JP2021195341A - 皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)糖蜜又はその抽出物と、酒類醸造粕又はその抽出物とを含有し、糖度60〜85の液体である、皮膚常在菌のバランス改善剤。
(2)総重量に対して1質量%以下の防腐剤を含む、(1)に記載の剤。
(3)20℃においてB型粘度計で測定した粘度が2000mPa・s以下である、(1)又は(2)に記載の剤。
(4)皮膚常在菌において、表皮ブドウ球菌の割合を増加させる及び黄色ブドウ球菌の割合を減少させる作用を有する、(1)〜(3)のいずれか一項に記載の剤。
(5)(1)〜(4)のいずれか一項に記載の剤を含有する、液体の皮膚外用剤。
(6)皮膚に塗布したときに、皮膚常在菌における黄色ブドウ球菌の割合を減少させる作用を有する、(5)に記載の皮膚外用剤。
(7)皮膚の炎症を起こしやすい対象者に、皮膚のなめらかさを付与するための(5)又は(6)に記載の皮膚外用剤。
本実施形態において、用語「皮膚常在菌のバランス改善剤」は、健全な皮膚に存在する皮膚常在菌叢を維持し、外部からの病原菌の侵入を防ぐバリア機能を付与する製剤又は組成物である。皮膚常在菌叢のバランスが崩れると、常在菌の過剰増殖や他の有害菌の侵入や増殖が起こり、様々な皮膚症状が誘発される。皮膚常在菌の一つである表皮ブドウ球菌は、病原性の菌、例えば黄色ブドウ球菌や緑膿菌に対して拮抗作用を有し、そのような有害菌の増殖を阻止しうることから、表皮ブドウ球菌の生育を促進する作用は、皮膚常在菌叢のバランス調整剤としての1つの機能であると考えられる。また、表皮ブドウ球菌等の生育には影響を与えず、有害な黄色ブドウ球菌等の生育を抑制するような抗菌作用を有する物質を含む製剤又は組成物であってもよい。本実施形態において、皮膚常在菌のバランス改善は、例えば、皮膚常在菌において、表皮ブドウ球菌の割合を増加させること及び黄色ブドウ球菌の割合を減少させること、が挙げられる。
糖蜜は、例えば、原料(サトウキビ・てん菜)から砂糖を精製するときに出る副産物で、糖分やミネラルなどが含まれている黒褐色で粘度の高い液体で、廃糖蜜・モラセス(molasses)とも言われることがある。又、粗糖(そとう)は、加工段階にある砂糖の一種である。糖蜜の製法は、例えば、途中まで黒砂糖の製法過程と同様な過程でも可能だが、サトウキビ又はてん菜の絞り汁を下処理した後に結晶させ、遠心分離機等を用いて糖蜜(=廃糖蜜)をある程度分離し、残った結晶が粗糖となる、という製法である。この分離される糖蜜を、本発明で用いることができる。なお、糖蜜の由来は、例えば、白下糖、和三盆などが挙げられる。
本実施形態における酒類醸造粕とは、清酒、合成清酒、粉末酒、雑酒、焼酎、料理酒、味醂、果実酒類、ウイスキー類、スピリッツ類、リキュール類、ビール、発泡酒類の醸造粕をいう。尚、酒類醸造粕とは、酒税法に規定する酒類、即ち、清酒、合成清酒、焼酎、味蔀、ビール、果実酒類、ウイスキー類、スピリッツ類、リキュール類及び雑酒の醸造粕で、糖類、デンプン質を含む種々の可食原料を微生物によりアルコール醗酵せしめたものの濾過残渣をいう。又、様々な原料(米、麦、サツマイモ、芋、とうもろこし、こうりやん、ばれいしよ、麦芽、ホップ、葡萄や各種果実、各種穀物等)を微生物等で糖化後、アルコール醗酵を行った後の残渣であればいずれを用いても良い。醸造粕抽出物とは、上記醸造粕を水、メタノール、エタノール等の溶媒により冷浸もしくは温浸し、その後濾過、濃縮した抽出物をいう。
本実施形態において、糖度とは、Brix値を意味する。ここで、Brix値とは、溶液100g中に含まれる可溶性固形分(糖類など)のグラム量を計測する単位である。Brix値は、市販の屈折率計又は糖度計を用いて測定することができる。詳細には、1グラムのショ糖が20℃の水溶液100グラムに溶けているとき、その溶液のBrix(ブリックス)値が1度であるとされ、このショ糖溶液と同じ糖度屈折計の値を示す溶液のBrix値が1度であると定義される。この定義によれば、Brix値は、必ずしも試料溶液中のショ糖の質量百分率のことを意味しない。
さらに本実施形態における剤は、その総質量に対して1質量%以下の防腐剤を含むことが好ましい。ここで、防腐剤は、後述する皮膚外用剤に添加される防腐剤であれば特に限定されないが、例えば皮膚外用剤に添加したときに皮膚刺激を生じたり、べたつきが生じたりといった問題があり、できるだけ使用量の低減が望まれている。本実施形態の剤は、糖度が高いため微生物の増殖が抑制されており、低温保存の場合は防腐剤を添加しなくてもよいが、低濃度の防腐剤の使用で室温保存でも所望の当該液体の防腐性が確保される。そのため、従来の防腐剤量では皮膚刺激を感じる敏感肌の人でも、刺激感を感じることなく使える外用剤組成物を製造することも可能である。したがって、防腐剤を添加する場合の下限濃度に制限はなく、0質量%を超えればよい。上限濃度は1質量%であり、0.5質量%が好ましく、0.1質量%がさらに好ましい。これらの低濃度で防腐作用を有する防腐剤としては、例えば、パラベン類や安息香酸及びその塩などが好ましく、さらに好ましくは安息香酸ナトリウム、である。
本実施形態における皮膚常在菌のバランス改善剤は、常温で流動性がある物質のことであり、ペースト状ないしスラリー状のものを含む。本実施形態における剤は、20℃における粘度が、10000mPa・s以下、好ましくは7000mPa・s以下、好ましくは5000mPa・s以下、好ましくは2000mPa・s以下、更に好ましくは1500mPa・s以下に調整されていることが望ましい。この粘度は、例えば、本実施形態における液体を20℃の条件下で、B型粘度計(例えば、B8M、東京計器株式会社製)を用いてローターNo.2、回転数:12rpmで5分間測定することによって求められる。この液体の粘度の下限は特に限定されないが、多量の糖類を含むため通常は500mPa・s以上となる。液体の粘度が増加するに従って、化粧料組成物や飲食品組成物に添加する際の取り扱いが難しくなるが、本実施形態の液体は、好ましくは粘度が2000mPa・s以下となるように調整されていることで取り扱いがより容易であり、種々の材料と均一に混合することがより可能となる。
本発明の皮膚常在菌のバランス改善剤を化粧品、外用医薬品、医薬部外品等の外用剤組成物とする場合は、糖類又はその抽出物と、酒類の醸造粕又はその抽出物と、を含有する液体と共に、製剤学的に許容される適当な製剤担体を用いて、一般的な皮膚外用剤の形態に調製されて実用される。かかる製剤担体としては、例えば、グリセリン、ワセリン、尿素、ヒアルロン酸、ヘパリン等の保湿剤;PABA誘導体(パラアミノ安息香酸、エスカロール507等)、桂皮酸誘導体(ネオヘリオパン、パルソールMCX、サンガードB等)、サリチル酸誘導体(オクチルサリチレート等)、ベンゾフェノン誘導体(ASL−24、ASL−24S等)、ジベンゾイルメタン誘導体(パルソールA、パルソールDAM等)、複素環誘導体(チヌビン系等)、酸化チタン等の紫外線吸収剤・散乱剤;エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、乳酸、リンゴ酸、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤;サリチル酸、イオウ、カフェイン、タンニン等の皮脂抑制剤;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン等の殺菌・消毒剤;塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸、グアイアズレン、アズレン、アラントイン、ヒノキチオール、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸等の抗炎症剤;ビタミンA、ビタミンB群(B1,B2,B6,B12,B15)、葉酸、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン、ビタミンC、ビタミンD群(D2,D3)、ビタミンE、ユビキノン類、ビタミンK(K1,K2,K3,K4)等のビタミン類;アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、リジン、グリシン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、アルギニン、ピロリドンカルボン酸等のアミノ酸及びその誘導体;レチノール、酢酸トコフェロール、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸、エラグ酸、胎盤抽出液等の美白剤;ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル等の抗酸化剤;塩化亜鉛、硫酸亜鉛、石炭酸亜鉛、酸化亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム等の収斂剤;グルコース、フルクトース、マルトース、ショ糖、トレハロース、エリスリトール、マンニトール、キシリトール、ラクチトール等の糖類;甘草、カミツレ、マロニエ、ユキノシタ、芍薬、カリン、オウゴン、オウバク、オウレン、ジュウヤク、イチョウ葉等の各種植物エキス等の他、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色素等が挙げられる。これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工(例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、pH調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組合わせた処理)を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
本発明の他の実施形態は、上記皮膚外用剤を用いる美容方法に関する。本実施形態の美容方法は、上記皮膚外用剤を被験者に適用することにより、皮膚常在菌のバランスを改善し、肌状態を改善することを特徴とする。適用方法としては、例えば、被験者の所望の部位の皮膚に塗布することである。皮膚への塗布は、例えば1日1回または複数回行ってよい。外用剤の種類に応じて適宜選択することができる。一般に、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤として調製された外用剤として適用する場合には、顔等の皮膚に対し、1日1〜2回程度塗布することが好ましい。本発明の皮膚外用剤は、化粧料としても利用でき、ローション、乳液、美容液、クリーム、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、口紅などに応用できる。本実施形態において、美容方法とは、単に個人的に行われる方法のみならず、美容に関わる商品の提供の際に、顧客にあわせた化粧料の処方として提供され、医師以外の化粧料販売員やエステティシャンにより提供されるものを含む。また、美容に関わる商品の説明書(添付文書等)等においてその商品の使用方法として提供されるものも含む。
糖蜜(ばいこう堂株式会社)100gを250gの精製水(約30℃)に混合・撹拌分散した後、濾過して、糖蜜エキス約300gを得た。
清酒の酒粕(中野BC株式会社)100gを150gの精製水(約30℃)に混合・撹拌分散した後、濾過して、酒粕エキスを約200g得た。
製造例1の糖蜜エキス100gと製造例2の酒粕エキス100gを混合・撹拌分散した後、濾過して、糖蜜酒粕混合エキス約150gを得た。
糖蜜(ばいこう堂株式会社)100gと清酒の酒粕(中野BC株式会社)25gを混合・撹拌分散した後、濾過して、糖蜜酒粕混合エキス約100gを得た。
インビトロにて、表皮ブドウ球菌の生育を促進し黄色ブドウ球菌の生育を抑制する物質をスクリーニングするため、黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌の共培養系を構築した。この共培養に使用した培地及び菌株は以下のとおりである:
・NB液体培地(Nutrient Broth No.2+0.1%NaCl(pH6.0))は、NB培地(関東化学、711067−5 ニュートリエントブイヨンNo.2)とNaClを水に溶解したのち、HClでpHを5.5〜6.5に調整後、オートクレーブ滅菌して使用する。なお、NB培地25gを水1000mlに溶かす割合で、当該溶解を行った。
・NB寒天培地(Nutrient Broth No.2)は、NB培地にAgarが1.5%となるように添加して固化させたもの。
・表皮ブドウ球菌(S.epidermidis):ATCC12228
・黄色ブドウ球菌(S.aureus):ATCC6538
予め、使用する菌の凍結ストックを作製した。この凍結ストックを、NB液体培地を用いて適切に希釈して寒天培地に撒き、コロニー数から、元のストックに含まれる生菌濃度を計算した。およそ109CFU/mLの凍結ストックが得られた。次に、24穴プレートに、NB液体培地を加え、続いて、試験に用いるサンプルを適量加えた。本実施例では、製造例4で作製した糖蜜酒粕混合エキス(和美乃盆盆、一丸ファルコス株式会社製)を、終濃度でそれぞれ0.01%又は1.00%となるように添加して、最終的な液量が500μLとなるように調整した。コントロールとしては、NB液体培地のみを用いた。
菌の凍結ストックをそれぞれ融解、氷冷した。表皮ブドウ球菌と黄色ブドウ球菌とを適切に希釈して混合した後、用意した24穴プレートに、菌混合液を適量加えた。本実施例では、表皮ブドウ球菌の最終濃度が、4.5×105CFU/mL、黄色ブドウ球菌の最終濃度が、0.5×105CFU/mLとなるように調整した。菌混合液を加えた24穴プレートを軽く振って混ぜた後、37℃で16時間培養した。
培養16時間経過時点で24穴プレートを37℃から出し、氷冷した。各穴の培養液を、新しい1.5mLのチューブに移し、氷冷した。この菌培養液を、新しいNB 液体培地を用いて希釈した。希釈後の培養液の適量を、NB寒天培地に滴下し、コンラージ棒で塗り広げ、37℃で一晩培養した。
一晩培養後のNB寒天培地に生育したコロニー数を計数した。コロニーの色で表皮ブドウ球菌(白色のコロニー)と、黄色ブドウ球菌(黄色のコロニー)とを見分けることが出来るので、それぞれの菌数を計測し、総菌数に占める表皮ブドウ球菌の割合等を算出した。
製造例4で作製した糖蜜酒粕混合エキス(和美乃盆盆、一丸ファルコス株式会社製)を配合した化粧水(以下の表2に示す。)、及び糖蜜酒粕混合エキスを水に置き換えたプラセボ化粧水を用いて1か月の連用試験を実施した。被験者(和美乃盆盆群:11名(脱落者1名)、プラセボ群:11名)は実験の目的及び試験内容について十分に説明を受けた健常日本人女性であり、年齢は20〜50代であった。本試験の約半年前に82名の皮膚細菌叢を採取、解析し、黄色ブドウ球菌が検出された被験者22名を選定し2群に割り付けた。そのうち4人にアトピー性皮膚炎の既往歴があった。
(被験者の皮膚細菌叢の採取と解析)
被験者の頬部から、ウェットスワブ(リン酸緩衝食塩水に浸して濡らした綿棒)で皮膚表面を擦り、菌叢を含むサンプルを採取した。微生物叢の変化を、次世代シーケンシング(Next Generation Sequencing,NGS)の方法により解析した。NGS解析用のDNAサンプルは、菌叢の付着した各スワブから、UCP Pathogen Mini Kit(QIAGEN)を用いて、機械的な前溶解処理プロトコール及びスピンプロトコールにて当該菌叢DNAを調製し、30μL容量で溶出した。このDNAサンプルに対して、Taq HS Perfect Mix(Takara)及び細菌16SrRNA v3領域のプライマーを用いて1st PCRを行った。
Rvプライマー:5’−GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGATTACCGCGGCTGCTGG−3’(配列番号2)
Miniseqより得られたFASTqファイルをhomology analysis tool v3(World Fusion)によってBLAST処理し、その後Metagenome@Kin(World Fusion)によって菌種判定を行った。
市販のセロファンテープを用い、被験者の顔面頬部よりストリッピングによって角質細胞を剥離した。これを塩化ビニル板に密着させた。そのあとこれをヘキサンに浸漬し、テープを取り去ると細胞がスライド上に移る。これをゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンで染色した。標本は、顕微鏡下で観察するとともに、描画装置とデジタイダーを組み合わせ、細胞の面積、形状を測定した。
図2は、被験者による試験用化粧水の適用後0週目と4週目の肌パラメータ測定値を、和美乃盆盆群とプラセボ群で比較した結果である。(A)は、すべての細菌のリード数を100としたときの黄色ブドウ球菌のリード数の割合(%)を、(B)は細胞剥離率を、(C)は角層重層度を示す。図2(A)の結果から、和美乃盆盆配合群では、0週の黄色ブドウ球菌の存在比率1.36%に比べ4週間後の黄色ブドウ球菌存在比率が0.74%と有意に減少(p=0.01)したが、プラセボ群では変化がなかった(p=0.66)。
Claims (7)
- 糖蜜又はその抽出物と、酒類醸造粕又はその抽出物とを含有し、糖度60〜85の液体である、皮膚常在菌のバランス改善剤。
- 総重量に対して1質量%以下の防腐剤を含む、請求項1に記載の剤。
- 20℃においてB型粘度計で測定した粘度が2000mPa・s以下である、請求項1又は2に記載の剤。
- 皮膚常在菌において、表皮ブドウ球菌の割合を増加させる及び黄色ブドウ球菌の割合を減少させる作用を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の剤。
- 請求項1〜4のいずれか一項に記載の剤を含有する、液体の皮膚外用剤。
- 皮膚に塗布したときに、皮膚常在菌における黄色ブドウ球菌の割合を減少させる作用を有する請求項5に記載の皮膚外用剤。
- 皮膚の炎症を起こしやすい対象者に、皮膚のなめらかさを付与するための請求項5又は6に記載の皮膚外用剤。
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