JP2020511215A - 皮膚注入用組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、粒径が互いに異なる２以上の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸を含む皮膚注入用組成物に関し、本発明による皮膚注入用組成物は、皮膚注入のための粘度、押出力、及び粘弾性の条件を満たし、押出力の偏差が少なくて組成物の皮膚注入時にユーザーが疲労度を感じない。また、粘弾性及び組織修復能に優れており、持続期間が長く維持され、初期の腫れの程度が低くて回復速度が速く、体内安全性及び安定性に優れた効果がある。

Description

本発明は、皮膚注入用組成物に関する。

ヒアルロン酸は、透明で粘性のあるゲルタイプの製品で、生体分解性があり、親水性の高い物質であり、１分子当たり２１４個の水分子を引き寄せる特性があり、肌の水分を維持し、皮膚のボリュームと弾力性を維持するのに重要な役割を果たす。したがって、ヒアルロン酸を成分とするフィラーが顔のハリ復元、浅い輪郭の改善、顔のしわの緩和、及び全般的な顔面輪郭手術に用いられる傾向にある。

しかし、天然のヒアルロン酸の構造は、半減期が１ないし２日に過ぎないので、フィラーに使用されるヒアルロン酸は、皮膚で長期間維持させるために、架橋結合（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ）状態で作製される。このような架橋結合は、分解酵素によるヒアルロン酸の破壊を防止し、粘性を高めてボリューム感を形成できるようにする（ソンイソプの他、大韓皮膚科学会誌２０１４；５２（２）：１００〜１０５）。

現在販売されているヒアルロン酸フィラーは、単相性（ｍｏｎｏｐｈａｓｉｃ）又は二相性（ｂｉｐｈａｓｉｃ）の形態を有している。単相性フィラーは、全体が均質なゲルからなっており、粘性が高く、注入しやすく、繊細な形状を作製するのに有用である。二相性フィラーは、ゲルをふるいにかけて粒子状に作製したものであるため、弾性が高くて形状維持とボリューム増大という長所がある。

一方、理想的な生体内の特性と手術の有用性を示すフィラーの開発に対する研究が続いている。しかし、生体内で安定性に優れたヒアルロン酸フィラーは、剛性が大きく、粘性が高いので、微細なゲージの針を介した注射が困難な場合もある。また、微細なゲージの針を介して注入が容易なヒアルロン酸フィラーは、生体内で安定性の低い問題が発生し得る。これに粘性と弾性が全て優れたヒアルロン酸フィラーが求められている。

本発明は、粒径が互いに異なる２以上の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸を含む皮膚注入用組成物を提供することを目的とする。

本発明では、第１の架橋ヒアルロン酸粒子、前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子と粒径が異なる第２の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸を含み、
前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び第２の架橋ヒアルロン酸粒子の重量比は、１：２.５以上ないし５.５以下であり、
前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸の重量比は、１：０.１以上ないし１.２以下である皮膚注入用組成物を提供する。

本発明による皮膚注入用組成物は、皮膚注入のための粘度、押出力、及び粘弾性の条件を満たし、押出力の偏差が少なくて組成物の皮膚注入時にユーザーが疲労度を感じない。

また、粘弾性及び組織修復能に優れており、持続期間が長く維持され、初期の腫れの程度が低くて回復速度が速く、体内安全性及び安定性に優れた効果がある。

図１は、製造例１−６のヒアルロン酸組成物の押出力の偏差のグラフを示す。 図２は、製造例１−７のヒアルロン酸組成物の押出力の偏差のグラフを示す。 図３は、製造例１−１１のヒアルロン酸組成物の押出力の偏差のグラフを示す。 図４は、製造例１−１２のヒアルロン酸組成物の押出力の偏差のグラフを示す。 図５は、製造例１−１３のヒアルロン酸組成物の押出力の偏差のグラフを示す。

本発明は、第１の架橋ヒアルロン酸粒子、前記第１の架橋ヒアルロン酸と粒径が異なる第２の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸を含む皮膚注入用組成物に関する。

以下、本発明の構成を具体的に説明する。

本発明において、皮膚注入用組成物は、フィラー組成物として表現できる。

本発明において、数値は、以上、以下又は超過、未満に限定したが、他の記載がない限り、以上または以下を示す。

本発明の皮膚注入用組成物において第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び第２の架橋ヒアルロン酸粒子の重量比は、１：２.５以上ないし５.５以下であってもよく、具体的に、１：２.５以上ないし３.５以下であってもよい。

また、第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸の重量比は、１：０.１以上ないし１.２以下であってもよく、具体的に、１：０.１以上ないし０.５未満であってもよい。

前記範囲で皮膚注入用組成物が要求する粘度、押出力、及び粘弾性などの物性を満たすことができる。

ヒアルロン酸は、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）とβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉc Ａｃｉｄ）が交互に結合された直鎖状の高分子であり、本発明では、ヒアルロン酸そのもの、これらの塩、又はこれらの組み合わせをすべて含む意味として使用され得る。前記ヒアルロン酸の分子量は、１００,０００ないし５,０００,０００Ｄａ、又は１,０００,０００ないし１,５００,０００Ｄａであってもよいが、これに制限されるものではない。前記ヒアルロン酸の塩には、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、ヒアルロン酸コバルトなどの無機塩と、ヒアルロン酸テトラブチルアンモニウムなどの有機塩がすべて含まれていてもよい。本発明において、ヒアルロン酸は、ヒアルロン酸そのもの、またはこれらの塩を単独で、又はヒアルロン酸そのもの、またはこれらの塩を２種以上組み合わせて使用し得る。前記ヒアルロン酸又はこれらの塩は、微生物から分離されたり、合成、または購入したものであってもよいが、これに制限されるものではない。一例として、前記ヒアルロン酸は、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属微生物（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｓｓｕｓ ｅｑｕｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）から分離、精製されたものであってもよい。

本発明において、架橋ヒアルロン酸粒子は、架橋ヒアルロン酸水和粒子と同一の意味として使用され得る。例えば、ヒアルロン酸がヒドロキシル基を介して共有結合架橋反応を実現したことを意味しうる。ヒアルロン酸の含水率又は架橋率は、当業界で用いられる一般的な方法で調節されることができ、例えば、１０ないし２０ｍｏｌ％、又は１０ないし１５ｍｏｌ％であってもよい。

前記ヒアルロン酸粒子は、結合剤によって架橋されたものであってもよい。前記結合剤は、これに制限されるものではないが、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ ｅｔｈｅｒ：ＥＧＤＧＥ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１,４-ｂｕｔａｎｄｉｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ ｅｔｈｅｒ：ＢＤＤＥ）、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル（１,６-ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ ｅｔｈｅｒ）、プロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ ｅｔｈｅｒ）、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ ｅｔｈｅｒ）、ジグリセロールポリグリシジルエーテル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ ｅｔｈｅｒ）、ＥＤＣ（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）、ＤＶＳ（ｄｉｖｉｎｙｌ ｓｕｌｆｏｎｅ）、ＢＣＤＩ（ｂｉｓｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｉｅ）、またはそれらの組み合わせであってもよい。

本発明の皮膚注入用組成物（以下、ヒアルロン酸組成物ということがある。）は、粒径が互いに異なる２以上の架橋ヒアルロン酸粒子を含む。

本発明において、第１の架橋ヒアルロン酸粒子は、第２の架橋ヒアルロン酸粒子に比べて弾性が低く凝集性が高い。例えば、第１の架橋ヒアルロン酸粒子は、０.０１Ｈｚないし１Ｈｚ（振動数、ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）で３００Ｐａ未満のＧ’値を示し、０.３以上のｔａｎδ値を持つものであってもよい。

前記ｔａｎδ値は、Ｇ”／Ｇ’値（ｄａｍｐｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）で、物質が固体、液体の内どちらに近いかを示す数値である。このとき、Ｇ’は、貯蔵弾性係数を示し、Ｇ”は、損失弾性係数を示す。周波数０.０１ないし１Ｈｚの範囲でｔａｎδの値が１に近いほど溶液状態（弾性が低い）であり、０に近いほど弾性が高い弾性体として定義できる。また、ｔａｎδ値が低く、弾性値の割合（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ、１００×Ｇ’／（Ｇ’＋Ｇ”））が高いほどフィラーの持続期間が長いものと予想されると報告されている。

前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子の平均粒径は、１０ないし２５０μmであってもよく、具体的に、２０ないし２００μm、５０ないし１５０μm、８０ないし１３０μm、２０ないし１００μm、１００ないし２００μm、２００ないし２５０μm、５０ないし１００μm、又は１５０ないし２００μmであってもよい。

本発明において、平均粒径は、Ｄ５０（５０％Ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ Ｐａｒｔｉｃｌｅ）として百分位数で表現された粒度分布曲線に粒子の体積が５０％に存在する時点で測定された粒子のサイズを意味する。このような平均粒径は、粒度分析器（Ｍａｌｖｅｒｎ、ＭＳ３０００）を使用して測定し、このとき、分散溶媒として水を使用する。すなわち、平均粒径は、水和された架橋ヒアルロン酸粒子の粒径を示す。

本発明において、第２の架橋ヒアルロン酸粒子は、前記粒子のサイズに応じて物性が調節される。前記第２の架橋ヒアルロン酸粒子は、第１の架橋ヒアルロン酸に比べて粘性が低く、弾性に優れる。例えば、第２の架橋ヒアルロン酸粒子は、０.０１Ｈｚないし１Ｈｚで３００Ｐａ以上のＧ’値を示し、０.３未満のｔａｎδ値を持つものであってもよい。

前記第２の架橋ヒアルロン酸の平均粒径は、１５００ないし３０００μmであってもよく、具体的に、１８００ないし２８００μm、２０００ないし２７００μm、２３００ないし２５００μm、１５００ないし２０００μm、２０００ないし２５００μm、又は２５００ないし３０００μm、１７００ないし２２００μm、２２００ないし３０００μm、１５００μmないし２５００μm又は２０００ないし３０００μmであってもよい。

本発明による皮膚注入用組成物は、非架橋ヒアルロン酸を含む。前記非架橋ヒアルロン酸は、ソリューションの剤形として皮膚注入用組成物に流動性を付与することができる。

本発明で水和された第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸は、全体の組成物１００重量部対比１ないし１０重量部で含まれていてもよい。

本発明による皮膚注入用組成物は、前述した成分の他に上皮成長因子（ＥＧＦ）をさらに含むことができる。前記ＥＧＦは、皮膚に注入されてコラーゲン、繊維芽細胞、及びエラスチンの生成を増加させて、例えば、組織修復の効果を増大させることができる。

前記上皮成長因子（ＥＧＦ）は、全体の組成物１００重量部対比０.０００１ないし０.００２重量部で含まれていてもよい。

また、本発明による皮膚注入用組成物は、麻酔剤の成分をさらに含むことができる。前記麻酔剤は、組成物の注入時に経験することになる痛みを緩和させることができる。

このような麻酔剤の成分は、これに制限されるものではないが、アムブカイン（ａｍｂｕｃａｉｎｅ）、アモラノン（ａｍｏｌａｎｏｎｅ）、アミロカイン（ａｍｙｌｏｃａｉｎｅ）、ベノキシネート（ｂｅｎｏｘｉｎａｔｅ）、ベンゾカイン（ｂｅｎｚｏｃａｉｎｅ）、ベトキシカイン（ｂｅｔｏｘｙｃａｉｎｅ）、ビフェナミン（ｂｉｐｈｅｎａｍｉｎｅ）、ブピバカイン（ｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ）、ブタカイン（ｂｕｔａｃａｉｎｅ）、ブタンベン（ｂｕｔａｍｂｅｎ）、ブタニリカイン（ｂｕｔａｎｉｌｉｃａｉｎｅ）、ブテタミン（ｂｕｔｅｔｈａｍｉｎｅ）、ブトキシカイン（ｂｕｔｏｘｙｃａｉｎｅ）、カルチカイン（ｃａｒｔｉｃａｉｎｅ）、クロロプロカイン（ｃｈｌｏｒｏｐｒｏｃａｉｎｅ）、コカエチレン（ｃｏｃａｅｔｈｙｌｅｎｅ）、コカイン（ｃｏｃａｉｎｅ）、シクロメチカイン（ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｙｃａｉｎｅ）、ジブカイン（ｄｉｂｕｃａｉｎｅ）、ジメチソキン（ｄｉｍｅｔｈｙｓｏｑｕｉｎ）、ジメトカイン（ｄｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）、ジペロドン（ｄｉｐｅｒｏｄｏｎ）、ジシクロニン（ｄｙｃｙｃｌｏｎｉｎｅ）、エクゴニジン（ｅｃｇｏｎｉｄｉｎｅ）、エクゴニン（ｅｃｇｏｎｉｎｅ）、エチルクロライド（ｅｔｈｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、エチドカイン（ｅｔｉｄｏｃａｉｎｅ）、ベータ−オイカイン（ｂｅｔａ−ｅｕｃａｉｎｅ）、ユープロシン（ｅｕｐｒｏｃｉｎ）、フェナルコミン（ｆｅｎａｌｃｏｍｉｎｅ）、フォルモカイン（ｆｏｒｍｏｃａｉｎｅ）、ヘキシルカイン（ｈｅｘｙｌｃａｉｎｅ）、ヒドロキシテトラカイン（ｈｙｄｒｏｘｙｔｅｔｒａｃａｉｎｅ）、イソブチルｐ−アミノ安息香酸塩（ｉｓｏｂｕｔｙｌ ｐ−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏａｔｅ）、ロイシノカインメシレート（ｌｅｕｃｉｎｏｃａｉｎｅ ｍｅｓｙｌａｔｅ）、レボキサドロール（ｌｅｖｏｘａｄｒｏｌ）、リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、メピバカイン（ｍｅｐｉｖａｃａｉｎｅ）、メプリルカイン（ｍｅｐｒｙｌｃａｉｎｅ）、メタブトキシカイン（ｍｅｔａｂｕｔｏｘｙｃａｉｎｅ）、メチルクロライド（ｍｅｔｈｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ミールテカイン（ｍｙｒｔｅｃａｉｎｅ）、ネーパイン（ｎａｅｐａｉｎｅ）、オクタカイン（ｏｃｔａｃａｉｎｅ）、オルトカイン（ｏｒｔｈｏｃａｉｎｅ）、オキセサゼイン（ｏｘｅｔｈａｚａｉｎｅ）、パレトキシカイン（ｐａｒｅｔｈｏｘｙｃａｉｎｅ）、フェナカイン（ｐｈｅｎａｃａｉｎｅ）、フェノール（ｐｈｅｎｏｌ）、ピペロカイン（ｐｉｐｅｒｏｃａｉｎｅ）、ピリドカイン（ｐｉｒｉｄｏｃａｉｎｅ）、ポリドカノール（ｐｏｌｉｄｏｃａｎｏｌ）、プラモキシン（ｐｒａｍｏｘｉｎｅ）、プリロカイン（ｐｒｉｌｏｃａｉｎｅ）、プロカイン（ｐｒｏｃａｉｎｅ）、プロパノカイン（ｐｒｏｐａｎｏｃａｉｎｅ）、プロパラカイン（ｐｒｏｐａｒａｃａｉｎｅ）、プロピポカイン（ｐｒｏｐｉｐｏｃａｉｎｅ）、プロポキシカイン（ｐｒｏｐｏｘｙｃａｉｎｅ）、スードコカイン（ｐｓｕｅｄｏｃｏｃａｉｎｅ）、ピロカイン（ｐｙｒｒｏｃａｉｎｅ）、ロピバカイン（ｒｏｐｉｖａｃａｉｎｅ）、サリチルアルコール（ｓａｌｉｃｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）、テトラカイン（ｔｅｔｒａｃａｉｎｅ）、トリカイン（ｔｏｌｙｃａｉｎｅ）、トリメカイン（ｔｒｉｍｅｃａｉｎｅ）、ゾラミン（ｚｏｌａｍｉｎｅ）、またはそれらの組み合わせであってもよい。

前記麻酔剤の成分は、注入用組成物１００重量部対比０.１ないし１重量部で含むことができる。

本発明による組成物は、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液及び／又は静菌剤などの他の通常の添加剤、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤などを付加的に添加して使用することができる。

本発明による皮膚注入用組成物は、下記の理化学的特徴を持つことができる。

（ａ）外観に気泡がなく、無色、透明で、
（ｂ）ｐＨが７±１であり、
（ｃ）粘度が６５,０００ないし９５,０００ｃＰであり、
（ｄ）浸透圧が平均０.３２５Ｏｓｍｏｌ／ｋｇ±１０％であり、
（ｅ）押出力が７０Ｎ以下であり、
（ｆ）弾性値は、８１ないし９２であり、
（ｇ）位相角（Ｐｈａｓｅ ａｎｇｌｅ）は、５ないし１５である。

粘度（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ）とは、流体の流れに対する抵抗を意味する粘性の大きさを表す量である。粘度が大きいほど手術の容易性が大きく、繊細な形状を作製するのに有用である。例えば、単相性ヒアルロン酸フィラーは、粘度が大きいため、注入しやすく、繊細な形状を作製するのに有用である。本発明において、粘度は、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ社のＤＶ３Ｔを使用して後述する実験例の条件によって測定することができる。

本発明において、皮膚注入用組成物の粘度は、６５,０００ないし９５,０００ｃＰ、又は７０,０００ないし９０,０００ｃＰ、７３,０００ないし８２,０００ｃＰであってもよい。

押出力は、患者に快適な注射速度における押出力を意味する。「患者に快適な」とは、皮膚に注射時、患者に傷害や過度の痛みを引き起こさない注射速度を定義するのに使用される。本発明で使用される「快適さ」は、患者の快適さだけでなく、医師や医療専門家が組成物を注射するにあたっての快適さ、又は能力を含む。本発明において押出力は、ＴｅｓｔＯｎｅ社のＴＯ−１０１−１６１を使用して、後述する実験例の条件によって測定することができる。一般的に、低い押出力を持つことが組成物の注入時に圧痛がなく、コントロールが容易である。

本発明において、皮膚注入用組成物の押出力は、７０Ｎ以下または６５Ｎ以下であってもよい。

粘弾性（ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）は、物体に力を加えたとき、液体としての性質と固体としての性質が同時に現れる現象を意味する。本発明において、粘弾性は、レオメーターを用いて後述する実験例の条件によって測定できるが、具体的に、レオメーターを用いて組成物が加わる力に対して抵抗する力と消失する力を測定して、損失弾性係数、貯蔵弾性係数、及び位相角を示すことができる。

貯蔵弾性係数（ｅｌａｓｔｉｃ ｍｏｄｕｌｕｓ、Ｇ’）とは、弾性体が弾性限界内で持つ応力と変形の比を意味する。前記貯蔵弾性係数が大きいほど組成物が硬く、変形に対して抵抗する能力が高まる。

本発明において、皮膚注入用組成物の貯蔵弾性係数は、８００ないし１２００、又は８５０ないし１０００であってもよい。

損失弾性係数（ｖｉｓｃｏｕｓ ｍｏｄｕｌｕｓ、Ｇ”）とは、失われたエネルギーの尺度として物質の粘性成分を意味する。

本発明において、皮膚注入用組成物の損失弾性係数は、１００ないし２００、又は１００ないし１３０であってもよい。

また、弾性値は、損失弾性係数及び損失弾性係数値を介して下記式により計算できる。前記弾性値が高いほど組織修復力に優れており、フィラーの持続期間が長くなる。

弾性値＝(１００×Ｇ’／（Ｇ’+Ｇ”））

本発明において、皮膚注入用組成物の弾性値は、８１ないし９２、又は８５ないし９０であってもよい。

また、位相角（Ｐｈａｓｅ ａｎｇｌｅ）は、組成物が液体に近いか、固体に近いかを示す尺度である。前記位相角の値が小さいほど固体の性質を有し、大きいほど液体の性質を有する。位相角が高いと、外部から力が加わったり、表情による変形が発生したとき、元の状態への回復が遅くなり、元の形態を維持できず、位相角が小さいほど外部の変形要素から直ちに反応してＧ”値が小さくなるので、流体の性質よりもさらに弾性体に近くなって周辺に流れず、元の形態を持続的に維持できる。したがって、弾性値と位相角値を適切に維持することは、皮膚注入用組成物において非常に重要である。

本発明において、皮膚注入用組成物の位相角は、５ないし１３、又は５ないし１０であってもよい。

本発明による皮膚注入用組成物は、当業界の一般的な方法を通じて製造されてもよい。

また、本発明は、前述した皮膚注入用組成物を哺乳類に投与する段階を含む組織修復方法を提供する。

前記哺乳類は、人間であってもよい。

組織修復とは、組成物の注入によって、一時的または半永久的に身体の皮膚のしわを改善又は修復したり、輪郭の改善、組織の体積感を形成、又は傷跡の治癒などの組織を再生することを意味しうる。前記皮膚及び組織は、顔面、胸、お尻、性器、及び他の身体部位を示す。

特に、本発明の皮膚注入用組成物は、ＷＳＲＳ基準によるユーザーのしわの度合いによって選択的に使用することができる。前記ＷＳＲＳは、Ｗｒｉｎｋｌｅ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅの略字であり、人のしわの度合いを５段階（Ｇｒａｄｅ１ないし５）に分けて区分する。前記Ｇｒａｄｅ１ないし５は、それぞれａｂｓｅｎｔ（なし）、ｍｉｌｄ（浅い）、ｍｏｄｅｒａｔｅ（中間）、ｓｅｖｅｒｅ（深い）、及びｅｘｔｒｅｍｅ（非常に深い）を示す。ＷＳＲＳ及び各等級に対する具体的な内容は、Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００４；５（１）：４９−５２ １１７５−０５６１に記載されており、本発明は、前記文献に提示された方法を用いてＷＳＲＳを評価することができる。

一方、食品医薬品安全処でも２０１７年１２月に発行した成形用フィラーの許可・審査ガイドライン−ヒアルロン酸原材料を中心に−を介してしわの度合いをＷＳＲＳによって浅い（ｍｉｌｄ）、中間（ｍｏｄｅｒａｔｅ）、深い（ｓｅｖｅｒｅ）、及び非常に深い（ｅｘｔｒｅｍｅ）シワに区分しており、成形用フィラーの使用目的にしわの度合いを記載することを提案している。

本発明による組成物は、ＷＳＲＳでＧｒａｄｅ４の深い（ｓｅｖｅｒｅ）シワ、又はＧｒａｄｅ５の非常に深い（ｅｘｔｒｅｍｅ）シワに使用することができる。

また、前記皮膚注入用組成物は、シリンジに充填されて、皮膚層に注入されてもよい。

皮膚層は、表皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）、真皮（ｄｅｒｍｉｓ）、皮下（ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｓ）に区分される。本発明の皮膚注入用組成物は、深い真皮層（ｄｅｅｐ ｄｅｒｍａｌ）又は真皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）に注入され得る。

発明の実施のための形態
以下、本発明を実施例を通じて詳細に説明する。下記の実施例は、本発明を例示するものに過ぎず、本発明の範囲が下記の実施例に限定されるものではない。本実施例は、本発明の開示が完全なようにし、本発明が属する技術分野で通常の知識を有する者に発明の範疇を完全に知らせるために提供されるものであり、本発明は、請求項の範疇によって定義されるだけである。

参考例．物性測定
（１）粘度測定
大韓薬典一般試験法のうち、粘度測定法によって粘度を測定した。
具体的に、試料組成物５００ｕｌを粘度測定器（ＤＶ３Ｔ、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ）のサンプルカップにロードし、ＣＰ−５２のサンプルカップに装着した後、スピンドルの回転速度を２ｒｐｍに設定して粘度を測定した。

（２）押出力測定
万能材料試験機（Ｔ０−１０１−１６１、ＴｅｓｔＯｎｅ）を用いて圧縮試験を行った。
具体的に、試料組成物を注射器に充填し、前記注射器に２７Ｇ１／２インチの注射針を装着した後、治具にセットした。その後、速度５０ｍｍ／ｍｉｎ、変位２５ｍｍを設定した後、圧縮試験を行った。

（３）粘弾性測定
レオメーター（ｒｈｅｏｍｅｔｅｒ）を使用して流動学的特性を測定した。
具体的に、平行板の間に試料を置いて平行板を振動回転させながら加わる力に対して、抵抗する力と消失する力を測定して、試料の貯蔵弾性係数（Ｇ’）、損失弾性係数（Ｇ”）、ｐｈａｓｅ ａｎｇｌｅ（位相角）を測定した。

レオメーターの分析条件は、下記の通りである。
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ：１Ｈｚ
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５℃
Ｓｔｒａｉｎ：５％
Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｇｅｏｍｅｔｒｙ：２０ｍｍ ｐｌａｔｅ
Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｇａｐ：０.５ｍｍ
Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｍｏｄｅ：Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ ｍｏｄｅ

また、測定されたＧ’及びＧ”値を参照して、下記式で弾性値を計算した。

弾性値＝(１００×Ｇ’／（Ｇ’＋Ｇ”））

製造例．皮膚注入用組成物の製造
（１）第１の架橋ヒアルロン酸粒子の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）１０ｇ、精製水８１ｇ、１Ｍ ＮａＯＨ（１Ｍ水酸化ナトリウム）９ｇを真空状態で４００ｒｐｍで粒がなく透明な状態のゲルになるまで攪拌した。その後、架橋剤（ＢＤＤＥ、ブタンジオールジグリシジルエーテル）０.５ｇを追加して攪拌した。攪拌が完了した後、容器を密封して、８０ｒｐｍ、５０℃の条件で１時間架橋反応させた。以後、２７℃の条件で１６時間放置してゲルを製造した。

以後、残留試薬の除去のために、前記得られたゲルを０.９Ｘ濃度のＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ）溶液３０Ｌに入れた後、３時間ごとに新しい溶液に替えた（３回／１日、５日間）。以後、これをｍｏｒｔａｒ ｇｒｉｎｄｅｒ（ＲＳ２００、Ｒｅｔｓｃｈ）に４０分間通過させて第１の架橋ヒアルロン酸粒子を製造した。

前記製造された第１の架橋ヒアルロン酸粒子は、約２００μmの平均粒径を有した。

（２）第２の架橋ヒアルロン酸粒子の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）２０ｇ、精製水１１７ｇ、１Ｍ ＮａＯＨ（１Ｍ水酸化ナトリウム）１３ｇを、真空状態で４００ｒｐｍで粒がなく透明な状態のゲルになるまで攪拌した。その後、架橋剤（ＢＤＤＥ、ブタンジオールジグリシジルエーテル）１ｇを追加して攪拌した。攪拌が完了した後、容器を密封して８０ｒｐｍ、５０℃の条件で１時間架橋反応させた。以後、２７℃の条件で１６時間放置してゲルを製造した。

以後、残留試薬の除去のために、前記得られたゲルを０.９Ｘ濃度のＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ）溶液３０Ｌに入れた後、３時間ごとに新しい溶液に替えた（３回／１日、５日間）。以後、これを１０００μmのＳｔａｎｄａｒｄ ｔｅｓｔ ｓｉｅｖｅに通過させて第２の架橋ヒアルロン酸粒子を製造した。

前記製造された第２の架橋ヒアルロン酸粒子は、約２０００μmの平均粒径を有した。

（３）非架橋ヒアルロン酸の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）２ｇを精製水１００ｇに添加し、攪拌して２％の非架橋ヒアルロン酸を製造した。

（４）ヒアルロン酸組成物の製造
前記（１）で製造した第１の架橋ヒアルロン酸粒子、（２）で製造した第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸を設定された含量（ｇ）及び含量比で混合してヒアルロン酸組成物を製造した。

実施例１．第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸のうち、１つ又は２つの成分のみを含むヒアルロン酸組成物に対する物性評価
（１）ヒアルロン酸組成物の製造＿比較製造例２−１ないし２−１６
第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸をすべて含む組成物の比較例として、第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸の含量（ｇ）及び含量比を下記表１のようにしてヒアルロン酸組成物を製造し、その他の条件は、製造例と同様にした。

（２）物性測定
比較製造例２−１ないし２−１６のヒアルロン酸組成物の粘度、押出力、及び粘弾性の測定結果を下記表２及び３に示した。

前記表２に示すように、第１の架橋ヒアルロン酸粒子又は非架橋ヒアルロン酸を１つのみ含む組成物は、低すぎる粘度を有するので、フィラー組成物として適しておらず、第２の架橋ヒアルロン酸粒子のみを含む組成物は、押出力が高すぎるので、フィラー組成物として適していない。

また、第１または第２の架橋ヒアルロン酸粒子を含み、非架橋ヒアルロン酸を含まない場合、粘度及び／又は押出力が高くてフィラーの組成物としての使用に適していない。特に、非架橋ヒアルロン酸は、潤滑役割を果たすので、前記非架橋ヒアルロン酸を使用しない比較製造例は、施術の際、押出力値の変動幅が大きくなり、皮膚注入に困難性があり、圧痛を感じることになるおそれがある。

また、前記表３に示すように、第１及び第２の架橋ヒアルロン酸粒子を含み、非架橋ヒアルロン酸を含まない場合、５以下の低い位相角を持っていて皮膚注入用組成物として適しておらず、第１の架橋ヒアルロン酸及び非架橋ヒアルロン酸を含む場合、高い位相角を持っていて皮膚注入用組成物として適していない。

すなわち、第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸をすべて含む場合、物性に優れているので、皮膚注入用として適したヒアルロン酸組成物を製造しうる。

実施例２．第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び第２の架橋ヒアルロン酸粒子の割合によるヒアルロン酸組成物に対する物性評価
（１）ヒアルロン酸組成物の製造＿製造例１−５ないし１−１０および比較製造例１−１ないし１−４
第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸の含量（ｇ）及び含量比を下記表４のようにしてヒアルロン酸組成物を製造した。

（２）物性測定
比較製造例１−１ないし１−４及び製造例１−５ないし１−１０のヒアルロン酸組成物の粘度、押出力、及び粘弾性の測定結果を下記の表５及び６に示した。

前記表５に示すように、第２の架橋ヒアルロン酸の重量比が、第１の架橋ヒアルロン酸１対比１である比較製造例１−１及び１−２の場合、粘度は、６５０００ｃＰ未満で低く示された。製造例の場合、粘度は、本発明の粘度の範囲である６５０００ないし９５０００ｃＰの範囲を満たしており、製造例１−５および１−６が７３０００ないし８２０００ｃＰの粘度を持っていてフィラー組成物に最も適した。

一方、第２の架橋ヒアルロン酸の重量比が２である比較製造例１−３および１−４の場合、粘度は、６５０００ｃＰ以上で示されたが、下記粘弾性データのように、低い弾性値を持つため、フィラーの組成物への使用に適していない。

また、前記表６に示すように、第２の架橋ヒアルロン酸の重量比が、第１の架橋ヒアルロン酸１対比１ないし２である比較製造例の場合、低い弾性値を有したり、位相角が高く測定された。

すなわち、第１の架橋ヒアルロン酸及び第２の架橋ヒアルロン酸の重量比が１：２.５以上ないし５.５以下である場合、物性（粘度、押出力、及び粘弾性）に優れたヒアルロン酸組成物を製造することができる。

実施例３．非架橋ヒアルロン酸の含量によるヒアルロン酸組成物に対する物性評価
（１）ヒアルロン酸組成物の製造＿製造例１−６ないし１−７及び製造例１−１１ないし１−１３
第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子、及び非架橋ヒアルロン酸の含量（ｇ）及び含量比を下記表７のようにしてヒアルロン酸組成物を製造した。

（２）物性測定
製造例１−６ないし１−７及び１−１１ないし１−１３のヒアルロン酸組成物の粘度、押出力、及び粘弾性の測定結果を下記表８及び９に示した。

前記表８に示すように、製造例のヒアルロン酸組成物の粘度は、６５０００ないし９００００ｃＰで本発明の粘度の範囲を満たしているものと示された。特に、非架橋ヒアルロン酸の重量比が０.２及び０.４である場合、粘度は、７３０００ないし８２０００ｃＰで皮膚注入用フィラーとして非常に適した粘度を示した。

また、表９に示すように、製造例のヒアルロン酸組成物の弾性値は、８１ないし９２であり、位相角は５ないし１３で本発明の範囲を満たしているものと示された。特に、非架橋ヒアルロン酸の重量比が０.２及び０.４である場合、弾性値は、８５ないし９０であり、位相角は、５ないし１０で皮膚注入用フィラーとして非常に適した粘弾性を示した。

すなわち、第１の架橋ヒアルロン酸及び第２の架橋ヒアルロン酸の重量比が１：２.５以上ないし３.５以下であり、第１の架橋ヒアルロン酸及び非架橋ヒアルロン酸の重量比が１：０.１以上ないし０.５未満であるとき、皮膚注入のための用途に適する。

実施例４．押出力の偏差の実験
製造例１−６ないし１−７及び製造例1-１１ないし1-１３に対し、時間による押出力を測定した。

前記測定された結果を図１ないし５にグラフで示した。

図１ないし５は、それぞれ製造例１−６ないし１−７及び製造例1-１１ないし1-１３の押出力の偏差のグラフであり、第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸をすべて含む場合、押出力は、約１０Ｎ程度で大きな偏差なく一定にフィラー組成物を注入できることを確認できる。

また、非架橋ヒアルロン酸の含量が増加するほど押出力の偏差値が小さくなることを確認できる。

本発明による皮膚注入用組成物は、皮膚注入のための粘度、押出力、及び粘弾性の条件を満たし、押出力の偏差が少なくて組成物の皮膚注入時にユーザーが疲労度を感じない。

また、粘弾性及び組織修復能に優れており、持続期間が長く維持され、初期の腫れの程度が低くて回復速度が速く、体内安全性及び安定性に優れた効果がある。

Claims (15)

1. 第１の架橋ヒアルロン酸粒子、前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子と粒径が異なる第２の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸を含み、
   前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び第２の架橋ヒアルロン酸粒子の重量比は、１：２.５以上ないし５.５以下であり、
   前記第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸の重量比は、１：０.１以上ないし１.２以下である、皮膚注入用組成物。
2. 第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び第２の架橋ヒアルロン酸粒子の重量比は、１：２.５以上ないし３.５以下であり、
   第１の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸の重量比は、１：０.１以上ないし０.５未満である、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
3. 第１の架橋ヒアルロン酸粒子の平均粒径は、１０ないし２５０μmである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
4. 第２の架橋ヒアルロン酸粒子の平均粒径は、１５００ないし３０００μmである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
5. 第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子又は非架橋ヒアルロン酸の分子量は、１００万ないし１５０万Ｄａである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
6. 第１の架橋ヒアルロン酸粒子または第２の架橋ヒアルロン酸粒子の架橋度は、１０ないし２０ｍｏｌ％である、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
7. 第１の架橋ヒアルロン酸粒子、第２の架橋ヒアルロン酸粒子及び非架橋ヒアルロン酸は、全体の組成物１００重量部対比１ないし１０重量部で含まれるものである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
8. 上皮成長因子（ＥＧＦ）をさらに含む、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
9. 上皮成長因子（ＥＧＦ）は、全体の組成物１００重量部対比０.０００１ないし０.００２重量部で含まれるものである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
10. 麻酔剤の成分をさらに含む、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
11. 麻酔剤の成分は、注入用組成物１００重量部対比０.１ないし１重量部で含まれるものである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
12. 皮膚注入用組成物は、下記の理化学的特徴を有するものである、請求項１に記載の皮膚注入用組成物。
    （ａ）外観に気泡がなく、無色、透明で、
    （ｂ）ｐＨが７±１であり、
    （ｃ）粘度が６５,０００ないし９５,０００ｃＰであり、
    （ｄ）浸透圧が平均０.３２５Ｏｓｍｏｌ／ｋｇ±１０％であり、
    （ｅ）押出力が７０Ｎ以下であり、
    （ｆ）弾性値は、８１ないし９２であり、
    （ｇ）位相角（Ｐｈａｓｅ ａｎｇｌｅ）は、５ないし１５である。
13. 皮膚注入用組成物は、粘度が７３,０００ないし８２,０００ｃＰである、請求項１２に記載の皮膚注入用組成物。
14. 皮膚注入用組成物は、押出力が６５Ｎ以下である、請求項１２に記載の皮膚注入用組成物。
15. 皮膚注入用組成物は、弾性値が８５ないし９０であり、位相角が５ないし１０である、請求項１２に記載の皮膚注入用組成物。