JP2021500341A - 肺組織への標的化薬物及び遺伝子送達のためのシンシチンの使用 - Google Patents
肺組織への標的化薬物及び遺伝子送達のためのシンシチンの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021500341A JP2021500341A JP2020521924A JP2020521924A JP2021500341A JP 2021500341 A JP2021500341 A JP 2021500341A JP 2020521924 A JP2020521924 A JP 2020521924A JP 2020521924 A JP2020521924 A JP 2020521924A JP 2021500341 A JP2021500341 A JP 2021500341A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- lung
- syncitin
- particles
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0091—Purification or manufacturing processes for gene therapy compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
- A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
- A61K9/0078—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a nebulizer such as a jet nebulizer, ultrasonic nebulizer, e.g. in the form of aqueous drug solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15023—Virus like particles [VLP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/15045—Special targeting system for viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
- C12N2810/6045—RNA rev transcr viruses
- C12N2810/6054—Retroviridae
Abstract
Description
- 欠損/異常遺伝子に対する機能的置換遺伝子を提供することを目的とした療法であって、これは、置換又は付加遺伝子療法であり;
- 遺伝子又はゲノム編集を目的とした療法:そのような場合、機能的遺伝子が発現されるように配列を修正する、又は欠損/異常遺伝子の発現若しくは調節を修飾するための必要なツールを細胞に提供することが目的であって、これは、遺伝子編集療法である。
- 家族型の慢性閉塞性肺疾患(COPD)に関与する遺伝子、例えば(Seifart C、Plagens A. Genetics of chronic obstructive pulmonary disease. International Journal of Chronic Obstructive pulmonary Disease. 2007;2(4):541〜550頁を参照のこと):
- アルファ1-アンチトリプシン(A1AT)をコードする遺伝子SERPINA1、この欠損は、COPDの1つの証明された遺伝的危険因子である。A1ATは分泌され、セリンプロテアーゼ阻害剤である。該阻害剤の標的には、エラスターゼ、プラスミン、トロンビン、トリプシン、キモトリプシン、及びプラスミノーゲン活性化因子が挙げられる。A1ATは、好中球エラスターゼに対する重要な防御を提供する急性期タンパク質である。この遺伝子の欠損は、肺気腫又は肝臓疾患を引き起こし得る。同じタンパク質をコードするいくつかの転写バリアントがこの遺伝子について見出されている。
- α1-抗キモトリプシン(SERPINA3)をコードする遺伝子SERPINA3は、カテプシンG及び肥満細胞キマーゼを可逆的に阻害することができる。SERPINA3遺伝子では、2つの機能的SNPが低いα1-抗キモトリプシンレベル及びCOPDと関連している;
- マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)をコードする遺伝子、例えば、MMP9、MMP1及びMMP2等。
- 肺及び他の器官を覆っている上皮細胞の表面で見出された塩化物トランスポーターをコードするCFTR遺伝子。CFTR遺伝子欠損は、気管支拡張を特徴とする最も一般的な致死的遺伝子疾患の1つ、嚢胞性線維症(CF)をもたらす。CFは多量のねばねばした粘液を身体に生じさせ、肺を塞ぎ、感染をもたらし、及び膵臓を遮断し、食べ物を消化するのに必要とされる消化酵素が腸に届くのを止める。数百の変異がこの遺伝子で見出されており、その全てが、上皮細胞による塩化物、及び副次的にナトリウムの輸送不全をもたらす。その結果、塩化ナトリウム(塩)の量が体分泌で増加する。CFの疾患症状の重症度は、患者に受け継がれた特定の変異の特徴的影響に直接関係する。
- 肺胞を囲んでいる組織及び空間に影響を与える100を超える種々の肺障害の寄せ集めである、肺間質性肺疾患(ILD)及びびまん性実質性肺疾患(DLPD)等の原発性肺病理による障害に関与する欠損遺伝子。いくつかの変異は、原発性肺病理又は肺を含む多臓器の病理による障害に関係している(Devine MS、Garcia CK. Genetic Interstitial Lung Disease. Clinics in Chest Medicine. 2012 ;33(1):95〜110頁、又はSteele MP、Brown KK. Genetic Predisposition to Respiratory Diseases: Infiltrative Lung Diseases. Respiration; international review of thoracic diseases. 2007;74(6):601〜608頁、及びSelman Mら Surfactant protein A and B genetic variants predispose to idiopathic pulmonary fibrosis. Hum Genet. 2003;113:542〜550頁、又はNogee LMら Allelic heterogeneity in hereditary surfactant protein B (SP-B) deficiency. Am J Respir Crit Care Med. 2000;161:973〜981頁を参照のこと)。例えば:
サーファクタント機能不全に関連する遺伝子:
- SFTPB遺伝子、この変異は欠如したSP-Bと関連しており、新生児及び乳児における重度の呼吸促迫であるサーファクタント代謝機能不全1患者で見出されている;
- SFTPC遺伝子、この変異はSP-Cの欠如及びERストレスと関連しており、新生児及び乳児における重度の呼吸促迫であるサーファクタント代謝機能不全2患者で見出されている;
- SFTPA2遺伝子、この変異は肺胞上皮のERストレスと関連しており、家族性肺線維症患者で見出されている;
- SFTPD遺伝子、この変異はCOPD及び喘息におけるアトピーと関連している(Fakihら、Respirology、2017 Sep 28.doi/ 10.1111/resp.13193);
- ABCA3遺伝子、この変異は層板小体へのリン脂質の輸送不全と関連しており、新生児及び乳児における重度の呼吸促迫であるサーファクタント代謝機能不全3患者で見出されている;
- CSF2RA遺伝子(この変異はGM-CSFシグナル伝達不全と関連している)、CSF2RBは、新生児及び乳児における重度の呼吸促迫であるサーファクタント代謝機能不全4患者で見出されている;
- SLC34A2遺伝子、この変異は肺胞腔からのリン酸クリアランスの低下と関連しており、肺胞微石症患者で見出されている。このタンパク質は、身体のいくつかの器官及び組織で見出すことができるが、主に肺の数百万個の小さな空気嚢(肺胞)、特にサーファクタントを産生する肺胞II型細胞にある。
- TERT遺伝子、この変異はテロメア短縮と関連しており、家族性肺線維症患者で見出されている;
- TERC遺伝子、この変異は家族性肺線維症患者で見出されている;
- DKC1、TERC、TERT、TINF2遺伝子、これらの変異はテロメア短縮と関連しており、先天性角化異常症に関係している;
- NF1遺伝子、この変異は、I型の神経線維腫症患者における腫瘍抑制因子の機能の喪失と関連している;
- TSC1遺伝子(この変異はLAM細胞の増殖と関連している)及びTSC2(この変異は結節性硬化症/LAM患者で見出されている);
- FLCN遺伝子、この変異は卵胞ホルモンの欠如と関連しており、バート-ホッグ-デュベ症候群患者で見出されている;
- HPS1遺伝子(この変異は細胞質小器官の欠損と関連している)及びHSP4遺伝子(この変異はヘルマンスキー-パドラック症候群患者で見出されている);
- GBA遺伝子、この変異は酸性β-グルコシダーゼの欠損と関連しており、ゴーシェ病、I型患者で見出されている;
- SMPD1遺伝子、この変異は酸性スフィンゴミエリナーゼの欠損と関連しており、ニーマン-ピック病、B型患者で見出されている;
- SLC7A7遺伝子、この変異はカチオン性アミノ酸輸送の欠損と関連しており、リジン尿性タンパク質不耐症患者で見出されている;
- 原発性肺高血圧症に関与する欠損遺伝子(高肺動脈圧、血管リモデリング及び早死を引き起こす)、例えば:
- SMAD9遺伝子(SMADファミリーのメンバーをコードする)、TGF-ベータファミリーメンバーからのシグナルを伝達する。コードされたタンパク質は、骨形成タンパク質によって活性化され、SMAD4と相互作用する。SMAD9遺伝子のヘテロ接合性切断変異(R294X)が、原発性肺高血圧症2(PPH2)患者で同定されている。
- KCNK3遺伝子、4-膜貫通/2-ポアドメインスーパーファミリーでpH感受性カリウムチャネルをコードする。E182K、V221L、G97R及びG203Dを含む、高度に保存された残基のいくつかの置換が、原発性肺高血圧症4(PPH4)患者で同定された。
- CAV1遺伝子、この変異は原発性肺高血圧症3(PPH3)と関連している。
a)少なくとも1つのプラスミドが、目的とする異種遺伝子、レトロウイルスrev、gag及びpol遺伝子、及びERVシンシチンをコードする核酸を含む、前記少なくとも1つのプラスミドを適当な細胞株にトランスフェクトする工程と;
b)a)で得られたトランスフェクト細胞が、それぞれERVシンシチンで偽型化され、及び目的とする異種遺伝子をパッケージングする安定なレンチウイルス粒子を産生するように、該細胞をインキュベートする工程と;
c)b)で得られた安定なレンチウイルス粒子を回収し、濃縮する工程と
を含む方法によって得ることができる。
- 目的とする異種遺伝子、
- rev、gag及びpol遺伝子、並びに
- 以前に記載されているERVシンシチンをコードする、及びとりわけHERV-W、HERV-FRD又はマウスシンシチンAをコードする核酸
を含む。
- 第1のプラスミドは目的とする遺伝子を含み、
- 第2のプラスミドはrev遺伝子含み、
- 第3のプラスミドは、gag及びpol遺伝子を含み、並びに
- 第4のプラスミドは、以前に記載されているERVシンシチンをコードする、及びとりわけHERV-W、HERV-FRD又はマウスシンシチンAをコードする核酸を含む。
材料及び方法
細胞株
ヒト胎児腎臓293T細胞を、10%の熱不活性化ウシ胎仔血清(FCS)(Life Technologies社)を補充したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM+グルタマックス)(Life Technologies社、サントーバン、フランス)で、37℃、5% CO2で培養した。
a. マウスシンシチンAを発現するプラスミドの生成。
マウスシンシチンA cDNAを、標準的な手法を使用してpCDNA3プラスミドにクローニングした。
b. Syn-A偽型化レンチウイルスベクターの作製。
HEK293T細胞を、リン酸カルシウムを使用して以下の4つのプラスミド(フラスコあたりの量)で同時トランスフェクトした: HIV-1 gagpol遺伝子を発現するpKLgagpol(14.6μg)、HIV-1 rev配列(5.6μg)、pcDNA3.1SynA(20μg)を発現するpKRev、及び遺伝子導入プラスミド(脾フォーカス形成ウイルス(SFFV)プロモーターの制御下でルシフェラーゼ2導入遺伝子を発現するPRRL-SFFV LucII、又は脾フォーカス形成ウイルス(SFFV)の制御下、2シストロン性カセットでルシフェラーゼ2導入遺伝子及び切断型の神経成長因子受容体(NGFR)導入遺伝子を発現するpRRL-SFFV-LucII-2A-ΔNGFR-WPREのどちらか)(22.5μg)。24時間後、細胞を洗浄し、新鮮な培地追加する。翌日、培地を回収し、遠心分離1500rpm、5分間によって清澄化し、0.45μm濾過し、次いで超遠心分離50000gによって12℃、2時間濃縮し、使用されるまで-80℃で保管する。VSVg偽型化粒子も、報告されているような一過性のトランスフェクションによって作製した(Mertenら、Human gene therapy、2011、22、343〜356頁)。
c. シンシチンA偽型化LVの滴定
物理的力価をp24 ELISA(Alliance(著作権)HIV-1 Elisaキット、Perkin-Elmer社、ヴィルボン/イヴェット、フランス)によって決定し、その後、他のタイプのLVについて以前に報告されているように(Charrierら、Gene therapy、2011、18、479〜487頁)、p24の1fgがLVの12ppに相当すると仮定して(Farsonら、Hum Gene Tuer. 2001、20、981〜97頁)、物理的粒子(pp)としての力価を計算した。感染性力価を、マウスリンパ腫細胞株A20を使用して感染性ゲノム力価(IG/mL)として決定した。ベクターの連続希釈物を、ベクトフシン-1(登録商標)(12μg/μL)の存在下でA20細胞に6時間添加した。培地を新しくし、細胞を7日間インキュベートし、ゲノムDNAを得て、プライマー: PSIフォワード5'CAGGACTCGGCTTGCTGAAG3'(配列番号7)、PSIリバース5'TCCCCCGCTTAATACTGACG3'(配列番号8)、及びFAM(6-カルボキシフルオレセイン)で標識したPSIプローブ5'CGCACGGCAAGAGGCGAGG3'(配列番号9)、Titinフォワード5'AAAACGAGCAGTGACGTGAGC3'(配列番号10)、Titinリバース5'TTCAGTCATGCTGCTAGCGC3'(配列番号11)、及びVICで標識したTitinプローブ5'TGCACGGAAGCGTCTCGTCTCAGTC3'(配列番号12)を用いたiCycler 7900HT(Applied Biosystems社)での二本鎖qPCRを使用して細胞あたりのベクターコピー数を測定する。
マウスシンシチンを、インビボ適用のためのHIV-1由来LVに対する可能性のある新たな偽型として調査した。シンシチンAは、ヒトシンシチン1及び2の非オルソログであるが、機能的に類似したマウスの対応物である(Dupressoirら、Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America、2005、102、725〜730頁)。
材料及び方法
動物
オス又はメスの6週齢C57/Bl6アルビノマウスに100μLのLV-SynA(3.105ng p24当量)を、又は対照マウスには尾静脈に100μLのPBSを注射した。マウスを異なる時点で生物発光によって分析し、注射後21日時点で頸部伸長によって屠殺する。屠殺後、肺を除去する。右肺を新鮮なうちに使用して細胞を選別し、qPCRを実現する。左肺をイソペンタンで凍結し、クリオスタット切片及び免疫組織染色を行うために-80℃で保存する。
C57BL/6マウスをケタミン(120mg/kg)及びキシラジン(10mg/kg)により麻酔し、100μL(150μg/mL)のD-ルシフェリン(Interchim社、参照番号FP-M1224D)を腹腔内投与し、10分後にCCDカメラISO14N4191(IVIS Lumina、Xenogen社、MA、USA)で撮像した。10cm視野、ビニング(解像度)係数4、1/fストップ及びオープンフィルターを使用して、3分間の生物発光画像を得た。関心領域(ROI)を手動で定義し(どの場合も標準的な面積を使用)、リビングイメージ3.2ソフトウェア(Xenogen社)を使用してシグナル強度を計算し、1秒あたりの光子として表した。バックグラウンド光子束を、ベクターを投与しなかった対照マウスに描かれたROIから定義した。
肺をコラゲナーゼIV(1mg/mL、Invitrogen社)及びDNase I(50μg/mL、Roche社)で灌流し、次いで37℃で45分間インキュベートする。反応をEDTA(100mM)の添加によって停止する。細胞を次いで破砕(dilaceration)によって単離する。肺細胞を、抗CD45-FITC抗体(BD Pharmingen社、参照番号553080)及び抗CD31-BV510抗体(BD Horizon社、参照番号563089)で染色する。細胞を次いでMoFlo(登録商標)Astrios(Beckman Coulter社)で選別する。
Wizard(登録商標)ゲノムDNA Purification Kit(Promega社、参照番号A1125)を使用して、ゲノムDNAを細胞から抽出した。TitinMex5を正規化遺伝子として用いて、多重qPCRをPSIプロウイルス配列又はWPREプロウイルス配列のどちらかで行った。以下のプライマー及びプローブを0.1μMの濃度で使用した:
Taq Phusion(Thermo Scientific社、参照番号F-549S)を使用するPCRを、肺由来のgDNAで行う。以下のプライマーを0.1μMの濃度で使用する:
Psi-F: 5' AGCCTCAATAAAGCTTGCC 3'(配列番号19)
RRE-R: 5' TCTGATCCTGTCGTAAGGG 3'(配列番号20)
PCRプログラムは、98℃ 30秒→(98℃ 10秒、61℃ 30秒、72℃ 45秒)×35→72℃ 5分である。PCR産物を電気泳動用の2%アガロースゲルに入れ、予測バンドを489bpとする。
マウス肺のクリオスタット切片(12μm)を4%パラホルムアルデヒド溶液で10分間固定し、次いでPBS 1×で3回洗浄する。切片を、次いで、一次抗体として1/100で希釈したポリクロナール抗体抗ルシフェラーゼ(Promega社、参照番号G7451)、及び二次抗体として1/1000で希釈したロバ抗ヤギAlexaFluor 594(Invitrogen社、参照番号A11058)で染色する。一次抗体を湿度チャンバーで4℃、一晩インキュベートし、二次抗体を湿度チャンバーで2時間インキュベートする。
目的は、静脈内全身送達後のシンシチンA偽型化LVの体内分布を決定することであった。導入遺伝子ルシフェラーゼは生物発光であり、経時的に動的検出を可能にするため、これを使用した。Luc2をコードする2つの異なるLVを、4つの異なるマウスインビボプロトコールでテストした。一方のLVはLuc2導入遺伝子のみをコードし(LV-SA-LucII)、他方は、2シストロン性カセットにLuc2及びdNGFRをコードした(LV-SA-LucII2AdNGFR)。2シストロン性ベクターはLuc2の発現力がはるかに弱い。したがって、2シストロン性ベクターは、器官の形質導入をqPCRによって確認するのに有用であるが、生物発光による導入遺伝子の発現は最適ではなく、したがって定量化されない。対照として、LV-VSVG Luc2を使用した。マウスでの4つの異なるインビボプロトコールを行なってベクターを注射し、形質導入を経時的に測定した。ベクターの用量は、100μL容量の注射で使用することができる最大用量であり、マウス1匹あたり約3×105ng p24又は5×105IGに相当する。導入遺伝子発現をインビボ生物発光検出によって異なる時点(注射後1、2及び3週間)でマウスにおいて測定し、異なる手法で導入遺伝子発現を確認するために、注射3週間後、ルシフェラーゼ免疫組織化学検出を数匹のマウスで行う。注射後3週間で形質導入をqPCRによって測定した。
材料及び方法
ELISPOTによる免疫応答の決定
1μMのDby又はUtyペプチドを含む又は含まない1ウェルあたり106脾臓細胞をIFN-γ酵素結合免疫スポットプレート(MAHAS45、Millipore社、モルスアイム、フランス)で培養して、IFN-γ酵素結合免疫スポットアッセイ(ELISPOT)を行った。陽性対照として、細胞をコンカナバリンA(Sigma社、リヨン、フランス)(5μg/ml)で刺激した。+37℃での培養の24時間後、プレートを洗浄し、ビオチニル化抗IFNγ抗体(eBiosciences社)、ストレプトアビジン-アルカリホスファターゼ(Roche Diagnostics社、マンハイム、ドイツ)、及びBCIP/NBT(Mabtech社、レジュリス、フランス)を用いてIFNγの分泌を明らかにした。スポットを、AIDリーダー(Cepheid Benelux社、ルーヴェン、ベルギー)及びAID ELISpot Reader v6.0ソフトウェアを使用してカウントした。スポット形成単位(SFU)は、非パルス脾臓細胞で得られたバックグラウンド値を差し引いた後に表される。
刺激培地[培地、Uty(2μg/mL)、Dby(2μg/mL)、又はコンカナバリンA(5μg /mL)]を播種し、106脾臓細胞/ウェルを添加した。+37℃での培養の36時間後、上清を滴定まで-80℃で凍結した。サイトメトリービーズアレイを、BD Biosciencesフレックスキット(IL-6、IFN-γ、TNFα、及びRANTES)を用いて行った。簡単には、明確に異なる蛍光強度を有し、サイトカイン特異的捕捉抗体でコーティングされた捕捉ビーズ集団を一緒に混合した。次に、ビーズのビーズミックス25μLを分配し、及び25μLの各試料(上清)を添加した。室温でのインキュベーションの1時間後、サイトカイン特異的PE抗体を一緒に混合し、25μLのこのミックスを添加した。室温でのインキュベーションの1時間後、ビーズを1mLの洗浄緩衝液で洗浄し、データをLSRIIフローサイトメーター(BD Biosciences社)で取得した。FCAPソフトウェア(BD Biosciences社)を分析に使用した。
全身性投与後のLV-SynAの免疫原性の低下を、VSVgで偽型化されたLV(LV-VSVg)を用いる比較アッセイでテストした。これらの試験では、使用した導入遺伝子は、オスHY遺伝子配列でタグ付けされたGFPからなる融合タンパク質をコードするGFP-HYであった。導入遺伝子が抗原提示細胞によって提示されると、Dby及びUtyペプチドはCD4及びCD8 T細胞に提示され、導入遺伝子特異的免疫応答の検出が可能になる。結果は、GFP-HYをコードするLV-SynAベクターのマウスへの全身投与、静脈内(IV)投与が、LV-VSVgと比べてより少ない及び極めて低いレベルの抗導入遺伝子CD4及びCD8 T細胞免疫応答(図6A)、並びにより低いレベルのサイトカイン(図6B)をもたらすことを示している。これらの結果は、シンシチン偽型化ベクターによる遺伝子送達後の肺で導入遺伝子の長期発現を達成する可能性と一貫性を持つ。結果はまた、導入遺伝子の反復投与をこれらのベクターにより達成できることも示唆している。結果はまた、高レベルの更なる免疫応答又は炎症を誘発することなく、シンシチン偽型化ベクターを炎症状態で安全に使用できることも示唆している。
この試験の第1の目的は、ヒト肺細胞が、ヒト又はマウスシンシチン(シンシチンA、B、1又は2)で偽型化されたレンチウイルスベクターを用いて形質導入され得るかどうかを評価することであった。この試験の第2の目的は、シンシチンAで偽型化されたレンチウイルスベクターによる異なるヒト及びマウス細胞株並びにマウス初代細胞の形質導入が、標的細胞でのLy6e発現と相関しているか否かを決定することであった。
LV-Synによるヒト初代小気道上皮細胞及びヒト肺細胞株形質導入
Luc2又はΔNGFRをコードし、及びSyn-A、-B、-1又は-2で偽型化されたレンチウイルスベクターをこれらの実験に使用した。12μg/mLのVectofusin-1(登録商標)(Miltenyi Biotec社、参照番号130-111-163)の存在下、1種類の濃度又は2種類の濃度のLV-SynAレンチウイルス粒子(1×105又は1×105及び5×105感染性ゲノム(IG)/mL(A20細胞で定義した感染性ゲノム単位))と、37℃で1×105MRC5細胞(ヒト肺胎児細胞、ECACC、参照番号84101801)、WI26VA4細胞(SV40形質転換ヒト肺細胞、ATCC、参照番号CCL-95.1)、又はヒト小気道上皮細胞(初代小気道上皮細胞;正常、ヒト(ATCC(登録商標)PCS301010(商標))を培養して、ベクターをテストした。陽性対照として、細胞を、Vectofusin-1の存在下、1×106IG(HCT116細胞/mLで定義した感染性ゲノム単位)のLV-VSVgとも並行して培養した。37℃での形質導入の6時間後、培養培地を変更し、新鮮な培地(DMEM+10%胎仔ウシ血清+1%ペニシリン-ストレプトマイシン+1%グルタミン)を細胞に添加して感染を停止した。
異なるヒト細胞株(HEK293T、HCT116、HT1080、WI26VA4、Jurkat及びRAJI)、マウス細胞株(A20IIA、C2C12、NIH/3T3)、並びにC57BL/6マウスの肺、脾臓及び骨髄由来の全細胞からのmRNAを、Qiagen社製RNeasy(登録商標)ミニキットを使用して抽出した。Thermofischer社製Verso cDNA合成キットを使用して、mRNAの逆転写を行った。以下のプライマーを使用してcDNAでqPCRを行なった: mLy6eフォワードプライマー5' CGGGCTTTGGGAATGTCAAC 3' (配列番号21)、mLy6eリバースプライマー5' GTGGGATACTGGCACGAAGT 3' (配列番号22)、hLy6eフォワードプライマー5' AGACCTGTTCCC CGGCC 3' (配列番号23)、hLy6eリバースプライマー5' CAGCTGATGCCCATGGAAG 3' (配列番号24)、POリバースプライマー5' CTCCAAGCAGATGCAGCAGA 3' (配列番号25)、及びPOフォワードプライマー5' ACCATGATGCGCAAGGCCAT 3' (配列番号26)。POは、ウェアハウス遺伝子(warehouse gene)として使用した。存在量を式存在量=2-ΔCtを用いて計算する。
LV-Syn(-A、-B、-1、-2)によるヒト初代小気道上皮細胞及びヒト肺細胞株形質導入
マウスシンシチンAで偽型化されたレンチウイルスベクター(LV-SynA)に感染後のMRC5及びWI26VA4細胞の形質導入のレベルを、2つの独立した形質導入実験で測定した。マウスシンシチンA(LV-SynA)、マウスシンシチンB(LV-SynB)、ヒトシンシチン1(LV-Syn1)、又はヒトシンシチン2(LV-Syn2)で偽型化されたレンチウイルスベクターに感染後のMRC5細胞の形質導入のレベルも、2つ又は3つの独立した形質導入実験で測定した。VSVgで偽型化され、高濃度で使用された対照レンチウイルスベクター(LV-VSVg)は、使用した実験条件で細胞が形質導入され得ることを確認した。
ΔNGFRをコードするLV-シンシチンAベクターによるmLy6e及びhLy6e mRNAの発現のレベル並びに形質導入のレベルを異なる細胞株で比較した。
Claims (15)
- 肺疾患の予防及び/又は治療において使用するための、シンシチンタンパク質に結合した少なくとも1つの治療薬を含む、肺組織を標的とする医薬組成物。
- シンシチンタンパク質が、ヒト又はマウスシンシチンであり、好ましくは、シンシチンが、ヒトシンシチン1、ヒトシンシチン2、マウスシンシチンA及びマウスシンシチンBからなる群から選択される、請求項1に記載の使用のための医薬組成物。
- 治療薬及びシンシチンタンパク質が、リポソーム、エクソソーム、ウイルス粒子及びウイルス様粒子からなる群から好ましくは選択される粒子に組み込まれる、請求項1又は2に記載の使用のための医薬組成物。
- シンシチンタンパク質が、粒子の表面に提示される、請求項3に記載の使用のための医薬組成物。
- 粒子が、シンシチンタンパク質で偽型化されたレンチウイルス又はレンチウイルス様粒子である、請求項4に記載の使用のための医薬組成物。
- 薬物が、治療的遺伝子、並びに治療的抗体又は抗体断片及びゲノム編集酵素等の治療的タンパク質又はペプチド、並びに干渉RNA、ゲノム編集のためのガイドRNA及びエクソンスキップすることができるアンチセンスRNA等の治療的RNAをコードする遺伝子を含む、治療のための目的とする遺伝子;抗菌薬、抗ウイルス薬、抗真菌薬又は抗寄生虫薬等の抗感染薬;抗炎症薬;並びに免疫調節薬、免疫抑制薬、抗アレルギー薬、抗ヒスタミン薬及び免疫刺激薬等の免疫治療薬からなる群から選択される、請求項1から5のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 薬物が、ウイルスベクター粒子にパッケージングされた目的とする遺伝子である、請求項3から6のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 目的とする遺伝子が、シンシチンタンパク質で偽型化されたレンチウイルスベクター粒子にパッケージングされる、請求項7に記載の使用のための医薬組成物。
- 肺疾患が、肺に影響を与える遺伝性疾患;肺に影響を与える感染症;肺の炎症性疾患又は自己免疫疾患、喘息、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、肺浮腫、肺気腫又は肺高血圧、急性呼吸促迫症候群、塵肺症、間質性肺疾患又はびまん性実質性肺疾患、肺移植拒絶反応の予防並びに新生児及び未熟児における肺の障害又は疾患の予防からなる群から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 肺疾患の遺伝子療法に使用するための、請求項1から9のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 目的とする遺伝子が、SERPINA3、SERPINA1、MMP、特にMMP1、MMP2及びMMP9、CFTR、SFTPB、SFTPC、ABCA3、CSF2RA、TERT、TERC、SFTPA2、SLC34A2、DKC1、TERC、TERT、TINF2、NF1、TSC1、FLCN、STAT3、HPS1、GBA、SMPD1、SLC7A7、SMAD9、KCNK3並びにCAV1遺伝子、並びにそれらの機能的バリアントからなる群から選択される、請求項6から10のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 注射、吸入又は気管支肺胞洗浄による投与のための、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 遺伝子SERPINA3、SERPINA1、MMP、特にMMP1、MMP2及びMMP9、CFTR、SFTPB、SFTPC、ABCA3、CSF2RA、TERT、TERC、SFTPA2、SLC34A2、DKC1、TERC、TERT、TINF2、NF1、TSC1、FLCN、STAT3、HPS1、GBA、SMPD1、SLC7A7、SMAD9、KCNK3、CAV1並びにそれらの機能的バリアント、並びに治療的RNAが前記リストの遺伝子を標的とする、干渉RNA、ゲノム編集のためのガイドRNA及びエクソンスキップすることができるアンチセンスRNA等の治療的RNAをコードする遺伝子を含む群から選択される目的とする遺伝子をパッケージする、シンシチンタンパク質で偽型化されたウイルス粒子を含む、肺組織を標的とする医薬組成物。
- ウイルス粒子が、レンチウイルスベクター粒子である、請求項13に記載の医薬組成物。
- 干渉RNA、ゲノム編集のためのガイドRNA及びエクソンスキップすることができるアンチセンスRNA等の治療的RNAであって、SERPINA3、SERPINA1、MMP、特にMMP1、MMP2及びMMP9、CFTR、SFTPB、SFTPC、ABCA3、CSF2RA、TERT、TERC、SFTPA2、SLC34A2、DKC1、TERC、TERT、TINF2、NF1、TSC1、FLCN、STAT3、HPS1、GBA、SMPD1、SLC7A7、SMAD9、KCNK3並びにCAV1を含む遺伝子の群から選択される目的とする遺伝子を標的とする前記治療的RNAをパッケージする、シンシチンタンパク質で偽型化されたウイルス様粒子、好ましくはレンチウイルス様粒子を含む、肺組織を標的とする医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17306447 | 2017-10-20 | ||
EP17306447.8 | 2017-10-20 | ||
PCT/EP2018/078809 WO2019077150A1 (en) | 2017-10-20 | 2018-10-19 | USE OF SYNCYTIN TO TARGET A MEDICINAL PRODUCT AND GENE ADMINISTRATION TO PULMONARY TISSUE |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021500341A true JP2021500341A (ja) | 2021-01-07 |
JP7208231B2 JP7208231B2 (ja) | 2023-01-18 |
Family
ID=60413109
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020521924A Active JP7208231B2 (ja) | 2017-10-20 | 2018-10-19 | 肺組織への標的化薬物及び遺伝子送達のためのシンシチンの使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210198636A1 (ja) |
EP (1) | EP3697430A1 (ja) |
JP (1) | JP7208231B2 (ja) |
CN (1) | CN111225682A (ja) |
CA (1) | CA3078103A1 (ja) |
IL (1) | IL273923B1 (ja) |
WO (1) | WO2019077150A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2019343045A1 (en) | 2018-09-18 | 2021-05-13 | Vnv Newco Inc. | ARC-based capsids and uses thereof |
WO2020219713A1 (en) | 2019-04-23 | 2020-10-29 | Case Western Reserve University | Fusogenic particles and related methods for delivering therapeutic agents to cells |
JP2022536364A (ja) * | 2019-06-13 | 2022-08-15 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | 操作されたヒト内在性ウイルス様粒子および細胞への送達のためのその使用方法 |
US11129892B1 (en) | 2020-05-18 | 2021-09-28 | Vnv Newco Inc. | Vaccine compositions comprising endogenous Gag polypeptides |
WO2022206812A1 (zh) * | 2021-03-30 | 2022-10-06 | 南京大学 | 一种用于治疗癌症的rna递送系统 |
WO2022206784A1 (zh) * | 2021-03-30 | 2022-10-06 | 南京大学 | 一种用于治疗肺纤维化的rna递送系统 |
WO2023217904A1 (en) * | 2022-05-10 | 2023-11-16 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Syncitin-1 fusion proteins and uses thereof for cargo delivery into target cells |
WO2024018003A1 (en) * | 2022-07-21 | 2024-01-25 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Extracellular vesicles functionalized with an erv syncitin and uses thereof for cargo delivery |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004087748A1 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Centre National De La Recherche Scientifique | Protein with fusogenic activity, nucleic acid sequences encoding said protein and pharmaceutical compositions comprising the same |
JP2007510412A (ja) * | 2003-10-30 | 2007-04-26 | オックスフォード バイオメディカ (ユーケー) リミテッド | レトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクター |
JP2010535495A (ja) * | 2007-08-03 | 2010-11-25 | インスティチュート・パスツール | レンチウイルス遺伝子導入ベクター及びそれらの医薬品への適用 |
JP2013055941A (ja) * | 2005-10-28 | 2013-03-28 | Dnavec Corp | Rnaウイルスまたはdnaウイルスのスパイクタンパク質でシュードタイプ化したレンチウイルスベクターを用いた気道上皮幹細胞への遺伝子導入 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2797889A1 (fr) | 1999-09-01 | 2001-03-02 | Bio Merieux | Procede de detection de l'expression d'une proteine d'enveloppe d'un retrovirus endogene humain et utilisations d'un gene codant pour cette proteine |
CA2872327A1 (en) * | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Genentech, Inc. | Anti-ly6e antibodies and immunoconjugates and methods of use |
EP3235828A1 (en) * | 2016-04-21 | 2017-10-25 | Genethon | Stable pseudotyped lentiviral particles and uses thereof |
-
2018
- 2018-10-19 CN CN201880067674.XA patent/CN111225682A/zh active Pending
- 2018-10-19 US US16/757,590 patent/US20210198636A1/en active Pending
- 2018-10-19 JP JP2020521924A patent/JP7208231B2/ja active Active
- 2018-10-19 EP EP18785998.8A patent/EP3697430A1/en active Pending
- 2018-10-19 CA CA3078103A patent/CA3078103A1/en active Pending
- 2018-10-19 WO PCT/EP2018/078809 patent/WO2019077150A1/en unknown
- 2018-10-19 IL IL273923A patent/IL273923B1/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004087748A1 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Centre National De La Recherche Scientifique | Protein with fusogenic activity, nucleic acid sequences encoding said protein and pharmaceutical compositions comprising the same |
JP2007510412A (ja) * | 2003-10-30 | 2007-04-26 | オックスフォード バイオメディカ (ユーケー) リミテッド | レトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクター |
JP2013055941A (ja) * | 2005-10-28 | 2013-03-28 | Dnavec Corp | Rnaウイルスまたはdnaウイルスのスパイクタンパク質でシュードタイプ化したレンチウイルスベクターを用いた気道上皮幹細胞への遺伝子導入 |
JP2010535495A (ja) * | 2007-08-03 | 2010-11-25 | インスティチュート・パスツール | レンチウイルス遺伝子導入ベクター及びそれらの医薬品への適用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 75, no. 7, JPN6021027198, 2001, pages 3488 - 3489, ISSN: 0004784724 * |
JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 79, no. 24, JPN6022020773, 2005, pages 15573 - 15577, ISSN: 0004784725 * |
JOURNAL OF VIROLOGY, vol. Vol.91, No.18, e00832-17, JPN6022020772, 5 July 2017 (2017-07-05), ISSN: 0004784727 * |
THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 179, JPN6020043238, 2007, pages 1210 - 1224, ISSN: 0004784726 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7208231B2 (ja) | 2023-01-18 |
EP3697430A1 (en) | 2020-08-26 |
IL273923B1 (en) | 2024-04-01 |
IL273923A (en) | 2020-05-31 |
WO2019077150A1 (en) | 2019-04-25 |
US20210198636A1 (en) | 2021-07-01 |
CA3078103A1 (en) | 2019-04-25 |
CN111225682A (zh) | 2020-06-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7208231B2 (ja) | 肺組織への標的化薬物及び遺伝子送達のためのシンシチンの使用 | |
JP6637444B2 (ja) | レンチウイルスベクター | |
US11014976B2 (en) | Heterologous targeting peptide grafted AAVS | |
Griesenbach et al. | Progress in gene and cell therapy for cystic fibrosis lung disease | |
US20200255859A1 (en) | Cellular models of and therapies for ocular diseases | |
US20200407750A1 (en) | Novel adeno-associated virus (aav) vectors, aav vectors having reduced capsid deamidation and uses therefor | |
US20210123073A1 (en) | Novel adeno-associated virus (aav) vectors, aav vectors having reduced capsid deamidation and uses therefor | |
JP2021530985A (ja) | フソソームの組成物及びその使用 | |
TW201837170A (zh) | 新穎aav媒介的流感疫苗 | |
Gill et al. | The development of gene therapy for diseases of the lung | |
EP3126498A1 (en) | Crispr-based methods and products for increasing frataxin levels and uses thereof | |
JP2024015408A (ja) | 高活性制御エレメント | |
US20200261589A1 (en) | Use of a Syncytin for Targeting Drug and Gene Delivery to Regenerate Muscle Tissue | |
IL296621A (en) | Targeted lipid particles and their preparations and uses | |
McLachlan et al. | Progress in respiratory gene therapy | |
Sitaraman et al. | Gene therapeutics for surfactant dysfunction disorders: targeting the alveolar type 2 epithelial cell | |
WO2020106772A9 (en) | Exosome loaded therapeutics for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis, diabetes mellitus type 1 and type 2, atherosclerotic cardiovascular disease, and alpha 1 antitrypsin deficiency | |
US20220275402A1 (en) | Compositions and methods for in utero gene editing for monogenic lung disease | |
TWI838812B (zh) | 用於治療法布瑞氏症之組合物及方法 | |
WO2023209226A1 (en) | Lentiviral vector | |
WO2023225572A2 (en) | Compositions and methods for efficient in vivo delivery | |
TW202342092A (zh) | 用於改良龐貝病治療之組合物及方法 | |
WO2020043765A1 (en) | Ldlr negative packaging cell line for the production of vsv-g pseudotyped retroviral vector particles or virus particles thereof | |
Enhancer-Blocking | RNA ViRus VectoRs | |
Oakland | Improving lentiviral vector-mediated gene transfer by understanding cellular barriers |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210816 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220525 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220530 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220812 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221125 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221212 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230105 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7208231 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |