaaaatccagacatagtcatctatcaatacatggatgatttgtatgtaggatctgacttagaaatagggcagcatagaacaaaaatagaggaactgagacaacatctgttgaggtggggatttaccacaccagacaaaaaacatcagaaagaacctccattcctttggatgggttatgaactccatcctgataaatggacagtacagcctatagtgctgccagaaaaggacagctggactgtcaatgacatacagaaattagtgggaaaattgaattgggcaagtcagatttatgcagggattaaagtaaggcaattatgtaaacttcttaggggaaccaaagcactaacagaagtagtaccactaacagaagaagcagagctagaactggcagaaaacagggagattctaaaagaaccggtacatggagtgtattatgacccatcaaaagacttaatagcagaaatacagaagcaggggcaaggccaatggacatatcaaatttatcaagagccatttaaaaatctgaaaacaggaaagtatgcaagaatgaagggtgcccacactaatgatgtgaaacaattaacagaggcagtacaaaaaatagccacagaaagcatagtaatatggggaaagactcctaaatttaaattacccatacaaaaggaaacatgggaagcatggtggacagagtattggcaagccacctggattcctgagtgggagtttgtcaatacccctcccttagtgaagttatggtaccagttagagaaagaacccataataggagcagaaactttctatgtagatggggcagccaatagggaaactaaattaggaaaagcaggatatgtaactgacagaggaagacaaaaagttgtccccctaacggacacaacaaatcagaagactgagttacaagcaattcatctagctttgcaggattcgggattagaagtaaacatagtgacagactcacaatatgcattgggaatcattcaagcacaaccagataagagtgaatcagagttagtcagtcaaataatagagcagttaataaaaaaggaaaaagtctacctggcatgggtaccagcacacaaaggaattggaggaaatgaacaagtagataaattggtcagtgctggaatcaggaaagtactatttttagatggaatagataaggcccaagaagaacatgagaaatatcacagtaattggagagcaatggctagtgattttaacctaccacctgtagtagcaaaagaaatagtagccagctgtgataaatgtcagctaaaaggggaagccatgcatggacaagtagactgtagcccaggaatatggcagctagattgtacacatttagaaggaaaagttatcttggtagcagttcatgtagccagtggatatatagaagcagaagtaattccagcagagacagggcaagaaacagcatacttcctcttaaaattagcaggaagatggccagtaaaaacagtacatacagacaatggcagcaatttcaccagtactacagttaaggccgcctgttggtgggcggggatcaagcaggaatttggcattccctacaatccccaaagtcaaggagtaatagaatctatgaataaagaattaaagaaaattataggacaggtaagagatcaggctgaacatcttaagacagcagtacaaatggcagtattcatccacaattttaaaagaaaaggggggattggggggtacagtgcaggggaaagaatagtagacataatagcaacagacatacaaactaaagaattacaaaaacaaattacaaaaattcaaaattttcgggtttattacagggacagcagagatccagtttggaaaggaccagcaaagctcctctggaaaggtgaaggggcagtagtaatacaagataatagtgacataaaagtagtgccaagaagaaaagcaaagatcatcagggattatggaaaacagatggcaggtgatgattgtgtggcaagtagacaggatgaggattaa
ATGGCAGGCCGCTCAGGGGACTCGGATGAGGATCTGCTGAAGGCGGTGCGGCTCATCAAATTCCTGTACCAGAGCAACCCGCCACCGAACCCCGAAGGAACTCGCCAGGCTCGCAGGAACCGCCGCAGACGCTGGCGCGAACGGCAGCGCCAGATCCACAGCATCAGCGAACGCATCCTGTCAACTTACTTGGGACGGTCAGCGGAACCTGTCCCGCTGCAGCTGCCGCCGCTGGAGCGCCTGACTCTGGATTGCAACGAAGACTGCGGAACCAGCGGAACCCAGGGCGTGGGAAGCCCACAGATCCTGGTGGAATCGCCTACCATCTTGGAAAGCGGCGCGAAAGAA
MAGRSGDSDEDLLKAVRLIKFLYQSNPPPNPEGTRQARRNRRRRWRERQRQIHSISERILSTYLGRSAEPVPLQLPPLERLTLDCNEDCGTSGTQGVGSPQILVESPTILESGAKE
tccctatcagtgatagaga
Atgtcgcgcctggacaaaagcaaagtgattaactcagcgctggaactgttgaatgaggtgggaattgaaggactcactactcgcaagctggcacagaagctgggcgtcgagcagccaacgctgtactggcatgtgaagaataaacgggcgctcctagacgcgcttgccatcgaaatgctggaccgccatcacacccacttttgccccctggagggcgaatcctggcaagattttctgcggaacaatgcaaagtcgttccggtgcgctctgctgtcccaccgcgatggcgcaaaagtgcacctgggcactcggcccaccgagaaacaatacgaaaccctggaaaaccaactggctttcctttgccaacagggattttcactggagaatgccctgtacgcactatccgcggtcggccactttaccctgggatgcgtcctcgaagatcaggagcaccaagtcgccaaggaggaaagagaaactcctaccactgactcaatgcctccgctcctgagacaagccatcgagctgttcgaccaccagggtgctgaacctgcatttctgttcgggcttgaactgattatctgcggcctggagaaacagttgaagtgcgagtcgggatcctag
MSRLDKSKVINSALELLNEVGIEGLTTRKLAQKLGVEQPTLYWHVKNKRALLDALAIEMLDRHHTHFCPLEGESWQDFLRNNAKSFRCALLSHRDGAKVHLGTRPTEKQYETLENQLAFLCQQGFSLENALYALSAVGHFTLGCVLEDQEHQVAKEERETPTTDSMPPLLRQAIELFDHQGAEPAFLFGLELIICGLEKQLKCESGS
ATGAACGAGGACACTCCGCCGTTTTATTTTATCAATACGCGCGACAACTTTCGCGATAACATCGCCGAACACGTATTCGATATGTTACTAGAAAGACATGGCTCGTTTGAAAATTATCCCATTGTAAACACGGCATTCATCAACAGCTTGATCGTTAACGGGTTTAAATACAATCAAGTCGATGACCACGTTGTGTGCGAGTATTGTGAAGCAGAAATAAAAAATTGGTCCGAAGACGAGTGTATTGAATATGCACACGTAACCTTGTCGCCGTATTGCGCCTACGCCAATAAGATTGCTGAGCATGAATCGTTTGGCGACAACATTACCATCAACGCTGTACTGGTAAAAGAAGGCAGACCCAAGTGTGTGTACAGATGCATGTCCAATTTACAGTCGCGTATGGATACGTTTGTTACTTTTTGGCCTGCCGCATTGCGTGACATGATTATAAACATCGCGGAAGCGGGACTTTTTTACACGGGTCGCGGAGACGAAACTGTATGTTTCTTTTGCGATTGTTGCGTACGTGATTGGCATACTAACGAAGACGCCTGGCAGCGACACGCCACCGAAAACCCGCAATGCTACTTTGTGCTGTCGGTGAAAGGTAAAGAATTTTGTCAAAACGCAATTACTGCCACTCACGTTGATAAACGTGACGATGACGACGACGACGATGATAATTTAAACGAGAGCGTCGATGACATTGAGGAAAAATACGAATGCAAAGTCTGTCTTGAACGCCAACGCGACGCAGTGCTTATGCCTTGTCGGCATTTTTGTGTTTGCGTTCAGTGTTATTTTGGTTTAGATCAAAAGTGTCCGACCTGTCGTCAAGACGTCACCGATTTCATAAAAATATTTGTGGTGTAG
ATGGGAGATCGTAGCGAAGTCCCCGGTCCGGCACGCCCCGGACCTCCGGGAATTGGCCCCGAAGGCCCTCTAGGACAGCTCCTGCGTCGGCACCGCAGTCCCTCCCCGACCCGTGGAGGCCAAGAGCCCCGGCGGGTCAGACGCCGCGTATTAGTCCAGCAGGAAGAGGAAGTAGTAAGTGGCTCACCATCAGGGCCCCGGGGAGACAGGTCAGAGGTCCCAGGCCCAGCCCGCCCTGGCCCGCCGGGTATCGGACCCGAAGGGCCCCTGGGCCAGCTGTTGCGCCGGCACAGATCACCCAGCCCCACCCGCGGCGGTCAGGAACCTCGCCGGGTCAGACGGCGGGTGCTCGTACAACAGGAAGAGGAAGTTGTTTCTGGATCGCCCTCGGGCCCGCGCGGCGACCGCTCAGAGGTGCCTGGACCAGCCCGGCCTGGGCCCCCCGGAATCGGACCTGAAGGACCGCTGGGTCAGTTACTACGCCGGCACCGGTCCCCTTCGCCGACTCGGGGCGGGCAGGAACCCCGGCGCGTGAGGCGTCGCGTCCTGGTCCAGCAGGAGGAAGAGGTTGTCAGCGGCAGCCCATCCGGGCCGAGGGGGGATCGTTCGGAAGTGCCCGGCCCAGCACGCCCGGGCCCGCCAGGTATTGGGCCCGAAGGTCCGTTAGGTCAGCTGCTCCGGCGGCATAGGTCACCATCCCCGACTCGGGGCGGCCAGGAACCGCGGAGAGTGCGCCGGAGAGTGCTGGTGCAACAGGAGGAAGAAGTCGTGTCCGGGTCGCCGTCAGGTCCTCGGGGCGACCGGTCAGAAGTACCTGGACCGGCCCGCCCCGGACCGCCGGGCATCGGGCCGGAAGGCCCCCTGGGACAGCTGCTGCGGAGACATAGATCGCCATCCCCCACCAGAGGCGGACAGGAACCGCGCCGCGTGCGCCGCCGGGTGCTGGTTCAGCAAGAAGAAGAGGTTGTGTCGGGTTCACCTAGCGGCCCGAGAGGCGACCGGAGCGAAGTGCCAGGACCAGCACGTCCGGGCCCTCCAGGTATCGGCCCAGAAGGACCACTGGGACAACTGCTGAGACGCCATCGCTCGCCGAGCCCTACGCGCGGAGGTCAAGAACCGAGACGGGTCCGCAGACGAGTCCTCGTTCAACAAGAAGAAGAGGTCGTGTCTGGAAGCCCGTCTGGCCCAAGAGGGGACAGAAGCGAGGTGCCGGGACCGGCGCGGCCGGGGCCGCCGGGGATCGGGCCTGAAGGTCCGCTGGGGCAGCTCTTGCGCAGACACCGCTCGCCCAGCCCAACCCGCGGTGGACAAGAACCCCGACGGGTGCGGCGGCGCGTGCTCGTGCAACAAGAAGAAGAGGTTGTCTCGGGCTCGCCATCTGGCCCGCTCAGACCAAGACCGCGACCGCCGGCCCGGTCCCTCCGCGAATGGCTGCTGCGCATCAGAGACAGATTCGAGCCGCCAACTGAAACCACCCAGCGGCAGTCCATCTACATTGAGGAAGAGGAAGATGAGGATTAG
ATGAGCCAGTCAAATCGGGAACTGGTGGTGGATTTTCTGAGCTACAAGCTCTCGCAAAAGGGCTACTCATGGAGCCAGTTTTCGGATGTCGAAGAAAACCGGACCGAGGCTCCAGAGGGCACCGAATCGGAGATGGAAACTCCGTCAGCAATCAACGGAAATCCATCATGGCACCTGGCAGATAGCCCGGCGGTGAACGGAGCAACCGGACATTCAAGCTCCCTGGACGCCAGAGAAGTGATTCCGATGGCGGCAGTGAAGCAGGCGCTACGCGAAGCGGGAGACGAGTTCGAGCTGCGGTACAGGAGAGCTTTTAGCGACCTGACTAGCCAGCTCCACATCACTCCGGGGACCGCCTACCAGTCGTTTGAACAGGTGGTGAACGAGCTGTTTCGGGATGGAGTCAACTGGGGCAGAATCGTGGCCTTCTTTTCCTTCGGCGGTGCGCTGTGCGTCGAATCCGTGGACAAGGAGATGCAGGTCCTGGTCAGCCGGATCGCAGCGTGGATGGCCACTTATCTCAACGATCACCTGGAGCCGTGGATTCAAGAGAATGGGGGCTGGGACACCTTCGTGGAACTGTATGGAAACAACGCGGCAGCAGAGTCGAGGAAGGGCCAAGAACGCTTTAATCGGTGGTTCCTGACTGGAATGACGGTGGCAGGAGTGGTGCTACTGGGCTCGCTTTTCAGCCGCAAATAA
MLSYLIFALAVSPILG
Claims (18)
- 二重鎖核酸分子であって:
(a)env遺伝子を含む第1の核酸;および
(b)gag−pol遺伝子を含む第2の核酸を含み;
前記の第1および第2の核酸のコード配列が前記二重鎖核酸分子の対向鎖上にあり、前記のenvおよびgag−pol遺伝子が第1および第2の誘導可能プロモーターとそれぞれ独立して機能的に関連し、前記の第1および第2のプロモーターが95%未満のヌクレオチド配列同一性をその間に有し、且つ前記二重鎖核酸分子がアポトーシス阻害物質をコードするヌクレオチド配列を1つ以上含む前記二重鎖核酸分子。 - 請求項1に記載の二重鎖核酸分子であって、前記第1および第2のプロモーターの間の前記ヌクレオチド配列同一性が90%、85%、80%、70%または60%未満である前記二重鎖核酸分子。
- 請求項1または請求項2に記載の二重鎖核酸分子であって、前記env遺伝子がVSV−G遺伝子である前記二重鎖核酸分子。
- 前述の請求項のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子であって、前記gag−pol遺伝子がHIV−1に由来するか、またはその誘導体である前記二重鎖核酸分子。
- 前述の請求項のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子であって、前記核酸分子がrev遺伝子を追加的に含む前記二重鎖核酸分子。
- 前述の請求項のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子であって、前記核酸分子が導入遺伝子を追加的に含む前記二重鎖核酸分子。
- 前述の請求項のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子であって、前記核酸分子がアポトーシス阻害物質をコードする1つまたは2つのヌクレオチド配列を含む前記二重鎖核酸分子。
- 前述の請求項のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子であって、前記アポトーシス阻害物質がセロウイルスGAM1、アデノウイルスE4 Orf6、アデノウイルスE1B 55K、アデノウイルスE1B 19K、粘液腫ウイルスM11L、サイトメガロウイルスIE1、サイトメガロウイルスIE2、バキュロウイルスp35、バキュロウイルスIAP−1、ヘルペスウイルスUS3、サルヘルペスウイルスORF16、単純ヘルペス2 LAT ORF1、ヒトXIAP、アフリカブタ熱ASFV−5−HL(LMW−5−HL/A179L)、カポジ肉腫ウイルスKSbcl2、ワクシニアウイルスSPI−2、牛痘ウイルスCrmA、エプスタインバーウイルスBHRF1、エプスタインバーウイルスEBNA−5、エプスタインバーウイルスBZLF−1、パピローマウイルスE6、ヒトAven、ヒトBCL2およびヒトBCL−XLからなる群から選択される前記二重鎖核酸分子。
- 請求項7に記載の二重鎖核酸分子であって、前記核酸分子がアポトーシス阻害物質IAP1およびEBNA5;IAP1およびBCL−XL;またはEBNA5およびBCL−XLをコードするヌクレオチド配列を含む前記二重核酸分子。
- 前述の請求項のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子を含む、レトロウイルスベクター、より好ましくはレンチウイルスベクター。
- 請求項1から9のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸を含む哺乳類細胞であって、好ましくは前記二重鎖核酸が前記哺乳類細胞の核ゲノムに安定的に組込まれる前記哺乳類細胞。
- 請求項1から9のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子を含むレトロウイルスパッケージング細胞。
- キットであって:
(i)請求項1から9のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸を含むレトロウイルスパッケージングベクターを、
以下のうち1つ以上と共に含むキット:
(ii)導入遺伝子およびレトロウイルスrev遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクター;
(iii)ウイルス粒子の産生に適した細胞株の細胞。 - キットであって:
(i)rev遺伝子を追加的に含む請求項1から9のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸を含むレトロウイルスパッケージングベクターを、
以下のうち1つ以上と共に含むキット:
(ii)導入遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクター;
(iii)ウイルス粒子の産生に適した細胞株の細胞。 - レトロウイルスパッケージング細胞を生成するためのプロセスであって、前記プロセスが:
(i)哺乳類細胞に請求項1から9のうちいずれか1つに記載の二重鎖核酸分子を安定的に組込み、
それによりレトロウイルスenvおよびgag−pol遺伝子、および任意にrev遺伝子を発現する哺乳類細胞を生成する段階を含む前記プロセス。 - レトロウイルス粒子の産生における請求項12に記載のレトロウイルスパッケージング細胞の使用。
- レトロウイルスを産生するためのプロセスであって、前記プロセスが:
(a)5’および3’レトロウイルスLTRおよびレトロウイルスパッケージングシグナルおよびレトロウイルスrev遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクターを請求項12に記載のレトロウイルスパッケージング細胞に導入する段階であって、前記レトロウイルスパッケージング細胞がそのゲノムに安定的に組込まれたレトロウイルスenvおよびgag−pol遺伝子を含む段階;
(b)レトロウイルスが構成されて前記細胞から分泌される条件下で前記細胞を培養する段階;および
(c)上清からパッケージングされたレトロウイルスを回収する段階を含む前記プロセス。 - レトロウイルスを産生するためのプロセスであって、前記プロセスが:
(a)導入遺伝子を含むレトロウイルス導入ベクターを請求項12に記載のレトロウイルスパッケージング細胞に導入する段階であって、前記レトロウイルスパッケージング細胞がそのゲノムに安定的に組込まれたレトロウイルスenv、gag−polおよびenv遺伝子を含む段階;
(b)レトロウイルスが構成されて前記細胞から分泌される条件下で前記細胞を培養する段階;および
(c)上清からパッケージングされたレトロウイルスを回収する段階を含む前記プロセス。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB1715052.5A GB201715052D0 (en) | 2017-09-19 | 2017-09-19 | Vectors |
GB1715052.5 | 2017-09-19 | ||
PCT/GB2018/052656 WO2019058108A1 (en) | 2017-09-19 | 2018-09-18 | RETROVIRAL VECTORS |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021502799A true JP2021502799A (ja) | 2021-02-04 |
JP7105875B2 JP7105875B2 (ja) | 2022-07-25 |
Family
ID=60159581
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020515093A Active JP7105875B2 (ja) | 2017-09-19 | 2018-09-18 | レトロウイルスベクター |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11667929B2 (ja) |
EP (1) | EP3684790A1 (ja) |
JP (1) | JP7105875B2 (ja) |
KR (1) | KR102423444B1 (ja) |
CN (1) | CN111108116B (ja) |
AU (1) | AU2018336042B2 (ja) |
CA (1) | CA3076270C (ja) |
GB (1) | GB201715052D0 (ja) |
SG (1) | SG11202001367QA (ja) |
WO (1) | WO2019058108A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023214579A1 (ja) * | 2022-05-02 | 2023-11-09 | 株式会社シンプロジェン | ウイルス由来構築物プラスミド |
WO2023214578A1 (ja) * | 2022-05-02 | 2023-11-09 | 株式会社シンプロジェン | ウイルス由来構築物プラスミドライブラリーおよびその構築 |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3159482A1 (en) * | 2019-12-18 | 2021-06-24 | Lonza Walkersville, Inc. | Methods and constructs for transient production of lentiviral vector |
GB202013060D0 (en) | 2020-08-21 | 2020-10-07 | Oxford Genetics Ltd | Cell line |
GB202013058D0 (en) | 2020-08-21 | 2020-10-07 | Oxford Genetics Ltd | Process for making a recombinant AAV library |
EP4200316A1 (en) | 2020-08-21 | 2023-06-28 | Oxford Genetics Limited | Process for making a recombinant aav library |
AU2022262784A1 (en) * | 2021-04-23 | 2023-11-09 | Asimov Inc. | Stable production systems for lentiviral vector production |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013059331A (ja) * | 2005-02-16 | 2013-04-04 | Lentigen Corp | レンチウイルスベクターとその使用 |
WO2016189326A1 (en) * | 2015-05-27 | 2016-12-01 | Oxford Genetics Ltd | Cell lines |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20010074493A (ko) * | 1998-05-22 | 2001-08-04 | 찰스 굿맨 | 레트로바이러스 전달 시스템 |
WO2010105251A2 (en) * | 2009-03-13 | 2010-09-16 | Lentigen Corporation | Non-integrating retroviral vector vaccines |
EP2325322A1 (en) * | 2009-11-23 | 2011-05-25 | 4-Antibody AG | Retroviral vector particles and methods for their generation and use |
DK2480677T3 (en) | 2010-09-02 | 2015-06-15 | Molmed Spa | Semi-stable production of lentiviral vectors |
AU2011298332B2 (en) | 2010-09-02 | 2015-05-07 | Molmed Spa | Semi-stable production of lentiviral vectors |
GB2544892B (en) | 2015-11-24 | 2017-11-15 | Glaxosmithkline Ip Dev Ltd | Stable cell lines for retroviral production |
DE102016122317A1 (de) | 2015-11-24 | 2017-05-24 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Transientes transfektionsverfahren für retrovirale produktion |
-
2017
- 2017-09-19 GB GBGB1715052.5A patent/GB201715052D0/en not_active Ceased
-
2018
- 2018-09-18 CN CN201880058492.6A patent/CN111108116B/zh active Active
- 2018-09-18 KR KR1020207011235A patent/KR102423444B1/ko active IP Right Grant
- 2018-09-18 US US16/647,697 patent/US11667929B2/en active Active
- 2018-09-18 CA CA3076270A patent/CA3076270C/en active Active
- 2018-09-18 JP JP2020515093A patent/JP7105875B2/ja active Active
- 2018-09-18 WO PCT/GB2018/052656 patent/WO2019058108A1/en unknown
- 2018-09-18 AU AU2018336042A patent/AU2018336042B2/en active Active
- 2018-09-18 EP EP18773599.8A patent/EP3684790A1/en active Pending
- 2018-09-18 SG SG11202001367QA patent/SG11202001367QA/en unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013059331A (ja) * | 2005-02-16 | 2013-04-04 | Lentigen Corp | レンチウイルスベクターとその使用 |
WO2016189326A1 (en) * | 2015-05-27 | 2016-12-01 | Oxford Genetics Ltd | Cell lines |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023214579A1 (ja) * | 2022-05-02 | 2023-11-09 | 株式会社シンプロジェン | ウイルス由来構築物プラスミド |
WO2023214578A1 (ja) * | 2022-05-02 | 2023-11-09 | 株式会社シンプロジェン | ウイルス由来構築物プラスミドライブラリーおよびその構築 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102423444B1 (ko) | 2022-07-20 |
EP3684790A1 (en) | 2020-07-29 |
AU2018336042B2 (en) | 2022-03-10 |
WO2019058108A1 (en) | 2019-03-28 |
US11667929B2 (en) | 2023-06-06 |
JP7105875B2 (ja) | 2022-07-25 |
KR20200056429A (ko) | 2020-05-22 |
GB201715052D0 (en) | 2017-11-01 |
CN111108116A (zh) | 2020-05-05 |
CA3076270C (en) | 2023-08-22 |
US20200277629A1 (en) | 2020-09-03 |
SG11202001367QA (en) | 2020-04-29 |
AU2018336042A1 (en) | 2020-04-23 |
CN111108116B (zh) | 2024-03-26 |
CA3076270A1 (en) | 2019-03-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7105875B2 (ja) | レトロウイルスベクター | |
Merten et al. | Large-scale manufacture and characterization of a lentiviral vector produced for clinical ex vivo gene therapy application | |
Reiser et al. | Development of multigene and regulated lentivirus vectors | |
US20060084093A1 (en) | Packaging cells comprising codon-optimized gagpol sequences and lacking lentiviral accessory proteins | |
US20220315950A1 (en) | Bio-production of lentiviral vectors | |
EP1076715A1 (en) | Novel lentiviral packaging cells | |
Sparacio et al. | Generation of a flexible cell line with regulatable, high-level expression of HIV Gag/Pol particles capable of packaging HIV-derived vectors | |
Berg et al. | Rapid establishment of stable retroviral packaging cells and recombinant susceptible target cell lines employing novel transposon vectors derived from Sleeping Beauty | |
WO2000015819A1 (en) | Packaging cell lines for hiv-derived retroviral vector particles | |
US9840720B2 (en) | Materials and methods relating to packaging cell lines | |
US20180127470A1 (en) | Cell Lines | |
US20220348956A1 (en) | Lentivirus packaging system, lentivirus produced by the same, cell transduced by the lentivirus, method for improving lentivirus production in a host cell, and method of using the cell for treating cancer | |
US6712612B1 (en) | Safe and stable retroviral helper cell line and related compositions and methods | |
WO2023115039A2 (en) | Modified paramyxoviridae fusion glycoproteins | |
WO2015053398A1 (ja) | 高力価レトロウイルスベクター | |
WO2014092090A1 (ja) | ウイルスベクター産生細胞及びベクターの製造方法 | |
Régulier et al. | Lentiviral-mediated gene transfer to model triplet repeat disorders | |
WO2006064847A1 (ja) | ベクターに含まれる非ウイルス由来のエンハンサー | |
WO2004044157A2 (en) | Gp64-pseudotyped vectors and uses thereof | |
CN112714790A (zh) | 用于生产vsv-g假型逆转录病毒载体颗粒或其病毒颗粒的ldlr阴性包装细胞系 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200911 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210622 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210625 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210921 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211221 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220111 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220407 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220628 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220712 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7105875 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |