JP2020526748A - 電気化学バイオセンサーを用いた検体検出のための方法及び装置 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
図1の方法の流れ図を参照すると、本開示の実施形態によっては、作用電極及び他の電極(例えば、対向電極及び/又は基準電極)を含むセンサーを利用して検体から信号を得る方法を含むものがある。前記作用電極は触媒(例えば、検体特異的酵素)及び電子移動剤(例えば、レドックスメディエーター)と共に提供される、或いはそれで変性されている(10)。検体特異的酵素とレドックスメディエーターで変性された作用電極の面積は、作用電極の感知要素又は感知層という場合もある。図1に示すように、検体特異的酵素と共に提供される(例えば、それで変性されている)作用電極は、検体と共に提供される(15)。検体の存在下、変性された作用電極は検体を酸化し、反応から生成された電荷の量として酸化の量が測定される。作用電極が他の電極と接続されない限り、酸化還元反応からの電荷は作用電極表面に蓄積し続ける(20)。体内での濃度が低い検体(例えば、コルチゾール)では、所定期間電荷(電子)が蓄積されると、低濃度の検体から信号出力が得られるが、この信号出力を測定及び定量するのは他の周知の方法に比べて容易である。所定期間(例えば、120秒まで、3分まで、5分まで、10分まで、15分まで、20分まで、25分まで、又は30分まで)電荷を蓄積した後、作用電極を少なくとも1つの他の電極(例えば、対向電極及び/又は基準電極)と接続して回路を形成する(25)。回路が形成されると、作用電極表面に蓄積された電子は、電気信号として放出され、その振幅が測定されて(30)作用電極に存在する検体量と相互に関係付けられる。従って、図1の行為10、15、20、25、及び30として示されている本開示の実施形態による以下の方法によれば低濃度(例えば、4.7nM等のナノモル量)の検体を容易に検出・測定することができる。
本明細書で記載するセンサーは、生体内センサー又は生体外センサー(すなわち別個の監視試験片)であってもよい。そのようなセンサーを基板、例えば実質的に平面状の基板に形成してもよい。特定の実施形態では、前記センサーは配線、例えば、作用電極に関連付けられた(例えば、その表面を包み込むことを含む)1つ以上の他の電極を持つ作用電極配線内側部分である。前記センサーはまた、少なくとも1つの対向電極(或いは対向/基準電極)及び/又は少なくとも1つの基準電極或いは少なくとも1つの基準/対向電極を含んでいてもよい。
本開示の実施形態によっては、本開示のセンサーは直接検体を測定することができない。すなわち、センサー上の電極は検体と直接相互作用することができない。従って、検体分子と直接相互作用することができる酵素タンパク質により検体を検出する。しかしながら、(例えば、グルコースオキシダーゼ等)酵素によっては、電極と直接電子を交換することができない。なぜなら、その酸化還元活性部位は酵素タンパク質構造の奥深くに埋まっているからである。従って、酵素の酸化還元活性部位と電極との間で電子を移動させるため、電子移動剤(すなわち、レドックスメディエーター)が用いられる。固定化された分子は電子を中継することができるので、感知層に電子移動剤と検体特異的酵素と固定することで、「配線」というものを形成する。従って、「電気的に接続」される。また、検体特異的酵素を「接続された酵素」とも言う。接続された酵素は、例えば、Gregg ら(米国特許第5,262,035号)、Say ら(米国特許第6,134,461号)、及びHoss ら(米国特許公開第2012/0150005号)に開示されており、その全内容を引用により本明細書に組み込む。実施形態によっては、検体特異的酵素は電子移動剤に架橋されている。
本開示の実施形態によっては、検体特異的酵素は、測定する検体の酸化を触媒するため、作用電極表面に提供される(例えば、固定されている)。本明細書で用いられるように、検体特異的酵素はまた、検体酸化酵素と言う場合がある。本開示の実施形態によっては、検体特異的酵素は、グルコースオキシダーゼ、NAD−グルコースデヒドロゲナーゼ、及びグルコースを酸化するFAD−グルコースデヒドロゲナーゼから選択される。実施形態によっては、検体特異的酵素は乳酸オキシダーゼ又は乳酸塩を酸化するNAD−乳酸デヒドロゲナーゼである。実施形態によっては、検体特異的酵素は3−ヒドロキシ酪酸を酸化するNAD−3−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼである。実施形態によっては、検体特異的酵素は、コルチゾールを酸化する11β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ2型である。実施形態によっては、検体特異的酵素はアルコールを酸化するNAD−アルコールデヒドロゲナーゼである。実施形態によっては、検体特異的酵素はピルビン酸を酸化するピルビン酸オキシダーゼである。実施形態によっては、検体特異的酵素はグルタミン酸塩を酸化するNAD−グルタミン酸デヒドロゲナーゼである。実施形態によっては、検体特異的酵素はテオフィリンを酸化するキサンチンオキシダーゼである。
、イノシトール−3−リン酸シンターゼ、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ、イソピペリテノールデヒドロゲナーゼ、キヌレン酸−7,8−ジヒドロジオールデヒドロゲナーゼ、L−アミノ酸デヒドロゲナーゼ、L−アミノアジピン酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、L−アラビニトール−2−デヒドロゲナーゼ、L−アラビニトール−4−デヒドロゲナーゼ、L−アラビノース−1−デヒドロゲナーゼ、L−エリトロ−3,5−ジアミノヘキサン酸デヒドロゲナーゼ、L−グリコールデヒドロゲナーゼ、L−グロン酸−3−デヒドロゲナーゼ、L−イディトール−2−デヒドロゲナーゼ、L−イドン酸−5−デヒドロゲナーゼ、L−ラムノース−1−デヒドロゲナーゼ、L−トレオン酸−3−デヒドロゲナーゼ、L−トレオニン−3−デヒドロゲナーゼ、ラクトアルデヒドデヒドロゲナーゼ、ラクトアルデヒドレダクターゼ、ラトステロールオキシダーゼ、レグヘモグロビンレダクターゼ、ロイシンデヒドロゲナーゼ、長鎖アルコールデヒドロゲナーゼ、リジンデヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(脱カルボキシル化)、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(オキサロ酢酸−脱カルボキシル化)、マレイル酢酸レダクターゼ、マロン酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、マロン酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(アセチル化)、マンニトール−2−デヒドロゲナーゼ、マンニトールデヒドロゲナーゼ、マンニトール−1−リン酸−5−デヒドロゲナーゼ、マンヌロン酸レダクターゼ、メリロト酸−3−モノオキシゲナーゼ、メソ酒石酸デヒドロゲナーゼ、メタノールデヒドロゲナーゼ、メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ(NAD+)、メチルグリオキサ−ルレダクターゼ(NADH依存性)、メチルマロン酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(アシル化)、メバルド酸レダクターゼ、モノデヒドロアスコルビン酸レダクターゼ(NADH)、モルヒネ−6−デヒドロゲナーゼ、マイコチオール依存性ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ、マイコチオンレダクターゼ、ミリストイル−CoA−11−(E)デサチュラーゼ、ミリストイル−CoA−11−(Z)デサチュラーゼ、N−アセチルヘキソサミン−1−デヒドロゲナーゼ、N−アシルマンノサミン−1−デヒドロゲナーゼ、N−ヒドロキシ−2−アセトアミドフルオレンレダクターゼ、NAD(+)−二窒素−レダクターゼ、ADP−D−リボシルトランスフェラーゼ、NAD(+)−ジフタミド−ADP−リボシルトランスフェラーゼ、NAD(P)(+)−タンパク質−アルギニン−ADP−リボシルトランスフェラーゼ、NAD(P)+ヌクレオシダーゼ、NAD(P)+トランスヒドロゲナーゼ(Re/Si−特異的)、NAD(P)+トランスヒドロゲナーゼ(Si−特異的)、NAD(P)Hデヒドロゲナーゼ(キノン1)、NAD(P)Hデヒドロゲナーゼ(キノン)、NAD+ジホスファターゼ、NAD+ヌクレオシダーゼ、NAD+シンターゼ、NAD+シンターゼ(グルタミン加水分解)、NADHデヒドロゲナーゼ(キノン)、NADHペルオキシダーゼ、ナフタレン−1,2−ジオキシゲナーゼ、ニコチンアミド−ヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼ、酸化窒素ジオキシゲナーゼ、亜硝酸レダクターゼ(NAD(P)H)、ニトロキノリン−N−オキシドレダクターゼ、オクタノールデヒドロゲナーゼ、ω−ヒドロキシデカン酸デヒドロゲナーゼ、オピンデヒドロゲナーゼ、オルシノール−2−モノオキシゲナーゼ、オルニチンシクロデアミナーゼ、オロチン酸レダクターゼ(NADH)、オキサログリコール酸レダクターゼ(脱カルボキシル化)、パントイン酸−4−デヒドロゲナーゼ、ペリリルアルコールデヒドロゲナーゼ、フェニルアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ、フェニルアラニンデヒドロゲナーゼ、フェニルグリオキシル酸デヒドロゲナーゼ(アシル化)、ホスファチジルコリン−12−モノオキシゲナーゼ、ホスファチジルコリンデサチュラーゼ、ホスホグルコン酸−2−デヒドロゲナーゼ、ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ、ホスホン酸デヒドロゲナーゼ、フタル酸−4,5−シス−ジヒドロジオールデヒドロゲナーゼ、フタル酸−4,5−ジオキシゲナーゼ、ピメロイル−CoAデヒドロゲナーゼ、プレコリン−2ヒドロゲナーゼ、プレコリン−3Bシンターゼ、プレフェン酸デヒドロゲナーゼ、プロパンジオール−リン酸デヒドロゲナーゼ、タンパク質−ジスルフィドレダクターゼ、ピリドキーサル−4−デヒドロゲナーゼ、ピロリン−2−カルボキシル酸レダクターゼ、ピロリン−5−カルボキシル酸レダクターゼ、キナ酸デヒドロゲナーゼ、レチナールデヒドロゲナーゼ、レチノールデヒドロゲナーゼ、リビトール−2−デヒドロゲナーゼ、リビトール−5−リン酸−2−デヒドロゲナーゼ、ルブレドキシン−NAD(+)レダクターゼ、ルブレドキシン−NAD(P)(+)レダクターゼ、S−(ヒドロキシメチル)グルタチオンデヒドロゲナーゼ、サッカロピンデヒドロゲナーゼ(NAD+、L−グルタミン酸塩形成)、サッカロピンデヒドロゲナーゼ(NAD+、L−リシン形成)、サリチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ、サリチル酸−1−モノオキシゲナーゼ、セクオイトールデヒドロゲナーゼ、セリン−2−デヒドロゲナーゼ、Sn−グリセリン−1−リン酸デヒドロゲナーゼ、ソルビトール−6−リン酸−2−デヒドロゲナーゼ、ステロイド−17α−モノオキシゲナーゼ、ステロール−4α−カルボキシル酸−3−デヒドロゲナーゼ(脱カルボキシル化)、ストロンビンデヒドロゲナーゼ、コハク酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、コハク酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(NAD(P)+)、スクシニルグルタミン酸−セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、スルカトンレダクターゼ、タガツロン酸レダクターゼ、酒石酸デヒドロゲナーゼ、タウロピンデヒドロゲナーゼ、タキシフォリン−8−モノオキシゲナーゼ、テレフタル酸−1,2−シス−ジヒドロジオールデヒドロゲナーゼ、テレフタル酸−1,2−ジオキシゲナーゼ、テストステロン−17β−デヒドロゲナーゼ、テトラヒドロキシプテリジンシクロイソメラーゼ、チオモルホリン−カルボン酸デヒドロゲナーゼ、TM0436、トルエンジオキシゲナーゼ、トランス−2−エノイル−CoAレダクターゼ(NAD+)、トリメチルアミン−N−オキシドレダクターゼ、トリプトファンデヒドロゲナーゼ、UDP−グルコース−4−エピメラーゼ、UDP−グルコース−6−デヒドロゲナーゼ、UDP−グルクロン酸−5’−エピメラーゼ、UDP−グルクロン酸デカルボキシラーゼ、UDP−N−アセチルグルコサミン−6−デヒドロゲナーゼ、ウレイドグリコール酸デヒドロゲナーゼ、ウロン酸デヒドロゲナーゼ、バニリン酸モノオキシゲナーゼ、バニリンデヒドロゲナーゼ、ヴォミフォリオールデヒドロゲナーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、キサントンマチンレダクターゼ、又はキサントキシンデヒドロゲナーゼ。
本開示の実施形態によっては、図13及び図14B〜図14Dを参照して、センサー500又はセンサー500の一部は外膜520又は335を含む。外膜520又は335は、少なくとも作用電極501又は320と感知要素322又は感知領域509に重なっている。感知試薬(例えば、検体特異的酵素323及びレドックスメディエーター324)に安定性をもたらすため、また、大量輸送の制限、生体適合性を与え、かつ/又は電極への付着物を防ぐため、電気化学センサーは外膜520又は335(例えば、重合体膜)で覆われていることが多い。
従って、これらの実施形態は、体液中の検体を生体内で検出するため、少なくともその一部が使用者の皮膚表面下に配置可能な検体センサーを含む検体監視装置及びシステムを含む。検体監視システムはSayら(米国特許第6,134,461号)及びHossら(米国特許出願公開第2012/0150005号)に開示されており、何れもその全内容を引用により本明細書に組み込む。本開示の実施形態は、全体を埋め込み可能な検体センサー、及びセンサーの一部のみを皮膚の下に配置して、例えば、センサー制御装置(送信装置を含んでいてもよい)、受信装置/表示装置、送受信装置、処理装置等と交信するためにセンサーの別の一部は皮膚の上にある検体センサーを含む。前記センサーは、使用者の間質液中の検体濃度を連続して、又は定期的に監視するため、例えば、使用者の皮下に配置してもよい。この記載の目的で、特に断りがなければ、連続監視と定期的監視は互いに言い換え可能である。センサー応答は、血液又は他の流体中の検体濃度と相関させてもよく、かつ/又はそれに変換してもよい。特定の実施形態では、検体センサーは間質液と接触するように配置されて、検体濃度を検出してもよい。この検体濃度を用いて、使用者の血流中の検体濃度を推定してもよい。検体センサーは、静脈、動脈、又は流体を含む身体の他の部分に挿入可能であってもよい。実施形態によっては、検体センサーは、ある期間検体の濃度を監視するようになっていてもよく、その期間は秒、分、時間、日、週、月、或いはそれより長い範囲であってもよい。
図5は、0〜500μMのグルコース濃度で重合体被覆グルコースセンサーを用いて電流測定と蓄積モードでの感知により得られた較正曲線を示す。各較正曲線は、4つのセンサーの平均応答である。しかしながら、電流測定とは異なり、蓄積モードでの感知によってセンサーの感度は、蓄積時間を変化させて容易に調整することができる。ピーク高さ測定とピーク面積測定の両方で、蓄積時間を1分から10分に延ばすとセンサーの感度は約10倍になる。図5に示す各較正曲線の感度は、表1に示す集計データにより一次回帰の傾きから算出された。
図7は、0.032Hzと3.2Hzという2つの異なる信号フィルタリング周波数での200nMのグルコースの蓄積モードによる検出を示す。図示のように、高周波数フィルターを用いると検出ピークは非常に急峻であり、ピーク高さがより大きくなる。しかしながら、2つの曲線下の面積は変わらない。これは、ピーク高さ測定を用いる場合、信号の大きさを最適にするには高周波数フィルターが理想的であることを示している。特に、フィルタリング周波数を0.032Hzから3.2Hzに変更すると、ピーク高さ信号が2〜3倍高まることが分かった。更に、フィルタリング周波数が3.2Hzより高いと、信号ノイズが大きくなりすぎて、電流測定電流と蓄積ピーク特性(ピーク高さ及びピーク面積)の何れでも正確な測定ができなかった。
図9Bに示すように、電流測定に関連づけられた電流は非常に低く(<50pA)、100nM未満で線形性を失うが、蓄積モードでの感知の信号は非常に高く100nM未満で線形性をよく保っている。以下の表5は、感度、低い検出限界(LOD)(標準法1を用いて3σ/傾きとして算出)、及び実施例5に開示されるこれら測定に関連づけられた線形検出範囲を示している。標準法1は、Mocak ら, Pure Appl. Chem. 1997, 69:297-328に開示されており、その全内容を引用により本明細書に組み込む。特に、標準法1は、LODを「3σ/傾き」として算出する方法であり、「σ」は空試験の標準偏差であり、「傾き」は較正曲線の傾きである。
図9A及び図9Bを参照して、大気に曝されている緩衝液中で感知を行うと負の(陰極の)背景信号が観察される。いかなる理論によっても限定されないが、酸素還元反応はこの負の背景に関係があると思われる。具体的には、オスミウムレドックスメディエーターとCNTは、酸素還元反応を触媒することがあり、その結果、オスミウムメディエーターが酸化されて、蓄積期間に回路が切断されるとOs3 +が堆積する。回路が再接続されると、Os3 +のこの堆積は減少して、陰極のピークが得られる。この仮説を試験するため、大気条件及び(例えば、空気吹込により)酸素でパージした条件でグルコースを含まない100mMのリン酸緩衝液中で例示的なグルコースセンサーを試験した。図10Aは、図示のように大気条件及び酸素パージ条件で2分、5分、及び10分の蓄積時間で代表的なセンサーにより得られた蓄積モード信号を示す。観察されるように、信号は大気条件で陰極のピークであり、酸素パージ条件でより小さい陽極のピークである。4つのセンサーの中央(平均)信号は図10Bに描かれている。図示のように、電流測定信号は大気条件でわずかに負であり、酸素パージ条件でわずかに正として観察される。この実験の結果から、負の背景は、Os触媒された酸素還元によるものであることが判明した。
蓄積モードでの感知の線形検出範囲を決定するため、図9A及び図9Bに示す較正実験をグルコース濃度200μMまで行った。得られた電流測定と蓄積モードの較正曲線を図11に示す。0〜200nMの濃度に対して決定された一次最良適合線は、高濃度に対して予測された。図から分かるように、電流測定信号は、少なくとも100μMまでは線形であった。一方、蓄積モード信号は、2〜5μMまでは線形であり、それより高い濃度で平坦になった。Osレドックスメディエーターが有限の電荷蓄積能を有するので、これは予測されたことである。この実験で用いられたセンサーでは、この能力は約5000nCまでであると思われる。なお、より短い蓄積時間を用いると蓄積モードでの感知の線形範囲はより高濃度にシフトし得る。ここで示すデータでは、比較的長い(例えば、30分)蓄積時間を用いて高感度を得た。
PET基板にスクリーン印刷した炭素センサーをSteven Label, Inc.(カリフォルニア州サンタフェスプリングス)から入手した。作用電極の活性領域は、堆積面積が約0.1mm2であるグルコース酸化触媒によって規定された。グルコースオキシダーゼ(GOx)配線に用いる占有技術のレドックスポリマーと占有技術の流量制限膜重合体は公開されている手順に従って合成され、それぞれNanosyn, Inc.(カリフォルニア州サンタローザ)とRegis Technologies, Inc.(イリノイ州モートングローブ)から得た。アスペルギルス属II由来のグルコースオキシダーゼ(GOx、EC1.1.3.4、活性:130U/mg)を東洋紡株式会社(日本国大阪)から入手した。ポリエチレングリコール(400)ジグリシジルエーテル(PEGDGE400)とグリセリルトリグリシジルエーテルはPolysciences, Inc.(ペンシルバニア州ワーリントン)から入手した。多層カーボンナノチューブ(CNT、外径:20〜40nm、長さ:10〜20μm)をMK Nano(カナダ国オンタリオ、ミシサーガ)から入手した。グルコースと緩衝液に用いた共通する薬品Sigma-Aldrich (ミズーリ州セントルイス)から入手した。Thermo Scientific製Barnstead E-Pure 超純水精製システムから得た18.0MΩ・cm−1超の脱イオン水を用いて全ての水溶液を調製した。
CNTを含むものと含まないものの2種の異なるグルコース感知試薬を用いた。非CNT試薬を以下のようにして調製した。まず、4%(w/v)のレドックスポリマー、8.08%(w/v)のGOx、及び8.08%(w/v)のPEGDGE400の3つの溶液を、10mMの4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−エタンスルホン酸(HEPES)緩衝液(pH:8)で調製した。これら3つの溶液を3.04:5.1:1.86の比で混合して、グルコース感知試薬を得た。CNTを含むグルコース感知試薬を調製するため、上記の手順に従ったが、4%のレドックスポリマー溶液と8.08%のPEGDGE400溶液を10mMのHEPES溶液ではなく、5%(w/v)のCNT水溶液で調製した。調製後、マイクロ注射器(Hamilton Co.)によりグルコース感知試薬を15nLずつセンサーの炭素作用電極に供給した。各作用電極の活性領域を供給した感知試薬の液滴の面積により規定した。この面積は、典型的には0.1mm2であった。感知試薬を供給した後、センサーを25℃、相対湿度60%で少なくとも12時間硬化した。図5に示す実験に用いられたセンサーでは、センサーを流量制限重合体外膜で被覆した。この膜は、80/20のエタノール/水の14%(w/v)の膜重合体と3.5%(w/v)グリセリルトリグリシジルエーテルの4:1の体積混合物からなり、上述のLiu ら, Anal. Chem. 2012, 84:3403-3409(その全内容を引用により本明細書に組み込む)に記載したようにディップコーティングにより塗布した。
特に断りがなければ、作用電極としてグルコースセンサー、Ag/AgCl基準電極(3MのKCl溶液; Bioanalytical Systems, Inc.)、及びスクリーン印刷された炭素対向電極を有する好適な3つの電極セルを用いて全ての電気化学測定を行った。定電位電解装置を用いた蓄積モード実験を通して、センサーの時間に対する電流を測定した。蓄積モード測定では、作用電極は設定量の時間(蓄積時間)の間定電位電解装置から電気的に切断した。その後、作用電極を回路に再接続した。図2は、電極の概略図を示す。センサーの作用電極が電気的に接続されると、+40mVとなった。図3A〜図3D、図4A〜図4B、図5、及び図6A〜図6Hに示す実験では、BASi Petit Ampere定電位電解装置(モデル:LC−3D; Bioanalytical Systems, Inc.、イリノイ州ウエストラファエット)を電流の測定に用いた。0.5秒のサンプリング間隔で0.03Hzのフィルターを用いた。電流信号を社内でLabView (National Instruments) ソフトウェアを用いて記録した。他の全ての実験で、高められた時間分解性能が望まれた。従って、高い時間分解性能を持つ定電位電解装置を用いた(モデル:1030C; CH Instruments, Inc.、テキサス州オースチン)。この定電位電解装置では、図7及び図8Bに示すものを除き、0.1秒のサンプリング間隔で3.2Hzのフィルターを用いた。図示のように、これらの実験で、この定電位電解装置は0.1秒のサンプリング間隔と3.2Hzフィルター又は0.032Hzフィルターの何れかを用いた。この信号は、製造者が提供しているソフトウェアを用いて記録された。時間に対する電流のピーク面積、ピーク高さ、及び電流測定電流の測定は、Graphpad Prism 6ソフトウェアを用いて行った。全ての実験は、33℃の100mMのPBS緩衝液(pH=7.4、100mMのNaCl)中で行われた。
Claims (20)
- 作用電極を含むセンサーを利用して検体を感知する方法であって、
前記作用電極に検体特異的酵素及びレドックスメディエーターを提供し、
前記作用電極を前記検体に提供し、
前記検体特異的酵素及び前記レドックスメディエーターと反応する前記検体に由来する電荷を所定期間に亘り蓄積し、
前記所定期間後に前記作用電極を前記回路に接続し、
蓄積された電荷からの信号を測定する
ことを含む方法。 - 前記作用電極を検体に提供する前に、前記方法が更に、前記作用電極を前記回路に接続することを含むと共に、前記作用電極を前記検体に提供する前に、前記方法が更に、前記作用電極と前記回路との接続を切ることを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記作用電極を前記検体に提供する前に、前記作用電極が前記回路に接続されると共に、前記方法が更に、前記作用電極を前記検体に提供する前に、前記作用電極と前記回路との接続を切ることを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記センサーが、酵素電気化学的バイオセンサーである、請求項1に記載の方法。
- 前記レドックスメディエーターが、固定化されたレドックスポリマーである、請求項1に記載の方法。
- 前記検体が、コルチゾール、グルコース、乳酸、3−ヒドロキシ酪酸、アルコール、ピルビン酸、グルタミン酸、テオフィリン、及びクレアチニンからなる群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記検体特異的酵素が、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)依存性デヒドロゲナーゼ、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)依存性オキシダーゼ、及びフラビンモノヌクレオチド(FMN)依存性オキシダーゼからなる群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記検体特異的酵素が、11β−ヒドロキシステロイド デヒドロゲナーゼ2型(11β−HSD−2)、グルコースオキシダーゼ、NAD−グルコースデヒドロゲナーゼ、FAD−グルコースデヒドロゲナーゼ、乳酸オキシダーゼ、NAD−乳酸デヒドロゲナーゼ、NAD−アルコールデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、NAD−グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、及びキサンチンオキシダーゼからなる群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記検体の濃度が4.7ナノモル程度の低濃度である、請求項1に記載の方法。
- 前記の蓄積された電荷からの信号の測定が、前記信号のピーク高さを測定すること、及び/又は、前記信号のピーク面積を測定することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が更に、前記測定されたピーク高さを較正することにより、前記検体の濃度を提供することを含む、請求項10に記載の方法。
- 前記方法が更に、前記測定されたピーク面積を較正することにより、前記検体の濃度を提供することを含む、請求項10に記載の方法。
- 前記の蓄積された電荷からの信号の測定が、前記信号を0.1〜0.5ヘルツ(Hz)のサンプリングレートで記録すること、及び/又は、前記信号を0.032〜3.2ヘルツ(Hz)の周波数でフィルタリングすることを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記作用電極が、前記検体特異的酵素と前記レドックスメディエーターとを含む感知要素を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記感知要素が更に、カーボンナノチューブを含む、請求項14に記載の方法。
- 検体特異的酵素とレドックスメディエーターとを含む作用電極を含むセンサーを利用して検体を感知する方法であって、前記方法が、
作用電極を検体に提供し、
検体特異的酵素及びレドックスメディエーターと反応する検体に由来する電荷を蓄積し、
前記信号のピーク高さを測定し、及び/又は、前記信号のピーク面積を測定することにより、蓄積された電荷からの信号を測定する、
ことを含む方法。 - 検体を感知するためのシステムであって、
前記システムが、作用電極と、感知要素と、回路とを含み、
前記感知要素が、前記作用電極上に配置されると共に、検体特異的酵素と、レドックスメディエーターとを含み、
前記感知要素が、前記検体特異的酵素及び前記レドックスメディエーターと反応する前記検体に由来する電荷を所定期間に亘り蓄積するように構成され、
前記回路が、前記所定期間後に前記作用電極と接続され、前記蓄積された電荷からの信号を測定するように構成される、システム。 - 前記システムが更に、少なくとも前記感知要素を被覆する外膜を含む、請求項17に記載のシステム。
- 前記検体特異的酵素が、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)依存性デヒドロゲナーゼ、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)依存性オキシダーゼ、及びフラビンモノヌクレオチド(FMN)依存性オキシダーゼからなる群より選択される、請求項17に記載のシステム。
- 前記検体特異的酵素が、11β−ヒドロキシステロイド デヒドロゲナーゼ2型(11β−HSD−2)、グルコースオキシダーゼ、NAD−グルコースデヒドロゲナーゼ、FAD−グルコースデヒドロゲナーゼ、乳酸オキシダーゼ、NAD−乳酸デヒドロゲナーゼ、NAD−アルコールデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、NAD−グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、及びキサンチンオキシダーゼからなる群より選択される、請求項17に記載のシステム。
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