JP2021501885A5 - - Google Patents
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Claims (21)
- 細胞解析法であって、
ａ．細胞のマーカーまたは抗原を有する有核細胞を含む単細胞懸濁液を調製する工程；
ｂ．細胞マーカーまたは抗原を抗体染色する工程；
ｃ．前記細胞を固定および／または透過処理する工程；
ｄ．前記細胞に対して細胞遺伝学的技術を実施する工程；および
ｅ．前記細胞に対してイメージングフローサイトメトリーを実施する工程
を含む、方法。 - 細胞解析法であって、
ａ．細胞のマーカーまたは抗原を有する有核細胞を含む単細胞懸濁液を調製する工程；
ｂ．細胞マーカーまたは抗原を抗体染色する工程；
ｃ．前記細胞を固定および／または透過処理する工程；
ｄ．前記細胞に対して細胞遺伝学的技術を実施して、目的の染色体の特徴を検出する、細胞遺伝学的技術を実施する工程；
ｅ．細胞のＤＮＡを染色する工程；および
ｆ．前記細胞に対してイメージングフローサイトメトリーを実施して、工程（ｂ）における抗体の存在および工程（ｄ）で標的にされた目的の染色体の特徴を測定し、定量し、かつ／または同定する、イメージングフローサイトメトリーを実施する工程
を含む、方法。 - 前記細胞のマーカーまたは抗原は、細胞表面マーカーもしくは抗原、細胞質マーカーもしくは抗原、または核マーカーもしくは抗原である、請求項１または２に記載の方法。
- 有核細胞の単細胞懸濁液を調製する工程が、血液試料もしくは骨髄試料内の赤血球を溶解することまたは組織試料中の細胞外基質および細胞間接着の酵素消化を含む、請求項１または２に記載の方法。
- 前記有核細胞試料を調製する工程が、調製された試料を適切な緩衝液で緩衝化することを含む、請求項４に記載の方法。
- 赤血球を溶解することまたは細胞外基質を消化することが、溶解または消化が生じる条件下で前記試料をインキュベートする工程を含む、請求項４または請求項５に記載の方法。
- 前記単細胞懸濁液を調製する工程が、（ａ）前記試料を遠心分離し、上清を除去すること、または（ｂ）余剰細胞外基質を除去するのに適切な条件下で前記細胞を洗浄することのうちの少なくとも１つを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記細胞マーカーを抗体染色する工程が、免疫表現型検査の抗体調製物を使用して前記細胞を染色することを含む、かつ／または
前記細胞を固定および透過処理する工程が、ホルムアルデヒドおよび非イオン性界面活性剤を前記試料に添加して、前記試料を固定および透過処理する工程を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。 - 前記細胞遺伝学的技術が、
前記細胞のＤＮＡを変性させる工程、および／または
リン酸緩衝生理食塩水中で前記細胞をクエンチする工程、および／または
前記細胞を核ＤＮＡ染色する工程、
の１つまたは複数の工程を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。 - 前記細胞遺伝学的技術を実施する工程が、細胞を遠心分離する工程、上清を除去する工程、前記細胞を再懸濁する工程を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記細胞遺伝学的技術が、前記細胞内のＤＮＡを少なくとも１つのＦＩＳＨプローブとハイブリッド形成させる工程を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ハイブリッド形成物を、ストリンジェンシー溶液で洗浄して非結合プローブを除去する、請求項１１に記載の方法。
- イメージングフローサイトメトリーを、工程（ｂ）または（ｄ）の結果を測定するのに適切なレーザーを使用した励起レーザーおよび発光の捕捉を用いて実施する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
- イメージングサイトメトリーの実施が、前記試料中の少なくとも１０，０００個の細胞を記録することを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
- イメージングフローサイトメトリーから得られたデータを解析する工程をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
- データ解析が、蛍光強度が高い細胞を排除することによって蛍光強度ヒストグラム中の有核非分裂細胞を同定することを含む、請求項１５に記載の方法。
- データ解析に基づいて医学的状態を診断、予後診断、またはモニタリングすることを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
- 請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法の構成要素のうちの１つまたは複数、および請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法におけるキットの使用に関する説明書を含む、キット。
- （ａ）標準的なフローサイトメトリーに適切な少なくとも１つの抗原マーカー検出システム、および（ｂ）１つまたは複数のＦＩＳＨプローブを含むキットであって、（ａ）および（ｂ）の各々が、１つまたは複数の容器に、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法における（ａ）および（ｂ）の使用に関する説明書と組み合わせて存在し、任意選択的に、前記キット中に存在するマーカー検出システムが、細胞試料の免疫表現型検査に適切な抗体である、請求項１８に記載のキット。
- 請求項１または２に記載の方法を実施する工程を含む、細胞解析法であって、
（Ａ）前記方法は、
ａ．細胞試料から単細胞懸濁液を調製する工程；
ｂ．前記懸濁液を抗体染色して１つまたは複数の細胞マーカーを検出する工程；
ｃ．前記細胞を固定する工程；
ｄ．前記懸濁液中の細胞のＤＮＡを変性させる工程；
ｅ．少なくとも１つのＦＩＳＨプローブを工程（ｄ）由来の細胞ＤＮＡにハイブリッド形成させる工程；
ｆ．前記細胞に対してイメージングフローサイトメトリーを実施して、明視野画像、蛍光画像、ならびに免疫表現型検査マーカーおよびＦＩＳＨプローブの強度測定値に関するデータを取得する、イメージングフローサイトメトリーを実施する工程；および
ｇ．前記データを解析する工程であって、任意選択的に、前記データの解析は、医学的状態の有無を診断、予後診断、またはモニタリングするために適している、解析する工程、
を含むか、または、
（Ｂ）前記方法は、
ａ．有核単細胞懸濁液を調製する工程；
ｂ．（ａ）で生成された懸濁液由来の細胞表面マーカー、細胞質マーカー、または核マーカーを抗体染色し、染色された抗体を検出する工程；
ｃ．同一工程において懸濁液中の細胞を固定および透過処理する工程；
ｄ．ＤＮＡを変性させ、非特異的プローブＤＮＡ結合をブロッキングし、ＦＩＳＨプローブを試験中の細胞内の核物質とハイブリッド形成させる工程；
ｅ．細胞に対してイメージングフローサイトメトリーを実施する工程；および
ｆ．工程（ｂ）および（ｅ）由来の結果に基づいて工程（ｅ）由来のデータを解析する工程であって、任意選択的に、前記解析は、医学的状態の有無を診断するために適している、解析する工程、
を含む、方法。 - ａ．解析すべき細胞集団を選択し、細胞集団の抗原プロフィールを、フローサイトメトリーを使用して前記集団を免疫表現型検査することによって解析して、測定または評価されるべき前記状態に関連する１つまたは複数の生物学的マーカーまたはパラメーターの有無を検出する工程、および
ｂ．前記集団を前記細胞を可視化してカウントすることが可能な少なくとも１つのＦＩＳＨプローブに供して、特定の細胞をその正確な表現型によって同定し、表現型によって同定された細胞のゲノム異常を同定する工程
を含む方法であって、
前記方法は請求項１または２に記載の細胞解析法を実施する工程を含み、
任意選択的に、前記方法は細胞集団における診断、予後診断、またはモニタリングのための方法である、方法。
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