JP2021080289A - 線維性疾患を処置するための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】線維性疾患を処置するための方法および組成物の提供。【解決手段】本発明は、特発性肺線維症等の線維性疾患および慢性過敏性肺臓炎等の前線維性疾患の予防または処置のための方法および組成物を提供する。特に、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたは前記抗体もしくはアゴニストを含む組成物の投与による、線維性疾患および前線維性疾患の予防または処置のための方法を提供する。本発明は、また、特発性肺線維症等の線維性疾患および慢性過敏性肺臓炎等の前線維性疾患の予防または処置のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む製造品またはキットを提供する。【選択図】なし

Description

関連出願への相互参照
本出願は、その全体が参考として本明細書に援用される、２０１５年６月１７日に出願
された米国仮特許出願第６２／１８１，１４６号、２０１６年２月１７日に出願された米
国仮特許出願第６２／２９６，４８２号および２０１６年６月１日に出願された米国仮特
許出願第６２／３４４，３５７号に対する優先権を主張する。これらの出願の開示は、そ
の全体が本明細書中に参考として援用される。

ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける次の提出の内容は、その全体が参照により本明７
０１７１２０００３４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録された日付：２０１６年６月１６
日、サイズ：９１ＫＢ）。

発明の分野
本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたは前記抗体もし
くはアゴニストを含む組成物の投与により、線維性疾患および前線維性（pre-fibrotic）
疾患を予防および／または処置するための方法に関する。

発明の背景
線維症は、強靱な線維性瘢痕組織の蓄積をもたらす、臓器または組織における細胞外マ
トリックス成分の過剰沈着によって特徴付けられる状態である。例えば、肺線維症は、マ
クロファージ、好中球、リンパ球および肥満細胞を含む炎症性応答によって特徴付けられ
る主要な型の線維性疾患である。特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、未知の病因による慢性肺
疾患であり、正常な肺実質が線維性組織に徐々に置き換わり、呼吸困難、咳、肺機能障害
および死亡率増加をもたらす。ＩＰＦは、予後不良となり、診断時からおよそ３年間の生
存期間中央値を有し、それに伴う罹患率が高く、クオリティオブライフに広範囲の悪影響
がある。多くのＩＰＦ患者は、呼吸不全で亡くなる。ＩＰＦの発症において起こるいくつ
かの病原となる事象が存在し、これらの事象のうちいくつかは、ＩＰＦ処置目的の治療剤
による標的とされてきた。マクロファージ、好中球またはリンパ球を標的とする治療アプ
ローチは、ＩＰＦ病因の経過を変更することができなかった。ＩＰＦおよび利用できるＩ
ＰＦ処置の総説については、Ahluwaliaら、Am J Respir Crit Care Med.、１９０巻
（８号）：８６７〜７８頁、２０１４年およびWoodcockら、F1000Prime Rep.、６巻：１
６頁、２０１４年を参照されたい。したがって、依然として、線維性疾患の病因に関与す
る免疫細胞の活性を制御することができる治療法の必要がある。

肥満細胞および肥満細胞メディエーターの数は、ＩＰＦにおいて有意に上昇する。肥満
細胞は、ＴＧＦ−βの主な供給源であり、ＴＧＦ−βは、線維芽細胞によるコラーゲン産
生の刺激および線維芽細胞から筋線維芽細胞への分化のためのシグナル伝達を介する、線
維症発症において役割を果たすサイトカインである。肥満細胞欠損マウスが、ブレオマイ
シン誘発肺線維症から保護されることも示された。Veerappanら、DNA Cell Biol.、３
２巻（４号）：２０６〜１８頁を参照されたい。肥満細胞は、ＩＰＦの病因に関与するよ
うであるが、線維性疾患発症の根底にある（underlay）数多くの複雑な病原性事象におけ
るその正確な役割は、依然として不明である。

シグレック（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球に存在し、細胞
表面の複合糖質に付着したシアル酸に対するその特異性によって特徴付けられる、１回膜
貫通細胞表面タンパク質である。シグレックファミリーは、哺乳動物において見出される
少なくとも１５種のメンバーを含有する（Ｐｉｌｌａｉら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．、３０巻：３５７〜３９２頁、２０１２年）。これらのメンバーは、シアロアド
ヘシン（ｓｉａｌｏａｄｈｅｓｉｏｎ）（シグレック−１）、ＣＤ２２（シグレック−２
）、ＣＤ３３（シグレック−３）、ミエリン関連糖タンパク質（シグレック−４）、シグ
レック−５、ＯＢＢＰ１（シグレック−６）、ＡＩＲＭ１（シグレック−７）、ＳＡＦ−
２（シグレック−８）およびＣＤ３２９（シグレック−９）を含む。シグレック−８は、
新規ヒト好酸球タンパク質を同定する試みの一環として最初に発見された。好酸球による
発現に加えて、これは、肥満細胞および好塩基球によっても発現される。シグレック−８
は、硫酸化グリカン、すなわち、６’−スルホ−シアリルルイスＸまたは６’−スルホ−
シアリル−Ｎ−アセチル−Ｓ−ラクトサミンを認識し、肥満細胞機能を阻害することが示
された細胞内免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含有する。シグレ
ック−８は、ＩｇＥ経路によって媒介される細胞性応答をモジュレートすることが示され
たが、非ＩｇＥ媒介性免疫応答経路におけるシグレック−８活性化の効果は、分かってい
ない。
特許出願、特許公報および科学文献を含む本明細書に引用されるあらゆる参考文献は、
個々の参考文献それぞれが具体的かつ個別に参照によりその全体が本明細書に組み入れら
れると示されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。

Ahluwaliaら、Am J Respir Crit Care Med.、１９０巻（８号）：８６７〜７８頁、２０１４年 Woodcockら、F1000Prime Rep.、６巻：１６頁、２０１４年 Veerappanら、DNA Cell Biol.、３２巻（４号）：２０６〜１８頁 Ｐｉｌｌａｉら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３０巻：３５７〜３９２頁、２０１２年

線維性疾患または前線維性疾患（pre-fibrotic disease）の予防または処置のための
、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはそれを含む組成物を使用
する方法が、本明細書に提供される。線維性疾患として、肺線維症（例えば、特発性肺線
維症）、肝線維症、腎線維症（例えば、腎間質線維症）、心臓線維症、脾臓線維症、眼線
維症、機械的誘発線維症（mechanical-induced fibrosis）（例えば、人工呼吸器誘発肺
線維症）、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症（例えば、ブレ
オマイシン誘発肺線維症）、ウイルス誘発線維症（viral-induced fibrosis）、嚢胞性
線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症（例えば、骨髄線維症）、強皮症
（例えば、全身性硬化症）、縦隔線維症および後腹膜腔線維症が挙げられるがこれらに限
定されない。前線維性疾患として、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性
多血症、本態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網
膜症および増殖性硝子体網膜症が挙げられるがこれらに限定されない。

一態様では、個体における線維性疾患を処置または予防するための方法であって、個体
に、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップを
含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体は、線維性疾患を有する
。一部の実施形態では、個体は、線維性疾患と診断された、または線維性疾患を発症する
リスクがある。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維
症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼線維症からなる群から選択される。さら
なる実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症である。一部の実施形態では、肺線維症
は、慢性閉塞性肺疾患に関連する。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は
、機械的誘発線維症、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およ
びウイルス誘発線維症からなる群から選択される。さらなる実施形態では、機械的誘発線
維症は、人工呼吸器誘発肺線維症である。また別のさらなる実施形態では、薬物誘発線維
症は、ブレオマイシン誘発肺線維症である。一部の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性
線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹
膜腔線維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、強皮症は、全身性硬化症で
ある。本明細書における実施形態の一部では、線維性疾患を有する個体における１種また
は複数種の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベ
ースラインと比べて低減する。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は、息切
れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または関節痛
等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている線維性疾患に関連する症状
であり得る。本明細書における一部の実施形態では、肺線維症を有する個体における１種
または複数種の肺機能は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後
に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する。さらなる実施形態では、１種または
複数種の肺機能は、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（ＦＥＶ_１）、努力肺活
量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）、予備吸気量（ＩＲ
Ｖ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（inspirator capacity）（ＩＣ）、総肺気量
（ＴＬＣ）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）か
らなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患を有する個体における１種ま
たは複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニス
トの投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態では、
１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイン放出
、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣形成か
らなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレック−８
に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて個体において低下す
る。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書
における実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含
む医薬組成物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、ア
ゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在す
ることができる。

一態様では、個体における前線維性疾患を処置または予防するための方法であって、個
体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップ
を含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患を有
する。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患と診断された、または前線維性疾患を
発症するリスクがある。一部の実施形態では、前線維性疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓
炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症
、血管新生緑内障、未熟児網膜症および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される。
本明細書における実施形態の一部では、前線維性疾患を有する個体における１種または複
数種の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベース
ラインと比べて低減する。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は、息切れ、
乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または関節痛等で
あるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている前線維性疾患に関連する症状で
あり得る。一部の実施形態では、前線維性疾患を有する個体における１種または複数種の
病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に
、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態では、１種または複
数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイン放出、コラーゲン
蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣形成からなる群から
選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレック−８に結合する抗
体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて個体において低下する。本明細書
における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施
形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物
中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、
アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができ
る。

別の態様では、個体における非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子（agent
）による肥満細胞活性化を低下させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８
に結合する抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に
提供される。一実施形態では、個体は、線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体
は、線維性疾患と診断された、または線維性疾患を発症するリスクがある。本明細書にお
ける一部の実施形態では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、
脾臓線維症および眼線維症からなる群から選択される。さらなる実施形態では、肺線維症
は、特発性肺線維症である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢性閉塞性肺疾患に関連
する。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、機械的誘発線維症、インプ
ラント誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からな
る群から選択される。さらなる実施形態では、機械的誘発線維症は、人工呼吸器誘発肺線
維症である。また別のさらなる実施形態では、薬物誘発線維症は、ブレオマイシン誘発肺
線維症である。一部の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥
状動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選
択される。一部の実施形態では、強皮症は、全身性硬化症である。本明細書における実施
形態の一部では、線維性疾患を有する個体における１種または複数種の症状は、ヒトシグ
レック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低減する
。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲
労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または関節痛等であるがこれらに限定され
ない、本明細書に開示されている線維性疾患に関連する症状であり得る。本明細書におけ
る一部の実施形態では、肺線維症を有する個体における１種または複数種の肺機能は、ヒ
トシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて少
なくとも５％増加する。さらなる実施形態では、１種または複数種の肺機能は、肺活量（
ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（ＦＥＶ_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量
（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）、予備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ
）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬＣ）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ
）および最大換気量（ＭＶＶ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性
疾患を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−
８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低
下する。さらなる実施形態では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入
、肥満細胞数、サイトカイン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤
、および線維芽細胞増殖巣形成からなる群から選択される。本明細書における実施形態の
一部では、非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子は、胸腺間質性リンパ球新生
因子（ＴＳＬＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トール様受容体３（ＴＬＲ３）、インターロ
イキン３３（ＩＬ−３３）および補体タンパク質からなる群から選択される。一部の実施
形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投
与後に、ベースラインと比べて個体において低下する。本明細書における実施形態のいず
れかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、抗
体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができ
る。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的
に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。

別の態様では、個体における非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子による肥
満細胞活性化を低下させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する
抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される
。一実施形態では、個体は、前線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は、前線
維性疾患と診断された、または前線維性疾患を発症するリスクがある。一部の実施形態で
は、前線維性疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態
性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および増
殖性硝子体網膜症からなる群から選択される。本明細書における実施形態の一部では、前
線維性疾患を有する個体における１種または複数種の症状は、ヒトシグレック−８に結合
する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低減する。さらなる実施形
態では、１種または複数種の症状は、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち
状の手指もしくは足指、筋痛または関節痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に
開示されている前線維性疾患に関連する症状であり得る。一部の実施形態では、前線維性
疾患を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−
８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低
下する。さらなる実施形態では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入
、肥満細胞数、サイトカイン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤
、および線維芽細胞増殖巣形成からなる群から選択される。本明細書における実施形態の
一部では、非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子は、胸腺間質性リンパ球新生
因子（ＴＳＬＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トール様受容体３（ＴＬＲ３）、インターロ
イキン３３（ＩＬ−３３）および補体タンパク質からなる群から選択される。一部の実施
形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投
与後に、ベースラインと比べて個体において低下する。本明細書における実施形態のいず
れかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、抗
体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができ
る。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的
に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。

別の態様では、個体における線維性疾患の処置または予防における使用のための、ヒト
シグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が、本明細書に提供される
。一部の実施形態では、個体は、線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は、線
維性疾患と診断された、または線維性疾患を発症するリスクがある。一部の実施形態では
、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み
、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残基を含有する。さらなる
実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有
しない。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維症、腎
線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼線維症からなる群から選択される。さらなる実
施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢
性閉塞性肺疾患に関連する。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、機械
的誘発線維症、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイ
ルス誘発線維症からなる群から選択される。さらなる実施形態では、機械的誘発線維症は
、人工呼吸器誘発肺線維症である。また別のさらなる実施形態では、薬物誘発線維症は、
ブレオマイシン誘発肺線維症である。一部の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性線維症
、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線
維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、強皮症は、全身性硬化症である。
本明細書における実施形態の一部では、線維性疾患を有する個体における１種または複数
種の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後
に、ベースラインと比べて低減する。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は
、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または
関節痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている線維性疾患に関連す
る症状であり得る。本明細書における一部の実施形態では、肺線維症を有する個体におけ
る１種または複数種の肺機能は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを
含む組成物の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する。さらなる実施形
態では、１種または複数種の肺機能は、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（Ｆ
ＥＶ_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）
、予備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬ
Ｃ）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）からなる
群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患を有する個体における１種または複
数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含
む組成物の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態
では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイ
ン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣
形成からなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレッ
ク−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後に、ベースラインと比べて
個体において低下する。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであっ
てもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、組成物は、薬学的に許容されるキ
ャリアをさらに含むことができる。

別の態様では、個体における前線維性疾患の処置または予防における使用のための、ヒ
トシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が、本明細書に提供され
る。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は
、前線維性疾患と診断された、または前線維性疾患を発症するリスクがある。一部の実施
形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖
とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残基を含有する。
さらなる実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残
基を含有しない。一部の実施形態では、前線維性疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢
性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管
新生緑内障、未熟児網膜症および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される。本明細
書における実施形態の一部では、前線維性疾患を有する個体における１種または複数種の
症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後に、
ベースラインと比べて低減する。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は、息
切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または関節
痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている前線維性疾患に関連する
症状であり得る。一部の実施形態では、前線維性疾患を有する個体における１種または複
数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含
む組成物の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態
では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイ
ン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣
形成からなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレッ
ク−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後に、ベースラインと比べて
個体において低下する。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであっ
てもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、組成物は、薬学的に許容されるキ
ャリアをさらに含むことができる。

別の態様では、個体に組成物を投与するステップを含む、個体における非ＩｇＥ媒介性
細胞シグナル伝達経路の作用因子による肥満細胞活性化の低下における使用のための、ヒ
トシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が、本明細書に提供され
る。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結
合型炭水化物鎖を含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残基
を含有する。さらなる実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが
、フコース残基を含有しない。一部の実施形態では、個体は、線維性疾患を有する。一部
の実施形態では、個体は、線維性疾患と診断された、または線維性疾患を発症するリスク
がある。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維症、腎
線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼線維症からなる群から選択される。さらなる実
施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢
性閉塞性肺疾患に関連する。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、機械
的誘発線維症、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイ
ルス誘発線維症からなる群から選択される。さらなる実施形態では、機械的誘発線維症は
、人工呼吸器誘発肺線維症である。また別のさらなる実施形態では、薬物誘発線維症は、
ブレオマイシン誘発肺線維症である。一部の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性線維症
、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線
維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、強皮症は、全身性硬化症である。
本明細書における実施形態の一部では、線維性疾患を有する個体における１種または複数
種の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後
に、ベースラインと比べて低減する。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は
、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または
関節痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている線維性疾患に関連す
る症状であり得る。本明細書における一部の実施形態では、肺線維症を有する個体におけ
る１種または複数種の肺機能は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを
含む組成物の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する。さらなる実施形
態では、１種または複数種の肺機能は、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（Ｆ
ＥＶ_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）
、予備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬ
Ｃ）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）からなる
群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患を有する個体における１種または複
数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含
む組成物の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態
では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイ
ン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣
形成からなる群から選択される。本明細書における実施形態の一部では、非ＩｇＥ媒介性
細胞シグナル伝達経路の作用因子は、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、幹細胞
因子（ＳＣＦ）、トール様受容体３（ＴＬＲ３）、インターロイキン３３（ＩＬ−３３）
および補体タンパク質からなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化
は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後に、ベー
スラインと比べて個体において低下する。本明細書における実施形態のいずれかでは、個
体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、組成物は、薬学
的に許容されるキャリアをさらに含むことができる。

別の態様では、個体に組成物を投与するステップを含む、個体における非ＩｇＥ媒介性
細胞シグナル伝達経路の作用因子による肥満細胞活性化の低下における使用のための、ヒ
トシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が、本明細書に提供され
る。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結
合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残
基を含有する。さらなる実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全て
が、フコース残基を含有しない。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患を有する。
一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患と診断された、または前線維性疾患を発症す
るリスクがある。一部の実施形態では、前線維性疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢
性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管
新生緑内障、未熟児網膜症および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される。本明細
書における実施形態の一部では、前線維性疾患を有する個体における１種または複数種の
症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後に、
ベースラインと比べて低減する。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は、息
切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛または関節
痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている前線維性疾患に関連する
症状であり得る。一部の実施形態では、前線維性疾患を有する個体における１種または複
数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含
む組成物の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態
では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイ
ン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣
形成からなる群から選択される。本明細書における実施形態の一部では、非ＩｇＥ媒介性
細胞シグナル伝達経路の作用因子は、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、幹細胞
因子（ＳＣＦ）、トール様受容体３（ＴＬＲ３）、インターロイキン３３（ＩＬ−３３）
および補体タンパク質からなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化
は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物の投与後に、ベー
スラインと比べて個体において低下する。本明細書における実施形態のいずれかでは、個
体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、組成物は、薬学
的に許容されるキャリアをさらに含むことができる。

一部の態様では、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、
線維性疾患を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における医薬の
投与のための指示を含む添付文書とを含む製造品も、本明細書に提供される。一部の実施
形態では、個体は、線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は、線維性疾患と診
断された、または線維性疾患を発症するリスクがある。本明細書における一部の実施形態
では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼
線維症からなる群から選択される。さらなる実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症
である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢性閉塞性肺疾患に関連する。本明細書にお
ける一部の実施形態では、線維性疾患は、機械的誘発線維症、インプラント誘発線維症、
放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる群から選択される
。さらなる実施形態では、機械的誘発線維症は、人工呼吸器誘発肺線維症である。また別
のさらなる実施形態では、薬物誘発線維症は、ブレオマイシン誘発肺線維症である。一部
の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の
線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選択される。一部の実
施形態では、強皮症は、全身性硬化症である。本明細書における実施形態の一部では、添
付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベ
ースラインと比べて線維性疾患を有する個体における１種または複数種の症状を低下させ
ることにおいて有効であることをさらに示す。さらなる実施形態では、１種または複数種
の症状は、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋
痛または関節痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている線維性疾患
に関連する症状であり得る。本明細書における一部の実施形態では、肺線維症を有する個
体における１種または複数種の肺機能は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴ
ニストの投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する。さらなる実施形態で
は、１種または複数種の肺機能は、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（ＦＥＶ
_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）、予
備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬＣ）
、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）からなる群か
ら選択される。一部の実施形態では、線維性疾患を有する個体における１種または複数種
の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後
に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態では、１種または
複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイン放出、コラーゲ
ン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣形成からなる群か
ら選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレック−８に結合する
抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて個体において低下する。本明細
書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実
施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成
物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは
、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することがで
きる。

一部の態様では、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、
前線維性疾患を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医
薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む製造品も、本明細書に提供される。一部の
実施形態では、個体は、前線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は、前線維性
疾患と診断された、または前線維性疾患を発症するリスクがある。一部の実施形態では、
前線維性疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態性血
小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および増殖性
硝子体網膜症からなる群から選択される。本明細書における実施形態の一部では、添付文
書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベース
ラインと比べて前線維性疾患を有する個体における１種または複数種の症状を低下させる
ことにおいて有効であることをさらに示す。さらなる実施形態では、１種または複数種の
症状は、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛
または関節痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている前線維性疾患
に関連する症状であり得る。一部の実施形態では、前線維性疾患を有する個体における１
種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴ
ニストの投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する。さらなる実施形態で
は、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイン
放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣形
成からなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレック
−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて個体において低
下する。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明
細書における実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリア
を含む医薬組成物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは
、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存
在することができる。

他の態様では、個体における線維性疾患を処置または予防するための方法であって、個
体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法
が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体は、線維性疾患を有する。一部の
実施形態では、個体は、線維性疾患と診断された、または線維性疾患を発症するリスクが
ある。本明細書における一部の実施形態では、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含
有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有ポリペ
プチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有糖タンパク質からなる群から選択される、６’
−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストである。一部の実施形態では、アゴニストは、ヒトシ
グレック−８に結合するアゴニスト抗体である。

また別の態様では、個体における前線維性疾患を処置または予防するための方法であっ
て、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含
む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患を有する
。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患と診断された、または前線維性疾患を発症
するリスクがある。本明細書における一部の実施形態では、アゴニストは、６’−スルホ
−ｓＬｅ^Ｘ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅ
^Ｘ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有糖タンパク質からなる群から選択
される、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストである。一部の実施形態では、アゴニス
トは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。

また別の態様では、個体における非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子によ
る肥満細胞活性化を低下させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合
するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部
の実施形態では、個体は、線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は、線維性疾
患と診断された、または線維性疾患を発症するリスクがある。一部の実施形態では、個体
は、前線維性疾患を有する。一部の実施形態では、個体は、前線維性疾患と診断された、
または前線維性疾患を発症するリスクがある。本明細書における一部の実施形態では、ア
ゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有オリゴ
糖、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有糖タン
パク質からなる群から選択される、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストである。一部
の実施形態では、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。

本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は
、モノクローナル抗体であってよい。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実
施形態のいずれかでは、抗体は、ＩｇＧ１抗体であってよい。本方法およびそれにおける
使用のための組成物の実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害
（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作することができる。さらなる実施形態では、抗体
は、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。
本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかでは、抗体の重鎖の
うち１または２つは、フコシル化していなくてよい。本方法およびそれにおける使用のた
めの組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ
抗体であってよい。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれか
では、抗体は、マウス抗体であってよい。本方法およびそれにおける使用のための組成物
の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよ
び（Ｆａｂ’）_２断片からなる群より選択される抗体断片となることができる。一部の実
施形態において、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、（
ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ
３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配
列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、抗体は
、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは
２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、
抗体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、
ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４を含む。さらなる実施形態に
おいて、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基は、Ｋａｂａｔ
で規定されたＥＵインデックスに従って番号付けされる。一部の実施形態において、ヒト
ＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ
４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号
７５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号７６もしくは７７のアミノ酸配
列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領
域を含み、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（
ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜
７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域
が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のア
ミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１１〜１４から選択される
アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるア
ミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号２〜
１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６〜２
４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗
体は、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／また
は配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実
施形態において、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列
を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配
列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸
配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；およ
び（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖
可変領域、および／または（ｂ）（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列
を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配
列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸
配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；およ
び（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一
部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−
ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３４の
アミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ
２；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミ
ノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−Ｆ
Ｒ４を含む重鎖可変領域；および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含
むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番
号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨ
ＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６
６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含む
ＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１
）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列
を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配
列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含
むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）
配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域；および／または（
ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミ
ノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５８のアミノ酸
配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；およ
び（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一
部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１
、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９
４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番
号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含
むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含
む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号８９のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２お
よび（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；お
よび／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号
１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配
列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（
ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ
３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ
−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配
列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施
形態において、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／ま
たは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において
、抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号
１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配
列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１１のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

本明細書に記載されている様々な実施形態の特性のうち１種、一部または全てを組み合
わせて、本発明の他の実施形態を形作ることができることを理解されたい。本発明の上述
および他の態様は、当業者には明らかになるであろう。本発明の上述および他の実施形態
を次の詳細な説明によりさらに記載する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
個体における線維性疾患を処置または予防するための方法であって、該個体に、ヒトシ
グレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
（項目２）
前記線維性疾患が、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼
線維症からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記肺線維症が、特発性肺線維症である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記肺線維症が、慢性閉塞性肺疾患に関連する、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記線維性疾患が、機械的誘発線維症、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症、
薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる群から選択される、項目１に記載の方
法。
（項目６）
前記機械的誘発線維症が、人工呼吸器誘発肺線維症である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記薬物誘発線維症が、ブレオマイシン誘発肺線維症である、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記線維性疾患が、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強
皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選択される、項目１に記載の方法
。
（項目９）
前記強皮症が、全身性硬化症である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記線維性疾患を有する前記個体における１種または複数種の症状が、ヒトシグレック
−８に結合する前記抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下する、
項目１〜９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
肺線維症を有する前記個体における１種または複数種の肺機能が、ヒトシグレック−８
に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する、項目１
〜７および１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記１種または複数種の肺機能が、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（ＦＥ
Ｖ_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）、
予備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬＣ
）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）からなる群
から選択される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
線維性疾患を有する前記個体における１種または複数種の病理学的パラメータが、ヒト
シグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低
下する、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記１種または複数種の病理学的パラメータが、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイ
ン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣
形成からなる群から選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
個体における前線維性疾患を処置または予防するための方法であって、該個体に、ヒト
シグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
（項目１６）
前記前線維性疾患が、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本
態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および
増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
肥満細胞活性化が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースライン
と比べて前記個体において低下する、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作さ
れている、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記抗体が、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置
換を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記抗体の重鎖のうち少なくとも１または２つが、フコシル化していない、項目１〜２
１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、項目１〜２２のいずれか
一項に記載の方法。
（項目２４）
前記抗体が、マウス抗体である、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）_２断片から
なる群より選択される抗体断片である、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配
列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を
含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含
み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配
列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記
載の方法。
（項目２７）
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号
１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１〜２３
のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記抗体が、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、項目１〜２７のいずれ
か一項に記載の方法。
（項目２９）
前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４を含む、項目２８に記
載の方法。
（項目３０）
前記ヒトＩｇＧ４が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、前記アミノ酸残基が、Ｋａｂａ
ｔで規定されたＥＵインデックスに従って番号付けられる、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６も
しくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１〜２３のいずれか一項
に記載の方法。
（項目３２）
前記抗体が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６の
アミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配
列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を
含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含
むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミ
ノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２
および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、項目１〜２３
のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記抗体が、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、お
よび／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む
、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記抗体が、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およ
び／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、
項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記抗体が、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およ
び／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、
項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記抗体が、以下：
（ａ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む
ＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列
を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および
（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含む
ＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列
を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および
（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む
ＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列
を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および
（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記抗体が、
（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０
９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１
０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１
１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記個体が、ヒトである、項目１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記抗体が、該抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する
、項目１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
個体における線維性疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８
に結合する抗体を含む組成物。
（項目４５）
前記抗体が、Ｆｃ領域と、該Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖と
を含み、該Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、
項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、
項目４４に記載の組成物。
（項目４７）
個体における前線維性疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−
８に結合する抗体を含む組成物。
（項目４８）
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖
とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有す
る、項目４７に記載の組成物。
（項目４９）
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、
項目４７に記載の組成物。
（項目５０）
肥満細胞活性化が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースライン
と比べて前記個体において低下する、項目４４〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５１）
前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目４４〜５０のいずれか一項に記載の組成
物。
（項目５２）
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、項目４４〜５１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５３）
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作さ
れている、項目４４〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５４）
前記抗体が、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置
換を含む、項目５３に記載の組成物。
（項目５５）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、項目４４〜５４のいずれ
か一項に記載の組成物。
（項目５６）
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配
列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を
含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含
み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配
列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、項目４４〜５５のいずれか一項に
記載の組成物。
（項目５７）
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号
１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目４４〜５
５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５８）
前記抗体が、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、項目４４〜５７のいず
れか一項に記載の組成物。
（項目５９）
前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１を含む、項目５８に記載の組成物。
（項目６０）
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６も
しくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目４４〜５５のいずれか一
項に記載の組成物。
（項目６１）
前記抗体が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６の
アミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目４４〜５５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６２）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目４４〜５５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６３）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目４４〜５５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６４）
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、線維性疾患を処置または予防するた
めの、該医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書
とを含む、製造品。
（項目６５）
前記線維性疾患が、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼
線維症からなる群から選択される、項目６４に記載の製造品。
（項目６６）
前記肺線維症が、特発性肺線維症である、項目６５に記載の製造品。
（項目６７）
前記肺線維症が、慢性閉塞性肺疾患に関連する、項目６５に記載の製造品。
（項目６８）
前記線維性疾患が、機械的誘発線維症、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症、
薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる群から選択される、項目６４に記載の
製造品。
（項目６９）
前記機械的誘発線維症が、人工呼吸器誘発肺線維症である、項目６８に記載の製造品。
（項目７０）
前記薬物誘発線維症が、ブレオマイシン誘発肺線維症である、項目６８に記載の製造品
。
（項目７１）
前記線維性疾患が、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強
皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選択される、項目６４に記載の製
造品。
（項目７２）
前記強皮症が、全身性硬化症である、項目７１に記載の製造品。
（項目７３）
前記添付文書は、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベ
ースラインと比べて前記線維性疾患を有する前記個体における１種または複数種の症状を
低下させることにおいて有効であることをさらに示す、項目６４〜７２のいずれか一項に
記載の製造品。
（項目７４）
肺線維症を有する前記個体における１種または複数種の肺機能が、ヒトシグレック−８
に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する、項目６
４〜７０および７３のいずれか一項に記載の製造品。
（項目７５）
前記１種または複数種の肺機能が、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（ＦＥ
Ｖ_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）、
予備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬＣ
）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）からなる群
から選択される、項目７４に記載の製造品。
（項目７６）
線維性疾患を有する前記個体における１種または複数種の病理学的パラメータが、ヒト
シグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低
下する、項目６４〜７５のいずれか一項に記載の製造品。
（項目７７）
前記１種または複数種の病理学的パラメータが、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイ
ン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣
形成からなる群から選択される、項目７６に記載の製造品。
（項目７８）
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、前線維性疾患を処置または予防する
ための、該医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文
書とを含む、製造品。
（項目７９）
前記前線維性疾患が、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本
態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および
増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される、項目７８に記載の製造品。
（項目８０）
前記添付文書が、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベ
ースラインと比べて前線維性疾患を有する前記個体における１種または複数種の症状を低
下させることにおいて有効であることをさらに示す、項目７８または７９に記載の製造品
。
（項目８１）
前記個体が、ヒトである、項目６４〜８０のいずれか一項に記載の製造品。
（項目８２）
前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目６４〜８１のいずれか一項に記載の製造
品。
（項目８３）
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、項目６４〜８２のいずれか一項に記載の製造品。
（項目８４）
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作さ
れている、項目６４〜８３のいずれか一項に記載の製造品。
（項目８５）
前記抗体が、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置
換を含む、項目８４に記載の製造品。
（項目８６）
前記抗体の重鎖のうち少なくとも１または２つが、フコシル化していない、項目６４〜
８５のいずれか一項に記載の製造品。
（項目８７）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、項目６４〜８６のいずれ
か一項に記載の製造品。
（項目８８）
前記抗体が、マウス抗体である、項目６４〜８６のいずれか一項に記載の製造品。
（項目８９）
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）_２断片から
なる群より選択される抗体断片である、項目６４〜８６のいずれか一項に記載の製造品。
（項目９０）
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配
列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を
含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含
み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配
列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、項目６４〜８７のいずれか一項に
記載の製造品。
（項目９１）
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号
１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目６４〜８
７のいずれか一項に記載の製造品。
（項目９２）
前記抗体が、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、項目６４〜９１のいず
れか一項に記載の製造品。
（項目９３）
前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４を含む、項目９２に記
載の製造品。
（項目９４）
前記ヒトＩｇＧ４が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、前記アミノ酸残基が、Ｋａｂａ
ｔで規定されたＥＵインデックスに従って番号付けられる、項目９３に記載の製造品。
（項目９５）
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６も
しくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目６４〜８７のいずれか一
項に記載の製造品。
（項目９６）
前記抗体が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６の
アミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目６４〜８７のいずれか一項に記載の製造品。
（項目９７）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目６４〜８７のいずれか一項に記載の製造品。
（項目９８）
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目６４〜８７のいずれか一項に記載の製造品。
（項目９９）
個体における線維性疾患を処置または予防するための方法であって、該個体に、ヒトシ
グレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
（項目１００）
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含
有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含
有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストである
、項目９９に記載の方法。
（項目１０１）
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、項目９９に
記載の方法。
（項目１０２）
個体における前線維性疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒ
トシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
（項目１０３）
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含
有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含
有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストである
、項目１０２に記載の方法。
（項目１０４）
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、項目１０２
に記載の方法。

図１は、抗シグレック−８抗体による処置による、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスにおける気管支肺胞空間への好中球流入の阻害を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）ｍ２Ｅ２枯渇は、ＡＤＣＣ活性によって好酸球および肥満細胞を死滅させる、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）ｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、ｍ２Ｅ２枯渇抗体試験群、ｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。好中球の％は、試料中の白血球の総数と比べた好中球のパーセンテージを示す。

図２Ａおよび図２Ｂは、抗シグレック−８抗体による処置による、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスにおけるコラーゲン蓄積の予防を示す一連のグラフである。実験２が、ｍ２Ｅ２枯渇抗体で処置されるマウスの群を含むことを除いて、図２Ａ）実験１および図２Ｂ）実験２は、２つ組の実験である。ＢＡＬは、気管支肺胞洗浄を示す；（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）ｍ２Ｅ２枯渇は、ＡＤＣＣ活性によって好酸球および肥満細胞を死滅させる、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）ｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、ｍ２Ｅ２枯渇抗体試験群、ｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図３は、抗シグレック−８抗体が、ブレオマイシン誘発体重減少からシグレック−８トランスジェニックマウスを保護することを示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）ｍ２Ｅ２枯渇は、ＡＤＣＣ活性によって好酸球および肥満細胞を死滅させる、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）ｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、ｍ２Ｅ２枯渇抗体試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図４は、抗シグレック−８抗体による処置による、シグレック−８トランスジェニックマウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症後の気管支肺胞洗浄液におけるサイトカイン上昇の阻害を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）ｍ２Ｅ２枯渇は、ＡＤＣＣ活性によって好酸球および肥満細胞を死滅させる、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）ｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、ｍ２Ｅ２枯渇抗体試験群、ｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。Ｇ−ＣＳＦは、顆粒球コロニー刺激因子を示す；ＩＬ−６は、インターロイキン−６を示す；ＩＰ−１０は、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０を示す；ＫＣは、ケラチノサイト由来サイトカインを示す；ＲＡＮＴＥＳは、活性化時に調節される正常Ｔ細胞により発現および分泌されるタンパク質（regulated on activation normal T cell expressed and secreted protein）を示す；活性ＴＧＦ−β２は、活性型のトランスフォーミング増殖因子−β２を示す。

図５は、抗シグレック−８抗体による処置による、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスの肺のＡｓｈｃｒｏｆｔスコアの低下を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）ｍ２Ｅ２枯渇は、ＡＤＣＣ活性によって好酸球および肥満細胞を死滅させる、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）ｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、ｍ２Ｅ２枯渇抗体試験群、ｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図６は、抗シグレック−８抗体による治療的処置による、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスにおける気管支肺胞空間への好中球流入の阻害を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（３）ｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、ｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。好中球の％は、試料中の白血球の総数と比べた好中球のパーセンテージを示す。

図７は、抗シグレック−８抗体による処置による、腹膜に異物誘発線維症を有するヒト化マウスにおけるコラーゲン沈着の予防および阻害を示すグラフである。（１）ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体を示す；（２）−１日目のｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４抗体は、ビーズの植え込みの１日前に投薬された、ヒトＩｇＧ４アイソタイプおよびマウス２Ｅ２可変ドメインを有するキメラモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）７日目のｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４抗体は、ビーズの植え込みの７日後に投薬された、ヒトＩｇＧ４アイソタイプおよびマウス２Ｅ２可変ドメインを有するキメラモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。ｐ値は、ｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４抗体試験群と、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図８は、抗シグレック−８抗体による処置による、腹膜に異物誘発線維症を有するヒト化マウスにおける筋線維芽細胞蓄積の予防および阻害を示すグラフである。（１）ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体を示す；（２）−１日目のｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４抗体は、ビーズの植え込みの１日前に投薬された、ヒトＩｇＧ４アイソタイプおよびマウス２Ｅ２可変ドメインを有するキメラモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す；（３）７日目のｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４抗体は、ビーズの植え込みの７日後に投薬された、ヒトＩｇＧ４アイソタイプおよびマウス２Ｅ２可変ドメインを有するキメラモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。α−平滑筋アクチンは、筋線維芽細胞のマーカーである。％線維性ビーズは、筋線維芽細胞と会合した、回収したポリスチレンビーズの数を示す。

図９は、抗シグレック−８抗体により処置された、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスにおける肺重量減少を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）７日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与７日後から、マウスに投薬した；（３）−１日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与１日前から、マウスに投薬した；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、７日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群、−１日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図１０Ａおよび図１０Ｂは、抗シグレック−８抗体処置による、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスの皮膚および肺におけるヒドロキシプロリン蓄積の予防を示す一連のグラフである。図１０Ａ）は、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスの肺におけるヒドロキシプロリン蓄積の減少を示すグラフであり、一方、図１０Ｂ）は、皮膚におけるヒドロキシプロリンの減少を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）７日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与７日後から、マウスに投薬した；（３）−１日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与１日前から、マウスに投薬した；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、７日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群、−１日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図１１Ａおよび図１１Ｂは、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスにおける抗シグレック−８抗体による処置による、皮膚病変における線維化促進（pro-fibrotic）メディエーターの発現減少を示す一連のグラフである。図１１Ａは、ブレオマイシン誘発皮膚線維症におけるｍ２Ｅ２処置後の、ＴＧＦβ ＲＮＡ発現の減少を示すグラフであり、図１１Ｂは、皮膚におけるＩＬ−１３ ＲＮＡ発現の減少を示すグラフである。ＩＬ−１３は、インターロイキン−１３を示す；ＴＧＦβは、トランスフォーミング増殖因子ベータを示す；（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）７日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与７日後から、マウスに投薬した；（３）−１日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与１日前から、マウスに投薬した；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、７日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群、−１日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

図１２は、抗シグレック−８抗体により処置された、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスにおける視覚的皮膚スコアにおける減少傾向を示すグラフである。（１）アイソタイプは、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を示す；（２）７日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与７日後から、マウスに投薬した；（３）−１日目のｍ２Ｅ２阻害は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体を示す。初回ブレオマイシン投与１日前から、マウスに投薬した；（４）ナイーブは、抗体またはブレオマイシンを投与されていない、シグレック−８トランスジェニックマウスを示す。ｐ値は、７日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群、−１日目に処置されたｍ２Ｅ２阻害抗体試験群またはナイーブ試験群と、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体試験群とを比較することにより決定された。

詳細な説明
Ｉ．定義
本発明に関して詳細に記載する前に、本発明が、当然ながら変動し得る特定の組成物ま
たは生命システムに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用されている用語法
が、特定の実施形態を記載することのみを目的としており、限定を目的としないことも理
解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されている通り、単数形
「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容がそれ以外を
明らかに指示しない限り、複数の指示対象を含む。よって、例えば、「分子（ａ ｍｏｌ
ｅｃｕｌｅ）」と言及される場合、２個またはそれを超える斯かる分子の組合せその他を
任意選択で含む。

用語「約」は、本明細書において、本技術分野における当業者であれば容易に分かるそ
れぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書において「約」の値またはパラメータが言
及される場合、該値またはパラメータそれ自体に指示される実施形態を含む（および記載
する）。

本明細書に記載されている本発明の態様および実施形態が、態様および実施形態を「含
む」、「からなる」および「から本質的になる」ことを含むことが理解される。

用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域
を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多特異性抗体（
例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ）および単鎖分子ならびに抗体断片（例えば、Ｆ
ａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細
書において「抗体」と互換的に使用される。

基本的４鎖抗体単位は、２つの同一軽（Ｌ）鎖および２つの同一重（Ｈ）鎖で構成され
たヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加的なポリペプチ
ドと共に５個の基本的ヘテロ四量体単位からなり、１０個の抗原結合部位を含有するが、
ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせた、重合して多価集合体を形成することができる２〜５
個の基本的４鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般に、約１５０，０００ダルト
ンである。各Ｌ鎖は、１個の共有結合性ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結される一方
、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１個または複数のジスルフィド結合によって
互いに連結される。各ＨおよびＬ鎖は、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋も有
する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）に続いて、αおよびγ鎖のそれ
ぞれに対し３個の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）、μおよびεアイソタイプに対し４個のＣ_Ｈドメ
インを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、続いてその他端に定常
ドメインを有する。Ｖ_Ｌは、Ｖ_Ｈと整列され、Ｃ_Ｌは、重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ
１）と整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖可変ドメイン間の界面を形成
すると考えられる。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌの対形成は共に、単一の抗原結合部位を形成する。異
なるクラスの抗体の構造および特性に関して、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ Ｐ． Ｓｔｉｅｓ、Ａｂｂａ
Ｉ． ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ Ｇ． Ｐａｒｓｏｌｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏ
ｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、１９９４年、７１頁、第６章を参照された
い。

いずれかの脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッ
パおよびラムダと呼ばれる明らかに異なる２型の一方に割り当てることができる。その重
鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスま
たはアイソタイプに割り当てることができる。それぞれα、δ、ε、γおよびμと命名さ
れた重鎖を有する５クラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩ
ｇＭが存在する。γおよびαクラスは、ＣＨ配列における相対的に軽微な差および機能に
基づいてサブクラスへとさらに分割され、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、
アロタイプと名付けられた複数の多型バリアントで存在することができ（Ｊｅｆｆｅｒｉ
ｓおよびＬｅｆｒａｎｃ ２００９年、ｍＡｂｓ、１巻、４号、１〜７頁において概説）
、そのうちいずれかが、本発明における使用に適する。ヒト集団における共通アロタイプ
バリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚによって命名されている。

「単離された」抗体は、その産生環境（例えば、天然または組換えによる）の構成成分
から同定、分離および／または回収された抗体である。一部の実施形態において、単離さ
れたポリペプチドは、その産生環境由来のあらゆる他の構成成分との関連を含まない。組
換えトランスフェクト細胞に起因するもの等、その産生環境の夾雑構成成分は、抗体の研
究、診断または治療的使用に典型的に干渉する材料であり、酵素、ホルモンおよび他のタ
ンパク質性または非タンパク質性溶質を含むことができる。一部の実施形態において、ポ
リペプチドは、（１）例えば、ローリー方法によって決定される抗体の９５重量％超まで
、一部の実施形態において、９９重量％超まで；（１）スピニングカップシークエネータ
ーの使用により、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分
な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用した非還元もしくは還
元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで精製される。単離された抗体は、抗
体の天然環境の少なくとも１種の構成成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ ｓｉ
ｔｕの抗体を含む。しかし通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１回
の精製ステップにより調製される。

用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において、実質的に均一な抗体の集団から得
られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天
然起源の変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一であ
る。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端
切断を有する。例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／また
は軽鎖のＣ末端において切断される。一部の実施形態において、Ｃ末端切断は、重鎖から
Ｃ末端リシンを除去する。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および
／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸残基
が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において切断される。一部の実施形態において、モ
ノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に向けられている。一部の実
施形態において、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、複数の抗原部位に向けら
れている（二重特異性抗体または多特異性抗体等）。修飾語句「モノクローナル」は、抗
体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の性状を示し、いずれか特定の方法によ
る抗体の産生を要求するものと解釈するべきではない。例えば、本発明に従って使用する
べきモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ方法、組換えＤＮＡ方法、ファージ
ディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝
子座または遺伝子の一部または全体を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生す
るための技術を含む種々の技法によって作製することができる。

用語「裸の抗体」は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない
抗体を指す。

用語「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」は、抗体断片とは対照的に、
その実質的にインタクトな形態の抗体を指すように互換的に使用される。特に、全抗体は
、Ｆｃ領域を含む重および軽鎖を有する抗体を含む。定常ドメインは、ネイティブ配列定
常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリア
ントとなり得る。場合によっては、インタクト抗体は、１種または複数種のエフェクター
機能を有することができる。

「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、インタクト抗体の抗原結合および／または可
変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖ断片
；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ
ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁［１９９５年］を
参照）；抗体断片から形成された単鎖抗体分子および多特異性抗体が挙げられる。

抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２個の同一抗原結合性断片と、容易
に結晶化する能力を反映する命名であるところの、残余の「Ｆｃ」断片を産生する。Ｆａ
ｂ断片は、一方の重鎖のＨ鎖可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）および第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ
１）と共にＬ鎖全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価である、すなわち
、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型のＦ（ａｂ’）_２断
片を生じ、これは、異なる抗原結合活性を有し、依然として抗原を架橋することができる
２個のジスルフィド結合したＦａｂ断片に大まかに相当する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒン
ジ領域由来の１個または複数のシステインを含む数個の追加的な残基をＣ_Ｈ１ドメインの
カルボキシ末端に有するという点において、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、
定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書
における命名である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は本来、それらの間にヒンジシステインを
有するＦａｂ’断片のペアとして産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知
である。

Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一体に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分
を含む。抗体のエフェクター機能は、ある特定の種類の細胞上に存在するＦｃ受容体（Ｆ
ｃＲ）によって認識される領域でもあるＦｃ領域における配列によって決定される。

「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は
、緊密な非共有結合性会合した１個の重および１個の軽鎖可変領域ドメインの二量体から
なる。これら２個のドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に
寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６個の高頻度可変性ループ（それぞれＨおよび
Ｌ鎖由来の３個のループ）を発する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的
な３個のＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性では
あるが、抗原を認識および結合する能力を有する。

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」としても省略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチ
ド鎖へと接続されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態
において、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインの間にポリペプチドリンカー
をさらに含み、これは、ｓＦｖが、抗原結合のための所望の構造を形成することを可能に
する。ｓＦｖの概説に関しては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ
ｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒ
ｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９〜
３１５頁（１９９４年）を参照されたい。

本発明の抗体の「機能断片」は、インタクト抗体の抗原結合もしくは可変領域を一般に
含むインタクト抗体の部分、または修飾されたＦｃＲ結合能を保持もしくは有する抗体の
Ｆｖ領域を含む。抗体断片の例として、抗体断片から形成された線状抗体、単鎖抗体分子
および多特異性抗体が挙げられる。

本明細書におけるモノクローナル抗体は、重および／または軽鎖の部分が、特定の種に
由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列
と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するまたは別の抗体ク
ラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同である「キ
メラ」抗体（免疫グロブリン）と共に、所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、斯か
る抗体の断片を特に含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒ
ｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（
１９８４年））。本明細書における目的のキメラ抗体は、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商
標）抗体を含み、この抗体の抗原結合領域は、例えば、目的の抗原でマカクザルを免疫化
することによって産生された抗体に由来する。本明細書において、「ヒト化抗体」は、「
キメラ抗体」のサブセットとして使用される。

「ヒト化」型の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最
小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエント
のＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有するマウス、ラッ
ト、ウサギまたは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基に置き換
えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例において、ヒト免
疫グロブリンのＦＲ残基は、相当する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体
は、レシピエント抗体またはドナー抗体に存在しない残基を含むことができる。これらの
修飾を為して、結合親和性等、抗体性能をさらに精緻化することができる。一般に、ヒト
化抗体は、少なくとも１、典型的には２個の可変ドメインのうち実質的に全てを含み、そ
れによると、高頻度可変性ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配
列のものに相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のも
のであるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性等、抗体性能を改善する１個ま
たは複数の個々のＦＲ残基置換を含むことができるであろう。一部の実施形態において、
ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖において６個以下であり、Ｌ鎖において
は、３個以下である。ヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン
定常領域（Ｆｃ）の少なくとも部分も任意選択で含むであろう。さらなる詳細に関して、
例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒ
ｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およ
びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．２巻：５９３〜５９
６頁（１９９２年）を参照されたい。例えば、ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、
Ａｎｎ． Ａｌｌｅｒｇｙ， Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１巻：１０５〜１１
５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓａｃｔｉ
ｏｎｓ ２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、
Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｂｉｏｔｅｃｈ．５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）；ならび
に米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一
部の実施形態において、ヒト化抗体は、単一の抗原部位に向けられている。一部の実施形
態において、ヒト化抗体は、複数の抗原部位に向けられている。代替的ヒト化方法は、米
国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に
記載されている。

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重または軽鎖のアミノ末端ドメ
インを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と称す
ることができる。これらのドメインは一般に、抗体の最も可変的な部分であり（同じクラ
スの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。

用語「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」は、本明細書において使用される
場合、配列が高頻度可変性であるおよび／または構造的に定義されたループを形成する抗
体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６個のＨＶＲを含む；ＶＨにおける３個
（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬにおける３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ネイティブ抗体に
おいて、Ｈ３およびＬ３は、６個のＨＶＲのうち最大の多様性を表示し、Ｈ３は特に、抗
体への優れた特異性の付与において特有の役割を果たすと考えられる。例えば、Ｘｕら、
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３巻：３７〜４５頁（２０００年）；ＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８巻：１〜２５頁（
Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３年））を参照されたい
。実際に、重鎖のみからなる天然起源のラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）抗体は、軽鎖の
非存在下で機能的かつ安定的である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎ
ａｔｕｒｅ ３６３巻：４４６〜４４８頁（１９９３年）およびＳｈｅｒｉｆｆら、Ｎａ
ｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．３巻：７３３〜７３６頁（１９９６年）を参照さ
れたい。

多数のＨＶＲの図解が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定
領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づき、最も一般的に使用されている（Ｋ
ａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ
（１９９１年））。Ｃｈｏｔｈｉａ ＨＶＲは、その代わりに、構造ループの位置を指す
（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１〜９１
７頁（１９８７年））。「Ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用できる複雑な結晶構造の解析
に基づく。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を下に記す。

他に断りがなければ、可変ドメイン残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域残基）
は、Ｋａｂａｔら（上掲）に従ってナンバリングする。

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されているＨＶＲ残基以外
の可変ドメイン残基である。

表現「Ｋａｂａｔにおける通りの可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔ
における通りのアミノ酸位置ナンバリング」およびこれらの変種は、Ｋａｂａｔら（上掲
）における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリ
ング方式を指す。このナンバリング方式を使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ド
メインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそれへの挿入に相当する、より少ないまたは追加
的なアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の
後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）を、また、重鎖ＦＲ残基８２の
後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃ等）を
含むことができる。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準」Ｋａｂａｔナンバリング
された配列との抗体配列の相同性領域におけるアライメントにより、所定の抗体に対して
決定することができる。

本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロ
ブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨ
フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレー
ムワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレー
ムワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができる、あるいは先在するアミノ酸配列
変化を含有することができる。一部の実施形態において、先在するアミノ酸変化の数は、
１０個もしくはそれに満たない、９個もしくはそれに満たない、８個もしくはそれに満た
ない、７個もしくはそれに満たない、６個もしくはそれに満たない、５個もしくはそれに
満たない、４個もしくはそれに満たない、３個もしくはそれに満たないまたは２個もしく
はそれに満たない。

参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整
列し、必要であればギャップを導入して、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も
考慮することなく、最大パーセント配列同一性を達成した後に、参照ポリペプチド配列に
おけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして
定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアライメントは、当
業者の技能範囲内の様々な仕方で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮま
たはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等、公的に利用可能なコンピュー
タソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較されている配列
の全長にわたる最大アライメントの達成に必要とされるいずれかのアルゴリズムを含む、
配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。例えば、所定のアミノ酸配列Ｂ
との、これに関するまたはこれに対する所定のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（
あるいは、所定のアミノ酸配列Ｂと、これに関しまたはこれに対し、ある特定の％アミノ
酸配列同一性を有するまたは含む所定のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、次
の通りに計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、ＡおよびＢの該プログラムのアライメントにおける配列により同一マッ
チとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数
である）。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対す
るＡの％アミノ酸配列同一性が、Ａに対するＢの％アミノ酸配列同一性に等しくならない
ことが認められよう。

特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドにおけるエピトープ「に結合する」、「
に特異的に結合する」または「に特異的な」抗体は、他のいかなるポリペプチドまたはポ
リペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、この特定のポリペプチドまたは特
定のポリペプチドにおけるエピトープに結合する抗体である。一部の実施形態において、
無関係の非シグレック−８ポリペプチドへの本明細書に記載されている抗シグレック−８
抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）の結合は、本技術分野で公知の方法
（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ））によって測定されるシグレック−８
への抗体結合の約１０％未満である。一部の実施形態において、シグレック−８に結合す
る抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦
１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１
ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^−８Ｍまたはそれに満たな
い、例えば、１０^−８Ｍ〜１０^−１３Ｍ、例えば、１０^−９Ｍ〜１０^−１３Ｍ）の解離定
数（Ｋｄ）を有する。

用語「抗シグレック−８抗体」または「ヒトシグレック−８に結合する抗体」は、無関
係の非シグレック−８ポリペプチドの他のいずれかのポリペプチドまたはエピトープに実
質的に結合することなく、ヒトシグレック−８のポリペプチドまたはエピトープに結合す
る抗体を指す。

用語「シグレック−８」は、本明細書において、ヒトシグレック−８タンパク質を指す
。この用語は、スプライスバリアントまたはアレルバリアントを含むシグレック−８の天
然起源のバリアントも含む。例示的なヒトシグレック−８のアミノ酸配列を配列番号７２
に示す。別の例示的なヒトシグレック−８のアミノ酸配列を配列番号７３に示す。一部の
実施形態において、ヒトシグレック−８タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域に融合さ
れたヒトシグレック−８細胞外ドメインを含む。免疫グロブリンＦｃ領域に融合された例
示的なヒトシグレック−８細胞外ドメインのアミノ酸配列を配列番号７４に示す。配列番
号７４における下線を引いたアミノ酸配列は、シグレック−８ Ｆｃ融合タンパク質アミ
ノ酸配列のＦｃ領域を示す。

「アポトーシスを誘導する」または「アポトーシス性」である抗体は、アネキシンＶの
結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化および／または膜小胞の形
成（アポトーシス小体と呼ばれる）等、標準アポトーシスアッセイによって決定されるプ
ログラム細胞死を誘導する抗体である。例えば、本発明の抗シグレック−８抗体（例えば
、ヒトシグレック−８に結合する抗体）のアポトーシス活性は、アネキシンＶで細胞を染
色することにより示すことができる。

抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはアミノ
酸配列バリアントＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指し、抗体アイソタイプにより
変動する。抗体エフェクター機能の例として：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆ
ｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（
例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；およびＢ細胞活性化が挙げられる。

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞傷害性細胞
（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在する
Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細
胞を、抗原を有する標的細胞に特異的に結合させ、その後、細胞毒で標的細胞を死滅させ
ることができる細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装（ａｒｍ）」さ
せ、この機構による標的細胞の死滅に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞
であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲ
ＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈお
よびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：４５７〜９２頁（１９
９１年）の４６４頁の表３に要約されている。一部の実施形態において、本明細書に記載
されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、Ａ
ＤＣＣを増強する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００
，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているもの等、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。斯かるアッセイに有用なエフェクター細胞は、
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。その代わりに
またはその上、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ
ら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されているもの
等、動物モデルにおいて評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変更
する他のＦｃバリアントは、Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５巻：６３７
〜４０頁、１９９７年；Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２巻：５６３〜５６４頁、
１９８８年；Ｌｕｎｄら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７巻：２６５７〜２６６２頁、１
９９１年；Ｌｕｎｄら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９巻：５３〜５９頁、１９９２年；
Ａｌｅｇｒｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７巻：１５３７〜１５４３頁、１
９９４年；Ｈｕｔｃｈｉｎｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９
２巻：１１９８０〜１１９８４頁、１９９５年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ
Ｌｅｔｔ．４４巻：１１１〜１１７頁、１９９５年；Ｌｕｎｄら、ＦＡＳＥＢ Ｊ ９巻
：１１５〜１１９頁、１９９５年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ５
４巻：１０１〜１０４頁、１９９６年；Ｌｕｎｄら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７巻：４
９６３〜４９６９頁、１９９６年；Ａｒｍｏｕｒら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９
巻：２６１３〜２６２４頁、１９９９年；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １
６４巻：４１７８〜４１８４頁、２００；Ｒｅｄｄｙら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４巻
：１９２５〜１９３３頁、２０００年；Ｘｕら、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００巻：
１６〜２６頁、２０００年；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６巻：２５
７１〜２５７５頁、２００１年；Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６巻
：６５９１〜６６０４頁、２００１年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ
８２巻：５７〜６５頁．２００２年；Ｐｒｅｓｔａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒ
ａｎｓ ３０巻：４８７〜４９０頁、２００２年；Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ
． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０３巻：４００５〜４０１０頁、２００６年；米
国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号
；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；
同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同
第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第
６，２７７，３７５号；同第７，３３５，７４２号；および同第７，３１７，０９１号に
開示されているものを含む。

本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ
領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用されている。免疫グロ
ブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２
２６またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端に伸びるものと
定義される。本発明の抗体における使用に適したネイティブ配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ
１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。単一のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔナンバ
リングによるＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと命名）を導入して、組換えＩｇＧ４抗体にお
いて観察される異質性を消失させることができる。Ａｎｇａｌ， Ｓ．ら（１９９３年）
Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０巻、１０５〜１０８頁を参照されたい。

「非フコシル化」または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域を含むグリコシル化抗体バ
リアントを指し、このＦｃ領域に付着した糖質構造は、低下したフコースを有するまたは
フコースを欠如する。一部の実施形態において、フコースが低下したまたはフコースを欠
如する抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。一部の実施形態において、非フコシル
化またはフコース欠損抗体は、細胞株において産生される同じ抗体におけるフコースの量
と比べて低下したフコースを有する。本明細書において企図される非フコシル化またはフ
コース欠損抗体組成物は、組成物における抗体のＦｃ領域に付着したＮ結合型グリカンの
約５０％未満が、フコースを含む組成物である。

用語「フコシル化」または「フコシル化された」は、抗体のペプチド骨格に付着したオ
リゴ糖内のフコース残基の存在を指す。特に、フコシル化抗体は、例えば、ヒトＩｇＧ１
ＦｃドメインのＡｓｎ２９７位における（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）、抗体Ｆ
ｃ領域に付着したＮ結合型オリゴ糖の一方または両方における最内側Ｎ−アセチルグルコ
サミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基にα（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免
疫グロブリンにおける軽微な配列変種により、２９７位の上流または下流の約＋３アミノ
酸に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもできる。

「フコシル化の程度」は、本技術分野で公知の方法によって、例えば、マトリックス支
援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳ）によって評価
されるＮ−グリコシダーゼＦ処理抗体組成物において同定された、全オリゴ糖と比べたフ
コシル化オリゴ糖のパーセンテージである。「完全にフコシル化された抗体」の組成物に
おいて、基本的に全オリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている
。一部の実施形態において、完全にフコシル化された抗体の組成物は、少なくとも約９０
％のフコシル化の程度を有する。したがって、斯かる組成物における個々の抗体は、典型
的に、Ｆｃ領域における２個のＮ結合型オリゴ糖のそれぞれにフコース残基を含む。逆に
、「完全非フコシル化」抗体の組成物において、基本的にいかなるオリゴ糖もフコシル化
されておらず、斯かる組成物における個々の抗体は、Ｆｃ領域における２個のＮ結合型オ
リゴ糖のいずれにもフコース残基を含有しない。一部の実施形態において、完全非フコシ
ル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化の程度を有する。「部分的にフコシル化
された抗体」の組成物において、オリゴ糖の一部のみが、フコースを含む。組成物が、Ｆ
ｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖にフコース残基を欠如する基本的にあらゆる個々の抗体
も、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含有する基本的にあらゆ
る個々の抗体も含まないのであれば、斯かる組成物における個々の抗体は、Ｆｃ領域にお
けるＮ結合型オリゴ糖の一方または両方にフコース残基を含むことができるまたはどちら
にも含まない。一実施形態において、部分的にフコシル化された抗体の組成物は、約１０
％〜約８０％（例えば、約５０％〜約８０％、約６０％〜約８０％または約７０％〜約８
０％）のフコシル化の程度を有する。

本明細書における「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位およびそ
の結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有結合性相互作用の強度を指す。一部の実
施形態において、シグレック−８（本明細書に記載されているシグレック−８−Ｆｃ融合
タンパク質等、二量体の場合がある）に対する抗体の結合親和性は、一般に、解離定数（
Ｋｄ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載されている方法を含む、本技
術分野で公知の一般的方法により測定することができる。

本明細書における「結合アビディティー」は、分子（例えば、抗体）の複数の結合部位
およびその結合パートナー（例えば、抗原）の結合強度を指す。

本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、同定され、これが産生
された環境においてこれが通常関連する少なくとも１種の夾雑核酸分子から分離された核
酸分子である。一部の実施形態において、単離された核酸は、産生環境と関連するあらゆ
る構成成分との関連を含まない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする
単離された核酸分子は、これが天然に見出される形態または設定以外の形態である。した
がって、単離された核酸分子は、本明細書において細胞中に天然に存在するポリペプチド
および抗体をコードする核酸から区別される。

用語「医薬製剤」は、活性成分の生物学的活性が有効となることを可能にするような形
態の、この製剤が投与される個体にとって容認し難い毒性がある追加的な構成成分を含有
しない調製物を指す。斯かる製剤は無菌である。

本明細書における「キャリア」は、用いられている投与量および濃度でこれに曝露され
る細胞または哺乳動物にとって無毒性の、薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または安
定剤を含む。多くの場合、生理的に許容されるキャリアは、水性ｐＨ緩衝溶液である。生
理的に許容されるキャリアの例として、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸等のバッ
ファー；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；
血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン
等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン等
のアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖、二糖および他の糖
質；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール；ナト
リウム等の塩形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる
。

本明細書において、用語「処置」または「処置する」は、臨床病理学の経過において処
置されている個体または細胞の天然の経過を変更するように設計された臨床介入を指す。
処置の望ましい効果は、疾患進行速度の減少、疾患状態の回復または緩和、および寛解ま
たは改善された予後を含む。例えば、障害（例えば、線維性疾患）に関連する１種または
複数種の症状が、軽減または排除される場合、個体はうまく「処置」される。例えば、処
置が、疾患に罹った個体のクオリティ・オブ・ライフの増加、疾患処置に必要とされる他
の薬物療法の用量の減少、疾患再発の頻度の低下、疾患の重症度の低減、疾患の発症もし
くは進行の遅延および／または個体の生存の延長をもたらす場合、個体はうまく「処置」
される。

本明細書において、「と併せて」は、ある処置様式に加えた、別の処置様式の投与を指
す。このようなものとして、「と併せて」は、個体へのある処置様式の投与の前、最中ま
たは後における、他の処置様式の投与を指す。

本明細書において、用語「予防」または「予防する」は、個体における疾患の発生また
は再発に関する予防法の提供を含む。個体は、障害の素因がある、障害になりやすいまた
は障害発症リスクがある可能性があるが、未だ障害と診断されていない。一部の実施形態
において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−
８に結合する抗体）は、障害（例えば、線維性疾患）の発症を遅延させるために使用され
る。

本明細書において、障害（例えば、線維性疾患）発症「リスクがある」個体は、検出可
能な疾患または疾患症状を有していても有していなくてもよく、本明細書に記載されてい
る処置方法に先立ち検出可能な疾患または疾患症状を呈していてもいなくてもよい。「リ
スクがある」は、個体が、本技術分野で公知の疾患（例えば、線維性疾患）の発症と相関
する測定可能なパラメータである１種または複数種のリスク因子を有することを意味する
。これらのリスク因子のうち１種または複数を有する個体は、これらのリスク因子の１種
または複数がない個体よりも高い障害発症確率を有する。

「有効量」は、治療的または予防的結果を含む、所望のまたは表示の効果の達成に必要
な投与量および期間で、少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回または複数の投与で
もたらすことができる。「治療有効量」は、特定の障害の測定可能な改善をもたらすため
に要求される少なくとも最小濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状
態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力等の
因子に応じて変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が、抗体のいかなる毒性ま
たは有害効果も上回る量となることもできる。「予防有効量」は、所望の予防的結果の達
成に必要な投与量および期間で有効な量を指す。典型的には、ただし必然的にではなく、
予防的用量は、疾患のより早期ステージにおいてまたはそれに先立ち個体において使用さ
れるため、予防有効量は、治療有効量未満となり得る。

「慢性」投与は、延長された期間で初期治療効果（活性）を維持するために、急性様式
とは対照的に継続的な様式での医薬（複数可）の投与を指す。「間欠的」投与は、中断す
ることなく連続的に為されないが、周期性の性質の処置である。

本明細書において、「個体」または「被験体」は、哺乳動物である。処置目的のための
「哺乳動物」は、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、
フェレット、ラット、ネコ等、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、スポーツま
たは愛玩動物を含む。一部の実施形態において、個体または被験体は、ヒトである。

ＩＩ．組成物および方法
Ａ．本発明の方法
個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を処置または予防するための方法
であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体（例え
ば、抗シグレック−８抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法が
本明細書に提供される。個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を処置また
は予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載
されているアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストまたはアゴニス
ト抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法も本明細書に提供され
る。一部の実施形態において、個体（例えば、ヒト）は、線維性疾患（例えば、特発性肺
線維症）と診断されている、または線維性疾患を発症するリスクがある。本発明の抗体お
よびアゴニストならびにそれらの組成物により処置可能な線維性疾患の非限定例として、
肺線維症（例えば、特発性肺線維症）、肝線維症（例えば、肝硬変）、腎線維症（例えば
、腎間質線維症）、心臓線維症（例えば、心内膜心筋線維症および心房線維症）、脾臓線
維症、眼線維症、機械的誘発線維症（例えば、人工呼吸器誘発肺線維症）、インプラント
誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症（例えば、ブレオマイシン誘発肺線維症
）、ウイルス誘発線維症、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症
（例えば、骨髄線維症）、強皮症（例えば、全身性硬化症）、縦隔線維症および後腹膜腔
線維症が挙げられる。一部の実施形態では、線維性疾患は、肥満細胞媒介性障害である。

個体における前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を処置または予防するための
方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体（
例えば、抗シグレック−８抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方
法も、本明細書に提供される。個体における前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）
を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明
細書に記載されているアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニストまた
はアゴニスト抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法も、本明細
書に提供される。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）は、前線維性疾患（例えば
、慢性過敏性肺臓炎）と診断された、または線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を発
症するリスクがある。本発明の抗体およびアゴニストならびにそれらの組成物により処置
可能な前線維性疾患の非限定例として、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、
真性多血症、本態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟
児網膜症および増殖性硝子体網膜症が挙げられる。一部の実施形態では、前線維性疾患は
、肥満細胞媒介性障害である。

線維性疾患は、臓器および組織の正常な構造および機能に進行性増悪をもたらし得る、
過剰な結合組織蓄積および組織収縮によって特徴付けられる。線維性疾患は一般に、正常
な創傷治癒過程がうまくいかなかったことにより生じる。組織損傷後の正常な創傷治癒過
程は、血餅形成を誘発する抗線維素溶解性凝固カスケードを惹起する炎症性メディエータ
ーを放出する上皮細胞および／または内皮細胞が関与する。このあとに炎症および増殖期
が続き、そこでは、白血球が動員され、次いでケモカインおよび増殖因子によって活性化
および誘導されて、増殖する。活性化された白血球は、ＩＬ−１３およびＴＧＦ−β等、
線維化促進サイトカインを分泌する。刺激された上皮細胞、内皮細胞および筋線維芽細胞
も、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）ならびにさらなるサイトカインおよび
ケモカインを産生し、これらは、修復組織の重要成分である、好中球、マクロファージ、
Ｔ細胞、Ｂ細胞および好酸球を動員および活性化する。初期炎症期の直後に、筋線維芽細
胞は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分を産生し、内皮細胞は、新たな血管を形成する
。その後のリモデリング期において、活性化された筋線維芽細胞は、創傷収縮を刺激する
。コラーゲン線維もより組織化されるようになり、血管は正常へと回復し、瘢痕組織は排
除され、上皮細胞および／または内皮細胞は分裂し、基底層上を遊走して、それぞれ上皮
または内皮を再生し、損傷した組織をその正常な外観に回復する。慢性創傷の場合、この
正常な創傷治癒過程が破壊される。持続性炎症、組織壊死および感染は、慢性筋線維芽細
胞活性化および過剰なＥＣＭ成分蓄積をもたらし、これらは、線維性瘢痕の形成を促進す
る。Wynn T.A.、J Clin Invest.、２００７年、１１４巻（３号）：５２４〜５２９頁
を参照されたい。種々の損傷に起因する、臓器および組織の多くの線維性疾患が存在する
。線維症をもたらす損傷として、組織および／または臓器の異常創傷治癒をもたらす慢性
損傷によって特徴付けられる、感染性病原体（infectious agent）（例えば、細菌、ウ
イルス、真菌および多細胞寄生生物）による感染、機械的ストレス（例えば、人工呼吸器
）、環境因子（例えば、粉塵、カビ、アスベスト等）への曝露、放射線曝露、薬物曝露（
例えば、化学療法薬）および前線維性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。様々な
種類の線維性疾患が存在するが、それらは全て、当業者にとって周知の疾患の共通の特質
である、過剰ＥＣＭ成分の蓄積を含有する。Wynnら、Nature Medicine、２０１２年、１
８巻：１０２８〜１０４０頁を参照されたい。

一部の実施形態では、個体における臓器の線維性疾患を処置または予防するための方法
であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体
）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の有効量を投与
するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、臓器の線維性
疾患は、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼線維症からな
る群から選択される。一部の実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、特
発性非特異性間質性肺臓炎（ＮＳＩＰ）、原因不明の器質化肺炎（ＣＯＰ）、ハンマン・
リッチ症候群（急性間質性肺炎としても公知）、リンパ球性間質性肺臓炎（ＬＩＰ）、呼
吸細気管支炎間質性肺疾患、剥離性間質性肺臓炎（desquamative interstitial pneumo
nitis）または特発性リンパ性間質性肺炎（idiopathic lymphoid interstitial pneum
onia）または特発性胸膜肺実質線維弾性症（idiopathic pleuroparenchymal fibroelas
tosis）であるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、肺線維症は、特発性肺
線維症である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢性閉塞性肺疾患に関連する。一部の
実施形態では、肝線維症は、肝硬変、アルコール誘発肝線維症、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣ
Ｖ）誘発肝線維症、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）誘発線維症または非アルコール性脂肪肝
炎であるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、腎線維症は、腎間質線維症ま
たは糸球体硬化症であるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、心臓線維症は
、心内膜心筋線維症または心房線維症であるが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、個体における環境因子によって誘発される線維性疾患を処置また
は予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、
抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニ
スト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形
態では、環境因子によって誘発される線維性疾患は、機械的誘発線維症、インプラント誘
発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる群から
選択される。一部の実施形態では、機械的誘発線維症は、人工呼吸器誘発肺線維症である
が、これに限定されない。一部の実施形態では、薬物誘発線維症は、ブレオマイシン誘発
肺線維症、メトトレキセート誘発線維症およびシクロホスファミド誘発線維症、アミオダ
ロン誘発線維症、プロプラノロール誘発線維症、ニトロフラントイン誘発線維症およびス
ルファサラジン誘発線維症であるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ウイ
ルス誘発線維症は、ＨＣＶ誘発線維症、ＨＢＶ誘発線維症、ＴＴウイルス誘発線維症、ア
デノウイルス誘発線維症、ヒトサイトメガロウイルス誘発線維症およびエプスタイン・バ
ーウイルス誘発線維症であるが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、個体における線維性疾患を処置または予防するための方法であっ
て、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）また
はアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の有効量を投与するス
テップを含む方法が、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、線
維性疾患は、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦
隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性
疾患は、がんに関連する（すなわち、がん関連線維症）。一部の実施形態では、がんは、
線維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、カポジ
肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、軟骨肉腫および骨肉腫等の肉腫、脳腫瘍、頭頸部癌、乳
癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、虫垂癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、膵癌、胆嚢癌、
胆管癌、肛門癌、腎臓癌、尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣癌、子宮癌、卵巣癌
、外陰部癌、腟癌および皮膚癌ならびにさらには白血病または悪性リンパ腫であるが、こ
れらに限定されない。一部の実施形態では、がん関連線維症は、脳、頭頸部、乳房、肢、
肺、心臓、胸腺、食道、胃、小腸（十二指腸、空腸、回腸）、大腸（結腸、盲腸、虫垂、
直腸）、肝臓、膵臓、胆嚢、肛門、腎臓、尿管、膀胱、前立腺、陰茎、精巣、子宮、卵巣
、外陰部、腟、皮膚、横紋筋、平滑筋、滑膜、軟骨、骨、甲状腺、副腎、腹膜、腸間膜、
骨髄、血液、脈管系、リンパ節またはリンパ液等のリンパ系に存在するが、これらに限定
されない。米国特許第８，６８６，０５２号を参照されたい。一部の実施形態では、線維
性疾患は、骨髄の線維症である。さらなる実施形態では、骨髄の線維症は、骨髄線維症で
あるが、これに限定されない。一部の実施形態では、線維性疾患は、強皮症である。さら
なる実施形態では、強皮症は、限局性強皮症または全身性強皮症である。さらなる実施形
態では、強皮症は、限局型全身性強皮症、線状強皮症、全身性硬化症、限局型強皮症また
はびまん性強皮症であるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、線維性疾患は
、デュピュイトラン拘縮である。

線維性疾患の種類および線維性疾患を診断する方法は、当業者に周知である。例えば、
特発性肺線維症（ＩＰＦ）の症状として、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、
筋痛、関節痛、ならびに手指および足指のばち指が挙げられるがこれらに限定されない。
ＩＰＦ疾患進行は、高分解能ＣＴ（ＨＲＣＴ）スキャニング等の技法によりモニターする
ことができる。ＨＲＣＴによる診断において、次の特徴の存在が留意される：（１）基底
および末梢優位による網状異常および／または牽引性気管支拡張の存在；（２）基底およ
び末梢優位による蜂巣状（honeycombing）の存在；ならびに（３）微小結節（micronodul
e）、気管支血管周囲（peribronchovascular）小結節、硬化、孤立性（非蜂巣）嚢胞、す
りガラス状陰影（または存在する場合、網状影よりも範囲が狭い）および縦隔腺症（medi
astinal adenopathy）（または存在する場合、胸部ｘ線で明らかなほど十分に広範では
ない）等、非定型特色の非存在。特徴（１）、（２）および（３）が満たされる場合、確
実なＩＰＦの診断が下される。特徴（１）および（３）が満たされる場合、ほぼ確実なＩ
ＰＦの診断が下される。ＩＰＦ患者における肺機能をモニターして、疾患の進行を決定す
ることもできる。肺機能値は、当該技術分野で周知である。次に、使用することができる
肺機能値の例を挙げる。値として、肺活量（ＶＣ）、残気量（Ｖ）、努力呼気量（ＦＥＶ
_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大呼気流速（ＰＥＦＲ）、予
備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（ＩＣ）、総肺気量（ＴＬＣ）
、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気量（ＭＶＶ）が挙げられる
がこれらに限定されない。ＦＥＶ_１は、完全吸気の直後の努力呼気により既定の期間にわ
たって呼息された空気の容量を測定する。ＦＶＣは、完全吸気の直後に呼息された空気の
総容量を測定する。ＦＥＦは、秒単位の時間で割った、ＦＶＣの間に呼息された空気の容
量を測定する。ＰＥＦＲは、完全吸気から努力呼息の間の最大流速を測定する。Ｖは、完
全呼気後に肺に残る空気の容量である。肺容量は通常、ＩＰＦが進行するにつれて低下す
る。肺容量は、機能的残気量（ＦＲＣ）、総肺気量（ＴＬＣ）および残余値（Ｖ）を決定
することにより測定することができる。ＩＰＦ患者は、疾患が進行するにつれてより速い
浅呼吸も発症し、したがって、呼吸仕事量が増加する。呼気速度、努力呼気量（ＦＥＶ_１
）および努力肺活量（ＦＶＣ）は多くの場合、肺容量の低下により減少するが、ＦＥＶ_１
対ＦＶＣの比（ration）は、ＩＰＦにおいて維持または増加する。安静時および運動中の
ガス交換ならびに肺血行動態も、ＩＰＦの診断およびモニターのために検査される肺機能
であり得る。American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine、
２０００年、１６１巻（２号）：６４６〜６６４頁；Travisら、Am J Respir Crit C
are Med、２０１３年、１８８巻（６号）：７３３〜７４８頁；および米国特許第８，２
４７，３７９号を参照されたい。

線維性疾患の別の例として、肺線維症は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に関連し得る
。ＣＯＰＤは、慢性気管支炎および／または肺気腫の存在によって特徴付けられる。ＣＯ
ＰＤにおける肺組織リモデリングは、上皮破壊、平滑筋肥大、平滑筋過形成、気道壁線維
症および肺胞破壊等の過程が関与する。Salazarら、Lung、２０１１年、１８９巻（２号
）：１０１〜１０９頁を参照されたい。肺組織リモデリングにより線維症を有する一部の
ＣＯＰＤ個体に加えて、ＣＯＰＤ個体の亜集団も肺線維症を有し得る。例えば、特発性肺
線維症（ＩＰＦ）は現在、ＣＯＰＤ患者におけるＩＰＦの有病率が、６％もの高さである
ことを見出した近年の試験により、ＣＯＰＤと共存すると認識されている。Divoら、Am
J Respir Crit Care Med.、２０１２年、１８６巻（２号）：１５５〜１６１頁を参
照されたい。肺気腫に関連する肺線維症の変種についても記載されており、労作性（exte
rtional）呼吸困難、上葉肺気腫および下葉線維症、温存された肺容量、縮小されたガス
交換能力ならびに不十分な生存によって特徴付けられる、肺気腫合併肺線維症（ＣＰＦＥ
）としても公知である。Cottinら、Eur. Respir. J.、２００５年、２６巻（４号）：
５８６〜５９３頁を参照されたい。

線維性疾患の別の代表例として、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）お
よびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）等、肝臓疾患の評価に伝統的に
使用されてきた肝臓酵素レベルを評価することにより、肝線維症を診断することができる
。＞１のＡＳＴ／ＡＬＴ（ＡＡＲ）比は、肝硬変を予測する。Batallerら、J Clin Inv
est.、２００５年、１１５巻（２号）：２０９〜２１８頁を参照されたい。

別の例では、心臓線維症において、線維性組織は、高血圧、高血圧性心臓疾患、粥状動
脈硬化および心筋梗塞の結果、心臓および血管に蓄積する。これらの心血管疾患は全て、
細胞外マトリックスの蓄積または線維性沈着を示し、これらは、脈管構造の硬直および心
臓組織それ自体の硬直をもたらす。典型的には、心臓線維症の症状は、疾患が最も広範な
特定の心室および弁に関する。心臓線維症の症状として、下肢腫脹、腹囲の増加、呼吸困
難、疲労、悪心、胸痛、動悸および失神が挙げられるがこれらに限定されない。米国特許
第８，４６１，３０３号を参照されたい。

線維性疾患の別の例において、個体は、敗血症、急性肺損傷および急性呼吸促迫症候群
等の疾病から回復する際に、酸素供給を改善し、臓器修復を容易にするために、機械的人
工呼吸を要求することがある。実験研究および臨床研究からの証拠は、機械的人工呼吸が
、肺線維症を引き起こし得ることを示唆する。機械的人工呼吸に関連する肺線維症を予防
または処置する必要がある。機械、薬物（例えば、ブレオマイシン）および放射線誘発線
維症は、同様の細胞機構を示す、すなわち、コラーゲンを産生する筋線維芽細胞を活性化
した。これは、薬物誘発線維症を有効に処置することができる治療剤が、機械的誘発線維
症および放射線誘発線維症の処置に有効であり得ることを示す。Cabrera-Benitezら、Ane
sthesiology、２０１４年、１２１巻：１８９〜１９８頁；Villarら、Critical Care、
２０１５年、１９巻：１３８頁；およびSchaeferら、Eur Respir Rev.、２０１１年、
２０巻（１２０号）：８５〜９７頁を参照されたい。

線維性疾患の別の例において、インプラントが体内に配置され、周囲の宿主組織からの
異物応答に遭遇する場合、インプラント誘発線維症が発生する。応答は、インプラントを
破壊または除去する場所への炎症性細胞の浸潤と、続く損傷した組織の修復および再生に
よって特徴付けられる。インプラントを除去することができない場合、インプラントが線
維性結合組織の層に被包され、これが免疫系から遮蔽されるまで炎症性応答が持続する。
インプラントによる線維症またはインプラントの線維状被包は、インプラントの効率を損
ない、インプラントの失敗をもたらし得る。Rolfe B.ら、Regenerative Medicine and
Tissue Engineering-Cells and Biomaterials、InTech、２０１１年、５５１〜５６
８頁を参照されたい。一部の実施形態では、医学的手技の際に個体にインプラントが植え
込まれた後に、個体においてインプラント誘発線維症が発生する。一部の実施形態では、
美容的手技の際に個体にインプラントが植え込まれた後に、個体においてインプラント誘
発線維症が発生する。本明細書で企図されているインプラントとして、美容外科手術（例
えば、豊胸手術、乳房再建術等）、関節置換外科手術（例えば、股関節置換術、膝関節置
換術、肩関節置換術、足関節置換術等）、ヘルニア修復術、グラフト術（例えば、人工血
管グラフト術、皮膚グラフト術等）、ステント留置、臓器移植手術、神経系外科手術、心
臓外科手術または他のいずれかの医学的外科手術に使用されるインプラントが挙げられる
がこれらに限定されない。本明細書で企図されているインプラントとして、整形外科イン
プラント、歯科インプラント、乳房インプラント、あごインプラント、頬インプラント、
殿部インプラント、鼻インプラント、陰茎インプラント、ペースメーカー、縫合糸、グラ
フト（例えば、血管グラフト、皮膚グラフト、骨グラフト等）、心臓弁、眼内レンズ、制
御薬物送達デバイス、バイオセンサー、ステント（例えば、胃腸管ステント、気管ステン
ト、気管支ステント、泌尿器ステント、耳ステント、鼻ステント等）、手術用メッシュも
しくはフィルム、生体材料、医療デバイス、カテーテル、緑内障ドレナージデバイス、圧
力モニターデバイス、避妊インプラント、人工関節、臓器移植組織（例えば、腎臓移植組
織、肺移植組織、心臓移植組織等）、または他のいずれかの医学的インプラントもしくは
美容インプラントも挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、グラフト
は、自家移植片、同系移植片、同種移植片または異種移植片である。一部の実施形態では
、本明細書で企図されているヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック
−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）は、個
体における本明細書で企図されているインプラントの植え込みの前および／または後に、
個体に投与することができる。一部の実施形態では、本明細書で企図されているヒトシグ
レック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば
、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）は、個体における本明細書で企図されている
インプラントの植え込みの最中に、個体に投与することができる。一部の実施形態では、
本明細書で企図されているヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−
８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）は、個体
に、本明細書で企図されているインプラントが植え込まれるのとほぼ同時に、個体に投与
することができる。一部の実施形態では、本明細書で企図されているインプラントは、ヒ
トシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（
例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）でコーティングすることができる。一
部の実施形態では、本明細書で企図されているインプラントは、ヒトシグレック−８に結
合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ
−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）で包埋することができる。

線維性疾患の別の例において、強皮症は、皮膚、手指または足指、消化器系、心臓、肺
および腎臓の結合組織等、結合組織の硬化により身体を冒す自己免疫性、リウマチ性およ
び慢性疾患である。２種の主要な型の強皮症である、限局性強皮症および全身性強皮症が
存在する。皮膚病変は、両方の型の強皮症において出現し、異なる形状および色で出現す
る。皮膚病変は、その周りの皮膚と比較して、異常な成長または外観を有する皮膚の一部
であることが注目される。限局性強皮症の一形態であるモルフェアは、様々なサイズおよ
び色の、皮膚における蝋様パッチによって特徴付けられる。同様に限局性強皮症の一形態
である線状強皮症は、通常、腕、脚または頭頸部区域における、硬化した蝋様皮膚の条痕
または線として始まる。全身性硬化症において、結合組織の硬化は、身体内部の系におい
て発生し、主要臓器の機能不全をもたらし得る。限局型強皮症またはびまん性強皮症は、
全身性硬化症の２つの型であり、皮膚のこわばりの程度に基づく。LeRoyら、J Rheumato
l.、１９８８年、１５巻：２０２〜２０５頁を参照されたい。限局型強皮症において、皮
膚のこわばりは、手指、手、および肘に対し遠位の前腕に限局され、足、および膝に対し
遠位の脚の皮膚のこわばりを伴うまたは伴わない。びまん性疾患において、近位四肢およ
び体幹の皮膚も関与する。強皮症の症状として、関節痛、皮膚発疹、皮膚における腫脹血
管、皮膚潰瘍、体重減少、こわばったおよび硬化した手指、呑酸、慢性咳嗽、嚥下困難、
ドライマウス、疲労、頭痛、関節硬直、冷え性または息切れを挙げることができるがこれ
らに限定されない。本明細書における実施形態の一部では、線維性疾患は、強皮症である
。さらなる実施形態では、強皮症は、限局性強皮症または全身性強皮症である。別のさら
なる実施形態では、強皮症は、限局型全身性強皮症、線状強皮症、全身性硬化症、限局型
強皮症またはびまん性強皮症であるが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、個体における前線維性疾患を処置または予防するための方法であ
って、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）ま
たはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の有効量を投与する
ステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、前線維性疾患は、
ブレオマイシン誘発肺臓炎である。一部の実施形態では、前線維性疾患は、慢性過敏性肺
臓炎である。一部の実施形態では、前線維性疾患は、真性多血症である。一部の実施形態
では、前線維性疾患は、本態性血小板血症である。一部の実施形態では、前線維性疾患は
、眼の前線維性疾患である。一部の実施形態では、前線維性疾患は、加齢黄斑変性、糖尿
病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および増殖性硝子体網膜症からなる群から選
択される。

前線維性疾患の種類および前線維性疾患を診断する方法は、当業者に周知である。本明
細書で企図されている前線維性疾患は、本明細書で企図されている線維性疾患等、線維性
疾患に対し感受性が高いかまたはこれを発症するリスクがある個体をもたらす疾患を含む
。例えば、慢性過敏性肺臓炎は、カビ、粉塵および化学物質等、異物を吸い込むことによ
り肺が炎症を起こすようになる前線維性疾患である。慢性過敏性肺臓炎の症状として、咳
、息切れ、疲労、体重減少、およびばち状の手指または足指が挙げられるがこれらに限定
されない。慢性過敏性肺臓炎は、肺線維症等、長期肺損傷を引き起こし得る。

前線維性疾患の別の例において、真性多血症は、血液細胞の数の異常増加をもたらす骨
髄の前線維性疾患である。真性多血症の症状として、横たわったときの呼吸困難、眩暈、
過剰出血、肥大した脾臓による左上腹部における膨満感、頭痛、そう痒、皮膚の赤い着色
（red skin coloring）、息切れ、青みを帯びた皮膚の色、疲労、赤い皮膚斑点、視覚
障害および静脈炎が挙げられるがこれらに限定されない。真性多血症の合併症は、線維性
疾患、骨髄線維症（骨髄瘢痕をもたらす進行性骨髄障害）、重度貧血、ならびに肝臓およ
び脾臓の肥大の発症である。

前線維性疾患の別の代表例において、本態性血小板血症は、身体が多過ぎる血小板を産
生する前線維性疾患である。本態性血小板血症の症状として、頭痛、眩暈、胸痛、脱力、
失神、一時的視力変化、手および足のしびれまたは刺痛、手および足における疼痛、軽度
に肥大した脾臓、鼻出血、紫斑、口および歯茎からの出血、ならびに血便が挙げられるが
これらに限定されない。本態性血小板血症の合併症は、線維性疾患、骨髄線維症の発症で
ある。

眼の網膜は、ニューロン、血管、ＥＣＭ、ならびにグリア細胞および単球等の様々な常
在性および一過性細胞の複数の層からなる。網膜の血管供給は、網膜血管および脈絡毛細
管板からなる。光受容体は、神経感覚網膜の最外側部分にあり、単層の細胞である網膜色
素上皮（ＲＰＥ）の上にある。ＲＰＥは、コラーゲン性基底膜（ブルッフ膜）の上にあり
、この構造の直下には、脈絡毛細管板が流れ、網膜の外側３分の１に血液が供給される。
視力喪失をもたらす疾患は、網膜または脈絡膜の脈管構造における異常の結果としてであ
り得る。黄斑浮腫（macula edema）、網膜および硝子体の出血、ならびに血管結合組織
瘢痕（fibrovascular scarring）によって特徴付けられるこれらの疾患は、加齢黄斑変
性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および血管新生緑内障を含む。これ
らの疾患の全てにおける最終一般的病態生理学的共通因子は、損傷に対する網膜応答であ
り、慢性創傷治癒は、線維症をもたらす。Friedlander, M.、J Clin Invest.、２００
７年、１１７巻（３号）：５７６〜５８６頁を参照されたい。

当該技術分野で公知であり本明細書に記載されている方法論およびアッセイは、本明細
書に記載されているいずれかの線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）もしくはいずれか
の前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）、または本明細書に記載されている線維性
疾患もしくは前線維性疾患の症状の評価に使用することができる。

本明細書に提供されている方法の一部の実施形態では、本方法は、線維性疾患（例えば
、特発性肺線維症）を有する個体（例えば、患者）を診断するステップ、線維性疾患（例
えば、特発性肺線維症）を有する個体（例えば、患者）を処置のために選択するステップ
、および／または個体（例えば、患者）が線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を有す
るか決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本方法は、線維性疾患を有す
る個体を診断するステップ、線維性疾患を有する個体を処置のために選択するステップ、
および／または個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）の処置もしくは予防
前に、個体が線維性疾患を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグ
レック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば
、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む。一部の
実施形態では、本方法は、線維性疾患を有する個体を診断するステップ、線維性疾患を有
する個体を処置のために選択するステップ、および／または個体における線維性疾患（例
えば、特発性肺線維症）の処置もしくは予防後に、個体が線維性疾患を有するか決定する
ステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグ
レック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）
の有効量を投与するステップを含む。

本明細書に提供されている方法の一部の実施形態では、本方法は、前線維性疾患（例え
ば、慢性過敏性肺臓炎）を有する個体（例えば、患者）を診断するステップ、前線維性疾
患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を有する個体（例えば、患者）を処置のために選択する
ステップ、および／または個体（例えば、患者）が前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺
臓炎）を有するか決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本方法は、前線
維性疾患を有する個体を診断するステップ、前線維性疾患を有する個体を処置のために選
択するステップ、および／または個体における前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎
）の処置もしくは予防前に、個体が前線維性疾患を有するか決定するステップをさらに含
み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）ま
たはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の有効量を投与する
ステップを含む。一部の実施形態では、本方法は、前線維性疾患を有する個体を診断する
ステップ、前線維性疾患を有する個体を処置のために選択するステップ、および／または
個体における前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）の処置もしくは予防後に、個体
が前線維性疾患を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−
８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−
スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む。

一部の実施形態では、個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を処置また
は予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、
抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニ
スト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形
態では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および
眼線維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症
である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢性閉塞性肺疾患に関連する。一部の実施形
態では、線維性疾患は、機械的誘発線維症、インプラント誘発線維症、放射線誘発線維症
、薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる群から選択される。一部の実施形態
では、機械的誘発線維症は、人工呼吸器誘発肺線維症である。一部の実施形態では、薬物
誘発線維症は、ブレオマイシン誘発肺線維症である。一部の実施形態では、線維性疾患は
、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症お
よび後腹膜腔線維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、骨髄の線維症は、
骨髄線維症である。一部の実施形態では、強皮症は、全身性線維症である。一部の実施形
態では、強皮症は、全身性硬化症である。本明細書における実施形態の一部では、線維性
疾患（例えば、特発性肺線維症）を有する個体における１種または複数種の症状は、ヒト
シグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例
えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下
または改善される（例えば、参照値）。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状
は、息切れ、乾性咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛、ま
たは関節痛等であるがこれらに限定されない、本明細書に開示されている線維性疾患に関
連する症状であり得る。一部の実施形態では、肺線維症（例えば、特発性肺線維症）を有
する個体における１種または複数種の肺機能は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例
えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有
アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％増加する（例えば、参照
値）。さらなる実施形態では、１種または複数種の肺機能は、肺活量（ＶＣ）、残気量（
Ｖ）、努力呼気量（ＦＥＶ_１）、努力肺活量（ＦＶＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、最大
呼気流速（ＰＥＦＲ）、予備吸気量（ＩＲＶ）、機能的残気量（ＦＲＣ）、深吸気量（Ｉ
Ｃ）、総肺気量（ＴＬＣ）、予備呼気量（ＥＲＶ）、一回換気量（ＴＶ）および最大換気
量（ＭＶＶ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患（例えば、特
発性肺線維症）を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシ
グレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例え
ば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて少なく
とも５％低下する（例えば、参照値）。さらなる実施形態では、１種または複数種の病理
学的パラメータは、好中球流入、肥満細胞数、サイトカイン放出、コラーゲン蓄積、線維
芽細胞または筋線維芽細胞浸潤、および線維芽細胞増殖巣形成からなる群から選択される
。本明細書における一部の実施形態において、個体は、ヒトである。本明細書における実
施形態の一部において、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成
物中に存在する。本明細書における実施形態の一部において、アゴニストは、アゴニスト
および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する。

一部の実施形態では、個体における前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を処置
または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例え
ば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有ア
ゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実
施形態では、前線維性疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血
症、本態性血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症
および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される。一部の実施形態では、前線維性疾
患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎である。一部の実施形態では、前線維性疾患は、慢性過
敏性肺臓炎である。本明細書における実施形態の一部では、前線維性疾患（例えば、慢性
過敏性肺臓炎）を有する個体における１種または複数種の症状は、ヒトシグレック−８に
結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スル
ホ−ｓＬｅ^Ｘ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される
（例えば、参照値）。さらなる実施形態では、１種または複数種の症状は、息切れ、乾性
咳嗽、体重減少、疲労、倦怠感、ばち状の手指もしくは足指、筋痛、または関節痛等であ
るがこれらに限定されない、本明細書に開示されている前線維性疾患に関連する症状であ
り得る。一部の実施形態では、前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を有する個体
における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体
（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ
含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて少なくとも５％低下する（例えば、
参照値）。さらなる実施形態では、１種または複数種の病理学的パラメータは、好中球流
入、肥満細胞数、サイトカイン放出、コラーゲン蓄積、線維芽細胞または筋線維芽細胞浸
潤、および線維芽細胞増殖巣形成からなる群から選択される。本明細書における一部の実
施形態では、個体は、ヒトである。本明細書における実施形態の一部において、抗体は、
抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する。本明細書におけ
る実施形態の一部において、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリ
アを含む医薬組成物中に存在する。

本明細書において互換的に使用される用語「ベースライン」または「ベースライン値」
は、治療法（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与前の、または治療法の投与の開始時
における症状（例えば、サイトカイン放出、コラーゲン蓄積、好中球流入等）の測定値ま
たは特徴付けを指すことができる。本明細書において考慮される線維性疾患または前線維
性疾患の症状の低下または改善を決定するために、ベースライン値は、参照値と比較する
ことができる。本明細書において互換的に使用される用語「参照」または「参照値」は、
治療法（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後の症状の測定値または特徴付けを指す
ことができる。参照値は、投与レジメンもしくは処置サイクルの間にまたは投与レジメン
もしくは処置サイクルの完了時に、１回または複数回測定することができる。「参照値」
は、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均値；中央値；
平均的な値；またはベースライン値と比較される値となることができる。同様に、「ベー
スライン値」は、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均
値；中央値；平均的な値；または参照値と比較される値となることができる。参照値およ
び／またはベースライン値は、１個体から、または異なる２個体から、または個体の群（
例えば、２、３、４、５またはそれを超える個体の群）から得ることができる。例えば、
線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を有する個体は、ヒトシグレック−８に結合する
抗体の投与後に、個体におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与前または投与初
期のコラーゲン蓄積のレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、コラーゲン蓄積の
レベルを低下させ得る（例えば、参照値）。別の例において、線維性疾患（例えば、特発
性肺線維症）を有する個体は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、異なる個
体におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与前または投与初期のコラーゲン蓄積
のレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、コラーゲン蓄積のレベルを低下させ得
る（例えば、参照値）。さらに別の例において、線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）
を有する個体は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、個体群におけるヒトシ
グレック−８に結合する抗体の投与前または投与初期のコラーゲン蓄積のレベル（例えば
、ベースライン値）と比較して、コラーゲン蓄積のレベルを低下させ得る（例えば、参照
値）。別の例において、線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を有する個体群は、ヒト
シグレック−８に結合する抗体の投与後に、個体群におけるヒトシグレック−８に結合す
る抗体の投与前または投与初期のコラーゲン蓄積のレベル（例えば、ベースライン値）と
比較して、コラーゲン蓄積のレベルを低下させ得る（例えば、参照値）。本明細書におけ
る実施形態のいずれかでは、ベースライン値は、ヒトシグレック−８に結合する抗体によ
り処置されていない、１個体から、２名の異なる個体から、または個体群（例えば、２、
３、４、５名またはそれを超える個体の群）から得ることができる。

肥満細胞は、アレルギー性免疫応答（例えば、ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路）お
よび非アレルギー性細胞機能（例えば、非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路）の両方に
おいて役割を果たす。非ＩｇＥ媒介性肥満細胞機能は、上皮機能（例えば、分泌および上
皮透過性）、平滑筋機能（例えば、蠕動および細気管支収縮（bronchioconstriction））
、内皮機能（例えば、血流、凝固および血管透過性）、ニューロン機能および他の組織機
能（例えば、創傷治癒および線維症）の調節を含む。これらの機能は、増殖因子、組織因
子、感染性病原体、神経ペプチドおよびタンパク質抗原等、種々の細胞シグナル伝達作用
因子（すなわち、非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子）によって媒介される
。Bischoffら、Nature Reviews Immunology、２００７年、７巻：９３〜１０４頁を参
照されたい。本明細書で企図されている処置方法は、ヒトシグレック−８に結合する本明
細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物を用いて、個体における
非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達経路の作用因子による肥満細胞活性化を低下させるため
の方法である。本明細書における実施形態の一部では、非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル伝達
経路の作用因子は、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、
トール様受容体３（ＴＬＲ３）、インターロイキン３３（ＩＬ−３３）および補体タンパ
ク質からなる群から選択される。一部の実施形態では、肥満細胞活性化は、ヒトシグレッ
ク−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて個体において
低下する。一部の実施形態では、個体は、本明細書に記載されている線維性疾患を有する
。一部の実施形態では、線維性疾患は、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾
臓線維症および眼線維症からなる群から選択される。さらなる実施形態では、肺線維症は
、特発性肺線維症である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢性閉塞性肺疾患に関連す
る。本明細書における一部の実施形態では、線維性疾患は、機械的誘発線維症、インプラ
ント誘発線維症、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる
群から選択される。さらなる実施形態では、機械的誘発線維症は、人工呼吸器誘発肺線維
症である。また別のさらなる実施形態では、薬物誘発線維症は、ブレオマイシン誘発肺線
維症である。一部の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状
動脈硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選択
される。一部の実施形態では、強皮症は、全身性硬化症である。一部の実施形態では、個
体は、本明細書に記載されている前線維性疾患を有する。一部の実施形態では、前線維性
疾患は、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態性血小板血症
、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および増殖性硝子体網
膜症からなる群から選択される。

一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、好酸球（例えば、シグレ
ック−８を発現する好酸球）の枯渇または低下のために、ヒトシグレック−８に結合する
抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態におい
て、抗シグレック−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較して、被験体から得ら
れる試料における好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の少なくとも約２
０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または
約１００％を枯渇または低下させる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は
、処置前のベースラインレベルと比較して、被験体から得られる試料における好酸球（例
えば、シグレック−８を発現する好酸球）の少なくとも約２０％を枯渇または低下させる
。一部の実施形態において、好酸球の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処
置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における好酸球集団数を、
抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における好酸球集団数と比較するこ
とにより測定される。一部の実施形態において、好酸球の枯渇または低下は、抗体または
アゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）におけ
る好酸球集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における
好酸球集団数または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均
好酸球集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織
試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料、等）である。本明細書における一部の実施
形態において、抗体は、組織試料（例えば、肺試料）における好酸球を枯渇させる。一部
の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞洗浄試料等）
である。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、生体液試料（例えば、気管
支肺胞洗浄試料）における好酸球を枯渇させる。本明細書における方法の一部の実施形態
において、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有
効量は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。好酸球は、ＩＬ−５、ＧＭ−Ｃ
ＳＦ、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびレプチン等が挙げられるがこれらに限
定されない、サイトカインまたはホルモンにより活性化または感作することができる。本
明細書における方法の一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書
に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、休止した好酸球
のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本
明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、好酸球に
対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。一部の実施形態におい
て、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストま
たはその組成物の有効量は、炎症性メディエーターの好酸球産生を予防または低下させる
。例示的な炎症性メディエーターとして、活性酸素種、顆粒タンパク質（例えば、好酸球
カチオン性タンパク質、主要塩基性タンパク質、好酸球由来神経毒、好酸球ペルオキシダ
ーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、ＰＡＦ、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２等）、酵素（例え
ば、エラスターゼ）、増殖因子（例えば、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β
等）、ケモカイン（例えば、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ４、エオタ
キシン等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３
、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＴＮＦ−α等）が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、肥満細胞の枯渇または低
下のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の
有効量を投与される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、抗体また
はアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）にお
ける肥満細胞集団数を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における肥
満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯
渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試
料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なし
の別の個体由来の試料における肥満細胞集団数または抗体処置もしくはアゴニスト処置な
しの個体由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部
の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料等）であ
る。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞洗浄
試料等）である。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記
載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、肥満細胞に対する抗
体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。一部の実施形態において、肥満
細胞の枯渇または低下は、肥満細胞から産生される予め形成または新たに形成された炎症
性メディエーターの低下または予防である。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒス
タミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシン（
ｃａｔｈｅｓｐｉｎ）Ｇ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、
プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエ
ンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（
例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸ
ＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ
−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げ
られるがこれらに限定されない。

一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、シグレック−８を発現す
る肥満細胞を枯渇させるために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニスト
またはその組成物の有効量を投与され、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によりシ
グレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の実施形態において、抗シグレック
−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較した場合に、被験体から得られる試料に
おけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、
約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇させる。一
部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較し
た場合に、被験体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なく
とも約２０％を枯渇させる。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または死滅は、抗
体による処置後の被験体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満
細胞集団数を、抗体による処置前の被験体由来の試料における肥満細胞集団数と比較する
ことにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または死滅は、抗体に
よる処置後の被験体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞
集団数を、抗体処置なしの別の被験体由来の試料における肥満細胞集団数または抗体処置
なしの被験体由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することにより測定される。
一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料等）
である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞
洗浄試料等）である。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性
を改善するように操作された。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、ＡＤ
ＣＣ活性を改善するＦｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一部の実施
形態において、抗体の重鎖の少なくとも１または２つは、フコシル化されていない。一部
の実施形態において、肥満細胞の枯渇または死滅は、肥満細胞から産生される予め形成ま
たは新たに形成された炎症性メディエーターの低下または予防である。例示的な炎症性メ
ディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ
、キマーゼ、カテプシンＧ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば
、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリ
エンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン
（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、Ｃ
ＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、Ｉ
Ｌ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｔ
ＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、肥満細胞媒介性活性の阻
害のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の
有効量を投与される。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、抗体また
はアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）にお
ける肥満細胞媒介性活性を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料におけ
る肥満細胞媒介性活性と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満
細胞媒介性活性の阻害は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば
、組織試料または生体液試料）における肥満細胞媒介性活性を、抗体処置もしくはアゴニ
スト処置なしの別の個体由来の試料における肥満細胞媒介性活性または抗体処置もしくは
アゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均肥満細胞媒介性活性と比較することに
より測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試
料、骨髄試料等）である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液
試料、気管支肺胞洗浄試料等）である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の
阻害は、肥満細胞脱顆粒の阻害である。一部の実施形態では、肥満細胞媒介性活性の阻害
は、線維性疾患の部位への好中球流入の阻害である。一部の実施形態では、肥満細胞媒介
性活性の阻害は、線維性疾患の部位におけるコラーゲン蓄積の阻害である。一部の実施形
態では、肥満細胞媒介性活性の阻害は、線維性疾患の部位におけるサイトカイン放出の阻
害である。一部の実施形態では、肥満細胞媒介性活性の阻害は、個体における肥満細胞の
数の低下である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、肥満細胞から
の予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターの放出の阻害である。例示的な
炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリ
プターゼ、キマーゼ、カテプシンＧ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター
（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロ
イコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケ
モカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシ
ン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例
えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−Ｃ
ＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。

疾患の予防または処置のために、活性薬剤の適切な投与量は、上に定義されている処置
しようとする疾患の種類、疾患の重症度および経過、予防または治療目的のいずれのため
に薬剤が投与されるか、以前の治療法、個体の臨床歴および薬剤に対する応答、ならびに
主治医の裁量に依存するであろう。薬剤は、一度にまたは一連の処置にわたって個体に適
宜投与される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、本明細書に記
載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）また
はアゴニストの投与間の間隔は、約１カ月間またはそれより長い。一部の実施形態におい
て、投与間の間隔は、約２カ月間、約３カ月間、約４カ月間、約５カ月間、約６カ月間ま
たはそれより長い。本明細書において、投与間の間隔は、抗体またはアゴニストの１投与
と、抗体またはアゴニストの次の投与との間の期間を指す。本明細書において、約１カ月
間の間隔は、４週間を含む。したがって、一部の実施形態において、投与間の間隔は、約
４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間
、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間またはそれより長い。一部の実施形
態では、投与間の間隔は、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約５日
間、約７日間またはそれより長い。一部の実施形態において、処置は、抗体またはアゴニ
ストの複数投与を含み、投与間の間隔は、変動し得る。例えば、第１の投与と第２の投与
との間の間隔は、約１ヶ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部
の実施形態において、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、第２
の投与と第３の投与との間の間隔は、約２ヶ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３
ヶ月間である。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗
体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴ
ニストは、平坦な用量で投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されてい
る抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書
に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．１ｍｇ〜約１８００ｍｇの投与量で個
体に投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレ
ック−８に結合する抗体）またはアゴニストは、用量当たり０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１
ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍ
ｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍ
ｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５
０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、
１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍ
ｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇおよび１８００ｍｇのほぼいずれかの投与量で個体に投
与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（
例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニス
トは、用量当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投与量で個体に投与される。一部の実施
形態において、抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）ま
たはアゴニストは、用量当たり１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５
０ｍｇ、４００ｍｇおよび４５０ｍｇのほぼいずれかの投与量で個体に投与される。一部
の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシ
グレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当た
り約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態
において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−
８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．０
１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において
、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合
する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０
ｍｇ／ｋｇまたは約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で被験体に投与される
。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、約０．
１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／
ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４
．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ
／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、
９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇまたは１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの投与量で被
験体に投与される。上述の投薬頻度のいずれかを使用することができる。上述のいずれか
の投薬頻度は、本明細書に記載されている方法または組成物の使用において使用すること
ができる。本明細書に記載されている抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体
）または本明細書に記載されているアゴニストによる処置の有効性は、１週間毎〜３カ月
間毎に及ぶ間隔で、本明細書に記載されている方法論またはアッセイのいずれかを使用し
て評価することができる。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、処
置の有効性（例えば、１種または複数種の症状の低下または改善）は、ヒトシグレック−
８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、約１カ月間毎に、約２カ月間毎に、約３
カ月間毎に、約４カ月間毎に、約５カ月間毎に、約６カ月間毎にまたはそれより長い間隔
で評価される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、処置の有効性
（例えば、１種または複数種の症状の低下または改善）は、約１週間毎に、約２週間毎に
、約３週間毎に、約４週間毎に、約５週間毎に、約６週間毎に、約７週間毎に、約８週間
毎に、約９週間毎に、約１０週間毎に、約１１週間毎に、約１２週間毎に、約１６週間毎
に、約２０週間毎に、約２４週間毎にまたはそれより長い間隔で評価される。本明細書に
記載されている方法の一部の実施形態では、処置の有効性（例えば、１種または複数種の
症状の低下または改善）は、約１日毎、約２日毎、約３日毎、約４日毎、約５日毎、約６
日毎、約７日毎またはそれより長い間隔で評価される。

シグレック−８のアゴニスト
一態様において、本発明は、本明細書における方法のいずれかにおける使用のためのア
ゴニストを提供する。一部の実施形態において、アゴニストは、好酸球において発現する
シグレック−８に結合し、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおける好酸球のアポ
トーシスを誘導する薬剤である。一部の実施形態では、アゴニストは、肥満細胞において
発現したシグレック−８に結合し、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで肥満細胞の
活性化を阻害する作用因子である。一部の実施形態では、アゴニストは、肥満細胞におい
て発現したシグレック−８に結合し、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで肥満細胞
の数を枯渇または低下させる作用因子である。一部の実施形態において、アゴニストは、
アゴニスト抗体である。一部の実施形態において、アゴニスト抗体（例えば、本明細書に
提供される抗体２Ｅ２）は、好酸球によって発現するシグレック−８に架橋し、好酸球に
おける１種または複数種のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３および
カスパーゼ−９）の活性化および／またはミトコンドリア膜電位の喪失を誘導する。Ｎｕ
ｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１
８〜９２４頁、２００５年を参照されたい。シグレック−８は、グリカン６’−スルホ−
シアリルルイスＸ（本明細書において、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘとも称される）に結合し
、このグリカンへの会合は、シグレック−８発現細胞（例えば、好酸球）のアポトーシス
を誘導する。Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．、３３０巻
（２号）：６０８〜１２頁、２００９年を参照されたい。本明細書における一部の実施形
態において、シグレック−８のアゴニストは、分子（例えば、ポリマー、オリゴ糖、ポリ
ペプチド、糖タンパク質等）に付着または連結された６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘを有する分
子である。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓ
Ｌｅ^Ｘ含有アゴニスト分子（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有リガンド、６’−スル
ホ−ｓＬｅ^Ｘ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅ^Ｘ含有ポリペプチドおよび６’−スル
ホ−ｓＬｅ^Ｘ含有糖タンパク質）である。

アゴニストは、種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび
天然産物の混合物から同定することができる。斯かるアゴニストは、グリカン６’−スル
ホ−ｓＬｅＸを含有し、シグレック−８に結合する天然または修飾された基質、リガンド
、受容体、オリゴヌクレオチド、ポリペプチドまたは抗体となることができる、あるいは
これらの構造または機能的模倣物となることができる。グリカン６’−スルホ−ｓＬｅＸ
を含有する斯かる天然または修飾された基質、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチドま
たは抗体の構造または機能的模倣物は、本明細書において、「６’−スルホ−ｓＬｅＸ含
有糖模倣物（ｇｌｙｃｏｍｉｍｅｔｉｃ）」と称される。Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅ
ｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １巻（２号）：第５章、１９
９１年を参照されたい。例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖模倣物は、シグレック−
８の天然リガンドの活性を構造または機能的に模倣する６’−スルホ−ｓＬｅＸで装飾さ
れた合成ポリマーに基づくリガンドとなることができる。例えば、本明細書で考慮される
糖模倣物に関する、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．、３
３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年を参照されたい。潜在的アゴニストの他の
例として、抗体、あるいは一部の事例において、シグレック−８の天然リガンドに密接に
関係したオリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドまたはシグレック−８に結合する小分
子が挙げられる。シグレック−８に結合する特定の多糖リガンド（例えば、６’−スルホ
−ｓＬｅＸ含有リガンド）のコンフォメーションおよび望ましい特色を模倣し、好ましく
は、目的の元の多糖リガンド（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド）の少なく
とも一部の望ましくない特色（低い結合親和性、短いｉｎ ｖｉｖｏ半減期その他等）を
回避する合成化合物は、本明細書において、「模倣物」と称される。例えば、本明細書で
考慮される模倣物に関する、米国特許第８，１７８，５１２号を参照されたい。

一部の態様において、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合するアゴニ
スト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストまたは抗体）は、好酸球のアポト
ーシスを誘導する。好酸球のアポトーシスは、本技術分野で周知の方法によって評価する
ことができる。Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．、３３０
巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年およびＮｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年を参照さ
れたい。例えば、ヒト好酸球は、末梢血から単離され、精製され、ＩＬ−５において２４
または７２時間培養され、続いてヒトシグレック−８に結合するアゴニストと共にさらに
２４時間インキュベーションされる。次に、アネキシン−Ｖおよびヨウ化プロピジウムで
標識した後に、フローサイトメトリー解析により細胞生存を評価する。アゴニスト活性は
、好酸球におけるカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびカスパー
ゼ−９）の活性化および／または好酸球におけるミトコンドリア膜電位の喪失を検出する
ことにより使用して評価することもできる。これらのアッセイは、Ｎｕｔｋｕら、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２
００５年に記載されている。

抗体
一態様において、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する単離された抗体（例えば、
ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体）を提供する。一部の実施形態では、本明
細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、次の特徴のうち１種または複数種を有す
る：（１）ヒトシグレック−８に結合する；（２）ヒトシグレック−８の細胞外ドメイン
に結合する；（３）マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高い親和性
でヒトシグレック−８に結合する；（４）マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２
Ｃ４よりも高いアビディティーでヒトシグレック−８に結合する；（５）熱シフトアッセ
イにおいて約７０℃〜７２℃またはそれより高いＴｍを有する；（６）低下した程度のフ
コシル化を有するまたはフコシル化していない；（７）好酸球において発現したヒトシグ
レック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する；（８）肥満細胞において発現し
たヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞の数を枯渇または低下させる；（９）肥満細胞
において発現したヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞のＦｃεＲＩ依存性活性（例え
ば、ヒスタミン放出、ＰＧＤ２放出、Ｃａ２＋フラックスおよび／またはβ−ヘキソサミ
ニダーゼ放出等）を阻害する；（１０）ＡＤＣＣ活性を改善するように操作されている；
ならびに（１１）肥満細胞において発現したヒトシグレック−８に結合し、非ＩｇＥ媒介
性細胞シグナル伝達経路の作用因子（例えば、補体タンパク質）による肥満細胞の活性化
を阻害する。

一態様において、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体を提供する。一部の実
施形態において、ヒトシグレック−８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実
施形態において、ヒトシグレック−８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実
施形態において、本明細書に記載されている抗体は、好酸球上に発現するヒトシグレック
−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、本明細書に
記載されている抗体は、肥満細胞上に発現するヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞を
枯渇させるかまたは肥満細胞の数を低下させる。一部の実施形態において、本明細書に記
載されている抗体は、肥満細胞上に発現するヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞媒介
性活性を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗体は、肥満細胞に
おいて発現したヒトシグレック−８に結合し、非ＩｇＥ媒介性免疫応答経路の作用因子に
よる肥満細胞活性化を低下させる。さらなる実施形態では、非ＩｇＥ媒介性細胞シグナル
伝達経路の作用因子は、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、幹細胞因子（ＳＣＦ
）、トール様受容体３（ＴＬＲ３）、インターロイキン３３（ＩＬ−３３）および補体タ
ンパク質からなる群から選択される。

一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、モノクローナル
抗体である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、抗体
断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖまた
は（Ｆａｂ’）２断片である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック
−８抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である。一態様において、本明細書に記載さ
れている抗シグレック−８抗体のいずれかは、精製されている。

一態様において、シグレック−８に結合するマウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体
と競合する抗シグレック−８抗体が提供される。マウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗
体と同じエピトープに結合する抗シグレック−８抗体も提供される。シグレック−８に対
するマウス抗体、２Ｅ２および２Ｃ４抗体は、米国特許第８，２０７，３０５号；米国特
許第８，１９７，８１１号、米国特許第７，８７１，６１２号および米国特許第７，５５
７，１９１号に記載されている。

一態様において、シグレック−８への結合に関して本明細書に記載されているいずれか
の抗シグレック−８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１）
と競合する抗シグレック−８抗体が提供される。本明細書に記載されているいずれかの抗
シグレック−８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１）と同
じエピトープに結合する抗シグレック−８抗体も提供される。

本発明の一態様において、抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドが提供
される。ある特定の実施形態において、抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオ
チドを含むベクターが提供される。ある特定の実施形態において、斯かるベクターを含む
宿主細胞が提供される。本発明の別の態様において、抗シグレック−８抗体または抗シグ
レック−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が提供される。ある特定の実
施形態では、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているもの等、線維性疾患（例えば
、特発性肺線維症）または前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）の処置のための医
薬製剤である。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、本明細書に列挙されている
もの等、線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）または前線維性疾患（例えば、慢性過敏
性肺臓炎）の予防のための医薬製剤である。

一態様において、マウス抗体２Ｃ４のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個
を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗
体２Ｅ２のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体
が本明細書において提供される。一部の実施形態において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤ
ＲまたはＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。

一態様において、マウス抗体１Ｃ３のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個
を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗
体４Ｆ１１のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗
体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体１Ｈ１０のＨＶＲ配列の
うち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供
される。一部の実施形態において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ
ＣＤＲである。

一態様において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する単
離された抗シグレック−８抗体が本明細書に提供される。一部の実施形態において、ヒト
シグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒトシグレック−
８のドメイン１におけるエピトープに結合する。一部の実施形態において、ヒトシグレッ
ク−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒトシグレック−８のドメ
イン３におけるエピトープに結合する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８お
よび非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体またはヒト
抗体である。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレッ
ク−８に結合する抗体は、マウス抗体である。一部の実施形態において、ヒトシグレック
−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である。

一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であっ
て、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）
配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４の
アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−
Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明
細書において提供される。

一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であっ
て、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）
配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０か
ら選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（
ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ
３を含む抗体が本明細書において提供される。

一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であっ
て、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）
配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４の
アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−
Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明
細書において提供される。

別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であ
って、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ
）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０
から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、
（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−
Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。

別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であ
って、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ
）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミ
ノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体
が本明細書において提供される。

別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であ
って、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ
）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミ
ノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体
が本明細書において提供される。

別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であ
って、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ
）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミ
ノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶ
Ｒ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体
が本明細書において提供される。

本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、この抗体が、ヒトシグレック−８
に結合する能力を保持するのであれば、いかなる適したフレームワーク可変ドメイン配列
を含むこともできる。本明細書において、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ−ＦＲ１〜
ＦＲ４」と命名され、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と命名され
る。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号２６、３４、３８およ
び４５の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、
ＨＣ−ＦＲ３およびＨＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８
抗体は、配列番号４８、５１、５５および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（
それぞれＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。一部
の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号４８、５１、５８および６０の
軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−Ｆ
Ｒ３およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。

一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変
領域を含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ
４配列、それぞれ配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−Ｆ
Ｒ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）および配列番号４５または４６（ＨＣ−Ｆ
Ｒ４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、
配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含
む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可
変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−Ｆ
Ｒ４配列、それぞれ配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−
ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）および配列番号４５または４６（ＨＣ−
ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は
、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６７〜７０から選択さ
れるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワー
ク配列および高頻度可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、Ｌ
Ｃ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配
列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）および配列番
号６０（ＬＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６６の
アミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配
列および高頻度可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ−
ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番
号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）および配列番号６
０（ＬＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶ
Ｒ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７１のアミ
ノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号２
〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２か
ら選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメイ
ンは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列
番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態にお
いて、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽
鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗
体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミ
ノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸
配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６のア
ミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。これらの
抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽
鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、重鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：

一部の実施形態において、重鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：

一部の実施形態において、重鎖ＦＲ配列は、次のものを含む：

一部の実施形態において、軽鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：

一部の実施形態において、軽鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：

一部の実施形態において、軽鎖ＦＲ配列は、次のものを含む：

一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する抗シグレック−８抗体（例え
ば、ヒト化抗シグレック−８抗体）であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗
体であり、
（ａ）
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変ドメイン
および／または
（ｂ）
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗体が本明細書において提供される。

一態様において、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／ま
たは配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が
本明細書において提供される。一態様において、配列番号２〜１０から選択される重鎖可
変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメ
インを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列
番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２
２から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供
される。一態様において、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、
かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレ
ック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号６の重鎖可変ド
メインを含む、かつ／または配列番号１６もしくは２１から選択される軽鎖可変ドメイン
を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。

一態様において、配列番号１０６〜１０８から選択される重鎖可変ドメインを含む、か
つ／または配列番号１０９〜１１１から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック
−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０６の重鎖可変ド
メインを含む、かつ／または配列番号１０９の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８
抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０７の重鎖可変ドメイ
ンを含む、かつ／または配列番号１１０の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体
が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０８の重鎖可変ドメインを
含む、かつ／または配列番号１１１の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本
明細書において提供される。

一部の実施形態において、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列に対し少なく
とも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または
９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８
抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、配列番号１０６〜１０８
から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
重鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実
施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置
換、挿入または欠失を含有するが、このアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトシグレック−８
に結合する能力を保持する。一部の実施形態において、置換、挿入または欠失（例えば、
１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において
生じる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列
を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配
列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

一部の実施形態において、配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列に対し少な
くとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−
８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、配列番号１０９〜１１
１から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含
む軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の
実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて
置換、挿入または欠失を含有するが、このアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトシグレック−
８に結合する能力を保持する。一部の実施形態において、置換、挿入または欠失（例えば
、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）におい
て生じる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１６または２１
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗シグレック
−８抗体は、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイ
ンを含む。

一態様において、本発明は、（ａ）表２に示すＶＨ ＨＶＲから選択される１、２もし
くは３個のＶＨ ＨＶＲおよび／または（ｂ）表２に示すＶＬ ＨＶＲから選択される１
、２もしくは３個のＶＬ ＨＶＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。

一態様において、本発明は、（ａ）表５に示すＶＨ ＨＶＲから選択される１、２もし
くは３個のＶＨ ＨＶＲおよび／または（ｂ）表５に示すＶＬ ＨＶＲから選択される１
、２もしくは３個のＶＬ ＨＶＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。

一態様において、本発明は、（ａ）表３に示すＶＨ ＦＲから選択される１、２、３も
しくは４個のＶＨ ＦＲおよび／または（ｂ）表３に示すＶＬ ＦＲから選択される１、
２、３もしくは４個のＶＬ ＦＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。

一部の実施形態において、表４に示す抗体、例えば、ＨＡＫＡ抗体、ＨＡＫＢ抗体、Ｈ
ＡＫＣ抗体等の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−
８抗体が本明細書において提供される。

それぞれα、δ、ε、γおよびμと命名された重鎖を有する５クラスの免疫グロブリン
：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在する。γおよびαクラスは、サブ
クラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、Ｉｇ
Ｇ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと命
名される複数の多型バリアントで存在することができ（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｅｆｒ
ａｎｃ ２００９年、ｍＡｂｓ １巻、４号１〜７頁において概説）、そのうちいずれか
が、本明細書における実施形態の一部における使用に適する。ヒト集団における共通アロ
タイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚまたはこれらの組合せによって命名されるバリ
アントである。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒトＩｇＧ Ｆ
ｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含むことができる。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ
Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇ
Ｇ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔにおける通り
のＥＵインデックスに従ってナンバリングされる。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ
１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、
配列番号７９のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配
列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗シグレック−８
抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体は、配列番号８７の
アミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む
ことができる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、肥満細胞を枯渇させ
、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、活性
化された好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態において、抗シ
グレック−８抗体は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態に
おいて、抗シグレック−８抗体は、休止した好酸球のアポトーシスを誘導する。本明細書
における一部の実施形態において、抗体は、組織（例えば、鼻ポリープ）における好酸球
を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、生体液（例えば、血
液）における好酸球を枯渇させる。

１．抗体親和性
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、マウス抗体
２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４と比較した場合に、ほぼ同じもしくはより高い親
和性および／またはより高いアビディティーでヒトシグレック−８に結合する。ある特定
の実施形態において、本明細書に提供される抗シグレック−８抗体は、≦１μＭ、≦１５
０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１
ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^−８Ｍまたはそれに満たない、例えば、１０
^−８Ｍ〜１０^−１３Ｍ、例えば、１０^−９Ｍ〜１０^−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有す
る。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、マウ
ス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも約１．５倍、約２倍、約３倍、約４
倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍高い親和性で、ヒトシグレ
ック−８に結合する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体
は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号１６もしくは
２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

一実施形態において、抗シグレック−８抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッ
セイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、固定化された抗原ＣＭ
５チップにより約１０の応答単位（ＲＵ）で２５℃にてＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−２００
０またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔ
ａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することにより測定することができる。簡潔に説明すると、
カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録
商標）Ｉｎｃ．）は、供給元の指示に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨ
Ｓ）により活性化される。捕捉抗体（例えば、抗ヒト−Ｆｃ）は、１０ｍＭ酢酸ナトリウ
ム、ｐＨ４．８で希釈され、その後、流速３０μｌ／分で注射し、抗シグレック−８抗体
でさらに固定化する。動態測定のため、二量体シグレック−８の２倍系列希釈を、０．０
５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）において２５℃、流速およそ２５μｌ／分で
注射する。会合および解離センサーグラムを同時に適合することにより、単純１対１ラン
グミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）
を使用して、会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数
（Ｋｄ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ， Ｙ．ら（１９９
９年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２９３巻：８６５〜８８１頁を参照されたい。

別の実施形態において、バイオレイヤーインターフェロメトリーを使用して、シグレッ
ク−８に対する抗シグレック−８抗体の親和性を決定することができる。例示的なアッセ
イにおいて、シグレック−８−Ｆｃタグ付けタンパク質は、抗ヒト捕捉センサー上に固定
化され、増加濃度のマウス、キメラまたはヒト化抗シグレック−８ Ｆａｂ断片と共にイ
ンキュベートされて、例えば、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｆｏｒｔｅ
Ｂｉｏ）等の機器を使用して親和性測定値を得る。

抗シグレック−８抗体の結合親和性は、例えば、関連技術分野において周知の標準技法
を使用して、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７巻：２２０頁（１
９８０年）に記載されているＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって決定することもできる。Ｓ
ｃａｔｃｈａｒｄ， Ｇ．、Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．５１巻：６６０
頁（１９４７年）も参照されたい。

１．抗体アビディティー
一実施形態において、抗シグレック−８抗体の結合アビディティーは、表面プラズモン
共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、ＢＩＡｃｏｒ
ｅ Ｔ１００を使用することにより測定することができる。捕捉抗体（例えば、ヤギ−抗
ヒト−Ｆｃおよびヤギ−抗マウス−Ｆｃ）は、ＣＭ５チップ上に固定化される。フローセ
ルは、抗ヒトまたは抗マウス抗体により固定化することができる。ある温度および流速、
例えば、２５℃、流速３０μｌ／分でアッセイを行う。二量体シグレック−８は、アッセ
イバッファーにおいて様々な濃度で、例えば、１５ｎＭ〜１．８８ｐＭに及ぶ濃度で希釈
する。抗体を捕捉し、高速注射、続いて解離を行う。バッファー、例えば、５０ｍＭグリ
シンｐＨ１．５でフローセルを再生する。空の参照セルおよび複数のアッセイバッファー
注射により結果をブランク作成し、１：１グローバルフィットパラメータにより解析する
。

２．競合アッセイ
競合アッセイを使用して、２種の抗体が、同一もしくは立体的に重複するエピトープを
認識することにより、同じエピトープに結合するか、または一方の抗体が、抗原への別の
抗体の結合を競合的に阻害するか決定することができる。このようなアッセイは、本技術
分野で公知である。典型的には、抗原または抗原発現細胞が、マルチウェルプレートに固
定化され、標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力が測定される。斯かる競合アッセ
イに一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態において、本明
細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）
の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、本明細書に記載されている２Ｅ２抗
体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗
体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合
に関して、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書
に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細
胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、本明細書に記載されている２Ｃ４抗体と
競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は
、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関
して、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（米国特許第８，２０７，３０
５号に見出されるものと同様に）および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（
米国特許第８，２０７，３０５号に見出されるものと同様に）を含む抗体と競合する。

３．熱的安定性
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８は、熱シフトアッセ
イにおいて少なくとも約７０℃、少なくとも約７１℃または少なくとも約７２℃の融解温
度（Ｔｍ）を有する。例示的な熱シフトアッセイにおいて、ヒト化抗シグレック−８抗体
を含む試料を、ｑＰＣＲサーマルサイクラーにおいて１サイクル毎に１℃増加させつつ７
１サイクルにわたり蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）と共にインキュベートして、
Ｔｍを決定する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、
マウス２Ｅ２抗体および／またはマウス２Ｃ４抗体と比較した場合に、同様のまたはより
高いＴｍを有する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は
、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは
２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、
抗シグレック−８抗体は、キメラ２Ｃ４抗体と比較した場合に同じまたはより高いＴｍを
有する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号８４のアミノ酸配
列を含む重鎖および配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と比較した場合
に同じまたはより高いＴｍを有する。

４．生物学的活性アッセイ
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、好酸球のア
ポトーシスを誘導する。一部の他の態様において、本明細書に記載されている抗シグレッ
ク−８抗体は、肥満細胞を枯渇させる。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイは
、本技術分野において周知であり、例えば、アネキシンＶによる染色およびＴＵＮＥＬア
ッセイが挙げられる。例示的な細胞アポトーシスアッセイにおいて、血液試料由来の新鮮
バフィーコートを培地に再懸濁し、９６ウェルＵ字底プレートで平板培養する。抗シグレ
ック−８抗体の一連の系列５倍希釈を各ウェルに添加し、このプレートを３７℃、５％Ｃ
Ｏ_２で４時間より長くインキュベートする。ＰＢＳに希釈したパラホルムアルデヒドで細
胞を固定し、顕微鏡を使用した検出のための好酸球に特異的なコンジュゲートされた抗体
で染色する。バフィーコートが抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされない
ときと比較した場合に、バフィーコートが抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベー
トされたときの総末梢血白血球における好酸球集団を評価する。別の例示的なアッセイに
おいて、血液試料から精製された好酸球（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ好酸球単離キット）
を培地に再懸濁し、ＩＬ−５の存在または非存在下で一晩培養する。培養した好酸球をそ
の後、遠心分離によって収集し、培地に再懸濁し、９６ウェルＵ字底プレートで平板培養
する。抗シグレック−８抗体の一連の系列５倍希釈を各ウェルに添加し、このプレートを
３７℃、５％ＣＯ_２で４時間より長くインキュベートする。本技術分野において周知の標
準技法を使用して細胞を固定し、アネキシン−Ｖで染色し、顕微鏡を使用して好酸球の数
を検出する。精製された細胞が抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされない
ときと比較した場合に、精製された細胞が抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベー
トされたときの試料における好酸球集団を評価する。

一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活
性を誘導する。一部の他の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗
体は、ＡＤＣＣ活性によりシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の実施
形態において、組成物は、非フコシル化（すなわち、アフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａ
ｔｅｄ））抗シグレック−８抗体を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載され
ている非フコシル化抗シグレック−８抗体を含む組成物は、部分的にフコシル化された抗
シグレック−８抗体を含む組成物と比較した場合に、ＡＤＣＣ活性を増強する。ＡＤＣＣ
活性を評価するためのアッセイは、本技術分野において周知であり、本明細書に記載され
ている。例示的なアッセイにおいて、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞
および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例として、ナチュラルキラー（ＮＫ）
細胞、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞ならびに
ＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または好中球、好酸球およびマクロファージ等、細胞
表面にＦｃ受容体を有する白血球が挙げられる。標的細胞は、評価しようとする抗体が認
識できる抗原を細胞表面に発現するいずれかの細胞である。斯かる標的細胞の例は、細胞
表面にシグレック−８を発現する好酸球である。斯かる標的細胞の別の例は、細胞表面に
シグレック−８を発現する肥満細胞である。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試
薬で標識される。標識のための試薬の例として、クロム酸ナトリウム（Ｎａ_２ ^５１Ｃｒ
Ｏ_４）等、放射性物質が挙げられる。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４巻、１８１頁
（１９６８年）；Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、１７２巻、２２７頁（１９
９４年）；およびＪ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４巻、２９頁（１９９
５年）を参照されたい。

一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、肥満細胞媒
介性活性を阻害する。肥満細胞トリプターゼは、総肥満細胞数および活性化のバイオマー
カーとして使用されてきた。例えば、血液または尿中の総および活性トリプターゼならび
にヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミンおよび１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２を測
定して、肥満細胞の低下を評価することができる。例えば、例示的な肥満細胞活性アッセ
イに関して、米国特許出願公開第２０１１０２９３６３１号を参照されたい。肥満細胞に
おける抗シグレック−８抗体のＡＤＣＣおよびアポトーシス活性を評価するための例示的
なアッセイにおいて、ヒト肥満細胞は、公開されたプロトコールに従ってヒト組織から単
離される（Ｇｕｈｌら、Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、
２０１１年、７５巻：３８２〜３８４頁；Ｋｕｌｋａら、Ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００１年、（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．））、または例えば、Ｙｏｋｏｉら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００８年、１２１巻：４９９〜５０５頁に記載されている通
りにヒト造血幹細胞から分化される。精製された肥満細胞は、無菌９６ウェルＵ字底プレ
ートにおける完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁され、０．０００１ｎｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌ
の間に及ぶ濃度における抗シグレック−８抗体の存在または非存在下で３０分間インキュ
ベートされる。精製されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新鮮ＰＢＬありまたはな
しで、試料をさらに４〜１６時間インキュベートして、ＡＤＣＣを誘導する。肥満細胞を
検出するための蛍光コンジュゲート抗体（ＣＤ１１７およびＦｃεＲ１）ならびに生きて
いるおよび死んでいるまたは瀕死の細胞を識別するためのアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤ
を使用したフローサイトメトリーにより、アポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞死滅を
解析する。製造元の指示に従ってアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤ染色を行う。

一部の態様では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、線維性疾患（例
えば、肺線維症）の部位への好中球流入を阻害する。ブレオマイシンは、糖ペプチド抗腫
瘍抗生物質および抗ウイルス薬である。ブレオマイシンは、ＤＮＡ鎖切断の誘導によって
作用する。ブレオマイシンの最も重大な合併症は、肺線維症および肺機能障害である。肺
線維症の周知の動物モデルは、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）の肺へのブレオマ
イシンの単一の気管内または鼻腔内送達によって作製される。ブレオマイシンの投与は一
般に、炎症性細胞浸潤、コラーゲン蓄積および実質の硬化によって特徴付けられる、肺に
用量依存性損傷をもたらす。肺は一般に、ブレオマイシンの単回投与の７〜１４日後に試
験される。Mouratisら、Curr Opin Pulm Med.、２０１１年、１７巻（５号）：３５５
〜６１頁を参照されたい。例示的なアッセイにおいて、好酸球、肥満細胞および好塩基球
においてヒトシグレック−８を発現し、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するトランスジ
ェニック齧歯類が、目的の投与量レジメンで、本明細書に記載されている抗シグレック−
８抗体で処置される。処置された齧歯類から気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液を収集し、白血
球評価のために処理する。ＢＡＬ液を遠心分離し、細胞ペレットを適切な溶解バッファー
に再懸濁して、赤血球を溶解する。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したリン酸緩衝食塩水
（ＰＢＳ）を添加して溶解反応を停止し、その後、再度試料を遠心分離して、白血球ペレ
ットを得る。本明細書に記載されている血球計数器およびトリパンブルー排除方法を使用
して、白血球の数を計数する。

一部の態様では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、線維性疾患（例
えば、肺線維症）の部位におけるコラーゲン蓄積を予防する。例示的なアッセイにおいて
、好酸球、肥満細胞および好塩基球においてヒトシグレック−８を発現し、ブレオマイシ
ン誘発肺線維症を有するトランスジェニック齧歯類は、目的の投与量レジメンで、本明細
書に記載されている抗シグレック−８抗体で処置される。処置された齧歯類から気管支肺
胞洗浄（ＢＡＬ）液を収集し、コラーゲン評価のために処理する。ＢＡＬ液を遠心分離し
、Ｓｉｒｃｏｌ（商標）コラーゲンアッセイ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ Ａｓｓａｙｓ、英国）等、コラーゲンアッセイを使用して、コラーゲンに関して上
清を解析する。

抗体調製
本明細書に記載されている抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、抗
体を作製するための本技術分野において利用できる技法を使用して調製されるが、そのう
ち例示的な方法について次のセクションでより詳細に記載する。

１．抗体断片
本発明は、抗体断片を包含する。抗体断片は、酵素消化等の伝統的な手段または組換え
技法によって作製することができる。ある特定の状況下で、全抗体ではなく抗体断片を使
用する利点がある。ある特定の抗体断片の概説に関しては、Ｈｕｄｓｏｎら（２００３年
）Ｎａｔ． Ｍｅｄ．９巻：１２９〜１３４頁を参照されたい。

抗体断片の産生のための様々な技法が開発された。伝統的には、このような断片は、イ
ンタクト抗体のタンパク質分解的消化により得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２年）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照）。しかし、このような断片は現在
、組換え宿主細胞によって直接的に産生することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ
抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、それから分泌させることができ、よっ
て、大量のこのような断片の手軽な産生を可能にする。抗体断片は、上述の抗体ファージ
ライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片をＥ．ｃｏｌｉ
から直接的に回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）_２断片を形成することが
できる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０巻：１６３〜１６７頁（
１９９２年））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、組換え宿主細胞培養
物から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、ｉ
ｎ ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２断片が、米国特許第５，８６
９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らか
となろう。ある特定の実施形態において、抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。Ｗ
Ｏ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８
号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域を欠くインタクトな組み合わせ部位
を有する唯一の種である；よって、これらは、ｉｎ ｖｉｖｏ使用における非特異的結合
低下に適する可能性がある。ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築して、ｓｃＦｖのアミノまた
はカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合体を生じることがで
きる。Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（上掲）を
参照されたい。例えば抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載され
ている「線状抗体」となることもできる。斯かる線状抗体は、単一特異性または二重特異
性となり得る。

２．ヒト化抗体
本発明は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、本技
術分野で公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒト供給源から導入された１個または複
数のアミノ酸残基を有することができる。このような非ヒトアミノ酸残基は多くの場合、
「移入」残基と称され、これは典型的には、「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化
は基本的に、高頻度可変領域配列をヒト抗体の相当する配列の代わりに置換することによ
り、Ｗｉｎｔｅｒの方法に従って行うことができる（Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３３２巻：３２３〜３２７頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３９巻：１５３４〜１５３６頁）。したがって、斯かる「ヒト化」抗体は、キメラ抗
体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、インタクトなヒト可変ドメインに実質的
に満たないものが、非ヒト種由来の相当する配列によって置換されている。実際には、ヒ
ト化抗体は典型的には、いくつかの高頻度可変領域残基およびおそらくいくつかのＦＲ残
基が、齧歯類抗体における類似性部位由来の残基によって置換されたヒト抗体である。

ヒト化抗体の作製において使用するべき軽および重両方のヒト可変ドメインの選択は、
抗原性の低下に重要となり得る。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」方法
によると、齧歯類（例えば、マウス）抗体の可変ドメインの配列が、公知ヒト可変ドメイ
ン配列のライブラリー全体に対しスクリーニングされる。続いて、齧歯類の配列に最も近
縁のヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして受け入れられる（Ｓｉｍｓら（
１９９３年）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１巻：２２９６頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８
７年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１頁）。別の方法は、軽または重鎖の
特定のサブグループのあらゆるヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワ
ークを使用する。いくつかの異なるヒト化抗体に同じフレームワークを使用することがで
きる（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．
ＵＳＡ、８９巻：４２８５頁；Ｐｒｅｓｔａら（１９９３年）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、
１５１巻：２６２３頁）。

抗体が、抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しつつヒト化
されることがさらに一般に望ましい。この目標を達成するため、一方法に従って、ヒト化
抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列および様々な概念的ヒト
化産物の解析のプロセスにより調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利
用でき、当業者には馴染み深い。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コン
フォメーションを図解および表示するコンピュータプログラムを利用できる。このような
表示の点検は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性の高い役割の解析、
すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響を与える残基の解析を可
能にする。このようにして、標的抗原（複数可）に対する親和性増加等、所望の抗体特徴
が達成できるように、レシピエントおよび移入配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせる
ことができる。一般に、高頻度可変領域残基は、直接的におよび最も実質的に、抗原結合
への影響に関与する。

３．ヒト抗体
本発明のヒト抗シグレック−８抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーか
ら選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）と公知ヒト定常ドメイン配列（複
数可）を組み合わせることにより構築することができる。あるいは、本発明のヒトモノク
ローナル抗シグレック−８抗体は、ハイブリドーマ方法によって作製することができる。
ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエロ
ーマ細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３巻：３００１頁
（１９８４年）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１〜６
３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７年）；お
よびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：８６頁（１９９１年）によ
って記載されている。

免疫化により、内在性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを
産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能
である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）
遺伝子のホモ接合型欠失が、内在性抗体産生の完全阻害をもたらすことが記載されている
。斯かる生殖系列変異体マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移行は、
抗原負荷によるヒト抗体の産生をもたらすであろう。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、
Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９
３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５頁（１９９３年）；
Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９
３年）を参照されたい。

遺伝子シャッフリングを使用して、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体からヒト抗体を得る
こともでき、このヒト抗体は、出発非ヒト抗体と同様の親和性および特異性を有する。「
エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従い、本明細書に記載されてい
るファージディスプレイ技法によって得られる非ヒト抗体断片の重または軽鎖可変領域の
いずれかを、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換え、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦ
ｖまたはＦａｂキメラの集団を作り出す。抗原による選択は、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓ
ｃＦｖまたはＦａｂの単離をもたらし、ヒト鎖は、一次ファージディスプレイクローンに
おける相当する非ヒト鎖の除去により破壊された抗原結合部位を修復する、すなわち、エ
ピトープは、ヒト鎖パートナーの選択を支配する。残存非ヒト鎖を置き換えるために、こ
のプロセスを反復すると、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ ＷＯ９３／０６２１３、１９９
３年４月１日公開を参照）。ＣＤＲグラフトによる非ヒト抗体の伝統的なヒト化とは異な
り、この技法は、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も持たない完全なヒト抗体を提供す
る。

４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２種の異なる抗原に対し結合特異性を有するモノクロー
ナル抗体である。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗
体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうち一方は、シグレック−８に対
するものであり、他方は、他のいずれかの抗原に向けられている。ある特定の実施形態に
おいて、二重特異性抗体は、シグレック−８の２種の異なるエピトープに結合することが
できる。二重特異性抗体を使用して、シグレック−８を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を
局在化させることもできる。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（
ａｂ’）_２二重特異性抗体）として調製することができる。

二重特異性抗体を作製するための方法は、本技術分野で公知である。Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
およびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７頁（１９８３年）、ＷＯ９３／０
８８２９、１９９３年５月１３日公開およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．、
１０巻：３６５５頁（１９９１年）を参照されたい。二重特異性抗体作製のさらなる詳細
に関しては、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、
１２１巻：２１０頁（１９８６年）を参照されたい。二重特異性抗体は、架橋されたまた
は「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の
一方は、アビジンにカップリングすることができ、他方はビオチンにカップリングするこ
とができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製するこ
とができる。適した架橋剤は、本技術分野において周知であり、多数の架橋技法と共に米
国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。

５．シングルドメイン抗体
一部の実施形態において、本発明の抗体は、シングルドメイン抗体である。シングルド
メイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体もしくは部分または軽鎖可変ドメインの全
体もしくは部分を含む単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態において、シン
グルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、
Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６（Ｂ１）号を参照
）。一実施形態において、シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体また
は部分からなる。

６．抗体バリアント
一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体のアミノ酸配列修飾（複数可
）が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善する
ことが望ましくなり得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオ
チド配列に適切な変化を導入することにより、あるいはペプチド合成により調製すること
ができる。斯かる修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／また
はそれへの挿入および／またはその置換を含む。欠失、挿入および置換のいずれかの組合
せを為して、最終構築物に到達することができるが、この最終構築物が、所望の特徴を保
有することを条件とする。アミノ酸変更は、配列が作製されるときに対象抗体アミノ酸配
列に導入することができる。

変異誘発に好まれる位置である、抗体のある特定の残基または領域の同定に有用な方法
は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：
１０８１〜１０８５頁によって記載されている「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ば
れる。それによると、残基または標的残基の群が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈ
ｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ等、荷電残基）、中性または負電荷アミノ酸（例えば、アラニ
ンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗原とアミノ酸との相互作用に影響を
与える。置換に対する機能的感受性を実証するアミノ酸位置は続いて、置換部位にまたは
それに代えてさらに別のまたは他のバリアントを導入することにより精緻化される。よっ
て、アミノ酸配列変種を導入するための部位は既定であるが、変異の性質それ自体は既定
である必要はない。例えば、所定の部位における変異の性能を解析するために、ａｌａス
キャニングまたはランダム変異誘発が、標的コドンまたは領域において行われ、発現した
免疫グロブリンが、所望の活性に関してスクリーニングされる。

アミノ酸配列挿入は、１残基から１００またはそれを超える残基を含有するポリペプチ
ドの長さに及ぶアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数の
アミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する
抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体の血清半減期を増加させる酵
素またはポリペプチドへの抗体のＮまたはＣ末端の融合を含む。

一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切
断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖
のＣ末端において切断される。一部の実施形態において、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端
リシンを除去する。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／また
は軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖お
よび／または軽鎖のＮ末端において切断される。一部の実施形態において、モノクローナ
ル抗体のトランケート型は、組換え技法によって作製することができる。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加
または減少させるように変更される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結
合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への糖質部
分の付着を指す。トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ
−スレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除くいずれかのアミノ酸である）は、アスパラギ
ン側鎖への糖質部分の酵素による付着の認識配列である。よって、ポリペプチドにおける
これらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を生じる。Ｏ結
合型グリコシル化は、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを使用しても
よいが、最も一般的にはセリンまたはスレオニンであるヒドロキシアミノ酸への糖、Ｎ−
アセチルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトース
またはキシロースのうち１種の付着を指す。

抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、上述のトリペプチド配列（Ｎ結合
型グリコシル化部位のための）のうち１種または複数が作出または除去されるように、ア
ミノ酸配列を変更することにより簡便に達成される。変更は、本来の抗体の配列に対する
１個または複数のセリンまたはスレオニン残基の付加、欠失または置換によって為すこと
もできる（Ｏ結合型グリコシル化部位のため）。

抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、それに付着した糖質を変更することができる。例えば、
抗体のＦｃ領域に付着したフコースを欠如する、成熟糖質構造を有する抗体が、米国特許
出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ， Ｌ．）に記載されている。Ｕ
Ｓ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．， Ｌｔｄ
）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に付着した糖質において二分（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）
Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、ＷＯ２００３／０１１８７
８、Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔらおよび米国特許第６，６０２，６８４号、Ｕｍａｎａらに
おいて参照される。抗体のＦｃ領域に付着したオリゴ糖において少なくとも１個のガラク
トース残基を有する抗体は、ＷＯ１９９７／３００８７、Ｐａｔｅｌらに報告されている
。そのＦｃ領域に付着した変更された糖質を有する抗体に関して、ＷＯ１９９８／５８９
６４（Ｒａｊｕ， Ｓ．）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ， Ｓ．）も参照
されたい。修飾されたグリコシル化を有する抗原結合分子に関して、ＵＳ２００５／０１
２３５４６（Ｕｍａｎａら）も参照されたい。

ある特定の実施形態において、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域に付着した糖質構
造が、フコースを欠如するＦｃ領域を含む。斯かるバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機
能を有する。任意選択で、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１個または複数のアミ
ノ酸置換をそこにさらに含み、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３および／または３３４
位（残基のＥｕナンバリング）における置換が挙げられる。「脱フコシル化（ｄｅｆｕｃ
ｏｓｙｌａｔｅｄ）」または「フコース欠損」抗体に関する刊行物の例として：ＵＳ２０
０３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２
００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２
１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０
１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２０
０３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ
２００５／０５３７４２；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．３３６巻：１
２３９〜１２４９頁（２００４年）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．
Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産
生する細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒ
ｉｐｋａら、Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４
５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ａ１）号、Ｐｒｅ
ｓｔａ， Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）、Ａｄａｍｓら、特に、実施
例１１）と、アルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣ
ＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：
６１４頁（２００４年））等のノックアウト細胞株と、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサ
ミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩ
Ｉ）を過剰発現する細胞が挙げられる。

野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗体におけるフコースの量と比べて低下した
フコースを有する抗体が、本明細書において企図される。例えば、抗体は、ネイティブＣ
ＨＯ細胞（例えば、ネイティブＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞等、ネイティブグリ
コシル化パターンを産生するＣＨＯ細胞）によって産生された場合よりも少量のフコース
を有する。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗シグレック−８
抗体は、そのＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％また
は１％未満がフコースを含む抗体である。ある特定の実施形態において、本明細書におい
て提供される抗シグレック−８抗体は、そのＮ結合型グリカンのいずれもフコースを含ま
ない抗体である、すなわち、抗体は、完全にフコースを含有しない、またはフコースを持
たない、またはフコシル化されていない、またはアフコシル化されている。フコースの量
は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析に
よって測定される、Ａｓｎ２９７に付着したあらゆる糖構造の和と比べて（例えば、複合
的、ハイブリッドおよび高マンノース構造）、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの
平均量を計算することにより決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における
約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥｕナンバリング）；し
かし、Ａｓｎ２９７は、抗体における軽微な配列変種により、２９７位の約±３アミノ酸
上流または下流に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもできる。一部の実
施形態において、抗体の重鎖の少なくとも１または２つは、フコシル化されていない。

一実施形態において、抗体は、その血清半減期を改善するように変更される。抗体の血
清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されてい
る通り、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に取り込ませること
ができる。本明細書において、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子
のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期の増加の原因となる、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、Ｉｇ
Ｇ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９
０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号；米国特許第６，１６５，７４５号；米国特
許第５，６２４，８２１号；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第６，１６５，
７４５号；米国特許第５，８３４，５９７号）。

別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。このようなバリアントは、
異なる残基によって置き換えられた少なくとも１個のアミノ酸残基を抗体分子に有する。
置換変異誘発のための目的の部位は、高頻度可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図される。
保存的置換は、表１の見出し「好まれる置換」に示す。斯かる置換が、生物学的活性に望
ましい変化をもたらす場合、表１において「例示的な置換」と命名される、またはアミノ
酸クラスを参照しつつさらに後述する、より実質的な変化を導入し、その産物をスクリー
ニングすることができる。

抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリック
スコンフォメーションとしての、置換の区域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標
的部位における分子の電荷もしくは疎水性、またはｃ）側鎖の嵩の維持におけるその効果
が有意に異なる置換を選択することにより達成される。アミノ酸は、その側鎖の特性の類
似性に従ってグループ化することができる（Ａ． Ｌ． Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、７３〜７５頁、Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（１９７５年））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ
）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）無電荷極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ
（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）

あるいは、天然起源の残基は、共通側鎖特性に基づき群に分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスのうちあるクラスから別のクラスへのメンバーの交換
を必要とするであろう。斯かる置換された残基は、保存的置換部位または残存（非保存）
部位へと導入することもできる。

１種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）のうち１個また
は複数の高頻度可変領域残基の置換に関与する。一般に、さらなる開発のために選択され
るその結果得られたバリアント（複数可）は、これを作製する元になった親抗体と比べて
修飾された（例えば、改善された）生物学的特性を有するであろう。斯かる置換バリアン
トを作製するための簡便な仕方は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟化に関与
する。簡潔に説明すると、いくつかの高頻度可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異
させて、各部位にあらゆる可能なアミノ酸置換を作製する。このように作製された抗体は
、各粒子内にパッケージされたファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩ
Ｉ産物）の少なくとも一部への融合体として繊維状ファージ粒子からディスプレイされる
。次に、ファージディスプレイされたバリアントは、その生物学的活性（例えば、結合親
和性）に関してスクリーニングされる。修飾のための候補高頻度可変領域部位を同定する
ために、スキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に
有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。その代わりにまたはその上
、抗原−抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体および抗原の間の接触点を同定すること
が有益となり得る。斯かる接触残基および隣接する残基は、本明細書に詳述されている技
法を含む、本技術分野で公知の技法に従った置換の候補である。斯かるバリアントが作製
されたら、バリアントのパネルを、本明細書に記載されている技法を含む本技術分野で公
知の技法を使用したスクリーニングに付し、１種または複数種の関連アッセイにおいて優
れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。

抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、本技術分野で公知の種々の方
法によって調製される。このような方法として、天然供給源からの単離（天然起源のアミ
ノ酸配列バリアントの場合）、または先に調製されたバリアントもしくは非バリアントバ
ージョンの抗体のオリゴヌクレオチド媒介性（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異
誘発およびカセット変異誘発による調製が挙げられるがこれらに限定されない。

本発明の抗体のＦｃ領域に１個または複数のアミノ酸修飾を導入し、これにより、Ｆｃ
領域バリアントを作製することが望ましくなり得る。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシス
テインの位置を含む１個または複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含
むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ
領域）を含むことができる。一部の実施形態において、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇ
Ｇ４ Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、アミノ
酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔにおける通りのＥＵインデッ
クスに従ってナンバリングされる。

本明細書および本技術分野が教示するところに従って、一部の実施形態において、本発
明の抗体が、野生型カウンターパート抗体と比較して１個または複数の変更を、例えば、
Ｆｃ領域に含むことができることが企図される。それにもかかわらず、このような抗体は
、その野生型カウンターパートと比較した場合に、治療的有用性に必要とされる実質的に
同じ特徴を保持するであろう。例えば、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている通り、例
えば、変更された（すなわち、改善または縮小された）Ｃ１ｑ結合および／または補体依
存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすであろう、ある特定の変更をＦｃ領域に為すことがで
きることが考えられる。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、ＤｕｎｃａｎおよびＷｉ
ｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２巻：７３８〜４０頁（１９８８年）；米国特許第５，６
４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＷＯ９４／２９３５１も参照
されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）およびＷＯ２００４／０５６３１２（
Ｌｏｗｍａｎ）は、ＦｃＲに対し改善または縮小された結合を有する抗体バリアントにつ
いて記載する。これらの特許公報の内容は、特に参照により本明細書に組み入れられる。
Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁
（２００１年）も参照されたい。増加された半減期および胎児への母系ＩｇＧの移行の原
因となる、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ
ら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４巻：２４９頁（１９９４年））は、ＵＳ２００５／００１４９３４
Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。このような抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の
結合を改善する、１個または複数の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。変更されたＦ
ｃ領域アミノ酸配列および増加または減少されたＣ１ｑ結合能を有するポリペプチドバリ
アントは、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されてい
る。これらの特許公報の内容は、特に参照により本明細書に組み入れられる。Ｉｄｕｓｏ
ｇｉｅら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）も参
照されたい。

７．ベクター、宿主細胞および組換え方法
本発明の抗体の組換え産生のため、これをコードする核酸を単離し、さらなるクローニ
ング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。抗体をコード
するＤＮＡは、従来手順を使用して（例えば、抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に
特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易
に単離および配列決定される。多くのベクターを利用できる。ベクターの選択は、一部に
は、使用するべき宿主細胞に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（
一般には哺乳動物）起源のいずれかである。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇ
Ｅ定常領域を含むいかなるアイソタイプの定常領域をこの目的のために使用してもよく、
いかなるヒトまたは動物種から斯かる定常領域を得てもよいことが認められよう。

原核生物宿主細胞を使用した抗体の作製：
ａ）ベクター構築
本発明の抗体のポリペプチド構成成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準組換
え技法を使用して得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細
胞等、抗体産生細胞から単離および配列決定することができる。あるいは、ポリヌクレオ
チドは、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。得られ
た後に、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチド
を複製および発現することができる組換えベクターに挿入する。利用できる本技術分野で
公知の多くのベクターを本発明の目的のために使用することができる。適切なベクターの
選択は、主に、ベクターに挿入されるべき核酸のサイズおよびベクターで形質転換される
べき特定の宿主細胞に依存するであろう。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチ
ドの増幅もしくは発現またはその両方）およびこれが存在する特定の宿主細胞との適合性
に応じて様々な構成成分を含有する。ベクター構成成分として、複製起点、選択マーカー
遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸挿入物
および転写終結配列が一般に挙げられるがこれらに限定されない。

一般に、宿主細胞と適合性の種に由来するレプリコンおよび対照配列を含有するプラス
ミドベクターは、このような宿主に関連して使用される。ベクターは通常、複製部位と共
に、形質転換細胞における表現型選択をもたらすことができるマーキング配列を保有する
。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは典型的に、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ
３２２を使用して形質転換される。ｐＢＲ３２２は、アンピシリン（Ａｍｐ）およびテト
ラサイクリン（Ｔｅｔ）抵抗性をコードする遺伝子を含有し、これにより、形質転換細胞
を同定するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その派生体または他の微生物プ
ラスミドまたはバクテリオファージは、内在性タンパク質の発現のために微生物によって
使用され得るプロモーターを含有することもできるまたは含有するように修飾することも
できる。特定の抗体の発現のために使用されるｐＢＲ３２２派生体の例は、Ｃａｒｔｅｒ
ら、米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。

加えて、宿主微生物と適合性であるレプリコンおよび対照配列を含有するファージベク
ターは、このような宿主に関連した形質転換ベクターとして使用することができる。例え
ば、λＧＥＭ．ＴＭ．−１１等、バクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２等、
感受性宿主細胞の形質転換に使用することができる組換えベクターの作製において利用す
ることができる。

本発明の発現ベクターは、ポリペプチド構成成分のそれぞれをコードする２個またはそ
れを超えるプロモーター−シストロンペアを含むことができる。プロモーターは、その発
現をモジュレートするシストロンの上流（５’）に位置する非翻訳調節配列である。原核
生物プロモーターは、典型的には、２種のクラス、誘導性および構成的に分類される。誘
導性プロモーターは、培養条件の変化、例えば、栄養素の存在もしくは非存在または温度
変化に応答して、その制御下でシストロンの転写のレベル増加を開始するプロモーターで
ある。

種々の潜在的宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが周知である。制限酵素
消化により供給源ＤＮＡからプロモーターを除去し、本発明のベクターへと単離されたプ
ロモーター配列を挿入することにより、選択されたプロモーターは、軽または重鎖をコー
ドするシストロンＤＮＡに作動可能に連結することができる。ネイティブプロモーター配
列および多くの異種プロモーターの両方を使用して、標的遺伝子の増幅および／または発
現を方向付けることができる。一部の実施形態において、一般に、ネイティブ標的ポリペ
プチドプロモーターと比較した場合に、より優れた転写および発現した標的遺伝子のより
高い収量を可能にするため、異種プロモーターが利用される。

原核生物宿主による使用に適したプロモーターは、ＰｈｏＡプロモーター、β−ガラク
タマーゼ（ｇａｌａｃｔａｍａｓｅ）およびラクトースプロモーター系、トリプトファン
（ｔｒｐ）プロモーター系ならびにｔａｃまたはｔｒｃプロモーター等のハイブリッドプ
ロモーターを含む。しかし、細菌において機能的な他のプロモーター（他の公知細菌また
はファージプロモーター等）も同様に適する。これらのヌクレオチド配列は発表されてい
るため、当業者であれば、任意の必要とされる制限部位を供給するためのリンカーまたは
アダプターを使用して、操作可能にこれらを標的の軽および重鎖をコードするシストロン
にライゲーションすることができる（Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔら（１９８０年）Ｃｅｌｌ
２０巻：２６９頁）。

本発明の一態様において、組換えベクター内の各シストロンは、膜を横切っての発現し
たポリペプチドのトランスロケーションを方向付ける分泌シグナル配列構成成分を含む。
一般に、シグナル配列は、ベクターの構成成分となり得る、あるいはベクターに挿入され
る標的ポリペプチドＤＮＡの一部となり得る。本発明の目的のために選択されるシグナル
配列は、宿主細胞によって認識およびプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダ
ーゼによって切断される）配列となるべきである。異種ポリペプチドにとってネイティブ
なシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞のため、シグナル配列
は、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐまたは熱安定性エンテロトキシン
ＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡおよびＭＢＰから
なる群から例えば選択される原核生物シグナル配列によって置換される。本発明の一実施
形態において、発現系の両方のシストロンで使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナ
ル配列またはそのバリアントである。

別の態様において、本発明に係る免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において
起こることができ、したがって、各シストロン内に分泌シグナル配列の存在を必要としな
い。これに関して、免疫グロブリン軽および重鎖は、細胞質内で発現され、フォールドさ
れ、アセンブルされて、機能的免疫グロブリンを形成する。ある特定の宿主系統（例えば
、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔｒｘＢ−系統）は、ジスルフィド結合形成に好ましい細胞質条件を提
供し、これにより、発現したタンパク質サブユニットの適切なフォールディングおよびア
センブリを可能にする。ＰｒｏｂａおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｇｅｎｅ、１５９巻：２
０３頁（１９９５年）。

本発明の抗体は、分泌され適切にアセンブルされた本発明の抗体の収量を最大化するた
めに、発現されたポリペプチド構成成分の定量的な比をモジュレートすることができる発
現系を使用することにより産生することもできる。斯かるモジュレーションは、少なくと
も一部には、ポリペプチド構成成分の翻訳強度を同時にモジュレートすることにより達成
される。

翻訳強度をモジュレートするための一技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、米国特許第５，８４
０，５２３号に開示されている。これは、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリ
アントを利用する。所定のＴＩＲのため、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントをあ
る範囲の翻訳強度で作り出し、これにより、特異的な鎖の所望の発現レベルにこの因子を
調整するための簡便な手段を提供することができる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列
を変更し得るコドン変化をもたらす従来の変異誘発技法によって作製することができる。
ある特定の実施形態において、ヌクレオチド配列の変化は、サイレントである。ＴＩＲに
おける変更は、例えば、シグナル配列における変更と共に、シャインダルガーノ配列の数
またはスペーシングの変更を含むことができる。変異体シグナル配列を作製するための一
方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントであ
る）、コード配列の開始における「コドンバンク」の作製である。これは、各コドンの第
３のヌクレオチド位置を変化させることにより達成することができる；その上、ロイシン
、セリンおよびアルギニン等、一部のアミノ酸は、バンクの作製において複雑さを加える
ことができる複数の第１および第２の位置を有する。この変異誘発方法は、Ｙａｎｓｕｒ
ａら（１９９２年）ＭＥＴＨＯＤＳ： Ａ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．４巻：１５１〜１５８頁に詳細に記載されている。

一実施形態において、ベクターのセットが、その中のシストロン毎にある範囲のＴＩＲ
強度で作製される。この限定されたセットは、各鎖の発現レベルの比較と共に、様々なＴ
ＩＲ強度組合せ下における所望の抗体産物の収量をもたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏ
ｎｓら、米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されている通り、レポーター遺伝
子の発現レベルを定量することにより決定することができる。翻訳強度比較に基づき、所
望の個々のＴＩＲが選択されて、本発明の発現ベクター構築物において組み合わされる。

本発明の抗体の発現に適した原核生物宿主細胞は、グラム陰性またはグラム陽性生物等
、古細菌および真正細菌を含む。有用な細菌の例として、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例え
ば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏ
ｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａ
ｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、
ＶｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａまたはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態におい
て、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本発明の
ための宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ系統の例として、系統Ｗ３１１０（Ｂａｃｈ
ｍａｎｎ、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２巻（Ｗ
ａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９８７年）、１１９０〜１２１９頁；ＡＴＣＣ寄託番号２７，３
２５）および遺伝子型Ｗ３１１０ ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３ ｌａｃ Ｉｑ
ｌａｃＬ８ ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ−ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１ ｋａｎＲを有する系統
３３Ｄ３を含むその派生体（米国特許第５，６３９，６３５号）が挙げられる。Ｅ．ｃｏ
ｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉλ １７７６
（ＡＴＣＣ３１，５３７）およびＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ３１，６０８）等
、他の系統およびその派生体も適している。これらの例は、限定的ではなく説明的である
。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のうちいずれかの派生体を構築するための方法
は、本技術分野で公知であり、例えば、Ｂａｓｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、８巻：３０９〜
３１４頁（１９９０年）に記載されている。細菌の細胞におけるレプリコンの複製能（ｒ
ｅｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ）を考慮に入れて適切な細菌を選択することが一般に必要であ
る。ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７またはｐＫＮ４１０等、周知のプラ
スミドが、レプリコンの供給に使用される場合、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉ
ａまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種は、宿主として適切に使用することができる。典型的に
は、宿主細胞は、最小量のタンパク質分解酵素を分泌するべきであり、望ましくは、追加
的なプロテアーゼ阻害剤を細胞培養において取り込むことができる。

ｂ）抗体産生
宿主細胞は、上述の発現ベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質
転換体を選択するため、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するための、必要に
応じて修飾された従来の栄養培地において培養される。

形質転換は、ＤＮＡが、染色体外エレメントとしてまたは染色体組み込み体により複製
可能となるような、原核生物宿主へのＤＮＡの導入を意味する。使用する宿主細胞に応じ
て、形質転換は、斯かる細胞に適切な標準技法を使用して行われる。塩化カルシウムを用
いたカルシウム処理は、実質的な細胞壁障壁を含有する細菌細胞のために一般に使用され
る。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用さ
れるさらに別の技法は、エレクトロポレーションである。

本発明のポリペプチドの産生に使用される原核細胞は、本技術分野で公知の、選択され
た宿主細胞の培養に適した培地において育成される。適した培地の例として、ルリアブロ
ス（ＬＢ）に必要な栄養素補充物質を加えたものが挙げられる。一部の実施形態において
、培地は、発現ベクターの構築に基づき選ばれる選択用薬剤も含有して、この発現ベクタ
ーを含有する原核細胞の成長を選択的に可能にする。例えば、アンピシリン抵抗性遺伝子
を発現する細胞の成長のために、培地にアンピシリンが添加される。

炭素、窒素および無機リン酸塩源に加えて任意の必要な補充物質が、単独でまたは複合
的窒素源等の別の補充物質もしくは培地との混合物として導入されて、適切な濃度で含ま
れていてもよい。任意選択で、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チ
オグリコレート、ジチオエリトリトールおよびジチオスレイトールからなる群より選択さ
れる１種または複数種の還元剤を含有することができる。

原核生物宿主細胞は、適した温度で培養される。ある特定の実施形態において、Ｅ．ｃ
ｏｌｉの成長のため、成長温度は、約２０℃から約３９℃、約２５℃から約３７℃の範囲
であるか、または約３０℃である。培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて、約５〜約９に
及ぶいずれかのｐＨとなり得る。ある特定の実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉのため、ｐ
Ｈは、約６．８〜約７．４または約７．０である。

誘導性プロモーターが、本発明の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質発
現は、プロモーターの活性化に適した条件下で誘導される。本発明の一態様において、Ｐ
ｈｏＡプロモーターが、ポリペプチドの転写を制御するために使用される。したがって、
形質転換された宿主細胞は、誘導のためのリン酸塩制限培地において培養される。ある特
定の実施形態において、リン酸塩制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（例えば、Ｓ
ｉｍｍｏｎｓら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００２年）２６３巻：１
３３〜１４７頁を参照）。本技術分野で公知の通り、用いられているベクター構築物に従
って、種々の他の誘導因子を使用することができる。

一実施形態において、本発明の発現したポリペプチドは、宿主細胞の周辺質に分泌され
、そこから回収される。タンパク質回収は、典型的には、一般に、浸透圧ショック、超音
波処理または溶解等の手段による微生物の崩壊に関与する。細胞が崩壊されたら、細胞デ
ブリまたは細胞全体は、遠心分離または濾過によって除去することができる。タンパク質
は、例えば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。ある
いは、タンパク質は、培養培地へと輸送され、そこに単離されてもよい。細胞をこの培養
物から除去し、産生されたタンパク質のさらなる精製のために培養上清を濾過および濃縮
することができる。発現したポリペプチドは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧ
Ｅ）およびウエスタンブロットアッセイ等、一般的に公知の方法を使用してさらに単離お
よび同定することができる。

本発明の一態様において、抗体産生は、発酵プロセスにより大量に行われる。様々な大
規模フェドバッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）発酵手順が、組換えタンパク質の産生のために
利用できる。大規模発酵は、少なくとも１０００リットルの容量、ある特定の実施形態に
おいて、約１，０００〜１００，０００リットルの容量を有する。このような発酵槽は、
酸素および栄養素、特にグルコースを分布させるための撹拌機羽根車を使用する。小規模
発酵は一般に、およそ１００リットル以下の容積測定的容量の発酵槽における発酵を指し
、約１リットル〜約１００リットルに及び得る。

発酵プロセスにおいて、タンパク質発現の誘導は、典型的には、細胞が適した条件下で
所望の密度、例えば、約１８０〜２２０のＯＤ５５０まで成長した後に開始され、このス
テージにおいて、細胞は定常期初期にある。本技術分野で公知かつ上述の通り、用いられ
ているベクター構築物に従って、種々の誘導因子を使用することができる。誘導に先立ち
より短い期間、細胞を育成することができる。細胞は通常、約１２〜５０時間誘導される
が、より長いまたはより短い誘導時間を使用してもよい。

本発明のポリペプチドの産生収量および質を改善するために、様々な発酵条件を修飾す
ることができる。例えば、分泌された抗体ポリペプチドの適切なアセンブリおよびフォー
ルディングを改善するために、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、Ｄｓ
ｂＤおよび／またはＤｓｂＧ）またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロ
リルｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−イソメラーゼ）等、シャペロンタンパク質を過剰発現する追加
的なベクターを使用して、宿主原核細胞を同時形質転換することができる。シャペロンタ
ンパク質は、細菌宿主細胞において産生された異種タンパク質の適切なフォールディング
および溶解度を容易にすることが実証された。Ｃｈｅｎら（１９９９年）Ｊ． Ｂｉｏｌ
． Ｃｈｅｍ．２７４巻：１９６０１〜１９６０５頁；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第
６，０８３，７１５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第６，０２７，８８８号；Ｂｏｔ
ｈｍａｎｎおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００年）Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２７
５巻：１７１００〜１７１０５頁；ＲａｍｍおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００年）Ｊ
． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２７５巻：１７１０６〜１７１１３頁；Ａｒｉｅら（２００
１年）Ｍｏｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９巻：１９９〜２１０頁。

発現した異種タンパク質（特に、タンパク質分解に感受性のタンパク質）のタンパク質
分解を最小化するために、タンパク質分解酵素を欠損したある特定の宿主系統を本発明の
ために使用することができる。例えば、宿主細胞系統を修飾して、プロテアーゼＩＩＩ、
ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プ
ロテアーゼＶＩおよびこれらの組合せ等、公知の細菌プロテアーゼをコードする遺伝子に
遺伝的変異（複数可）を生じることができる。いくつかのＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損
系統を利用することができ、例えば、Ｊｏｌｙら（１９９８年）（上掲）；Ｇｅｏｒｇｉ
ｏｕら、米国特許第５，２６４，３６５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第５，５０８
，１９２号；Ｈａｒａら、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、２巻
：６３〜７２頁（１９９６年）に記載されている。

一実施形態において、タンパク質分解酵素を欠損し、１種または複数種のシャペロンタ
ンパク質を過剰発現するプラスミドにより形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ系統が、本発明の
発現系における宿主細胞として使用される。

ｃ）抗体精製
一実施形態において、本明細書における産生された抗体タンパク質は、さらに精製され
て、さらなるアッセイおよび使用のために実質的に均一な調製物を得る。本技術分野で公
知の標準タンパク質精製方法を用いることができる。次の手順は、適した精製手順に例示
的である：免疫親和性またはイオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰ
ＬＣ、ＤＥＡＥ等、シリカまたはカチオン交換樹脂におけるクロマトグラフィー、クロマ
トフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿および例えば、Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ Ｇ−７５を使用したゲル濾過。

一態様において、固相に固定化されたプロテインＡが、本発明の抗体産物の免疫親和性
精製のために使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高親和性で結合する、Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｓ由来の４１ｋＤの細胞壁タンパク質である。Ｌ
ｉｎｄｍａｒｋら（１９８３年）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ．６２巻：１〜１３
頁。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラム、また
はポア制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ）ガラスカラムまたはケイ酸カラムであり
得る。一部の適用において、カラムは、グリセロール等の試薬でコーティングされて、夾
雑物の非特異的接着性を予防する可能性がある。

精製の第１のステップとして、上述の細胞培養物に由来する調製物をプロテインＡ固定
化固相にアプライして、プロテインＡへの目的の抗体の特異的結合を可能にすることがで
きる。続いて、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した夾雑物を除去する。最後に、
溶出により固相から目的の抗体を回収する。

真核生物宿主細胞を使用した抗体の作製：
真核生物宿主細胞における使用のためのベクターは一般に、次の非限定的構成成分のう
ち１種または複数を含む：シグナル配列、複製起点、１種または複数種のマーカー遺伝子
、エンハンサーエレメント、プロモーターおよび転写終結配列。

ａ）シグナル配列構成成分
真核生物宿主細胞における使用のためのベクターは、目的の成熟タンパク質またはポリ
ペプチドのＮ末端に特異的な切断部位を有する、シグナル配列または他のポリペプチドを
含有することもできる。選択された異種シグナル配列は、宿主細胞により認識およびプロ
セシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）配列となり得る
。哺乳動物細胞発現において、哺乳動物シグナル配列およびウイルス分泌リーダー、例え
ば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用できる。斯かる前駆体領域のためのＤＮＡは、抗体
をコードするＤＮＡに読み取り枠でライゲーションされる。

ｂ）複製起点
一般に、複製起点構成成分は、哺乳動物発現ベクターには必要とされない。例えば、Ｓ
Ｖ４０起点は、典型的には、初期プロモーターを含有するという理由でのみ使用すること
ができる。

ｃ）選択遺伝子構成成分
発現およびクローニングベクターは、選択可能マーカーとも命名される選択遺伝子を含
有することができる。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば
、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートもしくはテトラサイクリンに対する抵
抗性を付与する、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠乏を補完する、または（ｃ）複合培
地から得ることができない重大な栄養素を供給するタンパク質をコードする。

選択スキームの一例は、宿主細胞の成長を停止させるための薬物を利用する。異種遺伝
子による形質転換が成功した細胞は、薬物抵抗性を付与するタンパク質を産生し、これに
より、この選択レジメンを生き残る。斯かる優性選択の例は、薬物、ネオマイシン、ミコ
フェノール酸およびハイグロマイシンを使用する。

哺乳動物細胞に適した選択可能マーカーの別の例は、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メ
タロチオネイン−Ｉおよび−ＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナ
ーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可
能にするマーカーである。

例えば、一部の実施形態において、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は先ず、
ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキセート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地
において全形質転換体を培養することにより同定される。一部の実施形態において、野生
型ＤＨＦＲが用いられる場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を欠損したチャイニーズ
ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９０９６）。

あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質およびアミノグリコシド３’−ホスホトラ
ンスフェラーゼ（ＡＰＨ）等の別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換
または同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、
アミノグリコシド系抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８等、
この選択可能マーカーのための選択用薬剤を含有する培地における細胞成長により選択す
ることができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞は、グルタ
ミンシンテターゼ（ＧＳ）を欠損した細胞株を含む、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１Ｓ
Ｖまたは派生体を含むことができる。哺乳動物細胞のための選択可能マーカーとしてのＧ
Ｓの使用のための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１
，６９３号に記載されている。

ｄ）プロモーター構成成分
発現およびクローニングベクターは通常、宿主生物によって認識され、目的のポリペプ
チド（例えば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含有する
。プロモーター配列は、真核生物で公知である。例えば、実際ではあらゆる真核生物遺伝
子は、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を
有する。多くの遺伝子の転写開始から７０〜８０塩基上流に見出された別の配列は、ＣＮ
ＣＡＡＴ領域であり、Ｎは、いかなるヌクレオチドでもよい。大部分の真核生物遺伝子の
３’端には、コード配列の３’端へのポリＡテイルの付加のためのシグナルとなり得るＡ
ＡＴＡＡＡ配列がある。ある特定の実施形態において、これらの配列のいずれかまたは全
てを、真核生物発現ベクターに適切に挿入することができる。

哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘
ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫
ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびサルウイル
ス４０（ＳＶ４０）等、ウイルスのゲノムから、あるいは異種哺乳動物プロモーター、例
えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモ
ーターから得られるプロモーターによって制御される、ただし、斯かるプロモーターは、
宿主細胞系と適合性であること。

ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有
するＳＶ４０制限断片として簡便に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモ
ーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として簡便に得られる。ベクターとしてウシパピ
ローマウイルスを使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現するための系は、米国特許
第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許第４，６０１，９
７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの
制御下でのマウス細胞におけるヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現について記載す
るＲｅｙｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ２９７巻：５９８〜６０１頁（１９８２年）も参照され
たい。あるいは、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列をプロモーターとして使用することが
できる。

ｅ）エンハンサーエレメント構成成分
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、ベクター
にエンハンサー配列を挿入することにより増加する。多くのエンハンサー配列が、哺乳動
物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテインおよびインスリ
ン）から現在公知である。しかし典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使
用されるであろう。例として、複製起点の後方（ｌａｔｅ ｓｉｄｅ）（ｂｐ１００〜２
７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサ
ー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後方のポリ
オーマエンハンサーおよびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモー
ターの活性化のためのエンハンサーエレメントについて記載するＹａｎｉｖ、Ｎａｔｕｒ
ｅ ２９７巻：１７〜１８頁（１９８２年）も参照されたい。エンハンサーは、抗体ポリ
ペプチドコード配列に対し５’位または３’位においてベクターにスプライスすることが
できるが、一般に、プロモーターから５’の部位に位置する。

ｆ）転写終結構成成分
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安
定化に必要な配列を含有することもできる。斯かる配列は、真核生物またはウイルスＤＮ
ＡまたはｃＤＮＡの５’および場合により３’非翻訳領域から一般的に利用できる。この
ような領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分におけるポリアデニル化断片とし
て転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。有用な転写終結構成成分の１種は、ウ
シ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびそこに開示され
ている発現ベクターを参照されたい。

ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書におけるベクターにおけるＤＮＡのクローニングまたは発現に適した宿主細胞
は、脊椎動物宿主細胞を含む、本明細書に記載されている高等真核生物細胞を含む。培養
（組織培養）における脊椎動物細胞の繁殖は、ルーチン手順となった。有用な哺乳動物宿
主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系列（ＣＯＳ−７、Ａ
ＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎臓系列（懸濁培養における育成のためにサブク
ローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ． Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ
．３６巻：５９頁（１９７７年））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ Ｃ
ＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら
、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７巻：４２１６頁（１９
８０年））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ．
２３巻：２４３〜２５１頁（１９８０年））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ
７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７
）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、
ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット（ｂｕｆｆａｌｏ ｒａｔ）肝臓細胞（
ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣ
Ｌ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ
０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ
Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．３８３巻：４４〜６８頁（１９８２年））；ＭＲＣ５
細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または派生体およびヒトヘパト
ーマ系列（Ｈｅｐ Ｇ２）である。

宿主細胞は、抗体産生のために上述の発現またはクローニングベクターにより形質転換
され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望の配列をコ
ードする遺伝子を増幅するために、必要に応じて修飾された従来の栄養培地において培養
される。

ｈ）宿主細胞の培養
本発明の抗体の産生に使用される宿主細胞は、種々の培地において培養することができ
る。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭ
Ｉ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇ
ｍａ）等、市販の培地は、宿主細胞の培養に適する。加えて、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ． Ｅ
ｎｚ．５８巻：４４頁（１９７９年）、Ｂａｒｎｅｓら、Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１０２巻：２５５頁（１９８０年）、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７
，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号；もしくは同第５，
１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または米国再発行特
許（Ｕ．Ｓ． Ｐａｔ． Ｒｅ．）３０，９８５に記載されている培地のいずれかを宿主
細胞のための培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれも、ホルモン
および／または他の増殖因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮増殖因子等）、
塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸塩等）、バッファー（ＨＥ
ＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジン等）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹ
ＣＩＮ（商標）薬物等）、微量元素（マイクロモル濃度範囲内の最終濃度で通常存在する
無機化合物として定義）ならびにグルコースまたは等価なエネルギー源を必要に応じて補
充することができる。他のいずれかの補充物質が、当業者に公知の適切な濃度で含まれて
いてもよい。温度、ｐＨその他等、培養条件は、発現のために選択された宿主細胞により
以前に使用された条件であり、当業者には明らかとなろう。

ｉ）抗体の精製
組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内に産生することができる、あるいは培地に
直接的に分泌することができる。抗体が、細胞内に産生される場合、第１のステップとし
て、宿主細胞または溶解された断片のあらゆる粒子状デブリは、例えば、遠心分離または
限外濾過により除去することができる。抗体が、培地に分泌される場合、斯かる発現系か
ら得た上清は、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌ
ｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して先ず濃縮することができる。
ＰＭＳＦ等、プロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するために前述ステップのい
ずれかに含まれていてよく、抗生物質が、偶発的な夾雑物の成長を予防するために含まれ
ていてよい。

細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ
ー、ゲル電気泳動、透析および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ
、親和性クロマトグラフィーが、簡便な技法である。親和性リガンドとしてのプロテイン
Ａの適合性は、抗体に存在するいずれかの免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソ
タイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖に基づく抗
体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ６２巻：１〜１３頁（１９８３年））。プロテインＧは、全マウスアイソタイプお
よびヒトγ３に推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．５巻：１５６７ １５７５頁（
１９８６年））。親和性リガンドが付着するマトリックスは、アガロースであってよいが
、他のマトリックスも利用できる。ポア制御ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベン
ゼン等、機械的に安定的なマトリックスは、アガロースにより達成され得るものよりも速
い流速およびより短い処理時間を可能にする。抗体が、ＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａ
ｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ
、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。イオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、
逆相ＨＰＬＣ、シリカにおけるクロマトグラフィー、ヘパリンにおけるクロマトグラフィ
ー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）におけるＳＥＰＨ
ＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥお
よび硫酸アンモニウム沈殿等、タンパク質精製のための他の技法も、回収しようとする抗
体に応じて利用できる。

任意の予備的精製ステップ（複数可）の後に、目的の抗体および夾雑物を含む混合物は
、例えば、低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍ塩）で行われる約２．５〜４．５の間の
ｐＨの溶出バッファーを使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにより、さら
なる精製に付すことができる。

一般に、研究、検査および臨床用途における使用のための抗体を調製するための様々な
方法論は、本技術分野において十分に確立されており、上述の方法論と一貫しており、お
よび／または当業者によって特定の目的の抗体に適切であると考慮される。

非フコシル化抗体の産生
フコシル化の程度が低下した抗体を調製するための方法が本明細書に提供されている。
例えば、本明細書において企図される方法として、タンパク質フコシル化が欠損した細胞
株の使用（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、アルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺
伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩを過
剰発現する細胞およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩをさらに過剰発現する細胞等）およ
び抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコースアナログ（複数可）の添加が挙
げられるがこれらに限定されない。Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３
／０１５７１０８（Ａ１）号、Ｐｒｅｓｔａ， Ｌ；ＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１
）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４
頁（２００４年）；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコ
ース含量を低下させるための追加的な技法は、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９
７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術を含む。抗体のフコース含量を低下させるた
めの追加的な技法は、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１種または複数種の
グリコシダーゼ阻害剤の添加も含む。グリコシダーゼ阻害剤は、α−グルコシダーゼＩ、
α−グルコシダーゼＩＩおよびα−マンノシダーゼＩを含む。一部の実施形態において、
グリコシダーゼ阻害剤は、α−マンノシダーゼＩの阻害剤である（例えば、キフネンシン
）。

本明細書において、「コアのフコシル化」は、Ｎ結合型グリカンの還元末端におけるＮ
−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を
指す。斯かる方法によって産生された抗体およびその組成物も提供される。

一部の実施形態において、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合した複合Ｎ−グリコシド
結合型糖鎖のフコシル化が低下する。本明細書において、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖
鎖」は、典型的に、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号に従う）に結合されるが、複
合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖は、他のアスパラギン残基に連結されてもよい。「複合Ｎ−
グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端にマンノースのみが取り込まれた高マ
ンノース型の糖鎖を除外するが、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−ア
セチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１個または複数の分枝
を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、シアル酸、二分Ｎ−アセチルグルコサ
ミンその他を任意選択で有する複合型；または２）コア構造の非還元末端側が、高マンノ
ースＮ−グリコシド結合型糖鎖および複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖の両方の分枝を有す
るハイブリッド型を含む。

一部の実施形態において、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末
端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称さ
れる）の０、１個または複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、シ
アル酸、二分Ｎ−アセチルグルコサミンその他等の構造を任意選択でさらに有する複合型
を含む。

本方法によると、典型的には、ごく微量のフコースが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖
（複数可）に取り込まれる。例えば、様々な実施形態において、組成物中、抗体の約６０
％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約
１０％未満、約５％未満または約１％未満が、フコースによりコアがフコシル化されてい
る。一部の実施形態において、組成物中、抗体の実質的に全てが、フコースによりコアが
フコシル化されていない（すなわち、約０．５％未満が、フコシル化されている）。一部
の実施形態において、組成物中、抗体の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％
超、約８０％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９
５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超または約９９％超が、フコシル化されてい
ない。

一部の実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコー
ス残基を含有しない（すなわち、約０．５％未満が、フコース残基を含有する）抗体が本
明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体重鎖の少なくとも１または２
つがフコシル化されていない抗体が本明細書において提供される。

上述の通り、種々の哺乳動物宿主−発現ベクター系を利用して、抗体を発現させること
ができる。一部の実施形態において、培養培地は、フコースを補充されない。一部の実施
形態において、有効量のフコースアナログが、培養培地に添加される。この文脈において
、「有効量」は、抗体の複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖へのフコース取り込みを、少なく
とも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少
なくとも約５０％減少させるのに十分なアナログの量を指す。一部の実施形態において、
本方法によって産生された抗体は、フコースアナログの非存在下で培養された宿主細胞か
ら産生された抗体と比較した場合に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なく
とも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％のコアがフコシル化されて
いないタンパク質（例えば、コアのフコシル化が欠如している）を含む。

フコースが糖鎖の還元端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されていない糖鎖、
対、フコースが糖鎖の還元端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されている糖鎖の
含量（例えば、比）は、例えば、実施例に記載されている通りに決定することができる。
他の方法は、ヒドラジン分解または酵素消化（例えば、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｘｐ
ｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３巻：Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｓｔｕｄ
ｙｉｎｇ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｕｇａｒ Ｃｈａｉｎ（Ｊａｐａｎ Ｓｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ Ｐｒｅｓｓ）、Ｒｅｉｋｏ Ｔａｋａｈａｓｈｉ編
集（１９８９年）を参照）、放出された糖鎖の蛍光標識または放射性同位元素標識と、続
くクロマトグラフィーによる標識された糖鎖の分離を含む。また、放出された糖鎖の組成
は、ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ方法によって鎖を解析することにより決定することができる（例
えば、Ｊ． Ｌｉｑ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．６巻：１５５７頁（１９８３年）を参照）
（全般的には、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照）。

Ｂ．本発明の組成物
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、シグ
レック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストのいずれかを含
む組成物（例えば、医薬組成物）も本明細書に提供される。一部の態様において、本明細
書に記載されている抗シグレック−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、
Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型
炭水化物鎖の約５０％未満が、フコース残基を含有する組成物が本明細書において提供さ
れる。一部の実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコ
シド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の約４５％、約４０％
、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％または約１５％未満が、フコース残基を含有
する。一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体を含む組成
物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物
鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有し
ない組成物が本明細書において提供される。

任意選択の薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤と、所望の程度の純度を
有する活性成分とを混合することにより、貯蔵のための治療用製剤が調製される（Ｒｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍ
ａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｋｌｉｎｓ，
Ｐｕｂ．、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．２０００年）。許容さ
れるキャリア、賦形剤または安定剤は、用いられている投与量および濃度ではレシピエン
トに対し無毒性であり、バッファー、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、二亜硫
酸ナトリウム含む抗酸化剤；保存料、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）、安定剤
、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ＥＤＴＡ等のキレート剤および／または
非イオン性界面活性剤を含む。

特に、安定性がｐＨ依存性である場合、バッファーを使用して、治療上の有効性を最適
化する範囲にｐＨを制御することができる。バッファーは、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭに
及ぶ濃度で存在することができる。本発明による使用に適した緩衝剤は、有機および無機
酸ならびにこれらの塩の両方を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石
酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。その上、バッフ
ァーは、ヒスチジンおよびＴｒｉｓ等のトリメチルアミン塩で構成され得る。

保存料を添加して微生物の成長を予防することができ、これは典型的には、約０．２％
〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲内で存在する。本発明による使用に適した保存料は、オクタ
デシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザル
コニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、
フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアル
キルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノールお
よびｍ−クレゾールを含む。

「安定剤」として公知の場合もある等張化剤は、組成物における液体の張度を調整また
は維持するために存在することができる。タンパク質および抗体等、大型の荷電生体分子
と共に使用される場合、これは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、これにより、分子
間および分子内相互作用の可能性を減らすことができるため、多くの場合「安定剤」と命
名される。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮に入れつつ、約０．１％〜約２５重量％
の間または約１〜約５重量％の間のいずれかの量で存在することができる。一部の実施形
態において、等張化剤は、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、
ソルビトールおよびマンニトール等、多価糖アルコール、三価またはより高次の糖アルコ
ールを含む。

追加的な賦形剤は、次のうち１種または複数として機能し得る薬剤を含む：（１）増量
剤、（２）溶解促進剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｅｒ）、（３）安定剤およ
び（４）変性または容器壁への接着を予防する薬剤。斯かる賦形剤は、次のものを含む：
多価糖アルコール（上に列挙）；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒス
チジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミ
ン酸、スレオニン等、アミノ酸；スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース
、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイ
ニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイノシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ
）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトー
ル）、ポリエチレングリコール等、有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チ
オクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール
およびチオ硫酸ナトリウム等、含硫還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、
ゼラチンまたは他の免疫グロブリン等、低分子量タンパク質；ポリビニルピロリドン等、
親水性ポリマー；単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）
；二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノース等、三糖；なら
びにデキストリンまたはデキストラン等、多糖。

非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても公知）は、治療剤の可溶化を助
けると共に、撹拌誘導性凝集から治療タンパク質を保護するために存在することができ、
これは、活性治療タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤をせん断表面
応力に曝露させることもできる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１
．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲内で存在する。
一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤は、約０．００１％〜約０．１％ｗ／ｖ
または約０．０１％〜約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％〜約０．０２５％ｗ／ｖの範
囲内で存在する。

適した非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０等）
、ポロクサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（１８４、１８８等）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登
録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエ
ーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０等）、ラウロマ
クロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水素付加ヒマシ
油１０、５０および６０、グリセロールモノステアレート、スクロース脂肪酸エステル、
メチルセルロース（ｃｅｌｌｕｏｓｅ）ならびにカルボキシメチルセルロースを含む。使
用することができるアニオン性洗剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオク
チルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムを含む。カチオン性洗剤は、塩化
ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。

製剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するためには、無菌でなければならない。製剤は、
滅菌濾過膜を通した濾過により滅菌することができる。本明細書における治療用組成物は
一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針
により穿刺可能な共栓を有するバイアルに入れられる。

投与の経路は、適した方式での長期間に及ぶ単一または複数のボーラスまたは注入、例
えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射ま
たは注入、局所的投与、吸入または徐放もしくは延長放出手段による等、公知かつ受け入
れられた方法に従う。

本明細書における製剤は、処置されている特定の適応症の必要に応じて、１種より多く
の活性化合物、好ましくは、互いに有害な影響を与えない相補的な活性を有する化合物を
含有することもできる。その代わりにまたはそれに加えて、組成物は、細胞傷害性薬剤、
サイトカインまたは成長阻害薬剤を含むことができる。斯かる分子は、意図される目的に
有効な量で、組み合わせて適切に存在する。

ＩＩＩ．製造品またはキット
別の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシ
グレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストを含む製造品
またはキットが提供される。製造品またはキットは、本発明の方法における抗体またはア
ゴニストの使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態で
は、製造品またはキットは、個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）および
／または前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を処置または予防するための方法で
あって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗シグレック−８抗体またはアゴニスト
の有効量を投与するステップを含む方法における、ヒトシグレック−８に結合する抗シグ
レック−８抗体またはアゴニストの使用のための指示を含む。

ある特定の実施形態では、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニ
ストを含む医薬と、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、脾臓線維症および眼線
維症からなる群から選択される線維性疾患を処置または予防するための、該医薬の投与を
必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施
形態では、肺線維症は、特発性肺線維症である。一部の実施形態では、肺線維症は、慢性
閉塞性肺疾患に関連する。ある特定の実施形態では、製造品は、ヒトシグレック−８に結
合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、機械的誘発線維症、インプラント誘発線維症
、放射線誘発線維症、薬物誘発線維症およびウイルス誘発線維症からなる群から選択され
る線維性疾患を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医
薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、機械的誘発線維症
は、人工呼吸器誘発肺線維症である。一部の実施形態では、薬物誘発線維症は、ブレオマ
イシン誘発肺線維症である。ある特定の実施形態では、製造品は、ヒトシグレック−８に
結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、嚢胞性線維症、がん関連線維症、粥状動脈
硬化、骨髄の線維症、強皮症、縦隔線維症および後腹膜腔線維症からなる群から選択され
る線維性疾患を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医
薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、添付文書は、処置
が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比
べて線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）を有する個体における１種または複数種の症
状（本明細書に記載されている１種または複数種の症状等）を低下させることにおいて有
効であることをさらに示す。

ある特定の実施形態では、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニ
ストを含む医薬と、ブレオマイシン誘発肺臓炎、慢性過敏性肺臓炎、真性多血症、本態性
血小板血症、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、血管新生緑内障、未熟児網膜症および増殖
性硝子体網膜症からなる群から選択される前線維性疾患を処置または予防するための、該
医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む
。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体または
アゴニストの投与後に、ベースラインと比べて前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎
）を有する個体における１種または複数種の症状（本明細書に記載されている１種または
複数種の症状等）を低下させることにおいて有効であることをさらに示す。ある特定の実
施形態では、個体は、ヒトである。

製造品またはキットは、容器をさらに含むことができる。適した容器は、例えば、ボト
ル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（シングルまたはデュ
アルチャンバーシリンジ等）および試験管を含む。容器は、ガラスまたはプラスチック等
、種々の材料でできていてよい。容器は、製剤を保持する。

製造品またはキットは、容器上にあるかまたは容器に付随する、製剤の再構成および／
または使用に関する指示を示すことができるラベルまたは添付文書をさらに含むことがで
きる。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線
維症）および／または前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を処置または予防する
ための、皮下、静脈内または他の投与様式に有用であるまたは意図されることをさらに示
すことができる。製剤を保持する容器は、使い捨てバイアルであっても多重使用バイアル
であってもよく、これは、再構成された製剤の反復投与を可能にする。製造品またはキッ
トは、適した希釈液を含む第２の容器をさらに含むことができる。製造品またはキットは
、他のバッファー、希釈液、フィルター、針、シリンジおよび添付文書と使用指示を含む
、商業的、治療的および使用者の見地から望ましい他の材料をさらに含むことができる。

具体的な実施形態において、本発明は、単一用量投与単位のためのキットを提供する。
斯かるキットは、シングルまたはマルチチャンバーの両方の予め充填されたシリンジを含
む、治療抗体の水性製剤の容器を含む。例示的な予め充填されたシリンジは、Ｖｅｔｔｅ
ｒ ＧｍｂＨ、ドイツ、ラーフェンスブルクから入手できる。

本発明は、また、個体における線維性疾患（例えば、特発性肺線維症）および／または
前線維性疾患（例えば、慢性過敏性肺臓炎）を処置または予防するための、１種または複
数種の医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた、本明細書に記載されている抗シグレ
ック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはヒトシグレック−８
に結合するアゴニストを提供する。一部の実施形態において、本明細書における製造品ま
たはキットは、第２の医薬を含む容器を任意選択でさらに含み、抗シグレック−８抗体ま
たはアゴニストは、第１の医薬であり、製造品またはキットは、ラベルまたは添付文書に
、第２の医薬の有効量により個体を処置するための指示をさらに含む。

別の実施形態において、自動注射装置における投与のための、本明細書に記載されてい
る製剤を含む製造品またはキットが本明細書において提供される。自動注射器は、起動す
ると、患者または管理者の追加的な必要な動作なしでその内容物を送達する注射装置とし
て説明することができる。送達速度が一定でなければならず、送達時間が僅かな間よりも
長い場合、これは、治療用製剤のセルフメディケーションに特に適する。

本明細書に記載されている態様および実施形態は、単なる説明目的のものであり、これ
を踏まえた様々な修正または変更が、当業者に示唆され、これが本願の精神および範囲内
ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。

本発明は、次の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しか
し、実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈するべきではない。本明細書に記載さ
れている実施例および実施形態が、単なる説明目的であり、これを踏まえた様々な修正ま
たは変更が、当業者に示唆され、本願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲内に
含まれるべきであることが理解される。

（実施例１）
ヒト線維症のマウスモデルにおける抗シグレック−８抗体の活性
ブレオマイシン誘発肺線維症は、ヒト線維症の実験モデルである。肥満細胞、好酸球お
よび好塩基球の表面においてヒトシグレック−８を選択的に発現させた、シグレック−８
トランスジェニックマウスにおいて、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルにおける抗シグ
レック−８抗体の活性を調べた。ｍ２Ｅ２枯渇抗体は、ＡＤＣＣ活性によって好酸球およ
び肥満細胞を死滅させる、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有するマウスモノクローナル
抗シグレック−８抗体である。ｍ２Ｅ２阻害抗体は、好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を
阻害する、マウスＩｇＧ１アイソタイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８
抗体である。

シグレック−８トランスジェニックマウスに、総計３回、腹腔内注射により３ｍｇ／ｋ
ｇのマウス抗シグレック−８抗体（ｍ２Ｅ２枯渇抗体またはｍ２Ｅ２阻害抗体）またはマ
ウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を投与した。抗体の第１の投与は、ブレオマイシン投
与の４日前（−４日目）に行われ、第２の投与は、ブレオマイシン投与と同じ日（０日目
）に為され、第３の投与は、ブレオマイシン投与の４日後（４日目）に為された。１．５
Ｕ／ｋｇブレオマイシンの中咽頭投与は、表示の抗シグレック−８抗体またはアイソタイ
プ対照抗体の第１の投与の４日後に行われた。抗体またはブレオマイシンを投与されてい
ないマウスの対照群（ナイーブ）をその後の解析に使用した。アイソタイプ対照抗体、ｍ
２Ｅ２枯渇抗体またはｍ２Ｅ２阻害抗体で処置された、ブレオマイシン誘発肺線維症を有
するシグレック−８トランスジェニックマウス、およびブレオマイシン誘発肺線維症がな
い無処置シグレック−８トランスジェニックマウスの体重を、試験経過にわたってモニタ
ーした。ブレオマイシンの投与の７日後に、処置されたマウスから気管支肺胞洗浄（ＢＡ
Ｌ）液を収集し、コラーゲン、白血球、細胞鑑別（cell differential）およびサイトカ
イン評価のために処理した。ＢＡＬ液を１，０００ｒｐｍで４℃にて５分間遠心分離し、
その後の使用のために上清を移した。ＢＡＬ細胞ペレットを２ｍＬの１×ＢＤ Ｐｈａｒ
ｍ Ｌｙｓｅ（商標）溶解バッファー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に再懸濁して、
赤血球を溶解した。２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）
を添加して溶解反応を停止し、その後、細胞を再度１，０００ｒｐｍで遠心分離した。そ
の後の使用のために細胞を移した。

血球計数器およびトリパンブルー排除方法を使用して、ＢＡＬ液から得た細胞ペレット
試料における白血球を計数して、死細胞および生細胞をモニターした。ＢＡＬ液の細胞ペ
レット試料からサイトスピン（Cytospin）を調製し、ギムザ染色により分染し、視覚的細
胞形態に基づき、有核ＢＡＬ免疫細胞（すなわち、好中球、マクロファージ、単球、リン
パ球および好酸球）の百分率数（differential count）のために高倍率下で数え上げた
。マウスｍ２Ｅ２枯渇抗体およびマウスｍ２Ｅ２阻害抗体は両者共に、アイソタイプ対照
抗体を与えたブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマ
ウスと比較して、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニッ
クマウスの気管支肺胞空間への好中球流入を有意に阻害した（図１）。

コラーゲン定量のため、Ｓｉｒｃｏｌ（商標）コラーゲンアッセイ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ
Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｓｓａｙｓ、英国）を使用して、ＢＡＬ上清の１６０μ
ｌ試料を解析した。マウスｍ２Ｅ２枯渇抗体およびマウスｍ２Ｅ２阻害抗体は両者共に、
アイソタイプ対照抗体を与えたブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トラ
ンスジェニックマウスと比較して、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８
トランスジェニックマウスの気管支肺胞空間におけるコラーゲン蓄積を予防した（図２Ａ
および図２Ｂ）。

ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスは、試
験経過にわたって体重減少を経験した（図３）。しかし、マウスｍ２Ｅ２枯渇抗体または
マウスｍ２Ｅ２阻害抗体の投与は、ブレオマイシン誘発体重減少からシグレック−８トラ
ンスジェニックマウスを有意に保護した（図３）。ブレオマイシン誘発肺線維症を有する
抗シグレック−８抗体処置マウスにおける体重変化は、ブレオマイシン誘発肺線維症がな
い無処置マウスにおける体重変化に匹敵した（図３）。

サイトカイン解析のため、定量のためのＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）サイトカインマウ
ス３２プレックスパネル（血清、血漿および組織培養上清におけるサイトカイン、ケモカ
インおよび増殖因子を定量するために設計されたパネル；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ、ＣＡ）、潜在型ＴＧＦ−β前駆体型パネルおよびＴＧＦ−β活性型パネルを使用
して、ＢＡＬ液試料から得た上清の１６０μｌ試料を解析した。マウスｍ２Ｅ２枯渇抗体
およびマウスｍ２Ｅ２阻害抗体は両者共に、アイソタイプ対照抗体を与えたブレオマイシ
ン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスと比較して、ブレオマ
イシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスの気管支肺胞液に
おけるサイトカイン放出を阻害した（図４）。

ＢＡＬ収集後に、病理組織学的解析のため、およそ０．５ｍＬの１０％中性緩衝ホルマ
リン（ＮＢＦ）によって肺を膨張させた。肺検体における線維症の程度に基づき、獣医病
理学者により、各マウスから得た肺の顕微鏡視野にＡｓｈｃｒｏｆｔスコア（０〜８の尺
度でグレード分け）を与えた（図５）。Ａｓｈｃｒｏｆｔスコアリングの記載については
、Ashcroftら、J. Clin. Pathol.、１９９８年、４１巻：４６７〜４７０頁を参照され
たい。

（実施例２）
ヒト線維症のマウスモデルにおける抗シグレック−８抗体処置
ブレオマイシン誘発肺線維症を示すシグレック−８トランスジェニックマウスの抗シグ
レック−８抗体処置を調べた。シグレック−８トランスジェニックマウスは、肥満細胞、
好酸球および好塩基球の表面においてヒトシグレック−８を選択的に発現した。ｍ２Ｅ２
阻害抗体は、活性化好酸球を死滅させ、肥満細胞活性を阻害する、マウスＩｇＧ１アイソ
タイプを有するマウスモノクローナル抗シグレック−８抗体である。

シグレック−８トランスジェニックマウスに、腹腔内注射により、３ｍｇ／ｋｇのマウ
ス抗シグレック−８抗体（ｍ２Ｅ２阻害抗体）またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗
体を投与した。１．５Ｕ／ｋｇブレオマイシンの中咽頭投与の３日後（３日目）に、ｍ２
Ｅ２阻害抗体またはアイソタイプ対照抗体の第１の投与を行った。抗体またはブレオマイ
シンを投与されていないマウスの対照群（ナイーブ）をその後の解析のために使用した。
ブレオマイシンの投与の７日後に、処置されたマウスからＢＡＬ液を収集し、コラーゲン
、白血球および細胞鑑別評価のために処理した。ＢＡＬ液を１，０００ｒｐｍで４℃にて
５分間遠心分離し、その後の使用のために上清を移した。ＢＡＬ細胞ペレットを２ｍＬの
１×ＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）溶解バッファー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ）に再懸濁して、赤血球を溶解した。２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したリン酸緩
衝食塩水（ＰＢＳ）を添加して溶解反応を停止し、その後、細胞を１，０００ｒｐｍで再
度遠心分離した。その後の使用のために細胞を移した。

血球計数器およびトリパンブルー排除方法を使用して、ＢＡＬ液から得た細胞ペレット
試料における白血球を計数して、死細胞および生細胞をモニターした。ＢＡＬ液の細胞ペ
レット試料からサイトスピンを調製し、ギムザ染色で分染し、視覚的細胞形態に基づき、
有核ＢＡＬ免疫細胞（すなわち、好中球、マクロファージ、単球、リンパ球および好酸球
）の百分率数のために高倍率下で数え上げた。マウスｍ２Ｅ２阻害抗体の投与は、アイソ
タイプ対照抗体を与えたブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トランスジ
ェニックマウスと比較して、ブレオマイシン誘発肺線維症を有するシグレック−８トラン
スジェニックマウスの気管支肺胞空間への好中球流入を有意に阻害した（図６）。

コラーゲン定量のため、Ｓｉｒｃｏｌ（商標）コラーゲンアッセイ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ
Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｓｓａｙｓ、英国）を使用して、上清の１６０μｌ試料
を解析する。

サイトカイン解析のため、定量のためのＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）サイトカインマウ
ス３２プレックスパネル（血清、血漿および組織培養上清におけるサイトカイン、ケモカ
インおよび増殖因子を定量するために設計されたパネル；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ、ＣＡ）、潜在型ＴＧＦ−β前駆体型パネルおよびＴＧＦ−β活性型パネルを使用
して、ＢＡＬ液試料から得た上清の１６０μｌ試料を解析する。

ＢＡＬ収集後に、病理組織学的解析のため、およそ０．５ｍＬの１０％中性緩衝ホルマ
リン（ＮＢＦ）により肺を膨張させる。肺検体における線維症の程度に基づき、獣医病理
学者によって、各マウス由来の肺の顕微鏡視野にＡｓｈｃｒｏｆｔスコア（０〜８の尺度
でグレード分け）を与える。Ａｓｈｃｒｏｆｔスコアリングの記載については、Ashcroft
ら、J. Clin. Pathol.、１９９８年、４１巻：４６７〜４７０頁を参照されたい。

アイソタイプ対照抗体またはｍ２Ｅ２阻害抗体で処置した、ブレオマイシン誘発肺線維
症を有するシグレック−８トランスジェニックマウス、およびブレオマイシン誘発肺線維
症がない無処置シグレック−８トランスジェニックマウスの体重を試験経過にわたってモ
ニターする。

（実施例３）
インプラント誘発線維症のヒト化マウスモデルにおける抗シグレック−８抗体の活性
ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）生着後に豊富なヒト肥満細胞を生成することができる免疫不
全マウスについて記載されている（Tanakaら、J Immunol.、２０１２年、１８８巻（１
２号）：６１４５〜５５頁）。ＮＳＧ−ＳＧＭ３と命名されたマウス系統（Ｔｈｅ Ｊａ
ｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）は、ＩＬ−２受容体ガンマ鎖遺伝子を欠失した、非
肥満糖尿病／重症複合免疫不全症（ＮＯＤ ＳＣＩＤ）マウスの派生系統である（ＮＳＧ
マウス）。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスは、ヒト造血幹細胞による生着を容易にするための、
３種のヒトサイトカイン（幹細胞因子［ＳＣＦ］、ＩＬ−３およびＧＭ−ＣＳＦ）のさら
なるトランスジェニックである。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスの生着後に、ヒトＣＤ３４^＋細
胞は、ヒト好酸球および増強された数のヒト肥満細胞を生成する。生着したＮＳＧ−ＳＧ
Ｍ３マウスにおける両方の細胞型は、ヒト末梢血および組織から単離された対応する細胞
型におけるレベルに匹敵するレベルでシグレック−８を発現する。よって、このようなマ
ウスは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗シグレック−８抗体の活性の評価のためのモデルを提
供する。

植え込まれた物体によって誘発された線維症における抗シグレック−８抗体の効果を評
価するために、このようなヒト化マウスにポリスチレンビーズを植え込み、抗シグレック
−８抗体による予防的または治療的処置後に線維症の発症をモニターした。

材料と方法
５００μｍ平均直径のポリスチレンビーズをＰｈｏｓｐｈｏｒｅｘ（Ｈｏｐｋｉｎｔｏ
ｎ、ＭＡ）から購入し、ヒト化マウスに植え込んだ。マウスにおけるポリスチレンビーズ
植え込みの記載については、Veishら、Nat. Mater.、２０１５年、１４巻：６４３〜６
５１頁を参照されたい。ヒト化マウスを麻酔し、その腹部を剃毛し殺菌した。腹部の正中
に沿って０．５ｍｍ切開を入れ、鈍的切開を使用して腹膜内層を露出させた。次に、腹膜
壁を鉗子で掴み、白線に沿って０．５〜１ｍｍ切開を入れた。続いて、ＰＢＳに懸濁した
ポリスチレンビーズを無菌ピペットに充填し、切開を通して腹膜腔に植え込んだ。５−０
先端テーパーポリジオキサノン（ＰＤＳ ＩＩ）吸収性縫合糸を使用して切開を閉鎖し、
創傷クリップおよび組織接着剤を使用して、切開にわたって皮膚を閉鎖した。ポリスチレ
ンビーズの植え込みの１日前（−１日目）に、またはポリスチレンビーズの植え込みの７
日後（７日目）に、１００μｇの抗シグレック−８抗体（ｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４）またはア
イソタイプ適合対照ヒト抗体（ｈＩｇＧ４）を、１４日間試験の終結まで４日毎に（ｑ４
ｄ）腹腔内注射により投与した。したがって、１００μｇのｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４を、予防
的処置試験群（ｎ＝５匹のマウス）のために−１、３、７および１１日目に投与した、ま
たは治療的処置試験群（ｎ＝５匹のマウス）のために７および１１日目に投与した。１０
０μｇのｈＩｇＧ４を、対照試験群（ｎ＝５匹のマウス）のために−１、３、７および１
１日目に投与した。ｃ２Ｅ２ ＩｇＧ４抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプおよびマウス
２Ｅ２可変ドメインを有するキメラモノクローナル抗シグレック−８抗体である。

試験１４日目にマウスを安楽死させた。腹膜洗浄を行って浮遊性腹腔内細胞をすすぎ出
して採取するために、５ｍｌ容量の氷冷ＰＢＳを先ず注射した。次に、腹部皮膚および腹
膜壁に沿って切開を入れ、クレブスバッファーを使用して、採取のため腹部からペトリ皿
へとポリスチレンビーズを洗い出した。全てのビーズを洗い出した後、または腹腔内組織
へと直接的に線維形成した場合は手動で回収した後、イメージング前の下流処理のために
、採取したビーズを５０ｍＬコニカルチューブ内に移した。腹膜洗浄およびビーズ回収後
に、残っている線維形成した腹腔内組織も解析のため切除した。腹膜腔から回収したポリ
スチレンビーズおよび組織を、クレブスバッファーを使用して穏やかに洗浄し、位相差顕
微鏡検査のためペトリ皿に移した。Ｂｉｃｏｌｏｒ Ｓｉｒｃｏｌ可溶性コラーゲンアッ
セイを使用して、腹膜洗浄上清（ビーズおよび組織の除去後に残っている上清）の画分に
おいてコラーゲン定量を行った。

抗マウスアルファ平滑筋アクチン抗体（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉ
ｓ ＭＯ）を使用して、アルファ平滑筋アクチンを定量した。免疫蛍光イメージングを使
用して、Veishら、Nat. Mater.、２０１５年、１４巻：６４３〜６５１頁に記載されて
いる通りに、ビーズに付着した細胞集団を決定した。４％パラホルムアルデヒドを使用し
て、マウスから回収した材料を４℃で一晩固定した。ポリスチレンビーズおよび会合した
細胞をクレブスバッファーで２回洗浄し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００溶液を使用し
て３０分間透過処理し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液を使用して１時間ブロッ
キングした。次に、ＢＳＡ中ＤＡＰＩ（５００ｎＭ）および抗マウスアルファ平滑筋アク
チン抗体（１：２００希釈）からなる免疫染色カクテル溶液において、ビーズを１時間イ
ンキュベートした。染色後に、ビーズを０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液で３回洗浄し、５０
％グリセロール溶液中に維持した。次に、ビーズをガラス底の皿に移し、Ｎｉｋｏｎ Ｅ
ｃｌｉｐｓｅ Ｔｉシリーズ顕微鏡を使用して撮像した。Ｎｉｋｏｎ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ
画像解析ソフトウェアにより、画像をさらに解析した。

結果
ヒト化マウスの腹膜に１４日間植え込まれた無菌ポリスチレンビーズは、コラーゲン沈
着の増加（図７）およびビーズに会合した筋線維芽細胞の蓄積（図８）によって示される
通り、線維症を誘発した。ビーズ植え込み１日前の抗シグレック−８抗体によるヒト化マ
ウスの予防的処置は、コラーゲン沈着およびビーズ上の筋線維芽細胞の蓄積を著しく低下
させた。抗シグレック−８抗体処置は、ビーズ植え込み７日後に抗体で処置したヒト化マ
ウスにおけるコラーゲン沈着および筋線維芽細胞の蓄積も阻害した。

（実施例４）
強皮症および全身性線維症のマウスモデルにおける抗シグレック−８抗体の活性
ブレオマイシンの皮下投与は、全身性硬化症を含む強皮症の実験モデルを提供する。皮
下経路によりブレオマイシンで処置したマウスは、皮膚および肺の両方の線維症を発症す
る。肥満細胞、好酸球および好塩基球の表面においてヒトシグレック−８が選択的に発現
されるシグレック−８トランスジェニックマウスにおいて、ブレオマイシン誘発皮膚線維
症モデルにおける抗シグレック−８抗体の活性を調べた。

シグレック−８トランスジェニックマウスに、治療的試験群において総計６用量（＋７
日目）または予防的試験群において８用量（−１日目）、腹腔内注射により３ｍｇ／ｋｇ
のマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体またはマウス抗シグレック−８抗体（ｍ２Ｅ２
ＩｇＧ１抗体；ｍ２Ｅ２阻害抗体としても公知）を投与した。予防的試験群のため、抗体
の投与は、ブレオマイシン投与の１日前（−１日目）に行われ、その後、初回ブレオマイ
シン投与後３、７、１１、１５、１９、２３および２７日目に投与された。治療的試験群
のため、抗体の投与は、初回ブレオマイシン投与後７日目（７日目）に行われ、その後、
１１、１５、１９、２３および２７日目に投与された。マウス当たり０．１ ＩＵブレオ
マイシンを、０日目に、および２８日目まで２日毎に、各マウスの背中に皮下投与した。
抗体またはブレオマイシンを投与されていないマウスの対照群（ナイーブ）をその後の解
析のために使用した。アイソタイプ対照抗体またはｍ２Ｅ２阻害抗体で処置した、ブレオ
マイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスの肺重量をブ
レオマイシン投与後３０日間モニターした（３０日目）。ブレオマイシン誘発皮膚線維症
がない無処置シグレック−８トランスジェニックマウスを、この３０日間のモニタリング
期間モニターした。３０日目に、シグレック−８トランスジェニックマウスの病変由来の
肺および皮膚の部分を、製造業者の指示に従ってＢｉｏＶｉｓｉｏｎキットを使用して、
コラーゲンの成分であるヒドロキシプロリンのレベルの解析のために処理した。残ってい
る病変皮膚を、ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡ抽出のために処
理し、製造業者の指示に従ってＨｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ｃＤＮＡへと逆転写した。初回ブレオマイ
シン投与の１５日後（１５日目）、２０日後（２０日目）、２５日後（２５日目）および
３０日後（３０日目）に、ブレオマイシン誘発皮膚病変の科学的写真を撮った。アイソタ
イプ対照抗体またはｍ２Ｅ２阻害抗体で処置した、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有す
るシグレック−８トランスジェニックマウス、およびブレオマイシン誘発皮膚線維症がな
い無処置シグレック−８トランスジェニックマウスにおいて、視覚的皮膚スコア（visual
dermal score）を写真から計算した。

ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスは、
初回ブレオマイシン投与の３０日後（３０日目）に、肺重量増加を経験した。ｍ２Ｅ２阻
害抗体の投与は、アイソタイプ対照抗体を与えたブレオマイシン誘発皮膚線維症を有する
シグレック−８トランスジェニックマウスと比較して、肺重量増からシグレック−８トラ
ンスジェニックマウスを有意に保護および阻害した（図９）。ヒドロキシプロリン定量の
ため、シグレック−８トランスジェニックマウス肺および皮膚の部分を、製造業者の指示
（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ）に従ってホモジナイズした。アイソタイプ対照抗体で処置した、
ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスと比較
して、肺および皮膚の両方において、ｍ２Ｅ２阻害抗体の投与により、ヒドロキシプロリ
ンの低下が観察された（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。抗シグレック−８抗体処置マウスに
おけるヒドロキシプロリンの低下は、ブレオマイシン誘発皮膚線維症がない無処置マウス
において観察されるヒドロキシプロリン含量に匹敵した。遺伝子発現解析のため、ブレオ
マイシン誘発皮膚線維症におけるシグレック−８トランスジェニックマウスの皮膚から得
られるｃＤＮＡを、予め設計された遺伝子特異的プライマーを使用して、線維化促進メデ
ィエーターであるインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）およびトランスフォーミング増
殖因子ベータ（ＴＧＦβ）の定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）（ＢｉｏＲａｄ）解析に使用した
。マウスｍ２Ｅ２阻害抗体は、アイソタイプ対照抗体を与えたブレオマイシン誘発皮膚線
維症を有するシグレック−８トランスジェニックマウスと比較して、ブレオマイシン誘発
皮膚病変におけるＩＬ−１３およびＴＧＦβの両方の発現を有意に阻害した（図１１Ａお
よび図１１Ｂ）。

ブレオマイシン誘発皮膚病変を線維症に関して視覚的に定量し、皮膚病変の線維化重症
度に基づき１〜３のスコアを与えた（１は重症度が低く、３は最も重症度が高い）。ｍ２
Ｅ２阻害抗体で処置した、ブレオマイシン誘発皮膚線維症を有するシグレック−８トラン
スジェニックマウスは、アイソタイプ対照抗体を与えたブレオマイシン誘発皮膚線維症を
有するシグレック−８トランスジェニックマウスと比較して、より低い視覚的皮膚スコア
を有した（図１２）。

Claims (1)

1. 明細書に記載の発明。

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