JP2021165741A - 血液分析装置および血液分析方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】血液分析装置10は、血液検体と核酸を染色する蛍光色素とを混合して測定試料を調製する試料調製部30と、試料調製部30によって調製された測定試料に光を照射して生じる蛍光を受光する受光部105と、受光部105からの信号を処理して得られた蛍光強度に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する制御部51と、を備える。
【選択図】図1
Description
実施形態1の血液分析装置10は、血液検体と試薬とから調製された測定試料を測定して、マラリア原虫に感染した赤血球を含む集団を特定し、血液検体がマラリアに感染しているか否かを判定する。
発明者らが、図5(b)に示すマラリア感染赤血球に対応する領域203に、細胞外小胞の一種であるアポトーシス小体と、核酸の封入体の一種であるハウウェルジョリー小体を含む赤血球とが分布することを見いだした経緯について説明する。核酸の封入体を含む赤血球とは、細胞の内部で核酸が凝集して残った核酸の封入体を含む赤血球である。なお、網赤血球においては、内部に存在するRNAは網赤血球内で分散しており、核酸は凝集体としては存在しない。したがって、網赤血球は、核酸の封入体を含む赤血球とは異なるものである。
・培地:10% FBS添加 RPMI1640培地
・細胞溶液:1×106/μL程度まで培養したJurkat細胞を培地で10倍希釈し、24時間培養
(アポトーシス誘導)
・誘導剤:Staurosporine 1μM
・Stock solution:250μg/500μL DMSO(1mM Staurosporine)
・1mM Staurosporineを培地で10倍希釈した100μM Staurosporine溶液を作成し、培養液に対して1/100量添加
実施形態2では、判定処理において、マラリアの有無だけでなく、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無についても判定される。実施形態2および後述する実施形態3において「核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する」とは、核酸の封入体を含む赤血球、または細胞外小胞の有無を判定すること、すなわち核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞のうち少なくとも一方があるか否かを判定することを示す。実施形態2の判定処理は、図6に示した実施形態1の判定処理と比較して、判定内容が異なっているものの、図16に示すように、略同様に構成されている。実施形態2のその他の構成は、実施形態1と同様である。
実施形態3では、判定処理において、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無について判定される。上述したように、スキャッタグラム200において、マラリア感染赤血球に対応する領域203には、核酸の封入体を含む赤血球、または細胞外小胞が分布する場合がある。実施形態3では、図18に示すように、スキャッタグラム400において、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞に対応する領域403が設けられている。また、実施形態3の判定処理は、図19に示すように構成される。実施形態3のその他の構成は、実施形態1と同様である。
30 試料調製部
51 制御部
53 出力部
53a 表示部
101 フローセル
102 光源
103、105 受光部
400 スキャッタグラム
403 領域
500 度数分布図
G6 粒子群
Claims (21)
- 血液検体と核酸を染色する蛍光色素とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に光を照射して生じる蛍光を受光する受光部と、
前記受光部からの信号を処理して得られた蛍光強度に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する制御部と、を備える、血液分析装置。 - 前記制御部は、前記蛍光強度が白血球よりも小さい範囲に含まれる粒子群を特定し、特定した前記粒子群に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項1に記載の血液分析装置。
- 前記試料調製部は、さらに赤血球を収縮させる希釈液を混合して前記測定試料を調製する、請求項1または2に記載の血液分析装置。
- 前記制御部は、前記蛍光強度が前記希釈液により収縮した赤血球よりも大きく、且つ、前記白血球よりも小さい範囲に含まれる粒子群を特定し、特定した前記粒子群に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項3に記載の血液分析装置。
- 前記受光部は、前記測定試料に光を照射して生じる散乱光をさらに受光し、
前記制御部は、前記蛍光強度と前記受光部からの信号を処理して得られた散乱光強度とに基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項1ないし4の何れか一項に記載の血液分析装置。 - 前記制御部は、前記蛍光強度および前記散乱光強度が白血球よりも小さい範囲に含まれる粒子群を特定し、特定した前記粒子群に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項5に記載の血液分析装置。
- 前記制御部は、前記粒子群の数に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項2、4、または6に記載の血液分析装置。
- 前記制御部は、前記粒子群の前記蛍光強度に対する度数分布のばらつきを示す値に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項2、4、または6に記載の血液分析装置。
- 前記粒子群の前記ばらつきを示す値は、変動係数、標準偏差または度数分布図の半値幅である、請求項8に記載の血液分析装置。
- 前記制御部は、前記ばらつきを示す値が第1閾値以上であることに基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項8または9に記載の血液分析装置。
- 前記制御部は、前記ばらつきを示す値が第1閾値以上であり、且つ、前記粒子群の数が第2閾値以上であることに基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、請求項8ないし10の何れか一項に記載の血液分析装置。
- 情報を出力する出力部をさらに備え、
前記制御部は、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無に関する判定結果を前記出力部に出力させる、請求項8ないし11の何れか一項に記載の血液分析装置。 - 前記制御部は、特定した前記粒子群の前記蛍光強度に対する度数分布のばらつきを示す値が所定の閾値未満である場合に、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無に関する判定結果の信頼度を示す情報を前記出力部に出力させる、請求項12に記載の血液分析装置。
- 前記出力部は、情報を表示するための表示部を備え、
前記制御部は、前記信頼度を示す情報を、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無に関する判定結果とともに前記表示部に表示させる、請求項13に記載の血液分析装置。 - 前記制御部は、前記粒子群の前記蛍光強度に対する度数分布図を前記表示部にさらに表示させる、請求項14に記載の血液分析装置。
- 前記制御部は、前記蛍光強度に基づくスキャッタグラムを前記表示部にさらに表示させる、請求項14または15に記載の血液分析装置。
- 前記試料調製部により調製された前記測定試料を流すフローセルと、
前記フローセルを流れる前記測定試料に前記光を照射する光源と、を備え、
前記受光部は、前記光の照射により前記測定試料に含まれる粒子から生じる前記蛍光を受光する、請求項1ないし16の何れか一項に記載の血液分析装置。 - 前記光源は、青紫色波長帯域の光を出射する、請求項17に記載の血液分析装置。
- 前記細胞外小胞は、アポトーシス小体を含む、請求項1ないし18の何れか一項に記載の血液分析装置。
- 前記核酸の封入体を含む赤血球は、ハウウェルジョリー小体または好塩基性斑点を含む、請求項1ないし19の何れか一項に記載の血液分析装置。
- 血液検体と核酸を染色する蛍光色素とを混合して調製された測定試料に光を照射して生じる蛍光に基づいて、核酸の封入体を含む赤血球、および細胞外小胞の少なくとも一方の有無を判定する、血液分析方法。
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