JP2021104031A - Tm増強ブロッキングオリゴヌクレオチド、ならびに標的濃縮の改善およびオフターゲット選択の低減のためのベイト - Google Patents
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Abstract
Description
一態様において、本発明は、少なくとも1個のTm増強基を有するオリゴヌクレオチドを含む、所望の鋳型核酸の選択方法におけるオリゴヌクレオチドに関する。第1の観点において、オリゴヌクレオチドは、ハイブリッド捕捉方法などの選択方法において有用である。第2の観点において、オリゴヌクレオチドは、所望の鋳型核酸として、鋳型の集団から選択される少なくとも1つのメンバーを含む。第3の観点において、オリゴヌクレオチドは、所望の鋳型の少なくとも1つの配列に対して実質的に相補的である。第4の観点において、オリゴヌクレオチドは、ブロッカーまたはベイトから選択される少なくとも1つのメンバーを含む。第5の観点において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個のTm増強基として、ロックド核酸基、二環式核酸基、C5修飾ピリミジン、ペプチド核酸基、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも1つのメンバーを含む。第6の観点において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個のTm増強基として、ロックド核酸基、二環式核酸基、またはこれらの組合せの1つを含む。第7の観点において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個のTm増強基として、ロックド核酸基または二環式核酸基を含む。第7の観点の好ましい実施形態として、オリゴヌクレオチドは、ロックド核酸基または二環式核酸基として、シトシンおよびアデニンの混合物ならびにシトシンおよびチミンの混合物を含めて、シトシン、アデニンおよびチミンからなる群から選択される核酸塩基を有する。第9の観点において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個のTm増強基として、約1.4℃から約25℃を含む範囲の最適な増強Tm値を提供するものを含む。第10の観点において、オリゴヌクレオチドは、配列番号2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、13、14、15、16、18、19、21、22、24、25、27、28、30、32、34および36からなる群から選択される少なくとも1つのメンバーを含む。第11の観点において、オリゴヌクレオチドは、ブロッカーを含む。これらの観点の一つの好ましい実施形態において、ブロッカーは、所望の鋳型核酸の末端における少なくとも1つの配列に対する実質的な配列相補性を有する。この好ましい実施形態のさらなる精巧化において、ブロッカーは、複数のヌクレオチドを有するバーコード(またはインデックス)ドメインを含む。この観点のさらなる実施形態において、複数のヌクレオチドとしては、実質的に連続して位置する約5個から約12個のヌクレオチドが挙げられる。別の実施形態において、バーコードドメインは、核酸塩基として、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、3−ニトロピロール、5−ニトロインドールおよびこれらの組合せから選択される群から選択される少なくとも1つのメンバーを有するヌクレオチドを含む。第12の観点において、オリゴヌクレオチドは、所望の鋳型核酸の選択方法における改善を提供する。この観点の一つの好ましい実施形態において、改善は、所望されない鋳型核酸に対して所望の鋳型核酸の濃縮の改善からなる。なお別の実施形態において、濃縮の改善は、少なくとも65%の濃縮を含む。第13の観点において、オリゴヌクレオチドは、3’末端修飾をさらに含む。この観点において、3’末端修飾の好ましい実施形態は、オリゴヌクレオチドからのポリメラーゼ指向性合成を防止する。別の観点において、3’末端修飾としては、とりわけ2’,3’−ジデオキシヌクレオチド、3’−スペーサーC3基が挙げられる。
(a)場合によって、複数の標的メンバー、例えば標的核酸(例えば、DNAまたはRNA)メンバーを含むライブラリーを獲得し、ここで、1つ以上の標的メンバーは、挿入配列(例えば、目的の遺伝子のセグメント)および非標的核酸配列(例えば、アダプター配列)を含む、こと;ならびに
(b)ライブラリーと、捕捉プローブ、例えばベイトセットまたは複数のベイトセット、およびブロッキングオリゴヌクレオチドとを接触させること
を含み、
(i)ブロッキングオリゴヌクレオチドは、ライブラリーメンバーの非標的核酸配列(例えば、アダプター配列)に相補的である、またはライブラリーメンバーの非標的核酸配列(例えば、アダプター配列)で二重鎖を形成し、
(ii)ブロッキングオリゴヌクレオチドとライブラリーメンバーの非標的核酸配列との間の結合相互作用に関連したパラメータについての値は、バックグラウンド核酸に対する非標的核酸配列、例えば他の相補的非標的核酸配列についての値より高く、これによってオフターゲット選択を最小化する。
(a)場合によって、複数の標的メンバー、例えば標的核酸(例えば、DNAまたはRNA)メンバーを含むライブラリーを獲得し、ここで、標的メンバーの1つ以上は、挿入配列(例えば、目的の遺伝子のセグメント)および非標的核酸配列(例えば、アダプター配列)を含む、こと;ならびに
(b)ライブラリーと、捕捉プローブ、例えばベイトセットまたは複数のベイトセットとを接触させること
を含み、
非標的配列は十分に短いので、挿入配列と捕捉プローブとの間の結合相互作用に関連したパラメータについての値は、非標的核酸配列およびこの相補体についてのその値より高く、これによってオフターゲット選択を最小化する。
(c)例えば配列決定によって、例えば次世代配列決定方法を用いて、前記ライブラリーまたはライブラリーキャッチからの腫瘍メンバーからのサブゲノム間隔のための読み取りを獲得すること;
(d)前記読み取りをアラインメントすること;および
(e)予備選択ヌクレオチド位置、例えば、複数のサブゲノム間隔の各々、例えば複数の遺伝子の各々における予備選択ヌクレオチド位置に関する前記読み取りからのヌクレオチド値を割り当て(例えば、ベイズ方法を用いて、変異を呼び出す)、
これによって前記試料を分析すること
をさらに含む。
(i)Xヌクレオチド位置の各々は、ステップ(b)、(c)、(d)もしくは(e)の1つまたはこれらの組合せのための独特のセットの条件下で分析される(ここで、独特とは、他のX−1セットの条件と異なることを意味し、Xは、少なくとも2、5、10、20、30、40、50、100、200、300または500である。)。例えば、第1セットの条件、例えば本明細書に記載されている条件のセットは、例えば第1のサブゲノム間隔または遺伝子における第1のヌクレオチド位置のために使用され、第2セットの条件、例えば本明細書に記載されている条件の第2セットは、例えば第2のサブゲノム間隔または遺伝子における第2のヌクレオチド位置のために使用される;
(ii)X個のヌクレオチド位置の各々について、ヌクレオチド位置で発生し得る予備選択改変、例えば変異の特徴、例えば本明細書に記載されている特徴に応答して、ヌクレオチド位置は、独特のセットの条件下で分析される(ここで、独特とは、他のX−1セットの条件と異なることを意味し、Xは、少なくとも2、5、10、20、30、40、50、100、200、300または500である。)。例えば、第1のサブゲノム間隔におけるヌクレオチド位置で発生し得る予備選択改変、例えば変異の特徴、例えば本明細書に記載されている特徴に応答して、ヌクレオチド位置は第1セットの条件下で分析され、第2のサブゲノム間隔におけるヌクレオチド位置で発生し得る予備選択改変、例えば変異の特徴、例えば本明細書に記載されている特徴に応答して、ヌクレオチド位置は第2セットの条件下で分析される;
(iii)ここで、前記方法は、試料、例えば保存腫瘍試料上にて、少なくとも2、5、10、20、50または100個のサブゲノム間隔、例えば遺伝子におけるヌクレオチド位置に対する95%、98%もしくは99%の感受性または特異性を可能にする条件下で行われる;または
(iv)ここで、方法は、
a)第1のサブゲノム間隔を配列決定して、約500×またはこれより高い配列決定深度を提供すること、例えば、試料からの細胞の5%以下に存在する変異を配列決定すること;
b)第2のサブゲノム間隔を配列決定して、約200×以上、例えば約200×−約500×の配列決定深度を提供するステップこと、例えば、試料からの細胞の10%以下に存在する変異を配列決定すること;
c)第3のサブゲノム間隔を配列決定して、約10−100×の配列決定深度を提供すること、例えば、以下から選択される1つ以上のサブゲノム間隔(例えば、エクソン)を配列決定すること:a)異なる薬物を代謝するための患者の能力を説明し得る薬理ゲノミクス的(PGx)単一ヌクレオチド多型(SNP)またはb)患者を独特に同定する(例えば、指紋をとる。)ために使用され得るゲノムSNP;
d)第4のサブゲノム間隔を配列決定して、約5−50×の配列決定深度を提供すること、例えば、ゲノム転座またはインデルなどの構造ブレークポイントを検出すること
の1つ以上または全てを含む。例えば、イントロンブレークポイントの検出は、高い検出信頼性を確保するための5−50×の配列対スパニング深度を必要とする。こうしたベイトセットは、例えば転座/インデル傾向の癌遺伝子を検出するために使用され得る;または
e)第5のサブゲノム間隔を配列決定して、約0.1−300×の配列決定深度を提供すること、例えばコピー数変化を検出すること。一実施形態において、配列決定深度は、コピー数変化を検出するために約0.1−10×の配列決定深度を範囲とする。他の実施形態において、配列決定深度は、ゲノムDNAのコピー数獲得/消失、またはヘテロ接合性の消失(LOH)を判定するために使用されるゲノムSNP/座位を検出するために約100−300×を範囲とする。
第1のベイトセットは、第1のサブゲノム間隔のために使用され、第2のベイトセットは、第2のサブゲノム間隔のために使用されること;
第1のアラインメント方法は、第1のサブゲノム間隔のための読み取りに適用され、第2のアラインメント方法は、第2のサブゲノム間隔のための読み取りに適用されること;
第1の変異呼び出し方法は、第1のサブゲノム間隔のヌクレオチド位置に適用され、第2の変異呼び出し方法は、第2のサブゲノム間隔のヌクレオチド位置に適用されること
を含む。
第1のヌクレオチド位置は、第1のセットのベイト条件、第1のアラインメント方法、および第1の変異呼び出し方法を用いて分析され;
第2のヌクレオチド位置は、前記第1のセットのベイト条件、第2のアラインメント方法、および前記第1の変異呼び出し方法を用いて分析され;
第3のヌクレオチド位置は、前記第1のセットのベイト条件、前記第1のアラインメント方法、および第2の変異呼び出し方法を用いて分析されて、
各々が他の2つと比較して独特の条件下で分析される3つのヌクレオチド位置を提供する。
第1のベイトセットは、第1のサブゲノム間隔のために使用され、第2のベイトセットは、第2のサブゲノム間隔のために使用されること;
第1のアラインメント方法は、第1のサブゲノム間隔のための読み取りに適用され、第2のアラインメント方法は、第2のサブゲノム間隔のための読み取りに適用されること;または
第1の変異呼び出し方法は、第1のサブゲノム間隔のヌクレオチド位置に適用され、第2の変異呼び出し方法は、第2のサブゲノム間隔のヌクレオチド位置に適用されること
を含む。
(i)改変が位置されている遺伝子または遺伝子の型、例えばオンコジーンもしくは腫瘍サプレッサー、予備選択バリアントもしくはバリアントの型、例えば変異体によってもしくは予備選択頻度の変異体によって特徴づけられる遺伝子もしくは遺伝子の型、または本明細書に記載されている他の遺伝子もしくは遺伝子の型;
(ii)改変の型、例えば置換、挿入、欠失または転座;
(iii)試料の型、例えば改変のために分析されるFFPE試料;
(iv)評価される改変の前記ヌクレオチド位置またはこの付近における配列、例えば、サブゲノム間隔のためのミスアラインメント、例えばヌクレオチド位置またはこの付近における反復配列の存在の予想傾向に影響し得る配列;
(v)例えば予備選択型の腫瘍における改変、例えば変異を示す読み取りを観察する事前(例えば、文献)予想;
(vi)単独での塩基呼び出しエラーによる改変を示す読み取りを観察する確率;または
(vii)改変を検出するのに所望される配列決定の予備選択深度
が挙げられる。
(i)方法、例えば上記の方法の(b)は、本明細書に記載されているベイトセットの使用を含む;
(ii)方法、例えば上記の方法の(c)は、サブゲノム間隔のセットまたは群のための読み取り、または本明細書に記載されている遺伝子のセットまたは群からの読み取りを獲得するステップを含む;
(iii)方法、例えば上記の方法の(d)は、本明細書に記載されている複数のアラインメント方法の使用を含む;
(iv)方法、例えば上記の方法の(e)は、本明細書に記載されている予備選択ヌクレオチド位置にヌクレオチド値を割り当てるための複数の方法の使用を含む;または
(v)方法は、本明細書に記載されているサブゲノム間隔のセットにヌクレオチド値を割り当てることを含む。
ベイト
本明細書に記載されている方法は、配列決定される標的核酸の選択のために、ベイト、例えば溶液ハイブリダイゼーションにおける使用のためのベイトの適切な選択によって、1つ以上の対象からの試料、例えば腫瘍試料からの多数の遺伝子および遺伝子産物の選択および/または配列決定を提供する。様々なサブゲノム間隔またはこれらのクラスのための選択の効率は、選択の予備選択効率を有するベイトセットに従って整合される。この項において使用される場合、「選択の効率」は、それが標的サブゲノム間隔(単数または複数)に従って調整される場合の配列カバレッジのレベルまたは深度を指す。
a)サブゲノム間隔を含む充分なメンバーを選択して、約500×以上の配列決定深度を提供する、例えば、試料からの細胞の5%以下に存在する変異を配列決定する、ベイトセット;
b)サブゲノム間隔を含む充分なメンバーを選択して、約200×以上、例えば約200×から−約500×の配列決定深度を提供する、例えば、試料からの細胞の10%以下に存在する変異を配列決定する、ベイトセット;
c)サブゲノム間隔を含む充分なメンバーを選択して、約10−100×の配列決定深度を提供する、例えば、以下から選択される1つ以上のサブゲノム間隔(例えば、エクソン)を配列決定する、ベイトセット:a)異なる薬物を代謝するための患者の能力を説明することができる薬理ゲノミクス的(PGx)単一ヌクレオチド多型(SNP)、またはb)患者を独特に同定する(例えば、指紋をとる。)ために使用され得るゲノムSNP;
d)サブゲノム間隔を含む充分なメンバーを選択して、約5−50×の配列決定深度を提供する、例えば、ゲノム転座またはインデルなどの構造ブレークポイントを検出するベイトセット。例えば、イントロンブレークポイントの検出は、高い検出信頼性を確保するために5−50×の配列対スパニング深度を必要とする。こうしたベイトセットは、例えば転座/インデル傾向の癌遺伝子を検出するために使用され得る;または
e)サブゲノム間隔を含む充分なメンバーを選択して、約0.1−300×の配列決定深度を提供する、例えば、コピー数変化を検出する、ベイトセット。
複数のメンバー、例えば標的核酸メンバー(例えば、複数の腫瘍メンバー、参照メンバー、および/またはPGxメンバーを含む)を含むライブラリー(例えば、核酸ライブラリー)を提供すること;
例えば溶液ベースの反応におけるライブラリーと、複数のベイト(例えば、オリゴヌクレオチドベイト)とを接触させて、複数のベイト/メンバーハイブリッドを含むハイブリダイゼーション混合物を形成すること;
前記ハイブリダイゼーション混合物から複数のベイト/メンバーハイブリッドを、例えば前記ハイブリダイゼーション混合物と前記複数のベイト/メンバーハイブリッドの分離を可能にする結合実体とを接触させることによって分離し、
これによって、ライブラリーキャッチ(例えば、ライブラリーからの核酸分子の選択されたまたは濃縮されたサブグループ)を提供すること
を含む、複数のベイトは、以下の2つ以上を含む:
a)低い頻度、例えば約5%以下で出現する改変(例えば、1つ以上の変異)(すなわち、試料からの細胞の5%は、これらのゲノムにおいて改変を持つ。)に対する高いレベルの感受性を可能にするために最も深いカバレッジが必要とされる高レベルの標的(例えば、遺伝子、エクソンまたは塩基などのサブゲノム間隔を含む1つ以上の腫瘍メンバー)を選択する第1のベイトセット。一実施形態において;第1のベイトセットは、約500×以上の配列決定深度を必要とする改変(例えば、点変異)を含む腫瘍メンバーを選択する(例えば、それに相補的である。);
b)a)における高レベルの標的より高い頻度、例えば約10%の頻度で出現する改変(例えば、1つ以上の変異)(すなわち、試料からの細胞10%は、これらのゲノムにおける改変を持つ。)に対する高いレベルの感受性を可能にするために高いカバレッジが必要とされる中レベルの標的(例えば、遺伝子、エクソンまたは塩基などのサブゲノム間隔を含む1つ以上の腫瘍メンバー)を選択する第2のベイトセット。一実施形態において;第2のベイトセットは、約200×以上の配列決定深度を必要とする改変(例えば、点変異)を含む腫瘍メンバーを選択する(例えば、それに相補的である。);
c)高いレベルの感受性を可能にするために、例えばヘテロ接合性対立遺伝子を検出するために低中程度のカバレッジが必要とされる低レベルの標的(例えば、遺伝子、エクソンまたは塩基などのサブゲノム間隔を含む1つ以上のPGxメンバー)を選択する第3のベイトセット。例えば、ヘテロ接合性対立遺伝子の検出は、高い検出信頼性を確保するために10−100×の配列決定深度を必要とする。一実施形態において、第3のベイトセットは、以下から選択される1つ以上のサブゲノム間隔(例えば、エクソン)を選択する:a)異なる薬物を代謝するための患者の能力を説明することができる薬理ゲノミクス的(PGx)単一ヌクレオチド多型(SNP)、またはb)患者を独特に同定する(例えば、指紋をとる。)ために使用され得るゲノムSNP;
d)例えばゲノム転座またはインデルなどの構造ブレークポイントを検出するために低中程度のカバレッジが必要とされる第1のイントロン標的(例えば、イントロン配列を含むメンバー)を選択する第4のベイトセット。例えば、イントロンブレークポイントの検出は、高い検出信頼性を確保するために5−50×の配列対スパニング深度を必要とする。前記第4のベイトセットは、例えば転座/インデル傾向の癌遺伝子を検出するために使用され得る;または
e)コピー数変化を検出するための能力を改善するために低密度のカバレッジが必要とされる第2のイントロン標的(例えば、イントロンメンバー)を選択する第5のベイトセット。例えば、いくつかの末端のエクソンの1コピー欠失の検出は、高い検出信頼性を確保するために0.1−300×のカバレッジを必要とする。一実施形態において、カバレッジ深度は、コピー数変化を検出するために約0.1−10×からを範囲とする。他の実施形態において、カバレッジ深度は、ゲノムDNAのコピー数獲得/消失またはヘテロ接合性の消失(LOH)を判定するために使用されるゲノムSNP/座位を検出するため、約100−300×からを範囲とする。前記第5のベイトセットは、例えば、増幅/欠失傾向の癌遺伝子を検出するために使用され得る。
(i)第1の予備選択効率は、少なくとも約500×以上の配列決定深度である選択の第1の効率についての値を有し、例えば、選択の第2、第3、第4または第5の予備選択効率を超える、選択の効率についての値を有する(例えば、選択の第2の効率についての値より約2−3倍超;選択の第3の効率についての値より約5−6倍超;選択の第4の効率にてついての値より約10倍超;選択の第5の効率についての値より約50から5000倍超);
(ii)第2の予備選択効率は、少なくとも約200×以上の配列決定深度である選択の第2の効率についての値を有し、例えば、選択の第3、第4または第5の予備選択効率を超える、選択の効率についての値を有する(例えば、選択の第3の効率についての値より約2倍超;選択の第4の効率についての値より約4倍超;選択の第5の効率についての値より約20から2000倍超);
(iii)第3の予備選択効率は、少なくとも約100×以上の配列決定深度である、選択の第3の効率についての値を有し、例えば、選択の第4または第5の予備選択効率を超える、選択の効率についての値を有する(例えば、選択の第4の効率についての値より約2倍超;選択の第5の効率についての値より約10から1000倍超);
(iv)第4の予備選択効率は、少なくとも約50×以上の配列決定深度である、選択の第4の効率についての値を有し、例えば、選択の第5の予備選択効率を超える、選択の効率についての値を有する(例えば、選択の第5の効率についての値より約50から500倍超);または
(v)第5の予備選択効率は、少なくとも約10×から0.1×の配列決定深度である、選択の第5の効率についての値を有する。
(i)異なるベイトセットの示差表示−所定の標的(例えば、標的メンバー)を捕捉するためのベイトセット設計は、より多い/より少ない数のコピーに含まれることにより、相対的な標的カバレッジ深度を増強/低減することができる;
(ii)ベイトサブセットの示差重なり−所定の標的(例えば、標的メンバー)を捕捉するためのベイトセット設計に、隣接しているベイト間のより長いまたはより短い重なりが含まれることにより、相対的な標的カバレッジ深度を増強/低減することができる;
(iii)示差ベイトパラメータ−所定の標的(例えば、標的メンバー)を捕捉するためのベイトセット設計に、配列修飾/より短い長さが含まれることにより、捕捉効率を低減し、相対的な標的カバレッジ深度を低下させることができる;
(iv)異なるベイトセットの混合−異なる標的セットを捕捉するように設計されているベイトセットは、異なるモル比で混合されることにより、相対的な標的カバレッジ深度を増強/低減することができる;
(v)異なる型のオリゴヌクレオチドベイトセットを使用すること−特定の実施形態において、ベイトセットは、以下を含むことができる:
(a)1つ以上の、化学的に(例えば、非酵素的に)合成された(例えば、個別に合成された)ベイト、
(b)アレイに合成された1つ以上のベイト、
(c)1つ以上の、酵素的に調製された、例えばインビトロで転写されたベイト;
(d)(a)、(b)および/もしくは(c)の任意の組合せ、
(e)1つ以上のDNAオリゴヌクレオチド(例えば、天然または非天然のDNAオリゴヌクレオチド)、
(f)1つ以上のRNAオリゴヌクレオチド(例えば、天然または非天然のRNAオリゴヌクレオチド)、
(g)(e)および(f)の組合せ、または
(h)上記の任意のものの組合せ。
(i)ベイトの表示または重なりの増加/減少が使用されて、同じカテゴリーにおける他の標的に対して、不足して/過度にカバーされる標的(例えば、標的メンバー)のカバレッジを増強/低減することができる;
(ii)標的配列(例えば、高GC含有量配列)を捕捉するのが困難な低いカバレッジは、ベイトセットで標的化されている領域を拡大して、例えば隣接配列(例えば、GCが豊富でない隣接配列)をカバーする;
(iii)ベイト配列を修飾して、ベイトの二次構造を低減し、選択のそれの効率を増強することができる;
(iv)ベイトの長さの修飾が使用されて、同じカテゴリー内の異なるベイトの融解ハイブリダイゼーション動態を等しくすることができる。ベイトの長さは、直接的に(変動する長さを有するベイトを生成することによって)または間接的に(一貫した長さのベイトを生成すること、およびベイト末端を任意の配列と置き換えることによって)修飾され得る;
(v)同じ標的領域(すなわち、前方向鎖および逆方向鎖)に対して異なる配向のベイトの修飾は、異なる結合効率を有することができる。各標的に対して最適なカバレッジを提供するいずれかの配向を有するベイトセットが選択され得る;
(vi)結合実体、例えば各ベイト上に存在する捕捉タグ(例えば、ビオチン)の量の修飾は、それの結合効率に影響することができる。特異的標的を標的にするベイトのタグレベルの増加/減少が使用されて、相対的な標的カバレッジを増強/低減することができる;
(vii)異なるベイトのために使用されるヌクレオチドの型の修飾が変化されて、標的に対する結合親和性に影響し、相対的な標的カバレッジを増強/低減することができる;または
(viii)例えばより安定な塩基対形成を有する修飾オリゴヌクレオチドベイトが使用されて、高GC含有量に対して低いまたは正常のGC含有量の区域間の融解ハイブリダイゼーション動態を等しくすることができる。
分析のための予備選択されたサブゲノム間隔、例えば、遺伝子および他の領域のセットまたは群のためのサブゲノム間隔の群またはセットは、本明細書に記載されている。
A)以下の少なくとも5つ以上から選択される変異もしくは野生型遺伝子または遺伝子産物からの少なくとも5、6、7、8、9、10、15、20、25、30個、またはこれ以上のサブゲノム間隔:ABL1、AKT1、AKT2、AKT3、ALK、APC、AR、BRAF、CCND1、CDK4、CDKN2A、CEBPA、CTNNB1、EGFR、ERBB2、ESR1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FLT3、HRAS、JAK2、KIT、KRAS、MAP2K1、MAP2K2、MET、MLL、MYC、NF1、NOTCH1、NPM1、NRAS、NTRK3、PDGFRA、PIK3CA、PIK3CG、PIK3R1、PTCH1、PTCH2、PTEN、RB1、RET、SMO、STK11、SUFU、またはTP53;
B)以下の少なくとも5個以上から選択される変異もしくは野生型遺伝子または遺伝子産物からのサブゲノム間隔の少なくとも5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120個、またはこれ以上:ABL2、ARAF、ARFRP1、ARID1A、ATM、ATR、AURKA、AURKB、BAP1、BCL2、BCL2A1、BCL2L1、BCL2L2、BCL6、BRCA1、BRCA2、CBL、CARD11、CBL、CCND2、CCND3、CCNE1、CD79A、CD79B、CDH1、CDH2、CDH20、CDH5、CDK6、CDK8、CDKN2B、CDKN2C、CHEK1、CHEK2、CRKL、CRLF2、DNMT3A、DOT1L、EPHA3、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHB1、EPHB4、EPHB6、ERBB3、ERBB4、ERG、ETV1、ETV4、ETV5、ETV6、EWSR1、EZH2、FANCA、FBXW7、FGFR4、FLT1、FLT4、FOXP4、GATA1、GNA11、GNAQ、GNAS、GPR124、GUCY1A2、HOXA3、HSP90AA1、IDH1、IDH2、IGF1R、IGF2R、IKBKE、IKZF1、INHBA、IRS2、JAK1、JAK3、JUN、KDM6A、KDR、LRP1B、LRP6、LTK、MAP2K4、MCL1、MDM2、MDM4、MEN1、MITF、MLH1、MPL、MRE11A、MSH2、MSH6、MTOR、MUTYH、MYCL1、MYCN、NF2、NKX2−1、NTRK1、NTRK2、PAK3、PAX5、PDGFRB、PKHD1、PLCG1、PRKDC、PTPN11、PTPRD、RAF1、RARA、RICTOR、RPTOR、RUNX1、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMARCA4、SMARCB1、SOX10、SOX2、SRC、TBX22、TET2、TGFBR2、TMPRSS2、TNFAIP3、TNK、TNKS2、TOP1、TSC1、TSC2、USP9X、VHL、またはWT1;
C)表1、1A、2、3または4による遺伝子または遺伝子産物からの少なくとも5、6、7、8、9、10、15、20個、またはこれ以上のサブゲノム間隔;
D)腫瘍または癌に関連した、例えば正または負の処置応答予測因子である、正または負の予後因子である、または腫瘍または癌の鑑別診断を可能にする遺伝子または遺伝子産物、例えば以下の1つ以上から選択される遺伝子または遺伝子産物からの少なくとも5、6、7、8、9、10、15、20個、またはこれ以上のサブゲノム間隔:ABL1、AKT1、ALK、AR、BRAF、BRCA1、BRCA2、CEBPA、EGFR、ERBB2、FLT3、JAK2、KIT、KRAS、MET、NPM1、PDGFRA、PIK3CA、RARA、AKT2、AKT3、MAP2K4、NOTCH1、およびTP53;
E)以下の1つ以上から選択される変異または野生型コドンを含む、少なくとも5、6、7、8、9、10個、またはこれ以上のサブゲノム間隔:ABL1遺伝子のコドン315;APCのコドン1114、1338、1450または1556;BRAFのコドン600;CTNNB1のコドン32、33、34、37、41または45;EGFRのコドン719、746−750、768、790、858または861;FLT3のコドン835;HRASのコドン12、13または61;JAK2のコドン617;KITのコドン816;KRASのコドン12、13または61;PIK3CAのコドン88、542、545、546、1047、または1049;PTENのコドン130、173、233または267;RETのコドン918;TP53のコドン175、245、248、273または306(例えば、表1に示されているコドンの1つ以上を含む、少なくとも5、10、15、20個、またはこれ以上サブゲノム間隔)。
G)以下の1つ以上に関連した遺伝子または遺伝子産物中に存在するサブゲノム間隔の変異もしくは野生型PGx遺伝子または遺伝子産物(例えば、単一ヌクレオチド多型(SNP))からのサブゲノム間隔の少なくとも5、6、7、8、9、10、15、20、25、30個、またはこれ以上:(i)薬物で処置された癌患者のより良好な生存(例えば、パクリタキセル(例えば、ABCB1遺伝子)で処置された乳癌患者のより良好な生存);(ii)パクリタキセル代謝(例えば、表2に示されている、異なる座位および変異でのCYP2C8遺伝子;CYP3A4遺伝子);(iii)薬物に対する毒性(例えば、ABCC4遺伝子(表2)で見られる通りの6−MP毒性;DPYD遺伝子、TYMS遺伝子またはUMPS遺伝子(表2)で見られる通りの5−FU毒性;TMPT遺伝子(表2)で見られる通りのプリン毒性;NRP2遺伝子で見られる通りのダウノルビシン毒性;Clorf144遺伝子、CYP1B1遺伝子(表2));または(iv)薬物に対する副作用(例えば、ABCG2遺伝子、TYMS遺伝子、UGT1A1遺伝子、ESR1遺伝子およびESR2遺伝子(表2));
H)表3による少なくとも5個、10個、15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個、50個、75個、110個、またはこれ以上の遺伝子または遺伝子産物の転座改変;
I)ここに明記されている癌型からの固形腫瘍試料における、表3による少なくとも5個、10個、15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個、50個、75個、110個、またはこれ以上の遺伝子または遺伝子産物の転座改変;
J)表4による少なくとも5個、10個、15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個、50個、75個、100個、150個、200個、またはこれ以上の遺伝子または遺伝子産物の転座改変;
K)ここに明記されている癌型からのヘム腫瘍試料における、表4による少なくとも5個、10個、15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個、50個、75個、100個、150個、200個、またはこれ以上の遺伝子または遺伝子産物の転座改変;
L)表1−4から選択される少なくとも5個の遺伝子または遺伝子産物、ここで、例えば予備選択位置での対立遺伝子の変動は、腫瘍の予備選択型に関連し、前記対立遺伝子の変動は、前記腫瘍型における細胞の5%未満に存在する;
M)GCが豊富な領域に埋め込まれている、表1、1A−4から選択される少なくとも5個の遺伝子または遺伝子産物;または
N)癌を発生させる遺伝子(例えば、生殖系列リスク)因子を示す少なくとも5個の遺伝子または遺伝子産物(例えば、遺伝子または遺伝子産物は、BRCA1、BRCA2、EGFR、HRAS、KIT、MPL、ALK、PTEN、RET、APC、CDKN2A、MLH1、MSH2、MSH6、NF1、NF2、RB1、TP53、VHLまたはWT1の1つ以上から選択される。)。
選択された遺伝子または遺伝子産物(本明細書において「標的遺伝子または遺伝子産物」とも称される。)は、遺伝子内領域または遺伝子間領域を含むサブゲノム間隔を含むことができる。例えば、サブゲノム間隔は、エクソンまたはイントロン、またはこれらの断片、典型的にエクソン配列またはこの断片を含むことができる。サブゲノム間隔は、コード領域または非コード領域、例えばプロモーター、エンハンサー、5’非翻訳領域(5’UTR)、もしくは3’非翻訳領域(3’UTR)、またはこれらの断片を含むことができる。他の実施形態において、サブゲノム間隔は、cDNAまたはこの断片を含む。他の実施形態において、サブゲノム間隔は、例えば本明細書において記載されている通りのSNPを含む。
様々な組織試料が、本方法において使用される核酸試料の供給源であり得る。ゲノムまたはサブゲノムの核酸(例えば、DNAまたはRNA)は、対象の試料(例えば、腫瘍試料、正常の隣接組織(NAT)、血液試料、循環腫瘍細胞(CTC)、または任意の正常の対照を含有する試料))から単離され得る。特定の実施形態において、組織試料は、凍結試料としてまたはホルムアルデヒドもしくはパラホルムアルデヒド固定パラフィン包埋(FFPE)組織調製物として保存される。例えば、試料は、マトリックス、例えばFFPEブロックまたは凍結試料中に包埋され得る。単離ステップは、個別の染色体をフロー選別すること;および/または対象の試料(例えば、腫瘍試料、NAT、血液試料)を顕微解剖することを含むことができる。
「メンバー」もしくは「ライブラリーメンバー」または他の同様の用語は、本明細書で使用される場合、ライブラリーのメンバー(または「ライブラリーキャッチ」)である核酸分子、例えばDNAまたはRNAを指す。ライブラリーメンバーは、本明細書において記載されている通りの腫瘍メンバー、参照メンバー、またはPGxメンバーの1つ以上であり得る。典型的に、メンバーは、DNA分子、例えばゲノムDNAまたはcDNA分子である。メンバーは、例えば酵素的に断片化されたまたは剪断することによって断片化されたゲノムDNAであり得る。メンバーは、対象からのヌクレオチド配列を含むことができ、対象から誘導されたのではないヌクレオチド配列、例えばプライマーもしくはアダプター(例えば、PCR増幅用または配列決定用)、または試料の同定を可能にする配列、例えば「バーコード」配列を含むこともできる。
ベイトは、標的核酸にハイブリダイズし(例えば、相補的である。)、これによって、標的核酸の捕捉を可能にすることができる核酸分子、例えばDNAまたはRNA分子であり得る。一実施形態において、ベイトはRNA分子である。他の実施形態において、ベイトは、例えば結合実体に結合することによって、ベイトおよびベイトにハイブリダイズされる核酸により形成されるハイブリッドの捕捉および分離を可能にする結合実体、例えば親和性タグを含む。一実施形態において、ベイトは、溶液相ハイブリダイゼーションに適当である。
ベイトは、任意の型のオリゴヌクレオチド、例えばDNAまたはRNAであり得る。DNAまたはRNAベイト(「オリゴベイト」)は、個別に合成され得る、またはDNAまたはRNAベイトセットとしてのアレイ(「アレイベイト」)において合成され得る。オリゴベイトは、アレイフォーマットで提供されるかまたは単離オリゴとして提供されるかにかかわらず、典型的に一本鎖である。ベイトは、本明細書において記載されている通りの結合実体(例えば、ビオチン分子などの捕捉タグ)を追加として含み得る。結合実体、例えばビオチン分子は、ベイトに、例えばベイトの5’または3’末端で、典型的にはベイトの5’末端で付着され得る。
ベイトは、参照により本明細書に組み込むUS 2010/0029498およびGnirke,A.ら(2009)Nat Biotechnol.27(2):182−189に記載されている方法によって生成され得る。例えば、ビオチン化RNAベイトは、マイクロアレイ上で元々合成される合成の長いオリゴヌクレオチドのプールを得ること、およびオリゴヌクレオチドを増幅してベイト配列を生成することによって生成され得る。一部の実施形態において、ベイトは、ベイト配列の1つの末端でRNAポリメラーゼプロモーター配列を付加すること、およびRNAポリメラーゼを使用してRNA配列を合成することによって生成される。一実施形態において、合成のオリゴデオキシヌクレオチドのライブラリーは、Agilent Technologies、Inc.などの市販供給元から得られ、公知の核酸増幅方法を使用して増幅され得る。
(i)異なるベイトセットの示差表示−所定の標的(例えば、標的メンバー)を捕捉するためのベイトセット設計は、相対的な標的カバレッジ深度を増強/低減するため、より多い/より少ない数のコピーに含められ得る;
(ii)ベイトサブセットの示差重なり−所定の標的(例えば、標的メンバー)を捕捉するためのベイトセット設計は、隣接しているベイト間により長いまたはより短い重なりを含むことで、相対的な標的カバレッジ深度を増強/低減することができる;
(iii)示差ベイトパラメータ−所定の標的(例えば、標的メンバー)を捕捉するためのベイトセット設計は、配列修飾/より短い長さを含むことで、捕捉効率を低減するとともに相対的な標的カバレッジ深を低下させることができる;
(iv)異なるベイトセットの混合−異なる標的セットを捕捉するにように設計されているベイトセットは、異なるモル比で混合されて、相対的な標的カバレッジ深度を増強/低減することができる;
(v)オリゴヌクレオチドベイトセットの異なる型を使用すること−特定の実施形態において、ベイトセットは、以下を含むことができる:
(a)1つ以上の化学的に(例えば、非酵素的に)合成された(例えば、個別に合成された)ベイト、
(b)アレイにおいて合成された1つ以上のベイト、
(c)1つ以上の酵素的に調製された、例えばインビトロ転写されたベイト;
(d)(a)、(b)および/もしくは(c)の任意の組合せ、
(e)1つ以上のDNAオリゴヌクレオチド(例えば、天然または非天然のDNAオリゴヌクレオチド)、
(f)1つ以上のRNAオリゴヌクレオチド(例えば、天然または非天然のRNAオリゴヌクレオチド)、
(g)(e)および(f)の組合せ、または
(h)上記の任意のものの組合せ。
(i)ベイト表示または重なりを増加/減少することが使用されて、同じカテゴリーにおける他の標的に対して、不足して/過度にカバーされる標的(例えば、標的メンバー)のカバレッジを増強/低減することができる;
(ii)低いカバレッジのため、標的配列(例えば、高GC含有量配列)を捕捉するのが難しいのであれば、カバーするためにベイトセット、例えば隣接配列(例えば、GCが豊富でない隣接配列)で標的化されている領域を拡大する;
(iii)ベイト配列の修飾がなされて、ベイトの二次構造を低減するとともに選択のそれの効率を増強することができる;
(iv)ベイトの長さを修飾することが使用されて、同じカテゴリー内の異なるベイトの融解ハイブリダイゼーション動態を等しくすることができる。ベイトの長さは、直接的に(変動する長さでベイトを生成することによって)または間接的に(一貫性の長さのベイトを生成すること、およびベイト末端を任意の配列で置換することによって)修飾され得る;
(v)同じ標的領域ための異なる配向のベイト(すなわち、順方向および逆の鎖)を修飾することは、異なる結合効率を有することがある。各標的のための最適なカバレッジを提供するいずれかの配向を有するベイトセットが選択され得る;
(vi)各ベイト上に存在する結合実体、例えば捕捉タグ(例えば、ビオチン)の量を修飾することは、それの結合効率に影響することがある。特異的標的を標的にするベイトのタグレベルを増加/減少することが使用されて、相対的な標的カバレッジを増強/低減することができる;
(vii)異なるベイトのために使用されるヌクレオチドの型を修飾することが改変されて、標的に対する結合親和性に影響するとともに相対的な標的カバレッジを増強/低減することができる;または
(viii)修飾オリゴヌクレオチドベイトを使用し、例えば、より安定な塩基対合を有することが使用されて、高GC含有量に対して低いまたは正常のGC含有量の区域間の融解ハイブリダイゼーション動態を等しくすることができる。
本発明において特色とされる方法は、ライブラリー(例えば、核酸ライブラリー)と複数のベイトとを接触させて、選択ライブラリーキャッチを提供するステップを含む。接触ステップは、溶液ハイブリダイゼーションにおいて達成され得る。特定の実施形態において、方法には、溶液ハイブリダイゼーションの1つ以上の追加のラウンドによってハイブリダイゼーションステップを反復することが含まれる。一部の実施形態において、方法は、ベイトの同じまたは異なる収集物を用いる溶液ハイブリダイゼーションの1つ以上の追加のラウンドに、ライブラリーキャッチをかけることをさらに含む。
本発明は、核酸を配列決定する方法も含む。これらの方法において、核酸ライブラリーメンバーは、本明細書に記載されている方法を使用すること、例えば溶液ハイブリダイゼーションを使用することによって単離され、これによって、ライブラリーキャッチを提供する。ライブラリーキャッチまたはこのサブグループは、配列決定され得る。したがって、本発明において特色とされる方法は、ライブラリーキャッチを分析することをさらに含む。一実施形態において、ライブラリーキャッチは、配列決定方法、例えば本明細書において記載されている通りの次世代配列決定方法によって分析される。方法は、溶液ハイブリダイゼーションによってライブラリーキャッチを単離すること、およびライブラリーキャッチを核酸配列決定にかけることを含む。特定の実施形態において、ライブラリーキャッチは、再配列決定され得る。
アラインメントは、読み取りを位置、例えばゲノムの位置に関して整合するプロセスである。ミスアラインメント(例えば、ゲノムにおける不正確な位置上の短い読み取りからの塩基対の配置)、例えば、実際の癌変異の周辺での読み取りの配列状況(例えば、反復性配列の存在)によるミスアラインメントは、代わりの対立遺伝子の読み取りが代わりの対立遺伝子読み取りの主な重層から回避され得るので、変異検出の感受性における低減に至る恐れがある。実際の変異が存在しないという問題のある配列状況が発生するならば、ミスアラインメントは、参照ゲノム塩基の実際の読み取りを間違った位置に設置することによって、「変異された」対立遺伝子のアーチファクト的読み取りを導入する恐れがある。増殖多重遺伝子分析のための変異−呼び出しアルゴリズムは、低豊富度変異にも高感度であるべきなので、これらのミスアラインメントは、偽陽性発見率を増加/特異性を低減する恐れがある。
一般に、インデル変異の正確な検出は、本明細書において無効にされた配列決定プラットフォーム上での擬似インデル率が相対的に低いので、アラインメントにおける運動である(したがって、正しくアラインメントされたインデルのわずかな観察でも変異の強い証拠であり得る。)。しかしながらインデルの存在下での正確なアラインメントは難しいことがある(殊に、インデル長さが増加する場合。)。アラインメントに伴う一般の、例えば置換の課題に加えて、インデルこれ自体が、アラインメントの問題を引き起こす恐れがある。(例えば、ジヌクレオチド反復の2bpの欠失は、容易に断定的に配置することはできない。)感受性および特異性の両方は、より短い(<15bp)見かけのインデル含有読み取りの不正確な配置によって低減され得る。より大きいインデル(本発明者らの本プロセスにおける個別の読み取りの長さ−36bpと規模が近づいている。)は、読み取りを全くアラインメントし損ねる原因となり、アラインメントされた読み取りの標準的セットにおけるインデルの検出を不可能にする恐れがある。
塩基呼び出しは、配列決定装置の生アウトプットを指す。変異呼び出しは、配列決定されているヌクレオチド位置について、ヌクレオチド値、例えばA、G、TまたはCを選択するプロセスを指す。典型的に、位置についての配列決定読み取り(または塩基呼び出し)は、1つ超の値を提供し、例えば、一部の読み取りはTを与え、一部はGを与える。変異呼び出しは、ヌクレオチド値、例えば配列に対してそれらの値の1つを割り当てるプロセスである。それは「変異」呼び出しと称されるが、それは、任意のヌクレオチド位置、例えば変異体対立遺伝子、野生型対立遺伝子、変異体または野生型のいずれかと特徴付けられなかった対立遺伝子に対応する位置にまたは変動によって特徴付けされていない位置にヌクレオチド値を割り当てるために適用される。変異呼び出しのための方法は、以下の1つ以上を含むことができる:参照配列における各位置での情報に基づき非依存性呼び出しをすること(例えば、配列読み取りを検査すること;塩基呼び出しおよび品質スコアを検査すること;潜在的遺伝子型を前提として、観察された塩基および品質スコアの確率を算出すること;および遺伝子型を割り当てること(例えば、ベイズ規則を使用する。));偽陽性を除去すること(例えば、予想されるのよりずっと低いまたは高い読み取り深度を有するSNPを拒絶するための深度閾値を使用する;小さいインデルによる偽陽性を除去するための局所再アラインメント);および連鎖不平衡(LD)/インピュテーションに基づく分析を行うことで呼び出しを精密にすること。
アラインメントの後、置換の検出は、呼び出し方法、例えば、ベイズ変異呼び出し方法を使用して行うことができ;これは、サブゲノム間隔の各々における各塩基、例えば評価されるべき遺伝子のエクソンに適用され、ここで、代わりの対立遺伝子の存在が観察される。この方法は、変異の存在下での読み取りデータを観察する確率を、塩基呼び出しエラー単独の存在下での読み取りデータを観察する確率と比較する。この比較が変異の存在を十分に強く支持しているならば、変異が呼び出され得る。
インデル呼び出しは、挿入または欠失が参照配列と異なる配列決定データにおける塩基を見出すプロセスであり、典型的には、関連の信頼スコアまたは統計的証拠メトリックを含む。
下記の手順は、捕捉生成物を用いるDNAプローブのハイブリダイゼーションに必要なステップを要約している。
プールされたビオチン化ベイト100ナノグラム、適応DNAライブラリー500ng、Cot−1 DNA 2μg、2.0μL中のオリゴヌクレオチドブロッカー2ナノモルを、10μLの体積に合わせ、予備加温されたGenisphere Buffer 6(2×のSDS系ハイブリダイゼーション緩衝剤:0.50MのNaPO4、1%のSDS、2mMのEDTA、2×のSSC、4×のデンハート液)10μLと混合する。混合物のボルテックス混合に続いて、40μLの鉱物油のオーバレイを適用し、混合物を熱サイクラー内にて95℃で5分間変性し、71℃にゆっくり減少する。混合物を71℃で48時間インキュベートする。
ストレプトアビジンビーズを、ハイブリダイゼーション混合物への付加の前に以下の方式で調製する。ストレプトアビジンビーズを室温で30分間静置する。各ハイブリダイゼーション反応のため、Invitrogen M270 Streptavidinビーズ(磁性)50μLを、2×のBind、およびWash Buffer(10mMのTris−HCl(pH7.5)、2MのNaCl、1mMのEDTA)で2回洗浄する。50μLのBindおよびWash Bufferならびに水30μLを含む80μL中に、ビーズを再懸濁する。
回転期間に続いて、試料を磁性分離ラック上へ配置する。ビーズを上澄みから分離させておき、捕捉プローブに結合していないDNAを含有する上澄みを除去し、捨てる。ビーズに結合されたプローブを以下の溶液で順次に洗浄する。各洗浄のため、所定の温度に予備平衡化された洗浄溶液を添加し、示された時間ローテーター上に配置し、短時間でスピンダウンし(磁石)、上澄みを回収し、捨てる。第1の洗浄は、回転しながら71℃で5分間、1000μLの1×のSSC/0.1%SDSを用いる。第2の洗浄は、回転しながら71℃で5分間、1000μLの0.1×SSC/0.1%SDSを用いる。第3の洗浄は、回転しながら71℃で5分間、1000μLの0.1×のSSC/0.1%SDSを用いる。第4の洗浄は、回転しながらRTで5分間、1000μLの0.1×のSSC/0.1%SDSを用いる。第5の洗浄は、なお磁石上のチューブを用いてRTで30秒間、1000μLの0.2×のSSCを用いる。最終の洗浄溶液は、下記に説明されている通り、事前のさらなる加工より前に完全に除去する。
A.最終のPCR濃縮
回復された一本鎖鋳型(16μL)を、以下の反応ミックス構成成分(KAPA HiFiマスターミックス(25μL);10μMのプライマー1(2.5μL)、10μMのプライマー2(2.5μL)、水(4μL))を有する50μLの総体積に調製した。DNAを短時間でボルテックスし、簡潔な遠心分離に続いて溶液として再回収した。以下のプログラムを用いる熱サイクラー内に、反応物を配置した:5つ以上のサイクルに関して、98℃(5.0分);98℃(20秒);60℃(15秒);72℃(20秒);77℃(5.0分)。増幅された生成物を、1.5×の体積を使用するとともに20μLのEB Buffer(Qiagen)(10mMのTris−HCl、pH8.5)中で溶出して、AMPureビーズで精製した。その結果得られるDNA濃度を、Quibit Fluorometerで測定し、適切なNGS配列決定プラットフォームでの使用のために希釈した。
表Iにおいて、Illumina配列決定プラットフォームを用いるDNA鋳型ライブラリーに対するハイブリッド捕捉実験において使用するため、以下のブロッキングオリゴヌクレオチドを設計した。Tm増強基としてLNA(「+C」または「+A」)またはBNA(「/iBNA−meC/」または「/iBNA−A/」)を使用して、Tm増強オリゴヌクレオチドを調製した。ホスホラミダイト化学法を使用して、全てのオリゴヌクレオチドを調製した。参照によりその全体が組み込まれるOwczarzy(Biochemistry 2011 50:9352−9367)の方法を使用して、750mMのNaCl緩衝剤(5×のSSCと同様のイオン強度)中のLNA塩基について、および15mMのNaCl緩衝剤(0.1×のSSCと同様のイオン強度)についてTm値を概算する。BNA修飾はLNA修飾と同様の熱力学的な効果を有するので、本明細書に示される予測は両クラスの修飾ブロッカーに当てはまり、LNA/BNA修飾は全ての実施例において置換することができる。例えば、LNA誘導の最も近い隣接するパラメータを使用して、下記の実施例における熱力学的モデル化を行い、他方で、BNA塩基を使用して、オリゴヌクレオチド合成を行った。
表IIIにおいて、Illumina配列決定プラットフォームを用いるDNA鋳型ライブラリーに対するハイブリッド捕捉実験における使用のために、以下のオリゴヌクレオチドを設計した。Tm増強基としてLNA(「+C」、「+T」または「+A」)またはBNA(「/iBNA−meC/」、「/iBNA−T/」、または「/iBNA−A/」)を使用して、Tm増強オリゴヌクレオチドを調製した。ホスホラミダイト化学法を使用して、全てのオリゴヌクレオチドを調製した。
表IVにおいて、Ion Torrent PGM配列決定プラットフォームを用いるDNA鋳型ライブラリーに対するハイブリッド捕捉実験における使用のために、以下のオリゴヌクレオチドを設計した。Tm増強基としてLNA(「+C」または「+A」)またはBNA(「/iBNA−meC/」または「/iBNA−A/」)を使用して、Tm増強オリゴヌクレオチドを調製した。ホスホラミダイト化学法を使用して、全てのオリゴヌクレオチドを調製した。
パラフィンブロックから切断された3×20μmのセクションを400μLのBuffer FTLと、ボルテックスすることによって混合し、90℃で15分間、1.5mLの遠心管内でインキュベートした。88−92℃の範囲が、インキュベーションのための許容範囲であった。次いで、20μLのプロテイナーゼKを用いて55℃で6時間、および10μLのRNase(1mg/mL)を用いて室温で5分間、試料をインキュベートした。次に、460μLのBufferBLおよび500μLの無水エタノールを試料に添加した。結果として得られた試料溶液を、さらに使用するまで室温で保持した。
循環チラー付きのCovaris(商標)E210機器を4℃に設定した。機器の水タンクに蒸留/脱イオン水を充填ラインのレベル「6」まで充填した。SonoLab(商標)ソフトウェアを起動し、指示された時にシステムがホーミング配列を実行するのを可能にした。試料を剪断する前に少なくとも45分間、機器のタンク中の水を脱気した。
この実施例は、実施例2AからのDNA剪断のための代替方法を記載する。
末端修復反応
末端修復試薬(NEB番号E6050L)を解凍し、末端修復マスターミックスを氷上で調製した。1試料当たり70μlのマスターミックス調製するため、55μlのヌクレアーゼフリー水を10μlの10×のEnd Repair反応緩衝剤および5μlのEnd Repair酵素ミックスと混合した。次いでマスターミックス70μlを各剪断DNA試料30μlに、氷上の96ウェルPCRプレート内で添加した。反応物を熱サイクラー内にて20℃で30分間インキュベートした。QIAGEN MinElute(登録商標)カラムを使用して、各試料を精製した。短時間で、5×のQIAGENPBI緩衝剤を試料に(例えば、PBI緩衝剤500μlを試料100μlに添加した。)、1.5ml微量遠心機チューブ内で添加した。各試料をボルテックスし、短時間でスピンダウンし、MinEluteスピンカラムに移した。MinEluteスピンカラムを13,000rpmで1分間遠心分離し、フロースルーを捨てた。QIAGEN PE緩衝剤750μlをカラムに添加し、13,000rpmで1分間遠心分離し、フロースルーを捨てた。スピンカラムを再び13,000rpmで1分間遠心分離し、清潔な1.5ml微量遠心機チューブに移した。カラムを2−3分間風乾した。第1の溶出のため、22μlのQIAGEN Elution Buffer(10mMのTris、pH8.5)を各カラムに添加し、2−3分インキュベートし、次いで、13,000rpmで1分間遠心分離した。第2の溶出のため、22μlのQIAGEN Elution Bufferを添加し、1分間インキュベートし、次いで、13,000rpmで1分間遠心分離した。溶出液を回収し、スピンカラムを捨てた。
A塩基付加試薬(NEB番号E6053L)を氷上で解凍し、A塩基付加マスターミックスを氷上で調製した。1試料当たり10μlのマスターミックスを調製するため、2μlのヌクレアーゼフリー水を5μlの10×のdA−Tailing反応緩衝剤および3μlのKlenow Fragment(3’→5’exo−)と混合した。マスターミックス10μlを各精製末端修復DNA試料40μlに、氷上の96ウェルPCRプレート内で添加した。反応物を熱サイクラー内にて37℃で30分間インキュベートした。QIAGEN MinElute(登録商標)カラムを使用して、各試料を精製した。短時間で、5×のQIAGEN PBI緩衝剤を、1.5ml微量遠心機チューブ内の試料に添加した(例えば、PBI緩衝剤250μlを試料50μlに添加した。)。各試料をボルテックスし、短時間でスピンダウンし、MinEluteスピンカラムに移した。MinEluteスピンカラムを13,000rpmで1分間遠心分離し、フロースルーを捨てた。QIAGEN PE緩衝剤750μlをカラムに添加し、13,000rpmで1分間遠心分離し、フロースルーを捨てた。スピンカラムを再び13,000rpmで1分間遠心分離し、清潔な1.5ml微量遠心機チューブに移した。カラムを2−3分間風乾した。第1の溶出のため、13μlのQIAGEN Elution Buffer(10mMのTris、pH8.5)を各カラムに添加し、2−3分間インキュベートし、次いで、13,000rpmで1分間遠心分離した。第2の溶出のため、13μlのQIAGEN Elution Bufferを添加し、1分間インキュベートし、次いで、13,000rpmで1分間遠心分離した。溶出液を回収し、スピンカラムを捨てた。
ライゲーション試薬(NEB番号E6056L)を解凍し、ライゲーションマスターミックスを氷上で調製した。1試料当たり36μlのマスターミックスを調製するため、12μlの5×のQuick Ligation反応緩衝剤を3.3μlのIllumina Multiplex Adaptor(15uM、Illuminaカタログ番号PE−400−1001中に含まれる。)に添加した(3.3μlのアダプター/1μgの出発インプットDNAを使用した。)。例えば、500ngのインプットDNAの1つの試料のため、アダプターを最初に水中で希釈し(2μlのアダプタープラス2μlのH2O)、次いで、この希釈アダプターミックス3.3μl、ヌクレアーゼフリー水15.7μlおよびQuick T4 DNAリガーゼ5μlを、ライゲーション反応に添加した。>1μgの出発材料のため、アダプター>3.3μlを使用した。したがって、より少ない水を添加して、希釈アダプターミックスおよびヌクレアーゼフリー水の総体積を19μlに保持した。
PCR試薬を解凍し、PCRマスターミックスを氷上で調製した。1試料当たり62μlのマスターミックスのため、HF Buffer(Finnzyme、NEB カタログ番号F−531S)を有する50μlの2×のPhusion High Fidelityマスターミックス、8μlのヌクレアーゼフリー水、2μlのIllumina Primer 1.0(25μM)、および2μlのIllumina Primer 2.0(0.5μM)を使用した。次いでマスターミックス62μlを、適切なバーコードを有する2μlのIllumina Index Primer(25μM、Illumina カタログ番号PE−400−1001に含まれる。)および36μlのライゲートDNA試料と、96ウェルPCRプレート内で混合した。
1サイクル 98℃ 30秒
18サイクル 98℃ 10秒
65℃ 30秒
72℃ 30秒
1サイクル 72℃ 5分
4℃ 保持
プールインデックス試料ライブラリー
インデックスされ、精製され、Q−PCRによって定量化されたライブラリーのプール(最大12plexまで)を氷上で作製した。等モルのプールを1.5ml微量遠心機チューブ内で調製して、ハイブリッド選択プロセスにおいて同等に各試料を表すことを確保した。これらのプールの各々に関するDNAの全インプットは、2000ngから500ngの範囲であってよい。典型的に、全インプットDNAは2000ngである。したがって、12個の試料がプールされるなら、各々166.67ngがプールされて、合計2000ngを達成することができる。2000ngのライブラリープールの最終体積は、4μlであるはずである。インデックス化ライブラリーの濃度を変動することにより、プールはより大きい任意の体積で作製することができるが、次いでプールはspeedvacによって(低熱を使用して)乾燥し、4μlのヌクレアーゼフリー水中で再構成することができる。
ビオチン化RNAベイトへのプールDNAライブラリーのハイブリダイゼーション
Agilent SureSelect Target Enrichment Paired Endキット(番号G3360A−J)を、この実験に使用した。Hybridization Buffer番号3、SureSelect Block番号1、SureSelect Block番号2、Paired End Primer 1.0ブロック、Index Primer 1−12ブロック、RNAseブロック、およびビオチン化RNAベイトを氷上で解凍した。
a.ハイブリダイゼーション緩衝剤ミックス(1反応当たり13μl):
i.Hybridization Buffer番号1(Agilent)−25μl
ii.Hybridization Buffer番号2(Agilent)−1μl
iii.Hybridization Buffer番号3(Agilent)−10μl
iv.Hybridization Buffer番号4(Agilent)−13μl
b.ブロッキングミックス(1反応当たり8μl):
i.SureSelect Block番号1(Agilent)−2.5μl
ii.SureSelect Block番号2(Agilent)−2.5μl
iii.Paired Endプライマー1.0ブロック(IDT、H2Oを用いて200μMに再懸濁される。)−1.5μl
iv.Index Primer 1−12ブロック(IDT、H2Oを用いて200μMに再懸濁される。)−1.5μl
c.RNaseブロックの希釈
i.テリトリー<3Mbを有するカスタムビオチン化RNAベイト用:1μlのRNase Block(Agilent)を9μlの水中に希釈した。
ii.ベイトテリトリー>3Mbを有するカスタムベイト用:1μlのRNaseブロックを3μlの水中に希釈した(捕捉反応7μL当たり、まだ0.5μlのRNaseブロック)
d.ベイトミックス:(1反応当たり7μl)
i.RNAベイト−2μl(ベイトテリトリー>3Mbを有するベイトには、5μlベイトを使用した。)
ii.希釈RNaseブロック−5μl(ベイトテリトリー>3Mbを有するベイトには、上記に示されている通りに希釈された2μlのRNaseブロックを使用した。)
SureSelect Wash Buffer番号2を65℃で熱ブロック内にて予備加温した。Dynal MyOne Streptavidin T1ビーズ(Invitrogen)をボルテックスし、再懸濁した。Dynalビーズ(例えば、1200μlのSureSelect Binding Bufferを使用して、300μlのDynalビーズを調製した。)50μl当たり200μlのSureSelect Binding Bufferを添加することによって、ビーズを洗浄した。ビーズを5秒間ボルテックスし、短時間でスピンダウンする。ビーズを磁石台上に約15秒間または全てのビーズを捕捉するまで配置した。上澄みを除去し、捨てた。SureSelect Binding Bufferを用いてさらに2回洗浄を反復し、合計3回洗浄した。洗浄した後、Dynalビーズ50μl当たり200μlのSureSelect Binding Buffer中にビーズを再懸濁した(例えば、1200μlのSureSelect Binding Bufferを使用して、300μlのDynalビーズを調製した。)。再懸濁ビーズをボルテックスし、短時間でスピンダウンした。再懸濁ビーズ200μlを個別の1.5ml微量遠心機チューブ内にアリコットした。
インキュベーションの24時間後に、65℃での熱サイクラー内のPCRプレートから、調製ビーズ200μlを含有するチューブ中に室温で、各ハイブリダイズ化試料を迅速にピペットで取った。試料およびビーズの混合物を5秒間ボルテックスし、ローテーター上にて室温で30分間インキュベートして、適正な混合を確保した。次いでチューブを迅速にスピンダウンした。ビーズを磁石上に捕捉し(2分間)、上澄みを除去し、捨てた。低ストリンジェンシー洗浄のために、ビーズを500μlのSureSelect Wash Buffer番号1中に再懸濁した。試料を5秒間ボルテックスし、15分間室温でインキュベートし、磁石から外した。試料を3−5分毎に5秒間ボルテックスした。チューブを迅速にスピンダウンした。ビーズを次いで磁石台上で2分間捕捉し、上澄みを除去し、捨てた。オフターゲット材料を除去するための高ストリンジェンシー洗浄のため、65℃に予備加熱されたたSureSelect Wash Buffer番号2でビーズを洗浄した。短時間で、ビーズを500μlの予備加温SureSelect Wash Buffer番号2中に再懸濁し、ボルテックサー上で5秒間混合して、ビーズを再懸濁した。ビーズを遠心機内にて短時間でスピンダウンし、5秒間室温で時折ボルテックス混合しながら65℃で10分間熱ブロック内にてインキュベートした。次いでビーズを遠心機内にて短時間でスピンダウンし、磁石上で2分間捕捉した。予備加温SureSelect Wash Buffer番号2を用いて65℃でさらに2回洗浄を反復し、合計3回洗浄した。次いで洗浄緩衝剤を完全に除去し、50μlのSureSelect Elution Bufferをビーズに添加し、続いて、5秒間ボルテックスしてビーズを混合した。5秒間時折ボルテックス混合しながら、試料を10分間室温でインキュベートした。ビーズを遠心機内にて短時間でスピンダウンし、磁石台上で捕捉した。捕捉DNAを含有する上澄みを、新たな1.5ml微量遠心機チューブにピペットで取った。50μlのSureSelect Neutralization Bufferを捕捉DNAに添加した。試料を5秒間ボルテックスし、遠心機内にて短時間でスピンダウンし、1.8×体積のAMPureXPビーズを使用して精製した。DNAを40μlのヌクレアーゼフリー水中に溶出した。
PCR試薬を解凍し、PCRマスターミックスを氷上で調製した。1試料当たりのマスターミックス60μlのため、HF緩衝剤(NEB番号F−531S)を有する50μlの2×のPhusion High Fidelityマスターミックスを、8μlのヌクレアーゼフリー水、1μlのQPCRプライマー1.1(H2O中100μM)、および1μlのQPCRプライマー2.1(H2O中100μM)と混合した。Q−PCRのためのプライマー配列は:
QPCRプライマー1.1(IDTからHPLC精製された。):
5’AATGATACGGCGACCACCGAGAT3’(配列番号79)
QPCRプライマー2.1(IDTからHPLC精製された。):
5’CAAGCAGAAGACGGCATACGA3’(配列番号80)
マスターミックス60μlを各精製捕捉DNA試料40μlに、96ウェルPCRプレート中で添加した。反応物を熱サイクラー内にて以下の通りにインキュベートした:
1サイクル 98℃ 30秒
12サイクル 98℃ 10秒
65℃ 30秒
72℃ 30秒
1サイクル 72℃ 5分
4℃ 保持
以下は、実施例に従って改変を同定するために使用された方法および実験条件の特定の実施形態を例証する。追加の転座スクリーニングは、例えば予備選択腫瘍試料から調製されたcDNAのいずれかのqRT−PCR分析を使用して行うことができる。
アーカイブされたホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)腫瘍標本からのDNA;NSCLC患者から24個を使用して、145個の癌遺伝子の2574個のエクソンの配列決定を行った。ゲノムDNAを使用するアダプターライゲーション方法、続いて、最適化されたRNAハイブリダイゼーション捕捉プローブを用いるハイブリダイゼーション選択によって、配列決定ライブラリーを構築した(Agilent SureSelectカスタムキット)。253×の平均深度に対して36×36つの対合読み取りを使用して、HiSeq 2000機器(Illumina)上での配列決定を行った。腫瘍組織からの変異呼び出しのために最適化されたツールの組合せを使用して、塩基置換、インデル、コピー数改変およびゲノム再編成のデータ加工および変異割り当てを行った。
Roche High Pureキットを使用して単一の5−10μmのFFPE組織セクションから抽出された全RNAからcDNAを生成し、SuperScript(登録商標)III First−Strand Synthesis System(Invitrogen)によってランダム6量体プライマーを有するcDNAに逆転写した。二本鎖cDNAをNEBNext(登録商標)mRNA Second Strand Synthesis Module(New England Biolabs)で作製し、FFPE DNA試料に関してライブラリー構築、ハイブリッド捕捉および配列決定へのインプットとして使用した。分析ツールの組合せを用いて、発現レベルの分析を行った。
この実施例は、マルチプレックス分析のための遺伝子、バリアントおよび癌型の選択を要約する4つの例示的表を提供する。
転移性大腸癌におけるKRAS G13D
乳癌におけるERBB2増幅
非小細胞肺癌におけるEGFR L858R
大腸癌、肺癌または乳癌におけるKRAS G13D
メラノーマ、大腸癌または肺癌におけるBRAF V600E
メラノーマにおけるNRAS Q61K
乳癌におけるPIK3CA H1047R
乳癌におけるFGFR1増幅
乳癌におけるPTEN二対立遺伝子不活性化
乳癌または膵癌におけるBRCA1二対立遺伝子不活性化
大腸癌におけるKRAS Q61H(早期臨床)
乳癌におけるPIK3CA H1047R(矛盾する臨床)
大腸癌におけるBRAF V600E(矛盾する臨床)
肺癌におけるERBB2変異または増幅(事例レポート)
肺癌におけるBRAF D594G(前臨床)
乳癌におけるFGFR1増幅(前臨床)
乳癌におけるATM二対立遺伝子不活性化(前臨床)
大腸癌におけるTSC1二対立遺伝子不活性化(前臨床)
乳癌におけるATR二対立遺伝子不活性化(理論)
肉腫におけるBRAF V600E変異(理論)
大腸癌におけるMSH2二対立遺伝子不活性化(強い臨床的証拠)
大腸癌におけるBRAF V600E(強い臨床的証拠)
肺癌におけるKRAS G13D(強い臨床的証拠)
乳癌におけるBRCA1不活性化(強い臨床的証拠)
大腸癌におけるAPC二対立遺伝子不活性化
乳癌におけるTP53二対立遺伝子不活性化
メラノーマにおけるMITF増幅
卵巣癌におけるARID1A
公知癌遺伝子における新規な改変
治療の標的
公知癌遺伝子のオルソログ
表7は、3つの標的:SMAD3_標的_10、SMAD3_標的_11、SMAD3_標的_12のための例示的ベイトを提供している。
本明細書に記載されているベイズ手法を、以下の実施例において実施した。
本明細書において開示されているベイズ手法のこれらの利益をさらに実証するため、人工的な低純度の多クローン性「腫瘍」試料を、1000ゲノムプロジェクトにおける10人の参加者からのDNAの等しい付加混合物によって構築し、これによって、全DNA(非公式のヘテロ接合性SNPから生じる。)の約5%または10%に存在する多数の配列バリアントを含有するDNAプールを創出する。ミックスを、182個の癌関連遺伝子エクソンのハイブリッド選択にかけ、Illumina HiSeq2000プラットフォーム上で配列決定して、遺伝子パネルにわたっておよそ350×の平均カバレッジを得た。各構成要素試料を同様に個別に加工して、全てのSNP部位で遺伝子型を決定した。プール中に存在するおよそ260個の約5%「変異」のうち、1e−6の事前を使用して高い信頼で89%を検出したが、一方で、それぞれ1%および10%の事前を使用して94%および95%が検出可能であり(見逃された部位の平均カバレッジ約125×)、上記の理論的結論を支持した。プール中に存在する102個の10%「変異」のうち、1e−6の事前を使用して高い信頼で98%を検出したが、一方で、1%および10%の事前を使用して99%および99%が検出可能であった(見逃した部位のカバレッジ13×)。
COSMICデータベース(ワールドワイドウェブ上でsanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic)からのいくつかの癌型における関連の変異の頻度の事前予想を誘導し、ルーチン的臨床標本から抽出された80超の肺癌および大腸癌の試料を分析した。この癌型におけるこの変異についての3%事前の組込みによってのみ検出することができる大腸癌における1%のPIK3CA変異p.H1047Rを含めて、20個超の異なる遺伝子における公知の変異を観察した。これらの結果は、腫瘍型特異的変異スペクトルの周辺での事前予想の賢明な組込みが、臨床状況にとってNGSベースの腫瘍ゲノム分析の翻訳に有益であり得ることを示している。
FFPE乳癌試料について約260×に配列決定された182個の癌関連遺伝子のエクソンにおける置換変異呼び出しを行った。代わりの対立遺伝子の>2コピーを有する部位の数は1,793である。変異の存在における>99%の事後信頼を有する部位の数は402である。フィルター後に残留している部位の数は188であり、これはおよそ、バリアント部位の予想数である。dbSNPにない部位の数は14であり、これは、およそ、dbSNPが>90%の変動を捕捉する場合にdbSNPにない部位の予想数である。非同義部位の数は5である。COSMICにおける部位の数は2である(PIK3CA p.H1047RおよびP53 p.F113S)。
多くのルーチン的臨床標本は、関連の希少変異を含有する。図5は、100個超の臨床的癌試料における変異頻度を示す。試料は、主に大腸癌および肺癌のFFPE生検物、外科的切除物または細針吸引物であった。一連の臨床試料において見出された公知の変異の頻度スペクトルは、表12に示されている。
溶液ベースのゲノム標的選択技法の利用能は、標的化配列決定用途の急速な開発を可能にし、この一部は、臨床的配列決定試験の導入に至った。市販化されたハイブリダイゼーション捕捉試薬は、ビオチン化DNAまたはRNAプローブ(「ベイト」)に変換されているアレイ合成オリゴヌクレオチドに基づく。しかしながら、プローブのこれらの複合プールを生成する方法は、性能課題、例えば高GC含有量標的の捕捉に直面する。
3つのベイトセットを試験した。結果は図7に要約されている。ベイトセットは以下の通りであった:
ベイトセット番号1は、5’−ビオチン化の個別合成DNAオリゴヌクレオチドベイトのみからなる。
ベイトセットAは、5’−ビオチン化の個別合成DNAオリゴヌクレオチドベイトのみからなる。元のセットは、標的テリトリーの133kbをカバーする1000個のオリゴであった(本明細書において「大きなセット」、「ベイトセットA」または「DNAオリゴベイト」と称される。)。
オフターゲット核酸相互作用は、捕捉プローブ、例えばオリゴヌクレオチドベイトへのハイブリダイゼーション(例えば、溶液または固相ハイブリダイゼーション)によって標的核酸の選択の効率を制限する恐れがある。オフターゲット選択は、典型的に、ハイブリッド選択のストリンジェンシー条件が低減される場合、例えばより低い核酸溶融温度(例えば、RNA:DNA二重鎖と比較した場合のDNA:DNA二重鎖のTm)を有する標的:捕捉二重鎖のために選択する場合に増加される。したがって、オフターゲット配列の捕捉は、DNA:DNAハイブリダイゼーションにおいて、より問題であり得る。オフターゲット選択は、例えば、ハイブリダイゼーション捕捉および/またはアーチファクト的ハイブリッド捕捉の減少収率の1つ以上をもたらす恐れがあり、これが順じて、後続のステップ、例えば配列決定における非効率に至る。
この実施例は、パーセントオンターゲット選択が、ブロッキングオリゴヌクレオチドの長さを延長することによって改善され得ることを実証する。
本明細書において記述されている全ての公報、特許および特許出願は、各個別の公報、特許または特許出願が参照により組み込まれると具体的および個別に示されているかのように、本明細書によって参照によりそれらの全体を組み込まれる。矛盾の場合において、本明細書における任意の定義を含めて、本出願が優先される。
Claims (86)
- 少なくとも1つのTm増強基を有するオリゴヌクレオチドを含む、所望の鋳型核酸の選択方法における使用のためのオリゴヌクレオチド。
- 選択方法がハイブリッド捕捉方法を含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 所望の鋳型核酸が、鋳型の集団から選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドが、所望の鋳型の少なくとも1つの配列に実質的に相補的である、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドが、ブロッカーまたはベイトから選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも1つのTm増強基が、ロックド核酸基、二環式核酸基、C5修飾ピリミジン、ペプチド核酸基およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも1つのメンバーである、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも1つのTm増強基が、ロックド核酸基、二環式核酸基またはこれらの組合せを含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも1つのTm増強基が、ロックド核酸基または二環式核酸基を含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- ロックド核酸基または二環式核酸基が、シトシン、アデニンおよびチミンからなる群から選択される核酸塩基を含む、請求項8に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも1つのTm増強基が、約1.4℃から約25℃を含む範囲における最適な増強Tm値を提供する、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドが、配列番号2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、13、14、15、16、18、19、21、22、24、25、27、28、30、32、34および36からなる群から選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドがブロッカーを含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- ブロッカーが、所望の鋳型核酸の末端における少なくとも1つの配列に対する実質的な配列相補性を有する、請求項12に記載のオリゴヌクレオチド。
- ブロッカーが、複数のヌクレオチドを有するバーコードドメインをさらに含む、請求項12に記載のオリゴヌクレオチド。
- 複数のヌクレオチドが、実質的に連続して位置する約5個から約12個のヌクレオチドを含む、請求項14に記載のオリゴヌクレオチド。
- バーコードドメインが、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、3−ニトロピロール、5−ニトロインドール、およびこれらの組合せから選択される群から選択される少なくとも1つのメンバーを核酸塩基として有するヌクレオチドを含む、請求項14に記載のオリゴヌクレオチド。
- 所望の鋳型核酸の選択方法における改善を提供する、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 改善が、所望されない鋳型核酸に対して所望の鋳型核酸の濃縮の改善からなる、請求項17に記載のオリゴヌクレオチド。
- 濃縮の改善が少なくとも65%の濃縮を含む、請求項18に記載のオリゴヌクレオチド。
- 3’末端修飾をさらに含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 3’末端修飾が、オリゴヌクレオチドからのポリメラーゼ指向性合成を防止する、請求項20に記載のオリゴヌクレオチド。
- 3’末端修飾が、3’−ジデオキシヌクレオチド、2’,3’−ジデオキシヌクレオチドまたは3’−スペーサーC3基を含む、請求項20に記載のオリゴヌクレオチド。
- 3’末端修飾をさらに含む、請求項16に記載のオリゴヌクレオチド。
- 3’末端修飾が、3’−デオキシヌクレオチド、2’,3’−ジデオキシヌクレオチドまたは3’−スペーサーC3基を含む、請求項23に記載のオリゴヌクレオチド。
- 鋳型核酸の集団から所望の鋳型核酸を選択する方法であって、
(a)鋳型核酸の集団と、Tm増強オリゴヌクレオチドを含む第1のオリゴヌクレオチドとを接触させて、混合物を形成するステップ;および
(b)混合物から所望の鋳型核酸を単離するステップ
を含む方法。 - 鋳型核酸の集団と、Tm増強オリゴヌクレオチドを含む第1のオリゴヌクレオチドとを接触させるステップが、Tm増強オリゴヌクレオチドのほとんど最適な増強Tm値の温度で混合物をインキュベートすることを含む、請求項25に記載の方法。
- Tm増強オリゴヌクレオチドが複数のTm増強基を含む、請求項25に記載の方法。
- 複数のTm増強基が約2個から約25個のTm増強基を含む、請求項26に記載の方法。
- 複数のTm増強基がロックド核酸基または二環式核酸基を含む、請求項26に記載の方法。
- ロックド核酸基または二環式核酸基が、シトシン、アデニンおよびチミンからなる群から選択される核酸塩基を含む、請求項29に記載の方法。
- Tm増強オリゴヌクレオチドが、配列番号2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、13、14、15、16、18、19、21、22、24、25、27、28、30、32、34および36からなる群から選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項25に記載の方法。
- Tm増強オリゴヌクレオチドがブロッカーを含む、請求項25に記載の方法。
- ブロッカーが、鋳型核酸の集団の各メンバーの末端における少なくとも1つの配列に対する実質的な配列相補性を有する、請求項32に記載の方法。
- ブロッカーが、複数のヌクレオチドを有するバーコードドメインをさらに含む、請求項32に記載の方法。
- 複数のヌクレオチドが、実質的に連続して位置する約5個から約12個のヌクレオチドを含む、請求項32に記載の方法。
- バーコードドメインが、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、3−ニトロピロール、5−ニトロインドール、およびこれらの組合せから選択される群から選択される少なくとも1つのメンバーを核酸塩基として有するヌクレオチドを含む、請求項34に記載の方法。
- 鋳型核酸の集団と、Tm増強オリゴヌクレオチドを含む第1のオリゴヌクレオチドとを接触させるステップが、所望の鋳型核酸と所望されない鋳型核酸との間の複合体形成の実質的阻害をもたらす、請求項25に記載の方法。
- 所望の鋳型核酸を単離するステップが、
(i)所望の核酸と第2のオリゴヌクレオチドとの間にハイブリッド複合体を形成すること;および
(ii)混合物からハイブリッド複合体を分離すること
を含む、請求項25に記載の方法。 - 第2のオリゴヌクレオチドがベイトを含む、請求項38に記載の方法。
- ベイトが、所望の鋳型核酸内の配列に対する実質的な配列相補性を有する配列を含む、請求項39に記載の方法。
- ベイトが複数のTm増強基を含む、請求項39に記載の方法。
- ベイトが、ハイブリッド複合体の選択を可能にするための共有結合修飾を含む、請求項39に記載の方法。
- 共有結合修飾がビオチン化された基である、請求項42に記載の方法。
- ハイブリッド複合体が、アビジンまたはストレプトアビジンで固定化された固体支持体と接触される、請求項43に記載の方法。
- 大規模平行配列決定を行う方法であって、
(a)鋳型核酸のライブラリー集団を調製すること;
(b)鋳型核酸のライブラリー集団と、ブロッカーとして少なくとも1つのTm増強オリゴヌクレオチド、ベイトとして複数のオリゴヌクレオチド、およびCot−1 DNAとを接触させて、混合物を形成すること;
(c)混合物から複数の所望の鋳型核酸を単離すること;ならびに
(d)複数の所望の鋳型核酸を配列決定すること
を含み、
ここで、ベイトとして複数のオリゴヌクレオチドの少なくとも1つのメンバーが、複数の所望の鋳型核酸の少なくとも1つのメンバー内の配列に対する実質的な配列相補性を有する
方法。 - 鋳型核酸のライブラリー集団のメンバーが各々、約15個のヌクレオチドから約75個のヌクレオチドのサイズ範囲を有する少なくとも1つの同一の末端アダプター配列を含む、請求項45に記載の方法。
- ブロッカーが、鋳型核酸のライブラリー集団の少なくとも1個の同一の末端アダプター配列に対する実質的な配列相補性を有する、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも1個の同一の末端アダプター配列がバーコードドメインを含む、請求項46に記載の方法。
- ブロッカーが、少なくとも1個の同一の末端アダプター配列に対する実質的な配列相補性を有する、請求項48に記載の方法。
- 接触ステップ(b)が、少なくとも1個のTm増強オリゴヌクレオチドのほとんど最適な増強Tm値の温度で混合物をインキュベートすることを含む、請求項47に記載の方法。
- ブロッカーとしての少なくとも1つのTm増強オリゴヌクレオチドが、配列番号2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、13、14、15、16、18、19、21、22、24、25、27、28、30、32、34および36からなる群から選択される少なくとも1つのメンバーを含む、請求項45に記載の方法。
- 混合物から複数の所望の鋳型核酸を単離するステップが、
(i)複数の所望の鋳型核酸と、ベイトとして複数のオリゴヌクレオチドとの間に複数のハイブリッド複合体を形成すること;および
(ii)混合物から複数のハイブリッド複合体を分離すること
を含む、請求項45に記載の方法。 - ベイトとしての複数のオリゴヌクレオチドが複数のTm増強基を含む、請求項52に記載の方法。
- 各ベイトが、ベイトを含むハイブリッド複合体の選択を可能にするための共有結合修飾を含む、請求項52に記載の方法。
- 共有結合修飾が、ビオチン化された基である、請求項54に記載の方法。
- 複数のハイブリッド複合体が、アビジンまたはストレプトアビジンで固定化された固体支持体と接触される、請求項55に記載の方法。
- ハイブリダイゼーション反応において核酸を選択する、またはオフターゲット核酸選択を低減する方法であって、
(a)場合によって、複数の標的メンバー、例えば、標的核酸(例えば、DNAまたはRNA)メンバーを含むライブラリーを獲得し、ここで、標的メンバーの1つ以上は、挿入配列(例えば、目的の遺伝子のセグメント)および非標的核酸配列(例えば、アダプター配列)を含む、こと;ならびに
(b)ライブラリーと、捕捉プローブ、例えば、ベイトセットまたは複数のベイトセット、およびブロッキングオリゴヌクレオチドとを接触させること
を含み、
(i)ブロッキングオリゴヌクレオチドが、ライブラリーメンバー(例えば、アダプター配列)の非標的核酸配列に相補的である、またはこの非標的核酸配列と二重鎖を形成することができ、
(ii)ブロッキングオリゴヌクレオチドとライブラリーメンバーの非標的核酸配列との間の結合相互作用に関連のパラメータについての値が、バックグラウンド核酸に対する非標的核酸配列、例えば他の相補的非標的核酸配列についての値より高く、これによって、オフターゲット選択を最小化する
方法。 - ハイブリダイゼーション反応が、固相または溶液相ハイブリダイゼーション反応である、請求項57に記載の方法。
- 選択ライブラリーメンバー(本明細書において「ライブラリーキャッチ」とも称される)を提供することをさらに含む、請求項57に記載の方法。
- 捕捉プローブから選択ライブラリーメンバーを分離することをさらに含む、請求項57に記載の方法。
- 選択ライブラリーメンバーの挿入を配列決定することを含む、請求項57に記載の方法。
- 結合相互作用に関連のパラメータについての値が、親和性、会合率、解離率の反比例、または核酸溶融温度についての値であり得る(例えば、Tm、DNA鎖の半分が二重ヘリックス状態であり、半分がランダムコイル状態である温度)、請求項57に記載の方法。
- 第1の非標的核酸配列、例えば第1のアダプター配列と二重鎖を形成する第1のブロッキングオリゴヌクレオチド、および場合によって、第2の非標的核酸配列、例えば第2のアダプター配列と二重鎖を形成する第2のブロッキングオリゴヌクレオチドの使用を含む、請求項57に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドが、反応における配列と、捕捉プローブに対して二重鎖化されるライブラリーメンバーの非標的配列との間の二重鎖の形成を阻害する(例えば、ブロッキングオリゴヌクレオチドは、ライブラリーメンバーの連鎖状化鎖の形成を阻害する。)、請求項57に記載の方法。
- ライブラリーメンバーが、挿入、例えばサブゲノム間隔、および非標的配列、例えば複数のライブラリーメンバーに共通の配列を含む、請求項57に記載の方法。
- 挿入が、例えば腫瘍試料からの核酸からのサブゲノム配列であり、非標的配列が、非天然の配列、またはサブゲノム配列中に存在しない配列、例えば増幅タグまたはバーコーディングタグである、請求項57に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドが、少なくともX個のライブラリーメンバー(ここで、Xは、1、2、5、10、20、50、100または200に等しい。)の非標的核酸配列と二重鎖を形成し、二重鎖が、バックグラウンド核酸に対する非標的核酸配列、例えば非標的配列の相補体によって形成される二重鎖のTmより高いTmを有する、請求項57に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチド二重鎖の、より高い核酸溶融温度が、約5℃から25℃、またはこれ以上(例えば、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、またはこれ以上)である、請求項67に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドとライブラリーメンバーの非標的核酸配列との間の二重鎖についてのTmが、非標的核酸配列およびこの正確な相補体の二重鎖についてのTmより高い、請求項68に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドが、バックグラウンド核酸に対する非標的核酸配列、例えば非標的配列の相補体の会合率より高い、少なくともX個のライブラリーメンバー(ここで、Xは1、2、5、10、20、50、100または200に等しい。)の非標的核酸配列に対する会合率を有する、請求項57に記載の方法。
- より高い会合率が、バックグラウンド核酸に対する非標的核酸配列の会合率の約2倍から10倍超(例えば、2倍、4倍、6倍、8倍、10倍、またはこれ以上)である、請求項70に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドと少なくともX個のライブラリーメンバー(ここで、Xは、1、2、5、10、20、50、100または200に等しい。)の非標的核酸配列との間に形成される二重鎖が、非標的配列とこの相補体との間、例えば二本鎖化アダプターのワトソン鎖とクリック鎖との間に形成される二重鎖より長い、請求項57に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドと非標的核酸配列との間の二重鎖が、非標的配列とこの相補体との間、例えば二本鎖化アダプターのワトソン鎖とクリック鎖との間に形成される二重鎖より少なくとも1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、15個または20個のヌクレオチド長い、請求項72に記載の方法。
- ブロッキングオリゴヌクレオチドが、1個以上の非天然ヌクレオチドを含む、請求項57に記載の方法。
- 非天然ヌクレオチドを有するブロッキングオリゴヌクレオチドと、少なくともX個のライブラリーメンバー(ここで、Xは、1、2、5、10、20、50、100または200に等しい。)の非標的核酸配列との間に形成される二重鎖が、バックグラウンド核酸に対する非標的核酸配列、例えば他の相補的非標的核酸配列についての値より高い、結合相互作用(例えば、親和性、会合率、解離率の反比例、またはTm)に関連のパラメータについての値を有する、請求項74に記載の方法。
- 例えば本明細書において記載されている通りの複数のブロッキングオリゴヌクレオチドを含む調製物。
- 例えば本明細書において記載されている通りの複数のライブラリーメンバー;および例えば本明細書において記載されている通りの捕捉プローブの一方または両方をさらに含む、請求項76に記載の調製物。
- 例えば本明細書において記載されている通りの複数のブロッキングオリゴヌクレオチドを含むキット。
- 配列決定方法、アラインメント方法、呼び出し方法、またはベイトを使用する方法から選択される少なくとも1つの方法と組み合わされる、本明細書に記載されているオフターゲット核酸選択を低減する方法。
- オフターゲット核酸選択を低減する方法であって、
(a)場合によって、複数の標的メンバー、例えば標的核酸(例えば、DNAまたはRNA)メンバーを含むライブラリーを獲得し、ここで、標的メンバーの1つ以上は、挿入配列(例えば、目的の遺伝子のセグメント)および非標的核酸配列(例えば、アダプター配列)を含む、こと;ならびに
(b)ライブラリーと、捕捉プローブ、例えばベイトセットまたは複数のベイトセットとを接触させること
を含み、
ここで、非標的配列は十分に短いので、挿入配列と捕捉プローブとの間の結合相互作用に関連のパラメータについての値が、非標的核酸配列およびこの相補体についてのその値より高く、これによって、オフターゲット選択を最小化する
方法。 - 複数のベイトオリゴヌクレオチドを含む、所望の鋳型核酸の選択方法における使用のための捕捉試薬であって、複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーが合成化学プロセスによって個別に調製され、複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーの品質および活性が生成物規格によって決定される捕捉試薬。
- 複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーについての生成物規格が、標準化されている複数のベイトオリゴヌクレオチドを調製するための少なくとも1つのパラメータを含み、複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーが、複数のオリゴヌクレオチドの正常範囲内の少なくとも1つのパラメータを所有する、請求項81に記載の捕捉試薬。
- 複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーが、非修飾ベイトオリゴヌクレオチドまたは少なくとも1個のTm増強基を含有するベイトオリゴヌクレオチドを含む、請求項81に記載の捕捉試薬。
- 複数のベイトオリゴヌクレオチドでハイブリッド捕捉を行うことを含む、オフターゲット核酸選択を低減する方法であって、複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーが合成化学プロセスによって個別に調製され、複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーの品質および活性が生成物規格よって決定される方法。
- 複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーについての生成物規格が、標準化されている複数のベイトオリゴヌクレオチドを調製するための少なくとも1つのパラメータを含み、複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーが、複数のオリゴヌクレオチドの正常範囲内の少なくとも1つのパラメータを所有する、請求項84に記載の方法。
- 複数のベイトオリゴヌクレオチドの各メンバーが、非修飾ベイトオリゴヌクレオチドまたは少なくとも1個のTm増強基を含有するベイトオリゴヌクレオチドを含む、請求項84に記載の方法。
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CN115920796A (zh) | 2015-12-01 | 2023-04-07 | 特韦斯特生物科学公司 | 功能化表面及其制备 |
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US10961568B2 (en) * | 2016-03-28 | 2021-03-30 | Boreal Genomics, Inc. | Linked target capture |
WO2017180592A1 (en) * | 2016-04-11 | 2017-10-19 | President And Fellows Of Harvard College | Sequence design for efficient assembly of nucleic acid structures |
WO2017177308A1 (en) * | 2016-04-15 | 2017-10-19 | University Health Network (Uhn) | Hybrid-capture sequencing for determining immune cell clonality |
EP3459115A4 (en) | 2016-05-16 | 2020-04-08 | Agilome, Inc. | GRAPHEN-FET DEVICES, SYSTEMS AND METHODS FOR USE THEREOF FOR SEQUENCING NUCLEIC ACIDS |
SG11201901563UA (en) | 2016-08-22 | 2019-03-28 | Twist Bioscience Corp | De novo synthesized nucleic acid libraries |
JP7217224B2 (ja) | 2016-08-25 | 2023-02-02 | レゾリューション バイオサイエンス, インコーポレイテッド | Dna試料中のゲノムコピー変化の検出方法 |
JP6997773B2 (ja) * | 2016-09-15 | 2022-01-18 | アーチャーディーエックス, エルエルシー | 無細胞dnaの分析用の核酸サンプル調製の方法 |
EP3933039A1 (en) * | 2016-09-15 | 2022-01-05 | ArcherDX, LLC | Methods of nucleic acid sample preparation |
EP3516528A4 (en) | 2016-09-21 | 2020-06-24 | Twist Bioscience Corporation | NUCLEIC ACID BASED DATA STORAGE |
AU2017355460B2 (en) | 2016-11-02 | 2022-12-08 | Archerdx, Llc | Methods of nucleic acid sample preparation for immune repertoire sequencing |
AU2017378492B2 (en) | 2016-12-16 | 2022-06-16 | Twist Bioscience Corporation | Variant libraries of the immunological synapse and synthesis thereof |
WO2018119399A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Grail, Inc. | Methods for high efficiency library preparation using double-stranded adapters |
CN110892485B (zh) | 2017-02-22 | 2024-03-22 | 特韦斯特生物科学公司 | 基于核酸的数据存储 |
WO2018170169A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Twist Bioscience Corporation | Variant libraries of the immunological synapse and synthesis thereof |
US11274344B2 (en) * | 2017-03-30 | 2022-03-15 | Grail, Inc. | Enhanced ligation in sequencing library preparation |
WO2018183897A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Grail, Inc. | Higher target capture efficiency using probe extension |
WO2018218136A1 (en) * | 2017-05-25 | 2018-11-29 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Reverse complement adapters for the mitigation of umi hopping |
WO2018231864A1 (en) | 2017-06-12 | 2018-12-20 | Twist Bioscience Corporation | Methods for seamless nucleic acid assembly |
EP3638782A4 (en) | 2017-06-12 | 2021-03-17 | Twist Bioscience Corporation | SEALLESS NUCLEIC ACID ASSEMBLY METHODS |
EP3681906A4 (en) | 2017-09-11 | 2021-06-09 | Twist Bioscience Corporation | GPCR-BINDING PROTEINS AND THEIR SYNTHESIS |
WO2019075197A1 (en) | 2017-10-11 | 2019-04-18 | The General Hospital Corporation | METHODS OF DETECTION OF INDIVIDUAL SITE-SPECIFIC PARASITE GENOMIC DEAMINATION BY BASE EDITING TECHNOLOGIES |
CA3079687A1 (en) | 2017-10-18 | 2019-04-25 | Chiahao TSUI | Selective enrichment of a population of dna in a mixed dna sample through targeted suppression of dna amplification |
KR20240024357A (ko) | 2017-10-20 | 2024-02-23 | 트위스트 바이오사이언스 코포레이션 | 폴리뉴클레오타이드 합성을 위한 가열된 나노웰 |
GB2585506A (en) | 2018-01-04 | 2021-01-13 | Twist Bioscience Corp | DNA-based digital information storage |
JP7460539B2 (ja) | 2018-04-17 | 2024-04-02 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | 核酸を結合、修飾、および切断する物質の基質選択性および部位のためのin vitroでの高感度アッセイ |
GB2590196A (en) * | 2018-05-18 | 2021-06-23 | Twist Bioscience Corp | Polynucleotides, reagents, and methods for nucleic acid hybridization |
CN108949941A (zh) * | 2018-06-25 | 2018-12-07 | 北京莲和医学检验所有限公司 | 低频突变检测方法、试剂盒和装置 |
US20210292746A1 (en) * | 2018-08-06 | 2021-09-23 | Northwestern University | Enhanced capture of target nucleic acids |
JP7431802B2 (ja) * | 2018-08-15 | 2024-02-15 | イルミナ インコーポレイテッド | ライブラリー富化を改善するための組成物および方法 |
CA3131514A1 (en) * | 2019-02-25 | 2020-09-03 | Twist Bioscience Corporation | Compositions and methods for next generation sequencing |
WO2020176678A1 (en) | 2019-02-26 | 2020-09-03 | Twist Bioscience Corporation | Variant nucleic acid libraries for glp1 receptor |
EP3938506A4 (en) | 2019-02-26 | 2022-12-14 | Twist Bioscience Corporation | VARIANT NUCLEIC ACID LIBRARIES FOR OPTIMIZATION OF ANTIBODIES |
EP3987019A4 (en) | 2019-06-21 | 2023-04-19 | Twist Bioscience Corporation | BARCODE-BASED NUCLEIC ACID SEQUENCE ARRANGEMENT |
CN110527715A (zh) * | 2019-09-16 | 2019-12-03 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心 | 一种功能基因组克隆子库的测序方法 |
CN115917000A (zh) * | 2020-03-26 | 2023-04-04 | 合成Dna技术公司 | 杂交捕获方法和组合物 |
JP2024519596A (ja) * | 2021-05-24 | 2024-05-17 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 核酸ハイブリダイゼーションのためのエンハンサーオリゴヌクレオチド |
WO2023034969A1 (en) | 2021-09-03 | 2023-03-09 | Idbydna Inc. | Hybridization probes containing fluorinated carbon chains and related methods |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110263434A1 (en) * | 2010-04-26 | 2011-10-27 | Hehuang Xie | Selective enrichment of cpg islands |
US20120010091A1 (en) * | 2009-03-30 | 2012-01-12 | Illumina, Inc. | Gene expression analysis in single cells |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6110676A (en) | 1996-12-04 | 2000-08-29 | Boston Probes, Inc. | Methods for suppressing the binding of detectable probes to non-target sequences in hybridization assays |
US5849497A (en) * | 1997-04-03 | 1998-12-15 | The Research Foundation Of State University Of New York | Specific inhibition of the polymerase chain reaction using a non-extendable oligonucleotide blocker |
US6936443B2 (en) * | 2000-04-03 | 2005-08-30 | Cytyc Corporation | Detection and typing of human papillomavirus using PNA probes |
WO2003014734A1 (fr) * | 2001-08-07 | 2003-02-20 | Keio University | Procede de detection d'une interaction entre une substance et une proteine, procede d'analyse de la proteine interagissant avec la substance et procede de formation d'un complexe contenant la substance et la proteine interagissant avec cette substance |
FR2842534B1 (fr) | 2002-07-19 | 2006-01-20 | Inst Nat Sante Rech Med | Amplification multiplex quantitative a l'echelle d'un genome, et applications a la detection de remaniements genomiques |
US20040022764A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-02-05 | Hanan Polansky | Inhibition of microcompetition with a foreign polynucleotide as treatment of chronic disease |
US20050181394A1 (en) | 2003-06-20 | 2005-08-18 | Illumina, Inc. | Methods and compositions for whole genome amplification and genotyping |
DE602004026077D1 (de) * | 2003-09-10 | 2010-04-29 | Althea Technologies Inc | Erstellung von expressionsprofilen unter verwendung von mikroarrays |
US7407753B2 (en) * | 2004-05-24 | 2008-08-05 | Yissum Research Development Company Of The Hebrewuniversityofjerusalem | Methods, kits and pharmaceutical compositions for diagnosing, delaying onset of, preventing and/or treating osteoporosis |
US7867703B2 (en) | 2004-08-26 | 2011-01-11 | Agilent Technologies, Inc. | Element defined sequence complexity reduction |
US20070111960A1 (en) * | 2005-03-04 | 2007-05-17 | Advandx, Inc. | High affinity probes for analysis of human papillomavirus expression |
JP4879975B2 (ja) | 2005-05-31 | 2012-02-22 | アプライド バイオシステムズ リミテッド ライアビリティー カンパニー | 短い核酸のマルチプレックス増幅 |
US20090068643A1 (en) * | 2005-11-23 | 2009-03-12 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Dual Function Primers for Amplifying DNA and Methods of Use |
US20100009355A1 (en) * | 2006-03-14 | 2010-01-14 | Kolodney Michael S | Selective amplification of minority mutations using primer blocking high-affinity oligonucleotides |
EP2158334B1 (en) * | 2007-05-18 | 2012-12-26 | AdvanDx, Inc. | Detection of methicillin-resistant staphylococcus aureus |
EP2245198A1 (en) | 2008-02-04 | 2010-11-03 | Massachusetts Institute of Technology | Selection of nucleic acids by solution hybridization to oligonucleotide baits |
EP2270203A1 (en) | 2009-06-29 | 2011-01-05 | AIT Austrian Institute of Technology GmbH | Oligonucleotide hybridization method |
CA2769302C (en) | 2009-07-30 | 2018-10-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A set of oligonucleotide probes as well as methods and uses related thereto |
US20110091939A1 (en) * | 2009-10-20 | 2011-04-21 | Longze Cui | Methods and Compositions for Removing Specific Target Nucleic Acids |
US20110129832A1 (en) * | 2009-10-27 | 2011-06-02 | Swift Biosciences, Inc. | Polynucleotide Primers and Probes |
EP2496712A1 (en) * | 2009-11-06 | 2012-09-12 | Enzymatics Inc. | Composition and method for synthesizing a deoxyribonucleotide chain using a double stranded nucleic acid complex with a thermostable polymerase |
US20110117559A1 (en) * | 2009-11-13 | 2011-05-19 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Small rna detection assays |
WO2011139920A2 (en) | 2010-04-29 | 2011-11-10 | Life Technologies Corporation | Methylation-specific competitive allele-specific taqman polymerase chain reaction (cast-pcr) |
CN101921874B (zh) * | 2010-06-30 | 2013-09-11 | 深圳华大基因科技有限公司 | 基于Solexa测序法的检测人类乳头瘤病毒的方法 |
WO2012018697A1 (en) | 2010-08-02 | 2012-02-09 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Methods for predicting stability and melting temperatures of nucleic acid duplexes |
CN101967476B (zh) * | 2010-09-21 | 2012-11-14 | 深圳华大基因科技有限公司 | 一种基于接头连接的DNA PCR-Free标签文库构建方法 |
CN103328654B (zh) * | 2010-10-27 | 2017-07-11 | 哈佛学院院长等 | 立足点引物双链体的组合物及其使用方法 |
WO2012061600A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | The Broad Institute, Inc. | Hybrid selection using genome-wide baits for selective genome enrichment in mixed samples |
KR20140024270A (ko) | 2010-12-30 | 2014-02-28 | 파운데이션 메디신 인코포레이티드 | 종양 샘플의 다유전자 분석의 최적화 |
US10196681B2 (en) * | 2011-10-06 | 2019-02-05 | Sequenom, Inc. | Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations |
JP6433893B2 (ja) * | 2012-07-03 | 2018-12-05 | インテグレイテツド・デイー・エヌ・エイ・テクノロジーズ・インコーポレイテツド | Tm増強ブロッキングオリゴヌクレオチド、ならびに標的濃縮の改善およびオフターゲット選択の低減のためのベイト |
-
2013
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120010091A1 (en) * | 2009-03-30 | 2012-01-12 | Illumina, Inc. | Gene expression analysis in single cells |
US20110263434A1 (en) * | 2010-04-26 | 2011-10-27 | Hehuang Xie | Selective enrichment of cpg islands |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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