JP2020511501A - 抗体アジュバント複合体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む抗体構築物と、アジュバント部分と、リンカーと、を含む免疫複合体を提供し、各アジュバント部分は、エチレングリコール基又はグリシン残基を含むリンカーを介して抗体に共有結合する。本発明の免疫複合体を用いて癌を治療するための方法も記載される。【選択図】図１

Description

電子的に提出された材料の参照による組み込み
本明細書と同時に提出され、以下のように２０１７年１２月１３日に作成された「７３６５５５＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と名付けられた１つの６６６バイトのＡＳＣＩＩ（Ｔｅｘｔ）ファイルとして特定されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
腫瘍成長には免疫回避を促進する突然変異の獲得が必要であることが現在では十分に認識されている。それでも、腫瘍形成は、エクスビボ刺激後に宿主免疫系により容易に認識される、突然変異した抗原又はネオアンチゲンの蓄積をもたらす。免疫系がネオアンチゲンを認識することができない理由及びしくみは、解明され始めている。Ｃａｒｍｉらによるパイオニア的研究（Ｎａｔｕｒｅ，５２１：９９−１０４（２０１５））は、抗体−腫瘍免疫複合体を介して、活性化した樹状細胞にネオアンチゲンを送達することによって、免疫異常が克服され得ることを示している。これらの研究では、腫瘍内注射による腫瘍結合抗体と樹状細胞アジュバントとの同時送達は、強固な抗腫瘍免疫をもたらした。アクセス不可能な腫瘍に到達し、癌患者及び他の対象のための治療選択肢を拡張するために、抗体及び樹状細胞アジュバントの送達のための新規組成物及び方法が必要とされている。本発明は、この必要性及び他の必要性に対処する。
第１の態様では、本発明は、（ａ）（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体構築物と、（ｂ）アジュバント部分と、（ｃ）エチレングリコール基又はグリシン残基を含むリンカーと、を含む免疫複合体であって、各アジュバント部分が、リンカーを介して抗体構築物に共有結合している、免疫複合体を提供する。
別の態様では、本発明は、式ＩＩ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、ここで、
Figure 2020511501
は、Ｚに対する結合点を表し、Ａｄｊは、アジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、Ｚは、エチレングリコール基又はグリシン残基を有する二価の連結部分である）による構造を有する免疫複合体を提供する。
更なる一態様では、本発明は、本発明の複数の免疫複合体を含む組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、治療有効量の本発明による免疫複合体、又は本発明の免疫複合体を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
アジュバントＣＬ２６４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの末端カルボン酸は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４０１の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの一級アミンは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第１リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第２リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第３リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第４リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４１３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの一級アミンは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ４１９の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的には、アジュバントのアミン（図８の上部の末端アミン及び図８の下部の二級アミン）は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの二級アミンは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの別の二級アミンは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの一級アミンは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ５５３の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントのアミドは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＣＬ５７２の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的には一級アミン（図１３の上部）及びカルボニル（図１３の下部）は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ２ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの末端カルボン酸は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ２ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバント末端チオールは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ２ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第２リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ２ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第３リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ２ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの末端リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ３ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの末端カルボン酸は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ３ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバント末端チオールは、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ３ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第２リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ３ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの第３リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。 アジュバントＰａｍ３ＣＳＫ４の構造を示し、ここで、円は、アジュバント上の位置を示し、この位置で、アジュバント、具体的にはアジュバントの末端リジン残基は、リンカーに複合体化させることができる。
発明の詳細な説明
一般
本発明は、抗体依存性細胞毒性、抗体依存性細胞食作用を促進する抗体、免疫チェックポイント分子として機能する、癌産生蛋白質の作用を阻害する抗体、樹状細胞活性化及びＴ細胞増殖を促進するアジュバント、並びに抗腫瘍効能を促進する抗体とアジュバントとの間の共有結合、を含む、多数の利点を有する抗体−アジュバント免疫複合体を提供する。例えば、ヒト単球は、本発明の抗体−アジュバント免疫複合体を用いて一晩刺激した後、ＤＣ分化を受けるが、既知の刺激剤（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４）を用いたＤＣ分化プロトコルは、はるかに長い期間を必要とする。抗体−アジュバント免疫複合体活性化細胞はまた、既知の刺激剤を用いて達成可能なものよりも数倍多量の共刺激分子及び炎症性サイトカインも発現する。抗体−アジュバント免疫複合体活性化細胞は、既知の刺激剤を用いて達成可能なものよりも多量の（例えば、いくつかの場合では、数倍多量の）共刺激分子及び炎症性サイトカインを発現する。
共有結合した、すなわち、抗体が、アジュバントに共有結合しているリンカーに共有結合した、抗体−アジュバント免疫複合体は、非共有結合した抗体−アジュバント免疫複合体よりも、免疫活性化を誘発する際に、定量的かつ定性的により効果的である。更に、本発明に従って連結された抗体−アジュバント免疫複合体は、他の既知の免疫複合体よりもはるかに効果的である。アジュバント−抗体複合体の全身投与は、腫瘍内注射及び外科的切除を必要とせずに、原発腫瘍及び関連する転移の同時標的化を可能にする。
定義
本明細書で使用するとき、用語「免疫複合体」は、本明細書に記載される非天然に生じる化学部分に共有結合した抗体構築物又は抗体を指す。用語「免疫複合体」及び「抗体−アジュバント免疫複合体」は、本明細書において互換的に使用される。
本明細書で使用するとき、語句「抗体構築物」は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含むポリペプチドを指す。抗体構築物は、抗体を含むか、又は抗体であってもよい。
本明細書で使用するとき、語句「抗原結合ドメイン」は、特定の抗原（例えば、パラトープ）に特異的に結合する蛋白質、又は蛋白質の一部を指し、例えば、抗原と相互作用し、抗原結合蛋白質に抗原に対するその特異性及び親和性を付与するアミノ酸残基を含む抗原結合蛋白質のその部分を指す。
本明細書で使用するとき、語句「Ｆｃドメイン」は、抗体の結晶化可能な断片領域、又はテール領域を指す。Ｆｃドメインは、細胞表面上のＦｃ受容体と相互作用する。
本明細書で使用するとき、語句「標的化結合ドメイン」は、免疫複合体の抗原結合ドメインに結合した抗原とは異なる第２の抗原に特異的に結合する蛋白質又は蛋白質の一部を指す。標的結合ドメインは、ＦｃドメインのＣ末端で抗体構築物に複合体化され得る。
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、抗原に特異的に結合し、それを認識する免疫グロブリン遺伝子又はその断片に由来する抗原結合領域（相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）を含む）を含むポリペプチドを指す。認識された免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、ε、及びｍｕ定常領域遺伝子、並びに多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一の対のポリペプチド鎖からなり、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する、約１００〜１１０個以上のアミノ酸の可変領域を定義付ける。用語可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれ、これらの軽鎖及び重鎖を指す。軽鎖は、κ又はλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、ｍｕ、α、δ、又はεとして分類され、これは次に免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥをそれぞれ定義する。
ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖からなる約１５０ｋＤａの巨大分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスγ重鎖、及び約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖を含有し、四量体四級構造を形成する。２つの重鎖は、互いに結合し、ジスルフィド結合によってそれぞれ軽鎖に連結される。得られた四量体は、２つの同一の半体を有し、これは共にＹ字状形状を形成する。フォークの各端部は、同一の抗原結合部位を含む。ヒトには４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、２、３、及び４）が存在し、血清中のそれらの存在量（ＩｇＧ１が最も豊富である）に従って命名される。典型的には、抗体の抗原結合領域は、結合の特異性及び親和性において最も重要である。
二量体ＩｇＡ抗体は、約３２０ｋＤａである。ＩｇＡは、２つのサブクラス（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を有し、モノマー及び二量体形態として産生され得る。ＩｇＡ二量体形態（分泌型又はｓＩｇＡ）は最も豊富である。
抗体は、例えば、インタクトな免疫グロブリンとして、又は様々なペプチダーゼを用いた消化によって産生される多数の十分に特徴付けられた断片として存在し得る。したがって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合の下で抗体を消化して、それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に結合された軽鎖であるＦａｂの二量体であるＦ（ａｂ）’２を生じる。Ｆ（ａｂ）’２は、適度な条件下で分解され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合が切断されてもよく、それによって、Ｆ（ａｂ）’２二量体はＦａｂ’モノマーに変換される。Ｆａｂ’モノマーは、本質的にヒンジ領域の部分を有するＦａｂである（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ ｅｄ．、７ｔｈ ｅｄ．２０１２）を参照されたい）。様々な抗体断片は、インタクトな抗体の消化に関して定義されるが、そのような断片は、化学的に、又は組み換えＤＮＡ方法を使用して、新たに合成されてもよい。したがって、本明細書で使用するとき、抗体という用語はまた、組み換えＤＮＡ方法（例えば、単鎖Ｆｖ）を使用して新規に合成されたか、又はファージディスプレイライブラリを使用して同定された、全抗体の修飾により産生された抗体断片を含む（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５４（１９９０）を参照されたい）。
用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含む。本明細書で使用するとき、「抗体断片」及びその全ての文法的な変形は、インタクトな抗体の抗原結合部位又は可変領域を含むインタクトな抗体の一部として定義され、この部分は、インタクトな抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわち、抗体アイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）を含まない。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；連続するアミノ酸残基の１つの中断されていない配列（本明細書では、「単鎖抗体断片」又は「単鎖ポリペプチド」と称される）からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片を含み、（１）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含有する単鎖ポリペプチド、又は関連する重鎖部分を含まない、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するその断片；（３）１つの重鎖可変ドメインのみを含有する単鎖ポリペプチド、又は関連する軽鎖部分を含まない、重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するその断片；（４）非ヒト種に由来する単一のＩｇドメイン、又は他の特定の単一ドメイン結合モジュールを含むナノボディ；及び（５）抗体断片から形成された多重特異性又は多価構造体；を含むが、これらに限定されない。１つ以上の重鎖を含む抗体断片において、重鎖（複数可）は、インタクトな抗体の非Ｆｃ領域に見出される任意の定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプ中のＣＨ１）を含有することができ、及び／又は、インタクトな抗体に見出される任意のヒンジ領域配列を含有することができ、及び／又は、ヒンジ領域配列又は重鎖（複数可）の定常ドメイン配列に融合された又は位置するロイシンジッパー配列を含有することができる。
本明細書で使用するとき、生物学的製品を参照する用語「バイオシミラー」は、生物学的製品が、臨床的に不活性な構成成分におけるわずかな差にもかかわらず、参照製品と非常に類似しており、生物学的製品と参照製品との間には、製品の安全性、純度、及び効力の点で、臨床的に有意な差異が存在しないことを意味する。
本明細書で使用するとき、用語「エピトープ」は、抗体のパラトープとも呼ばれる抗原結合部位が結合する抗原上の任意の抗原決定因子を意味する。エピトープ決定因子は、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団からなり、通常、特定の三次元構造特性、並びに特定の電荷特性を有する。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「蛋白質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために、本明細書において互換的に使用される。この用語はまた、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に生じるアミノ酸の人工化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び非天然に生じるアミノ酸ポリマーにも当てはまる。
本明細書で使用するとき、用語「アジュバント」は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。
本明細書で使用するとき、用語「アジュバント部分」は、本明細書に記載される抗体に共有結合したアジュバントを指す。アジュバント部分は、免疫複合体を対象に投与した後、抗体に結合した状態で、又は抗体からの切断（例えば、酵素的切断）後に、免疫応答を誘発することができる。
本明細書で使用するとき、用語「パターン認識受容体（Pattern recognition receptor）」及び「ＰＲＲ」は、病原体関連分子パターン（pathogen-associated molecular pattern、ＰＡＭＰ）又は損傷関連分子パターン（damage-associated molecular pattern、ＤＡＭＰ）を認識し、自然免疫における主要なシグナル伝達要素として機能する、保存された哺乳類蛋白質の１つのクラスの任意のメンバーを指す。パターン認識受容体は、膜結合型ＰＲＲ、細胞質ＰＲＲ、及び分泌型ＰＲＲに分割される。膜結合型ＰＲＲの例としては、Ｔｏｌｌ様受容体（Toll-like receptor、ＴＬＲ）及びＣ型レクチン受容体（C-type lectin receptor、ＣＬＲ）が挙げられる。細胞質ＰＲＭの例としては、ＮＯＤ様受容体（NOD-like receptor、ＮＬＲ）及びＲｉｇ−Ｉ様受容体（Rig-I-like receptor、ＲＬＲ）が挙げられる。
本明細書で使用するとき、用語「Ｔｏｌｌ様受容体」及び「ＴＬＲ」は、病原体関連分子パターンを認識し、自然免疫における主要なシグナル伝達要素として機能する、高度に保存された哺乳類蛋白質の１つのファミリーの任意のメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンリッチ反復を有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む、特徴的構造を共有する。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体１」及び「ＴＬＲ１」は、例えば、ヒトＴＬＲ１ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＹ８５６４３、又はマウスＴＬＲ１ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＧ３７３０２などの公的に利用可能なＴＬＲ１配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体２」及び「ＴＬＲ２」は、例えば、ヒトＴＬＲ２ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＹ８５６４８、又はマウスＴＬＲ２ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＤ４９３３５などの公的に利用可能なＴＬＲ２配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体３」及び「ＴＬＲ３」は、例えば、ヒトＴＬＲ３ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ３４１３４、又はマウスＴＬＲ３ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ２６１１７などの公的に利用可能なＴＬＲ３配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体４」及び「ＴＬＲ４」は、例えば、ヒトＴＬＲ４ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＹ８２２７０、又はマウスＴＬＲ４ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＤ２９２７２などの公的に利用可能なＴＬＲ４配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体５」及び「ＴＬＲ５」は、例えば、ヒトＴＬＲ５ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣＭ６９０３４、又はマウスＴＬＲ５ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＦ６５６２５などの公的に利用可能なＴＬＲ５配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体６」及び「ＴＬＲ６」は、例えば、ヒトＴＬＲ６ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＢＹ６７１３３、又はマウスＴＬＲ６ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＧ３８５６３などの公的に利用可能なＴＬＲ６配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体７」及び「ＴＬＲ７」は、例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９９０２６、又はマウスＴＬＲ７ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７６などの公的に利用可能なＴＬＲ７配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体８」及び「ＴＬＲ８」は、例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９５４４１、又はマウスＴＬＲ８ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７７などの公的に利用可能なＴＬＲ８配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体７／８」及び「ＴＬＲ７／８」」は、ＴＬＲ７アゴニスト及びＴＬＲ８アゴニストの両方である核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体９」及び「ＴＬＲ９」は、例えば、ヒトＴＬＲ９ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＦ７８０３７、又はマウスＴＬＲ９ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ２８４８８などの公的に利用可能なＴＬＲ９配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を共有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体１０」及び「ＴＬＲ１０」は、例えば、ヒトＴＬＲ１０ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ２６７４４などの公的に利用可能なＴＬＲ１０配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する核酸又はポリペプチドを指す。
用語「Ｔｏｌｌ様受容体１１」及び「ＴＬＲ１１」は、例えば、マウスＴＬＲ１１ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＳ８３５３１などの公的に利用可能なＴＬＲ１１配列と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する核酸又はポリペプチドを指す。
「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８）に直接的又は間接的に結合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する物質である。ＴＬＲシグナル伝達における任意の検出可能な差は、アゴニストがＴＬＲを刺激又は活性化することを示すことができる。シグナル伝達の差異は、例えば、標的遺伝子の発現の変化として、シグナル伝達成分のリン酸化における変化として、ＮＫ−κＢなどの下流要素の細胞内局在における変化として、特定の成分（ＩＲＡＫなど）と他の蛋白質若しくは細胞内構造との関連性における変化として、又はキナーゼ（ＭＡＰＫなど）などの成分の生化学的活性における変化として、明示され得る。
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、ペプチド、ポリペプチド、又は蛋白質に組み込まれ得る任意のモノマー単位を指す。アミノ酸としては、天然に生じるα−アミノ酸及びそれらの立体異性体、並びに非天然（非天然に生じる）アミノ酸及びそれらの立体異性体が挙げられる。所与のアミノ酸の「立体異性体」は、同じ分子式及び分子内結合を有するが、結合及び原子の三次元配置が異なる（例えば、Ｌ−アミノ酸及び対応するＤ−アミノ酸）異性体を指す。
天然に生じるアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされたアミノ酸、並びに、後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、及びＯ−ホスホセリンである。天然に生じるα−アミノ酸としては、限定するものではないが、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが挙げられる。天然に生じるα−アミノ酸の立体異性体としては、限定するものではないが、Ｄ−アラニン（Ｄ−Ａｌａ）、Ｄ−システイン（Ｄ−Ｃｙｓ）、Ｄ−アスパラギン酸（Ｄ−Ａｓｐ）、Ｄ−グルタミン酸（Ｄ−Ｇｌｕ）、Ｄ−フェニルアラニン（Ｄ−Ｐｈｅ）、Ｄ−ヒスチジン（Ｄ−Ｈｉｓ）、Ｄ−イソロイシン（Ｄ−Ｉｌｅ）、Ｄ−アルギニン（Ｄ−Ａｒｇ）、Ｄ−リジン（Ｄ−Ｌｙｓ）、Ｄ−ロイシン（Ｄ−Ｌｅｕ）、Ｄ−メチオニン（Ｄ−Ｍｅｔ）、Ｄ−アスパラギン（Ｄ−Ａｓｎ）、Ｄ−プロリン（Ｄ−Ｐｒｏ）、Ｄ−グルタミン（Ｄ−Ｇｌｎ）、Ｄ−セリン（Ｄ−Ｓｅｒ）、Ｄ−トレオニン（Ｄ−Ｔｈｒ）、Ｄ−バリン（Ｄ−Ｖａｌ）、Ｄ−トリプトファン（Ｄ−Ｔｒｐ）、Ｄ−チロシン（Ｄ−Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
非天然（非天然に生じる）アミノ酸としては、限定するものではないが、天然に生じるアミノ酸と同様の様式で機能する、Ｌ−又はＤ−配置のいずれかである、アミノ酸類似体、アミノ酸模倣体、合成アミノ酸、Ｎ−置換グリシン、及びＮ−メチルアミノ酸が挙げられる。例えば、「アミノ酸類似体」は、天然に生じるアミノ酸と同じ基本化学構造（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基に結合している炭素）を有するが、修飾された側鎖基又は修飾されたペプチド骨格を有する非天然アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムであり得る。「アミノ酸模倣体」は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に生じるアミノ酸と同様の様式で機能する化学的化合物を指す。アミノ酸は、本明細書において、一般に知られている３文字記号、又はＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかによって参照されてもよい。
本明細書で使用するとき、用語「免疫チェックポイント阻害剤」は、免疫チェックポイント分子の活性を阻害する任意の調節因子を指す。免疫チェックポイント阻害剤としては、免疫チェックポイント分子結合蛋白質、小分子阻害剤、抗体、抗体誘導体（Ｆｃ融合、Ｆａｂ断片及びｓｃＦｖを含む）、抗体−薬物複合体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、ペプチド、及びペプチド模倣体を挙げることができるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、用語「連結部分」は、化合物又は材料中の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、免疫複合体中の抗体にアジュバント部分を共有結合させる働きをすることができる。
連結部分を蛋白質及び他の材料に連結するための有用な結合としては、アミド、アミン、エステル、カルバメート、尿素、チオエーテル、チオカルバメート、チオカーボネート、及びチオウレアが挙げられるが、これらに限定されない。「二価」連結部分は、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含み、多価連結部分は、更なる官能基を連結するための更なる結合点を有することができる。例えば、二価の連結部分としては、二価ポリ（エチレングリコール）、二価ポリ（プロピレングリコール）、及び二価ポリ（ビニルアルコール）などの二価ポリマー部分が挙げられる。
本明細書で使用するとき、用語「任意に存在する」が、化学構造（例えば、「Ｒ」又は「Ｑ」）を指すために使用される場合に、化学構造が存在しない場合、化学構造に元々作られた結合は、隣接する原子に直接作られる。
本明細書で使用するとき、用語「リンカー」は、化合物又は材料中の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、リンカーは、免疫複合体中の抗体構築物にアジュバント部分を共有結合させる働きをすることができる。
本明細書で使用するとき、用語「アルキル」は、示される炭素原子数を有する、直鎖若しくは分枝鎖の飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキルは、Ｃ１〜２、Ｃ１〜３、Ｃ１〜４、Ｃ１〜５、Ｃ１〜６、Ｃ１〜７、Ｃ１〜８、Ｃ１〜９、Ｃ１〜１０、Ｃ２〜３、Ｃ２〜４、Ｃ２〜５、Ｃ２〜６、Ｃ３〜４、Ｃ３〜５、Ｃ３〜６、Ｃ４〜５、Ｃ４〜６及びＣ５〜６などの任意の数の炭素を含み得る。例えば、Ｃ１〜６アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルはまた、最大３０個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、限定するものではないが、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルを指すことができる。アルキル基は、置換又は非置換であり得る。「置換アルキル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。用語「アルキレン」は、二価アルキルラジカルを指す。
本明細書で使用するとき、用語「ヘテロアルキル」は、本明細書に記載されるアルキル基を指し、１つ以上の炭素原子は、任意に及び独立して、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子で置換される。用語「ヘテロアルキレン」は、二価ヘテロアルキルラジカルを指す。
本明細書で使用するとき、用語「炭素環」は、３〜１２個の環原子又は示された数の原子を含有する飽和若しくは部分的に不飽和の単環式、縮合二環式、又は架橋多環式環集合を指す。炭素環は、Ｃ３〜６、Ｃ４〜６、Ｃ５〜６、Ｃ３〜８、Ｃ４〜８、Ｃ５〜８、Ｃ６〜８、Ｃ３〜９、Ｃ３〜１０、Ｃ３〜１１、及びＣ３〜１２などの任意の数の炭素を含み得る。飽和単環式炭素環としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが挙げられる。飽和二環式及び多環式炭素環としては、例えば、ノルボルナン、［２．２．２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン、及びアダマンタンが挙げられる。炭素環式基はまた、環中に１つ以上の二重結合又は三重結合を有する、部分的に不飽和であってもよい。部分的に不飽和である代表的な炭素環基としては、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３−及び１，４−異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（１，３−、１，４−及び１，５−異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが挙げられるが、これらに限定されない。
不飽和炭素環式基は、アリール基も含む。用語「アリール」は、任意の好適な数の環原子及び任意の好適な数の環を有する芳香環系を指す。アリール基は、任意の好適な数の環原子、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個又は１６個の環原子、並びに６〜１０個、６〜１２個、又は６〜１４個の環員を含み得る。アリール基は、単環式であってもよく、縮合して二環式若しくは三環式基を形成してもよく、又は結合によって結合して、ビアリール基を形成することができる。代表的なアリール基としては、フェニル、ナフチル、及びビフェニルが挙げられる。他のアリール基としては、メチレン連結基を有するベンジルが挙げられる。一部のアリール基は、フェニル、ナフチル、又はビフェニルなどの６〜１２個の環員を有する。他のアリール基は、フェニル又はナフチルなどの６〜１０個の環員を有する。
「二価の」炭素環は、分子又は材料中の２つの部分を共有結合するための２つの結合点を有する炭素環式基を指す。炭素環は、置換又は非置換であり得る。「置換炭素環式」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
本明細書で使用するとき、用語「複素環」は、ヘテロシクロアルキル基及びヘテロアリール基を指す。「ヘテロアリール」は、それ自体又は別の置換基の一部として、５〜１６個の環原子を含有する単環式又は縮合二環式若しくは三環式芳香環集合を指し、ここで、環原子の１〜５個はＮ、Ｏ又はＳなどのヘテロ原子である。Ｂ、Ａｌ、Ｓｉ、及びＰを含むがこれらに限定されない更なるヘテロ原子もまた有用であり得る。ヘテロ原子は、限定されないが、−Ｓ（Ｏ）−及び−Ｓ（Ｏ）２−などの部分を形成するために酸化され得る。ヘテロアリール基は、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、又は３〜１２個の環員などの任意の数の環原子を含むことができる。１、２、３、４、又は５個の、又は１〜２個、１〜３個、１〜４個、１〜５個、２〜３個、２〜４個、２〜５個、３〜４個、又は３〜５個などの任意の好適な数のヘテロ原子が、ヘテロアリール基中に含まれ得る。ヘテロアリール基としては、ピロール、ピリジン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン（１，２，３−、１，２，４−、及び１，３，５−異性体）、チオフェン、フラン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、及びイソオキサゾールなどの基を挙げることができる。ヘテロアリール基はまた、フェニル環などの芳香環系に縮合して、インドール及びイソインドールなどのベンゾピロール、キノリン及びイソキノリンなどのベンゾピリジン、ベンゾピリミジン（キノキサリン）、ベンゾピリミジン（キナゾリン）、フタラジン及びシンノリンなどのベンゾピリダジン、ベンゾチオフェン、及びベンゾフランが挙げられるがこれらに限定されない員を形成することもできる。他のヘテロアリール基としては、ビピリジンなどの結合によって連結されたヘテロアリール環が挙げられる。ヘテロアリール基は、置換又は非置換であり得る。「置換ヘテロアリール」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
ヘテロアリール基は、環上の任意の位置を介して連結され得る。例えば、ピロールは、１−、２−及び３−ピロールを含み、ピリジンは、２−、３−及び４−ピリジンを含み、イミダゾールは、１−、２−、４−及び５−イミダゾールを含み、ピラゾールは、１−、３−、４−及び５−ピラゾールを含み、トリアゾールは、１−、４−及び５−トリアゾールを含み、テトラゾールは、１−及び５−テトラゾールを含み、ピリミジンは、２−、４−、５−及び６−ピリミジンを含み、ピリダジンは、３−及び４−ピリダジンを含み、１，２，３トリアジンは、４−及び５−トリアジンを含み、１，２，４−トリアジンは、３−、５−及び６−トリアジンを含み、１，３，５−トリアジンは、２−トリアジンを含み、チオフェンは、２−及び３−チオフェンを含み、フランは、２−及び３−フランを含み、チアゾールは、２−、４−及び５−チアゾールを含み、イソチアゾールは、３−、４−及び５−イソチアゾールを含み、オキサゾールは２−、４−及び５−オキサゾールを含み、イソオキサゾールは、３−、４−及び５−イソオキサゾールを含み、インドールは１−、２−及び３−インドールを含み、イソインドールは、１−及び２−イソインドールを含み、イソインドールは、１−及び２−イソインドールを含み、キノリンは、２−、３−及び４−キノリンを含み、イソキノリンは、１−、３−及び４−イソキノリンを含み、キナゾリンは２−及び４−キノゾリンを含み、シンノリンは３−及び４−シンノリンを含み、ベンゾチオフェンは、２−及び３−ベンゾチオフェンを含み、ベンゾフランは、２−及び３−ベンゾフランを含む。
「ヘテロシクリル」は、それ自体又は別の置換基の一部として、３〜１２個の環員及び１〜４個のＮ、Ｏ、及びＳのヘテロ原子を有する飽和環系を指す。Ｂ、Ａｌ、Ｓｉ、及びＰを含むがこれらに限定されない更なるヘテロ原子もまた有用であり得る。ヘテロ原子は、限定されないが、−Ｓ（Ｏ）−及び−Ｓ（Ｏ）２−などの部分を形成するために酸化され得る。ヘテロシクリル基は、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、又は３〜１２個の環員などの任意の数の環原子を含むことができる。１、２、３、又は４個の、又は１〜２個、１〜３個、１〜４個、２〜３個、２〜４個、又は３〜４個などの任意の好適な数のヘテロ原子が、ヘテロシクリル基中に含まれ得る。ヘテロシクリル基は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、アゼパン、アゾカン、キヌクリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピペラジン（１，２−１，３−、及び１，４−異性体）、オキシラン、オキセタン、テトラヒドロフラン、オキサン（テトラヒドロピラン）、オキセパン、チラン、チエタン、チオラン（テトラヒドロチオフェン）、チラン（テトラヒドロチオピラン）、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ジオキソラン、ジチオラン、モルホリン、チオモルホリン、ジオキサン、又はジチアンなどの基を含み得る。ヘテロシクリル基はまた、芳香族又は非芳香族環系に縮合して、インドリンを含むがこれらに限定されない員を形成することもできる。ヘテロシクリル基は、非置換であっても置換されていてもよい。「置換ヘテロシクリル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
ヘテロシクリル基は、環上の任意の位置を介して連結され得る。例えば、アジリジンは、１−又は２−アジリジンであってよく、アゼチジンは、１−又は２−アゼチジンであってよく、ピロリジンは、１−、２−又は３−ピロリジンであってよく、ピペリジンは、１−、２−、３−又は４−ピペリジンであってよく、ピラゾリジンは、１−、２−、３−又は４−ピラゾリジンであってよく、イミダゾリジンは、１−、２−、３−又は４−イミダゾリジンであってよく、ピペラジンは、１−、２−、３−又は４−ピペラジンであってよく、テトラヒドロフランは、１−又は２−テトラヒドロフランであってよく、オキサゾリジンは、２−、３−、４−又は５−オキサゾリジンであってよく、イソオキサゾリジンは、２−、３−、４−又は５−イソオキサゾリジンであってよく、チアゾリジンは、２−、３−、４−又は５−チアゾリジンであってよく、イソチアゾリジンは、２−、３−、４−又は５−イソチアゾリジンであってよく、モルホリンは、２−、３−又は４−モルホリンであってもよい。
本明細書で使用するとき、用語「ハロ」及び「ハロゲン」は、それ自体又は別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を指す。
本明細書で使用するとき、「カルボニル」という用語は、それ自体又は別の置換基の一部として、−Ｃ（Ｏ）−、すなわち、カルボニルを有する部分中、酸素に二重結合し、２つの他の基に結合した炭素原子を指す。
本明細書で使用するとき、用語「アミノ」は、各Ｒ基がＨ又はアルキルである、−ＮＲ３部分を指す。アミノ部分をイオン化して、対応するアンモニウムカチオンを形成することができる。
本明細書で使用するとき、用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ部分を指す。
本明細書で使用するとき、用語「シアノ」は、窒素原子に三重結合した炭素原子（すなわち、−Ｃ≡Ｎ部分）を指す。
本明細書で使用するとき、用語「カルボキシ」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ部分を指す。カルボキシ部分をイオン化して、対応するカルボキシレートアニオンを形成することができる。
本明細書で使用するとき、用語「アミド」は、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ又は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２部分を指し、式中、各Ｒ基はＨ又はアルキルである。
本明細書で使用するとき、用語「ニトロ」は、−ＮＯ２部分を指す。
本明細書で使用するとき、用語「オキソ」は、化合物に二重結合した酸素原子（すなわち、Ｏ＝）を指す。
本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療（treatment）」、及び「治療する（treating）」という用語は、緩和；寛解；症状の減少、又は症状、傷害、病理、若しくは状態を患者にとってより忍容可能なものにすること；症状の進行速度の低減；症状又は状態の頻度又は持続時間の軽減；又は、いくつかの状況では、症状の発症の予防；などの、任意の客観的又は主観的パラメータを含む、傷害、病理、状態、又は症状（例えば、認知障害）の治療又は改善における奏功の任意の兆候を指す。症状の治療又は改善は、例えば、身体検査の結果を含む、任意の客観的又は主観的パラメータに基づくことができる。
本明細書で使用するとき、用語「癌」は、固形癌、リンパ腫、及び白血病を含む状態を指す。異なる種類の癌の例としては、肺癌（例えば、非小細胞肺癌又はＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌（すなわち、肝細胞癌）、腎癌（すなわち、腎細胞癌）、膀胱癌、乳癌、甲状腺癌、胸膜癌、膵臓癌、子宮癌、子宮頸癌、精巣癌、肛門癌、胆管癌、胃腸カルチノイド腫瘍、食道癌、胆嚢癌、虫垂癌、小腸癌、胃（胃部）癌、中枢神経系の癌、皮膚癌（例えば、黒色腫）、絨毛癌、頭部及び頸部癌、血液癌、骨肉腫、線維肉腫、神経芽腫、神経膠腫、黒色腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小細胞型リンパ腫、大細胞型リンパ腫、単球性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、及び多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、用語「有効量」及び「治療有効量」は、投与の目的となる治療効果をもたらす免疫複合体などの物質の用量を指す。正確な用量は、治療の目的に依存し、既知の技術を用いて当業者によって確認可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｕｍｅ １〜３、１９９２）；Ｌｌｏｙｄ、Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ、Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、２００６、Ｂｒｕｎｔｏｎ、ｅｄ．、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ、２００５、Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ、Ｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい）。
本明細書で使用するとき、用語「対象」は、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどが挙げられるが、これらに限定されない哺乳動物などの動物を指す。特定の実施形態では、対象はヒトである。
本明細書で使用するとき、用語「投与する」は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病巣内、鼻腔内又は皮下投与、経口投与、坐剤としての投与、局所的接触、髄腔内投与、又は遅延放出用装置、例えば、ミニ浸透圧ポンプの対象への移植を指す。
本明細書で使用するとき、構造
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
は、リンカーへの結合点を表す。したがって、Ａｂは、示された少なくとも１つのリジン残基を含有する抗体の残部である。リンカーへの結合点を表す構造
Figure 2020511501
は、本明細書に記載され、それぞれ式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び式ＩＶの免疫複合体中に存在する、Ｚ、Ｚ１、又はＧ２への結合点を表すことができる。
数値を修正するために本明細書で使用するとき、用語「約」及び「およそ」は、その明示的な値を囲む近接範囲を示す。「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」又は「およそＸ」は、０．９Ｘ〜１．１Ｘ、例えば、０．９５Ｘ〜１．０５Ｘ、又は０．９９Ｘ〜１．０１Ｘの値を示し得る。「約Ｘ」又は「およそＸ」への任意の言及は、具体的には、少なくとも、値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘの値を示す。したがって、「約Ｘ」及び「およそＸ」は、例えば、「０．９８Ｘ」の請求制限のために、明細書による支持を教示及び提供することが意図される。
抗体アジュバント複合体
本発明は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む抗体構築物と、アジュバント部分と、リンカーと、を含む免疫複合体を提供し、各アジュバント部分は、リンカーを介して抗体に共有結合する。
本明細書に記載される免疫複合体は、抗原提示細胞（antigen presenting cell、ＡＰＣ）の予想外に増加した活性化応答を提供することができる。この増加した活性化は、インビトロ又はインビボで検出することができる。場合によっては、ＡＰＣ活性化の特定レベルを達成するために、増加したＡＰＣ活性化を低減された時間の形態で検出することができる。例えば、インビトロアッセイでは、ＡＰＣ活性化％は、等価用量の免疫複合体を用いると、非共役抗体とＴＬＲアゴニストとの混合物を用いて別様に同一の濃度及び条件下で同じ又は同様のＡＰＣ活性化％を受けるのに必要とされる時間の１％、１０％、又は５０％以内に、成し遂げることができる。場合によっては、免疫複合体は、低減された時間量でＡＰＣ（例えば、樹状細胞）及び／又はＮＫ細胞を活性化させることができる。例えば、場合によっては、抗体ＴＬＲアゴニスト混合物は、２、３、４、５、１〜５、２〜５、３〜５、又は４〜７日間の混合物とのインキュベーション後に、ＡＰＣ（例えば、樹状細胞）及び／若しくはＮＫ細胞を活性化することができ、及び／又は樹状細胞分化を誘導することができるが、対照的に、本明細書に記載の免疫複合体は、別様に同一の濃度及び条件下で、４時間、８時間、１２時間、１６時間、又は１日以内に活性化及び／又は分化を誘導することができる。あるいは、ＡＰＣ活性化の増加は、ＡＰＣ活性化の量（例えば、ＡＰＣの割合）、レベル（例えば、好適なマーカーの上方制御のレベルによって測定されるような）、又は速度（例えば、活性化に必要なインキュベーション時間によって検出されるような）を達成するために必要とされる免疫複合体の低減された濃度の形態で検出することができる。
本発明の免疫複合体は、Ｆｃ領域を含む必要がある。非ＦｃＲ結合蛋白質は、本発明のアジュバントと結合複合体化させたとき、骨髄細胞を活性化しない。
一実施形態では、本発明の免疫複合体は、先行技術の免疫複合体（例えば、米国特許第８，９５１，５２８号に開示されている免疫複合体）と比較して、５％超の活性増大をもたらす。別の実施形態では、本発明の免疫複合体は、従来技術の免疫複合体と比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７０％を超える活性増大をもたらす。活性の増加は、任意の好適な手段によって評価することができ、その多くは当業者に既知であり、サイトカイン分泌による骨髄活性化又は評価を含むことができる。
一実施形態では、本発明の免疫複合体は、改善された薬物対アジュバントの比を提供する。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均の数は、約１〜約１０の範囲である。望ましい薬物対アジュバントの比は、治療の所望の効果に応じて、当業者によって決定することができる。例えば、１．２を超える薬物対アジュバント比が望ましい場合がある。一実施形態では、０．２、０．４、０．６、０．８、１、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、又は９．０を超える薬物対アジュバント比が望ましい場合がある。別の実施形態では、１０．０、９．０、８．０、７．０、６．０、５．０、４．０、３．８、３．６、３．４、３．２、３．０、２．８、２．６、２．４、２．２、２．０、１．８、１．６、１．４、１．２、０．８、０．６、０．４、又は０．２未満の薬物対アジュバント比が望ましい場合がある。薬物対アジュバント比は、任意の好適な手段によって評価することができ、その多くは当業者に既知である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
はＺに対する結合点を表し、Ａｄｊは、アジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、Ｚは、エチレングリコール基又はグリシン残基を有する二価の連結部分である）による構造を有する。Ｚは、好ましくは、アミド結合、Ｃ−Ｎ単結合、Ｃ−Ｏ単結合、又はＣ−Ｃ単結合を介してアジュバントに結合し、アミド結合又はＣ−Ｎ単結合を介して抗体に結合する。いくつかの実施形態では、Ｚは、アジュバントの窒素基及び抗体の窒素基に結合する。本明細書で使用するとき、用語「窒素基」は、アジュバント又は抗体中に存在する非置換又は置換アミン原子を指す。このような実施形態では、Ｚは、アミド結合、Ｃ−Ｎ単結合、又はこれらの組み合わせを介して隣接する窒素基に結合する。
アジュバント
いくつかの実施形態では、アジュバント部分は、免疫応答を誘発する化合物である。いくつかの実施形態では、アジュバント部分は、パターン認識受容体（「ＰＲＲ」）アゴニストである。パターン認識受容体（ＰＲＲ）を活性化することができる任意のアジュバントを、本発明の免疫複合体に組み込むことができる。本明細書で使用するとき、用語「パターン認識受容体」及び「ＰＲＲ」は、病原体関連分子パターン（「ＰＡＭＰ」）又は損傷関連分子パターン（「ＤＡＭＰ」）を認識し、自然免疫における主要なシグナル伝達要素として機能する、保存された哺乳類蛋白質の１つのクラスの任意のメンバーを指す。パターン認識受容体は、膜結合型ＰＲＲ、細胞質ＰＲＲ、及び分泌型ＰＲＲに分割される。膜結合型ＰＲＲの例としては、Ｔｏｌｌ様受容体（「ＴＬＲ」）及びＣ型レクチン受容体（「ＣＬＲ」）が挙げられる。細胞質ＰＲＲの例としては、ＮＯＤ様受容体（「ＮＬＲ」）及びＲｉｇ−Ｉ様受容体（「ＲＬＲ」）が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、２つ以上の異なるＰＲＲアジュバント部分を有することができる。
特定の実施形態では、本発明の免疫複合体中のアジュバント部分は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである。好適なＴＬＲアゴニストとしては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、又はこれらの任意の組み合わせ（例えば、ＴＬＲ７／８アゴニスト）が挙げられる。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を活性化することができる任意のアジュバントを、本発明の免疫複合体に組み込むことができる。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、脊椎動物における自然免疫応答の開始に関与するＩ型膜貫通蛋白質である。ＴＬＲは、細菌、ウイルス、及び真菌からの様々な病原体関連分子パターンを認識し、進入する病原体に対する第１の防御線として作用する。ＴＬＲは、細胞発現の差異及びそれらが開始するシグナル伝達経路における差異に起因して、重ねて更に異なる生物学的応答を引き起こす。一旦、（例えば、天然刺激又は合成ＴＬＲアゴニストによって）関与すると、ＴＬＲは、シグナル伝達カスケードを開始し、アダプター蛋白質骨髄分化一次応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）を介するＮＦ−κＢの活性化、及びＩＬ−１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）の動員をもたらす。ＩＲＡＫのリン酸化は、次いで、ＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の動員をもたらし、ＮＦ−κＢ阻害剤Ｉ−κＢのリン酸化が生じる。結果として、ＮＦ−κＢは細胞核に入り、プロモーターがサイトカインなどのＮＦ−κＢ結合部位を含有する遺伝子の転写を開始する。ＴＬＲシグナル伝達の調節の更なるモードは、ＴＲＡＦ６のＴＩＲ−ドメイン含有アダプター誘導インターフェロンβ（ＴＲＩＦ）依存性誘導、並びにＴＲＩＦ及びＴＲＡＦ３を介したＭｙＤ８８非依存経路の活性化を含み、インターフェロン応答因子３（interferon response factor three、ＩＲＦ３）のリン酸化がもたらされる。同様に、ＭｙＤ８８依存経路はまた、ＩＲＦ５及びＩＲＦ７を含むいくつかのＩＲＦファミリーメンバーを活性化するが、一方で、ＴＲＩＦ依存経路はまた、ＮＦ−κＢ経路も活性化する。
ＴＬＲ３アゴニストの例としては、ポリイノシン−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、ポリアデニル−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ）、及びポリ（Ｉ）−ポリ（Ｃ１２Ｕ）が挙げられる。
ＴＬＲ４アゴニストの例としては、リポ多糖（Lipopolysaccharide、ＬＰＳ）及びモノホスホリルリピドＡ（Monophosphoryl lipid A、ＭＰＬＡ）が挙げられる。
ＴＬＲ５アゴニストの例としては、フラジェリンが挙げられる。
ＴＬＲ９アゴニストの例としては、単鎖ＣｐＧオリゴデオキシリヌクレオチド（CpG oligodeoxynucleotide、ＣｐＧ ＯＤＮ）が挙げられる。刺激性ＣｐＧ ＯＤＮの３つの主要なクラスは、ヒト末梢血単核球（peripheral blood mononuclear cell、ＰＢＭＣ）、特にＢ細胞及び形質細胞様樹状細胞（plasmacytoid dendritic cell、ｐＤＣ）に対する構造的特性及び活性に基づいて同定されている。これらの３つのクラスは、クラスＡ（Ｄ型）、クラスＢ（Ｋ型）、及びクラスＣである。
Ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）アゴニストの例としては、ｉＥ ＤＡＰのアシル化誘導体、Ｄ−ガンマ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ、Ｌ−Ａｌａ−ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ、Ｃ１８脂肪酸鎖を有するムラミルジペプチド、ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド、及びＮ−グリコシル化ムラミルジペプチドが挙げられる。
ＲＩＧ−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストの例としては、５’ｐｐｐ−ｄｓｒｎａ（５’−ｐｐｐＧＣＡＵＧＣＧＡＣＣＵＣＵＧＵＵＵＧＡ−３’［配列番号１］：３’−ＣＧＵＡＣＧＣＵＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＵ−５’［配列番号２］）、及びポリ（デオキシアデニル−デオキシチミジル）酸（ポリ（ｄＡ：ｄＴ）が挙げられる。
サイトゾルＤＮＡ及び環状ジヌクレオチドと呼ばれる固有の細菌核酸などの更なる免疫刺激性化合物は、サイトゾルＤＮＡセンサを作用させることができるインターフェロン遺伝子（stimulator of interferon gene、「ＳＴＩＮＧ」）の刺激によって認識することができる。ＡＤＵ−ＳｌＯＯは、ＳＴＩＮＧアゴニストであり得る。ＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的な例としては、環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］（２’２’−ｃＧＡＭＰ）、環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（２’３’−ｃＧＡＭＰ）、環状［Ｇ（３’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（３’３’−ｃＧＡＭＰ）、環状ジアデニレートモノホスフェート（ｃ−ジ−ＡＭＰ）、２’，５’−３’，５’−ｃ−ジＡＭＰ（２’３’−ｃ−ジ−ＡＭＰ）、環状ジグアニレートモノホスフェート（ｃ−ジ−ＧＭＰ）、２’，５’−３’，５’−ｃ−ジＧＭＰ（２’３’−ｃ−ジ−ＧＭＰ）、環状ジイノシンモノホスフェート（ｃ−ジ−ＩＭＰ）、環状ジウリジンモノホスフェート（ｃ−ジ−ＵＭＰ）、ＫＩＮ７００、ＫＩＮ１１４８、ＫＩＮ６００、ＫＩＮ５００、ＫＩＮｌＯＯ、ＫＩＮ１０１、ＫＩＮ４００、ＫＩＮ２０００、又はＳＢ−９２００が挙げられ、認識することができる。
ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８を活性化することができる任意のアジュバントを、本発明の免疫複合体に組み込むことができる。ＴＬＲ７アゴニスト及びＴＬＲ８アゴニストの例は、例えば、Ｖａｃｃｈｅｌｌｉら（ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２：８、ｅ２５２３８、ＤＯＩ：１０．４１６１／ｏｎｃｉ．２５２３８（２０１３））、及びＣａｒｓｏｎら（米国特許出願公開第２０１３／０１６５４５５号、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載されている。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は両方とも、単球及び樹状細胞で発現される。ヒトでは、ＴＬＲ７はまた、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及びＢ細胞でも発現される。ＴＬＲ８は、骨髄起源のほとんどの細胞、すなわち単球、顆粒球、及び骨髄性樹状細胞で発現される。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、ウイルス侵入に応答する手段として、細胞内の「外来」一本鎖ＲＮＡの存在を検出することができる。ＴＬＲ８アゴニスト用いるＴＬＲ８発現細胞の治療は、高レベルのＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらし得る。同様に、ＴＬＲ７アゴニストを用いるｐＤＣなどのＴＬＲ７発現細胞の刺激は、高レベルのＩＦＮ−α及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらし得る。ＴＬＲ７／ＴＬＲ８の関与及びその結果として得られるサイトカイン産生は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞を活性化することができ、多様な自然及び獲得免疫応答機構を駆動して腫瘍破壊をもたらすことができる。
ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ７／８アゴニストの例としては、限定するものではないが、Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ（１−（４−アミノ−２−エチルアミノメチルイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール）、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（Ｒ８３７）（ＴＬＲ７のアゴニスト）、ロキソリビン（loxoribine）（ＴＬＲ７のアゴニスト）、ＩＲＭ１（１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ−［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）、ＩＲＭ２（２−メチル−１−［２−（３−ピリジン−３−イルプロポキシ）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）（ＴＬＲ８のアゴニスト）、ＩＲＭ３（Ｎ−（２−［２−［４−アミノ−２−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エトキシ］エチル）−Ｎ−メチルシクロヘキサンカルボキサミド）（ＴＬＲ８のアゴニスト）、ＣＬ０９７（２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、ＣＬ３０７（ＴＬＲ７のアゴニスト）、ＣＬ２６４（ＴＬＲ７のアゴニスト）、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、３Ｍ−０５２／ＭＥＤＩ９１９７（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、ＳＤ−１０１（Ｎ−［（４Ｓ）−２，５−ジオキソ−４−イミダゾリジニル］−ウレア）（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、ｍｏｔｏｌｉｍｏｄ（２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−［４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル］−３Ｈ−１−ベンゾアゼピン−４−カルボキサミド）（ＴＬＲ８のアゴニスト）、ＣＬ０７５（３Ｍ００２、２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）（ＴＬＲ７／８のアゴニスト）、及びＴＬ８−５０６（３Ｈ−１−ベンゾアゼピン−４−カルボン酸、２−アミノ−８−（３−シアノフェニル）−、エチルエステル）（ＴＬＲ８のアゴニスト）が挙げられる。
ＴＬＲ２アゴニストの例としては、限定するものではないが、Ｎ−α−パルミトイル−Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−Ｌ−システイン、パルミトイル−Ｃｙｓ（（ＲＳ）−２，３−ジ（パルミトイルオキシ）−プロピル）（「Ｐａｍ３Ｃｙｓ」）、例えば、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、Ｐａｍ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（［Ｐａｍ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ」及び「Ｐａｍ３ＣＳＫ４」としても知られる）、トリアシルリピドＡ（「ＯＭ−１７４」）、リポテイコ酸（Ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ、「ＬＴＡ」）、ペプチドグリカン、及びＣＬ４１９（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニルスペルミン）が挙げられる。
ＴＬＲ２／６アゴニストの例は、Ｐａｍ２ＣＳＫ４（Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−［Ｒ］−システイニル−［Ｓ］−セリル−［Ｓ］−リシル−［Ｓ］−リシル−［Ｓ］−リシル−［Ｓ］−リシン×３ ＣＦ３ＣＯＯＨ）である。
ＴＬＲ２／７アゴニストの例は、ＣＬ５７２（Ｓ−（２−ミリストイルオキシエチル）−（Ｒ）−システイニル４−（（６−アミノ−２−（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）、ＣＬ４１３（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニル−（Ｓ）−セリル−（Ｓ）−リシル−（Ｓ）−リシル−（Ｓ）−リシル−（Ｓ）−リシル−４−（（６−アミノ−２−（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）、及びＣＬ４０１（Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）プロピル）−（Ｒ）−システイニル４−（（６−アミノ−２（ブチルアミノ）−８−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）メチル）アニリン）を含む。
図１〜２３は、ＴＬＲアゴニストＣＬ２６４、ＣＬ４０１、ＣＬ４１３、ＣＬ４１９、ＣＬ５５３、ＣＬ５７２、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、及びＰａｍ２ＣＳＫ４が、それらのアジュバント活性を維持しながら、本発明の免疫複合体に結合できる位置を示す。具体的には、アジュバントに対してリンカーを連結させるべき位置は円で囲まれている。
いくつかの実施形態では、アジュバント部分はイミダゾキノリン化合物である。有用なイミダゾキノリン化合物の例としては、米国特許第５，３８９，６４０号、同第６，０６９，１４９号、及び同第７，９６８，５６２号に記載されているものが挙げられ、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、アジュバント（adjuvant、「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、各Ｊは独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、任意に存在し、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
特定の実施形態では、Ｑが存在する。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
各Ｒ４は、独立して、水素であるか、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、各Ｊは独立して、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、各Ｕは独立して、ＣＨ又はＮであり、少なくとも１つのＵはＮであり、各下付き文字ｔは、独立して、１〜３（すなわち、１、２、又は３）の整数であり、Ｑは、任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
特定の実施形態では、Ｑが存在する。特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｒ４は、水素、又は１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、Ｑは、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、Ｒ５は、水素であるか、又は１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、Ｑは、１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキル基からなる群より選択され、Ｕは、ＣＨ又はＮであり、Ｖは、ＣＨ２、Ｏ、又はＮＨであり、各下付き文字ｔは、独立して、１〜３（すなわち、１、２、又は３）の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキル及び２〜６員ヘテロアルキルから選択され、これらはそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択される１つ以上のメンバーで任意に置換され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、各Ｙは独立してＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。あるいは、Ｒ１及びそれが結合している窒素原子は、５〜８員の複素環を含む連結部分を形成し得る。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）の整数である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは、１〜３（すなわち、１、２、又は３）の整数である。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、各Ｙは独立してＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。あるいは、Ｒ１及びそれが結合している窒素原子は、５〜８員の複素環を含む連結部分を形成し得る。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）の整数である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは、１〜３（すなわち、１、２、又は３）の整数である。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、各Ｙは独立してＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。あるいは、Ｒ１及びそれが結合している窒素原子は、５〜８員の複素環を含む連結部分を形成し得る。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）の整数である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは、１〜３（すなわち、１、２、又は３）の整数である。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｗは、Ｏ及びＣＨ２からなる群から選択され、Ｘは、Ｏ及びＣＨ２から選択され、各Ｙは独立してＣＨＲ２であり、式中、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、下付き文字ｎは、１〜１２の整数（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２）であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは、１〜６（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）の整数である。特定の実施形態では、下付き文字ｎは、１〜３（すなわち、１、２、又は３）の整数である。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｒ１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｊは、水素、ＯＲ４、又はＲ４であり、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、又は１〜８個（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８個）の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、式：
Figure 2020511501
（式中、各Ｒ４は、独立して、水素、又は１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含むアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキル基であり、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
特定の実施形態では、アジュバント（「Ａｄｊ」）は、
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
（式中、破線
Figure 2020511501
は、アジュバントの結合点を表す）のものである。
いくつかの実施形態では、アジュバントは、蛍光色素分子ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、放射線診断用化合物ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、放射線治療用化合物ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、チューブリン阻害剤ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＤＮＡ架橋剤／アルキル化剤ではない。いくつかの実施形態では、アジュバントは、トポイソメラーゼ阻害剤ではない。
リンカー
アジュバント部分を抗体に共有結合させる連結部分を含有する、本発明の免疫複合体。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式Ｉ：
Figure 2020511501
（式中、Ａは、抗体中の非修飾アミノ酸側鎖又は抗体中の修飾アミノ酸側鎖であり、Ａｂは、アミノ酸側鎖Ａを含有する抗体の残部であり、Ｚは連結部分であり、Ａｄｊはアジュバント部分であり、下付き文字ｒは１〜１０の整数である）による構造を有する。
関連する一態様では、本発明は、本明細書で記載されるような複数の免疫複合体を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均の数は、約１〜約１０（例えば、約１〜約４）の範囲である。
複合体中のアジュバント部分は、蛋白質修飾のための様々な化学的性質を使用して抗体に共有結合することができ、上記の連結部分は、蛋白質官能基（すなわち、アミノ酸側鎖）と反応性リンカー基を有する試薬との反応から生じる。多種多様なこのような試薬が当該技術分野において既知である。このような試薬の例としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル及びＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ−ＮＨＳ）エステル（アミン反応性）；カルボジイミド（アミン及びカルボキシル反応性）；ヒドロキシメチルホスフィン（アミン反応性）；マレイミド（チオール反応性）；Ｎ−ヨードアセトアミド（チオール反応性）などのハロゲン化アセトアミド；アリールアジド（一級アミン反応性）、フッ素化アリールアジド（炭素−水素（Ｃ−Ｈ）挿入による反応）；ペンタフルオロフェニル（pentafluorophenyl、ＰＦＰ）エステル（アミン反応性）；テトラフルオロフェニル（tetrafluorophenyl、ＴＦＰ）エステル（アミン反応性）；イミドエステル（アミン反応性）；イソシアネート（ヒドロキシル反応性）；ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒドロキシル反応性）；ピリジルジスルフィド（チオール反応性）；及びベンゾフェノン誘導体（Ｃ−Ｈ結合挿入による反応）が挙げられるが、これらに限定されない。更なる試薬としては、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、２００８．に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
リンカーは、リンカーが抗体構築物及びアジュバント部分に共有結合しているとき、抗体構築物及びアジュバント部分の機能が維持されるように、任意の好適な長さを有することができる。リンカーは、約３Å以上、例えば、約４Å以上、約５Å以上、約６Å以上、約７Å以上、約８Å以上、約９Å以上、又は約１０Å以上の長さを有し得る。あるいは、又はそれに加えて、リンカーは、約５０Å以下、例えば、約４５Å以下、約４０Å以下、約３５Å以下、約３０Å以下、約２５Å以下、約２０Å以下、又は約１５Å以下の長さを有してもよい。したがって、リンカーは、前述の端点のうちのいずれか２つによって画定される長さを有することができる。リンカーは、約３Å〜約５０Å、例えば、約３Å〜約４５Å、約３Å〜約４０Å、約３Å〜約３５Å、約３Å〜約３０Å、約３Å〜約２５Å、約３Å〜約２０Å、約３Å〜約１５Å、約５Å〜約５０Å、約５Å〜約２５Å、約５Å〜約２０Å、約１０Å〜約５０Å、約１０Å〜約２０Å、約５Å〜約３０Å、又は約５Å〜約１５Åの長さを有することができる。特定の実施形態では、リンカーは、約３Å〜約２０Åの長さを有する。
いくつかの実施形態では、リンカーは、生理学的条件下で切断不可能である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
はＺに対する結合点を表し、Ａｄｊは、アジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、Ｚは、エチレングリコール基又はグリシン残基を有する二価の連結部分である）による構造を有する。Ｚは、好ましくは、アミド結合、Ｃ−Ｎ単結合、Ｃ−Ｏ単結合、又はＣ−Ｃ単結合を介してアジュバントに結合し、アミド結合又はＣ−Ｎ単結合を介して抗体に結合する。いくつかの実施形態では、Ｚは、アジュバントの窒素基及び抗体の窒素基に結合する。このような実施形態では、Ｚは、アミド結合、Ｃ−Ｎ単結合、又はこれらの組み合わせを介して隣接する窒素基に結合する。
特定の実施形態では、本発明は、式ＩＩａ：
Figure 2020511501
（式中、
Ａｂは抗体であり、
下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、
Ｚは、エチレングリコール基又はグリシン残基を含む二価連結部分である）による構造を有する。Ｚは、好ましくは、アミド結合、Ｃ−Ｎ単結合、Ｃ−Ｏ単結合、又はＣ−Ｃ単結合を介してアジュバントに結合し、アミド結合又はＣ−Ｎ単結合を介して抗体に結合する。いくつかの実施形態では、Ｚは、アジュバントの窒素基及び抗体の窒素基に結合する。このような実施形態では、Ｚは、アミド結合、Ｃ−Ｎ単結合、又はこれらの組み合わせを介して隣接する窒素基に結合する。
いくつかの実施形態では、Ｚは、ポリ（エチレングリコール）基を含む。特定の実施形態では、Ｚは、少なくとも２個のエチレングリコール基（例えば、少なくとも３個のエチレングリコール基、少なくとも４個のエチレングリコール基、少なくとも５個のエチレングリコール基、少なくとも６個のエチレングリコール基、少なくとも７個のエチレングリコール基、少なくとも８個のエチレングリコール基、少なくとも９個のエチレングリコール基、少なくとも１０個のエチレングリコール基、少なくとも１１個のエチレングリコール基、少なくとも１２個のエチレングリコール基、少なくとも１３個のエチレングリコール基、少なくとも１４個のエチレングリコール基、少なくとも１５個のエチレングリコール基、少なくとも１６個のエチレングリコール基、少なくとも１７個のエチレングリコール基、少なくとも１８個のエチレングリコール基、少なくとも１９個のエチレングリコール基、少なくとも２０個のエチレングリコール基、少なくとも２１個のエチレングリコール基、少なくとも２２個のエチレングリコール基、少なくとも２３個のエチレングリコール基、少なくとも２４個のエチレングリコール基、又は少なくとも２５個のエチレングリコール基）を含む。特定の実施形態において、Ｚは、ジ（エチレングリコール）基、トリ（エチレングリコール）基、又はテトラ（エチレングリコール）基、５個のエチレングリコール基、６個のエチレングリコール基、８個のエチレングリコール基、１２個のエチレングリコール基、２４個のエチレングリコール基、又は２５個のエチレングリコール基を含む。
いくつかの実施形態では、Ｚはグリシン残基を含む。特定の実施形態では、Ｚは、少なくとも２個のグリシン残基（例えば、少なくとも３個のグリシン残基、少なくとも４個のグリシン残基、少なくとも５個のグリシン残基、少なくとも６個のグリシン残基、少なくとも７個のグリシン残基、少なくとも８個のグリシン残基、少なくとも９個のグリシン残基、少なくとも１０個のグリシン残基、少なくとも１１個のグリシン残基、少なくとも１２個のグリシン残基、少なくとも１３個のグリシン残基、少なくとも１４個のグリシン残基、少なくとも１５個のグリシン残基、少なくとも１６個のグリシン残基、少なくとも１７個のグリシン残基、少なくとも１８個のグリシン残基、少なくとも１９個のグリシン残基、少なくとも２０個のグリシン残基、少なくとも２１個のグリシン残基、少なくとも２２個のグリシン残基、少なくとも２３個のグリシン残基、少なくとも２４個のグリシン残基、又は少なくとも２５個のグリシン残基）を含む。特定の実施形態では、Ｚは、２個のグリシン残基、３個のグリシン残基、４個のグリシン残基、５個のグリシン残基、６個のグリシン残基、８個のグリシン残基、１２個のグリシン残基、２４個のグリシン残基、又は２５個のグリシン残基を含む。
いくつかの実施形態では、Ｚは、二価シクロヘキシレン基を更に含む。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩａ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
は、Ｚ１に対する結合点を表し、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含む）による構造を有する。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＩＩｂ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
は、Ｚ１に対する結合点を表し、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含み、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含む）による構造を有する。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＶ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表し、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｇ２は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、下付き文字ｒは１〜１０（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩である。式ＩＶの免疫複合体の特定の実施形態では、抗体はチオール修飾されたリジン側鎖を含有しない。
いくつかの実施形態では、Ｌは、以下：
Figure 2020511501
（式中、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）から選択される。特定の実施形態では、ａは、２〜２５の整数である。特定の実施形態では、ｃは、２〜８の整数である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＶａ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ａは、２〜２５の整数である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＶｂ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ａは、２〜２５の整数である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＶｃ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ｃは、２〜８の整数である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＶｄ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、ｃは、２〜８の整数である。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、式ＩＶｅによる構造を有する。
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩である。

したがって、免疫複合体は、式Ｖａ〜式Ｖｆｆ：
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有するか、又はその薬学的に許容される塩であり得る。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４（すなわち、１、２、３、又は４）の整数である。
例えば、免疫複合体は、式ＶＩａ〜ＶＩｊ：
Figure 2020511501
Figure 2020511501
Figure 2020511501
（式中、ｎは、１〜４０の整数であり、ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）による構造を有することができる。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４（すなわち、１、２、３、又は４）の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、２〜２５の整数である。特定の実施形態では、ｎは、２〜８の範囲の整数である。
第２の一態様では、本発明は、式ＶＩＩの１つ以上の化合物及び式ＶＩＩＩの抗体から式ＩＶの免疫複合体を産生するための改良された方法であって、
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｇ２は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、Ｅは、エステルであり、下付き文字ｒは、１〜１０（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の整数である）の工程を含む方法を提供する。特定の実施形態では、下付き文字ｒは、１〜４（すなわち、１、２、３、又は４）の整数である。
任意の好適なリンカーは、エステルを介して抗体（式ＶＩＩの化合物）に結合することができる。例えば、リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
を有することができ、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜８の整数である。特定の実施形態では、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
（式中、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）を有し得る。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜８の整数である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
を有することができ、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜８の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜８の整数である。特定の実施形態では、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
（式中、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）を有することもできる。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、ｃは１〜８の整数である。いくつかの実施形態では、ｃは２〜８の整数である。特定の実施形態では、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
を有することができ、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜８の整数である。特定の実施形態では、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
（式中、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）を有することができる。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、１〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ａは、２〜８の整数である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
を有することができ、式中、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）を有することもできる。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜８の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜８の整数である。特定の実施形態では、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
リンカー（「Ｌ」）は、以下の式
Figure 2020511501
（式中、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２０の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）を有することもできる。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜２５の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは、１〜８の整数である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｃは２〜８の整数である。特定の実施形態では、Ｒは任意に存在し、１〜８（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、又は８）個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖である。
いくつかの実施形態では、式ＶＩＩの化合物は、以下：
Figure 2020511501
（式中、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｇ２は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、Ｅはエステルである）から選択される。特定の実施形態では、下付き文字ａは、２〜２５の整数である。特定の実施形態では、下付き文字ｃは、２〜８の整数である。
既に記載されているように、免疫複合体を形成する多くの方法が存在する。先行技術の方法のそれぞれには、欠点がある。本方法は、リンカーを含むように修飾されたアジュバントを抗体（式ＶＩＩＩの化合物）のリジン側鎖に複合体化させる、一工程プロセスを含む。このプロセスは、エステルを使用することによって可能である。エステルは、式ＶＩＩの化合物を抗体（式ＶＩＩＩの化合物）のリジン側鎖に連結することができる任意の好適なエステルであり得る。
例えば、式ＶＩＩのエステルは、式：
Figure 2020511501
（式中、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２への結合点を表す）のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（N-hydroxysuccinimide、「ＮＨＳ」）エステルであり得る。
式ＶＩＩのエステルは、式：
Figure 2020511501
（式中、Ｍは任意のカチオンであり、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２への結合点を表す）のスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルであってもよい。例えば、カチオン対イオン（「Ｍ」）は、プロトン、アンモニウム、四級アミン、アルカリ金属のカチオン、アルカリ土類金属のカチオン、遷移金属のカチオン、希土類金属のカチオン、典型元素カチオン、又はこれらの組み合わせであり得る。
式ＶＩＩのエステルは、式：
Figure 2020511501
（式中、各Ｒ２は、水素又はフッ素から独立して選択され、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２への結合点を表す）のフェノールエステルであり得る。
式ＶＩＩのエステルは、式：
Figure 2020511501
（テトラフルオロフェニル）又は
Figure 2020511501
（ペンタフルオロフェニル）；
（式中、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２への結合点を表す）のフェノールエステルであり得る。
いくつかの実施形態では、式ＶＩＩＩの抗体及び式ＶＩＩのエステルは、任意の好適な水性緩衝液中で組み合わされる。好適な水性緩衝液の例示的なリストは、リン酸緩衝生理食塩水、ホウ酸緩衝生理食塩水、及びトリス緩衝生理食塩水である。
テトラフルオロフェニル（「ＴＦＰ」）又はペンタフルオロフェニル（「ＰＦＰ」）を使用することは、本発明の免疫複合体の合成において特に有効である。
抗体
免疫複合体中の抗体は、同種異系抗体であり得る。「同種異系抗体」又は「同種抗体」という用語は、対象となる個体（例えば、腫瘍を有し治療を探求している個体）からではないが、同じ種に由来する抗体、又は異なる種に由来するが、異種抗体（例えば、非自己）としての認識を低減、緩和、又は回避するよう遺伝子操作されている抗体を指す。例えば、「同種異系抗体」は、ヒト化抗体であり得る。特に明記しない限り、本明細書で使用するとき、「抗体」及び「同種異系抗体」は、免疫グロブリンＧ（immunoglobulin G、ＩｇＧ）又は免疫グロブリンＡ（immunoglobulin A、ＩｇＡ）を指す。
ヒト個体の癌細胞が、その同じヒトによって産生されなかった抗体（例えば、抗体は、第２のヒト個体によって産生されたか、抗体は、マウスなどの別の種によって産生されたか、抗体は、別の種によって産生された抗体をヒト化したものである）と接触する場合、抗体は（第１の個体に対して）同種異系であると考えられる。ヒト抗原（例えば、癌特異的抗原、癌細胞内及び／又は癌細胞上で豊富な抗原など）を認識するヒト化マウスモノクローナル抗体は、「同種抗体」（同種異系抗体）であると考えられる。
いくつかの実施形態では、抗体は、ポリクローナル同種異系ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、複数の結合特異性を有するポリクローナルＩｇＧ抗体の混合物中に存在する。場合によっては、混合物の抗体は、異なる標的分子に特異的に結合し、場合によっては、混合物の抗体は、同じ標的分子の異なるエピトープに特異的に結合する。したがって、抗体の混合物は、場合によっては、本発明の２つ以上の免疫複合体を含むことができる（例えば、アジュバント部分は、混合物の抗体、例えば、ポリクローナルＩｇＧ抗体の混合物と共有結合して、本発明の抗体−アジュバント複合体の混合物をもたらすことができる）。抗体の混合物は、２個体以上（例えば、３個体以上、４個体以上、５個体以上、６個体以上、７個体以上、８個体以上、９個体以上、１０個体以上など）からプールすることができる。場合によっては、プールされた血清は、同種抗体の供給源として使用され、血清は、第１の個体ではない任意の数の個体に由来することができる（例えば、血清は２個体以上、３個体以上、４個体以上、５個体以上、６個体以上、７個体以上、８個体以上、９個体以上、１０個体以上などからプールすることができる）。場合によっては、抗体は、使用前に血清から単離されるか又は精製される。精製は、異なる個体から抗体をプールする前又は後に実施することができる。
免疫複合体中の抗体が血清からの複数のＩｇＧを含むいくつかの場合、ある程度の（例えば、０％超〜５０％未満）、半分、大部分（５０％超〜１００％未満）、又は更には全ての（すなわち、血清からの複数のＩｇＧ）抗体についての標的抗原は不明である。しかしながら、このような混合物は多種多様な標的抗原に特異的な多種多様な抗体を含有するため、混合物中の少なくとも１つの抗体が目的の標的抗原を認識する可能性は高い。
いくつかの実施形態では、抗体は、ポリクローナル同種異系ＩｇＡ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、複数の結合特異性を有するポリクローナルＩｇＡ抗体の混合物中に存在する。場合によっては、混合物の抗体は、異なる標的分子に特異的に結合し、場合によっては、混合物の抗体は、同じ標的分子の異なるエピトープに特異的に結合する。したがって、抗体の混合物は、場合によっては、本発明の２つ以上の免疫複合体を含むことができる（例えば、アジュバント部分は、混合物の抗体、例えば、ポリクローナルＩｇＡ抗体の混合物と共有結合して、本発明の抗体−アジュバント複合体の混合物をもたらすことができる）。抗体の混合物は、２個体以上（例えば、３個体以上、４個体以上、５個体以上、６個体以上、７個体以上、８個体以上、９個体以上、１０個体以上など）からプールすることができる。場合によっては、プールされた血清は、同種抗体の供給源として使用され、血清は、第１の個体ではない任意の数の個体に由来することができる（例えば、血清は２個体以上、３個体以上、４個体以上、５個体以上、６個体以上、７個体以上、８個体以上、９個体以上、１０個体以上などからプールすることができる）。場合によっては、抗体は、使用前に血清から単離されるか又は精製される。精製は、異なる個体から抗体をプールする前又は後に実施することができる。
免疫複合体中の抗体が血清からの複数のＩｇＡを含むいくつかの場合、ある程度の（例えば、０％超〜５０％未満）、半分、大部分（５０％超〜１００％未満）、又は更には全ての（すなわち、血清からの複数のＩｇＡ）抗体についての標的抗原は不明である。しかしながら、このような混合物は多種多様な標的抗原に特異的な多種多様な抗体を含有するため、混合物中の少なくとも１つの抗体が目的の標的抗原を認識する可能性は高い。
いくつかの場合では、免疫複合体中の抗体は、静脈内免疫グロブリン（intravenous immunoglobulin、ＩＶＩＧ）及び／又はＩＶＩＧに由来する（例えば、ＩＶＩＧ由来のものが豊富な、ＩＶＩＧから精製された、例えば、ＩＶＩＧからアフィニティ精製された）抗体を含む。ＩＶＩＧは、多数（例えば、場合によっては、１，０００超〜６０，０００）の正常かつ健康な血液ドナーに由来する血漿（例えば、場合によっては、任意の他の蛋白質を含まない）からプールされたＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）を含有する血液製品である。ＩＶＩＧは市販されている。ＩＶＩＧは、高い割合の天然ヒト単量体ＩＶＩＧを含有し、低ＩｇＡ含有量を有する。静脈内投与されると、ＩＶＩＧは、いくつかの疾患状態を改善する。したがって、米国食品医薬品局（the United States Food and Drug Administration、ＦＤＡ）は、（１）川崎病、（２）免疫介在性血小板減少症、（３）一次免疫不全、（４）造血幹細胞移植（２０歳以上について）、（５）慢性Ｂ細胞リンパ球性白血病、及び（６）小児ＨＩＶ１型感染症、を含む多数の疾患のためにＩＶＩＧの使用を認可した。２００４年に、ＦＤＡは、腎臓移植レシピエントについてのＣｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ ＩＶＩＧプロトコルを認可し、その結果、このようなレシピエントは、血液型（ＡＢＯ不適合）又は組織適合にかかわらず、任意の健康なドナーから生体ドナー腎臓を受容することができる。ＩＶＩＧのこれら及び他の態様は、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０１５０９４２号、同第２００４／０１０１９０９号、同第２０１３／０１７７５７４号、同第２０１３／０１０８６１９号、及び同第２０１３／００１１３８８号に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの場合において、抗体は、定義されたサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、又はＩｇＡ２）のモノクローナル抗体である。抗体の組み合わせが使用される場合、抗体は、同じサブクラス又は異なるサブクラスに由来し得る。例えば、抗体は、ＩｇＧ１抗体であり得る。異なる相対比率で異なるサブクラスの様々な組み合わせを、当業者によって得ることができる。場合によっては、特定のサブクラス、又は異なるサブクラスの特定の組み合わせは、癌治療又は腫瘍サイズの低減において特に有効であり得る。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、抗体がモノクローナル抗体である免疫複合体を提供する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体はヒト化される。
いくつかの実施形態では、抗体は、癌細胞の抗原に結合する。例えば、抗体は、癌細胞の表面上に少なくとも１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００、２．５×１０６、５×１０６、又は１×１０７コピー以上の量で存在する標的抗原に結合し得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、非癌細胞上の対応する抗原よりも高い親和性で癌又は免疫細胞上の抗原に結合する。例えば、抗体は、非癌又は非免疫細胞上の対応する野生型抗原の認識と比較して、癌又は免疫細胞上に見出される多型を含有する抗原を優先的に認識し得る。場合によっては、抗体は、非癌又は非免疫細胞よりも高い結合活性を伴って癌又は免疫細胞に結合する。例えば、癌又は免疫細胞は、より高い密度の抗原を発現することができ、したがって、多価抗体の癌又は免疫細胞に対するより高い親和性結合を提供することができる。
場合によっては、抗体は非癌抗原に有意に結合しない（例えば、抗体は、標的癌抗原よりも少なくとも１０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、１００，０００倍、又は１，０００，０００倍低い親和性（より高いＫｄ）を伴って１つ以上の非癌抗原に結合する）。場合によっては、抗体が結合する標的癌抗原は、癌細胞上に豊富である。例えば、標的癌抗原は、対応する非癌細胞よりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、１００，０００倍、又は１，０００，０００倍高いレベルで、癌細胞の表面上に存在し得る。一部の場合には、対応する非癌細胞は、過剰増殖性ではない、又はそうでなければ癌性ではない、同一組織又は起源の細胞である。一般に、癌細胞の抗原（標的抗原）に特異的に結合する対象ＩｇＧ抗体は、他の利用可能な抗原に対して、その特定の抗原に優先的に結合する。しかしながら、標的抗原は、他の細胞と比較して、癌細胞に特異的である必要はなく、又は癌細胞中で豊富である必要はない（例えば、標的抗原は、他の細胞によって発現され得る）。したがって、語句「癌細胞の抗原に特異的に結合する抗体」という語句において、「特異的に」という用語は、抗体の特異性を指し、その特定の細胞型における抗原の固有性を指すものではない。
修飾されたＦｃ領域
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、修飾されたＦｃ領域を含有し、修飾は、Ｆｃ領域の１つ以上のＦｃ受容体への結合を調節する。
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体の３つの主要なクラス：ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及びＩｇＥに結合するＦｃεＲ、が存在する。ＦｃγＲファミリーは、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）などのいくつかのメンバーを含む。Ｆｃγ受容体は、ＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）について異なる親和性も有する。
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体（例えば、リンカーを介してＴＬＲ７／８アゴニストなどのＴＬＲアゴニストに複合体化した抗体）は、Ｆｃ領域内に１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／又は置換）を含み、これにより、Ｆｃ領域内の変異を欠く天然抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））に対する調節された結合がもたらされる。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、Ｆｃ領域内に１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／又は置換）を含み、これにより、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢに対する結合が低減する。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、抗体のＦｃ領域内に１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／又は置換）を含み、これは、Ｆｃ領域内に変異を欠く天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、及び／又はＦｃＲγＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）に対する結合を同じに維持するか、又はそれらに対する結合を増大するが、抗体のＦｃγＲＩＩＢに対する結合を低減させる。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、Ｆｃ領域内に１つ以上の修飾を含み、これにより、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢに対する結合が増大する。
いくつかの場合では、調節された結合は、抗体の天然Ｆｃ領域に対する抗体のＦｃ領域における突然変異によって提供される。変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はこれらの組み合わせであり得る。「天然Ｆｃ領域」は、「野生型Ｆｃ領域］と同義であり、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるか、又は天然抗体（例えば、リツキシマブ）のＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、並びに天然に存在するそれらの変異体、を含む。天然配列Ｆｃは、Ｆｃの様々なアロタイプを含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、ｍＡｂｓ、１（４）：３３２−３３８（２００９）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ受容体に対する調節された結合をもたらすＦｃ領域中の突然変異は、以下の突然変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）の１つ以上、及び／又は以下のアミノ酸：Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８、及びＡ３３０の１つ以上の突然変異を含み得る。Ｆｃ受容体結合を調節するための更なるＦｃ領域修飾は、例えば、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３５０号及び米国特許第７，４１６，７２６号及び同第５，６２４，８２１号に記載されている。
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを変化させるように修飾される。
ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメイン中のＡｓｎ２９７残基でグリコシル化される。このＮ−結合型オリゴ糖は、コアの六糖類、Ｎ−アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）から構成される。エンドグリコシダーゼ又はＰＮＧａｓｅ Ｆによる六糖類の除去は、抗体Ｆｃ領域における立体構造変化をもたらすことが知られており、これは、抗体結合親和性を有意に低下させて、ＦｃγＲを活性化させることができ、エフェクター機能の低下をもたらす。コアの六糖類は、多くの場合、ガラクトースと結合し、ＧｌｃＮＡｃ、フコース、又はシアル酸を二等分し、活性化及び阻害性ＦｃγＲに対するＦｃ結合に差次的に影響する。加えて、α２，６−シアリル化が、生体内で抗炎症活性を強化する一方で、脱フコシル化は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合をもたらし、抗体依存性細胞毒性及び抗体依存性食作用において１０倍の増加をもたらすことが実証されている。したがって、特定のグリコシル化パターンを使用して、炎症性エフェクター機能を制御することができる。
いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変更する修飾は突然変異である。例えば、Ａｓｎ２９７における置換。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７はグルタミン（Ｎ２９７Ｑ）に変異している。ＦｃγＲ調節シグナル伝達を調節する抗体を用いる免疫応答を制御するための方法は、例えば、米国特許第７，４１６，７２６号、並びに米国特許第２００７／００１４７９５号及び同第２００８／０２８６８１９号に記載されている。
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、非天然に生じるグリコシル化パターンを伴う操作されたＦａｂ領域を含有するように修飾される。例えば、ハイブリドーマは、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増大を可能にする特定の突然変異を用いて、アフコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂ、又は脱グリコシル化Ｆｃを分泌するように、遺伝子操作することができる。いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、アフコシル化されるように操作される（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから入手可能な、アフコシル化リツキシマブ、ｈｃｄ２０−ｍａｂ１３）。
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体のＦｃ領域全体が異なるＦｃ領域と交換され、その結果、抗体のＦａｂ領域は、非天然Ｆｃ領域に複合体化される。例えば、通常ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むリツキシマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＡに複合体化することができ、又は通常ＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、又はＩｇＧ２に複合体化させることができる。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、記載されるＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４ Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ変異などの１つ以上のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、ＦｃＲに対するＦｃ結合を調節する、本明細書に記載の１つ以上のアミノ酸修飾を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較して、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を改変しない。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較して、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を増大させる。
抗体標的化
いくつかの実施形態では、抗体は、５Ｔ４、ＡＢＬ、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧＩ、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣｌ、ＡＲ、アロマターゼ、ＡＴＸ、ＡＸ１、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖蛋白質）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７−Ｈ１、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧ１、ＢＡＩ１、ＢＣＲ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＢＩｙＳ、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦＩＯ）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｃ１９ｏｒｆｌＯ（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＡ９、ＣＡＮＴ１、ＣＡＰＲＩＮ−１、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬ１（１−３０９）、ＣＣＬＩ１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−Ｉｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＥＰ−２）、ＳＬＣ、ｅｘｏｄｕｓ−２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−Ｉ）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−Ｉ）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−Ｉａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰＩｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ−ＩＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲ８又はＣＤｗ１９８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲＩ／ＣＫＲ−Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤ１９、ＣＤＩＣ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２００、ＣＤ−２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ２７４、ＣＤＨ１（Ｅカドヘリン）、ＣＤＨ１Ｏ、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２Ｏ、ＣＤＨ５、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲＩ、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クローディン−７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＲ２、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＡＧ１Ｂ（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＣＴＬ８、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ１Ｏ（ＩＰ−ＩＯ）、ＣＸＣＬＩ１（１−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＤＮＣＬ１、ＤＰＰ４、Ｅ２Ｆ１、Ｅｎｇｅｌ、Ｅｄｇｅ、ウイキョウ、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、Ｅｎｏｌａ、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、ＥＰＨＢ６、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ１、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ２、ＥＰＨＲＩＮＡ３、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ４、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ５、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ６、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ１、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ２、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＧ、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＲＥＧ、ＥＲＫ８、エストロゲン受容体、Ｅａｒｌ、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ファルネシルトランスフェラーゼ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮｆ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１ １、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬ１（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＢＬ１（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＬＴ１、ＦＬＴ−３、ＦＯＬＲ１、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤ２、ＧＤＦ５、ＧＦＩ１、ＧＧＴ１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＣ３、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＧＲＣＣ１Ｏ（Ｃ１Ｏ）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ハリネズミ、ＨＧＦ、ＨＩＦ１Ａ、ＨＩＰ１、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸＩ、ＨＳＰ９０、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＥＦＮＡ６、ＢＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮｇａｍｍａ、ＩＦＮＷ１、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦＩＲ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＤＬ−１、ＩＬＩＯ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ−１、ＩＬ１Ｒ１（ＣＤ１２１ａ）、ＩＬ１Ｒ２（ＣＤ１２１ｂ）、ＩＬ−ＩＲＡ、ＩＬ−２、ＩＬ２ＲＡ（ＣＤ２５）、ＩＬ２ＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ（ＣＤ１２３）、ＩＬ−５、ＩＬ５ＲＡ（ＣＤ１２５）、ＩＬ３ＲＢ（ＣＤ１３１）、ＩＬ−６、ＩＬ６ＲＡ、（ＣＤ１２６）、ＩＲ６ＲＢ（ＣＤ１３０）、ＩＬ−７、ＩＬ７ＲＡ（ＣＤ１２７）、ＩＬ−８、ＣＸＣＲ１（ＩＬ８ＲＡ）、ＣＸＣＲ２、（ＩＬ８ＲＢ／ＣＤ１２８）、ＩＬ−９、ＩＬ９Ｒ（ＣＤ１２９）、ＩＬ−１０、ＩＬ１０ＲＡ（ＣＤ２１０）、ＩＬ１０ＲＢ（ＣＤＷ２１０Ｂ）、ＩＬ−１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１２Ｂ、ＩＬ−１２ＲＢ１、ＩＬ−１２ＲＢ２、ＩＬ−１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１９、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬＩＦ１０、ＩＬＩＦ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬＩＦ７、ＩＬ１Ｆ８、ＤＬ１Ｆ９、ＩＬＩＨＹＩ、ＩＬＩＲ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３、ＤＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３０、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、１Ｌ４、ＩＬ６ＳＴ（糖蛋白質１３０）、ＩＬＫ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（α６ インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（β４ インテグリン）、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＴＢ、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＡ５、ＬＥＰ（レプチン）、ルイスＹ抗原、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、ＬＲＲＣ１５、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧ又はＯＭｇｐ、ＭＡＧＥＡ３、ＭＡＧＥＡ６、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＣＰ−１、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＳＲＩＩ、ＭＪＰ−２、ＭＳＬＮ、ＭＫ、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＵＩ）、ｍＴＯＲ、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ｍｕｃｉｎ）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ニューロカン、ＮＦＫＢＩ、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ−リンゴ、ＮｇＲＮｏｇｏ６６、（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮＭＥＩ（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＴＣＨ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＸ５、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲＩＤ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１１２、ＮＲ１１３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴ５Ｅ、ＮＴＮ４、ＯＤＺＩ、ＯＰＲＤＩ、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＤＧＦ、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＣＡＭＩ、
ｐｅｇ−アスパラギナーゼ、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩ３ キナーゼ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣＩ、ＰＫＣ、ＰＫＣ−ベータ、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＰＴＮ、ＰＶＲＩＧ、ＲＡＣ２（Ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ リガンド、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦＩ１Ｏ（ＺＮＦ１４４）、Ｒｏｎ、ＲＯＢＯ２、ＲＯＲ１、ＲＸＲ、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ １Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（エンドセリアル単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＥＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢ５（ｍａｓｐｉｎ）、ＳＥＲＰＩＮＥＩ（ＰＡＩ−Ｉ）、ＳＥＲＰＩＮＦＩ、ＳＨＩＰ−１、ＳＨＩＰ−２、ＳＨＢ１、ＳＨＢ２、ＳＨＢＧ、ＳｆｃＡＺ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１Ｏ、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＩＬ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＮＦ、ＴＮＦ−ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦＩ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１Ｏ（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１ １（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０ リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０ リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７ リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０ リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢ リガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＲＫＡ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＯＰ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、チロシナーゼ、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、バーシカン、ＶＨＬ Ｃ５、ＶＬＡ−４、ＷＴ１、Ｗｎｔ−１、ＸＣＬ１（リンフォタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ−Ｉｂ）、ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹ１、ＺＦＰＭ２、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ−２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（ミンクル）、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン−２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ−１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ−２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ−１）、ＣＬＥＣ７Ａ（Ｄｅｃｔｉｎ−１）、ＣＬＥＣ１１Ａ、ＰＤＧＦＲａ、ＳＬＡＭＦ７、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＬＩＬＲＢ１、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ、ＴＡＲＭ１、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ５、ＳＩＧＬＥＣ６、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ８、ＳＩＧＬＥＣ９、ＳＩＧＬＥＣ１０、ＳＩＧＬＥＣ１１、ＳＩＧＬＥＣ１２、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＡ、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、ＴＲＥＭ２、及びＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）から選択される１つ以上の標的に結合する（例えば、から選択される標的に特異的に結合する）ことができる。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲγ共役受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲγ共役受容体は、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５Ｂ、ＩＬＴ８）、ＬＩＬＲＢ１、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ、及びＴＡＲＭ１からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＤＡＰ１２共役受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１２共役受容体は、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ５、ＳＩＧＬＥＣ６、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ８、ＳＩＧＬＥＣ９、ＳＩＧＬＥＣ１０、ＳＩＧＬＥＣ１１、ＳＩＧＬＥＣ１２、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、及びＴＲＥＭ２からなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、抗体は、ｈｅｍＩＴＡＭ含有受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ｈｅｍＩＴＡＭ含有受容体は、ＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）である。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ−２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（ミンクル）、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン−２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ−１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ−２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ−１）、及びＣＬＥＣ７Ａ（デクチン−１）から選択される１つ以上の標的に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン−２）又はＣＬＥＣ５Ａに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン−２）に結合することができる。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＴＰ５Ｉ（Ｑ０６１８５）、ＯＡＴ（Ｐ２９７５８）、ＡＩＦＭ１（Ｑ９Ｚ０Ｘ１）、ＡＯＦＡ（Ｑ６４１３３）、ＭＴＤＣ（Ｐ１８１５５）、ＣＭＣ１（Ｑ８ＢＨ５９）、ＰＲＥＰ（Ｑ８Ｋ４１１）、ＹＭＥＬ１（Ｏ８８９６７）、ＬＰＰＲＣ（Ｑ６ＰＢ６６）、ＬＯＮＭ（Ｑ８ＣＧＫ３）、ＡＣＯＮ（Ｑ９９ＫＩ０）、ＯＤＯ１（Ｑ６０５９７）、ＩＤＨＰ（Ｐ５４０７１）、ＡＬＤＨ２（Ｐ４７７３８）、ＡＴＰＢ（Ｐ５６４８０）、ＡＡＴＭ（Ｐ０５２０２）、ＴＭＭ９３（Ｑ９ＣＱＷ０）、ＥＲＧＩ３（Ｑ９ＣＱＥ７）、ＲＴＮ４（Ｑ９９Ｐ７２）、ＣＬ０４１（Ｑ８ＢＱＲ４）、ＥＲＬＮ２（Ｑ８ＢＦＺ９）、ＴＥＲＡ（Ｑ０１８５３）、ＤＡＤ１（Ｐ６１８０４）、ＣＡＬＸ（Ｐ３５５６４）、ＣＡＬＵ（Ｏ３５８８７）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＭＯＧＳ（Ｑ８０ＵＭ７）、ＧＡＮＡＢ（Ｑ８ＢＨＮ３）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＵＧＧＧ１（Ｑ６Ｐ５Ｅ４）、Ｐ４ＨＡ１（Ｑ６０７１５）、ＨＹＥＰ（Ｑ９Ｄ３７９）、ＣＡＬＲ（Ｐ１４２１１）、ＡＴ２Ａ２（Ｏ５５１４３）、ＰＤＩＡ４（Ｐ０８００３）、ＰＤＩＡ１（Ｐ０９１０３）、ＰＤＩＡ３（Ｐ２７７７３）、ＰＤＩＡ６（Ｑ９２２Ｒ８）、ＣＬＨ（Ｑ６８ＦＤ５）、ＰＰＩＢ（Ｐ２４３６９）、ＴＣＰＧ（Ｐ８０３１８）、ＭＯＴ４（Ｐ５７７８７）、ＮＩＣＡ（Ｐ５７７１６）、ＢＡＳＩ（Ｐ１８５７２）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＥＮＶ２（Ｐ１１３７０）、ＶＡＴ１（Ｑ６２４６５）、４Ｆ２（Ｐ１０８５２）、ＥＮＯＡ（Ｐ１７１８２）、ＩＬＫ（Ｏ５５２２２）、ＧＰＮＭＢ（Ｑ９９Ｐ９１）、ＥＮＶ１（Ｐ１０４０４）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＣＬＨ（Ｑ６８ＦＤ５）、ＤＳＧ１Ａ（Ｑ６１４９５）、ＡＴ１Ａ１（Ｑ８ＶＤＮ２）、ＨＹＯＵ１（Ｑ９ＪＫＲ６）、ＴＲＡＰ１（Ｑ９ＣＱＮ１）、ＧＲＰ７５（Ｐ３８６４７）、ＥＮＰＬ（Ｐ０８１１３）、ＣＨ６０（Ｐ６３０３８）、及びＣＨ１０（Ｑ６４４３３）から選択される１つ以上の標的に結合することができる。前述のリストでは、アクセッション番号は括弧内に示されている。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＣＲ８、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、及びｇｐ７５から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＣＲ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、及びＨＥＲ２から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔｎ抗原及びＴｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＧＦＲ、ＣＣＲ８、及びＨＥＲ２から選択される抗原に結合する。特定の実施形態では、抗体はＨＥＲ２に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体又はＦｃ融合蛋白質は、アバゴボマブ、アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（商標）としても知られる）、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（商標）、ｃ７Ｅ３ Ｆａｂとしても知られる）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標）としても知られる）、アデカツムマブ、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈ又はＣａｍｐａｔｈ−１Ｈとしても知られる）、アルツモマブ、アフェリモマブ、アナツモマブマフェナトックス（mafenatox）、アネツムマブ、アンルキズマブ、アポリズマブ、アーシツモマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（商標）としても知られる）、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（商標）としても知られる）、ベリムマブ（ＬＹＭＰＨＯ−ＳＴＡＴ−Ｂ（商標）としても知られる）、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ビバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）としても知られる）、ビシロマブブラロバービタル（brallobarbital）、ビバツズマブメルタンシン、ｃａｍｐａｔｈ、カナキヌマブ（ＡＣＺ８８５としても知られる）、カンツズマブメルタンシン、カプロマブ（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（商標）としても知られる）、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（商標）としても知られる）、セデリズマブ（ＣＩＭＺＩＡ（商標）としても知られる）、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）としても知られる）、クレノリキシマブ、ダセツズマブ、ダクリキシマブ、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（商標）としても知られる）、デノスマブ（ＡＭＧ １６２としても知られる）、デツモマブ、ドルリモマブアリトックス、ドルリキシズマブ、ダムツムマブ、デュリムルマブ、デュルムルマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（商標）としても知られる）、エドバコマブ、エドレコロマブ（Ｍａｂ１７−１Ａ、ＰＡＮＯＲＥＸ（商標）としても知られる）、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（商標）としても知られる）、エフングマブ（ＭＹＣＯＧＲＡＢ（商標）としても知られる）、エルシリモマブ、エンリモマブペゴール、エピツモマブシツセタン（cituxetan）、エファリズマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ（商標）としても知られる）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標）としても知られる）、エタラシズマブ（エタラツズマブ、ＶＩＴＡＸＩＮ（商標）、ＡＢＥＧＲＩＮ（商標）としても知られる）、エクスビビルマブ（exbivirumab）、ファノレソマブ（ＮＥＵＴＲＯＳＰＥＣ（商標）としても知られる）、ファラリモマブ、フェルビズマブ、フオントリズマブ（ＨＵＺＡＦ（商標）としても知られる）、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ（ＡＢＸＣＢＬ（商標）としても知られる）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）としても知られる）、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ １４８としても知られる）、ゴミリキシマブ、イバリズマブ（ＴＮＸ−３５５としても知られる）、イブリツモマブチウキセタン（tiuxetan）（ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）としても知られる）、イゴボマブ、イムシロマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）としても知られる）、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１としても知られる）、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レマレソマブ、レブリリズマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ（ＨＧＳ−ＥＴＲ２、ＥＴＲ２−ＳＴ０１としても知られる）、レキシツムマブ、リビビルマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ（ＨＧＳＥＴＲ１、ＴＲＭ−１としても知られる）、マスリモマブ、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００としても知られる）、メポリズマブツ（ＢＳＡＴＲＩＡ（商標）としても知られる）、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モロリムマブ、モタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（商標）としても知られる）、ムロモナブ（ＯＫＴ３としても知られる）、ナコロマブタフェナトックス、ナプツモマブエスタフェナトックス、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（商標）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（商標）としても知られる）、ネバクマブ、ネレリモマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ ｈＲ３（商標）、ＴＨＥＲＡ−ＣＩＭ−ｈＲ３（商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（商標）としても知られる）、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（商標）としても知られる）、オクレリズマブ、オヅリモマブ、オファツムマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（商標）としても知られる）、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（商標）としても知られる）、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩ（商標）としても知られる）、パニツムマブ（ＡＢＸ−ＥＧＦ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標）としても知られる）、パスコリズマブ、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（商標）としても知られる）、ペルツズマブ（２Ｃ４、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）としても知られる）、ペキセリズマブ、ピンツモマブ、プリリキシマブ、ピリツムマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標）としても知られる）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）、ＭａｂＴＨＥＲＡ（商標）としても知られる）、ロベリズマブ、ルピリズマブ、サツモマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ（ＭＥＤＩ−５０７としても知られる）、ソンツズマブ、スタムルマブ（ＭＹＯ−０２９としても知られる）、スレソマブ（ＬＥＵＫＯＳＣＡＮ（商標）としても知られる）、タクツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タプリツモマブパプトックス（paptox）、テフィバズマブ（ＡＵＲＥＸＩ（商標）としても知られる）、テリモマブアリトックス、テネリキシアブ、テプリズマブ、チシリムマブ、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）としても知られる）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られる）、トレメリムマブ（ＣＰ−６７５、２０６としても知られる）、ツコツズマブ、セルモレウキン、ツビルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（ＣＮＴＯ１２７５としても知られる）、バパリキシマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ビシリズマブ（ＮＵＶＩＯＮ（商標）としても知られる）、ボロシキシマブ（Ｍ２００としても知られる）、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（商標）としても知られる）、ザルツムマブ、ザノリムマブ（ＨｕＭＡＸ−ＣＤ４としても知られる）、ジラリムマブ、ゾリモマブアリトックス、ダラツムマブ、エロツキスマブ、オビンツンズマブ、オララツマブ、ブレンツキシマブベドチン、アファイバーセプト（afibercept）、アバタセプト、ベラタセプト、アファイバーセプト、エタネルセプト、ロミプロスティム、ＳＢＴ−０４０（米国特許第２０１７／０１５８７７２号に列挙されている配列）から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、トラスツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、又はマツズマブである。特定の実施形態では、抗体は、トラスツズマブである。
チェックポイント阻害剤
任意の好適な免疫チェックポイント阻害剤は、本明細書に開示される免疫複合体と共に使用するために企図される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。別の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質とそのリガンドとの間の相互作用を低下させる。免疫チェックポイント分子の発現及び／又は活性を低下させる阻害性核酸もまた、本明細書に開示される方法で使用することができる。
ほとんどのチェックポイント抗体は、細胞を殺傷しようとしていないが、シグナル伝達を遮断するように、エフェクター機能を有さないように設計されている。本発明の免疫複合体は、骨髄免疫を活性化するために必要な「エフェクター官能基」を追加することができる。したがって、ほとんどのチェックポイント抗体阻害剤では、この発見は重要である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、細胞毒性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られる）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連蛋白質（ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲＳＦ１８としても知られる）、誘導性Ｔ細胞共刺激性（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られる）、ＣＤ９６、ポリオウイルス受容体関連２（ＰＶＲＬ２、ＣＤ１１２Ｒとしても知られる、プログラム細胞死蛋白質１（ＰＤ−１、ＣＤ２７９としても知られる）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ２７４としても知られる）、プログラム細胞死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ及びＣＤ２７３としても知られる）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３、ＣＤ２２３としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４、キラー免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０及びＣＤ１３４としても知られる）及びそのリガンドＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、インドレアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ−１）、インドレアミン２，３−ジオキシゲナーゼ２（ＩＤＯ−２）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、Ｂ及びＴリンパ球減衰剤（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても知られる）、Ｔ細胞膜蛋白質３（ＴＩＭ３）、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２Ａｒ）、及びＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制剤（ＶＩＳＴＡ蛋白質）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、又はＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。
いくつかの実施形態では、抗体は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）としても知られる）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）としても知られる）、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｇ（登録商標）としても知られる）、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）としても知られる）、及びデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ（商標）としても知られる）から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）としても知られる）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）としても知られる）、及びアテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｇ（登録商標）としても知られる）から選択される。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を低減する。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を低減する。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ−３などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ４などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲに対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲなどの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０Ｌの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０Ｌに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０Ｌに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０Ｌに対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０Ｌなどの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４とＯＸ４０Ｌとの間の相互作用を低減する。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−１などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ−２などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＥＡＣＡＭ１などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡに対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡなどの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒの阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒに対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒに対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒに対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ａ２Ａｒなどの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ蛋白質の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ蛋白質に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ蛋白質に対するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ蛋白質に対するヒト又はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ蛋白質などの１つ以上の免疫チェックポイント蛋白質の発現又は活性を低下させる。
バイオシミラー
本発明の免疫複合体は、市販のものと非常に類似しているか、若しくはバイオシミラーである抗体構築物、又は「イノベーター」抗体構築物を用いて、効果的になり得る。バイオシミラー免疫複合体は、市販の抗体と同様に効果的に骨髄活性化を誘発する可能性が高い。
ＤＡＲ比
本発明の免疫複合体は、望ましいＤＡＲ比を提供する。例えば、ＤＡＲ比は約１である。
アイソタイプ修飾
リツキシマブなどの抗体のＩｇＧ１ Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１ ＡＦ、ＩｇＧ１ ＮＱ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＡ２と交換され、次いで、本発明の免疫複合体に形成されると、免疫複合体の活性は、所望の用途のために調節され、多くの場合、改善され得る。
ヒトＩｇＧのおよそ３０％は、Ｆａｂ領域内でグリコシル化され、本発明の免疫複合体中の抗体は、非天然に生じるグリコシル化パターンを有する操作されたＦａｂ領域を含有することができる。例えば、ハイブリドーマは、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増大を可能にする特定の突然変異を用いて、アフコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂ、又は脱グリコシル化Ｆｃを分泌するように、遺伝子操作することができる。
免疫複合体を形成するための抗体は、アジュバント部分を抗体に共有結合させるために使用される試薬に対して改変された（例えば、増強された）反応性によって特徴付けられる、操作された（すなわち、非天然に生じる）システイン残基を含有することができる。特定の実施形態では、操作されたシステイン残基は、０．６〜１．０の範囲のチオール反応性値を有する。多くの場合、操作された抗体は、親抗体よりも反応性が高い。
一般に、操作された残基は、ジスルフィド架橋の一部ではない「遊離」システイン残基である。用語「チオール反応性値」は、遊離システインアミノ酸の反応性の定量的特徴付けである。本明細書で使用するとき、用語「チオール反応性値」は、チオール反応性試薬と反応し、最大値１に変換される、操作された抗体における遊離システインアミノ酸の割合を指す。例えば、マレイミドなどのチオール反応性試薬と１００％の収率で反応して修飾抗体を形成する操作された抗体中のシステイン残基は、１．０のチオール反応性値を有する。チオール反応性試薬と８０％の収率で反応する同じ又は異なる親抗体に操作された別のシステイン残基は、０．８のチオール反応性値を有する。特定のシステイン残基のチオール反応性値の決定は、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析法、液体クロマトグラフィ、オートラジオグラフィ、又は他の定量分析試験によって実施することができる。
操作されたシステイン残基は、抗体重鎖又は抗体軽鎖に位置し得る。特定の実施形態では、操作されたシステイン残基は、重鎖のＦｃ領域に位置する。例えば、抗体の軽鎖にある位置Ｌ−１５、Ｌ−４３、Ｌ−１１０、Ｌ−１４４、及びＬ−１６８にあるアミノ酸残基、又は抗体の重鎖にあるＨ−４０、Ｈ−８８、Ｈ−１１９、Ｈ−１２１、Ｈ−１２２、Ｈ−１７５、及びＨ−１７９にあるアミノ酸残基を、システイン残基で置換することができる。これらの位置のそれぞれの側の約５アミノ酸残基以内の位置、すなわち、Ｌ−１０〜Ｌ−２０、Ｌ−３８〜Ｌ−４８、Ｌ−１０５〜Ｌ−１１５、Ｌ−１３９〜Ｌ−１４９、Ｌ−１６３〜Ｌ−１７３、Ｈ−３５〜Ｈ−４５、Ｈ−８３〜Ｈ−９３、Ｈ−１１４〜Ｈ−１２７、及びＨ−１７０〜Ｈ−１８４と、並びにＨ−２６８〜Ｈ−２９１、Ｈ−３１９〜Ｈ−３４４、Ｈ−３７０〜Ｈ−３８０、及びＨ−３９５〜Ｈ−４０５から選択されるＦｃ領域内の位置も、システイン残基で置換することができ、免疫複合体を形成するための有用なシステイン操作された抗体を提供する。他の改変された抗体は、例えば、米国特許第７，８５５，２７５号、同第８，３０９，３００号、及び同第９，０００，１３０号に記載されているものが挙げられ、これらの文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
抗体に加えて、代替的な蛋白質足場を免疫複合体の一部として使用してもよい。用語「代替的な蛋白質足場」は、非免疫グロブリン由来蛋白質又はペプチドを指す。このような蛋白質及びペプチドは、一般に、工学的に修正可能であり、所与の抗原に対する単一の特異性、二重特異性、又は多重特異性を付与するように設計することができる。代替的な蛋白質足場の工学は、いくつかのアプローチを使用して実施することができる。既知の特異性の配列が足場の可変ループ上にグラフトされる場合、ループグラフトアプローチを使用することができる。配列ランダム化及び突然変異誘発を使用して、変異体のライブラリを開発することができ、これを、様々なディスプレイプラットフォーム（例えば、ファージディスプレイ）を使用してスクリーニングして、新規結合剤を同定することができる。部位特異的突然変異誘発を、類似のアプローチの一部として使用することもできる。代替的な蛋白質足場は、最小限の二次構造を有する小ペプチドから、フルサイズの抗体と同様のサイズの大きな蛋白質までの範囲の様々なサイズで存在する。足場の例としては、チンノットミニ蛋白質（ノッチンとしても知られる）、環状シスチンノットミニ蛋白質（シクロタイドとしても知られる）、アビマー（avimer）、アフィボディ、ヒトフィブロネクチンの第１０のＩＩＩ型ドメイン、ＤＡＲＰｉｎｓ（設計されたアンキリン反復）、及びアンティカリン（anticalins）（リポカリンとしても知られる）が挙げられるが、これらに限定されない。既知の特異性を有する天然に生じるリガンドは、所与の標的に対する新規特異性を付与するように操作することもできる。操作され得る天然に生じるリガンドの例としては、ＥＧＦリガンド及びＶＥＧＦリガンドが挙げられる。操作された蛋白質は、所望の結合戦略及び特異性に応じて、単量体蛋白質として、又は多量体として産生され得る。蛋白質工学戦略を使用して、Ｆｃドメインに対する代替蛋白質足場を融合させることができる。
抗体アジュバント複合体の調製
本発明の免疫複合体を形成するための反応は、アジュバント部分を抗体に共有結合させるのに十分な条件下で実施される。一般に、反応は、抗体中のアミノ酸側鎖がアジュバントリンカー化合物と反応するように、抗体をアジュバント−リンカー化合物と接触させることによって実施される。いくつかの実施形態では、アジュバント−リンカー化合物及び抗体は、免疫複合体を形成する際に、おおよそ等モル量で使用される。いくつかの実施形態では、免疫複合体を形成する際に過剰なアジュバント−リンカー化合物が使用される。例えば、免疫複合体を形成するための反応混合物は、抗体に対して約１．１〜約５０モル当量のアジュバント−リンカー化合物を含有することができる。
反応は、任意の好適な温度で実施することができる。一般に、反応は、約４℃〜約４０℃の温度で実施される。反応は、例えば、約２５℃又は約３７℃で実施することができる。反応は、任意の好適なｐＨで実施することができる。一般に、反応は、約４．５〜約１０のｐＨで実施される。反応は、例えば、約５〜約９のｐＨで実施することができる。いくつかの実施形態では、反応は、中性ｐＨ付近（すなわち、ｐＨ７付近）で実施される。いくつかの実施形態では、反応は、７．２〜７．５の範囲のｐＨで実施される。反応は、任意の好適な時間にわたって実施することができる。一般に、反応混合物は、好適な条件下、任意の場所で、約１分〜数時間、インキュベートされる。反応は、例えば、約１分間、又は約５分間、又は約１０分間、又は約３０分間、又は約１時間、又は約２時間、又は約４時間、又は約８時間、又は約１２時間、又は約２４時間、又は約４８時間、又は約７２時間実施することができる。免疫複合体中の抗体とアジュバント部分を導入するために使用される試薬との同一性に応じて、他の反応条件が、本発明の方法において使用されてもよい。
抗体アジュバント複合体を形成するための反応混合物は、生体複合体化反応に典型的に使用される種の更なる試薬を含有することができる。例えば、特定の実施形態では、反応混合物は、緩衝剤（例えば、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−モルホリノプロパン−１−スルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール（ＴＲＩＳ）、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及びホウ酸ナトリウム）、共溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、及び酢酸）、塩（例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、及びＭｎ２＋とＭｇ２＋との塩）、洗剤／界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤、例えば、Ｎ，Ｎ−ビス［３−（Ｄ−グルコンアミド）プロピル］コラミド、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル、ジメチルデシルホスフィンオキシド、分枝状オクチルフェノキシポリ（エチレンオキシ）エタノール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートなど；アニオン性界面活性剤、例えば、コール酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸ナトリウムなど；カチオン性界面活性剤、例えば、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、トリメチル（テトラデシル）アンモニウムブロミドなど；又は双性イオン性界面活性剤、例えば、アミドスルホベタイン、３−［（３−コラミドプロピル）ジメチル−アンモニオ］−１−プロパンスルホネートなど；キレート剤（例えば、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、２−（｛２−［ビス（カルボキシメチル）アミノ］エチル｝（カルボキシメチル）アミノ）酢酸（ＥＤＴＡ）、及び１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ））、及び還元剤（例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ））を含むことができる。緩衝剤、共溶媒、塩、洗剤／界面活性剤、キレート剤、及び還元剤は、任意の好適な濃度で使用することができ、これは当業者によって容易に決定されることができる。一般に、緩衝剤、共溶媒、塩、洗剤／界面活性剤、キレート剤、及び還元剤は、約１μＭ〜約１Ｍの範囲の濃度で反応混合物中に含まれる。例えば、緩衝剤、共溶媒、塩、洗剤／界面活性剤、キレート剤、キレート剤、又は還元剤は、約１μＭ、又は約１０μＭ、又は約１００μＭ、又は約１ｍＭ、又は約１０ｍＭ、又は約２５ｍＭ、又は約５０ｍＭ、又は約１００ｍＭ、又は約２５０ｍＭ、又は約５００ｍＭ、又は約１Ｍ．の濃度で反応混合物に含まれてもよい。
免疫複合体の製剤及び投与
関連する一態様では、本発明は、上記のような複数の免疫複合体を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均の数は、約１〜約１０の範囲である。免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均の数は、例えば、約１〜約１０、又は約１〜約６、又は約１〜約４の範囲であり得る。免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均の数は、約０．８、１、１．２、１．４、１．６、１．８、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、又は４．２であり得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均の数は、約４である。いくつかの実施形態では、免疫複合体当たりのアジュバント部分の平均数は、約２である。場合によっては、抗体は、単一のアジュバント部分に共有結合する。いくつかの場合において、抗体は、２つ以上のアジュバント部分（例えば、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上のアジュバント部分）に共有結合する。場合によっては、抗体は、１〜１０個のアジュバント部分（例えば、１〜８個、１〜５個、１〜３個、２〜１０個、２〜８個、２〜５個、２〜３個、又は３〜８個のアジュバント部分）に共有結合する。場合によっては、抗体は、２〜１０個のアジュバント部分（例えば、２〜８個、２〜５個、２〜３個、又は３〜１０個、又は３〜８個のアジュバント部分）に共有結合する。抗体が２つ以上のアジュバント部分に共有結合している場合には、結合したアジュバント部分は同じであっても異なっていてもよい。例えば、場合によっては、アジュバント部分のうちの２つ以上は同じであってもよい（例えば、同じアジュバント部分の２つの異なる分子は、抗体上の異なる部位で抗体にそれぞれ結合され得る）。いくつかの場合において、抗体は、２つ以上の異なるアジュバント部分（例えば、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上の異なるアジュバント部分）に共有結合する。例えば、本発明の免疫複合体を生成するとき、１つ以上の抗体中のアミノ酸側鎖がアジュバント−リンカー化合物と反応するように、１つ以上の抗体は、２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上）の異なるアジュバント−リンカー化合物を含む混合物と接触させることができ、その結果、２つ以上の異なるアジュバント部分にそれぞれ共有結合している１つ以上の免疫複合体をもたらす。
部位特異的抗体複合体化により、抗体中のリジン残基への結合から生じる不均質な複合体化生成物と比較して、アジュバントの抗体上での正確な配置、及び均質なＤＡＲが可能になる。部位特異的免疫複合体は、抗体の様々な修飾によって生成され得る。部位特異的複合体化のための方法としては、以下の方法が挙げられるが、本明細書に記載される方法に限定されるものではない。部位特異的複合体化のための１つの方法は、配列の組み込みを伴い、これは次に、酵素により認識されて、化学的修飾をもたらす。例えば、酵素ＦＧＥは、配列Ｃｙｓ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ａｒｇを認識する。哺乳類培養物中のＦＧＥと修飾された抗体との共発現は、操作された部位（複数可）においてアルデヒドタグを含有する抗体を生成する。部位特異的複合体化を可能にする化学反応性基への変換のための天然に生じる配列又は残基を認識する他の酵素を使用してもよい。細菌トランスグルタミナーゼ（Bacterial transglutaminase、ＢＴＧ）は、グルタミン残基と一級アミンとの間の結合の形成を触媒することができ、細菌酵素ソルターゼＡは、認識モチーフを介して、ペプチド転移反応を触媒することができる。非天然アミノ酸は、抗体配列に組み込まれてもよく、これは次に反応して、部位特異的複合体を生成し得る。アミノ酸セレノシステインなどの天然に生じる残基を抗体に組み込み、続いて、部位特異的複合体化のためにマレイミド及びヨードアセトアミドを含むがこれらに限定されない適切な反応基と反応させることができる。別の方法は、抗体構築物の重鎖又は軽鎖に付加される操作されたシステイン残基の組み込みである。重鎖及び／又は軽鎖をコードするベクターは、システイン残基についてのコドン配列を組み込むように修飾される。複合体化は、最初に抗体を還元し、次いで再酸化して、抗体の天然のジスルフィド結合を再生成し、反応性チオール（複数可）の除去をもたらすことによって実施される。アジュバント−リンカーと反応すると、得られた生成物は、抗体中に操作されたシステイン残基の数によって定義されるＤＡＲを有する免疫複合体の均質な集団を含有する。例えば、位置２０５における軽鎖のバリンからシステインへの組み込み（Ｖ２０５Ｃ変異）は、定義された部位（Ｖ２０５Ｃ）で複合体化したアジュバントを有する生成物をもたらす。
いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を更に含む。例えば、本発明の免疫複合体は、静脈内（intravenous、ＩＶ）投与又は臓器の体腔若しくは内腔への投与などの非経口投与用に製剤化することができる。あるいは、免疫複合体は、腫瘍内に注入することができる。注射用製剤は、一般に、薬学的に許容される担体中に溶解した免疫複合体の溶液を含む。使用することができる許容可能なビヒクル及び溶媒の中としては、水及びＲｉｎｇｅｒ溶液、等張塩化ナトリウムが挙げられる。加えて、滅菌凝固油は、従来、溶媒又は懸濁媒体として使用され得る。この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無刺激凝固油を用いることができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸も同様に、注射剤の調製に使用することができる。これらの溶液は無菌であり、一般に望ましくない物質を含まない。これらの製剤は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができる。製剤は、必要に応じて、おおよその生理学的条件に近づけるために、薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整及び緩衝剤、毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有することができる。これらの製剤中の免疫複合体の濃度は、広く異なり得るものであり、選択される特定の投与モード及び患者の必要性に応じて、主として流体体積、粘度、体重などに基づいて選択される。特定の実施形態では、注射用の溶液製剤中の免疫複合体の濃度は、約０．１重量％〜約１０重量％の範囲である。
別の態様では、本発明は癌を治療するための方法を提供する。本方法は、治療有効量の免疫複合体（例えば、上記の組成物として）を、それを必要とする対象に投与することを含む。例えば、方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するように、免疫複合体を投与することを含み得る。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約１００μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、又は５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量はまた、特定の免疫複合体、並びに治療される癌の種類及び重症度に応じて、これらの範囲外であることもできる。投与頻度は、１週間当たり単一投与量から複数回投与量までの範囲であるか、又はより頻繁であり得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、１ヶ月当たり約１回〜１週間当たり約５回投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週１回投与される。
本発明のいくつかの実施形態は、癌が頭部及び頸部癌である、上記の癌を治療するための方法を提供する。頭部及び頸部癌（並びに頭部及び頸部扁平上皮細胞癌）は、口腔、咽頭及び喉頭、唾液腺、副鼻腔、及び鼻腔、並びに頸部上部のリンパ節の扁平上皮細胞癌を特徴とする様々な癌を指す。頭部及び頸部癌は、米国における全ての癌の約３〜５パーセントを占める。これらの癌は、男性及び５０歳以上の人においてより一般的である。タバコ（無煙タバコを含む）及びアルコールの使用は、頭部及び頸部癌、特に、口腔、中咽頭、下咽頭、及び喉頭の癌について、最も重要な危険因子である。頭部及び頸部癌の８５％は、タバコの使用に関連している。本発明の方法では、免疫複合体を使用して多数の悪性細胞を標的化することができる。例えば、免疫複合体を使用して、唇、口腔、咽頭、喉頭、鼻腔、又は副鼻腔の扁平上皮細胞を標的とすることができる。免疫複合体を使用して、粘膜上皮性癌腫細胞、アデノイド嚢胞癌腫細胞、腺癌細胞、小細胞未分化癌細胞、感覚神経芽腫細胞、ホジキンリンパ腫細胞、及び非ホジキンリンパ腫細胞を標的とすることができる。いくつかの実施形態では、頭部及び頸部癌を治療するための方法は、ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、マツズマブ、及びズツムマブ）、ＰＤ−１（例えば、ペムブロリズマブ）、及び／又はＭＵＣ１を結合させることができる抗体を含有する免疫複合体を投与することを含む。
本発明のいくつかの実施形態は、癌が乳癌である、上記の癌を治療するための方法を提供する。乳癌は乳房の異なる領域に由来してもよく、多くの異なる種類の乳癌が特徴付けられている。例えば、本発明の免疫複合体は、その場での腺管癌腫、侵襲性腺癌腫（例えば、管状癌腫、髄様癌腫、粘液性癌腫、乳頭癌、又は乳房の篩状癌腫）、その場での小葉癌、侵襲性小葉癌、炎症性乳癌、及び他の形態の乳癌を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、乳癌を治療するための方法は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ、マルゲツキシマブ）、糖蛋白質ＮＭＢ（例えば、ガレムバツムマブ）、及び／又はＭＵＣ１を結合させることができる抗体を含有する免疫複合体を投与することを含む。
本開示の非限定的態様の例
本明細書に記載される本主題の実施形態を含む態様は、１つ以上の他の態様又は実施形態と共に、単独で又は組み合わせて、有益であり得る。前述の説明を限定することなく、１〜２１の番号付けされた本開示の特定の非限定的な態様が以下に提供される。本開示を読むことにより、当業者には明らかとなるように、個々に番号付けされた各態様は、個々に番号付けされた態様に先行する又は後続する任意のものと組み合わせることができる。これは、そのような全ての態様の組み合わせのための支持を提供することを意図するものであり、以下に明示的に提供される態様の組み合わせに限定されない。
１．（ａ）（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体構築物と、（ｂ）アジュバント部分と、（ｃ）エチレングリコール基又はグリシン残基を含むリンカーと、を含む免疫複合体であって、各アジュバント部分が、リンカーを介して抗体構築物に共有結合している、免疫複合体。
２．抗体構築物が、標的結合ドメインを更に含む、態様１に記載の免疫複合体。
３．抗体構築物が抗体である、態様１に記載の免疫複合体。
４．抗原結合ドメインが癌細胞の抗原に結合する、態様１〜３のいずれか１つに記載の免疫複合体。
５．抗原結合ドメインが、ＣＣＲ８、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、ＰＤＧＦＲａ、及びｇｐ７５からなる群から選択される抗原に結合する、態様１〜４のいずれか１つに記載の免疫複合体。
６．抗体がＩｇＧ１抗体である、態様３〜５のいずれか１つに記載の免疫複合体。
７．免疫複合体が、式ＩＩ
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
はＺに対する結合点を表し、Ａｄｊは、アジュバントであり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、Ｚは、エチレングリコール基又はグリシン残基を有する二価の連結部分である）による構造を有する、態様３〜６のいずれか１つの記載の免疫複合体。
８．Ｚが、ポリ（エチレングリコール）基を含む、態様７に記載の免疫複合体。
９．Ｚがグリシン残基を含む、態様７又は８に記載の免疫複合体。
１０．Ｚが二価シクロヘキシレン基を更に含む、態様７〜９のいずれか１つに記載の免疫複合体。
１１．免疫複合体が、式ＩＩＩａ：
Figure 2020511501
（式中、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含む）による構造を有する、態様１０に記載の免疫複合体。
１２．免疫複合体が、式ＩＩＩｂ：
Figure 2020511501
（式中、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含む）による構造を有する、態様１０に記載の免疫複合体。
１３．免疫複合体が、式ＩＶ：
Figure 2020511501
（式中、
Figure 2020511501
は、抗体のリジン残基を表す
Figure 2020511501
残基を有する抗体であり、
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表し、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｇ２は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、下付き文字ｒは１〜１０の整数である）による構造を有する、態様７〜９のいずれか１つに記載の免疫複合体、又はその薬学的に許容される塩。
１４．Ｌが、以下：
Figure 2020511501
（式中、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、破線
Figure 2020511501
は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
Figure 2020511501
は、Ｇ２に対する結合点を表す）から選択される、態様１３に記載の免疫複合体。
１５．免疫複合体が、式ＩＶａ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、態様１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
１６．免疫複合体が、式ＩＶｂ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、態様１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
１７．免疫複合体が、式ＩＶｃ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、態様１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
１８．免疫複合体が、式ＩＶｄ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、態様１７に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
１９．免疫複合体が、式ＩＶｅ：
Figure 2020511501
（式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊは、アジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、態様１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
２０．態様１〜１９のいずれか１つに記載の複数の免疫複合体を含む組成物。
２１．治療有効量の態様１〜１９のいずれか１つに記載の免疫複合体又は態様２０に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療するための方法。
実施例
実施例１：免疫複合体Ｉ〜ＩＩＩの調製
以下のスキーム１に示されるように、イミダゾキノリン１（１−（４−アミノブチル）−２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）を２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（（２−（（２−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−２−オキソエチル）アミノ）−２−オキソエチル）カルバモイル）シクロヘキサン−１−カルボキシレートと反応させて、ＮＨＳ−Ｇｌｙ２−ＣＣ−１を形成する。スキーム２に示されるように、イミダゾキノリン１は、ＮＨＳ−ＥＧ−ＣＣ−１に類似の様式で変換される。スキーム３に示されるように、イミダゾキノリン１及びアルデヒド２を水素化ホウ素ナトリウムの存在下で反応させ、得られた中間体をＮ−ヒドロキシスクシンイミドでエステル化して、ＮＨＳ−ＥＧ−１を形成する。
Figure 2020511501
抗体を、１〜５ｍｇ／ｍＬで、リン酸緩衝生理食塩水（phosphate buffered saline、ＰＢＳ）中に再懸濁させ、１０倍モル過剰のＮＨＳ−Ｇｌｙ２−ＣＣ−１、ＮＨＳ−ＥＧ−ＣＣ−１、又はＮＨＳ−ＥＧ−１と室温で３０分間反応させる。得られた免疫複合体を、製造業者の指示書（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１００メンブレン付きの平衡化されたＡｍｉｃｏｎウルトラ遠心式フィルターユニットを用いて、ＰＢＳ中で３回洗浄して、過剰な試薬及び副産物から精製する。
平均アジュバント対抗体比は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦにより決定される。試料を脱塩し、Ｚｅｂａスピン脱塩カラム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、緩衝液を脱イオン水に交換する。マトリックス（シナピン酸）を最初にＭＡＬＤＩ試料標的プレート上にスポットし、乾燥させる。次に、試料を、ウシ血清アルブミン（bovine serum albumin、ＢＳＡ）標準（０．２５〜１ｐＭのＢＳＡ）を用いて、又は用いることなく、１：１比で混合し、マトリックス試料をプレート上にスポットする。マトリックス及び試料層の両方が乾燥すると、ＡＢ Ｓｃｉｅｘ ＴＯＦ／ＴＯＦ ５８００で試料を分析する。負イオン化を伴う高質量検出器（ＣｏｖａｌＸ）は、完全にインタクトなＩｇＧ抗体（約１５０，０００ｋＤａ）の範囲の蛋白質サイズでの感受性及び分解能の向上を可能にする。
ヒト単球は、免疫複合体を用いて一晩刺激した後、ＤＣ分化を受けることが観察されるが、既知の刺激剤（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４）を用いたＤＣ分化プロトコルは、より長い期間を必要とする。
実施例２：ペンタフルオロフェニル（「ＰＦＰ」）エステルを用いた免疫複合体ＩＶの調製
Figure 2020511501
この実施例は、ＰＦＰエステル法を用いた免疫複合体の合成についての手引きを提供する。アジュバントのエステル修飾、及び修飾されたアジュバントの抗体への複合体化を、スキーム４の上部に示す。シクロヘキサントランス−１，４−ジカルボキシレート（１ｇ）を、１０ｍＬのジメチルホルムアミド（dimethylformamide、「ＤＭＦ」）中に溶解し、次いで、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート）（「ＨＡＴＵ」）（１ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、１ｍＬのＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン（「ＤＩＰＥＡ」）を添加した。化合物１（３１１ｍｇ）を添加し、混合物を２０℃で一晩撹拌した。反応混合物を５０ｍＬのジクロロメタン（dichloromethane、「ＤＣＭ」）で希釈し、２０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌで洗浄した。ＤＣＭ層を蒸発乾固させ、生成物をシリカゲル上で、１％の酢酸を含有するＤＣＭ中０〜１０％のＭｅＯＨで溶出して、精製した。純粋な画分を濃縮して、２２０ｍｇの精製された酸３を得た。化合物３（１００ｍｇ）をＴＨＦ中に溶解し、１００ｍｇのＨＡＴＵを添加し、続いて２００μＬのＤＩＰＥＡを添加した。２当量のアミノ−ＰＥＧ２−ｔｅｒｔブチル−カルボキシレートを添加し、２０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮乾固させ、ジオキサン中１０ミリリットルの４Ｎ ＨＣｌを添加した。混合物を濃縮乾固させ、粗生成物４を分取ＨＰＬＣにより精製して、４０ｍｇの化合物４を得た。
化合物４を、以下に記載されるように、ＰＦＰエステル５に変換した。化合物４（３５ｍｇ）を５ｍＬのＴＨＦ中の５０ｍｇのＰＦＰに添加し、５ｍＬのＤＭＦを添加し、続いて２０ｍｇのＤＣＣを添加した。ＤＭＡＰ（２〜３ｍｇ）を添加し、溶液を２０℃で一晩撹拌した。反応物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィ（０〜１０％のＭｅＯＨで溶出）により精製して、１：２のアセトニトリル水からの凍結乾燥後に、１７ｍｇのＰＦＰエステル５を得た。
ＰＦＰエステル５（ＩｇＧに対して６モル当量）を２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に添加し、３７℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＩＶをＰＢＳ（ｐＨ７．２）に緩衝液交換して、過剰な小分子量試薬を除去し、ナノドロップ上で濃度を測定した。収率は、１５ｍｇの免疫複合体ＩＶ（収率７５％）であった。生成物を４℃で貯蔵した。ＬＣ／ＭＳ分析によって、２．２のＤＡＲを測定した。望ましいＤＡＲ及び高収率の他に、生成物はまた、ＳＥＣ分析によって測定される不純物もほとんど有さなかった。
実施例３：ＮＨＳエステルを用いた免疫複合体Ｖの調製
Figure 2020511501
アジュバントのエステル修飾、及び修飾されたアジュバントの抗体への複合体化を、スキーム５の上部に示す。化合物１（１５０ｍｇ）を２０ｍＬのテトラヒドロフルラン（tetrahydrofluran、「ＴＨＦ」）中に溶解し、１０ｍＬの水性飽和重炭酸ナトリウムを添加した。次いで、５０ｍｇの無水コハク酸を一度に添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。２０ミリリットルの１ＮのＨＣｌをゆっくり添加し、混合物を２×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を蒸発乾固させた。粗生成物（６）を、４グラムのシリカゲルカラム上で、０〜１５％のＭｅＯＨ（１％酢酸）で１５分間溶出して、精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発させて、１９０ｍｇの純粋な化合物６を得た。
化合物６（１５０ｍｇ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、１当量のＨＡＴＵを加え、続いて２当量のＤＩＰＥＡを加えた。１．５当量のグリシン−ＯｔＢｕを添加し、一晩撹拌した。ＤＭＦを蒸発させ、残留物をジオキサン中５ｍＬの１ＮのＨＣｌで３０分間処理した。溶媒を蒸発させ、粗化合物７を、０〜１０％のＭｅＯＨで１０分間溶出した４グラムのシリカゲルカラム上でフラッシュ精製した。純粋な画分の蒸発により、１１０ｍｇの化合物７が得られ、純粋な材料をＤＭＦ中に溶解し、上記プロセスを繰り返して、６０ｍｇの純粋な化合物８を得た。
純粋な化合物８（３０ｍｇ）を５ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、１．５当量のＮＨＳを添加し、続いて５ｍＬのＴＨＦを添加した。ＤＣＣ（１．５当量）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗ＮＨＳエステルを、ＤＣＭ中０〜１０％のＭｅＯＨで１０分間溶出したシリカゲル上でフラッシュ精製した。純粋画分（ＴＬＣにより決定）を合わせ、蒸発させて、アセトニトリル水から凍結乾燥した後、１ｍｇの純粋なＮＨＳ化合物８を得た。
純粋なＮＨＳエステルをＤＭＳＯ中に溶解させて、２０ｍＭの溶液を作成し、６当量を２ｍＬのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。複合体化反応物を室温で一晩インキュベートし、緩衝液を新しいＰＢＳに交換して、過剰なアジュバントを除去した。精製した免疫複合体Ｖを滅菌濾過し、４℃で保存した。収率は約１６ｍｇであった。高収率を有することに加え、ＬＣ／ＭＳ分析は、高レベルの純度、低レベルの凝集、及び望ましいＤＡＲ比を示した。
実施例４：ＴＦＰエステルを用いた免疫複合体ＶＩの調製
Figure 2020511501
この実施例は、ＴＦＰエステル法を使用する、異なるリンカーとの免疫複合体の合成についての手引きを提供する。アジュバントのエステル修飾、及び修飾されたアジュバントの抗体への複合体化を、スキーム６の上部に示す。化合物１（３１１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、０．３ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。ＮＨＳ−ＰＥＧ５−酸（１．２当量）を５ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、化合物１に一度で添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで、濃縮乾固させた。粗残渣を、１％酢酸を含むＤＣＭ中の０〜１０％のＭｅＯＨで１０分間溶出する４ｇのカラム上のシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、純粋画分の濃縮後に、２６０ｍｇの化合物９（収率５７％）を得た。
化合物９（５０ｍｇ）を１０ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、１．５当量のＴＦＰを添加し、続いて１．２当量のＤＣＣ及び５ｍｇのＤＭＡＰを添加した。反応物を一晩撹拌し、濃縮乾固させ、ＤＣＭ中の０〜１０％のＭｅＯＨで溶出したシリカゲル４グラムのカラム上で精製し、１：２のアセトニトリル水から凍結乾燥した後に、３５ｍｇの純粋な化合物１０を得た。
ＴＦＰエステル（１０）をＤＭＳＯ中に溶解させて、２０ｍＭの原液を作製し、ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬの、２０ｍｇのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）に添加した。複合体化反応を室温で一晩進行させた。得られた免疫複合体ＶＩをｐＨ７．４でＰＢＳに緩衝液交換した（ＧＥ、ＰＤ１０脱塩カラム）。精製した免疫複合体を、２μｍのシリンジフィルターを用いて滅菌濾過し、４℃で保存した。ＬＣ／ＭＳ分析により、プロセスは、抗体当たり２．９アジュバントのＤＡＲを提供したことが確認された。ＳＥＣ分析は、最小限の量の凝集体（すなわち、２％未満）を示した。
実施例５：ＴＦＰエステルを用いた免疫複合体ＶＩＩＩの調製
Figure 2020511501
この実施例は、ＴＦＰ法を使用する、ＰＥＧ三級アミンリンカーを含有する免疫複合体の合成についての手引きを提供する。化合物１１（２００ｍｇ）をメタノール（２０ｍＬ）中に溶解し、３当量のｔｅｒｔ−ブチル３−（２−（３−オキソプロポキシ）エトキシ）プロパノエートを添加し、続いて１．１当量のＮａＣＮＢＨ４を添加した。混合物を室温で３時間撹拌し、濃縮乾固させた。トリフルオロ酢酸（Trifluoroacetic acid、ＴＦＡ、１０ｍＬ）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。ＴＦＡを真空下で蒸発させ、粗生成物を、分取ＨＰＬＣによってＣ−１８カラム上で精製した。生成物を、水（０．１％のＴＦＡ）中１０〜９０％のアセトニトリルの勾配で２０分間溶出させ、組み合わせた純粋画分（ＬＣ／ＭＳにより確認された）の凍結乾燥後に、８５ｍｇの精製された酸１２を得た。
化合物１２（８０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）中に溶解し、２当量のＴＦＰを添加し、続いて１．２当量のＥＤＣＩを添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。粗ＴＦＰエステル生成物１３を、０〜１０％のイソプロパノールで１０分間溶出する４グラムのシリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィにより精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を３０％のアセトニトリル水から凍結乾燥して、４５ｍｇの化合物１３の精製されたＴＦＰエステルをベージュ色の固体として得た。分子量及び純度は、ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ＝６４７．７）によって確認した。
抗体への複合体化：化合物１３のＴＦＰエステルを無水ＤＭＳＯ中に溶解させて、２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）をＩｇＧ１抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。複合体化反応を４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＶＩＩＩをＰＢＳ（ｐＨ７．２）に緩衝液交換して、過剰な小分子量試薬を除去した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００分光光度計で２８０ｎｍにて抗体を測定することにより、最終濃度を決定した。収率は、１５ｍｇの免疫複合体ＶＩＩＩ（７５％）であり、これを使用時まで４℃で保存した。
ＳＥＣ分析によって検出されたように、最小限の凝集体（１％未満）が見られた。ＬＣ／ＭＳ分析によって測定されるように、生成物は、２．２のＤＡＲ比を有した。精製した免疫複合体ＶＩＩＩを０．２μＭの滅菌フィルタを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例６：ＴＦＰエステルを用いた免疫複合体ＩＸの調製
Figure 2020511501
この実施例は、ＴＦＰエステル法を使用する、異なるリンカーとの免疫複合体の合成についての手引きを提供する。化合物１（１５０ｍｇ）を２０ｍＬのＴＨＦ中に溶解し、１０ｍＬの水性飽和重炭酸ナトリウムを添加した。無水コハク酸（５０ｍｇ）を一度に添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。２０ｍＬの１ＮのＨＣｌをゆっくり添加し、混合物を２×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、合わせた有機抽出物を蒸発乾固させた。粗生成物１４を、０〜１５％のＭｅＯＨ（１％酢酸）で１５分間溶出した４グラムのシリカゲルカラム上で精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発させて、１８０ｍｇの純粋な化合物１４を得た。
１５０ｍｇの化合物１４をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、１当量のＨＡＴＵを添加し、続いて２当量のＤＩＰＥＡを添加した。１．５当量のグリシン−ＯｔＢｕを添加し、一晩撹拌した。ＤＭＦを蒸発させ、残留物をジオキサン中５ｍＬの１ＮのＨＣｌで３０分間攪拌しながら処理した。溶媒を蒸発させ、粗化合物を、４グラムのシリカゲルカラム上で、０〜１０％のイソプロパノールで１５分間溶出して、フラッシュ精製した。純粋な画分の蒸発により、１１０ｍｇの純粋物１５が得られた。
化合物１５（５０ｍｇ）を１０ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、１．５当量のＴＦＰを添加し、続いて１．２当量のＤＣＣ及び２ｍｇのＤＭＡＰを添加した。反応物を一晩撹拌し、濃縮乾固させ、シリカゲル（４グラムのカラム）上で、ＤＣＭ中の０〜１０％のＩＰＡで溶出して、精製し、１：３のアセトニトリル水から凍結乾燥した後に、３２ｍｇの純粋なＴＦＰエステル、化合物１６を得た。
抗体への複合体化：ＴＦＰエステル、化合物１６を無水ＤＭＳＯ中に溶解させて、２０ｍＭの原液を作成し、５モル当量（抗体に対して）をＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬの２０ｍｇの抗体に添加した。複合体化反応を４℃で６時間インキュベートした。得られた免疫複合体ＩＸをＰＢＳ（ｐＨ７．４）に緩衝液交換して、過剰な小分子量不純物を除去した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００分光光度計で２８０ｎｍにて吸光度を測定することにより、最終蛋白質濃度を決定した。収率は１５ｍｇ（回収した蛋白質に基づいて７５％）であった。ＳＥＣ分析は、１％未満の最小限の凝集体を検出し、ＤＡＲは、ＬＣ／ＭＳ分析により、抗体当たり２．８アジュバントであると決定された。精製した免疫複合体を０．２μＭの滅菌フィルタを通して濾過し、必要時まで−２０℃で保存した。
実施例７：ＴＦＰエステル免疫複合体Ｘの調製
Figure 2020511501
この実施例は、ＴＦＰ法を使用する、異なるリンカーとの免疫複合体の合成についての手引きを提供する。化合物１（１５５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、０．２ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。別個の容器中に、１．２当量のＰＥＧ２−ジカルボキシレートモノメチルエステルを５ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、２当量のＤＩＰＥＡを添加し、続いてＨＡＴＵ（１．２当量）を添加した。混合物を１に添加し、室温で１時間撹拌した。反応物を真空下で濃縮乾固させ、残留物をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解した。等量の水を加え、続いて２ｍＬの１Ｍ ＬｉＯＨ水溶液を添加した。混合物を一晩撹拌した後、１０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを添加した。酸性化した混合物をジクロロメタンで２回抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮乾固させ、シリカゲルクロマトグラフィにより精製した。生成物を０〜１０％のメタノールで１０分間溶出させた。純粋な画分を合わせ、濃縮して、１１０ｍｇの純粋な化合物１７を淡黄色固体として得た。
化合物１７（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）中に溶解し、２当量のＴＦＰを添加し、続いて１．５当量のＥＤＣＩを添加した。反応物を周囲温度で一晩撹拌し、反応物を濃縮乾固させた。粗ＴＦＰエステル１８を、４グラムのシリカゲルカラム上で、０〜１０％のイソプロパノールで１０分間溶出して、フラッシュクロマトグラフィにより精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を３０％のアセトニトリル水から凍結乾燥して、４１ｍｇの精製されたＴＦＰエステル１８を白色の固体として得た。分子量及び純度をＬＣ／ＭＳにより確認した。
抗体への複合体化：ＴＦＰエステル１８を無水ＤＭＳＯ中に溶解させて、２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）を２０ｍＬのＩｇＧ抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）（ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。複合体化反応を４℃で一晩インキュベートした。得られた免疫複合体ＸをＰＢＳ（ｐＨ７．２）に緩衝液交換して、過剰な小分子量不純物を除去した。Ｔｈｅｒｍｏ Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００分光光度計で２８０ｎｍにて吸光度を測定することにより、最終濃度を決定した。収率は、回収した蛋白質に基づいて、１６ｍｇの複合体化した免疫複合体、又は７０％であった。最小限の凝集体（１％未満）をＳＥＣ分析により検出し、２．３のＤＡＲをＬＣ／ＭＳ分析により測定した。精製した免疫複合体を０．２μＭの滅菌フィルタを通して濾過し、−２０℃で保存した。
実施例８：ＴＦＰエステルを用いた免疫複合体ＸＩ及びＸＩＩの調製
Figure 2020511501
この実施例は、ＴＦＰエステル法を使用する、異なるリンカーとの免疫複合体の合成についての手引きを提供する。アジュバントと抗体との間の距離を延長するために、化合物１９（スキーム１０）を、２個又は８個のＰＥＧ単位を含有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーに連結した。ＰＥＧリンカー延長部の連結は、リンカー連結及びＴＦＰ活性化について以前記載されたプロトコルを使用して実施した。簡潔に述べると、１００ｍｇの化合物１９を１０ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、０．２ｍＬのＤＩＰＥＡを添加し、続いてＨＡＴＵ（１．２当量）を添加した。１時間後、適切なアミノＰＥＧリンカー（ｎ＝２又は８）を添加し、室温で更に２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮乾固させ、残渣を、水中１０〜９０％のアセトニトリルで３０分間溶出したＣ−１８カラム上の分取ＨＰＬＣにより精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥して、６５ｍｇ及び４５ｍｇの中間体２０又は２１を透明なガラス状物質として得た。
化合物２０及び２１を、以前記載されたプロトコルを用いて、対応するＴＦＰエステル２２及び２３に変換した。簡潔に述べると、遊離酸２０又は２１（５０ｍｇ）をジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（５ｍＬ、１：１）中に溶解し、２当量のＴＦＰを添加し、続いて１．５当量のＥＤＣｌを添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、濃縮乾固させ、粗ＴＦＰエステル２２及び２３を得た。粗ＴＦＰエステルをシリカゲル上で、０〜１０％イソプロパノールで１０分間溶出して、フラッシュクロマトグラフィにより精製した。純粋な画分を濃縮し、残渣を水中３０％のアセトニトリル水から凍結乾燥して、精製されたＴＦＰエステル２２及び２３を透明な固体として得た。純化合物の分子量及び純度は、ＬＣ／ＭＳにより確認した。
抗体への複合体化：ＴＦＰエステル２２及び２３を、以前記載されたプロトコルを用いて、ＩｇＧ１抗体（具体的には、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）に複合体化させた。ＴＦＰエステルを無水ＤＭＳＯ中に溶解させて、２０ｍＭの原液を作成し、８モル当量（抗体に対して）をＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬの２０ｍｇのＩｇＧ抗体に添加した。複合体化反応を４℃で１２時間インキュベートした。得られた免疫複合体ＸＩ及びＸＩＩをＰＢＳ（ｐＨ７．４）に緩衝液交換して、過剰な小分子量不純物を除去した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００分光光度計で２８０ｎｍにて吸光度を測定することにより、最終蛋白質濃度を決定した。収率は、回収した蛋白質に基づいて、７５％であった。ＳＥＣ分析は、最小限の凝集体が存在したことを検出し、抗体当たり１．０及び１．７アジュバントのＤＡＲが、ＬＣ／ＭＳ分析により決定された。精製した免疫複合体を０．２μＭの滅菌フィルタを通して濾過し、必要時まで−２０℃で保存した。
本明細書に引用される刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、それぞれの参照文献が参照により組み込まれることが個々にかつ具体的に示され、その全体が本明細書に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明を説明する文脈における（特に、以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」、並びに「少なくとも１つの」及び類似の指示対象の使用は、本明細書に別途記載のない限り、又は文脈と明確に矛盾しない限り、単数及び複数の両方を網羅するものと解釈されるべきである。１つ以上の項目のリストが後に続く用語「少なくとも１つ」（例えば、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」）の使用は、本明細書に別途記載のない限り、又は文脈と明確に矛盾しない限り、列挙された項目（Ａ若しくはＢ）から選択される１つの項目、又は列挙された項目（Ａ及びＢ）のうちの２つ以上の任意の組み合わせを意味すると解釈されるべきである。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」、及び「含有する（containing）」は、別途記載のない限り、オープンエンド用語（すなわち、「含むが、限定するものではない」ことを意味する）と解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書に別途記載のない限り、単に、範囲内に入る各別個の値に個別に言及する簡略化方法としての役割を果たすことを意図するものであり、それぞれの別個の値は、本明細書において個別に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に別途記載のない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実行することができる。本明細書で提供される任意の及び全ての実施例、又は例示的な文言（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をより良好に明確化することを意図するものであり、別途特許請求されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の文言は、本発明の実施に不可欠な未請求のいかなる要素を示すものとして解釈されるべきではない。
本発明を実施するための発明者に既知の最良の様式を含む、本発明の好ましい実施形態が、本明細書に記載される。これらの好ましい実施形態の変形例は、前述の説明を読むと、当業者には明らかとなり得る。本発明者らは、当業者が適宜このような変形例を採用することを期待しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されるものとは違う方法で本発明が実施されることを意図している。したがって、本発明は、適用可能な法則によって認可されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に記載された主題の全ての修飾物及び均等物を含む。更に、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、上記の要素のその全ての可能な変形例の任意の組み合わせが、本発明に包含される。

Claims (21)

  1. （ａ）（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体構築物と、
    （ｂ）アジュバント部分と、
    （ｃ）エチレングリコール基又はグリシン残基を含むリンカーと、を含む免疫複合体であって、
    各アジュバント部分が、前記リンカーを介して前記抗体構築物に共有結合している、免疫複合体。
  2. 前記抗体構築物が、標的結合ドメインを更に含む、請求項１に記載の免疫複合体。
  3. 前記抗体構築物が抗体である、請求項１に記載の免疫複合体。
  4. 前記抗原結合ドメインが、癌細胞の抗原に結合する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  5. 前記抗原結合ドメインが、ＣＣＲ８、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、ＰＤＧＦＲａ、及びｇｐ７５からなる群から選択される抗原に結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  6. 前記抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  7. 前記免疫複合体が、式ＩＩ：
    Figure 2020511501
    （式中、
    Figure 2020511501
    は、抗体のリジン残基を表す
    Figure 2020511501
    残基を有する前記抗体であり、式中、
    Figure 2020511501
    は、Ｚに対する結合点を表し、
    Ａｄｊはアジュバントであり、
    下付き文字ｒは、１〜１０の整数であり、
    Ｚは、エチレングリコール基又はグリシン残基を有する二価連結部分である）による構造を有する、請求項３〜６のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  8. Ｚが、ポリ（エチレングリコール）基を含む、請求項７に記載の免疫複合体。
  9. Ｚがグリシン残基を含む、請求項７又は８に記載の免疫複合体。
  10. Ｚが、二価シクロヘキシレン基を更に含む、請求項７〜９のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  11. 前記免疫複合体が、式ＩＩＩａ：
    Figure 2020511501
    （式中、
    Figure 2020511501
    は、抗体のリジン残基を表す
    Figure 2020511501
    残基を有する前記抗体であり、
    Figure 2020511501
    は、Ｚ１に対する結合点を表し、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含む）による構造を有する、請求項１０に記載の免疫複合体。
  12. 前記免疫複合体が、式ＩＩＩｂ：
    Figure 2020511501
    （式中、
    Figure 2020511501
    は、抗体のリジン残基を表す
    Figure 2020511501
    残基を有する前記抗体であり、
    Figure 2020511501
    は、Ｚ１に対する結合点を表し、Ｚ１は、少なくとも１つのエチレングリコール基又は少なくとも１つのグリシン残基を含む）による構造を有する、請求項１０に記載の免疫複合体。
  13. 前記免疫複合体が、式ＩＶ：
    Figure 2020511501
    （式中、
    Figure 2020511501
    は、抗体のリジン残基を表す
    Figure 2020511501
    残基を有する前記抗体であり、
    Figure 2020511501
    は、Ｇ２に対する結合点を表し、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｇ２は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｌはリンカーであり、下付き文字ｒは１〜１０の整数である）による構造を有する、請求項７〜９のいずれか一項に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
  14. Ｌが、以下：
    Figure 2020511501
    （式中、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、ａは、１〜４０の整数であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、破線
    Figure 2020511501
    は、Ｇ１に対する結合点を表し、波線
    Figure 2020511501
    は、Ｇ２に対する結合点を表す）からなる群から選択される、請求項１３に記載の免疫複合体。
  15. 前記免疫複合体が、式ＩＶａ：
    Figure 2020511501
    （式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、請求項１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
  16. 前記免疫複合体が、式ＩＶｂ：
    Figure 2020511501
    （式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、下付き文字ａは、１〜４０の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、請求項１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
  17. 前記免疫複合体が、式ＩＶｃ：
    Figure 2020511501
    （式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、各Ａは、独立して、任意のアミノ酸から選択され、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、請求項１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
  18. 前記免疫複合体が、式ＩＶｄ：
    Figure 2020511501
    （式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖又は分枝鎖、環状又は直線状、飽和又は不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｃは、１〜２５の整数であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、請求項１７に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
  19. 前記免疫複合体が、式ＩＶｅ：
    Figure 2020511501
    （式中、Ａｂは、本明細書に定義されるとおりであり、Ａｄｊはアジュバントであり、Ｇ１は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、又は結合であり、Ｒは、任意に存在し、１〜８個の炭素単位を含む直鎖若しくは分枝鎖、環状若しくは直線状、飽和若しくは不飽和アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリール鎖であり、下付き文字ｒは、１〜１０の整数である）による構造を有する、請求項１３又は１４に記載の免疫複合体又はその薬学的に許容される塩。
  20. 請求項１〜１９のいずれか一項に記載の複数の免疫複合体を含む組成物。
  21. 治療有効量の請求項１〜１９のいずれか一項に記載の免疫複合体又は請求項２０に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療するための方法。
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