JP2021001895A - 食物アレルギーのバイオマーカー、食物アレルギーの検査方法、尿検体検査用キット、及び尿検体検査用スティック - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2016年1月29日に、日本に出願された特願2016−015681号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
また、血中IgEを測定する診断方法では、アレルギー反応の有無は推測できても、発症リスクや症状の程度を知ることはできない。つまり、血中のIgE抗体の存在量と食物アレルギー症状の発症リスクや重篤度とは一致しないことが多い。また、この方法は採血が必要とされるため、医療機関にて行わなければならず、採血自体、乳幼児には負担も大きい。
[1] 食物アレルギーを検査するためのバイオマーカーであって、11−dehydro Thromboxane B2(11−dehydro TXB2)からなることを特徴とするバイオマーカー。
[2] 被検者の尿検体中のバイオマーカーの含有量を測定する工程を備えた食物アレルギーの検査方法であって、前記バイオマーカーが11−dehydro TXBであることを特徴とする方法。
[3] 前記測定工程において、さらに、Leukotriene E4(LTE4)、14,15−LTE4、11−trans LTE4、2,3−dinor−8−iso Prostaglandin F2α、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α、tetranor−Prostaglandin F Metabolite(tetranor−PGFM)、20−hydroxy Prostaglandin E2(20−OH PGE2)、PGE3、Prostaglandin D3(PGD3)、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2、及び13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つの含有量を測定する、[2]に記載の方法。
[4] 前記測定工程において、さらに、tetranor−PGDM又はtetranor−PGEMの含有量を測定する、[2]又は[3]に記載の方法。
[5] さらに、尿検体中の前記バイオマーカーの含有量が多い又は少ないほど、食物アレルギーの症状が重篤である若しくは重篤になった、又は、食物アレルギーを発症するリスクが高い若しくは高くなったと評価する評価工程を備える、[2]〜[4]のいずれか一つに記載の方法。
[6] 食物アレルギーの治療法又は治療薬の評価に用いられる、[2]〜[5]のいずれか一つに記載の方法。
[7] 減感作療法に用いられる、[6]に記載の方法。
[8] 前記測定工程を、イムノアッセイ又は質量分析法で行う、[2]〜[7]のいずれか一つに記載の方法。
[9] さらに、前記尿検体中に、重水素化LTC4、重水素化6−keto−PGF1α、重水素化tetranor−PGDM、重水素化tetranor−PGEM、及び重水素化PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つを内部標準として加える前処理工程を備え、前記測定工程を、質量分析法で行う、[2]〜[7]のいずれか一つに記載の方法。
[10] 前記評価工程において、食物アレルギーにおける肥満細胞の活性化を評価する、[5]に記載の方法。
[11] 抗11−dehydro TXB2抗体を含むことを特徴とする食物アレルギーの尿検体検査用キット。
[12] さらに、抗LTE4抗体、抗14,15−LTE4抗体、抗11−trans LTE4抗体、抗2,3−dinor−8−iso PGF2α抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β抗体、抗6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α抗体、抗tetranor−PGFM抗体、抗20−OH PGE2抗体、抗PGE3抗体、抗PGD3抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2抗体、及び抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2抗体からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、[11]に記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
[13] さらに、抗tetranor−PGDM抗体又は抗tetranor−PGEM抗体を含む、[11]又は[12]に記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
[14] さらに、重水素化LTC4、重水素化6−keto−PGF1α、重水素化tetranor−PGEM、及び重水素化PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、[11]〜[13]のいずれか一つに記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
[15] さらに、重水素化tetranor−PGDMを含む、[11]〜[14]のいずれか一つに記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
[16] 抗11−dehydro TXB2抗体を含むことを特徴とする食物アレルギーの尿検体検査用スティック。
[17] さらに、抗LTE4抗体、抗14,15−LTE4抗体、抗11−trans LTE4抗体、抗2,3−dinor−8−iso PGF2α抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β抗体、抗6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α抗体、抗tetranor−PGFM抗体、抗20−OH PGE2抗体、抗PGE3抗体、抗PGD3抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2抗体、及び抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2抗体からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、[16]に記載の食物アレルギーの尿検体検査用スティック。
[18] さらに、抗tetranor−PGDM抗体又は抗tetranor−PGEM抗体を含む、[16]又は[17]に記載の食物アレルギーの尿検体検査用スティック。
また、本発明の検査方法は、採血等の医療技術を必要とせず、本発明の尿検体検査用キット又は尿検体検査用スティックを用いて、小児から高齢者まで簡便に家庭で検査を行うことができる。
一実施形態として、本発明は、食物アレルギーを検査するためのバイオマーカーであって、Leukotriene E4(LTE4)、14,15−LTE4、11−trans LTE4、11−dehydro Thromboxane B2(11−dehydro TXB2)、2,3−dinor−8−iso Prostaglandin F2α、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α、tetranor−Prostaglandin F Metabolite(tetranor−PGFM)、20−hydroxy Prostaglandin E2(20−OH PGE2)、PGE3、Prostaglandin D3(PGD3)、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2、及び13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つからなる、バイオマーカーを提供する。
これらの脂質の量は、肥満細胞依存的に上昇又は減少すると考えられており、肥満細胞は、食物アレルギーが起こる消化管の粘膜に非常に多く存在することが知られている。よって、食物を摂取し、消化される際に、上述の脂質の量が変化を、被検者から血液、尿、又は便を採取することによって、食物アレルギーの有無、及び発症リスクや重篤度を適切に評価することができる。中でも、非侵襲的に採取することができ、含有量が多いことから、上述のバイオマーカーを測定する場合には、尿を試料として用いることが好ましい。
一実施形態において、本発明は、被検者の尿検体中のバイオマーカーの含有量を測定する工程を備えた食物アレルギーの検査方法であって、前記バイオマーカーがLTE4、14,15−LTE4、11−trans LTE4、11−dehydro TXB2、2,3−dinor−8−iso Prostaglandin F2α、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α、tetranor−PGFM、20−OH PGE2、PGE3、PGD3、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2、及び13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つである、方法を提供する。
本実施形態の検査方法は、採血等の医療技術を必要とせず、後述の尿検体検査用キット又は尿検体検査用スティックを用いて、小児から高齢者まで簡便に家庭で検査を行うことができる。
測定工程において、被検者より採取した尿を試料として用いる。本実施形態の検査方法に用いられる尿は、常法に従って採取したものを用いることができる。一回の尿であってもよく、二回以上の蓄尿であってもよい。採取した尿は、測定まで室温で保存してもよく、−40℃以下、例えば−80℃で保存してもよい。凍結した尿は、急速に融解させて測定に用いることができる。
なお、上述の<食物アレルギーのバイオマーカー>に記載したとおり、前記バイオマーカーは、被検者の血液、尿、又は便に含まれるが、非侵襲的に採取することができ、含有量が多いことから、尿を試料として用いることが好ましい。
tetranor PGDM又はtetranor PGEMは、国際公開第2016/021704号に記載の食物アレルギーのバイオマーカーであって、本発明者らによって見出されたものである。
脂質の産生及び代謝機構については、脂質の種類が多く、詳細は明らかにされていないが、PGD2及びTXB2、並びにこれらの代謝産物(例えば、tetranor PGDM、11−dehydro TXB2)は、肥満細胞由来のものであると考えられ、また、上述の13種の脂質のうち、PGD2及びTXB2の代謝産物以外の脂質は、肥満細胞由来のもの又はその活性によって起こる二次的な炎症反応産物であると考えられる。
よって、上述の13種の脂質に加えて、tetranor PGDM又はtetranor PGEMの含有量を測定することにより、複数の脂質を指標とすることができ、食物アレルギーの有無、及び発症リスクや重篤度をより高い精度で判定することができる。
イムノアッセイは、検出可能に標識された上述のバイオマーカーに特異的に結合する抗体、又は、検出可能に標識された上述のバイオマーカーのうちいずれか一つに特異的に結合する抗体に対する抗体(二次抗体)を用いればよい。抗体の標識方法としては、例えば、エンザイムイムノアッセイ(EIA(Enzyme immunoassay)又はELISA(Enzyme−linked immunosorbent assay))、ラジオイムノアッセイ(Radioimmunoassay;RIA)、蛍光イムノアッセイ(Fluoroimmunoassay;FIA)、蛍光偏光イムノアッセイ(Fluorescence polarization immunoassay;FPIA)、化学発光イムノアッセイ(Chemiluminescent Immunoassay;CLIA)等が挙げられる。
競合法では、マイクロプレート等の固相担体に、上述のバイオマーカーのうち、例えば、LTE4に特異的に結合する抗体(以下、「抗LTE4抗体」と呼ぶ。)を固定し、尿検体と、酵素標識された抗原として、前記抗体と反応する酵素標識されたLTE4とを添加して、抗原抗体反応を生じさせる。いったん洗浄した後、酵素基質と反応、発色させ、吸光度を測定する。尿検体中のLTE4の含有量が多ければ発色は弱くなり、尿検体中のLTE4の含有量が少なければ発色は強くなるので、検量線を用いて、LTE4の尿検体中の含有量を求めることができる。LTE4以外のバイオマーカーを用いた場合においても、同様の方法により、含有量を求めることができる。
また、サンドイッチ法では、前記固相担体に固定した抗LTE4抗体と、尿検体中の抗原(LTE4)を反応させた後、まず非標識の同じ抗原(LTE4)の別のエピトープを認識する抗LTE4抗体を添加し、この非標識の抗LTE4抗体に対する抗体(二次抗体)を酵素標識してさらに添加してもよい。
測定工程において、質量分析法を用いる場合、測定工程の前に尿検体中に含まれる代謝物質を分離するための分離工程を備えていてもよい。分離工程では、尿検体中に含まれる代謝物質の時間分解分離が得られる。分離方法としては、すべてのクロマトグラフィー分離技術を用いることができ、より具体的には、例えば、液体クロマトグラフィー(Liquid chromatography;LC)、高速液体クロマトグラフィー(High performance liquid chromatography;HPLC)、ガスクロマトグラフィー(Gas chromatography;GC)、薄層クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられる。
また、分離工程において、上述のバイオマーカーのうち、11−dehydro TXB2、tetranor−PGFMtetranor PGDM、及びtetranor PGEMは尿検体中からの分離条件が近しいため、質量分析法を用いた測定においては、好ましくは11−dehydro TXB2、tetranor−PGFMtetranor PGDM、又はtetranor PGEM、より好ましくは11−dehydro TXB2、tetranor−PGFMtetranor PGDM、及びtetranor PGEMを標的のバイオマーカーとすればよい。
本実施形態の検査方法において、上述の[測定工程]の後に、尿検体中の上述のバイオマーカーの含有量に基づき、食物アレルギーの発症リスクや重篤度を評価する評価工程を備えていてもよい。
また、上述のバイオマーカーのうち、PGE3又はPGD3の尿検体中の含有量がより少ないときに、食物アレルギーの症状が重篤である若しくは重篤になった、又は、食物アレルギーを発症するリスクが高い若しくは高くなったと判断することができる。
また、上述のバイオマーカーのうち、PGE3又はPGD3の尿検体中の含有量が所定の値より少ないときに、食物アレルギーの症状が重篤である若しくは重篤になった、又は、食物アレルギーを発症するリスクが高い若しくは高くなったと判断することができる。一方、所定の値より高いときに、食物アレルギーの症状が軽い若しくは軽くなった、又は、食物アレルギーを発症するリスクが低い若しくは低くなったと判断することができる。
本実施形態の検査方法は、食物アレルギー患者に投与する治療薬、又は患者に対して行う治療方法の評価に用いることができる。例えば、治療開始前から治療開始後の任意の時点で採取した尿検体における上述のバイオマーカーの含有量を測定し、上述のバイオマーカーの含有量が減少又は増加する場合には、その治療薬又は治療方法は有効であると判断することができる。一方、上述のバイオマーカーの含有量が減少しない若しくは増加する又は増加しない又は減少する場合には、その治療薬又は治療方法は有効ではないと判断することができる。このとき、上述のバイオマーカーの含有量の減少または増加は、有意な減少又は増加でなくてもよく、減少または増加の傾向があると当業者が判断できる程度であってもよい。
一実施形態において、本発明は、抗LTE4抗体、抗14,15−LTE4抗体、抗11−trans LTE4抗体、抗11−dehydro TXB2抗体、抗2,3−dinor−8−iso PGF2α抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β抗体、抗6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α抗体、抗tetranor−PGFM抗体、抗20−OH PGE2抗体、抗PGE3抗体、抗PGD3抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2抗体及び抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2抗体からなる群(前記13種の抗体をまとめて、以下、「上述のバイオマーカーに特異的に結合する抗体」と呼ぶ。)から選ばれる少なくとも一つを含む、食物アレルギーの尿検体検査用キットを提供する。
本実施形態の尿検体検査用キットは、サンドイッチ法によって、例えば、上述のバイオマーカーのうちLTE4の含有量を測定する場合には、マイクロタイタープレート;抗原(LTE4)捕捉用の抗LTE4抗体(以下、「捕捉用抗体1」と呼ぶ。);ペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼで標識された抗LTE4抗体(以下、「標識抗体1」と呼ぶ。);及び、ペルオキシダーゼ基質(例えば、DAB、TMB、OPD等)又はアルカリホスファターゼ基質(例えば、NPP等)を含んでいてもよい。
捕捉用抗体1と標識抗体1は、抗原(LTE4)の異なるエピトープを認識するものであることが好ましい。
LTE4以外のバイオマーカーに特異的に結合する抗体を用いた場合においても、同様の方法により、含有量を求めることができる。
本実施形態の尿検体検査用キットは、二次抗体を使用したサンドイッチ法によって、例えば、上述のバイオマーカーのうちLTE4の含有量を測定する場合には、マイクロタイタープレート;抗原(LTE4)捕捉用の抗LTE4抗体(以下、「捕捉用抗体2」と呼ぶ。);一次抗体としての抗LTE4抗体(以下、「一次抗体1」と呼ぶ。);二次抗体としての、ペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼで標識された抗LTE4抗体に対する抗体(以下、「二次抗体1」と呼ぶ。);及び、ペルオキシダーゼ基質(例えば、DAB、TMB、OPD等)又はアルカリホスファターゼ基質(例えば、NPP等)を含んでいてもよい。
捕捉用抗体2と一次抗体1は、抗原(LTE4)の異なるエピトープを認識するものであることが好ましい。
LTE4以外のバイオマーカーに特異的に結合する抗体を用いた場合においても、同様の方法により、含有量を求めることができる。
また、上述の標識抗体1及び上述の二次抗体1は、ビオチン化抗体であってもよく、この場合、本実施形態の尿検体検査用キットは、標識されたアビジン又はストレプトアビジンを含んでいてもよい。
本実施形態の尿検体検査用キットは、質量分析法により上述のバイオマーカーを測定する場合には、さらに、内部標準として、重水素化LTC4、重水素化6−keto−PGF1α、重水素化tetranor−PGEM、及び重水素化PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つを含んでいてもよい。これらを内部標準とすることにより、尿検体中の上述のバイオマーカーの含有量を測定する際に、分析毎の抽出効率及びイオン化効率を補正することができる。
重水素化tetranor−PGDMとしては、例えば、tetranor−PGDM−d6等が挙げられる。
一実施形態として、本発明は、抗LTE4抗体、抗14,15−LTE4抗体、抗11−trans LTE4抗体、抗11−dehydro TXB2抗体、抗2,3−dinor−8−iso PGF2α抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β抗体、抗6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α抗体、抗tetranor−PGFM抗体、抗20−OH PGE2抗体、抗PGE3抗体、抗PGD3抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2抗体及び抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2抗体からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、食物アレルギーの尿検体検査用スティックを提供する。
本実施形態の尿検体検査用スティックは、イムノクロマト法により、例えば、上述のバイオマーカーのうちLTE4の含有量を測定する場合には、金コロイドなどで標識された第1の抗LTE4抗体が格納された抗体格納部と、LTE4の別のエピトープを認識する第2の抗LTE4抗体とが、セルロース膜などにライン状に固定化された判定部が細い溝でつながれた構成とすることができる。
LTE4以外のバイオマーカーに特異的に結合する抗体を用いた場合においても、同様の方法により、検出することができる。
(1)オボアルブミン(Ovalbumin;OVA)誘導性食物アレルギーモデルマウスの作製
(1−1)感作条件
野生型のBALB/cマウス(6〜12週齢、雌)にオボアルブミン(Ovalbumin;OVA)50μg及びミョウバン1mgを腹腔内投与し、2週間後にOVA50μgを腹腔内投与することにより、感作した。
続いて、2回目の投与から2週間後に、マウスにOVA10mgを2日おきに計10回経口投与した。
続いて、10回目の刺激後、観察中に、マウス(n=5)の尿を採取した。コントロールとして、無処置のマウス(n=3)について観察中に、尿を採取した。
尿上清に内部標準として、LTC4−d5、6−keto−PGF1α−d4、tetranor−PGDM−d6、tetranor−PGEM−d6、PGE2−d4を加えた。続いて、塩酸及びエタノールを用いて、尿検体をpH3〜4の50%エタノール含有溶液となるように調製した。続いて、エタノール及び精製水で平衡化したSep−pak C18カートリッジ(Waters社製)に、調製した尿検体を注入した。続いて、3mLの水と3mL×2のヘキサンとで夾雑物を洗浄した。続いて、0.05%ギ酸メタノールで目的の成分を溶出させた。続いて、5時間の減圧乾燥後、100%メタノールに再溶解し、濾過した。
(2)の前処理済の尿検体について、エレクトロスプレーイオン化をイオン源とする3連四重極型質量分析装置(LC−MS8030、島津製作所製)に注入し、ソフトウエア「LC/MS/MSメソッドパッケージ」(島津製作所製)を用いて脂質網羅解析を行った。結果として、無処置のマウスの尿検体中での各脂質の含有量を1としたときの、食物アレルギーモデルマウスの尿検体中での各脂質の含有量の相対値を示すグラフを図1A〜図1Iに示す。図1A〜図1Iにおいて、「naive」とは無処置のマウスを意味し、「OVA×10」とは食物アレルギーモデルマウスを意味する。
図1A〜図1Iから、OVA誘導性食物アレルギーモデルマウスの尿検体中において、コントロール群と比較して、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2、6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α、及び20−OH PGE2の5成分が有意に増加することが明らかとなった。また、PGD3及びPGE3の2成分が有意に減少することが明らかとなった。
(1)尿検体の入手
3〜22歳の食物アレルギー患者(男女)に医師の監督のもと適切な負荷量及び摂取間隔で食物負荷試験を行い、症状の程度により0〜2のスコアを付けた。なお、数値が高いほど、症状が重篤な患者である。スコア0及びスコア2の患者それぞれについて、負荷試験前の尿(以下、「score 0 pre」、「score 2 pre」と表す。)及び負荷試験後の尿(以下、「score 0 post」、「score 2 post」と表す。)を採取した。なお、「score 0 pre」はn=9、「score 2 pre」はn=10、「score 0 post」はn=10、「score 2 post」」はn=10である。
内部標準として、さらにTXM−d4を用いた以外は、実施例1の(2)と同様の方法を用いて、尿検体を前処理した。
実施例1の(3)と同様の方法を用いて、(2)の前処理済み尿検体について、脂質網羅解析を行った。結果として、負荷試験前のスコア0患者の尿検体中での各脂質の含有量を1としたときの、負荷試験後のスコア0患者、及び負荷試験前後のスコア2患者の尿検体中での各脂質の含有量の相対値を示すグラフを図2A〜図2Jに示す。
図2A〜図2Jから、score 2 postにおいて、score 0 postと比較して、tetranor−PGFM、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、11−dehydro TXB2、2,3−dinor−8−iso PGF2α、14,15−LTE4及び11−trans LTE4の6成分が有意に増加することが明らかとなった。また、score 2 postにおいて、score 2 preと比較して、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、11−dehydro TXB2、2,3−dinor−8−iso PGF2α、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2及び13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2の5成分が有意に増加することが明らかとなった。
よって、上記4成分については、マウスを用いた食品のアレルギー原性を評価する実験系におけるバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
よって、上記5成分については、ヒトにおける食物アレルギーの発症リスクや重篤度を適切に評価、又は、減感作療法に対する反応性を評価するためのバイオマーカーとして有用であることが示唆された。
(1)尿検体の入手
3〜22歳の食物アレルギー患者(男女)に医師の監督のもと適切な負荷量及び摂取間隔で食物負荷試験を行い、症状の程度により0〜4のスコアを付けた。なお、数値が高いほど、症状が重篤な患者である。スコア0及びスコア4の患者それぞれについて、負荷試験前の尿(以下、「score 0 pre」、「score 4 pre」と表す。)及び負荷試験後の尿(以下、「score 0 post」、「score 4 post」と表す。)を採取した。なお、「score 0 pre」はn=8、「score 4 pre」はn=10、「score 0 post」はn=8、「score 4 post」」はn=10である。
尿上清に内部標準として、tetranor−PGDM−d6、tetranor−PGEM−d6、TMX−d4、LTC4−d5を加えた。続いて、塩酸を用いて、尿検体をpH3〜4となるように調製した。続いて、メタノール及び精製水で平衡化したSep−pak C18カートリッジ(Waters社製)に、調製した尿検体を注入した。続いて、3mLの水と3mL×2のヘキサンとで夾雑物を洗浄した。続いて、メタノールで目的の成分を溶出させた。続いて、4時間の減圧乾燥後、80%メタノールに再溶解し、濾過した。
(2)の前処理済の尿検体について、エレクトロスプレーイオン化をイオン源とする3連四重極型質量分析装置(LC−MS8030、島津製作所製)に注入し、ソフトウエア「LabSolutions」(島津製作所製)を用いて脂質網羅解析を行った。結果として、負荷試験前後のスコア0及びスコア4患者の尿検体中での各脂質の含有量(絶対値)を示すグラフを図3A〜図3Dに示す。なお、図3A〜図3Dにおいて、縦軸の単位「ng/mg Cre」は、尿検体中のクレアチン1mgに対する各脂質の含有量(ng)を示している。
図3A〜図3Dから、score 4 postにおいて、score 0 postと比較して、tetranor−PGDM、tetranor−PGEM、11−dehydro TXB2、LTE4は有意に増加することが明らかとなった。また、score 4 postにおいて、score 4 preと比較して、tetranor−PGDM、tetranor−PGEM、11−dehydro TXB2、LTE4は有意に増加することが明らかとなった。
以上のことから、本発明で初めて明らかとなった11−dehydro TXB2及びLTE4の2成分、並びに公知のtetranor−PGDM及びtetranor−PGEMの2成分、合計4成分については、ヒトにおける食物アレルギーの発症リスクや重篤度を適切に評価、又は、減感作療法に対する反応性を評価するためのバイオマーカーとして有用であり、これら4成分を指標とすることで、食物アレルギーの有無、及び発症リスクや重篤度をより高い精度で判定できることが示唆された。
また、本発明の検査方法は、採血等の医療技術を必要とせず、本発明の尿検体検査用キット又は尿検体検査用スティックを用いて、小児から高齢者まで簡便に家庭で検査を行うことができる。
Claims (18)
- 食物アレルギーを検査するためのバイオマーカーであって、
11−dehydro Thromboxane B2(11−dehydro TXB2)からなることを特徴とするバイオマーカー。 - 被検者の尿検体中のバイオマーカーの含有量を測定する工程を備えた食物アレルギーの検査方法であって、
前記バイオマーカーが11−dehydro TXBであることを特徴とする方法。 - 前記測定工程において、さらに、Leukotriene E4(LTE4)、14,15−LTE4、11−trans LTE4、2,3−dinor−8−iso Prostaglandin F2α、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β、6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α、tetranor−Prostaglandin F Metabolite(tetranor−PGFM)、20−hydroxy Prostaglandin E2(20−OH PGE2)、PGE3、Prostaglandin D3(PGD3)、13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2、及び13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つの含有量を測定する、請求項2に記載の方法。
- 前記測定工程において、さらに、tetranor−PGDM又はtetranor−PGEMの含有量を測定する、請求項2又は3に記載の方法。
- さらに、尿検体中の前記バイオマーカーの含有量が多い又は少ないほど、食物アレルギーの症状が重篤である若しくは重篤になった、又は、食物アレルギーを発症するリスクが高い若しくは高くなったと評価する評価工程を備える、請求項2〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 食物アレルギーの治療法又は治療薬の評価に用いられる、請求項2〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 減感作療法に用いられる、請求項6に記載の方法。
- 前記測定工程を、イムノアッセイ又は質量分析法で行う、請求項2〜7のいずれか一項に記載の方法。
- さらに、前記尿検体中に、重水素化LTC4、重水素化6−keto−PGF1α、重水素化tetranor−PGDM、重水素化tetranor−PGEM、及び重水素化PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つを内部標準として加える前処理工程を備え、前記測定工程を、質量分析法で行う、請求項2〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記評価工程において、食物アレルギーにおける肥満細胞の活性化を評価する、請求項5に記載の方法。
- 抗11−dehydro TXB2抗体を含むことを特徴とする食物アレルギーの尿検体検査用キット。
- さらに、抗LTE4抗体、抗14,15−LTE4抗体、抗11−trans LTE4抗体、抗2,3−dinor−8−iso PGF2α抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β抗体、抗6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α抗体、抗tetranor−PGFM抗体、抗20−OH PGE2抗体、抗PGE3抗体、抗PGD3抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2抗体、及び抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2抗体からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、請求項11に記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
- さらに、抗tetranor−PGDM抗体又は抗tetranor−PGEM抗体を含む、請求項11又は12に記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
- さらに、重水素化LTC4、重水素化6−keto−PGF1α、重水素化tetranor−PGEM、及び重水素化PGE2からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、請求項11〜13のいずれか一項に記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
- さらに、重水素化tetranor−PGDMを含む、請求項11〜14にいずれか一項に記載の食物アレルギーの尿検体検査用キット。
- 抗11−dehydro TXB2抗体を含むことを特徴とする食物アレルギーの尿検体検査用スティック。
- さらに、抗LTE4抗体、抗14,15−LTE4抗体、抗11−trans LTE4抗体、抗2,3−dinor−8−iso PGF2α抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGF1β抗体、抗6,15−diketo−13,14−dihydro PGF1α抗体、抗tetranor−PGFM抗体、抗20−OH PGE2抗体、抗PGE3抗体、抗PGD3抗体、抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGD2抗体、及び抗13,14−dihydro−15−keto−tetranor PGE2抗体からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む、請求項16に記載の食物アレルギーの尿検体検査用スティック。
- さらに、抗tetranor−PGDM抗体又は抗tetranor−PGEM抗体を含む、請求項16又は17に記載の食物アレルギーの尿検体検査用スティック。
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