JP2021118722A5

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Publication number: JP2021118722A5
Application number: JP2021073204A
Authority: JP
Filing date: 2021-04-23
Publication date: 2023-02-27
Anticipated expiration: 2040-02-17

Claims

所望の細胞膜タンパク質に対して特異的に結合する目的物質を生産する目的細胞を、第二細胞の集団から選抜する細胞の選抜方法であって、
下記工程：
ａ）互いに連通することなく独立した複数のマイクロウェルを有する基板を提供する工程、
ｂ）前記細胞膜タンパク質を細胞表面に発現する１個の第一細胞を、各々の前記マイクロウェルに導入し、前記マイクロウェルに接着させる工程、
ｃ）工程ｂ）に続いて、各々の前記マイクロウェルに、前記集団から単離された１個の第二細胞を導入し、前記マイクロウェル内で前記第一細胞と前記第二細胞を接触可能な状態で共存させる工程、
ｄ）工程ｃ）に続いて、前記目的物質が結合した第一細胞を含むマイクロウェルを特定する工程、
ｅ）工程ｄ）で特定されたマイクロウェルから、前記目的細胞として前記第二細胞を回収する工程、
を包含し、
前記工程ｃ）は、
マイクロウェル内で共存させた前記第一細胞と前記第二細胞を所定時間インキュベートすること、及び
インキュベートが終了した後、各々のマイクロウェルを洗浄して上清を除去すること、
をさらに包含する、細胞の選抜方法。
前記工程ｄ）は、前記目的物質が前記第一細胞に結合したことを可視化する可視化工程を包含する、請求項１に記載の細胞の選抜方法。
前記可視化工程は、前記マイクロウェルに、前記目的物質に対して特異的に結合する標識物質を添加することを含む、請求項２に記載の細胞の選抜方法。
前記標識物質が前記目的物質に対する標識抗体である、請求項３に記載の細胞の選抜方法。
前記標識物質における標識が蛍光標識である、請求項３又は４に記載の細胞の選抜方法。
前記標識物質は、第一蛍光物質で標識された抗体であり、
前記工程ｂ）は、前記マイクロウェルに接着している前記第一細胞を第二蛍光物質で標識する第一細胞標識工程を含み、
第一蛍光物質が発する蛍光の蛍光波長は、第二蛍光物質が発する蛍光の蛍光波長と異なる、請求項５に記載の細胞の選抜方法。
前記可視化工程は、前記目的物質が前記第一細胞に結合した際に起きる、前記細胞膜タンパク質の活性化に伴う細胞内情報伝達物質の変動を可視化することを含む、請求項２に記載の細胞の選抜方法。
前記第一細胞が、前記細胞膜タンパク質を発現するベクターを導入した細胞である、請求項１～７のいずれかに記載の細胞の選抜方法。
前記第一細胞が、前記細胞膜タンパク質を発現する腫瘍細胞である、請求項１～７のいずれかに記載の細胞の選抜方法。
前記第一細胞が、前記細胞膜タンパク質を発現する非腫瘍細胞である、請求項１～７のいずれかに記載の細胞の選抜方法。
前記目的物質が抗体である、請求項１～１０のいずれかに記載の細胞の選抜方法。
前記第二細胞が、前記細胞膜タンパク質又はそれをコードする核酸で免疫した非ヒト動物由来の骨髄、脾臓、リンパ組織、又は血液細胞由来である、請求項１１に記載の細胞の選抜方法。
前記第二細胞が不死化された細胞である、請求項１２に記載の細胞の選抜方法。
前記第二細胞がハイブリドーマである、請求項１３に記載の細胞の選抜方法。
前記第二細胞が、ヒトのリンパ組織又は血液由来である、請求項１１に記載の細胞の選抜方法。
前記第二細胞が、エプスタイン・バール・ウイルス感染により不死化された細胞である、請求項１５に記載の細胞の選抜方法。
前記第二細胞が、外来性の抗体遺伝子を有し、当該抗体を発現する組換え細胞である、請求項１１に記載の細胞の選抜方法。
前記抗体が、完全抗体、機能的抗体断片、一本鎖抗体、又は多重特異性抗体である、請求項１７に記載の細胞の選抜方法。
前記抗体が、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である、請求項１７又は１８に記載の細胞の選抜方法。
前記抗体が、ネコ化抗体又はイヌ化抗体である、請求項１７又は１８に記載の細胞の選抜方法。
請求項１～２０のいずれかに記載の方法によって第二細胞の集団より選抜された目的細胞から、前記目的物質をコードする核酸を取得する、核酸の製造方法。
前記目的物質が抗体である、請求項２１に記載の核酸の製造方法。
請求項２１又は２２に記載の方法によって製造された核酸を宿主細胞に導入し、前記目的物質を発現する組換え細胞を取得する、組換え細胞の製造方法。
請求項２３に記載の方法によって製造された組換え細胞を培養し、その培養物から前記目的物質を取得する、目的物質の製造方法。
請求項１～２０のいずれかに記載の方法によって第二細胞の集団より選抜された目的細胞を培養し、その培養物から前記目的物質を取得する、目的物質の製造方法。
前記目的物質が抗体である、請求項２４又は２５に記載の目的物質の製造方法。
請求項２１又は２２に記載の方法によって製造された核酸に、薬学的に許容される担体又は添加物を組み合わせて、前記核酸を有効成分として含有する医薬組成物を取得する、医薬組成物の製造方法。
請求項２４～２６のいずれかに記載の方法によって製造された目的物質に、薬学的に許容される担体又は添加物を組み合わせて、前記目的物質を有効成分として含有する医薬組成物を取得する、医薬組成物の製造方法。