JP2021023268A - 核酸アプタマー、ヒト間葉系幹細胞吸着剤、ヒト間葉系幹細胞の分離方法、ヒト間葉系幹細胞の検出方法 - Google Patents
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Description
(a)配列番号1〜8のいずれかに示される塩基配列
(b)配列番号1〜8のいずれかに示される塩基配列において、1〜5個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列
(c)配列番号9〜16のいずれかに示される塩基配列
(d)配列番号9〜16のいずれかに示される塩基配列において、1〜5個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列
本発明のアプタマーは、以下の(a)、(b)、(c)又は(d)のいずれかの塩基配列を含み、且つ、ヒト間葉系幹細胞(以下、「hMSC」ともいう。)に結合性を有する核酸アプタマーである。
(a)配列番号1〜8のいずれかに示される塩基配列
(b)配列番号1〜8のいずれかに示される塩基配列において、1〜5個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列
(c)配列番号9〜16のいずれかに示される塩基配列
(d)配列番号9〜16のいずれかに示される塩基配列において、1〜5個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列
(1)スペーサー配列が、(a)、(b)、(c)又は(d)の塩基配列と、プライマー配列や修飾と、の間に配置される。
(2)プライマー配列に対する相補鎖が、(a)、(b)、(c)又は(d)の塩基配列と、プライマー配列と、の間に配置される。
本発明のアプタマーは、当該技術分野において核酸合成方法として知られる公知の方法によって製造できる。
本発明のアプタマーは、ヒト間葉系幹細胞(hMSC)への特異的な結合性を有する。
なお、hMSC以外の細胞としては、上記のhMSC陽性マーカータンパク質を発現していない細胞(例えば、HeLa細胞(ヒト子宮頸部類上皮がん)、HL60細胞(ヒト急性前骨髄性白血病由来細胞株)、Ramos細胞(ヒトバーキットリンパ腫細胞))が挙げられる。
本発明のアプタマーは、hMSCに対するその特異的な結合性を利用し、ヒト間葉系幹細胞吸着剤として好ましく利用できる。
アガロース、セルロース、キチン、キトサン、デキストラン、及びプルラン等の多糖類を原料とした多糖系担体、並びに、これらを架橋剤で架橋した架橋多糖系担体;
ポリメタクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、及びポリスチレン等の合成高分子系担体、並びに、これらを架橋剤で架橋した架橋合成高分子系担体。
上記のうち、親水性が高く、hMSC以外の細胞や生体分子(タンパク質等)との非特異的な吸着を低減しやすいという点で、アガロース、セルロース、デキストラン、及びプルラン等の電荷を有さない多糖系担体、並びに、これらの架橋多糖系担体や、ポリメタクリレート、及びポリビニルアルコール等の親水性合成高分子系担体、並びに、これらの架橋親水性合成高分子系担体が好ましい。
本発明の吸着剤を用いることで、任意の細胞混合物から、該細胞混合物中のhMSCを、hMSC以外の細胞から選択的に分離することができる。
本発明のアプタマーは、hMSCに対する特異的な結合性を利用し、ヒト間葉系幹細胞の検出方法において好ましく利用できる。
(1)任意のhMSC(組織培養用シャーレ等で培養したhMSC、生体から採取した組織や骨髄液中に含まれるhMSC等)と、本発明のアプタマーと、を接触させることにより、該アプタマーをhMSCに結合させる。
(2)接触後、蛍光顕微鏡で観察することにより、hMSCを検出する。
ランダムDNAライブラリー(配列番号17、配列長:72mer、ユーロフィンジェノミクス製)を用い、「Cell−SELEX法」(Guo,K.T. et al. Int.J.Mol.Sci.9:668−678,2008等を参照。)によりhMSC結合性アプタマーの探索を行った。このライブラリーは、30塩基からなるランダム領域と、その3’末端及び5’末端にリンカーを介して18塩基からなるプライマー領域と、を含む。
Cell−SELEX法に使用するランダムDNAライブラリープール試料は、ランダムDNAライブラリーを最終濃度が5μMとなるように緩衝液Aに溶解し、95℃で10分間加熱処理したのち、30分かけて25℃まで冷却し、最終濃度が1μMとなるように緩衝液Aで希釈することにより調製した。
Cell−SELEX法に使用するhMSC(JCRB1133:ヒト骨髄由来間葉系幹細胞)は、JCRB細胞バンクより入手した。
hMSC試料の培養及び培養物の処理を以下の方法で行った。
10%FBS(Biological Industries製、以下の試験においても同様。)、L−グルタミン水溶液(富士フイルム和光純薬製、以下の試験においても同様。)及びペニシリン−ストレプトマイシン水溶液(富士フイルム和光純薬製、以下の試験においても同様。)を含むD−MEM(低グルコース、シグマアルドリッチ製)を用いた。
直径10cmの組織培養用シャーレ(コーニング製)にhMSCを播種し、コンフルエントになるまで、5%CO2雰囲気下、37℃で培養を行った。
培養後、以下の操作を順に行い、hMSCに結合性を有する一本鎖DNA分子(以下、「hMSC結合性DNA分子」ともいう。)を調製した。
(1)培養後、シャーレから培地を除去したのち、緩衝液Bを用いて、培養物を2回洗浄した。
(2)洗浄後のシャーレに、ランダムDNAライブラリープール試料1mLを添加し、室温で1時間放置してhMSCとランダムDNAライブラリーとを接触させた。次いで、緩衝液Bを用いて3回洗浄し、hMSCに結合しなかったランダムDNAライブラリーを除去した。
(3)DNA分解酵素を含まない水(0.5mL)をシャーレに添加し、セルスクレーパーを用いてシャーレからhMSCを剥離して遠心分離容器に添加したのち、4℃において150gで3分間、遠心分離処理を行い、上清を廃棄した。
(4)遠心分離容器に緩衝液C(0.12mL)を添加してhMSCを含む沈殿物を懸濁し、95℃で10分間加熱処理してhMSCに結合したDNA分子を遊離させたのち、13100gで5分間遠心分離処理を行い、hMSCに結合性を有するDNA分子を含む上清を回収した。
(5)回収したhMSC結合性DNA分子を、95℃で10分間加熱処理したのち、30分かけて25℃まで冷却して一本鎖に調製した。
上記で回収したhMSC結合性DNA分子を、定量PCRにより増幅することで、該hMSC結合性DNA分子の回収量を算出した。
定量PCRは、DNAポリメラーゼとしてAmpliTaq Gold DNAポリメラーゼ(アプライドバイオシステムズ製)を用い、プライマーとして表2に記載のフォワードプライマー及びリバースプライマーを用いた。定量PCRの条件は用いた試薬や装置に基づき適切に設定した。
上記「(hMSC試料の培養)」の項に示した1連の操作を「1ラウンド」として繰り返し、Cell−SELEX法によるhMSC結合性DNA分子のスクリーニングを、合計9ラウンド行った。
(1)HeLa細胞の培養は、直径10cmの組織培養用シャーレ(コーニング製)を用いて、培地として10%FBS、L−グルタミン溶液及びペニシリン−ストレプトマイシン溶液を含むD−MEM(シグマアルドリッチ製)を用い、5%CO2雰囲気下、37℃で行った。
(2)HeLa細胞をコンフルエントになるまで培養し、シャーレから培地を除去したのち、緩衝液Bを用いて2回洗浄した。
(3)洗浄後のシャーレに、3ラウンド目に回収したhMSC結合性DNA分子溶液1mLを添加し、室温で1時間放置してHeLa細胞とhMSC結合性DNA分子とを接触させたのち、緩衝液Bを用いて3回洗浄し、HeLa細胞に結合しないhMSC結合性DNA分子を回収した。
9ラウンド目で回収したhMSC結合性DNA分子について、下記のカウンターセレクション及びポジティブセレクションを併用した方法により、Cell−SELEX法によるhMSC結合性DNA分子のスクリーニングを行った。
カウンターセレクションは、JCRB細胞バンクより入手したHL60細胞(JCRB0085:ヒト急性前骨髄性白血病由来細胞)を用いて、以下の方法で行った。
(2)HL60細胞の培養は、培地として10%FBSとペニシリン−ストレプトマイシン溶液を添加したRPMI 1640培地(富士フイルム和光純薬製)を用い、浮遊培養用シャーレ(住友ベークライト製)にHL60細胞を播種し、5%CO2雰囲気下、37℃で行った。培養終了後、HL60細胞を遠心分離容器に添加したのち、遠心分離処理により細胞を回収し、緩衝液Bを用いて2回洗浄した。
(3)洗浄後、9ラウンド目で回収した一本鎖調製後のhMSC結合性DNA分子を添加し、室温で1時間放置して、HL60細胞と、ランダムDNAライブラリーとを接触させたのち、4℃において150gで3分間、遠心分離処理を行い、HL60細胞に結合しないhMSC結合性DNA分子を含む上清を回収した。
ポジティブセレクションは、hMSCを用いて、以下の方法で行った。
(1)上記「(hMSC試料の培養)」の項に示した方法と同様に、直径10cmの組織培養用シャーレでhMSCを培養後、緩衝液Bを用いて2回洗浄した。
(2)洗浄後のシャーレに、9ラウンド目で回収したhMSC結合性DNA分子を含む上清を添加し、室温で1時間放置して、hMSCと、hMSC結合性DNA分子とを接触させたのち、緩衝液Bを用いて3回洗浄し、hMSCに結合しないhMSC結合性DNA分子を除去した。
(3)DNA分解酵素を含まない水0.5mLをシャーレに添加し、セルスクレーパーを用いてシャーレからhMSCを剥離して遠心分離容器に添加したのち、4℃において150gで3分間、遠心分離処理を行い、上清を廃棄した。
(4)遠心分離容器に緩衝液C(0.12mL)を添加してhMSCを含む沈殿物を懸濁し、95℃で10分間加熱処理してhMSCに結合したDNA分子を遊離させたのち、13100gで5分間遠心分離処理を行い、hMSCに結合性を有するDNA分子を含む上清を回収した。
(5)回収したhMSC結合性DNA分子は、上記[定量PCRの条件]の項と同様の条件で定量PCRを用いた増幅を行ったのち、hMSC結合性DNA分子の回収量を算出するとともに、95℃で10分間加熱処理したのち、30分かけて25℃まで冷却した。
上記試験1のスクリーニングで得られたhMSC結合性DNA分子の配列解析を以下の方法で行った。
(1)hMSC結合性DNA分子を、「Ex taq DNAポリメラーゼ」(タカラバイオ製)を用いてPCRにより増幅し、「FastGene Gel/PCR Extraction Kit」(日本ジェネティクス製)により精製した。
(2)精製したPCR増幅産物を、「pGEM−T Easyベクター」(プロメガ製)にTAクローニングし、得られたサブクローニングベクターにより、大腸菌DH5αを形質転換した。
(3)形質転換された大腸菌DH5αを培養し、生育したコロニーについて「illustra TempliPhi DNA Amplification Kit」(GEヘルスケア製)を用いて、配列解析用の鋳型を調製し、hMSC結合性DNA分子の塩基配列を決定した。
(4)塩基配列を決定したhMSC結合性DNA分子の中で、重複配列が観察された8種の塩基配列をhMSC結合性DNAアプタマー候補配列として特定した。これらの候補配列を表5(配列番号1〜8)に示す。
表5に示した各候補配列(配列番号1〜8のいずれかの塩基配列)について、プライマー配列等を付加することでアプタマー(以下、「hMSC結合性DNAアプタマー」ともいう。)を調製し、以下の方法により、hMSCに対する結合能をフローサイトメトリーにより評価した。
図1に、フローサイトメトリーによる評価に使用したhMSC結合性DNAアプタマーの構成を示す。より詳細には、このアプタマーは、以下の関係を満たすように「アプタマー候補配列」、「TTT」、「プライマー配列」、「相補鎖」、「FITC(フルオレセイン修飾)」を含む。
「アプタマー候補配列」は、各候補配列(配列番号1〜8のいずれかの塩基配列)に相当する。
この「アプタマー候補配列」の3’末端側には、3塩基のチミンからなるリンカー配列「TTT」を介して、18塩基からなる「プライマー配列」が付加されている。「アプタマー候補配列」、「TTT」、及び「プライマー配列」の塩基配列を表6に示す。
上記プライマー配列に対する「相補鎖」(配列番号21)を介して、この分子はフルオレセイン修飾(「FITC」)されている。
以下、フローサイトメトリーによる評価に使用した、図1の構成を有する上記hMSC結合性DNAアプタマーを、「フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー」ともいう。
試験1の「(hMSC試料の培養)」の項に示した方法と同様に、hMSC(JCRB1133)をコンフルエントになるまで培養後、D−PBS(−)1mLを添加し、セルスクレーパーを用いてシャーレからhMSCを剥離してhMSC懸濁液を調製した。
調製したhMSC懸濁液を1.5mL容の遠心分離容器に添加したのち、4℃において150gで4分間、遠心分離処理を行い、上清を廃棄した。遠心分離容器内のhMSCを再度D−PBS(−)で懸濁し、懸濁液中のhMSC数を測定して細胞数が1.5×106個となるように調製した。
得られた細胞懸濁液に、濃度を500nMに調整したフルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー溶液(詳細を後述する。)を添加し、室温で1時間放置して、hMSCとフルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーとを接触させた。
室温で1時間放置後、D−PBS(−)を用いてhMSCを3回洗浄し、フローサイトメーター(BD ACCURI C6 PLUS、BDバイオサイエンス製)を用いてフルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーのhMSCへの結合性を評価した。
また、hMSCの代わりにHL60細胞(JCRB0085)を用いた以外は前記と同様の方法を行うことにより、フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーのHL60細胞への結合性を評価した。
上記のフルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー溶液(濃度:500nM)は、以下のように調製した。
フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーを緩衝液Dに溶解し、95℃で10分間加熱処理したのち、30分かけて25℃まで冷却した。冷却後の溶液を緩衝液Aで希釈して、フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー濃度を500nMに調製した。
フローサイトメトリーによる評価結果を図2及び図3に示す。
表5に示した各候補配列(配列番号1〜8のいずれかの塩基配列)について、以下の方法により、hMSCに対する結合能をドットブロットにより評価した。
フローサイトメトリーによる評価に使用したhMSC結合性DNAアプタマーを含む塩基配列の構成は、図1及び上記「(フローサイトメトリーに用いたアプタマー試料)」の項で説明したものと同様である。
試験1の「(hMSC試料の培養)」の項に示した方法と同様に、hMSC(JCRB1133)をコンフルエントになるまで培養後、D−PBS(−)1mLを添加し、セルスクレーパーを用いてシャーレからhMSCを剥離してhMSC懸濁液を調製した。
調製したhMSC懸濁液を1.5mL容の遠心分離容器に添加したのち、4℃において150gで4分間、遠心分離処理を行い、上清を廃棄した。遠心分離容器内のhMSCを再度D−PBS(−)で懸濁し、懸濁液中のhMSC数を測定したのち、細胞数が1.5×104個となるようニトロセルロース膜上にhMSCを固定した。
hMSCを固定したニトロセルロース膜を緩衝液E中で室温において1時間振盪してブロッキングしたのち、再度緩衝液Eで洗浄した。
次に、hMSCを固定したニトロセルロース膜を、フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー溶液(濃度:400nM)とともに室温で1時間振盪して、hMSCとフルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーとを接触させたのち、緩衝液Eを用いて3回洗浄した。なお、フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー溶液の調製方法は、試験例3の「(フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマー溶液の調製)」の項と同様である。
洗浄後のニトロセルロース膜を、画像解析装置(Typhoon8600、GEヘルスケアライフサイエンス製)を用いて、フルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーのhMSCへの結合性を評価した。
図4に示されるとおり、評価した8種類全てのフルオレセイン修飾hMSC結合性DNAアプタマーがhMSCに選択的に結合性を有することが明らかとなった。
本発明のアプタマーは、MSCの特異的な吸着剤や回収剤として有用であり得る。そこで、上記試験例3及び4において、hMSCに結合能を持つことが確認されたhMSC結合性DNAアプタマーを用いて、これを不溶性担体に固定化した吸着剤を調製した。
hMSC結合性DNAアプタマーとしては、図1及び上記試験例3の「(フローサイトメトリーに用いたアプタマー試料)」の項で説明したものと同様の構成を有する試料を用いた。ただし、アプタマー候補配列、TTT、及びプライマー配列の塩基配列が、配列番号11又は配列番号13の塩基配列であるものを用いた。また、「FITC(フルオレセイン修飾)」の代わりにビオチン修飾を用いた。
以下、吸着剤の製造に使用した上記hMSC結合性DNAアプタマーを、「ビオチン修飾hMSC結合性DNAアプタマー」ともいう。
不溶性担体として、水に懸濁した「トヨパールHW−40EC」(東ソー製、100−300μm)を、目開きが150μmのステンレス製標準ふるい(東京スクリーン製)と250μmのステンレス製標準ふるい(東京スクリーン製)を用いて分級したのち、グラスフィルターでろ過したものを使用した。
なお、本明細書の実施例において、特段の説明がない限り、不溶性担体を「重量」で記載した場合は、水に懸濁した不溶性担体をグラスフィルターでろ過したのちに秤量した含水重量を意味する。不溶性担体を「容積」で記載した場合は、水に懸濁した不溶性担体を目盛付き容器に添加し、12時間以上放置したときの沈降容積を目視により測定した値を意味する。
上記のアプタマー試料及び不溶性担体を用いて、以下の方法により、吸着剤を製造した。
(1)100mL容のテフロン(登録商標)製容器に、2.5gのトヨパールHW−40EC、3.75mLの水、0.5gの1,4−ブタンジオールジグリシジルエーテル(東京化成製)を添加したのち、振盪機内で50℃、120rpmの条件で30分間振盪した。
(2)振盪後、反応容器に47μLの48%NaOH水溶液を添加し、振盪機内で50℃、120rpmの条件で8時間振盪することにより担体にエポキシ基を導入した。
(3)反応終了後、担体を、グラスフィルター上で、ろ液が中性になるまで水で洗浄したのち、担体全量を100mL容のテフロン(登録商標)製容器に添加した。
(4)反応容器に5.0mLの0.5M D−グルカミン水溶液(東京化成製のD−グルカミンから調製)を添加したのち、振盪機内で50℃、120rpmの条件で3時間振盪することにより担体に隣接する水酸基を導入した。
(5)反応終了後、担体を、グラスフィルター上で、ろ液が中性になるまで水で洗浄したのち、担体全量を100mL容のテフロン(登録商標)製容器に添加した。
(6)反応容器に5.0mLの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液(濃度:5.0mg/mL、関東化学製の過ヨウ素酸ナトリウムから調製)を添加したのち、振盪機内で30℃、120rpmの条件で60分間振盪することにより担体のホルミル化を行った。
(7)反応終了後、担体をグラスフィルター上で水、D−PBS(−)で順次洗浄したのち、ホルミル化担体全量を100mL容のテフロン(登録商標)製容器に添加した。
(8)ホルミル化担体を添加した反応容器に、3.0mLの緩衝液Fと、1.5mLのTamavidin2(富士フイルム和光純薬製、アビジン様組換えタンパク質)のD−PBS(−)溶液(濃度1.0mg/mL)を添加し、振盪機内で30℃、120rpmの条件で60分間振盪した。次いで、150μLの水素化ホウ素ナトリウム水溶液(濃度4.0mg/mL、関東化学製の水素化ホウ素ナトリウムから調製)を添加し、さらに30℃、120rpmの条件で60分間振盪することにより還元アミノ化による担体へのアビジン様組換えタンパク質の固定化を行った。
(9)反応終了後、反応液全量を15mL容の容器に移し、D−PBS(−)で繰り返し洗浄することにより、目的のTamavidin2固定化担体を得た。
(10)Micro BCA Protein Assay Kit(サーモフィッシャーサイエンティフィック製)を用い、反応に使用したTamavidin2量から洗浄液中の未反応のTamavidin2量を差し引くことで各担体へのTamavidin2の固定化量を測定した結果、固定化量は0.45mg/mL−吸着剤であった。
(11)得られたTamavidin2固定化担体500mgと、ビオチン修飾hMSC結合性DNAアプタマーのD−PBS(−)溶液500μL(濃度:200nM)とを5mL容の容器に添加した。
(12)容器を振盪機内で30℃、120rpmの条件で60分間振盪することにより、Tamavidin2固定化担体へのビオチン修飾hMSC結合性DNAアプタマーの固定化を行った。
(13)固定化終了後の担体を、遠心分離処理によりD−PBS(−)で繰り返し洗浄することにより、目的のhMSC結合性DNAアプタマー固定化担体を製造した。
なお、以下、配列番号11の塩基配列を含むhMSC結合性DNAアプタマーを用いたhMSC結合性DNAアプタマー固定化担体を「hMSC吸着剤A」ともいう。配列番号13の塩基配列を含むhMSC結合性DNAアプタマーを用いたhMSC結合性DNAアプタマー固定化担体を「hMSC吸着剤B」ともいう。
以下の方法により、試験例5で製造した2種類のhMSC吸着剤について、hMSCへの結合能(吸着能)を評価した。
(2)培地で懸濁したhMSCを容器に添加したのち、遠心分離処理により細胞を回収し、緩衝液Gで再懸濁したのち、35μmのセルストレーナー(コーニング製)で処理することによりシングルセル化した。シングルセル化した細胞の密度をコールターカウンターZ2型(ベックマンコールター製)で測定し、評価用のhMSC懸濁液を調製した。
(3)2.5mL容シリンジ(テルモ製)と注射針(テルモ製、22G)との間に目開き100μmのポリエステルメッシュフィルター(BioLab製)を装着したカラムを作製した。
(4)hMSC吸着剤A及びBをそれぞれ緩衝液Gで懸濁することにより、50%(v/v)懸濁液を調製し、上記(3)で作製したカラムに1.0mLの50%懸濁液を添加し、各吸着剤をカラムに充填した(吸着剤容量:500μL)。
(5)吸着剤を充填したカラムに、上記(2)で調製したhMSC懸濁液(5.0×105個/50μL)を添加したのち、カラムに1.0mLの緩衝液Gを添加して吸着剤を洗浄し、コールターカウンターを用いて回収した洗浄液中の細胞密度を測定することにより、hMSCの回収率を測定した。
試験例6では、hMSC吸着剤A及びBはいずれもhMSCへの結合能が示された。この結合能がhMSCに特異的であるかを評価するために、hMSCの代わりに、JCRB細胞バンクより入手したRamos細胞(JCRB9119:ヒトバーキットリンパ腫細胞)を用いて、以下の方法により、hMSC吸着剤A及びBによる結合能を評価した。
(2)培養終了後、遠心分離処理により細胞を回収し、試験例6の「(2)」で示した方法と同様に、緩衝液Fで再懸濁してシングルセル化した。シングルセル化した細胞の密度をコールターカウンターZ2型で測定し、評価用のRamos細胞懸濁液を調製した。
(3)試験例6の「(3)」及び「(4)」で示した方法と同様にカラムの作製及び吸着剤の充填を行った(吸着剤容量:500μL)。
(4)吸着剤を充填したカラムに、上記(2)で調製したRamos細胞懸濁液(4.9×105個/50μL)を添加したのち、カラムに1.0mLの緩衝液Gを添加して吸着剤を洗浄し、コールターカウンターを用いて回収した洗浄液中の細胞密度を測定することにより、Ramos細胞の回収率を測定した。
hMSC吸着剤A及びBの代わりに、hMSC結合性DNAアプタマーを固定化していない不溶性担体(トヨパールHW−40EC(150−250μm))を用いた以外は、試験例6及び7と同様の方法で、hMSCとRamos細胞の回収率を測定した。
Claims (8)
- 以下の(a)又は(b)の塩基配列を含み、且つ、ヒト間葉系幹細胞に結合性を有する核酸アプタマー。
(a)配列番号1〜8のいずれかに示される塩基配列
(b)配列番号1〜8のいずれかに示される塩基配列において、1〜5個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列 - 以下の(c)又は(d)の塩基配列を含み、且つ、ヒト間葉系幹細胞に結合性を有する核酸アプタマー。
(c)配列番号9〜16のいずれかに示される塩基配列
(d)配列番号9〜16のいずれかに示される塩基配列において、1〜5個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列 - 前記核酸アプタマーがDNAアプタマーである、請求項1又は2に記載の核酸アプタマー。
- 前記(a)、前記(b)、前記(c)又は前記(d)の塩基配列の3’末端及び/又は5’末端が修飾されている、請求項1から3のいずれかに記載の核酸アプタマー。
- 請求項1から4のいずれかに記載の核酸アプタマーを含むヒト間葉系幹細胞吸着剤。
- さらに、前記核酸アプタマーが固定化された不溶性担体を含む、請求項5に記載のヒト間葉系幹細胞吸着剤。
- 請求項5又は6に記載のヒト間葉系幹細胞吸着剤を用いる工程を含む、ヒト間葉系幹細胞の分離方法。
- 請求項1から4のいずれかに記載の核酸アプタマーと、ヒト間葉系幹細胞とを接触させる工程を含む、ヒト間葉系幹細胞の検出方法。
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