JP2020527553A - クロマトグラフィー - Google Patents
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Abstract
Description
a)生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように、供給原料からの供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと;
b)溶出溶液をクロマトグラフィーマトリックスに適用することによって、クロマトグラフィーマトリックスから溶離液に生体分子生成物を溶出し、
溶離液は:
−精製された生体分子生成物を含む第1の画分;及び
−生体分子生成物と少なくとも1つの不純物の両方を含む第2の画分であって、1つ又は2つ以上の先行する画分及び/又は後続する画分を含む第2の画分
を含み、第1の画分は第2の画分と分離されて回収されるステップと;
c)1つ又は2つ以上の容器に第2の画分を保持するステップと;
d)第2の画分中の生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように1つ又は2つ以上の容器からの第2の画分及び供給原料からの追加の供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードし;追加の供給材料は第2の画分と同時に又は続いてロードされるステップと;
e)溶出溶液をクロマトグラフィーマトリックスに適用することによって、クロマトグラフィーマトリックスから溶離液に生体分子生成物を溶出し、溶離液は精製された生体分子生成物を含むステップと
を含み;
ステップ(a)、ステップ(b)、ステップ(d)及びステップ(e)のクロマトグラフィーマトリックスは同じクロマトグラフィーマトリックスである方法を提供する。
本発明の根底にある課題は、本明細書で提供される方法によって解決される。
a)生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように、供給原料からの供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと;
b)溶出溶液をクロマトグラフィーマトリックスに適用することによって、クロマトグラフィーマトリックスから溶離液に生体分子生成物を溶出し、
溶離液は:
−精製された生体分子生成物を含む第1の画分;及び
−生体分子生成物と少なくとも1つの不純物の両方を含む第2の画分であって、1つ又は2つ以上の先行する画分及び/又は後続する画分を含む第2の画分
を含み、第1の画分は第2の画分と分離されて回収されるステップと;
c)1つ又は2つ以上の容器に第2の画分を保持するステップと;
d)第2の画分中の生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように、1つ又は2つ以上の容器からの第2の画分及び供給原料からの追加の供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードし;追加の供給材料は第2の画分と同時に又は続いてロードされるステップと;
e)溶出溶液をクロマトグラフィーマトリックスに適用することによって、クロマトグラフィーマトリックスから溶離液に生体分子生成物を溶出し、溶離液は精製された生体分子生成物を含むステップと
を含み;
ステップ(a)、ステップ(b)、ステップ(d)及びステップ(e)のクロマトグラフィーマトリックスは同じクロマトグラフィーマトリックスである方法を提供する。
a)第1の運転クロマトグラフィーサイクルで、第1の容器からの目的の化合物を含む混合物を、化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転されるクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと;
b)クロマトグラフィーマトリックスから目的の化合物を溶出し、目的の化合物を含有する溶離液を溶離液の画分として回収するステップと;
c)溶離液の1つ又は2つ以上の画分を、目的の化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転される同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードするステップと
を含む方法が提供される。
a)第1の運転クロマトグラフィーサイクルで、第1の容器からの目的の化合物を含む混合物を、化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転されるクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと;
b)クロマトグラフィーマトリックスから目的の化合物を溶出し、目的の化合物を含有する溶離液を溶離液の画分として回収するステップと;
c)さらなるクロマトグラフィーサイクルで、溶離液の1つ又は2つ以上の画分を、目的の化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転される同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードするステップと
を含み得る。
a)第1の運転クロマトグラフィーサイクルで、第1の容器からの目的の化合物を含む混合物を、化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転されるクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと;
b)クロマトグラフィーマトリックスから目的の化合物を溶出し、目的の化合物を含有する溶離液を溶離液の画分として回収するステップと;
c)同じクロマトグラフィーサイクルで、溶離液の1つ又は2つ以上の画分を、目的の化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転される同じクロマトグラフィーマトリックス、すなわち第1の運転クロマトグラフィーサイクルにリロードするステップと
を含み得る。
上記のように、本発明の方法は、供給原料からの供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードし、マトリックスから目的の化合物、すなわち生体分子生成物を溶出することを含む。したがって、溶離液は、精製された生体分子生成物を含む1つ又は2つ以上の「第1の画分」を含む。溶離液は、生体分子生成物及び少なくとも1つの不純物を含む1つ又は2つ以上の「第2の画分」も含む。
上記のように、生体分子の粗抽出物は、典型的には生体分子生成物(目的の化合物)と類似のクロマトグラフィーマトリックスへの結合特性を有する不純物を含有している。このような不純物の溶出プロファイルは、典型的には少なくとも部分的に生体分子生成物と重複する。したがって、「先行する画分」は、生体分子生成物(目的の化合物)と生体分子生成物ほど強くなくクロマトグラフィーマトリックスに結合する不純物の両方を含む。「後続する画分」は、生体分子生成物(目的の化合物)と生体分子生成物よりも強くクロマトグラフィーマトリックスに結合する不純物の両方を含む。先行する画分は生体分子生成物(目的の化合物)の前にクロマトグラフィーマトリックスから溶出し;後続する画分は生体分子生成物(目的の化合物)の後にクロマトグラフィーマトリックスから溶出する。先行する画分は「前の画分」とも呼ばれる。後続する画分は「後の画分」とも呼ばれる。
i)同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードされる溶離液の1つ又は2つ以上の画分が、所望の特性を有する溶離液の1つ又は2つ以上の画分と異なる;
ii)クロマトグラフィーマトリックスにリロードされる溶離液の1つ又は2つ以上の画分が、所望の特性を有する溶離液の1つ又は2つ以上の画分の前にクロマトグラフィーマトリックスから溶出する;及び/又は
クロマトグラフィーマトリックスにリロードされる溶離液の1つ又は2つ以上の画分が、所望の特性を有する溶離液の1つ又は2つ以上の画分の後にクロマトグラフィーマトリックスから溶出する;
ならびに任意に、
iii)所望の特性を有する溶離液の1つ又は2つ以上の画分の前にクロマトグラフィーマトリックスから溶出するクロマトグラフィーマトリックスにリロードされる溶離液の1つ又は2つ以上の画分;及び所望の特性を有する溶離液の1つ又は2つ以上の画分の後にクロマトグラフィーマトリックスから溶出するクロマトグラフィーマトリックスにリロードされる溶離液の1つ又は2つ以上の画分が、
i)同じクロマトグラフィーマトリックスに別々にリロードされる;又は
ii)合わせられ、同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードされる。
上記のように、本発明の方法は、供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードし、マトリックスから標的生体分子(目的の化合物)を溶出することを含む。精製された生体分子生成物を含む(したがって本明細書で定義される所望の特性を有する)第1の画分に加えて、溶離液はまた、少なくとも1つの不純物を含む(したがって本明細書で定義される望ましくない特性を有する)第2の画分も含む。本発明の方法は、1つ又は2つ以上のこのような第2の画分を生じさせることができる。以下により詳細に記載されるように、複数の第2の画分は、本発明の方法の単一サイクルから複数の第2の画分を回収すること、又は本発明の方法の複数のサイクルを実行し、各サイクルで単一もしくは複数の第2の画分を回収することを含む種々の方法で生じ得る。
本発明の方法では、供給原料からの供給材料がクロマトグラフィーカラムにロードされ、第1及び第2の画分が溶出されると、1つ又は2つ以上の第2の画分が、クロマトグラフィーマトリックスにリロードされる前に1つ又は2つ以上の容器に保持される。この保持段階は、特許請求される方法のステップ(c)に対応する。
本発明の方法では、クロマトグラフィーマトリックスにリロードされる1つ又は2つ以上の第2の画分が、クロマトグラフィーマトリックスによる生体分子の結合を促進するために処理され得る。1つ又は2つ以上の第2の画分は、好ましくはクロマトグラフィーマトリックスによる生体分子の結合を促進するために、クロマトグラフィーマトリックスへのリロードの前又は間に処理される。ただし、1つ又は2つ以上の第2の画分が、クロマトグラフィーマトリックスからの溶出中に処理されてもよい。したがって、本発明の特許請求される方法では、処理が、好ましくは方法のステップ(b)及び/又はステップ(c)及び/又はステップ(d)の間、好ましくはステップ(c)及び/又はステップ(d)の間;最も好ましくは方法のステップ(c)の間に行われる。
本発明では、第2の画分が、供給原料からの追加の供給材料(すなわち、目的の化合物を含む追加の混合物)と共にクロマトグラフィーマトリックスにリロードされる。追加の供給材料は、第2の画分と同時に又は続いてロードされる。得られる混合物がクロマトグラフィーマトリックスにロードされる前に、追加の供給材料を、1つ又は2つ以上の容器に保持された1つ又は2つ以上の第2の画分に添加することができる。あるいは、1つ又は2つ以上の容器からの1つ又は2つ以上の第2の画分のローディングの前、間又は後に、追加の供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードすることができる。
本発明の上記の説明から明らかなように、本発明の方法は、生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックス結合するように、供給原料(すなわち、生体分子生成物、すなわち目的の化合物を含む混合物)からの供給材料をクロマトグラフィーマトリックスにロードすることを含む。
当業者が理解するように、生体分子生成物を含む供給原料をクロマトグラフィーマトリックスにロードする場合、供給材料中の生体分子生成物の総量の全部又は一部のみがクロマトグラフィーマトリックスに結合し得る。クロマトグラフィーマトリックスに結合しない過剰な生体分子生成物(目的の化合物)は、マトリックスによって捕捉されないままであり、フロースルーとしてクロマトグラフィーマトリックスから回収され得る。これは、マトリックスの静的結合容量を超えるように、過剰な供給材料がクロマトグラフィーマトリックスにロードされると生じ得る。
ab)未結合の目的の化合物を含有するフロースルーを第2の容器に回収するステップと;
ac)さらなる運転クロマトグラフィーサイクルで、第2の容器からのフロースルーを、目的の化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転される同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードするステップと
を含む。
ab)未結合の目的の化合物を含有するフロースルーを第2の容器に回収するステップと;
ac)第2の容器からのフロースルーを同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードし、さらに新たなロード混合物を目的のタンパク質がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転されるさらなる運転クロマトグラフィーサイクルでロードするステップと
を含み得る。
ab)未結合の目的の化合物を含有するフロースルーを第2の容器に回収するステップと;
ac)さらなる運転クロマトグラフィーサイクルで、第2の容器からのフロースルーをリロードし、第1の容器からの目的の化合物の第2の容積を、クロマトグラフィーマトリックスの動的結合容量を超えるように運転される同じクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと
を含む。
本明細書に記載される場合、生体分子生成物(すなわち、目的の化合物)を含む混合物は、供給原料としても知られる。本発明の方法では、供給原料からの供給材料がクロマトグラフィーマトリックスにロードされる。
多くのクロマトグラフィー技術が当技術分野で知られており、本発明の方法と適合性である。
−イオン交換クロマトグラフィーマトリックス;
−疎水性相互作用クロマトグラフィーマトリックス;
−アフィニティークロマトグラフィーマトリックス;
−ミックスモードクロマトグラフィーマトリックス;
−キラルクロマトグラフィーマトリックス;及び
−誘電クロマトグラフィーマトリックス
から選択される。
好ましくは、本発明の方法の複数のサイクルからの第1の画分が合わせられる又は一緒にプールされ得る。したがって、本発明の方法は、好ましくは第1の画分の各々を合わせることを含む。
本明細書で使用される「陰イオン交換クロマトグラフィー」という用語は、固相が正に帯電している、例えば四級アミノ基などの1つ又は2つ以上の正に帯電したリガンドがそこに結合しているクロマトグラフィーを指す。市販の陰イオン交換マトリックスには、DEAEセルロース、QAE SEPHADEX(商標)、FAST Q SEPHAROSE(商標)Capto Q及びCapto Q Impres(GE Healthcare)、Unosphere及びNuvia Q(BioRad)、GigaCap Q(Tosoh)、Mustang Q XT(Pall)、Fractogel Q及びEshmuno Q(Merck Millipore)、ならびに陰イオン交換膜吸着器、例えばSartoBind Q(Sartorius)、ならびにモノリス吸着器、例えばQAモノリス(Bia Separations)が含まれる。
本発明の方法に従って精製することができる抗体又は抗体断片などの目的のタンパク質は、組換え抗体又は抗体断片をコードする1つ又は2つ以上の発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養することによって産生することができる。
濃度2.18g/L及び導電率約14mS/cmの裸のFabを含有する大腸菌(E.coli)培養物から遠心分離及び熱抽出された凍結清澄化細胞培養液を、脱イオン水で、pH約4.5及び導電率約3.76mS/cmで濃度0.5g/lに希釈した。3カラムボリューム(CV)相当の洗い流し緩衝液(50mM酢酸ナトリウムpH4.5 導電率4.0mS/cm)をカラムベースのクロマトグラフィーマトリックスに150cm/hでポンプで送ってカラムを平衡化し、引き続いて17.5g/L樹脂容積のロード負荷まで適用される目的のタンパク質を含有するロードを、225cm/時間でポンプで送り、引き続いて150cm/hでさらに5CVの同じ洗い流し緩衝液、引き続いて150cm/時間で10CVにわたって低導電率洗い流し緩衝液から高導電率溶出緩衝液に上昇する線形溶出緩衝液勾配(50mM酢酸ナトリウム 225mM塩化ナトリウム緩衝液pH4.5 導電率26.4mS/cm)、引き続いて2CVの高導電率再生緩衝液(50mM酢酸ナトリウム 1M塩化ナトリウム pH4.5 導電率85mS/cm)を300cm/時間で適用し、引き続いて2CVの高pH洗浄緩衝液を300cm/時間で適用し、この点で15分間保持した後、さらなる2CVの洗い流し緩衝液ですすぎ落とす、結合及び溶出クロマトグラフィーによるプロセスを実行した。使用したクロマトグラフィーマトリックスはGE 4.66ml 10cm Capto S HiScreen陽イオン交換カラムで、作業はGE Akta Avant機械で実行した。クロマトグラフィーの間中、カラムからの出力の導電率、pH、280nm吸光度、260nm吸光度及び305nm吸光度をインラインで測定し、リアルタイムで監視及び記録し、10CV溶出中の出力液を捕捉し、6℃で96ウェルディープウェルマイクロタイタープレートに1.55ml画分を保存した。10CV勾配溶出を通して振幅測定値を観察すると、2つの主に部分的に分離されたピークが強い重複で現れた;おおよそ22番目の画分のはるかに大きな非対称ピーク頂点の直前のおおよそ17番目の画分の別個の頂点を有する小さなピーク。各画分の30ulをサンプリングし、アフィニティープロテインG分析HPLCステップで実行して画分の組成を決定し、プロテインG HPLCを通過する各試料の別個のフロースルーピーク及び溶離液ピークのA280吸光度を積分することによって、Capto S勾配溶出での初期の小さいピークに相当する非抗体成分(HPLCのフロースルー、ここでは非Fabと呼ばれる)の量とCapto S勾配溶出の後期の大きなピークに相当する抗体成分(HPLCの溶離液、ここではFabと呼ばれる)の量の別個の決定が可能になり、両方の真のプロファイルを得た。
Kontermann,R.E.(2012).“Dual targeting strategies with bispecific antibodies.”MAbs 4(2):182-197.
Mahajan,E.,A.George and B.Wolk(2012).“Improving affinity chromatography resin efficiency using semi-continuous chromatography.”J Chromatogr A 1227:154-162.
1.目的の化合物を含む混合物から目的の化合物を精製する方法であって、
a)第1の運転クロマトグラフィーサイクルで、第1の容器からの目的の化合物を含む混合物を、化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転されるクロマトグラフィーマトリックスにロードするステップと;
b)クロマトグラフィーマトリックスから目的の化合物を溶出し、目的の化合物を含有する溶離液を溶離液の画分として回収するステップと;
c)溶離液の1つ又は2つ以上の画分を、目的の化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転される同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードするステップと
を含む方法。
ab)未結合の目的の化合物を含有するフロースルーを第2の容器に回収するステップと;
ac)さらなる運転クロマトグラフィーサイクルで、第2の容器からのフロースルーを目的の化合物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転される同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードするステップと
を含む、態様1から8のいずれか1つに記載の方法。
ab)未結合の目的の化合物を含有するフロースルーを第2の容器に回収するステップと;
ac)第2の容器からのフロースルーを同じクロマトグラフィーマトリックスにリロードし、さらに新たなロード混合物を、目的のタンパク質がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように運転されるさらなる運転クロマトグラフィーサイクルでロードするステップと
を含む、態様1から8のいずれか1つに記載の方法。
Claims (29)
- 生体分子生成物を、前記生体分子生成物及び少なくとも1つの不純物を含む供給原料から精製するための工業規模の方法であって、以下のステップを含むもの:
a)前記生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように、前記供給原料からの供給材料を前記クロマトグラフィーマトリックスにロードするステップ;
b)溶出溶液を前記クロマトグラフィーマトリックスに適用することによって、前記クロマトグラフィーマトリックスから溶離液に前記生体分子生成物を溶出するステップ、
前記溶離液は以下を含む:
−精製された生体分子生成物を含む第1の画分;及び
−前記生体分子生成物と少なくとも1つの不純物の両方を含む、1つ又は2つ以上の先行する画分及び/又は後続する画分を含む第2の画分、
前記第1の画分は前記第2の画分と分離されて回収される;
c)1つ又は2つ以上の容器に前記第2の画分を保持するステップ;
d)前記第2の画分中の前記生体分子生成物が前記クロマトグラフィーマトリックスに結合するように、前記1つ又は2つ以上の容器からの前記第2の画分及び前記供給原料からの追加の供給材料を前記クロマトグラフィーマトリックスにロードするステップ、前記追加の供給材料は前記第2の画分と同時に又は続いてロードされる;ならびに
e)溶出溶液を前記クロマトグラフィーマトリックスに適用することによって、前記クロマトグラフィーマトリックスから溶離液に前記生体分子生成物を溶出するステップ、前記溶離液は精製された生体分子生成物を含む;
ステップ(a)、ステップ(b)、ステップ(d)及びステップ(e)の前記クロマトグラフィーマトリックスは同じクロマトグラフィーマトリックスである。 - ステップ(b)、(c)及び(d)が繰り返される、請求項1に記載の方法。
- ステップ(b)、(c)及び(d)が少なくとも2回実行される、請求項1に記載の方法。
- 第2の画分が、(i)第1の画分の直前の先行する画分;及び/又は(ii)前記第1の画分の直後の後続する画分を含む、請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- 以下を含む請求項1〜4のいずれかに記載の方法:
−ステップ(a)及び(b)が複数回繰り返され;
−各ステップ(b)で回収された第2の画分が一緒にプールされ;
−ステップ(c)が、1つ又は2つ以上の容器に前記プールされた第2の画分を保持する;
−ステップ(d)が、前記プールされた第2の画分中の生体分子生成物がクロマトグラフィーマトリックスに結合するように、前記1つ又は2つ以上の容器からの前記プールされた第2の画分を前記クロマトグラフィーマトリックスにロードすること。 - ステップ(a)が、クロマトグラフィーマトリックスに結合しない未結合の生体分子生成物を含有するフロースルーを回収することをさらに含み;
ステップ(d)が、前記フロースルーを第2の画分及び/又は追加の供給材料と同時に又は続いて、前記クロマトグラフィーマトリックスにロードすることをさらに含む、
請求項1〜5のいずれかに記載の方法。 - 1つ又は2つ以上の第2の画分をプロセシングして、生体分子のクロマトグラフィーマトリックスへの結合を促進することをさらに含む、請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- プロセシングがステップ(c)及び/又はステップ(d)の間に行われる、請求項7に記載の方法。
- プロセシングが、1つ又は2つ以上の第2画分のpH、イオン強度、濃度、温度及び/又は溶媒を変更すること、ならびに/あるいは前記1つ又は2つ以上の第2の画分の混合及び/又は脱気を含む、請求項7又は8に記載の方法。
- 1つ又は2つ以上の第2の画分を試験することをさらに含む、請求項1〜9のいずれかに記載の方法。
- 1つ又は2つ以上の第2の画分を試験することが、前記1つ又は2つ以上の第2の画分の生体分子生成物の濃度;不純物の濃度;不純物の正体;pH;イオン強度;温度;溶媒;及び/又はガス濃度の1つ又は2つ以上を決定することを含む、請求項10に記載の方法。
- ステップ(c)が、1つ又は2つ以上の第2の画分を少なくとも5分間保持することを含む、請求項1〜11のいずれかに記載の方法。
- ステップ(c)が、1つ又は2つ以上の第2の画分を一晩保持することを含む、請求項1〜12のいずれかに記載の方法。
- クロマトグラフィーマトリックスが保持時間中に交換、洗浄又は更新される、請求項12又は13に記載の方法。
- 生体分子生成物がタンパク質、抗体、抗体断片、ポリヌクレオチド又はポリペプチドである、請求項1〜14のいずれかに記載の方法。
- 供給原料が少なくとも20リットル、任意に、少なくとも100リットルの容積を有する、請求項1〜15のいずれかに記載の方法。
- クロマトグラフィーマトリックスが少なくとも4リットルのベッドボリュームを有する、請求項1〜16のいずれかに記載の方法。
- ステップ(b)において、溶離液の体積がクロマトグラフィーマトリックスのベッドボリュームの少なくとも2倍であり、任意に、前記溶離液の体積が前記クロマトグラフィーマトリックスのベッドボリュームの2倍〜20倍である、請求項1〜17のいずれかに記載の方法。
- クロマトグラフィーマトリックスが、
イオン交換クロマトグラフィーマトリックス;
疎水性相互作用クロマトグラフィーマトリックス;
アフィニティークロマトグラフィーマトリックス;
ミックスモードクロマトグラフィーマトリックス;
キラルクロマトグラフィーマトリックス;及び
誘電クロマトグラフィーマトリックス
から選択される、請求項1〜18のいずれかに記載の方法。 - クロマトグラフィーマトリックスがクロマトグラフィーカラム内にある、請求項1〜19のいずれかに記載の方法。
- クロマトグラフィーマトリックスがクロマトグラフィー膜又はモノリス吸着器である、請求項1〜20のいずれかに記載の方法。
- クロマトグラフィーマトリックスからの生体分子生成物の溶出が、少なくとも約0.2クロマトグラフィーマトリックス容積/分の流速で行われる、請求項1〜21のいずれかに記載の方法。
- 第1の画分の各々を合わせることをさらに含む、請求項1〜22のいずれかに記載の方法。
- 精製された生体分子生成物をダイアフィルトレーション及び/又は濃縮することをさらに含む、請求項1〜23のいずれかに記載の方法。
- 精製された生体分子生成物をナノ濾過することをさらに含む、請求項1〜24のいずれかに記載の方法。
- 精製された生体分子生成物をさらなるクロマトグラフィー精製に供することをさらに含む、請求項1〜25のいずれかに記載の方法。
- 精製された生体分子生成物を化学的に修飾することをさらに含む、請求項1〜26のいずれかに記載の方法。
- 精製された生体分子生成物を薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又はアジュバントと共に製剤化することをさらに含む、請求項1〜27のいずれかに記載の方法。
- 請求項1〜28のいずれかに記載の方法によって得られる精製された生体分子生成物。
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