JP2020518817A - 溶解度を低下させた酵素で生産されるバイオセンサ、その生産方法及び使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年5月4日に出願された米国仮出願第62/501,322号に基づく優先権を主張するものであり、上記仮特許出願の開示を参照により本明細書に援用する。
該当せず。
以下に実施例を示す。しかしながら、本開示の発明の技術思想は、特定の実験、結果および臨床検査手順の適用に限定されないことを理解されたい。むしろ、実施例は、単に、様々な実施形態の1つとして提供されており、例示的であって、網羅的ではない。
以下の実施例は、溶解度の低下のために改変されたウレアーゼを用いて製造されたBUN多使用バイオセンサの製造および使用に関する。
図3および図4は、5mg/dLおよび27mg/dLのBUNキャリブレーター溶液、ならびに血液サンプルについての、センサのアッセイ応答および添加反応の勾配(スロープ)をそれぞれ例示している。センサは、典型的には、少なくとも2週間、最大で30日まで、完全な安定性を維持した。
特定の実施形態は、生物学的流体サンプル中の少なくとも1つの目標分析物の存在および/または濃度を検出するための多使用バイオセンサに関する。多使用バイオセンサは、電極、改変酵素、および膜を含む。改変酵素は、電極の少なくとも一部の上に分配される。改変酵素は、その上の少なくとも1つの官能基と反応体との反応を介して、酵素の溶解度を低下させるように改変されており、その結果、改変酵素は、生物学的流体サンプル中および多使用バイオセンサと共に用いられるキャリブレーション用試薬中で実質的に不溶性である。この際、改変酵素は、目標分析物の検出のために、目標分析物と相互作用する活性部位を含む。膜は、改変酵素の少なくとも一部の上に配置されて、その膜は、改変酵素を電極上に固定化する。
12 電極
14 改変酵素
16 膜
18 検出層
52 多使用バイオセンサ
54 基板
56 第1の表面
58 第2の表面
Claims (23)
- 生物学的流体サンプル中の少なくとも1つの目標分析物の存在および/または濃度を検出するための多使用バイオセンサであって、
電極と、
電極の少なくとも一部上に分配された改変酵素であって、前記改変酵素上の少なくとも1つの官能基と反応物との反応によって、前記改変酵素の溶解度が低下するように前記酵素は改変されており、前記改変酵素は、生物学的流体サンプル中および前記多使用バイオセンサと共に用いられる校正試薬中で実質的に不溶性であり、かつ、前記改変酵素は、前記目標分析物の検出のために前記目標分析物と相互作用する活性部位を含む、前記改変酵素と、
前記改変酵素の少なくとも一部上に配置されて、前記電極上に前記改変酵素を固定化する膜と、
を含む多使用バイオセンサ。 - 前記多使用バイオセンサは電位計測式分析物バイオセンサとして定められる、請求項1に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記改変酵素上の少なくとも1つの官能基が、アルデヒド−、アミン−、カルボニル−、カルボキシル−、ヒドロキシル−、ケトン−、マレイミド−、スルフヒドリル−、およびチオール−反応性基を含む一群の中から選択される、請求項1または2に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記反応物が長鎖ビオチンを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記膜は、検出対象の目標分析物に対して透過性であるが、前記改変酵素に対して実質的に不透過性である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記膜が、ポリウレタン、シリコン、ポリ(塩化ビニル)、およびそれらの組み合わせを含む一群の中から選択される材料で形成される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記酵素が、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、サルコシンオキシダーゼ、クレアチニンアミドヒドロラーゼ、クレアチンアミジノヒドロラーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、ラクケース、チロシナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、およびピルビン酸デヒドロゲナーゼを含む一群の中から選択される、請求項1〜6のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記多使用バイオセンサは多使用血中尿素窒素(BUN)バイオセンサとしてさらに定められ、かつ少なくとも1つの前記改変酵素が改変ウレアーゼである、請求項1〜7のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記バイオセンサが少なくとも14日間の使用寿命を有する、請求項1〜8のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記改変酵素は、前記生物学的流体サンプルおよび前記多使用バイオセンサと共に用いられるキャリブレーション用試薬よりも低いイオン強度を有する緩衝液中に実質的に溶解する、請求項1〜9のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 前記酵素に付着した前記反応物によって、改変されていない酵素の分子量および/または等電点と比較した場合に、前記改変酵素の分子量の増加、および/または等電点の変化をもたらす、請求項1〜10のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサ。
- 多使用バイオセンサ配列組立体であって、
基板と、
複数の多使用バイオセンサと、を含み、前記複数の多使用バイオセンサの各々が、前記基板の少なくとも1つの表面上に空間的に配置され、かつ前記複数の多使用バイオセンサのうちの少なくとも1つが、請求項1〜11のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサである、多使用バイオセンサ配列組立体。 - 多使用バイオセンサを製造する方法であって、
(a)酵素上の少なくとも1つの官能基を反応物と反応させることによって、第1緩衝液中に存在する酵素を改変させて、改変されていない酵素と比較して溶解度を低下させて、前記改変酵素が生物学的流体サンプル中および前記多使用バイオセンサと共に用いられるキャリブレーション用試薬中で実質的に不溶性であるようにし、かつ、前記改変酵素が、目標分析物の検出のために前記目標分析物と相互作用する活性部位を含むようにし、
(b)前記改変酵素の沈殿を形成し、
(c)前記改変酵素の沈殿を第2緩衝液中に再溶解させて、改変酵素溶液を提供し、その際、第2緩衝液が第1緩衝液よりも低いイオン強度を有し、前記改変酵素が第2緩衝液中に実質的に溶解するが、前記第1緩衝液中にはより可溶性が劣るかまたは実質的に不溶性であるようにし、
(d)電極の少なくとも一部上に特定量の前記改変酵素溶液を分配し、
(e)前記改変酵素溶液を前記電極上で乾燥させ、
(f)前記改変酵素および前記電極の少なくとも一部上に膜を配置して、前記膜によって、前記電極上に前記改変酵素を固定化する、
各ステップを含む方法。 - 多使用分析物バイオセンサが、電位計測式分析物バイオセンサとして定められる、請求項13記載の方法。
- (i)前記酵素上の少なくとも1つの官能基は、アルデヒド−、アミン−、カルボニル−、カルボキシル−、ヒドロキシル−、ケトン−、マレイミド−、スルフヒドリル−、およびチオール−反応性基を含む一群の中から選択され、
(ii)前記反応物は長鎖ビオチンを含み、
(iii)前記膜は検出対象の前記目標分析物に対して透過性であるが、前記改変酵素に対して実質的に不透過性であり、
(iv)前記膜は、ポリウレタン、シリコン、ポリ(塩化ビニル)、およびそれらの組合せを含む一群の中から選択される材料から形成され、
(v)前記酵素は、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、サルコシンオキシダーゼ、クレアチニンアミドヒドロラーゼ、クレアチンアミジノヒドロラーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、ラクケース、チロシナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、およびピルビン酸デヒドロゲナーゼからなる一群の中から選択され、
(vi)前記酵素に付着した反応物によって、改変されていない酵素の分子量および/または等電点と比較した場合、前記改変酵素の分子量の増加、および/または等電点の変化をもたらす、
各ステップを含む請求項13または14に記載の方法。 - 前記多使用バイオセンサが、多使用血中尿素窒素(BUN)バイオセンサとしてさらに定められ、かつ少なくとも1つの前記改変酵素がウレアーゼである、請求項13〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記バイオセンサが、少なくとも14日間の使用寿命を有するように生成される、請求項13〜16のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ステップ(a)では、前記改変酵素の溶解度を低下させて、前記改変酵素が、前記生物学的流体サンプル中および前記多使用バイオセンサと共に用いられるキャリブレーション用試薬中で実質的に不溶性であるが、前記生物学的流体サンプルおよびキャリブレーション用試薬よりも低いイオン強度を有する緩衝液中では実質的に可溶性であるようにする、請求項13〜17のいずれか1項に記載の方法。
- (g)前記ステップ(a)の前に、前記第1緩衝液中への緩衝液交換による添加物からの前記酵素の浄化と、
(h)前記ステップ(d)の前に、前記酵素の活性の測定、
とのうち少なくとも1つを含む、請求項13〜18のいずれか1項に記載の方法。 - 多使用バイオセンサ配列組立体を製造する方法であって、
複数の多使用バイオセンサを、基板の少なくとも1つの表面上に形成し、この際、前記複数の多使用バイオセンサの各々が、基板の少なくとも1つの表面上に空間的に配置され、かつ前記複数の多使用バイオセンサのうちの少なくとも1つが、請求項13〜19のいずれか1項に記載の方法によって形成される、ステップを含む方法。 - 生物学的流体サンプル中の目標分析物の存在および/または濃度を検出する方法であって、
(a)請求項1〜11のいずれか1項に記載の多使用バイオセンサを含む血液ガス、電解質、および/または代謝物機器中に生物学的流体サンプルを挿入し、
(b)前記多使用バイオセンサによって捕獲された目標分析物の存在および/または濃度を測定する、
各ステップを含む方法。 - 生物学的流体サンプル中の複数の目標分析物の存在および/または濃度を検出する方法であって、
(a)前記生物学的流体サンプルを、請求項12に記載の多使用バイオセンサ配列組立体を含む血液ガス、電解質、および/または代謝物機器中に挿入し、
(b)配列組立体の個々の多使用バイオセンサによって捕獲された複数の目標分析物の各々の存在および/または濃度を測定する、
各ステップを含む方法。 - 前記生物学的流体サンプルが、血液、血漿、血清、尿、唾液、痰、脳脊髄液、皮膚、腸液、腹腔内液、のう胞液、汗、間質液、細胞外液、涙液、粘液、膀胱洗浄液、精液、便、胸水、鼻咽頭液、およびそれらの組み合わせを含む一群の中から選択される、請求項21または22に記載の方法。
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