JP2020527711A - 子宮内膜癌のマーカとしてのｃｔｎｂ１ - Google Patents

子宮内膜癌のマーカとしてのｃｔｎｂ１ Download PDF

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Abstract

本発明は、１つ以上のタンパク質の発現レベルを検出することにより、入手が容易な単離サンプル中の子宮内膜癌の診断及び予後を行う方法を提供する。特に、子宮液サンプルからである。本発明は、疾患の診断及び予後に使用するための前記タンパク質を検出する手段を含むキットも提供する。

Description

本出願は、２０１７年７月２１日に出願された欧州特許出願ＥＰ１７３８２４８３．０の利益を主張する。
本発明は、子宮内膜癌の診断及び予後に関する。
子宮内膜癌（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ、ＥＣ）は、女性生殖管の最も頻繁に認められる浸潤性腫瘍であり、先進国の女性で４番目に多い癌であり、米国では２０１７年に診断症例数が６１３８０件、推定死亡者１０，９２０名となっている。現在、ＥＣ症例の７０％は疾患の初期段階で診断され、初期段階では腫瘍はまだ子宮内膜内に局在し、９６％の全５年生存率に関連付けられる。しかし、ＥＣ患者の３０％は、５年生存率の大幅な低下に関連付けられる、疾患の進行期にのみ診断され、５年生存率は、子宮筋層浸潤及び／又はリンパ節の罹患が既に存在する場合、６７％に低下し、遠隔転移の場合は１８％に低下する。したがって、早期診断を改善することは、ＥＣを適切に管理し、疾患に関連する死亡率を低下させるための主要な課題である。
ＥＣ患者を早期発見するには、ＥＣと診断される女性の９３％に存在する異常な膣出血などの症状が存在すると有利であるが、他の多くの良性の疾患によって同様の症状が引き起こされる。良性の子宮内膜病変の患者とＥＣの患者の区別は、骨盤検査及び経膣超音波検査からなる冗長な診断過程の後、子宮内膜生検の確認用の組織病理学的検査を行った後にのみ達成される。この手順で使用される好ましい生検は、子宮吸引物及び／又はｐｉｐｅｌｌｅ生検と呼ばれ、子宮腔内からの子宮内膜液の低侵襲吸引によって得られる。現行の子宮吸引物の診断手順は細胞物質の存在に依存しているため、この過程は残念ながら診断の失敗を伴い、関連する不適切なサンプリング率はそれぞれ８％及び１５％である。不適切なサンプリング率は、閉経後の女性では１２％及び２２％まで上昇する。これらの症例では、子宮鏡により誘導される生検を行う必要があり、この侵襲的な技法によって、子宮穿孔、出血及び他の臓器に及ぼし得る害を含む合併症のリスクが上昇する。
これまで、主に組織及び血清サンプル中のＥＣタンパク質バイオマーカを同定するために多くの研究が行われてきた（例えば非特許文献１又は２参照のこと）。そのいずれも臨床的有用性につながっていない。
生検は腫瘍組織学及び腫瘍グレードに関する情報を与えて、ＥＣ患者のリスク層別化に役立ち、外科的病期分類手順を導くはずであるが、残念ながら、検査に利用できる細胞の数が限定され、病理学的解釈における観察者間のばらつきが大きいため、生検と最終子宮摘出標本間のＥＣの組織型及びグレードの不一致が４０〜５０％生じる。したがって、ＥＣ腫瘍の組織型と悪性度の診断、予後、術前評価を改善する高感度、特異的、再現性のあるバイオマーカの同定は、ＥＣ患者を適切に管理し、この疾患に関連する死亡率及び罹患率を低下させるためにきわめて重要である。
ＥＣのサブタイプ又は発現変種（ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｖａｒｉｅｔｙ）の中で、類内膜子宮内膜癌（ＥＥＣ）はＥＣで最も一般的な組織構造であり、非類内膜ＥＣ症例（ＮＥＥＣ）と比較すると予後は良好である。ＮＥＥＣは全ＥＣ症例の約２０％に相当するが、ＥＣの再発及び死亡の５０％超を占めている。ＮＥＥＣの中で、漿液性ＥＣ（ＳＥＣ）は最も一般的なサブタイプである。転帰が異なるこれら２つの組織構造を区別するために利用できる検査はない。
ＤｅＳｏｕｚａ ＬＶ，ｅｔ ａｌ，"Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｔａｇｇｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ"， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ＭＣＰ−２００７，ｖｏｌ．ｎｏ．６，ｐｐ．：１１７０−８ Ｋｅｍｉｋ Ｐ， ｅｔ ａｌ．"Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＹＫＬ−４０，ＨＥ−４ａｎｄ ＤＫＫ−３ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ"，Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ−２０１６；ｖｏｌ．ｎｏ．１４０，ｐｐ．：６４−９
結論として、費やした労力にもかかわらず、高い感度と特異性で子宮内膜癌の診断及び予後さえも可能にするバイオマーカの必要性、特に臨床診療のためのバイオマーカの必要性が依然として存在する。
発明者らは、子宮液から単離したエクソソーム中に検出可能なあるタンパク質マーカによって、子宮内膜癌（ＥＣ）の貴重な診断情報を提供することを突き止めた。これらのタンパク質の多くは、エクソソーム画分を単離することなく、子宮液自体において検証された。したがって、このタンパク質は、子宮液中で分析した場合に、ＥＣと非癌対照を高い感度及び特異性で区別可能にする、有意義な診断バイオマーカである。
更に本発明者らは、子宮液及び子宮液のエクソソーム画分において検出できるいくつかのタンパク質が子宮内膜癌（ＥＣ）の有意義な予後バイオマーカであることを突き止めた。これらのタンパク質によって、子宮内膜癌のサブタイプを高い感度と高い特異性で区別できるようになるため、これらのサブタイプ間での偽陽性及び偽陰性の分類のリスクを最小限に抑えることができる。
更に、侵襲的診療なしで得られるサンプル中で、例えば更にＥＣ診断における通常のサンプルタイプである子宮液サンプル中で検出可能なタンパク質であることにより、ＥＣ患者分類及び管理の臨床診療における真の利点と改善が想定される。
発明者らは以前の研究で、子宮吸引物の液画分がＥＣタンパク質バイオマーカのスクリーニングに重要な価値を有することを示した（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｇａｒｃｉａ Ｅ，ｅｔ ａｌ．“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｗｏｒｋｆｌｏｗ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＬＣ−ＰＲＭ ｆｏｒ ｔｈｅ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｕｔｅｒｉｎｅ ａｓｐｉｒａｔｅ ｓａｍｐｌｅｓ”，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ−２０１６，ｖｏｌ．ｎｏ．７（３３），ｐｐ．：５３１０２−５３１１４を参照のこと）。この文献では、ＬＣ−ＰＲＭに基づいたシーケンシャルワークフロで実施された研究を示し、発見と臨床診療のギャップを埋めるバイオマーカ検証フェーズの重要性を示している。この研究は、非ＥＣ患者（対照）からＥＣ患者を診断するための２６のタンパク質の利点を強調した。
子宮液のエクソソーム中で同定されたＥＣの新たな診断バイオマーカに関して、本発明の一態様は、ＥＣの診断方法であって、本方法は、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
本発明の別の態様は、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＥＣを診断するためのインビトロマーカとしての、ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用である。この態様は、対象において１以上の子宮内膜癌マーカを検出するインビトロ法として構築することもでき、方法は、（ａ）女性生殖管から液体サンプルを取得すること、並びに（ｂ）女性生殖管からの子宮液サンプル中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６から選択される、ＥＣの診断の情報を与える、少なくとも１つの子宮内膜癌マーカの量をサンプル中で検出することを含む。一般に、女性生殖管から単離された子宮液サンプル中の子宮内膜癌を診断するためのインビトロマーカとしての、ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用が含まれる。
上掲の１以上のタンパク質を用いたＥＣの診断は、これらのタンパク質の発現レベルを判定する手段を含むキットを使用して行うことができる。このため、固体担体並びに１以上の以下のタンパク質ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６の発現レベルを検出する手段を含むキットも本発明の態様である。
本発明の別の態様は、ＥＣの診断のための、上記で定義したタンパク質の１以上を判定する手段を含むキットの使用である。
ＥＣの診断に関連する更なる態様は、ＥＣに罹患した疑いのある対象を同定する方法であって、
ａ）女性の子宮液サンプル中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＣＬＩＣ１、ＢＣＡＭ及びＫＰＹＭからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルをインビトロで判定するステップ、
ｂ）子宮液から分離されたエクソソーム含有画分中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＴＥＲＡ、ＲＵＶＢ１、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＳＭＤ３、ＡＤＡ１０、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＬ１１、ＩＭＢ１、ＡＧＲ２、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＲＬ１２、ＰＳＭＤ２、ＭＸ１、ＶＰＳ３５、ＩＬＦ２、ＰＤＩＡ１、ＡＮＸＡ４、ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ、ＳＨ３Ｌ３、ＲＬ２９、ＰＬＤ３、ＰＰＩＡ、ＡＮＸＡ２、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルをインビトロで任意に判定するステップ、並びに
ｃ）ステップ（ａ）のレベル及び任意にステップ（ｂ）のレベルを基準対照レベルと比較するステップを含み、ステップ（ａ）にて判定されたレベル及び任意にステップ（ｂ）にて判定されたレベルが基準対照レベルよりも高い場合、対象が子宮内膜癌に罹患している疑いがあることを示す、方法を提供する。
更なる態様において、本発明は、子宮内膜癌に罹患している疑いのある対象の医療レジメンを開始するか否かを決定又は推奨する方法であって、
ａ）女性の子宮液サンプル中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９及びＫＰＹＭからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルをインビトロで判定するステップ、
ｂ）子宮液から分離されたエクソソーム含有画分中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＴＥＲＡ、ＲＵＶＢ１、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＳＭＤ３、ＡＤＡ１０、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＬ１１、ＩＭＢ１、ＡＧＲ２、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＲＬ１２、ＰＳＭＤ２、ＭＸ１、ＶＰＳ３５、ＩＬＦ２、ＰＤＩＡ１、ＡＮＸＡ４、ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ、ＳＨ３Ｌ３、ＲＬ２９、ＰＬＤ３、ＰＰＩＡ、ＡＮＸＡ２、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３及びＣＤ１６６からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルをインビトロで任意に判定するステップ、並びに
ｃ）ステップ（ａ）のレベル及び任意にステップ（ｂ）のレベルを基準対照レベルと比較するステップを含み、ステップ（ａ）にて判定されたレベル及び任意にステップ（ｂ）にて判定されたレベルが基準対照レベルよりも高い場合、対象が子宮内膜癌に罹患している疑いがあることを示し、
ｉ）対象が子宮内膜癌に罹患している、又は子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断された場合、医療レジメンの開始が推奨される、及び
ｉｉ）患者が子宮内膜癌に罹患していないと診断された場合、医師による患者の検査結果を考慮して、フォローアップが任意に実施される、
方法を提供する。
検査サンプルのマーカレベルを判定することにより、サンプルで検出されたレベルが疾患の伸展（即ち重症度）を反映し得るため、当業者は更に、どれが推奨できる最も適切な治療法であるかを確定することができる。
子宮液中のＥＣの新しい予後バイオマーカに関連して、本発明の第１の態様は、子宮内膜癌の鑑別診断の方法であって、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＣＴＮＢ１の発現レベルを判定することを含む方法である。
別の態様は、子宮内膜癌の予後の方法であって、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを含む方法である。
該方法が重要な診断及び予後情報を与えるのは、ＥＣの２つの異なる組織学的症状発現、即ち類内膜子宮内膜癌（ＥＥＣ）と非類内膜子宮内膜癌（ＮＥＥＣ）が鑑別可能であるので、正確な予後診断が可能となるためであり、ＥＥＣはより良好な、起こりがちな転帰（即ち、より良い予後）である。言い換えれば、子宮液サンプル中のタンパク質の判定により、ＥＥＣとＮＥＥＣを鑑別診断することができる。
以下の例に示すように、上述のタンパク質により、ＥＥＣに罹患した患者及びＮＥＥＣに罹患した患者による単離サンプルにて、タンパク質が差次的に発現したという点で、ＥＣの診断又はＥＣの正確な予後のいずれも可能となった。診断的価値のあるタンパク質は、非ＥＣサンプル（健常対照）との関係において、ＥＣ対象の子宮液サンプルにおける差次的発現のために、差次的に検出することができる。ＮＥＥＣ腫瘍にて増加したＣＡＰＧを除き、ＮＥＥＣサブタイプのレベルと比較して、ＥＥＣサブタイプでは予後値を有するタンパク質が有意に増加した。そのためそのタンパク質によって、最も一般的な組織学的サブタイプの腫瘍の分類が可能となった。そのタンパク質はこのため、診断、予後及び／又は術前リスク評価を改善するための、並びに最適な外科的治療の予測を支援するための有用なツールである。以下にまた示すように、ＥＣサンプルと非ＥＣサンプルを正確な区別が可能であり、ＥＣ組織型（０．９９のＡＵＣ）も正確に区別する、これら及び他のタンパク質を含むいくつかのタンパク質パネル（タンパク質の組合せ）が開発されている。これらのパネルを組織病理学的検査と組合せると、より侵襲的な診断サンプリングが必要なくなり、ＥＣ患者の最適な外科的治療を予測する助けとなることが期待される。
したがって、一般的には、本発明の一態様は、子宮内膜癌（ＥＣ）の予後の方法であって、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを含む、方法である。
本発明の第２の態様は、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＥＣの予後を判定するためのインビトロマーカとしてのＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用である。この態様は、対象における１以上の子宮内膜癌マーカを検出するためのインビトロ法であって、（ａ）女性生殖管から液体サンプルを取得するステップ、並びに（ｂ）サンプル中でＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１から選択される少なくとも１つの子宮内膜癌マーカの量を検出するステップであって、マーカがＥＥＣ及びＮＥＥＣの鑑別診断の情報を与える、ステップを含む方法として構築することもできる。一般に、女性生殖管からの単離された子宮液サンプル中の子宮内膜癌の予後を判定するためのインビトロマーカとしてのＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用が含まれる。
第３の態様において、本発明は、第１の態様の方法における子宮内膜癌の予後のための、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用を提供する。即ち、タンパク質はＥＥＣとＮＥＥＣを鑑別診断するために使用される。
重要なことには、本発明のタンパク質バイオマーカの目的は、病院で広く利用可能な免疫化学、化学発光アッセイ又はＥＬＩＳＡなどの簡単で低コストの方法により評価できる。結果として、これらのタンパク質バイオマーカは、日常的な臨床診断及び／又は予後キットとして容易に実装でき、医療制度のコストが低減される。加えて、本発明により提供されるバイオマーカに基づく診断キット検査は、診断及び予後の現在の方法を改善することができ、子宮吸引物に疾患の貴重な診断及び予後情報を与える能力を付与する。
したがって、第４の態様において、本発明は、ＥＣの予後のためのキットの使用を提供し、該キットは、固体担体並びに以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１以上の発現レベルを検出する手段、並びに任意に以下のタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルを検出する手段を含む。
本態様は、ＥＣの予後で使用するための、固体担体並びに以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１以上の発現レベルを検出する手段、並びに任意に以下のタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルを検出する手段を含むキットとして構築することもできる。
本発明の方法及び使用の実施を容易にする新しいキットが開発されている。このため、第５の態様において、本発明は、固体担体並びにＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含むキットも提供する。
追加の態様は、固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ；ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含むキットである。
追加の態様において、本発明は、本発明の第１の態様の方法における子宮内膜癌の予後のための、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１の発現レベルを判定する手段の使用を提供する。このため、これはＥＥＣとＮＥＥＣの鑑別診断のための手段である。本発明の第１の態様の方法における子宮内膜癌の予後のための、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１の発現レベルを判定する手段及び任意にＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡの発現レベルを判定する手段の使用も提供される。
更なる態様において、本発明は、ＮＥＥＣのＥＥＣを鑑別診断することによって、子宮内膜癌に罹患している疑いのある対象を同定する、及び更にＥＣサブタイプを同定する方法であって、
ａ）対象の女性生殖管の子宮液サンプル中のＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベル並びに任意にタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡの１以上のタンパク質の発現レベルをインビトロで判定するステップ、並びに
ｂ）ステップ（ａ）のレベルを基準対照レベルと比較するステップであって、ステップ（ａ）で判定したレベルがＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１の基準対照レベルよりも高く、ＣＡＰＧの基準対照レベルよりも低い場合、対象がＮＥＥＣに罹患している及びＥＥＣに罹患している疑いがあることを示す、ステップ、を含む方法を提供する。
本発明のこの態様において、基準対照レベルは、非ＥＣ及びＮＥＥＣサンプルから不明瞭に選択される。上で明るみになったように、ＣＡＰＧを除いて、ＥＥＣの発現レベルはＮＥＥＣの発現レベルよりも高い。更に、ＣＡＤＨ１、ＣＡＰＧ、ＣＴＮＢ１及びＣＤ４４のレベルも、非ＥＣ（癌なし）対照サンプルよりも高い。
更なる態様において、本発明は、予後の機能における、子宮内膜癌に罹患している対象の医療レジメンを開始するか否かを決定又は推奨する方法であって、
ａ）対象の女性生殖管からの子宮液サンプル中の、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベル及び任意にタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルをインビトロで判定するステップ、並びに
ｂ）検査サンプル中のタンパク質レベルがＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１の基準対照レベルよりも高く、及びＣＡＰＧの基準対照レベルよりも低い場合、ＥＥＣとＮＥＥＣを区別することによってＥＣの予後を確立するステップ、
を含み、
ｉ）対象が子宮内膜癌に罹患している、又は子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断され、対象がＥＥＣに罹患していると鑑別診断された場合、ＥＥＣの医療レジメンの開始が推奨され；
ｉｉ）対象が子宮内膜癌に罹患している、又は子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断され、対象がＮＥＥＣに罹患していると鑑別診断された場合、ＮＥＥＣの医療レジメンの開始が推奨され、及び
検査サンプルのマーカレベルを判定することにより、サンプル中で検出されたレベルが疾患の攻撃性を反映し得るため、当業者が更に、推奨できる最も好適な治療法を確立できる、方法を提供する。
最後に、本発明の別の態様は、上記の態様で定義された診断及び／又は予後の方法のいずれかを実施するためのアルゴリズムを提供することである。本発明の意味において、「アルゴリズム」という用語は、個々のサンプルを正しく分類するためのパンネル又は決定ダイヤグラム、予測子、及びデータの組合せの同義語でもある。
本発明の態様及び実施形態により、ＥＣの診断及び予後を、上記のＥＣの診断及び予後のバイオマーカの１以上を含む生体分子、タンパク質、抗体及び／又はｍＲＮＡの検出可能なレベルを評価する数学的アルゴリズムを、他の臨床パラメータと併せて、又は他の臨床パラメータから独立して使用して行って、健常な患者、子宮内膜の非悪性疾患の患者、 子宮内膜の前悪性疾患の患者、子宮内膜癌の患者に由来するものとして個々のサンプルを正しく分類することができ、又は上記のように、子宮内膜癌の特定の組織学的サブタイプを有する対象、特定の組織学的グレード若しくは病期を有する対象、若しくはＥＣの特定の分子サブタイプを有する対象に由来するものとして個々のサンプルを更に分類することができる。
分類アルゴリズムは、測定した特定のバイオマーカ又はバイオマーカのサブセットの量が特定のカットオフ数を上回るか下回るかの判定と同程度に容易であり得る。複数のバイオマーカを使用する場合、分類アルゴリズムは線形回帰式であり得る。又は、分類アルゴリズムは、いくつかの学習アルゴリズムのいずれかの積であってもよい。複雑な分類アルゴリズムの場合、コンピュータ、例えばプログラム可能なデジタルコンピュータを使用して、データに対してアルゴリズムを実行し、それによって分類を判定することが必要であり得る。どちらの場合でも、次いで例えばメモリドライブ若しくはディスクなどのコンピュータで読み取り可能な形式で、又は単に紙に印刷して、有形の媒体に状態を記録することができる。結果はコンピュータ画面に表示することもできる。このアルゴリズムは、診断及び／又は予後法として使用され、特に前の態様で開示した方法を実施するためのキットの一部である。
レベル、スコア、及び／又は計算値の関数におけるＥＣの診断及び／又は予後のためのタンパク質の１以上の発現レベルの判定後、前悪性病変及び／若しくはＥＣの罹患の有無の選択肢、並びに／又は異なるＥＣサブタイプ間の罹患の選択肢の間で決定がなされる。
図１は、ＮＥＥＣからＥＥＣを区別するマーカのＲＯＣ曲線を示し、具体的にはＮＥＥＣの症例は漿液性子宮内膜癌（ＳＥＣ）である。ＣＴＮＢ１、ＸＰＯ２、ＣＡＰＧそれぞれの感度及び特異性並びに３つの組合せ（又はタンパク質のパネル）を示す。
発明の詳細な説明
本出願において本明細書で使用される全ての用語は、別途記載しない限り、当分野で既知であるような通常の意味で理解されるものとする。本出願で使用するある用語の他のより具体的な定義は、後述の通りであり、明示的に定義された定義がより広い定義を提供しない限り、明細書及び請求項全体に均一に適用されるものである。
本発明は、女性生殖管液中の子宮内膜癌の診断及び予後のための新たなバイオマーカを提供する。
「診断」という用語は、当業者に既知である。「診断」は、本明細書で使用する場合、対象における特定の医学的状態の合併症若しくはリスクを認識するようになること、疾患若しくは状態の性質を判定すること、又は、ある疾患若しくは状態を別のものと区別することとして理解される。これは、考えられる疾患又は障害を判定又は同定しようとする方法、及びその方法によって到達した意見の両方を示す。診断は、診断手順の意味で、治療及び予後に関する医学的決定を可能にする別個の異なるカテゴリに、個人の状態を分類する試みとみなすことができる。続いて、診断上の意見は、疾患又は他の状態の観点から説明されることが多い。しかし、診断は多くの形をとることができる。診断は、存在を検知し、疾患、病変、機能不全又は障害を命名することであり得る。診断は、あるカテゴリを管理又は予後のためカテゴリに帰属させる作業であり得る。診断は、連続体の異常の程度又は分類上の異常の種類のいずれのどちらかを示し得る。一般に、本明細書に記載する診断マーカは、子宮内膜癌サンプル（複数のＥＣ型を含む）に対する対照の単離サンプル（非癌個人）において、レベル発現で差次的に検出されるタンパク質である。
本発明の第１の態様のインビトロ方法は、（ａ）無症候性対象、（ｂ）子宮内膜癌に罹患している疑いがあると既に同定されている対象、（ｃ）相補的な確定診断アッセイ時に子宮内膜癌と既に診断されている対象又は（ｄ）疾患に罹患するリスクの高い対象のサンプルを用いて行うことができる。
本発明において、本発明の態様のいずれかの方法において言う「基準対照レベル」という用語は、所与の分子マーカ又は所与の分子マーカの組合せの、この場合、第１又は第２の態様並びに詳細な実施形態に挙げたタンパク質のいずれかの、所定の値として理解されるべきであり、この値はサンプル又はサンプルグループ中の分子マーカ又は複数のマーカのレベルから誘導される。発現レベルがタンパク質レベルで判定される場合、「基準発現レベル」はタンパク量の所定値であるのに対して、発現レベルがｍＲＮＡレベルで判定される場合、「基準発現レベル」は、ｍＲＮＡ量の所定値である。サンプルは、疾患の存在、非存在、病期、組織学的サブタイプ若しくはグレード又は経過が以前に適切に行われた対象又は対象のグループから採取される。この値は、特に疾患の組織学的サブタイプ、子宮内膜癌の発生又は罹患のリスクを判定するために、分析される状態が存在する対象をそのような状態が存在しない対象から（即ち、子宮内膜癌を有する対象を子宮内膜癌のない対象から）区別するための閾値として使用される。この基準対照レベルは、対象の医療レジメン開始の必要性及びレジメンの有効性を判定するのにも有用である。「基準対照レベル」が得られる１名以上の対象は、状態が存在しない１名以上の対象、状態が存在する１名以上の対象又はその両方を含み得る。一般知識を利用する当業者は、本発明の各方法の基準対照レベルを得るためにより適切な対象又は対象の群を選択することができる。選択された対象の群から基準値を得る方法は、最新技術において周知である（Ｂｕｒｔｉｓ Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｈａｐｔｅｒ１４，ｓｅｃｔｉｏｎ“Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｖａｌｕｅｓ”）。詳細な場合において、「基準対照レベル」は、従来のＲＯＣ分析（受信者操作特性分析、Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ）によって定義されたカットオフ値である。当業者によって認識されるように、最適なカットオフ値は、診断法又は予後法の特定の用途：目的、診断又は予後の対象集団、特異性と感受性のバランスなどに従って定義される。
「予後」とは、本明細書で使用する場合、疾患の起こり得る進行及び転帰の予測を示す。予後は、新生物の類別（増加する退形成が新生物の攻撃性と相関するとき、新生物における細胞の分化のレベルを反復可能な用語で表現しようとする試み）、新生物の病期分類（患者における新生物の程度を反復可能な用語で表現しようとする試み）、新生物の組織学的サブタイプ及び新生物の分子サブタイプを含む。予後とは、本明細書で使用する場合、詳細な実施形態において、類内膜子宮内膜癌と非類内膜子宮内膜癌との区別を意味する。
「女性生殖管からの液体サンプル」という用語は、女性生殖管の一部を形成する子宮器官により生成され、吸引、例えば真空吸引によって若しくはｃｏｒｎｉｅｒ ｐｉｐｅｌｌｅ及び／又は子宮腔から液体を回収する他の任意の方法によって採取された液体（即ち「子宮吸引物サンプル」）を示す。このため、サンプルは子宮洗浄液を含む。本発明により、流体の吸引は特に、以前の生理食塩水の注入ステップなしで行われる。即ち「吸引物」という用語には、子宮洗浄液から生じるサンプルは含まれない。
本発明において、「エクソソーム」は、「細胞外小胞」、「微小胞」、「エクソソーム様小胞」又は「ユーテロソーム（ｕｔｅｒｏｓｏｍｅ）」と互換的に呼ばれ、血液、尿及び細胞培養物の培養培地を含む多くの真核細胞液中に存在する、細胞由来小胞である。報告されているエクソソームの直径は３０〜１００ｎｍであり、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）よりも大きいが、例えば赤血球よりもはるかに小さい。エクソソームは、多小胞体が細胞膜と融合したときに細胞から放出されるか、又は細胞膜から直接放出される。エクソソームは、場合によっては診断、予後、治療に並びに健康及び疾患のバイオマーカとして使用することができる。「ＵＡから単離されたエクソソーム含有画分」は、主にエクソソームを含む子宮吸引物からの任意の精製画分として理解されるべきである。子宮吸引物からエクソソームを単離する方法の非限定的な例を以下に詳述する。
子宮液のエクソソームにて同定されたＥＣの新たな診断バイオマーカに関する態様の詳細な実施形態において、上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明の一態様は、サンプルが子宮液吸引物（ＵＡ）であるＥＣの診断方法である。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、ＥＣの診断方法の別の詳細な実施形態において、サンプルは、子宮吸引物（子宮液サンプル）から単離されたエクソソーム含有画分であり、該方法は、ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＴＥＲＡ、ＲＵＶＢ１、ＲＳＳＡ、ＲＳ１６、ＳＭＤ３、ＡＤＡ１０、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＬ１１、ＩＭＢ１、ＡＧＲ２、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＲＬ１２、ＰＳＭＤ２、ＭＸ１、ＶＰＳ３５、ＩＬＦ２、ＰＤＩＡ１、ＡＮＸＡ４、ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ、ＳＨ３Ｌ３、ＲＬ２９、ＰＬＤ３、ＰＰＩＡ、ＡＮＸＡ２、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３、及びＣＤ１６６からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
別の実施形態において、ＥＣの診断方法は、ＵＡから単離したエクソソーム含有画分中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＴＥＲＡ、ＲＵＶＢ１、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＳＭＤ３、ＡＤＡ１０、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＬ１１、ＩＭＢ１、ＡＧＲ２、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＲＬ１２、ＰＳＭＤ２、ＭＸ１、ＶＰＳ３５、ＩＬＦ２、ＰＤＩＡ１、ＡＮＸＡ４、ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ、ＳＨ３Ｌ３、ＲＬ２９、ＰＬＤ３、ＰＰＩＡ、ＡＮＸＡ２、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３、及びＣＤ１６６から選択される１以上のタンパク質の発現レベル、並びに女性生殖管からの子宮液サンプル中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、及びＫＰＹＭからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを含み、この後者のサンプルは、エクソソームの単離又は精製は行わない。
詳細な実施形態において、ＥＣの診断方法は、２以上のタンパク質、より詳細には３以上のタンパク質、更には４以上のタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
別の詳細な実施形態において、ＥＣの診断方法は、ＰＥＲＭ、ＯＳＴＰ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＸＰＯ２、ＮＧＡＬ、ＳＧ２Ａ１、ＣＡＤＨ１、ＳＰＩＴ１、ＭＭＰ９、ＮＡＭＰＴ、ＬＤＨＡ、ＣＡＳＰ３、ＰＲＤＸ１、ＭＩＦ、Ｋ２Ｃ８、ＣＡＰＧ、ＭＵＣ１、ＡＮＸＡ１、ＨＳＰＢ１、ＰＩＧＲ、ＣＨ１０、ＣＤ４４、ＣＬＩＣ１、ＴＰＩＳ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＥＮＯＡ、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＡＮＸＡ２、及びＦＡＢＰ５からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、別の詳細な実施形態において、ＥＣの診断方法は、ＵＡから単離されたエクソソーム含有画分中のＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１、ＴＥＲＡ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９、ＭＶＰ；ＡＧＲ２、ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６、ＭＶＰ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９；及びＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９からなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質（即ちバイオマーカ）の発現レベルを判定すること、並びに／又は子宮吸引物中のＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＳＳＡ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＶＡＭＰ８；ＭＭＰ９、ＭＸ１；ＭＭＰ９、ＲＳＳＡ；ＭＭＰ９、ＭＶＰ；ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＶＡＭＰ８；ＢＣＡＭ、ＭＭＰ９；ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質（即ちバイオマーカ）の発現レベルを判定することを含む。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、更に別の詳細な実施形態において、ＥＣの診断方法は、（本明細書の最後に示す）表Ｄのリストからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質（即ちバイオマーカ）の発現レベルを判定することを更に含む。
本発明の別の態様は、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＥＣを診断するためのインビトロマーカとしての、ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３、及びＣＤ１６６からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用である。この態様は、対象において１以上の子宮内膜癌マーカを検出するインビトロ法として構築することもでき、方法は、（ａ）女性生殖管から液体サンプルを取得すること、並びに（ｂ）女性生殖管からの子宮液サンプル中のＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３、及びＣＤ１６６から選択される、ＥＣの診断の情報を与える、少なくとも１つの子宮内膜癌マーカの量をサンプル中で検出することを含む。一般に、女性生殖管から単離された子宮液サンプル中の子宮内膜癌を診断するためのインビトロマーカとしての、ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＲＡＢ８Ａ、ＭＸ１、ＩＭＢ１、ＣＬＩＣ１、ＳＭＤ３、ＩＬＦ２、ＴＥＲＡ、ＲＬ１１、ＢＣＡＭ、ＡＮＸＡ２、ＬＡＴ１、ＲＵＶＢ１、ＳＨ３Ｌ３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＳ１６、ＲＳＳＡ、ＲＬ１２、ＰＤＩＡ１、ＲＬ２９、ＰＰＩＡ、ＡＧＲ２、ＭＭＰ９、ＫＰＹＭ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＡＤＡ１０、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＰＳＭＤ２、ＶＰＳ３５、ＡＮＸＡ４、ＰＬＤ３、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３、及びＣＤ１６６からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用が含まれる。
上掲の１以上のタンパク質を用いたＥＣの診断は、これらのタンパク質の発現レベルを判定する手段を含むキットを使用して行うことができる。診断キットの詳細な実施形態において、キットは、ＵＡから単離したエクソソーム含有画分からの以下のタンパク質ＡＧＲＩＮ、ＭＶＰ、ＴＡＣＤ２、ＦＡＳ、ＶＡＭＰ８、ＳＹＩＣ、ＳＯＲＴ、ＬＡＴ１、ＴＥＲＡ、ＲＵＶＢ１、ＲＳＳＡ、ＲＳ１６、ＳＭＤ３、ＡＤＡ１０、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＬ１１、ＩＭＢ１、ＡＧＲ２、ＩＴＡ３、ＲＵＸＥ、ＲＬ１２、ＰＳＭＤ２、ＭＸ１、ＶＰＳ３５、ＩＬＦ２、ＰＤＩＡ１、ＡＮＸＡ４、ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ、ＳＨ３Ｌ３、ＲＬ２９、ＰＬＤ３、ＰＰＩＡ、ＡＮＸＡ２、ＳＳＲＡ、ＬＡＭＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＣＤ５９、ＭＬＥＣ、ＰＧＢＭ、Ｓ１０ＡＣ、ＣＤ１４、Ｈ１０、ＣＤ８１、ＡＲ６Ｐ１、ＶＡＣ１４、ＩＴＢ３、及びＣＤ１６６の１以上の発現レベルを検出する手段を含む。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、別の詳細な実施形態において、キットは、以下のタンパク質ＰＥＲＭ、ＯＳＴＰ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＸＰＯ２、ＮＧＡＬ、ＳＧ２Ａ１、ＣＡＤＨ１、ＳＰＩＴ１、ＭＭＰ９、ＮＡＭＰＴ、ＬＤＨＡ、ＣＡＳＰ３、ＰＲＤＸ１、ＭＩＦ、Ｋ２Ｃ８、ＣＡＰＧ、ＭＵＣ１、ＡＮＸＡ１、ＨＳＰＢ１、ＰＩＧＲ、ＣＨ１０、ＣＤ４４、ＣＬＩＣ１、ＴＰＩＳ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＥＮＯＡ、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＡＮＸＡ２、及びＦＡＢＰ５の１以上の発現レベルを更に検出する手段を含む。
また別の更に詳細な実施形態において、キットは、詳細な予後情報を与え（即ち予後バイオマーカ）、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、ＬＤＨＡ、ＡＧＲ２、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む。
本発明の別の態様は、ＥＣの診断のための、上記で定義したタンパク質の１以上を判定する手段を含むキットの使用である。
キットの使用の別の詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルを検出する手段は、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である。
ここに挙げたすべてのタンパク質のＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号は、２０１７年７月７日にアクセス可能なバージョンに対応する。アクセッション番号を実施例の表に更に示す。
ＡＧＲＩＮのＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ００４６８である。このタンパク質は、神経筋接合部の形成と維持に関与するヘパリン硫酸基底膜糖タンパク質である。
ＭＶＰは、主要なヴォールトタンパク質としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１４７６４である。ＭＶＰはシグナル伝達に関与する。
ＶＡＭＰ８は、小胞関連膜タンパク質８としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ９ＢＶ４０である。ＶＡＭＰ８は、リソソーム膜とのオートファゴソーム膜融合の直接制御によるオートファジーに関与する可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体（ＳＮＡＲＥ）である。
ＳＹＩＣは、イソロイシン−ｔＲＮＡリガーゼとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ４１２５２である。
ＲＡＢ８Ａは、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ−８Ａとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６１００６である。ＲＡＢ８Ａは、細胞内膜輸送に関与する小型ＧＴＰアーゼＲａｂである。
ＭＸ１は、インターフェロン誘導ＧＴＰ結合タンパク質Ｍｘ１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ２０５９１である。ＭＸ１は、広範囲のＲＮＡウイルスと一部のＤＮＡウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。
ＩＭＢ１は、インポーチンサブユニットベータ１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１４９７４である。ＩＭＢ１は核タンパク質輸送に関与している。
ＳＭＤ３は、小型核リボ核タンパク質Ｓｍ Ｄ３としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６２３１８である。ＳＭＤ３はスプライソソームの成分である。
ＩＬＦ２は、インターロイキンエンハンサ結合因子２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１２９０５である。ＩＬＦ２はＩＬ２遺伝子の調節に関与している。
ＴＥＲＡは、移行性小胞体ＡＴＰアーゼとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ５５０７２である。このタンパク質は、移行性小胞体の形成に関与している。
ＲＬ１１は、６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ１１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６２９１３である。このタンパク質はリボソームの成分であるため、細胞内のタンパク質の合成に関与している。
ＢＣＡＭは、基底細胞接着分子としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ５０８９５である。このタンパク質は、ラミニンα−５受容体である。
ＡＮＸＡ２は、アネキシンＡ２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０７３５５である。このタンパク質は、ＰＳＣＫ９強化ＬＤＬＲ分解を阻害する、カルシウム調節性膜結合タンパク質である。
ＬＡＴ１は、大型中性アミノ酸トランスポータ小型サブユニット１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ０１６５０である。このタンパク質は、細胞のアミノ酸取り込みに関与している。
ＲＵＶＢ１は、ポンチン５２又はＩＮＯ８０複合体サブユニットＨとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ９Ｙ２６５である。このタンパク質は、主にヌクレオソームヒストンＨ４及びＨ２Ａのアセチル化による選択遺伝子の転写活性化に関与する、ＮｕＡ４ヒストンアセチルトランスフェラーゼ複合体の成分である。
ＳＨ３Ｌ３は、ＳＨ３ドメイン結合グルタミン酸リッチライクタンパク質３又はＳＨ３ドメイン結合タンパク質１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ９Ｈ２９９である。このタンパク質は、グルタレドキシン活性の調節に関与し得る。
ＲＰＬ１３Ａは、６０Ｓリボソームタンパク質としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ４０４２９である。ＲＰＬ１３Ａは炎症過程におけるインターフェロンγ誘発転写産物選択的翻訳阻害に関与している。
ＲＳ１６は、４０Ｓリボソームタンパク質Ｓ１６としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６２２４９である。
ＲＳＳＡは、４０Ｓリボソームタンパク質ＳＡ又はラミニン受容体１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０８８６５である。ＲＳＳＡは４０Ｓリボソームサブユニットの組立て及び／又は安定性に必要である。
ＲＬ１２は、６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ１２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ３００５０である。
ＲＬ２９は、６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ２９としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ４７９１４である。このタンパク質は、大型リボソームサブユニットの成分である。
ＰＰＩＡは、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼＡ、シクロフィリンＡ又はロタマーゼＡとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６２９３７である。このタンパク質は、タンパク質の折りたたみに関与している。
ＡＧＲ２は、前部勾配（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ）タンパク質２ホモログ又はＨＰＣ８としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ９５９９４である。このタンパク質は、ＭＵＣ２の転写後の合成と分泌に関与している。
ＰＯＤＸＬは、ポドカリキシン又はＧＣＴＭ−２抗原としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ００５９２である。ＰＯＤＸＬは接着、細胞形態及び癌の進行の調節に関与している。
ＣＤ５９は、ＣＤ５９糖タンパク質又はＭＡＣ阻害タンパク質としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１３９８７である。ＣＤ５９は、補体膜攻撃複合体（ＭＡＣ）作用の阻害に関与している。
ＴＡＣＤ２は、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２又は細胞表面糖タンパク質Ｔｒｏｐ−２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０９７５８である。このタンパク質は成長因子受容体として機能し得る。
ＦＡＳは、脂肪酸シンターゼとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ４９３２７である。ＦＡＳはアセチルＣｏＡ、マロニルＣｏＡ及びＮＡＤＰＨからの長鎖脂肪酸の形成に関与している。
ＳＯＲＴは、ソルチリン又はニューロテンシン受容体３としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ９９５２３である。このタンパク質は、ゴルジ体領域における選別受容体として、及び細胞表面のクリアランス受容体として機能する。
ＡＤＡ１０は、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１０としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ１４６７２である。ＡＤＡ１０はＴＮＦ−αの膜結合前駆体等、複数の細胞表面タンパク質のタンパク質分解放出に関与している。
ＰＧＢＭは、基底膜特異的ヘパラン硫酸プロテオグリカンコアタンパク質又はパールカンとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ９８１６０である。ＰＧＢＭは負の静電膜電荷及び血管新生の固定に関与している。
ＩＴＡ３は、インテグリンα−３又はＶＬＡ−３サブユニットαとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ２６００６である。ＩＴＡ３はフィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、エピリグリン、トロンボスポンジン及びＣＳＰＧ４の受容体である。
ＲＵＸＥは、小型核リボ核タンパク質Ｅとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６２３０４である。このタンパク質は、ヒストン３´末端プロセシングに関与している。間接的に発毛に関与し得る。
ＰＳＭＤ２は、２６Ｓプロテアソームの非ＡＴＰアーゼ調節サブユニット２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１３２００である。ＰＳＭＤ２はユビキチン化タンパク質のＡＴＰ依存性分解に関与している。
ＶＰＳ３５は、液胞タンパク質選別関連タンパク質３５としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ９６ＱＫ１である。ＶＰＳ３５は、選択された膜貫通型カーゴタンパク質のリソソーム分解経路への誤選別の防止に関与している。
ＡＮＸＡ４は、アネキシンＡ４又はリポコルチンＩＶとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０９５２５である。ＡＮＸＡ４は膜融合関連過程及びエキソサイトーシスに関与している。
ＰＬＤ３は、ホスホリパーゼＤ３又はコリンホスファターゼ３としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ８ＩＶ０８である。このタンパク質は、ＡＰＰプロセシングに関与し得る。
Ｓ１０ＡＣは、タンパク質Ｓ１００−Ａ１２又はカルグラニュリン−Ｃとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ８０５１１である。このタンパク質は、炎症過程及び免疫応答の調節に関与している。
ＣＤ１４は、単球分化抗原ＣＤ１４としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０８５７１である。このタンパク質は、細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）に対する自然免疫応答に関与する、細菌性ＬＰＳの共受容体である。
ＬＡＭＰ２は、リソソーム関連膜糖タンパク質２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１３４７３である。ＬＡＭＰ２はシャペロン介在性オートファジーに関与している。
ＣＬＤ６は、クローディン−６又はＳｋｕｌｌｉｎとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ５６７４７である。ＣＬＤ６は、細胞間空間のタイトジャンクション特異的閉塞に関与している。
ＩＦ２Ｂ３は、インスリン様成長因子２ｍＲＮＡ結合タンパク質３又はＶＩＣＫＺファミリーメンバー３としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ００４２５である。ＩＦ２Ｂ３は細胞質タンパク質−ＲＮＡ複合体への標的転写物の補充に関与している。
ＭＬＥＣは、マレクチンとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１４１６５である。このタンパク質は、タンパク質Ｎ−グリコシル化の初期段階に関与している。
Ｈ１０は、ヒストンＨ１．０又はヒストンＨ１’としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０７３０５である。このタンパク質は、ヌクレオソーム鎖の高次構造への縮合に関与している。
ＣＤ１６６は、ＣＤ１６６抗原としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１３７４０である。ヘテロ型及びホモ型の細胞間接触の両方に関与している。
ＣＤ８１は、ＣＤ８１抗原又はテトラスパニン−２８としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６００３３である。このタンパク質は、リンパ腫細胞増殖の調節に関与し得る。
ＡＲ６Ｐ１は、ＡＤＰリボシル化因子様タンパク質６−相互作用タンパク質１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１５０４１である。このタンパク質は、ＳＬＣ１Ａ１／ＥＡＡＣ１介在性グルタミン酸輸送に関与している。
ＶＡＣ１４は、タンパク質ＶＡＣ１４ホモログ又はＴａｘ１結合タンパク質２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ０８ＡＭ６である。このタンパク質は、初期のエンドソームからのエンドソーム担体小胞（ＥＣＶ）／多胞体（ＭＶＢ）輸送中間体の生合成に関与している。
ＩＴＢ３は、インテグリンβ−３としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０５１０６である。このタンパク質は、特にフィブロネクチン、ラミニン又はオステオポンチン（ｏｓｔｏｅｏｐｏｎｔｉｎ）等のいくつかのリガンドに対する細胞受容体を形成するため、細胞シグナル伝達に関与している。
ＰＩＧＲは、高分子免疫グロブリン受容体としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０１８３３、２００７年６月２６日−ｖ４である。この受容体は上皮細胞の基底外側表面で高分子ＩｇＡ及びＩｇＭに結合する。
ＶＩＭＥは、ビメンチンとしても既知であり、多様な非上皮細胞、特に間葉細胞に見られるクラスＩＩＩ中間体フィラメントである。ビメンチンは、核、小胞体及びミトコンドリアに側方又は末端のどちらで結合する。ビメンチンのＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０８６７０、２００７年１月２３日−ｖ４である。
ＣＴＮＢ１は、カテニンβ−１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ３５２２２、１９９４年２月１日−ｖ１である。ＣＴＮＢ１は中心体凝集の負の調節因子として作用し、悪性腎臓及び腸上皮細胞のアノイキスを遮断する。
ＣＡＹＰ１は、カルシフォシンとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１３９３８、１９９７年１１月１日−ｖ１である。ＣＡＹＰ１は、細胞シグナル伝達イベントで役割を果たし得るカルシウム結合タンパク質である。
ＷＦＤＣ２、即ちＷＡＰ４−ジスルフィドコアドメインタンパク質２は、精巣上体分泌タンパク質Ｅ４としても既知である、広範囲のプロテアーゼ阻害剤である。ＷＦＤＣ２のＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ１４５０８ ２００２年１月２３日−ｖ２である。
ＣＡＤＨ１は、カドヘリン−１又はＥ−カドヘリンとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１２８３０、１９９３年７月１日−ｖ３である。このタンパク質は、上皮細胞の細胞間接着、移動性及び増殖を調節する機構に関与している。強力な浸潤サプレッサの役割を有する。
ＣＤ４４は、ＣＤ４４抗原としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１６０７０、２０１０年１０月５日−ｖ３である。ＨＡに対する親和性によって、並びにおそらくオステオポンチン、コラーゲン、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）などの他のリガンドに対する親和性によって、細胞間相互作用及び細胞マトリックス間相互作用に介在する。
ＸＰＯ２は、エクスポーチン−２としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ５５０６０、２００５年３月２９日−ｖ３である。このタンパク質はとりわけ、インポーチン−αの受容体を搬出し、基質（カーゴ）搬入後に核から細胞質へのインポーチン−αの再搬出に介在し、その活性ＧＴＰ結合形でインポーチン−α及びＧＴＰアーゼＲａｎに協同的に結合するとして開示されている。
ＳＧ２Ａ１は、マンマグロビンＢとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ７５５５６、１９９８年１１月１日−ｖ１である。ＳＧ２Ａ１はアンドロゲンや他のステロイドに結合し得る。
ＥＮＯＡは、α−エノラーゼとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０６７３３、２００７年１月２３日−ｖ２である。ＥＮＯＡは、解糖におけるその役割と同様に、成長調節、低酸素耐性及びアレルギー反応などの多様な過程で役割を果たす多機能酵素である。白血球やニューロンなどの複数の細胞型の細胞表面でプラスミノーゲンの受容体及び活性化剤として機能するその能力のために、血管内及び細胞周囲の線維素溶解系でも機能し得る。免疫グロブリンの産生を刺激する。
ＬＥＧ３は、ガレクチン−３（ｇａｌｅｃｔｉｎ−３）として既知であり、ガレクチン−３（Ｇａｌｅｃｔｉｎ−３）とも呼ばれ、ＩｇＥに結合するガラクトース特異的レクチンである。内皮細胞遊走のＣＳＰＧ４による刺激に、α−３，β−１インテグリンによって介在し得る。ＤＭＢＴ１とともに、（類似性により）初期胚形成中の円柱上皮細胞の最終分化に必要とされる。核内では、ｐｒｅ−ｍＲＮＡスプライシング因子として作用する。好中球の活性化及び接着、単球マクロファージの化学誘引、アポトーシス好中球のオプソニン作用及びマスト細胞の活性化を含む急性炎症反応に関与する。Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１７９３１、２００８年１１月２５日−ｖ５である。
ＬＥＧ１は、タンパク質のＬＥＧ１ホモログとしても既知であり、初期肝臓発生に関与する。Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０９３８２、２００５年３月２９日−ｖ２である。
ＣＡＰＧは、マクロファージキャッピングタンパク質としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号は、Ｐ４０１２１、２０１０年１１月３０日−ｖ２である。ＣＡＰＧは、アクチンフィラメントの反矢尻端を可逆的に遮断するが、事前に形成されたアクチンフィラメントは切断しない、カルシウム感受性タンパク質である。ＣＡＰＧは、マクロファージ機能で重要な役割を果たし得る。
ＰＲＤＸ１は、ペルオキシレドキシン−１としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＱ０６８３０、１９９４年６月１日−ｖ１である。ＰＲＤＸ１は細胞の酸化還元調節に関与している。
ＣＬＩＣ１は、塩化物細胞内チャネルタンパク質１としても既知であり、ＣＬＩＣ１のＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＯ００２９９、２００７年１月２３日−ｖ４である。ＣＬＩＣ１は膜中に挿入され、塩化物イオンチャネルを形成する。チャネルの活性はｐＨに依存する。膜挿入は酸化還元調節されていると思われ、酸化条件下でのみ発生し得る。細胞周期の調節に関与している。
ＰＤＩＡ１は、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０７２３７、１９９７年１１月１日−ｖ３である。ＰＤＩＡ１は、ジスルフィド結合の形成、破壊及び転位を触媒する。
ＫＰＹＭは、ピルビン酸キナーゼＰＫＭとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１４６１８、２００７年１月２３日−ｖ４である。ＫＰＹＭは、ホスホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）からＡＤＰへのホスホリル基の移動を触媒してＡＴＰを生成し、腫瘍細胞のカスパーゼ非依存性細胞死において一般的な役割を果たす解糖系酵素である。
ＧＳＴＰ１は、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＰとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ０９２１１、２００７年１月２３日−ｖ２である。ＧＳＴＰ１はｐ２５／ｐ３５転座を介してＣＤＫ５活性を負に調節して、神経変性を防止する。
ＧＴＲ１のＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１１１６６、２００６年１０月３日−ｖ２である。ＧＴＲ１は促進性グルコース輸送体である。このアイソフォームは、構成的又は基礎的グルコース取り込みを担い得る。ＧＴＲ１は基質特異性が非常に広く、ペントース及びヘキソースの両方を含む広範囲のアルドースを輸送できる。
ＣＨ１０は、ミトコンドリアの１０ｋＤａ熱ショックタンパク質としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６１６０４、２００７年１月２３日−ｖ２である。ＣＨ１０はＣＰＮ６０とともに、ミトコンドリアのタンパク質生合成に不可欠である。Ｍｇ−ＡＴＰの存在下でＣＰＮ６０に結合し、Ｍｇ−ＡＴＰのＡＴＰアーゼ活性を抑制する。
ＭＩＦは、マクロファージ遊走阻害因子としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ１４１７４、２００７年１月２３日−ｖ４である。ＭＩＦは、細菌性病原体に対する自然免疫応答に関与している
ＰＥＢＰ１、即ちホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質１は、ＡＴＰ、オピオイド、ホスファチジルエタノールアミンに結合する。ＰＥＢＰ１は、トロンビン、ニューロプシン及びキモトリプシンを阻害するが、（類似性により）トリプシン、組織型プラスミノーゲン活性化因子及びエラスターゼを阻害しないセリンプロテアーゼ阻害剤である。ＲＡＦ１のキナーゼ活性を、その活性化を阻害することにより、及びＲＡＦ１／ＭＥＫ複合体を解離することにより、ＭＥＫリン酸化の競合阻害剤として作用して阻害する。ＲＡＦ１のＵｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ３００８６、２００７年１月２３日−ｖ３である。
ＴＰＩＳは、トリオースリン酸イソメラーゼとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ６０１７４、２０１１年１０月１９日−ｖ３である。このタンパク質は、炭水化物生合成の一部である糖新生経路に関与している。
ＮＧＡＬは、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンとしても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ８０１８８、１９９５年１１月１日−ｖ２である。ＮＧＡＬはインターロイキン３（ＩＬ３）欠乏によるアポトーシス及び自然免疫に関与している。
ＬＤＨＡは、Ｌ−乳酸デヒドロゲナーゼＡ鎖としても既知であり、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースアクセッション番号はＰ００３３８、２００７年１月２３日−ｖ２である。このタンパク質は、ピルビン酸から（Ｓ）乳酸塩を合成するサブ経路のステップ１に関与している。
これらのタンパク質のいくつかは、組織サンプルにおけるＥＣの段階に関連付けられている。しかし、女性生殖管の子宮液サンプルの値と相関する有意なデータはない。上記で明らかになったように、子宮液（吸引物又は洗浄液）中のマーカの検出によって、婦人科疾患の臨床診療における日常的なサンプリングからデータを収集する利点が示され、コスト、そして重要なことには組織生検が回避される。
上記のように、本発明は、第１の態様として、子宮内膜癌の鑑別診断の方法であって、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＣＴＮＢ１の発現レベルを判定することを含む、方法も目的とする。
子宮内膜癌の鑑別診断方法の詳細な実施形態において、子宮液サンプルは、女性生殖管からの子宮吸引液サンプルである。
別の詳細な実施形態において、本方法は、以下のタンパク質：ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮ、ＣＡＰＧ、ＨＳＰＢ１、及びＸＰＯ２の１以上の発現レベルを判定することを更に含む。
更に別の詳細な実施形態において、以下のタンパク質：ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１の１以上の発現レベルを更に判定することを含む。
子宮内膜癌の鑑別診断方法の別の詳細な実施形態において、以下のタンパク質：ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１ 、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＬＤＨＡ、ＰＥＲＭ、ＯＳＴＰ、ＳＰＩＴ１、ＮＡＭＰＴ、ＣＡＳＰ３、Ｋ２Ｃ８、ＭＵＣ１、ＡＮＸＡ１、ＡＮＸＡ２、ＦＡＢＰ５、及びＷＦＤＣ２の１以上の発現レベルを判定することを更に含む。
更に、別の詳細な実施形態において、方法は、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１つのタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む。
別の詳細な実施形態において、方法は、子宮吸引物から単離されたエクソソーム含有画分におけるＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む。
更に、別の詳細な実施形態において、方法は、
ＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む。
本方法の別の詳細な実施形態において、子宮内膜癌の鑑別診断は、類内膜子宮内膜癌を非類内膜子宮内膜癌及び非癌と区別することによって判定される。
方法の別の詳細な実施形態において、発現レベルはタンパク質レベルで判定される。
より詳細な実施形態において、タンパク質レベルは、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術によって判定される。
別の詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルは、そのタンパク質に結合することができる抗体又はそのフラグメントを使用して判定される。
より詳細には、抗体又はそのフラグメントはキットの一部を形成する。
指摘するように、本発明の別の態様は、女性生殖管からの子宮液サンプル中の子宮内膜癌の予後を判定するためのインビトロマーカとしてのＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用である。より詳細には、少なくともＣＴＮＢ１の発現レベルの使用である。
本発明は、態様及び実施形態のいずれか１つの方法における、子宮内膜癌の予後のための、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用にも関する。
別の態様は、子宮内膜癌の予後診断及び子宮内膜癌の鑑別診断のためのキットの使用でもあり、キットは、固体担体並びに以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１の１以上の発現レベルを検出する手段、並びに任意に以下のタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルを検出する手段を含む。
キットの使用の詳細な実施形態において、キットは、固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ；ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む。
キットの使用の詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルを検出する手段は、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である。
より詳細には、タンパク質の発現レベルを検出する手段は、抗体又はそのフラグメントである。
本発明の別の態様は、固体担体並びにＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、特に、少なくともＣＴＮＢ１の発現レベルを検出する手段を含むキットである。
別の態様は、固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含むキットである。
キットの詳細な実施形態において、キットは、
ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＳＳＡ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＶＡＭＰ８；ＭＭＰ９、ＭＸ１；ＭＭＰ９、ＲＳＳＡ；ＭＭＰ９、ＭＶＰ；ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＶＡＭＰ８；ＢＣＡＭ、ＭＭＰ９；ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１、ＴＥＲＡ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９、ＭＶＰ；ＡＧＲ２、ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６、ＭＶＰ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９；及び表Ｄに挙げるタンパク質のセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を更に含む。
キットのより詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルを検出する手段は、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である。
より詳細には、キットは、タンパク質の発現レベルを検出する手段として、抗体又はそのフラグメントを含む。
キットの別の詳細な実施形態において、キットは酵素結合免疫吸着アッセイを実施するためのキットである。
別の詳細な実施形態において、キットは、個々のサンプルを分類するためのパンネルダイヤグラムを更に含む。
本発明は、上で開示され、実施形態のいずれかで定義される鑑別診断の方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＥＣの診断及び／又は予後のためにタンパク質の１以上の発現レベルを判定した後、レベルに値及び／又はスコアが与えられ、計算値を得るために数式で任意に計算され、レベル、スコア及び／又は計算値の機能において、ＥＣに罹患している若しくは罹患していない選択肢の間で、及び／又は異なるＥＣサブタイプ間で罹患している選択肢の間で決定がなされる、方法にも関する。
上記のように、本発明は、別の態様として、ＥＣの予後のための方法も目的とする。本発明の第１の態様の詳細な実施形態において、本方法は、女性生殖管からの子宮液サンプル中のＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＬＥＧ１、及びＣＡＰＧの１以上の発現レベルを判定することを含む。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明のこの態様の別の詳細な実施形態において、子宮液サンプルは女性生殖管からの子宮吸引液サンプルである。
必要な操作は最小限であり、臨床的に意味のある情報が得られるため、子宮吸引物でタンパク質を差次的に検出できることが非常に有利である。
この態様の別の詳細な実施形態において、方法は、以下のタンパク質：ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、及びＣＡＤＨ１の１以上の発現レベルを判定することを含む。実施例で説明するように、この７つのタンパク質の１つのレベルを判定することによって、ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）０．７４〜０．８５（信頼区間９５％）のＥＣサブタイプの高感度かつ特異的な診断が可能となった。
発明者らは、子宮液、特に子宮吸引物中の他のタンパク質の発現レベルを検出することにより、ＥＣサブタイプの分類の、また疾患の診断の、頑健性（感度及び特異性）を改善できたと判断した。このため、上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、第１及び他の態様の別の詳細な実施形態において、方法は、以下のタンパク質：ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、ＣＡＰＧ、ＣＤ４４、ＬＥＧ１、ＬＥＧ３、及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルを判定することを更に含む。
より詳細には、方法は、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、ＣＡＰＧ、ＣＤ４４、ＬＥＧ１、ＬＥＧ３、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１つのタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明の第１及び他の態様の別の詳細な実施形態において、方法は、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される２つのタンパク質の発現レベルを判定することを含み、タンパク質の少なくとも１つは、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、及びＣＡＰＧからなる群から選択される。
別の詳細な実施形態において、方法は、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される２つのタンパク質の発現レベルを検出することを含む。
第１及び更なる方法の態様の別の詳細な実施形態において、方法は、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択される２つのタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明の第１及び更なる方法態様の別の詳細な実施形態において、方法は、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される３つのタンパク質の発現レベルを判定することを含み、タンパク質の少なくとも１つは、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、及びＣＡＰＧからなる群から選択される。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明の第１及び更なる方法態様の別の詳細な実施形態において、方法は、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される３つのタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
本発明の第１及び更なる方法の態様の別の詳細な実施形態において、方法は、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択される３つのタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
ＥＣの予後のための方法の別の詳細な実施形態において、方法は、子宮吸引物から単離されたエクソソーム含有画分におけるＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む。
発明者らは、エクソソームをより精製された形で含む子宮吸引物の画分中で、あるマーカ（タンパク質）がＥＥＣ及びＮＥＥＣにおいて差次的に発現したことを見出した。このため、本発明は、子宮液にて判定された予後を検証するための、又はエクソソームを単離せずに子宮液によって関連データが得られない場合の方法の感度上昇させるための、処理済み子宮吸引物（エクソソーム画分）中で特定のマーカを判定する任意のステップを含む。
より詳細な実施形態において、ＥＣの予後又は鑑別診断の方法は、ＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９，ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２，ＰＩＧＲ，ＰＬＤ３；ＡＧＲ２，ＢＣＡＭ，ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ；ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを判定することを含む。
ＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ，ＭＭＰ９，ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２，ＰＩＧＲ，ＰＬＤ３；ＡＧＲ２，ＢＣＡＭ，ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ，ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ，ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ，ＰＩＧＲ（下の表Ｂ）；並びに表Ｃに挙げるもの（明細書の最後に示す）から選択される特定の組合せは、子宮吸引物中のタンパク質の発現レベルが検出された際に、高い予後値で判定された。次の表Ｂは、ＡＵＣ及び９５％値の信頼区間（ＣＩ）を示す。データは、ＥＥＣ及びＮＥＥＣのサンプルの分析に由来する。表Ｃには、ＡＵＣ値も示す。
他方、表Ａは、以下の組合せＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３のＡＵＣ値及び９５％のＣＩを示し、子宮吸引物から単離されたエクソソーム含有画分でタンパク質の発現レベルが検出された際の重要な予後情報を与える。データは、ＥＥＣ及びＮＥＥＣのサンプルの分析に由来する。
より詳細な実施形態において、方法は、ＣＴＮＢ１、ＸＰＯ２、及びＣＡＰＧの発現レベルを判定することを含む。以下で説明及び図示（図１）説明するように、この組合せにより、ＥＥＣ対ＮＥＥＣ（漿液性ＥＣ；ＳＥＣ）の高感度で特異的な鑑別診断が可能となる。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明の第１及び更なる方法態様の別の詳細な実施形態において、方法は、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される４、５、６、７、８、９、１０、又は１１個のタンパク質の発現レベルを判定することを含み、タンパク質の少なくとも１つは、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、及びＣＡＰＧからなる群から選択される。
上記又は下記の任意の実施形態と任意に組合せた、本発明の第１及び更なる方法態様の別の詳細な実施形態において、方法は、以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、及びＣＤ５９の発現レベルを判定することを含む。
上記又は下記で与える実施形態のいずれかにおいて、本発明の態様のいずれについても、発現レベルはタンパク質レベルで判定される。本実施形態において、タンパク質マーカとしては、これに限定されるわけではないが、天然配列ペプチド、アイソフォーム、キメラポリペプチド、マーカのすべての相同体、フラグメント及び前駆体が挙げられ、ポリペプチド及びその誘導体の修飾型が含まれる。より詳細な実施形態において、タンパク質レベルは、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術によって判定される。
上記又は下記に与える詳細な実施形態において、発現のレベルは免疫化学によって決定される。
「免疫化学」という用語は、本明細書で使用する場合、サンプル中の抗原（通常はタンパク質及びペプチド、この場合は、単独の又は組合せた上記タンパク質のいずれか）を、抗原に特異的に結合する抗体の原理を利用することによって検出する、多様な技術を示す。抗体−抗原相互作用の描出は、いくつかの方法で実現できる。最も一般的な例では、抗体は、発色反応を触媒できるペルオキシダーゼなどの酵素に結合する。又は、抗体は、フルオレセイン又はローダミンなどのフルオロフォアにタグ付けすることもできる。免疫化学的技法は直接的又は間接的であることができる。直接法はワンステップ染色法であり、抗原と直接反応する標識抗体（例えばＦＩＴＣ結合抗血清）を使用する。この技法は抗体を１つのみを使用するため、簡単で迅速であるが、例えば間接法による、信号増幅がわずかであるため感度はより低く、間接法ほど一般的に使用されない。間接法には、サンプル中の標的抗原に結合する非標識１次抗体（第１層）と、１次抗体と反応する標識２次抗体（第２層）が含まれる。本方法は、２次抗体が蛍光又は酵素レポータに結合している場合、各１次抗体に複数の２次抗体が結合することによるシグナル増幅のため、直接検出法よりも高感度となる。
２次抗体が複数のビオチン分子に結合している場合、更なる増幅が可能となり、アビジン−酵素、ストレプトアビジン−酵素又はニュートラアビジン−酵素の複合体を補充することできる。間接法は、感度がより高いことは別として、生成する必要があるのは比較的少数の標準的な結合（標識）２次抗体のみであるという利点もある。直接法では、対象となるすべての抗原に対して１次抗体をそれぞれ標識することが必要となる。（ある標的核酸配列に特異的に結合するように設計された）タグ付き核酸プローブを標識抗体によって後に検出可能である場合、免疫化学技法を使用してある核酸配列の検出も可能であることに留意する必要がある。このため、タンパク質の検出は、標的タンパク質ＲＮＡの特定の配列に結合するように設計されたタグ付き核酸を使用し、次に、タグに選択的に結合する標識抗体によってタグ付き核酸を検出することによって行うことができる。
好適なイムノアッセイ処置としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ、例えばマルチプレックスＥＬＩＳＡ）、酵素イムノドットアッセイ、凝集アッセイ、抗体−抗原−抗体サンドイッチアッセイ、抗原−抗体−抗原サンドイッチアッセイ、イムノクロマトグラフィー（ｉｍｍｕｎｏｃｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）又は当業者に周知の他のイムノアッセイ形式、例えばラジオイムノアッセイ並びにタンパク質マイクロアレイ形式が挙げられる。
上記又は下記に与える実施形態のいずれかと組合せた、一実施形態において、タンパク質の発現レベルは、イムノアッセイによって判定される。
上記又は下記に与える実施形態のいずれかと組合せた、別の実施形態では、タンパク質の発現レベルはＥＬＩＳＡ、特にマルチプレックスＥＬＩＳＡによって判定される。
又は、タンパク質の発現レベルは、生物発光、蛍光、化学発光、電気化学又は質量分析によって判定することができる。
又は、タンパク質の発現レベルは、タンパク質のプロテオタイプペプチド（所与のプロテオームにおける試験を行ったタンパク質に一意に関連付けられたアミノ酸配列を有するペプチド）のレベルを質量分析によって測定することによって判定することができる。
上記又は下記に与える実施形態のいずれかと組合せた、別の実施形態において、タンパク質の発現レベルは、標的タンパク質に結合することができる抗体又はそのフラグメントを使用して判定される。
「標的タンパク質に結合することができる抗体又はそのフラグメント」という用語は、標的タンパク質に選択的に結合することができる免疫グロブリン又はそのフラグメントとして理解されるべきである。この用語には、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体が含まれる。「そのフラグメント」という用語は、標的タンパク質のエピトープへの結合に好適なサイズ及び構造を有する抗体の任意の部分を含む。好適なフラグメントとしては、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）及びＦｖが挙げられる。「エピトープ」は、免疫系（Ｂ細胞、Ｔ細胞又は抗体）によって認識されている抗原の一部である。
特異的検出に使用される抗体は、ポリクローナル又はモノクローナルである。抗体の調製及びキャラクタリゼーションの最新技術において、周知の手段がある。ポリクローナル抗体を生成する方法は、先行技術において周知である。簡潔には、動物をタンパク質で免疫することによってポリクローナル抗体を調製し、次に免疫動物の血清を収集し、抗体を単離する。抗血清の作製には、広範囲の動物種を使用できる。通例、抗血清の作製に使用される動物は、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット又はヤギであり得る。
更に、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）は、周知の技法を使用して調製することができる。通例、この処置は、疾患に関連するタンパク質によって好適な動物を免疫する。免疫化組成物は、抗体産生細胞の刺激に有効な量で投与することができる。モノクローナル抗体の調製方法は、一般に、ポリクローナル抗体の調製と同じ方針に従って開始される。免疫原は、抗原として動物に注入される。抗原は、完全又は不完全フロイントアジュバントなどのアジュバントと混合され得る。およそ２週間の間隔で、同じ抗原によって免疫を反復する。
第３の態様の別の詳細な実施形態において、本発明を実施する手段は、キットの一部を形成する。標的タンパク質を検出するための抗体又はそのフラグメントを、キットに含めることができる。キットは、抗体−タンパク質相互作用を描出する手段（添加剤、溶媒）を更に含み得る。
これらの抗体は、本発明の第５の態様において標的タンパク質の発現を判定するための「手段」として使用することができる。
このため、本発明の第１及び更なる方法の態様の詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルは、タンパク質に結合することができる抗体又はそのフラグメントを使用して判定される。
別の詳細な実施形態において、抗体又はそのフラグメントはキットの一部を形成する。
本発明の第１及び更なる方法の態様の下で、分析されるタンパク質（リストの２〜１１）に関する上記の全ての実施形態も、本発明の第２、第３、及び第４の態様の使用の詳細な実施形態である。
又は、発現レベルはｍＲＮＡレベルで判定される。
一実施形態において、マーカそれぞれのｍＲＮＡの量は、例えば１以上のポリヌクレオチド子宮内膜癌マーカ又はそのようなポリヌクレオチドの補体にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマーを使用する、ポリメラーゼ連鎖反応により検出される。他の実施形態では、ｍＲＮＡの量は、１以上のポリヌクレオチド子宮内膜癌マーカ又はそのようなポリヌクレオチドの補体にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを用いる、ハイブリダイゼーション技法を使用して検出される。
ｍＲＮＡ検出を使用する場合、方法は、当分野で周知の標準的な方法に従って、単離されたｍＲＮＡを試薬と組合せてｃＤＮＡに変換し、変換されたｃＤＮＡを、核酸プライマーの適切な混合物と共に容器内の増幅反応試薬（例えばｃＤＮＡ ＰＣＲ反応試薬）で処理して、容器の内容物を反応させて増幅産物を生成し、増幅産物を分析して、サンプル中の１以上のポリヌクレオチド子宮内膜癌マーカの存在を検出することによって行われ得る。ｍＲＮＡについては、サンプル中のポリヌクレオチド子宮内膜癌マーカの存在を検出するノーザンブロット分析を使用して、分析ステップが達成され得る。分析ステップは、増幅産物中のポリヌクレオチド子宮内膜癌マーカの存在を定量的に検出し、検出されたマーカの量を、同様のプライマーを使用して得た正常組織及び悪性組織中のそのようなマーカの既知の存在又は非存在に関する期待値のパネルと比較することによって、更に達成され得る。
別の実施形態において、本発明は、ｍＲＮＡが、（ａ）サンプルからｍＲＮＡを単離し、ｍＲＮＡを試薬と組合せ、ｍＲＮＡをｃＤＮＡに変換すること、（ｂ）変換されたｃＤＮＡを、増幅反応試薬及び１以上のポリヌクレオチド子宮内膜癌マーカにハイブリダイズする核酸プライマーによって処理して、増幅産物を産生すること、（ｃ）増幅産物を分析して、タンパク質子宮内膜癌マーカをコードするｍＲＮＡの存在量を測定すること、並びに（ｄ）ｍＲＮＡの測定量を、同様の方法を使用して得た正常組織及び病変組織（例えば悪性組織）の予測値のパネルに対して検出された量と比較することによって検出される方法を提供する。
本発明の詳細な実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲを使用して、検出及び分析のためのタンパク質子宮内膜癌マーカのｍＲＮＡを増幅することができる。本発明の他の実施形態は、定量的ＲＴ−ＰＣＲを使用して、タンパク質子宮内膜癌マーカのｍＲＮＡの量を定量的に測定する。本発明の更なる実施形態は、定量化及び分析のためにリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用する。
本発明のデバイス又はキットに関して、キットは、本発明の詳細な実施形態において、患者サンプルの分析のために提供される。このようなデバイス又はキットには、少なくともタンパク質のサブセットが上に挙げたタンパク質及び下に挙げる表Ａ〜Ｆから選択される、１以上のタンパク質を特異的に同定する試薬が含まれる。対象のデバイスとしては、スライド、ゲル、マルチウェルプレートなどの基質上で試薬が空間的に分離されるアレイが挙げられる。又は、試薬は、懸濁液又は懸濁性形態の試薬、例えばビーズに結合した試薬を含むキットとして提供され得る。対象の試薬としては、自己抗体マーカに特異的な試薬が挙げられる。そのような試薬としては、抗原性タンパク質又はペプチドなどが挙げられ得る。そのようなデバイス又はキットは、サイトカイン特異的抗体又はそのフラグメントなどを更に含み得る。
上記のように、本発明の一態様は、固体担体並びに以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１以上の発現レベルを検出する手段、並びに任意に以下のタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルを検出する手段を含むキットであって、ＮＥＥＣのＥＥＣを区別することによる子宮内膜癌の予後のためのキットの使用である。
キットの使用の詳細な実施形態において、キットは、固体担体及びＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び１１個のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む。より詳細には、キットは、固体担体及びこれらのタンパク質の３つの発現レベルを検出する手段を含む。
キットの使用の詳細な実施形態において、キットは、固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ； ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ；ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含むキットである。
キットの使用のより詳細な実施形態において、キットは、固体担体並びにＣＴＮＢ１、ＸＰＯ２及びＣＡＰＧの発現レベルを検出する手段を含むキットである。
キットの使用の別の詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルを検出する手段は、標的タンパク質に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントである。
第５の態様により、本発明は、固体担体並びにＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含むキットに関する。
第５の態様の詳細な実施形態において、キットは、固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ；ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む。
より詳細な実施形態において、キットは、２〜５００セット、より詳細には２〜４００セットの組合せの発現レベル検出する手段を含む。
上記又は下記の実施形態のいずれかと任意に組合せた、別の詳細な実施形態において、キットは、ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＳＳＡ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＶＡＭＰ８；ＭＭＰ９、ＭＸ１；ＭＭＰ９、ＲＳＳＡ；ＭＭＰ９、ＭＶＰ；ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＶＡＭＰ８；ＢＣＡＭ、ＭＭＰ９；ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１、ＴＥＲＡ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９、ＭＶＰ；ＡＧＲ２、ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６、ＭＶＰ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９；及び表Ｄに挙げるタンパク質のセットからなる群から選択される、少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を更に含む。
次の表Ｅから選択される特定の組合せ並びに表Ｄに挙げたもの（本明細書の最後に示す）は、子宮吸引物中のタンパク質の発現レベルが検出された際に、高い診断値で判定された。次の表Ｅは、ＡＵＣと９５％値の信頼区間（ＣＩ）を示す。データは、非ＥＣ及びＥＣ（ＥＥＣ及びＮＥＥＣを含む）のサンプルの分析に由来する。表Ｄには、ＡＵＣも示す。
他方、表Ｆは、以下の組合せ：ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１、ＴＥＲＡ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９、ＭＶＰ；ＡＧＲ２、ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６、ＭＶＰ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９のＡＵＣ値及び９５％のＣＩを示し、子宮吸引物から分離されたエクソソーム含有画分でタンパク質の発現レベルが検出された際の重要な予後情報を与える。データは、非ＥＣ及びＥＣ（ＥＥＣ及びＮＥＥＣを含む）のサンプルの分析に由来する。
第４の態様について示したように、この第５の態様の詳細な実施形態において、タンパク質の発現レベルを検出する手段は、標的タンパク質に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントである。
本発明の第４及び第５の態様の別の詳細な実施形態において、キットはＥＬＩＳＡキットである。本実施形態において、キットは、固体担体並びに上記のタンパク質及びタンパク質の組合せのいずれかの発現レベルを判定する手段を含む。別の実施形態において、キットは、検出される標的タンパク質に特異的に結合する固体担体及び抗体又はそのフラグメントを含み、これらの抗体はシグナルを生成できるレポータ分子と結合している。
「固体担体」としては、ニトロセルロース膜、ガラス又はポリマーが挙げられる。最もよく使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンである。固体担体は、ストリップ、チューブ、ビーズ、ディスク若しくはマイクロプレートの形態、又はイムノアッセイを行うのに好適な他の表面であってよい。
本明細書で使用する「レポータ分子」は、その化学的性質により、抗原結合抗体の検出を可能にする分析的に同定可能なシグナルを与える分子を意味する。検出は定性的又は定量的のいずれかであり得る。この種のアッセイで最もよく使用されるレポータ分子は、酵素、フルオロフォア又は放射性核種含有分子（即ち、放射性同位元素）のいずれかである。酵素イムノアッセイの場合、酵素は、一般にグルタルアルデヒド又は過ヨウ素酸塩によって２次抗体に結合されている。しかし、ただちに認識されるように、多種多様の異なる結合技法が存在し、これらは当業者に容易に利用できる。よく使用される酵素としては、特にホースラディッシュペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ及びアルカリホスファターゼが挙げられる。特定の酵素とともに使用される基質は、一般に、対応する酵素による加水分解の際に、検出可能な色変化の生成のために選択される。例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウムは、アルカリホスファターゼ結合体との使用に好適であり、ペルオキシダーゼ結合体には、１，２−フェニレンジアミン、５−アミノサリチル酸、３，３：５，５：テトラメチルベンジジン又はトリジンがよく使用される。上記の発色性基質ではなく、蛍光生成物を生じる蛍光発生基質を用いることも可能である。蛍光発生基質の例は、フルオレセイン及びローダミンである。特定の波長の光の照射によって活性化されると、蛍光色素標識抗体は光エネルギーを吸収し、分子内に励起状態を誘発し、続いて光学顕微鏡によって視覚的に検出可能な特徴的な色で光が放出される。免疫蛍光及びＥＩＡ技法はどちらも当分野で十分に確立されていて、本方法にとって特に好ましい。しかし、他のレポータ分子、例えば放射性同位体、化学発光分子及び生物発光分子並びに／又は色素及び他の発色性物質も使用され得る。
特定のレポータ分子結合抗体の選択は、大部分は、本発明の検査キットの意図された使用及び使用者によって決定される。
バイオマーカのレベルを測定するための結合アッセイでは、固相又は均一形式が使用され得る好適なアッセイ法としては、サンドイッチ又は競合結合アッセイが挙げられる。サンドイッチイムノアッセイの例は、米国特許第４，１６８，１４６号及び米国特許第４，３６６，２４１号に記載され、これらはどちらもその全体が参照により本明細書に組み入れられている。競合イムノアッセイの例としては、米国特許第４，２３５，６０１号、米国特許第４，４４２，２０４号及び米国特許第５，２０８，５３５号に開示されているものが挙げられ、これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み入れられている。
複数のバイオマーカは、マルチプレックスアッセイ形式、例えば、結合試薬アレイの使用による多重化、標識のスペクトル区別を使用する多重化、例えばＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）システムを使用する、粒子に対して行われる結合アッセイのフローサイトメトリー分析の多重化を使用して測定され得る。
本発明のアッセイは、任意の好適な方法によって行われ得る。一実施形態において、バイオマーカレベルは単一のサンプルで測定され、これらの測定は、これに限定されるわけではないが、アッセイプレートの単一のウェル、単一のアッセイカートリッジ、単一の側方流デバイス、単一のアッセイチューブなどを含む、単一のアッセイチャンバ又はアッセイデバイスで行われ得る。バイオマーカレベルは、当業者が利用可能ないくつかの技法、例えば直接物理的測定（例えば質量分析）又は結合アッセイ（例えばイムノアッセイ、凝集アッセイ及び免疫クロマトグラフィーアッセイ）のいずれかを使用して測定され得る。方法は、化学反応、例えば光学的吸光度の変化、蛍光の変化、化学発光又は電気化学発光の発生、反射率、屈折率又は光散乱の変化、表面からの検出可能な標識の蓄積又は放出、酸化又は還元又は酸化還元種、電流又は電位、磁場の変化などから生じるシグナルを測定することも含み得る。好適な検出技法は、標識の光ルミネセンス（例えば蛍光、時間分解蛍光、エバネッセント波蛍光、アップコンバートリン光体、多光子蛍光などの測定により）、化学発光、電気化学発光、光散乱、光学的吸光度、放射能、磁場、酵素活性（例えば、光学的吸光度若しくは蛍光の変化を引き起こす、又は化学発光の放出を引き起こす酵素反応によって酵素活性を測定することにより）による標識の測定を通じて標識結合試薬の関与を測定することによって、結合イベントを検出し得る。又は、標識の使用を必要としない検出技法、例えば質量（例えば表面弾性波測定）、屈折率（例えば表面プラズモン共鳴測定）又は検体の固有のルミネセンスの測定に基づく技法が使用され得る。
別の実施形態において、キットはマイクロアレイである。
別の実施形態において、キットは、タンパク質子宮内膜癌マーカをコードする定義された遺伝子のセットを含むマイクロアレイである。発現が子宮内膜疾患によって著しく変化する、分析される特定のタンパク質（リストの２〜１１）について上記で与えた実施形態すべても、マイクロアレイの詳細な実施形態である。
別の詳細な実施形態において、本発明のキットは、個々のサンプルを分類するためのパンネルダイヤグラムを更に含む。
本発明の更なる態様は、予後の機能における、子宮内膜癌に罹患している対象の医療レジメンを開始するか否かを決定又は推奨する方法であった。本方法の詳細な実施形態において、方法は
ａ）対象の女性生殖管からの子宮液サンプル中の、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベル及び任意にタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルをインビトロで判定するステップ、並びに
ｂ）検査サンプル中のタンパク質レベルがＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１の基準対照レベルよりも高く、及びＣＡＰＧの基準対照レベルよりも低い場合、ＥＥＣとＮＥＥＣを区別することによってＥＣの予後を確立するステップ、
を含み、
ｉ）対象が子宮内膜癌に罹患している、又は子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断され、対象がＥＥＣに罹患していると鑑別診断された場合、リンパ節郭清によって任意に補完された、子宮全摘出術及び両側付属器切除術からなる、ＥＥＣの医療レジメンの開始が推奨され、
ｉｉ）対象が子宮内膜癌に罹患している、又は子宮内膜癌に罹患している疑いがあると診断され、対象がＮＥＥＣに罹患していると鑑別診断された場合、子宮全摘出術及び両側付属器切除術、骨盤内及び傍大動脈リンパ節郭清、大網切除術並びに腹膜（ｐｅｒｉｔｉｏｎｅａｌ）生検からなる、ＮＥＥＣの医療レジメンの開始が推奨される。
確立された予後の機能における子宮内膜癌に罹患した対象の医療レジメンを開始するか否かを決定又は推奨する別の詳細な実施形態の方法において、対象がＥＥＣに罹患していると診断された場合、放射線療法、化学療法及びその組合せから選択される補助治療が推奨される。更に別の詳細な実施形態において、対象がＮＥＥＣに罹患していると診断された場合、補助治療として化学療法が推奨される。
本発明の別の態様は、上記の態様及び実施形態で定義された診断及び／又は予後の方法のいずれかを実施するためのアルゴリズムを提供することである。
詳細な実施形態において、アルゴリズムは、ＥＣの診断及び／又はＥＣの予後のための、特にＥＣサブタイプ、特にＥＥＣ又はＮＥＥＣを判定することによる疾患の予後のためのコンピュータ実装方法である。このアルゴリズムにより、サンプルがＥＣに罹患している対象若しくは罹患していない対象のどちらに由来するか、又はサンプルがＥＣに罹患している対象に由来する場合、ＥＥＣ又はＮＥＥＣのどちらに罹患しているかを決定することができる。より詳細な実施形態において、アルゴリズムは推奨治療を提供する。したがって、上記で定義された方法を実施するためのコンピュータ実装方法も提供され、本方法では、ＥＣの診断及び／又は予後のためにタンパク質の１以上の発現レベルを判定した後、レベルに値及び／又はスコアが与えられ、計算値を得るために数式で任意に計算され、レベル、スコア及び／又は計算値の機能において、ＥＣに罹患している若しくは罹患していない選択肢の間で、及び／又は異なるＥＣサブタイプ間で罹患している選択肢の間で決定がなされる。
言い換えれば、本発明のアルゴリズムの別の詳細な実施形態において、ＥＣの診断及び／又は予後のためにタンパク質の１以上の発現レベルを判定した後、レベルに値及び／又はスコアが与えられ、計算値を得るために数式で任意に計算され、レベル、スコア及び／又は計算値の機能において、ＥＣに罹患している若しくは罹患していない選択肢の間で、及び／又は異なるＥＣサブタイプ間で罹患している選択肢の間で決定がなされる。
本発明は、非類内膜子宮内膜癌（ＮＥＥＣ）から類内膜子宮内膜癌（ＥＥＣ）を区別することによる、子宮内膜癌の予後の方法であって、女性生殖管から単離したサンプル中の以下のＰＩＧＲ及びＶＩＭＥタンパク質の１以上の発現レベルを判定することを含む、方法も含む。
発明者らは、これらの２つのタンパク質が、女性生殖管のサンプルから出ることによって、ＥＣサブタイプの区別に有用であることを初めて発見した。サンプルは、特に子宮器官の組織生検及び生殖管の液体（即ち子宮吸引物）から選択することができる。本方法は、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを更に検出することを含む。発現レベルは、特にタンパク質に特異的に結合する抗体又は抗体のフラグメントによって、特にタンパク質レベルで判定される。方法を実施するために使用される部品及び手段のキットも本発明の一部である。
本発明者らが行ったアッセイにより、ＥＣの重要な情報を与えるタンパク質が同定されている。これは、ＥＥＣサンプル及びＮＥＥＣ（ＳＥＣ）サンプルにおいて差次的に発現されたＶＩＭＥの場合である。このため、本タンパク質によって、ＥＣサブタイプの分類だけでなく、診断の確認も可能となる。発明は、ＥＣの診断及び／又は予後の方法であって、特に女性生殖管からの女性の単離サンプル中のＶＩＭＥの発現レベルを判定することを含む、方法を含む。
その上、アッセイしたサンプルによって、ＥＣと子宮内膜過形成の間の、女性生殖管からの液体サンプル中のいくつかのタンパク質の差次的発現の判定が可能になる。子宮内膜過形成は、過剰なストロゲン刺激によって引き起こされる子宮内膜の肥厚である。これは良性疾患である。しかし、これはＥＣの前駆病変と見なされ、明確に診断すべきである。ＥＣサンプル（任意のサブタイプ、ＥＥＣ及びＮＥＥＣ）及び過形成症例を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｇ）非ＥＣサンプル対照を用いたアッセイにおいて、１６のタンパク質が差次的に豊富であることが見出され、過形成とその他の非ＥＣ対照（正常な子宮内膜又は筋腫若しくはポリープなどの過形成とは異なる良性疾患の女性）の間で調整ｐ値は＜０．０５、倍率変化は２倍を超えた。このタンパク質のうち４つ、ＮＡＭＰＴ、ＥＮＯＡ、ＣＡＴＤ、及びＧＳＴＰ１は、０．８５より高いＡＵＣを示した。適正な検証の後、これらはＥＣからの過形成の診断につながる。このため、本発明は、対象における子宮内膜過形成の診断及び／又は予後の方法であって、特に女性生殖管からの女性の単離サンプル中の以下のタンパク質：ＮＡＭＰＴ、ＥＮＯＡ、ＣＡＴＤ、及びＧＳＴＰ１の１以上の発現レベルを判定することを含む方法にも関する。ＥＣの前駆病変である過形成を早期に検出することによって、可能な限り早期に悪性腫瘍を検出するための、患者のフォローオンを増加することができる。この態様に関連して、本発明は、本発明のＮＡＭＰＴ、ＥＮＯＡ、ＣＡＴＤ、及びＧＳＴＰ１マーカの１以上を使用して過形成のための医療レジメンをモニタリングする方法も提供する。マーカの正常レベルへの（即ち、過形成のない対照対象のレベルへの）低下又は復帰によって、患者が医療レジメンに有利に反応したこと、従って、レジメンが有効であることを示すことができる。マーカのレベルが大幅に変化しない、又は上昇する場合、これはレジメンが有効ではないこと、及び／又は過形成がＥＣに進行するリスクが高いことを示すことができる。これらの症例では、外科的治療を行う必要がある。
本発明のインビトロ方法は、診断及び／又は予後情報を与える。一実施形態において、本発明の方法は、（ｉ）診断及び／又は予後情報を収集するステップ、並びに（ｉｉ）データ担体に情報を保存するステップを更に含む。
本発明の意味において、「データ担体」は、紙等の、子宮内膜癌の診断及び／又は予後のための意味のある情報データを含有する任意の手段として理解されるべきである。担体は、予後データの収容が可能な任意の要素又はデバイスでもあり得る。例えば、担体は、ＲＯＭ、例えばＣＤ ＲＯＭ若しくは半導体ＲＯＭ、又は磁気記録媒体、例えばフロッピーディスク若しくはハードディスクなどの記憶媒体を備え得る。更に、担体は、電気若しくは光ケーブルを介して、又は無線若しくは他の手段によって搬送され得る、電気又は光シグナルなどの伝送可能な担体であり得る。診断／予後データが、ケーブル又は他のデバイス若しくは手段によって直接搬送され得るシグナルで表される場合、担体はそのようなケーブル又は他のデバイス若しくは手段によって構成され得る。他の担体は、ＵＳＢデバイス及びコンピュータアーカイブに関連している。好適なデータ担体の例は、紙、ＣＤ、ＵＳＢ、ＰＣのコンピュータアーカイブ、又は同じ情報を用いた音声登録である。
明細書及び特許請求の範囲を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語及びその用語の変形は、他の技術的特徴、添加物、成分又はステップを除外することを意図していない。更に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」の場合を含む。本発明の追加の目的、利点及び特徴は、明細書を検討することにより当業者に明らかになるか、又は本発明の実施により習得され得る。以下の実施例は例示のために提供されるものであり、本発明を限定することを意図するものではない。更に、本発明は、本明細書に記載の特定の好ましい実施形態の全ての考えられる組合せを網羅している。
実施例１ 子宮液由来のエクソソーム中の及び子宮液中のＥＣの診断及び予後のバイオマーカ
１．サンプル、試薬及び方法
１．１ 患者及びサンプルの説明
患者は３つの別の機関：ＨＵＶＨ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉ Ｖａｌｌ ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ、バルセロナ、スペイン）、ＨＵＡＶ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉ Ａｒｎａｕ ｄｅ Ｖｉｌａｎｏｖａ、レリダ、スペイン）及びＵＭＣＦ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、フライブルク、ドイツ）で募集した。各参加機関は倫理審査による承認を得て、参加者がインフォームドコンセントに署名した後に、サンプルを採取した。
子宮吸引物（ＵＡ）は、Ｃｏｒｎｉｅｒ Ｐｉｐｅｌｌｅ（Ｇｙｎｅｔｉｃｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を用いた吸引によって得た。サンプルを１．５ｍＬ管に入れ、１：１の比率（ｖ／ｖ）でのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の添加、サンプルの穏やかなピペッティング、Ｆ４５−３０−１１ロータ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍｉｃｒｏｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５４１７Ｒ）による、２５００ ｇ（４℃）にて２０分間の遠心分離を含む処理全体を通じて氷上に保持して、細胞画分を除去した。次に、残りの上清（ＳＮ）画分を分注し、必要になるまで−８０℃にて凍結させた。
エクソソーム（省略形ＥＬＶ）単離では、ＥＬＶは、Ｔｈｅｒｙらによって以前に記載されたＥＬＶ単離プロトコルｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１８２２８４９０の変法に従い、分画遠心分離によってＵＡのＳＮから得た。簡潔には、ＳＮを解凍し、ＰＢＳで希釈して最終体積を２５ｍＬとした。１０，０００×ｇ（４℃）で３０分間の遠心分離ステップをＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｅｒａｅｕｓ ＭｕｌｔｉｆｕｇｅＸ３Ｒ遠心分離機（ＦｉｂｅｒＬｉｔｅロータＦ１５−８ｘ−５０ｃ）にて行い、細胞片、マクロ粒子及びアポトーシス体を除去した。ＭＶが濃縮された、得られたペレットをＰＢＳ ５０μＬに再懸濁させて、−８０℃にて凍結させた。次に、上清を超遠心管（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）に移し、ＰＢＳで満たし、ＡＨ−６２９ロータを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓｏｒｖａｌｌ ＷＸ ＵｌｔｒａＳｅｒｉｅｓ遠心分離機で１００，０００×ｇ（４℃）にて２時間、最初の超遠心ステップを行った。この２回目の遠心分離の上清は可溶性画分であり、−８０℃にて凍結させた。この最初のペレットをＰＢＳに再懸濁させて、１００，０００×ｇ（４℃）にて１時間、再度遠心分離した。ＥＬＶが濃縮された最終ペレットを（微小胞（ＭＶ）及びいくつかの残存アポトーシス体とともに）ＰＢＳ５０μＬに再懸濁させた。ＭＶ及びＥＬＶペレットから５μＬを、粒度分布及びＮＴＡによる定量化のために−８０℃にて保存して、残りのサンプルはタンパク質抽出のために−８０℃にて凍結させた。
１．２ 液体クロマトグラフィー並行反応モニタリング（ＬＣ−ＰＲＭ）分析によるタンパク質の抽出及び同定
発見段階では、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００及び１：１００プロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で構成される溶解緩衝液に、ＥＬＶを１：１の比率（ｖ／ｖ）で再懸濁させた。次に、サンプルを−２０℃にて少なくとも８時間凍結させ、氷上で解凍し、振幅１００％で５秒間の超音波処理（Ｌａｂｓｏｎｉｃ Ｍ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、サイクルを５回行って、膜を破壊した。抽出したタンパク質は、必要になるまで−２０℃にて保存した。
検証段階は、ＥＬＶを隔離する必要なしに、ＥＬＶ及び子宮吸引物（ＵＡ）に対して行った。検証段階でＥＬＶからタンパク質を抽出するために、溶解緩衝液に含有される洗浄剤を１％未満のＮＰ−４０に変更し、タンパク質抽出が直接溶液内消化及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳにすでに好適となるようにした。残りの手順は同様のままとした。ＵＡの液体画分からタンパク質を抽出するには、サンプル中に存在する微小胞、タンパク質凝集体及び／又は粘液を破壊するために、各ＵＡに、１００％振幅で５秒間の超音波処理（Ｌａｂｓｏｎｉｃ Ｍ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ）サイクルを５回行った。次に、Ａｌｂｕｍｉｎ ＆ ＩｇＧ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｓｐｉｎ ｔｒａｐキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造元の指示に従って使用して、サンプルからアルブミン及び免疫グロブリンＧを除去した。抽出したタンパク質は全て、必要になるまで−２０℃にて保存した。アルブミン及び免疫グロブリンＧを除去しなかった子宮液サンプル（ＥＬＶ又はＥＬＶを単離しないＵＡ）でも、診断値と予後値のデータを得た。
発見段階では、０．１％ギ酸に溶解させたペプチドをまず、所内充填カラム内の内径１５０μｍＩＤ×２０ｃｍ ｎａｎｏ−ＬＣ（Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８，３μｍ、３００Å、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、トーランス、カリフォルニア州）に添加して、ＥＡＳＹ ｎａｎｏＬＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて分離した。ペプチドの溶離には、６００ｎＬ／分の一定流量で５〜４０％ＡＣＮ（０．２％ＦＡ）の１時間線形勾配を使用した。ＬＣシステムをＱＥｘａｃｔｉｖｅ ｐｌｕｓ Ｏｒｂｉｔｒａｐタンデム質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に連結し、ＲＡＷファイルをＸＣａｌｉｂｕｒソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって取り込んだ。タンデム質量スペクトルは、ｍ／ｚ ２．０の前駆体単離ウィンドウ（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｗｉｎｄｏｗ）を用いたＴｏｐ−１２法で行った。分解能は、検索スキャンではｍ／ｚ４００にて７０．０００（ＡＧＣ １ｅ６、最大注入時間２００ ｍｓ、スキャン範囲ｍ／ｚ３００−２０００）、ＭＳ／ＭＳスペクトルでは１７．５００（５ｅ５におけるＡＧＣ、最大注入時間５０ｍｓ及びスキャン範囲ｍ／ｚ２００−２０００）であった。正規化衝突エネルギー（ＮＣＥ）を２５に設定し、排除時間を１０秒に設定した。
タンパク質の同定については、ＳＩＬＡＣ定量化のために、ＭａｘＱｕａｎｔ（バージョン１．３．０．３）を使用してＲＡＷファイルを分析した。採用したデフォルトのパラメータは、ＭＳ／ＭＳフラグメントの許容誤差２０ｐｐｍ、カルバミドメチル化（Ｃａｒｂａｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎ）（Ｃ）固定、酸化（Ｍ）並びに可変修飾としてのアセチル（タンパク質Ｎ末端）であった。重度標識にはアルギニン（Ａｒｇ１０）及びリジン（Ｌｙｓ８）を選択し、「ｍａｔｃｈ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｕｎ」オプションを適用した。ＲＡＷファイルは、ＨＵＭＡＮ ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースで検索した。Ｐｒｅｓｅｎｃｅ／Ａｂｓｅｎｃｅ分析では、ＰＥＡＫＳ７．０（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏｒ．ｃｏｍ／）を使用して標識フリー分析を行った。データベース検索では、３７２５４エントリを含有するＨｕｍａｎ ＵｎｉｐｒｏｔデータベースでＲＡＷファイルを検索した。検索パラメータについては、前駆体の誤差許容値を１０ｐｐｍに設定し、ＭＳ２フラグメントについては、許容値は０．０１Ｄａであった。トリプシンの最大２つの誤切断が許容された。カルバミドメチル化（Ｃ）、脱アミド化（ＮＱ）及び酸化（Ｍ）は可変修飾であった。偽発見率（ＦＤＲ）が１％未満のペプチドのみを検討した。潜在的バイオマーカを検証するために、ＰＥＡＫＳ結果をＳｃａｆｆｏｌｄプロテオームソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｏｍｅｓｏｆｔｗａｒｅ．ｃｏｍ／）にアップロードした。
発見段階の統計分析を行って、２つの異なる結果：（１）患者の異なるサブグループに存在する又は存在しないタンパク質からなる定性的データ及び（２）各タンパク質と内部標準の相対的存在量を表すＳＩＬＡＣ比から得た発現測定値から成る定量的データを得た。
定性的データについては、Ｆｉｓｈｅｒの正確検定を各タンパク質に適用して、グループ間で存在／非存在を比較した（ｐ値＜０．００１）。定量的データについては、差次的に発現されるタンパク質を選択するために、グループの各ペア間でＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を行った。この検定は、グループごとに４名を超える個人に存在するタンパク質に対してのみ行った。多くの検定（タンパク質につき１つ）を行って生じた多重比較の問題に対処するために、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｋｂｅｒｇ法を使用して、ｐ値を調整してＦＤＲを強く制御した（調整ｐ値＜０．２５及びＦＣ＞１．３）。
全ての分析は、統計プログラム「Ｒ」（Ｒバージョン３．２、（Ｃ）２０１５ Ｔｈｅ Ｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ）を使用して行った。
発明者のグループの以前の結果から選択した５つの候補とともに、発見段階の結果（４９）に基づいて、選択反応モニタリング（ＳＲＭ）により、対象実験用に合計５４のタンパク質を選択した。タンパク質ごとに２つの固有のペプチドを選択して、以前の質量分析実験での検出可能性に基づいてＳＲＭによってモニタリングした。選択した各ペプチドについて、同位体標識バージョン（１５Ｎ２、１３Ｃ６−リジン、１５Ｎ４、１３Ｃ６−アルギニン）を購入し、各サンプルにスパイクして内部標準として使用した。内部標準は、実験の希釈曲線に基づいて個々のペプチドごとに確立された線形応答範囲内の濃度でスパイクした（データ非表示）。並行して、同位体標識ペプチドを混合し、ＭＳ２スペクトルライブラリと保持時間の知識データベースを生成するために使用した。
合計８５の内因性ペプチドとその対応する内部標準を、患者１０７人名の独立したコホートからのＬｙｓ−Ｃ及びトリプシン消化サンプルにおけるＳＲＭによって測定した。ペプチド当たりの５つの最も強いトランジションは、内径７５μＭを有し、１．９μＭ Ｃ１８粒子を充填した逆相クロマトグラフィー２５ｃｍカラム（日京テクノス株式会社、日本）及び２ｃｍプレカラム（Ａｃｃｌａｉｍ ＰｅｐＭａｐ １００、Ｃ１８、１５μＭ、１００Ａ）を装備した、三連四重極質量分析計（５５００Ｑ−Ｔｒａｐ、ＡＢ Ｓｃｉｅｘ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国カリフォルニア州フォスター）でモニタリングした。ローディング緩衝液：０．１％ギ酸を含むＨ２Ｏ；溶離緩衝液：ＡＣＮ、０．１％ギ酸。使用した流量は２５０ｎＬ／分であり、４０分間で５〜４０％の範囲に及ぶ溶離緩衝液のクロマトグラフィー勾配を使用した。サンプルの繰り越しを回避するために、生物学的サンプルのＳＲＭ測定間にブランク試験を行った。測定は、３００秒のウィンドウ及び１．５秒の目標サイクル時間を使用して、スケジュール化ＳＲＭモードで行った。
検証フェーズのデータ分析のために、標的ペプチドに対応するトランジショングループを、ライト形及びヘビー形の両方で、標的ペプチドに関連付けられたトランジショントレースの共溶離；ライトＳＲＭ相対強度とヘビーＳＲＭ相対強度の相関に基づいて、Ｓｋｙｌｉｎｅ ｖ２．５で評価した。すべてのペプチドピークを目視検査した。ＭＳｓｔａｔｓ Ｓｋｙｌｉｎｅ ｐｌｕｇ−ｉｎ（ｖ３．３）に実装された線形混合効果モデルへの入力として、すべてのトランジションの領域を使用して、異なるサンプルグループ間でタンパク質の倍率変化と調整ｐ値を計算した。
予測変数の開発では、ＭＳｓｔａｔｓを使用して、ｌｏｇ２変換されたトランジション面積に基づいてすべてのサンプルに存在するタンパク質の量を概算し、定義されたグループ間のロジスティック回帰モデルへの入力変数として使用した。各タンパク質の分類能力は、性能指標として、曲線下面積（ＡＵＣ）を使用してデータセットの２／３以内で評価した。最も特徴的な高いタンパク質が最初の分類指標として選択された。ＡＵＣ値を増加させながら（ΔＡＵＣ＞０．０２）、大半の特徴的タンパク質を繰返し添加した。分類評価の手順は、各繰返しにおいて異なる患者のサブセットを使用して５００回繰返した。サンプルのサブセットは、置換を行わずに元のコホートから患者を無作為に選択することによって生成して、サンプルのサブグループごとに平衡化した。最終的なコンセンサスモデルは、タンパク質の組合せで構成され、５００個の繰返しで最も多く選択された。最終モデルを全データセットに当て嵌め、ＲＯＣ曲線下面積、感度、特異性及び精度を使用して予測精度を定量化した。統計プログラム「Ｒ」のｐＲＯＣパッケージを、ＲＯＣの作成、ＡＵＣ及びその他のパフォーマンス値（即ち、感度、特異性及び精度）の計算に使用した。「最適カットオフ」を感度と特異度の和が最大値に達した時点と見なして、これらを得た。
２．結果
２．１ 発見段階
このプロジェクトの発見段階では、ＥＥＣ（ＥＣ１とも省略）患者１０名から、ＮＥＥＣ（ＥＣ２とも省略、特にＳＥＣであった）１０名から及び対照患者１０名からの子宮吸引物（Ｎ＝３０）を使用してＥＬＶを単離した。
単離した小胞の純度を確認したら、１Ｄ−ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分離の直前に、３０個の各サンプル（ＥＥＣ ｎ＝１０、ＮＥＥＣ ｎ＝１０及びＣＴＲＬ ｎ＝１０）を、２：１のヘビー／ライト比の同量のＳｕｐｅｒ−ＳＩＬＡＣミックス（内部標準）でスパイクした。各ゲルレーンをバンド１０個にスライスし、各バンドをトリプシン消化してペプチドを抽出し、３００個の個別のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を行った。これらのタンパク質のみが少なくとも１つの固有のペプチドによって同定され、これらのペプチドが１％未満の偽発見率（ＦＤＲ）を有すると考えて、ＭＳ／ＭＳデータのタンパク質データベースを検索した結果、全体で２１３８のタンパク質が同定された。ＭＳ／ＭＳスペクトルをソフトウェアＭａｘＱｕａｎｔで更に処理すると、９２０のタンパク質の定量化、即ち同定されたプロテオームの４３％の全定量化率につながった。
合計１５２のタンパク質は、調整ｐ値＜０．２５及び−１．３未満又は１．３超の倍率変化で、差次的に発現した。これらから、１４７のタンパク質が潜在的な診断バイオマーカであり（ＣＴＲＬとＥＣの比較からの差）、２８のタンパク質が潜在的な予後バイオマーカ（ＥＥＣとＮＥＥＣの比較からの差）であった。定量分析と並行して、定量できなかったタンパク質を考慮するために存在／非存在試験を行ったのは、そのタンパク質にはヘビー相対物（ｈｅａｖｙ ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ）はないが、特定のグループに存在するために関連性がなおあるためである。このため、ＲＡＷファイルをＰＥＡＫＳソフトウェアで再分析し、Ｆｉｓｈｅｒ検定を行って、グループ内に有意に存在するタンパク質を選択した（ｐ値＜０．００１）。この分析後に、２９の潜在的な診断バイオマーカ及び９の潜在的な予後バイオマーカに相当する、合計３０の候補が含まれていた。
上記の統計的制限を常に尊重して、（ｉ）相対定量分析、（ｉｉ）存在／非存在試験及び（ｉｉｉ）候補リストでファミリが過剰提示されたタンパク質又は癌でダウンレギュレートされたタンパク質の排除などの生物学的基準を組合せて、合せて５４の候補の最終リストが生成された。この５４の候補バイオマーカのうち、５０は診断バイオマーカに相当し、１５は予後バイオマーカに相当し、そのうち３７は診断潜在能力のみを有し、２は予後潜在能力のみを有し、１３が診断潜在能力と予後潜在能力の両方を有していた。
２．２ ＵＡ ＥＬＶのタンパク質バイオマーカの検証
前の節に記載した５４の候補リストを得て、新たなより大規模な患者コホートでＬＣ−ＳＲＭを使用して、その候補の潜在能力を検証することを目的とした。発見段階の試験と同様に、ＵＡのＥＬＶ画分が分析の選択サンプルであった。ＥＣを診断し、組織学的サブタイプを区別する各マーカの個々の潜在能力を評価することに加えて、ここでは異なる候補を組合せて診断モデル及び予後モデルを生成しようとした。更に、独立コホート中のＵＡの全体液画分における各候補の分類精度を評価した。
検証段階で合計１０７人の患者を募集して（コホートＢ）、ＥＥＣ又はＥＣ１（ｎ＝４５）、ＮＥＥＣ又はＥＣ２（ｎ＝２１）、及びＣＴＲＬ（ｎ＝４１）の３つのグループに分けた。特に、ＮＥＥＣは漿液性子宮内膜癌（ＳＥＣ）と診断された患者に相当した。これより、前の節で見られたように、ＵＡからのＥＬＶが単離、キャラクタリゼーションされた（データ非表示）。発見段階で生成した５４のタンパク質候補バイオマーカのリストをＬＣ−ＳＲＭによって検証した。検証するために、タンパク質ごとに２つの固有のトリプシンペプチドを選択し、これから最終的に合計８５の内因性ペプチドをスケジュールＳＲＭによってモニタリングした。ただし、５１のタンパク質に対応する８５のペプチドのうち、検出されたのは６９のみであった。３つの候補（ＴＮＲ６、ＣＬＨ１、及びＰＳＢ３）はいずれのサンプルでも検出されなかった。
このＳＲＭ実験の結果として、４８の潜在的な診断バイオマーカのうち４３（８９．６％）が（即ち、ＣＴＲＬとＥＣの間で存在量の有意差が認められた）、この検証段階でも有意であることが認められ（調整ｐ値＜０．０１）、このため、個々の診断バイオマーカとしての潜在能力が確認された。４５の定量化されたタンパク質のうち合計２９が、ＥＣ症例とＣＴＲＬ症例を個別に区別する高い精度を示した（表６にて太字で強調表示した、０．７５より高いＡＵＣ値）。最も重要な５つの個々のバイオマーカは、ＡＧＲＩＮ（ＡＵＣ＝０．９０、ＣＩ９５：０．８５−０．９６）、ＴＡＣＤ２（ＡＵＣ＝０．８７、ＣＩ９５：０．８１−０．９４）、ＳＯＲＴ（ＡＵＣ＝０．８６、ＣＩ９５：０．７９−０．９３）、ＭＶＰ（ＡＵＣ＝０．８６、ＣＩ９５：０．７８−０．９３）及びＦＡＳ（ＡＵＣ＝０．８５、ＣＩ９５：０．７８−０．９２）であった。以下の表２．１は、ＥＬＶ中のＥＣ診断用に選択したバイオマーカのリストを示す。
潜在的な予後バイオマーカ（即ち、ＥＣ１（ＥＥＣ）対ＥＣ２（ＮＥＥＣ）の比較）については、１５の候補のうち５つのタンパク質のみが検証段階で差次的に発現していることが判明した（調整ｐ値＜０．０１）。検証したバイオマーカは、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＢＣＡＭ、ＰＬＤ３及びＭＸ１であった。４５の定量タンパク質のうち合計４つが、ＥＣ１症例とＥＣ２症例を個別に区別する高い精度を示し、ＡＵＣ値は０．７５：ＣＬＤ６（ＡＵＣ＝０．８８、ＣＩ９５：０．７６−１．００）、ＢＣＡＭ（ＡＵＣ＝０．８７、ＣＩ９５：０．７６−０．９７）、ＩＦ２Ｂ３（ＡＵＣ＝０．８０、ＩＣ９５：０．６８−０．９３）及びＰＬＤ３（ＡＵＣ＝０．７９、ＩＣ９５：０．６６−０．９３）であった。以下の表２．２は、ＥＬＶのＥＣ予後に関して選択されたバイオマーカのリストを示す。
２．３ ＵＡの全液体中の標的プロテオミクスによる候補の検証
これらのバイオマーカの使用が、より入手しやすく、細胞外小胞の単離を必要としないサンプルに移行可能か否かを理解するために、ＵＡの全液体画分のエクソソーム中で同定されたバイオマーカの試験を行うことを目的とした。そのために、合計６７人の患者（コホートＣ）を選択し、ＥＥＣ（ｎ＝２２）、ＮＥＥＣ（ｎ＝２０）、ＣＴＲＬ（ｎ＝２５）の３つのグループに分けた。
試験のこの部分では、合計５１のタンパク質を分析した。タンパク質ごとに２つの固有のトリプシンペプチドを選択し、これから最終的に合計７５の内因性ペプチドをスケジュールＳＲＭによってモニタリングした。合計３７のタンパク質のみを検出し、続いてＡＵＣを推定するために定量化した。
この検証試験で得た結果は、ＥＬＶに基づくバイオマーカをＵＡの全液体に移行させる可能性を理解するために、以前に行った結果と比較して評価した。まず、ＵＡの全液体中のＥＬＶバイオマーカの検出可能性は、ＥＬＶを分析したときの検出可能性と比較して非常に限定的であることが認められ、ＥＬＶで検出された５１のバイオマーカのうち、ＵＡで検出されたものは、わずか３４（６６．７％）であった。
次の表１．１及び表１．２に、ＵＡの全液体画分におけるＥＣ診断のための、及びＵＡの全液体画分におけるＥＣ予後（ＥＥＣとＮＥＥＣの比較）のための重要なバイオマーカのリスト。
実施例２ 子宮吸引物中の、患者１１６名のコホートにおける、ＥＥＣ（ＥＣ１）症例をＮＥＥＣ（ＥＣ２）症例と区別することによるＥＣの予後
１．サンプル、試薬及び方法
１．１ 患者及びサンプルの説明
２０１２年から２０１５年にかけて、Ｖａｌｌ Ｈｅｂｒｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ（バルセロナ、スペイン）、Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉ Ａｒｎａｕ ｄｅ Ｖｉｌａｎｏｖａ（リエダ、スペイン）及びＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｒｅｉｂｕｒｇ（フライブルク、ドイツ）で合計１１６名の女性を募集した。各病院の倫理委員会によって承認されたインフォームドコンセント文書にすべての患者が署名した。全ての女性は、ＥＣの疑い、即ち経膣超音波検査の結果に基づく、異常子宮出血（ｂｌｏｏｄｉｎｇ）（ＡＵＢ）の出現及び／又は閉経後の女性では４ｍｍ以上、閉経前の女性では８ｍｍ以上の子宮内膜の厚さによる、ＥＣ診断過程に進んだ。女性１１６名のうち、６９名がＥＣと診断され、類内膜ＥＣ（ＥＥＣ）４９名及び非類内膜漿液性ＥＣ（ＳＥＣ又はＮＥＥＣ）２０名が含まれていた。残りの４７名の女性は、子宮内膜が正常であるか、良性障害（子宮内膜過形成を含む）と診断された非ＥＣ女性であった。患者の臨床病理学的特徴を、患者の次の表に記載する。
表３ 試験に登録した女性の臨床的特徴
＊未定グレードの１症例
子宮吸引物をＣｏｒｎｉｅｒ Ｐｉｐｅｌｌｅ（Ｅｕｒｏｇｉｎｅ Ｒｅｆ．０３０４０２００）で吸引して採取し、１．５ｍｌマイクロチューブに移した。リン酸緩衝生理食塩水を１：１（ｖ／ｖ）の比率で添加し、細胞画分から液体画分を分離するために、２，５００ｘｇで２０分間遠心分離した。１００μｌ〜１ｍｌの範囲に及ぶ子宮吸引物液を、使用するまで−８０℃に保持した。
１．２ 液体クロマトグラフィー並行反応モニタリング（ＬＣ−ＰＲＭ）分析のためのサンプル調製
ＬＣ−ＰＲＭ分析のサンプル調製は、Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｇａｒｃｉａ Ｅら、“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｗｏｒｋｆｌｏｗ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＬＣ−ＰＲＭ ｆｏｒ ｔｈｅ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｕｔｅｒｉｎｅ ａｓｐｉｒａｔｅ ｓａｍｐｌｅｓ”，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ−２０１６，ｖｏｌ．ｎｏ．７（３３），ｐｐ．：５３１０２−５３１１４（上掲）によって以前に記載されたように行った。簡潔には、子宮吸引物からの液体画分を超音波処理し、Ａｌｂｕｍｉｎ＆ＩｇＧ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｓｐｉｎ ｔｒａｐキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、各サンプル５０μｌからアルブミン及び免疫グロブリンＧタンパク質を除去した。総タンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによって推定した。次に、サンプル１１６個すべてを１２．５μｇの２つの等しいアリコートに分割し、技術的複製を用いて後続のステップ及び分析を行った。サンプルを変性、還元及びアルキル化した後、最初にＬｙｓ−ＣエンドプロテイナーゼＭＳグレード（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をプロテアーゼ／総タンパク質量比１／１５０（ｗ／ｗ）で４時間、３７℃にて、次にトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）をプロテアーゼ／総タンパク質量比１／５０（ｗ／ｗ）、３７℃にて一晩使用して、２段階の連続タンパク質分解を行った。安定同位体標識合成ペプチド（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、粗品質）の混合物を各サンプルにスパイクした（Ｃ末端アルギニン１３Ｃ６、１５Ｎ４、Δｍ＝１０Ｄａ、Ｃ末端リジン１３Ｃ６、１５Ｎ２、Δｍ＝８Ｄａ、又は重ロイシン１３Ｃ６、１５Ｎ１、Δｍ＝７Ｄａ若しくはフェニルアラニン１３Ｃ９、１５Ｎ１、Δｍ＝１０Ｄａに利用できない場合）。最後に、サンプルを固相抽出（Ｓｅｐ Ｐａｋ ｔＣ１８、５０ｍｇ、Ｗａｔｅｒｓ）で精製し、真空乾燥させ、ＬＣ−ＰＲＭ分析の前に０．１％ギ酸に再懸濁させた。実施例１と同様に、アルブミン及び免疫グロブリンＧを除去しなかった子宮液サンプル（ＵＡ）でも予後値データを得た。
１．３ ＬＣ−ＰＲＭの準備
ペプチドの分離は、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００ＲＳＬＣクロマトグラフィーシステムをカラムスイッチングモードで動作させて行った。水中の０．０５％トリフルオロ酢酸と１％アセトニトリルの移動相を流速５μｌ／分にて使用して、消化サンプル２５０ｎｇの相当物をトラップカラム（７５μｍ×２ｃｍ、Ｃ１８ｐｅｐｍａｐ１００、３μｍ）に注入及び添加した。２％溶媒Ａから開始して３５％溶媒Ｂまでの線形勾配により、４８分間で３００ｎｌ／分にて、ペプチドを分析カラム（７５μｍ×１５ｃｍ、Ｃ１８ｐｅｐｍａｐ１００、２μｍ）中へ更に溶離させた。溶媒Ａは水中０．１％ギ酸であり、溶媒Ｂはアセトニトリル中０．１％ギ酸であった。Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ ｐｌｕｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でＰＲＭ分析を行った。ＭＳサイクルは、（２００ｍ／ｚにて）分解能７０，０００で行われるフルＭＳ１スキャンと、（２００ｍ／ｚにて）分解能３５，０００で得た正規化衝突エネルギーが２０の、時間設定された標的ＭＳ２スキャンからなっていた。前駆体イオンの四重極単離ウィンドウをＭＳ２イベントでは１ｍ／ｚ単位に設定し、内因性及び同位体標識ペプチドの各ペアの時間設定ウィンドウの期間を２分に設定した。
１．４．ＰＲＭデータ処理
ＰＲＭデータは、Ｍａｒｔｉｎｅｚら（上掲）に記載されているように処理した。簡潔には、各前駆体の５つの最も強力なフラグメントイオン（即ちＰＲＭトランジション）の抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）の面積を、Ｓｋｙｌｉｎｅプログラム（ｖ３．１）（ＭｃＣｏｓｓ Ｌａｂ、ワシントン大学、米国）を使用して抽出した。ペプチドの同一性は、リファレンスの５つのトランジションのピーク面積（生体マトリックスなしの合成ペプチドミックスのＰＲＭ取得）と、臨床サンプル中の内因性及び重ペプチドの対応するトランジションの面積との間で計算したスペクトルコントラスト角度（ｃｏｓθ）のコサインに基づく、スペクトルマッチング手法を使用して確認した。ペプチドの内因性及び同位体標識バージョンのｃｏｓθのどちらも０．９８を超えた場合、ペプチドの検出及び同定は合格であった。定量化の限界を下回るＭＳ測定により、０．９８未満のスコアが生成され、そのような場合には、面積値をバックグラウンドの推定値に置き換えた。
１．５ 統計分析
各ペプチドの軽／重面積比をＳｋｙｌｉｎｅから抽出して、複製間の平均を計算した。統計分析は、ＳＰＳＳ（ｖ２０．０）（ＩＢＭ、ニューヨーク州アーモンク、米国）及びＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ．６．０）（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ラホーヤ、カリフォルニア州、米国）で行った。データが正規分布に従っていなかったため、ノンパラメトリックＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定を使用して、患者のグループ間でモニタリングしたペプチドのレベルの比較を行った。Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ ＦＤＲ法を使用して、複数の比較のためにＰ値を調整した。０．０５未満の調整ｐ値は、統計的に有意であると見なした。受信者操作特性（ＲＯＣ）分析を使用して、バイオマーカの特異性と感度を評価し、個々のタンパク質ごとにＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）を推定した。
１．６ 分類指標の開発
タンパク質の各種組合せの能力を評価して、サンプルを２つの臨床カテゴリに分類するために、ロジスティック回帰モデルをデータに合わせて調整した。これらの回帰モデルごとにＲＯＣ曲線を生成した。ＡＵＣ、及びグループ間の区別のための「最適」カットオフポイントにおける感度及び特異性を得た。最適カットオフは、同一性ライン（対角線）までの距離を最大化したしきい値に相当していた。最適性基準は：ｍａｘ（感度＋特異性）であった。ＡＵＣ ９５％信頼区間（ＣＩ）は、Ｄｅｌｏｎｇ法で計算した。感度及び特異性の値の９５％ＣＩは、ブートストラップ再サンプリング及びＦａｗｃｅｔｔが記載した平均化方法によって計算した。すべてのＲＯＣ分析は、Ｒ「ｐＲＯＣ」パッケージを使用して行った（Ｒｏｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，“ｐＲＯＣ：ａｎｄ ｏｐｅｎ−ｓｏｕｒｃｅ ｐａｃｋａｇｅ ｆｏｒ Ｒ ａｎｄ Ｓ＋ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅ ＲＯＣ ｃｕｒｖｅｓ”，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ−２０１１，ｖｏｌ．ｎｏ．１２：７７）。各タンパク質パネルの頑健性を評価するために、データセット内の各サンプルに、データセットの残りのサンプルに対して調整したロジスティック回帰モデルを適用することにより、「リーブワンアウト（ｌｅａｖｅ−ｏｎｅ−ｏｕｔ）」交差検証手順を行い、よって新しいＲＯＣ曲線を得て、その後、通常のＲＯＣ分析を行った。
２．結果
ＥＥＣはＥＣで最も一般的な組織型であり、非類内膜ＥＣ症例（ＮＥＥＣ）と比較した場合、予後は良好である。ＮＥＥＣは全ＥＣ症例の約２０％に相当するが、ＥＣの再発及び死亡の５０％超を占めている。ＮＥＥＣの中で、漿液性ＥＣ（ＳＥＣ）は最も一般的なサブタイプである。４９のＥＥＣ症例と２０のＳＥＣ症例のコホートにおいて５１のタンパク質の存在量を調査した後、表４に示すように、ＥＥＣ患者からの子宮吸引物サンプルにおいて１１のタンパク質のレベルが有意に上昇した（調整ｐ値＜０．０５）。中でも、６つのタンパク質は２を超える倍率変化を有し、最も高い個別のＡＵＣ値を示した：ＰＩＧＲ ０．８５（９５％ＣＩ、０．７３４−０．９５８）、ＣＡＹＰ１ ０．８３（９５％ＣＩ、０．７２５−０．９４２）、ＣＴＮＢ１ ０．７８（９５％ＣＩ、０．６７０−０．８９５）、ＳＧ２Ａ１ ０．７７（９５％ＣＩ、０．６６１−０．８８０）、ＶＩＭＥ ０．７６（９５％ＣＩ、０．６４５−０．８８１）及びＷＦＤＣ２ ０．７４（９５％ＣＩ、０．６２４−０．８５５）。
表４ ＥＥＣ対ＳＥＣ（ＮＥＥＣ）を鑑別診断するタンパク質
発明者らは、表４のタンパク質の１以上の発現レベルを判定することに加えて、他のタンパク質のレベルを分析した場合に、分類の頑健性が向上することを見出した。特に、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡの１以上のレベル。
上記と同じ手順に従って、診断及び予測バイオマーカの間で２〜１２のタンパク質、特に２及び３のタンパク質のすべての考えられる組合せを評価して、個々のバイオマーカの結果を改善するタンパク質のパネルを同定した。ＣＴＮＢ１、ＸＰＯ２及びＣＡＰＧからなる３つのタンパク質の組合せは、ＡＵＣ ０．９９（９５％ＣＩ、０．９０−１）を有する、子宮吸引物サンプルの液体中のＥＥＣとＳＥＣを区別するための性能が最高のパネルであった。このパネルは、９５％（９５％ＣＩ、８５％−１００％）の感度及び９５．９％（９５％ＣＩ、８９．８％−１００％）の特異性を達成した（図１）。「リーブワンアウト（ｌｅａｖｅ−ｏｎｅ−ｏｕｔ）」交差検証の完了後、値は９５％の感度と８９．８％の特異性であった。
この図１から推測できるように、マーカＣＴＮＢ１とＣＡＰＧのどちらも、ＳＥＣからＥＥＣを鑑別診断するための感度及び特異性の興味深い値を与えたが、驚くべきことに、ＣＴＮＢ１、ＣＡＰＧ及び更にＸＰＯ２の組合せ（パネル）は、高い感度及び特異性の鑑別診断値を与えた。このため、パネルは診断パネルとしてだけでなく、ＥＣサブタイプの分類を可能にする、信頼性の高い予後パネルとしても理解されるべきである。疾患の正確な分類は、早ければ早いほど良く、基本的には可能な限り早く適用される正しい医療レジメンのために、生存率の上昇につながる。
本試験において、女性生殖管から得た液体生検（即ち、子宮吸引物液）を使用することにより、ＥＥＣとＳＥＣの組織を高い信頼性で区別する方法が開示されている。これにより真の改善が前提とされるのは、現行の診断手順が、このサンプルの限定された細胞含有量の組織学的検査に基づき、重大な欠点：平均２２％の未診断患者、及び最大５０％のＥＣ症例の誤った組織型及び／又はグレード割り当てに関連付けられるためである。
この調査の臨床上の強みは、この試験に登録した女性がＥＣ診断過程に参加する女性の幅広い多様性を含んでいたことである。ＥＣ患者に関しては、２つの最も一般的な組織構造である、ＥＥＣ及びＳＥＣ症例が含まれていた。非ＥＣ患者は、主にＡＵＢ又は子宮内膜の肥厚によりＥＣの疑いがあるすべての女性を対象とした。これには、良性の病状（主にポリープ、筋腫及び子宮内膜過形成）に罹患した女性、及び子宮内膜が正常な女性が含まれていた。更に、この試験には、機能性子宮内膜を有する閉経前の女性と、主に萎縮性子宮内膜を示す閉経後の女性の両方が含まれていた。
ＥＣ患者のリスクグループの割り当てを改善するための試験を行ったタンパク質の役割に関して、欧州臨床腫瘍学会（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ＥＳＭＯ）分類等の現行の主要なリスク層別化システムは、腫瘍の組織構造、グレード、子宮筋層浸潤及びリンパ管浸潤に焦点を当てている。大半の情報は術前に利用できないため、組織学的サブタイプ及びグレードは、リスクグループの割り当て及び外科的病期分類手順の範囲の決定のための重要な要素となる。本発明に由来する３つのタンパク質（ＣＴＮＢ１、ＸＰＯ２、及びＣＰＧ）の組合せにより、９５．０％の感度及び９５．９％の特異性で、ＥＥＣ及びＮＥＥＣ（ＳＥＣ）組織ＥＣタイプ間を正確に区別することができた。
これらの３つのタンパク質は、以前はＥＣに関連していた。ベータカテニン（ＣＴＮＢ１）は、上皮細胞間接着、及びＷｎｔシグナル伝達経路の細胞増殖及び分化を担う必須遺伝子の転写において重要な役割を有する。現行のアッセイでの観察に従って、ＣＴＮＢ１はＥＥＣ組織標本に記載されているが、ＮＥＥＣ腫瘍には記載されていない。マクロファージキャッピングタンパク質（ＣＡＰＧ）は、アクチンフィラメントを再構築することによって細胞の運動性を調節する。いくつかのタイプの癌の細胞遊走及び侵襲性に関与している。ＣＴＮＢ１とは異なり、組織レベルのＥＥＣ症例と比較して、より浸潤性のＳＥＣ腫瘍ではより高いレベルのＣＡＰＧが報告され、これはここで報告した子宮吸引物の結果と一致している。最後に、細胞アポトーシス感受性タンパク質としても既知である、エクスポーチン−２（ＸＰＯ２）は、有糸分裂紡錘体チェックポイントにおいて役割を有する。ＸＰＯ２の除去は細胞周期の停止につながり、結果として、腫瘍の増殖に関連しているが、腫瘍の浸潤及び転移にも関連している。ＥＣを含む多くの癌タイプでＸＰＯ２がより高いレベルで認められ、患者のより高い癌グレード及び転帰不良に明らかに関連している。本試験において、ＥＥＣ症例とＳＥＣ症例の間にＸＰＯ２レベルの有意な差は認められなかったが、ＣＴＮＢ１とＣＡＰＧによって形成されたパネルに含めると、その性能は有意に改善された。
注目すべきことに、本試験がＥＣの重要な臨床的ニーズを扱っているのは、本明細書に記載する子宮吸引物に基づくプロテオミクス手法が、ＥＣ腫瘍をより臨床的に関連性のあるリスクグループに分類し、外科的治療の予測を支援するプロテオミクスシグネチャの同定への道を開くためである。したがって、最も一般的な組織を正確に分類するためのシクネチャを用いて最初のステップが達成された。全体として、子宮吸引物ベースのバイオマーカシグネチャの開発は、ＥＣ患者の管理を改善し、多額の医療費を節約することが期待されている。
説明に示したように、表Ｃ及び表Ｄの特定のタンパク質のセットを以下に挙げる。
発明は、以下の項の内容にも関連している。
項１ 子宮内膜癌の予後の方法であって、女性生殖管からの子宮液サンプル中の以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１の１以上の発現レベルを判定することを含む、方法。
項２ 子宮液サンプルが、女性生殖管からの子宮吸引液サンプルである、項１に記載の方法。
項３ 以下のタンパク質：ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、及びＷＦＤＣ２及の１以上の発現レベルを判定することを含む、項１〜２のいずれかに記載の方法。
項４ 以下のタンパク質：ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡのタンパク質の１以上の発現レベルを判定することを更に含む、項１〜３のいずれかに記載の方法。
項５ ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１つのタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む、項１〜４のいずれかに記載の方法。
項６ 子宮吸引物から単離されたエクソソーム含有画分におけるＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを判定することを更に含む、項１〜５のいずれかに記載の方法。
項７ ＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセット
からなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを判定することを含む、項１〜６のいずれかに記載の方法。
項８ 子宮内膜癌の予後が、類内膜子宮内膜癌を非類内膜子宮内膜癌と区別することによって判定される、項１〜７のいずれかに記載の方法。
項９ 発現レベルがタンパク質レベルで判定される、項１〜８のいずれかに記載の方法。
項１０ タンパク質レベルが、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術によって判定される、項１〜９のいずれかに記載の方法。
項１１ タンパク質の発現レベルが、該タンパク質に結合することができる抗体又はそのフラグメントを使用して判定される、項９〜１０のいずれかに記載の方法。
項１２ 抗体又はそのフラグメントがキットの一部を形成する、項１１に記載の方法。
項１３ 女性生殖管からの子宮液サンプル中の子宮内膜癌の予後のためのインビトロマーカとしてのＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用。
項１４ 項１〜１３のいずれか一項に記載の方法における、子宮内膜癌の予後のための、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１以上の使用。
項１５ 子宮内膜癌の予後のためのキットの使用であって、固体担体並びに以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１以上の発現レベルを検出する手段、並びに任意に以下のタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡの１以上の発現レベルを検出する手段を含む、キットの使用。
項１６ 固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、項１５に記載のキットの使用。
項１７ タンパク質の発現レベルを検出する手段が、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である、項１５〜１６のいずれかに記載のキットの使用。
項１８ タンパク質の発現レベルを検出する手段が抗体又はそのフラグメントである、項１５〜１７のいずれかに記載の使用。
項１９ 固体担体並びにＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、及びＬＤＨＡからなる群から選択される１以上のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、キット。
項２０ 固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、キット。
項２０ ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＳＳＡ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＶＡＭＰ８；ＭＭＰ９、ＭＸ１；ＭＭＰ９、ＲＳＳＡ；ＭＭＰ９、ＭＶＰ；ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＶＡＭＰ８；ＢＣＡＭ、ＭＭＰ９；ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１、ＴＥＲＡ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９、ＭＶＰ；ＡＧＲ２、ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６、ＭＶＰ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９；及び表Ｄに挙げるタンパク質のセット
からなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を更に含む、項１９に記載のキット。
項２１ 前記タンパク質の発現レベルを検出する手段が、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析、及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である、項１９〜２０のいずれかに記載のキット。
項２２ タンパク質の発現レベルを検出する手段が抗体又はそのフラグメントである、項１９〜２１のいずれかに記載のキット。
項２３ 酵素結合免疫吸着アッセイを実施するためのキットである、項１９〜２２のいずれかに記載のキット。
項２４ 個々のサンプルを分類するための、パンネルダイヤグラムを更に含む、項１９〜２３のいずれかに記載のキット。
項２５ 項１〜１２のいずれかに記載の方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＥＣの診断及び／又は予後のためにタンパク質の１以上の発現レベルを判定した後、レベルに値及び／又はスコアが与えられ、計算値を得るために数式で任意に計算され、レベル、スコア及び／又は計算値の機能において、ＥＣに罹患している若しくは罹患していない選択肢の間で、及び／又は異なるＥＣサブタイプ間で罹患している選択肢の間で決定がなされる、方法。
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Claims (27)

  1. 女性生殖管からの子宮液サンプル中のＣＴＮＢ１の発現レベルを判定することを含む、子宮内膜癌の鑑別診断の方法。
  2. 前記子宮液サンプルが、女性生殖管からの子宮吸引液サンプルである、請求項１に記載の方法。
  3. 以下のタンパク質：ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮ、ＣＡＰＧ、ＨＳＰＢ１及びＸＰＯ２の１つ以上の発現レベルを判定することを含む、請求項１又は２のいずれかに記載の方法。
  4. 以下のタンパク質：ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１つ以上の発現レベルを判定することを含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
  5. 以下のタンパク質：ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＬＤＨＡ、ＰＥＲＭ、ＯＳＴＰ、ＳＰＩＴ１、ＮＡＭＰＴ、ＣＡＳＰ３、Ｋ２Ｃ８、ＭＵＣ１、ＡＮＸＡ１、ＡＮＸＡ２、ＦＡＢＰ５及びＷＦＤＣ２の１つ以上の発現レベルを判定することをさらに含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
  6. ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡからなる群から選択される１つのタンパク質の発現レベルを判定することをさらに含む、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
  7. 子宮吸引物から単離されたエクソソーム含有画分におけるＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択される１つ以上のタンパク質の発現レベルを判定することをさらに含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
  8. ＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを判定することを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
  9. 子宮内膜癌の前記鑑別診断が、類内膜子宮内膜癌を非類内膜子宮内膜癌及び非癌と区別することによって判定される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
  10. 前記発現レベルがタンパク質レベルで判定される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
  11. 前記タンパク質レベルが、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術によって判定される、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
  12. タンパク質の前記発現レベルが、該タンパク質に結合することができる抗体又はそのフラグメントを使用して判定される、請求項１０〜１１のいずれかに記載の方法。
  13. 前記抗体又はそのフラグメントがキットの一部を形成する、請求項１２に記載の方法。
  14. 女性生殖管からの子宮液サンプル中の子宮内膜癌の予後のためのインビトロマーカとしてのＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１つ以上の使用。
  15. 請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法における、子宮内膜癌の予後のための、ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１からなる群から選択されるタンパク質の１つ以上の使用。
  16. 子宮内膜癌の予後のためのキットの使用であって、固体担体並びに以下のタンパク質ＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３及びＭＸ１の１つ以上の発現レベルを検出する手段、並びに任意に以下のタンパク質ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡの１つ以上の発現レベルを検出する手段を含む、キットの使用。
  17. 固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、請求項１６に記載のキットの使用。
  18. 前記タンパク質の発現レベルを検出する手段が、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である、請求項１６〜１７のいずれかに記載のキットの使用。
  19. 前記タンパク質の発現レベルを検出する手段が抗体又はそのフラグメントである、請求項１６〜１８のいずれかに記載の使用。
  20. 固体担体並びにＰＩＧＲ、ＶＩＭＥ、ＣＴＮＢ１、ＣＡＹＰ１、ＳＧ２Ａ１、ＷＦＤＣ２、ＣＡＤＨ１、ＣＤ４４、ＬＥＧ３、ＬＥＧ１、ＣＡＰＧ、ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ、ＭＭＰ９、ＣＤ５９、ＣＬＤ６、ＢＣＡＭ、ＩＦ２Ｂ３、ＰＬＤ３、ＭＸ１、ＸＰＯ２、ＰＲＤＸ１、ＣＬＩＣ１、ＰＤＩＡ１、ＫＰＹＭ、ＥＮＯＡ、ＧＳＴＰ１、ＧＴＲ１、ＣＨ１０、ＭＩＦ、ＰＥＢＰ１、ＴＰＩＳ、ＮＧＡＬ及びＬＤＨＡからなる群から選択される１つ以上のタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、キット。
  21. 固体担体並びにＬＡＭＰ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＩＧＲ；ＡＧＲ２、ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＡＧＲ２、ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＰＩＧＲ、ＰＬＤ３；ＢＣＡＭ、ＰＩＧＲ；ＣＬＤ６、ＲＡＢ８Ａ；ＣＬＤ６、ＰＯＤＸＬ；ＢＣＡＭ、ＲＬ２９；ＢＣＡＭ、ＰＯＤＸＬ；ＣＬＤ６、ＰＰＩＡ、ＡＧＲＩＮ、ＢＣＡＭ；ＡＮＸＡ、ＢＣＡＭ；ＢＣＡＭ、ＲＡＢ８Ａ；ＢＣＡＭ、ＳＹＩＣ；ＣＬＤ６、ＩＦＢ３；及び表Ｃに挙げるセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段を含む、キット。
  22. ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＲＳＳＡ；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ；ＭＭＰ９、ＰＯＤＸＬ、ＶＡＭＰ８；ＭＭＰ９、ＭＸ１；ＭＭＰ９、ＲＳＳＡ；ＭＭＰ９、ＭＶＰ；ＭＭＰ９、ＲＡＢ８Ａ；ＭＭＰ９、ＶＡＭＰ８；ＢＣＡＭ、ＭＭＰ９；ＭＭＰ９、ＡＧＲＩＮ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１、ＴＥＲＡ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９、ＭＶＰ；ＡＧＲ２、ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６、ＭＶＰ；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ８１；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ１６６；ＡＧＲＩＮ、ＣＤ５９；ＡＧＲＩＮ、ＭＭＰ９；及び表Ｄに挙げるタンパク質のセットからなる群から選択される少なくとも１セットのタンパク質の発現レベルを検出する手段をさらに含む、請求項２１に記載のキット。
  23. 前記タンパク質の発現レベルを検出する手段が、イムノアッセイ、生物発光アッセイ、蛍光アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学アッセイ、質量分析及びその組合せからなる群から選択されるアッセイ又は技術を実施する手段である、請求項２０〜２２のいずれかに記載のキット。
  24. 前記タンパク質の発現レベルを検出する手段が抗体又はそのフラグメントである、請求項２０〜２３のいずれかに記載のキット。
  25. 酵素結合免疫吸着アッセイを実施するためのキットである、請求項２０〜２４のいずれかに記載のキット。
  26. 個々のサンプルを分類するためのパンネルダイヤグラムをさらに含む、請求項２０〜２５のいずれかに記載のキット。
  27. 請求項１〜１３のいずれかに記載の方法を実施するためのコンピュータ実装方法であって、ＥＣの診断及び／又は予後のためにタンパク質の１つ以上の発現レベルを判定した後、前記レベルに値及び／又はスコアが与えられ、計算値を得るために数式で任意に計算され、前記レベル、スコア及び／又は計算値の機能において、ＥＣに罹患している若しくは罹患していない選択肢の間で、及び／又は異なるＥＣサブタイプ間で罹患している選択肢の間で決定がなされる、方法。
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