JP2020505929A - 抗体ドメインの好ましい対形成 - Google Patents
抗体ドメインの好ましい対形成 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020505929A JP2020505929A JP2019541726A JP2019541726A JP2020505929A JP 2020505929 A JP2020505929 A JP 2020505929A JP 2019541726 A JP2019541726 A JP 2019541726A JP 2019541726 A JP2019541726 A JP 2019541726A JP 2020505929 A JP2020505929 A JP 2020505929A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- domain
- antibody
- abm
- domains
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102100021651 SUN domain-containing ossification factor Human genes 0.000 claims abstract description 135
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 130
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 129
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 107
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 107
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 107
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 58
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims abstract description 39
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 218
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 66
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 60
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 23
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 19
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 13
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 239000001601 sodium adipate Substances 0.000 claims description 4
- 239000001608 potassium adipate Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 47
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 46
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 41
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 39
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 33
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 28
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 26
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 description 22
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 19
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 17
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 17
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 14
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 12
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 12
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 238000001972 liquid chromatography-electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 11
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 10
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 10
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 7
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 102220584011 Non-receptor tyrosine-protein kinase TYK2_K26D_mutation Human genes 0.000 description 7
- 102220414504 c.53C>G Human genes 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 6
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 101100075830 Caenorhabditis elegans mab-5 gene Proteins 0.000 description 5
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 4
- UNDAPMUKULIMSY-HGKXDEPLSA-N (4s)-4-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s) Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.N([C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NC(CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(C)=O UNDAPMUKULIMSY-HGKXDEPLSA-N 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 101150030901 mab-21 gene Proteins 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- -1 up to 10 Chemical class 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(octadecanoyloxy)propyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 2
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical class OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000012436 analytical size exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000002849 thermal shift Methods 0.000 description 2
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 102000016904 Armadillo Domain Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014223 Armadillo Domain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002086 C-type lectin-like Human genes 0.000 description 1
- 108050009406 C-type lectin-like Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000289632 Dasypodidae Species 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000002090 Fibronectin type III Human genes 0.000 description 1
- 108050009401 Fibronectin type III Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000746783 Homo sapiens Cytochrome b-c1 complex subunit 6, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102100038126 Tenascin Human genes 0.000 description 1
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 1
- 229940074045 glyceryl distearate Drugs 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 1
- 102000048638 human UQCRH Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000989 no adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/522—CH1 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Abstract
Description
抗体分子の先端部分に位置するVL及びVHドメインは、6個のCDR(ドメイン毎に3個)が、抗原と特異的結合するための表面(又はキャビティ)を構成する際に協力し合うように、緊密にパックされている。従って、抗体の天然の抗原結合部位は、軽鎖可変ドメインのストランドB−C、C’−C’’、及びF−G、並びに重鎖可変ドメインのストランドB−C、C’−C’’、及びF−Gを結びつけるループから構成される。
本目的は、本発明の主題により解決される。
a)CLドメインの18位のアミノ酸残基は正極性のものであり、特にR、H、若しくはKのいずれかであり、CH1ドメインの26位のアミノ酸残基は負極性のものであり、特にD若しくはEのいずれかである;又は
b)CLドメインの18位のアミノ酸残基は負極性のものであり、特にD若しくはEのいずれかであり、CH1ドメインの26位のアミノ酸残基は正極性のものであり、特にR、H、又はKのいずれかである
となるように、列挙されたアミノ酸位置で反対の極性によって特徴付けられる。
A
a)CLドメインは、少なくとも点突然変異T18X(Xは、R、H、若しくはKのいずれかである)を含有する、配列番号1と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCカッパであり;
b)CH1ドメインは、少なくとも点突然変異K26X(Xは、D若しくはEのいずれかである)を含有する、配列番号3と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み;又は
B
a)CLドメインは、少なくとも点突然変異K18X(Xは、D又はEのいずれかである)を含有する、配列番号2と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCラムダであり;
b)CH1ドメインは、26位のKが他のいずれのアミノ酸によっても置換されていないか、若しくは少なくとも点突然変異K26X(Xは、R又はHのいずれかである)を含有する、配列番号3と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み;又は
C
a)CLドメインは、18位のKが他のいずれのアミノ酸によっても置換されていないか、若しくは少なくとも点突然変異K18X(Xは、R又はHのいずれかである)を含有する、配列番号2に対して少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCラムダであり;
b)CH1ドメインは、少なくとも点突然変異K26X(Xは、D又はEのいずれかである)を含有する、配列番号3と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ナンバリングはIMGTに従う。
A
a)CLドメイン変異体は、配列番号1と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、点突然変異T18X(Xは、R、H、若しくはKのいずれかである)を含有するCカッパ変異体であり;
b)点突然変異K26X(Xは、D若しくはEのいずれかである)を除いて、配列番号3として同定されたアミノ酸配列からなるCH1ドメイン
と対形成することができ;又は
B
a)CLドメイン変異体は、配列番号2と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、点突然変異K18X(Xは、D又はEのいずれかである)を含有するCラムダ変異体であり;
b)配列番号3、若しくは点突然変異K26X(Xは、R又はHのいずれかである)を除く配列番号3のいずれかとして同定されたアミノ酸配列からなるCH1ドメイン
と対形成することができ;又は
C
a)CLドメイン変異体は、18位のKが他のいずれのアミノ酸によっても置換されていないか、若しくは点突然変異K18X(Xは、R若しくはHのいずれかである)を含有する、配列番号2と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCラムダ変異体であり;
b)点突然変異K26X(Xは、D又はEのいずれかである)を除いて、配列番号3として同定されたアミノ酸配列からなるCH1ドメイン
と対形成することができる。
具体的な実施形態によれば、ABMは、1つの同種のLC/HC二量体のみを含み、HCは、CH2−CH3を含み、場合によりCH4をさらに含むFc鎖とさらに二量体化され、これによりFc領域が得られる。このようなABMは、具体的には、ただ1つのFabアーム及びFc領域によって特徴付けられる一価の単一特異性抗体である。
a)CLドメインの点突然変異F7X(Xは、S、A、又はVのいずれかである);及び
b)CH1ドメインの点突然変異A20L
を含み、ナンバリングはIMGTに従う。
A
a)上記第1のFabアームは、上記で同定された点突然変異によって具体的に特徴付けられる、本明細書に記載される同種のLC/HC二量体を含み、特に、1つ又は2つの点突然変異は、反対の極性である、CLドメインの18位のアミノ酸残基、及びCH1ドメインの26位のアミノ酸残基が提供され、CLドメイン及びCH1ドメインは、上記で同定された支持的な点突然変異、特にCLドメイン中点突然変異F7X(Xは、S、A、若しくはVのいずれかである)、及びCH1ドメインの点突然変異A20Lをさらに含み;ならびに
b)上記第2のFabアームは、a)の点突然変異のいずれも含まない、又は
B
a)上記第1のFabアームは、上記で同定された点突然変異によって具体的に特徴付けられる、本明細書に記載される同種のLC/HC二量体を含み、特に、1つ又は2つの点突然変異は、反対の極性である、CLドメインの18位のアミノ酸残基、及びCH1ドメインの26位のアミノ酸残基が提供され、CLドメイン及びCH1ドメインは、上記で同定された支持的な点突然変異、特にCLドメイン中点突然変異F7X(Xは、S、A、若しくはVのいずれかである)、及びCH1ドメインの点突然変異A20Lをさらに含まない;ならびに
b)上記第2のFabアームは、上記で同定された支持的な点突然変異、特にCLドメインの点突然変異F7X(Xは、S、A、又はVのいずれかである)、及びCH1ドメインの点突然変異A20Lを含む
によって特徴付けられる。
a)第1のFabアームのHCが第1のFabアームのLCと対形成するか又はそれに結合することが好ましく、第2のFabアームのLCと対形成するか又はそれに結合するが好ましくはなく;及び
b)第1のFabアームのLCが第1のFabアームのHCと対形成するか又はそれに結合することが好ましく、第2のFabアームのHCと対形成するか又はそれに結合するが好ましくはない;これは、
c)第2のFabアームのHCが第2のFabアームのLCと対形成するか又はそれに結合することが好ましく、第1のFabアームのLCと対形成するか又はそれに結合することが好ましくはなく;及び
d)第2のFabアームのLCが第2のFabアームのHCと対形成するか又はそれに結合することが好ましく、第1のFabアームのHCと対形成するか又はそれに結合することが好ましくはない
ことを意味する支持的な点突然変異を含む第2のFabアームによって特徴付けられる。
a)18位のアミノ酸残基はCH1ドメインを特異的に認識する正極性のものであり、26位のアミノ酸残基は負極性のものである、CLドメインを含む第1のFabアーム;及び
b)18位のアミノ酸残基はCH1ドメインを特異的に認識する負極性のものであり、26位のアミノ酸残基が正極性のものである、CLドメインを含む第2のFabアーム
を産生し、任意選択的に、支持的な点突然変異は、第1のFabアーム又は第2のFabアームのいずれかにある。
a)18位のアミノ酸残基はCH1ドメインを特異的に認識する正極性のものであり、26位のアミノ酸残基は負極性のものである、CLドメインを含む第1のFabアーム;及び
b)CLドメインの18位のアミノ酸残基及び/又はCH1ドメインの26位のアミノ酸残基は、電荷を有さないものであり、特にN、C、Q、G、S、T、W、若しくはYのいずれか;又は非極性のものであり、特にA、I、L、M、F、P若しくはVのいずれかである、第2のFabアーム
であり、任意選択的に、支持的な点突然変異は、第1のFabアーム又は第2のFabアームのいずれかにある。
a)ヒトIgA及びIgG CH3配列の交互セグメントから構成される鎖交換設計ドメイン(SEED)CH3ヘテロ二量体;
b)1つ若しくは複数のノブ若しくはホール突然変異、好ましくはT366Y/Y407’T、F405A/T394’W、T366Y:F405A/T394‘W:Y407’T、T366W/Y407’A及びS354C:T366W/Y349’C:T366’S:L368’A:Y407’Vのいずれか;
c)第2のCH3ドメインのシステイン残基に共有結合し、これによりドメイン間ジスルフィド架橋が導入され、好ましくは両方のCH3ドメインのC末端を連結する、第1のCH3ドメインのシステイン残基;
d)反発性の電荷がヘテロ二量体の形成を抑制する1つ若しくは複数の突然変異、好ましくはK409D/D399’K、K409D/D399’R、K409E/D399’K、K409E/D399’R、K409D:K392D/D399’K:E356’K又はK409D:K392D:K370D/D399’K:E356’K:E357’Kのいずれか;並びに/又は
e)ヘテロ二量体形成及び/若しくは熱安定性のために選択された1つ若しくは複数の突然変異、好ましくはT350V:L351Y:F405A:Y407V/T350V:T366L:K392L:T394W、
T350V:L351Y:F405A:Y407V/T350V:T366L:K392M:T394W、
L351Y:F405A:Y407V/T366L:K392M:T394W、
F405A:Y407V/T366L:K392M:T394W、又は
F405A:Y407V/T366L:T394Wのいずれか、
のうちの1つ又は複数を導入するように設計されている及び/又はこれにより特徴付けられる2つのCH3ドメインを含み、
但し、ナンバリングはKabatのEUインデックスに基づく。
a)抗体の生物学的に活性なフラグメントであり、該フラグメントは、分子の配列のうちの少なくとも50%、好ましくは少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、又は少なくとも95%、及び最も好ましくは少なくとも97%、98%、又は99%を含み、
b)少なくとも1つのアミノ酸が置換、付加、及び/又は除去された抗体に由来し、機能的に活性な変異体は、分子又はその一部分に対して配列相同性を有し、例えば、少なくとも50%の配列相同性、好ましくは少なくとも60%、より好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、なおもより好ましくは少なくとも90%、なおいっそうより好ましくは少なくとも95%、及び最も好ましくは少なくとも97%、98%、又は99%の配列相同性を有する抗体等であり、並びに/或いは
c)抗体又はその機能的に活性な変異体、及びポリペプチド又はヌクレオチド配列とは異種の少なくとも1つの更なるアミノ酸又はヌクレオチドから構成される。
a)CLドメインの18位のアミノ酸残基が正極性のものである場合、CH1ドメインの26位のアミノ酸残基は負極性のものである;又は
b)CLドメインの18位のアミノ酸残基が負極性のものである場合、CH1ドメインの26位のアミノ酸残基は正極性のものである。
T366Y/Y407’T、
F405A/T394’W、
T366Y:F405A/T394‘W:Y407’T、
T366W/Y407’A、及び/又は
S354C:T366W/Y349’C:T366’S:L368’A:Y407’V
が挙げられる。
VL/VH;
CL(Cラムダダ又はカッパ)/CH1;
CH2/CH2;
CH3/CH3。
IgG構造を有する二重特異性抗体が記載される。B10v5−Fabはヒトc−METに結合し、一方、hu225M−FabはヒトEGFR(上皮細胞増殖因子受容体)に結合する。hu225M軽鎖とhu225M重鎖との間の界面は、二重特異性IgGの両方の軽鎖をそれらの同種の重鎖に指向させる突然変異を有する。抗体のCH3ドメインは、重鎖のヘテロ二量体化を強化するためにSEEDドメイン(SEED−AG又はSEED−GAと呼ばれる、Davisら、2010年及び米国出願公開第2007/0287170A1号)によって置換される。LC−ESI−MS分析を用いて4つの鎖全ての正しい会合を確認する。以下では、この二重特異性IgGを説明するためにBxMという用語を使用する。
MKLPVRLLVLMFWIPASLSEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSLTNYGVHWMRQAPGQGLEWIGVIWSGGNTDYNTPFTSRVTITSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNHYTQKSLDRSPGK
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
MKLPVRLLVLMFWIPASLSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGTNIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGYGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQNYNWPTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRRITHTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK
下線部:シグナルペプチドMETDTLLLWVLLLWVPGSTG(配列番号10)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPVLTQPPSVSVAPGETATIPCGGDSLGSKIVHWYQQRPGQAPLLVVYDDAARPSGIPERFSGSKSGTTATLTISSVEAGDEADYFCQVYDYHSDVEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
下線部:シグナルペプチドMETDTLLLWVLLLWVPGSTG(配列番号10)
突然変異は、製造業者のプロトコルに従って、QuikChangeライトニング部位特異的突然変異誘発キット(#210519、Agilent Technologies)を用いた部位特異的突然変異誘発によって導入された。突然変異K26Dは、hu225M_HC_AGのCH1に導入され、突然変異T18Rは、hu225M_LCのCLに導入された。突然変異の導入の成功は、目的の遺伝子を配列決定することによって確認された。
MKLPVRLLVLMFWIPASLSEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSLTNYGVHWMRQAPGQGLEWIGVIWSGGNTDYNTPFTSRVTITSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVDDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNHYTQKSLDRSPGK
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
MKLPVRLLVLMFWIPASLSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGTNIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGYGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQNYNWPTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGRASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
BxMは、製造業者のプロトコルに従って、Expi293F(商標)細胞及びExpiFectamine(商標)293トランスフェクションキット(thermoFisher、A14525)を用いて発現させた。2つの異なるトランスフェクションが設定された:
LC−ESI−MSシステムで測定する前に、両方の試料のN−グリカンをPNGase Fを用いて放出させた。可能性のある10個全ての鎖対形成変異体の質量を計算し、それらの存在について質量スペクトルを分析した。4つの異なる鎖を含有するが、両方の軽鎖がそれらの非同種の重鎖に結合しているミスペアリング変異体(すなわち、交換された軽鎖を有するBxM)は、正しく会合されたBxMと同じ質量を有し、したがって正しく対形成したBxMと区別することできない。しかしながら、一方又は両方の軽鎖のそれらの非同種の重鎖へのミスペアリングを検出することができない場合、交換された軽鎖を有するBxMの存在を統計的に排除することができる。同様に、両方の軽鎖のミスペアリングが少量(<5%の相対存在量)でのみ検出される場合、上記ミスペアリング変異体はごく僅かな量(<1%)でしか存在しない。
SECを用いてBxM野生型及びBxM MaB40を分析した。両方のクロマトグラムは、IgGについて予想された15.6分に主ピークを示した。凝集の徴候は、突然変異体ならびに野生型において検出可能であった(図2)。
リアルタイムPCRシステムStep One Plusを用いてサーマルシフトアッセイを行った。BxM野生型及びBxM MaB40の濃度はPBS中1μMであり、20×最終濃度の色素Sypro Orange(Invitrogen)を使用した。両方の試料を三重に測定した。BxM野生型のサーモグラムは、64.8℃及び74.5℃で2つの変性事象を明らかにした。BxM MaB40のサーモグラムは、64.6℃及び74.6℃で2つの変性事象を明らかにした。したがって、界面突然変異は、タンパク質の熱安定性を損なわない。
BxM野生型及びMaB40のアフィニティーは、プロテインAで被覆されたバイオセンサーを備えたOctetシステムを用いて分析された。抗原として、cMET及びEGFRの細胞外ドメインを用いた。アフィニティーを決定するために3つの異なる濃度の抗体を試験した。cMETに対するBxM wtのKDは0.35nMであり、EGFRに対しては5.3nMであった。cMETに対するBxM MaB40のKDは0.42nMであり、EGFRに対しては2.9nMであり、これは、界面突然変異が抗体のアフィニティーを損なわないことを裏付けている。
BxMがその両方の抗原に同時に結合する能力は、ストレプトアビジン被覆したバイオセンサーを備えたOctet Systemを用いて確認された。まず、バイオセンサーは、ビオチン化cMETを含有する溶液に浸された。クエンチング及び緩衝液交換の後、バイオセンサーは、BxM野生型又はBxM MaB40のいずれかを含有する溶液に浸された。両方の場合において、抗体によるその第1の抗原への結合が検出された。その後、バイオセンサーは、EGFRを含有する溶液に浸され、第2の抗原への結合を野生型及びMaB40について検出した。
BxM野生型及びBxM MaB40は、標準的な技術に従って、ポリエチレンイミン(PEI)を用いた一過性トランスフェクションを使用するHEK293−6E細胞(National Research Council Canada)において発現された。発現されたIgGをプロテインAアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、PBSに対して透析した。両方のタンパク質試料の吸光度を280nmで測定して濃度を決定した。合計で、両方のタンパク質を発現させ、精製し、独立して3回測定して、平均収量を計算した。BxM野生型の収量は57.3mg/L(±13.7標準偏差)であり、BxM MaB40の収量は58.9mg/L(±7.3標準偏差)であり、これは、界面操作がタンパク質収量に有害な影響を及ぼさないことを実証している。
実施例1において記載したのと類似するIgG構造を有する二重特異性抗体が記載される。B10v5−Fabはヒトc−METに結合し、一方、OKT3−FabはヒトCD3に結合する。OKT3軽鎖とOKT3重鎖の間の界面は、実施例1において記載したのと同じ突然変異を有する。さらに、重鎖に対する軽鎖の正しい対形成をさらに強化するために、B10v5−Fabにおける突然変異を導入した。上記のように、SEED技術は、重鎖のヘテロ二量体化に適用された。LC−ESI−MS分析を使用して、4つ全ての鎖の正しい会合を確認した。以下では、この二重特異性IgGを説明するためにBxOという用語を使用する。
B10v5重鎖(配列番号9)及び軽鎖(配列番号11)は実施例1に記載されている。
MKLPVRLLVLMFWIPASLSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNHYTQKSLDRSPGK
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
MKLPVRLLVLMFWIPASLSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
突然変異は、上記のように製造業者のプロトコルに従って、QuikChangeライトニング部位特異的突然変異誘発キット(#210519、Agilent Technologies)を用いた部位特異的突然変異誘発によって導入された。OKT3では、CH1に突然変異K26D、及びCLにT18Rが導入された。B10v5では、CH1に突然変異A20L、及びCLにF7S、F7A又はF7Vのいずれかが導入された。突然変異の導入の成功は、目的の遺伝子を配列決定することによって確認された。
MKLPVRLLVLMFWIPASLSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVDDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNHYTQKSLDRSPGK
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
MKLPVRLLVLMFWIPASLSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGRASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
下線部:シグナルペプチドMKLPVRLLVLMFWIPASLS(配列番号7)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRRITHTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTALLGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK
下線部:シグナルペプチドMETDTLLLWVLLLWVPGSTG(配列番号10)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPVLTQPPSVSVAPGETATIPCGGDSLGSKIVHWYQQRPGQAPLLVVYDDAARPSGIPERFSGSKSGTTATLTISSVEAGDEADYFCQVYDYHSDVEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLSPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
下線部:シグナルペプチドMETDTLLLWVLLLWVPGSTG(配列番号10)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPVLTQPPSVSVAPGETATIPCGGDSLGSKIVHWYQQRPGQAPLLVVYDDAARPSGIPERFSGSKSGTTATLTISSVEAGDEADYFCQVYDYHSDVEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLAPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
下線部:シグナルペプチドMETDTLLLWVLLLWVPGSTG(配列番号10)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPVLTQPPSVSVAPGETATIPCGGDSLGSKIVHWYQQRPGQAPLLVVYDDAARPSGIPERFSGSKSGTTATLTISSVEAGDEADYFCQVYDYHSDVEVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLVPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
下線部:シグナルペプチドMETDTLLLWVLLLWVPGSTG(配列番号10)
二重特異性抗体は、標準的な技術に従って、ポリエチレンイミン(PEI)を用いた一過性トランスフェクションを使用するHEK293−6E細胞において発現された。4つの異なるトランスフェクションが設定された:
測定前に両方の試料のN−グリカンをPNGase Fを用いて放出させた。実施例1に記載したように分析を実施した。界面突然変異の導入は、重鎖に対する軽鎖の検出可能なミスペアリングにおいて顕著な減少をもたらした(図3)。
SECを用いてBxO野生型、BxO MaB5/40及びBXO MaB45/40を分析した。全てのクロマトグラムは、IgGについて予想された15.5分に主ピークを示した(図4)。凝集の兆候は、突然変異体ならびに野生型において類似した量で検出可能であった。
実施例1は、hu225M Fabにおいて突然変異を有するか又は有しない、BxMと呼ばれる、IgG構造を有する二重特異性抗体の産生を記載する。LC−ESI−MSによるBxM野生型の分析は、軽鎖のそれらの同種の重鎖に対する正しい対形成を強化するためのいずれの操作もなしに、二重特異性IgGを産生する課題を実証する。両方の軽鎖は、それらの非同種の重鎖に、合わせて24%の量で結合することができ、これは、次に精製タンパク質試料の76%のみが正しく対形成した二重特異性IgGであったことを意味する。
GETAREAプログラム(Fraczkiewiczら、1998年、J.Comp.Chem.、第19巻、319〜333頁)を用いて、タンパク質の溶媒接触可能表面積又は溶媒和エネルギーを計算した。野生型CH1及びCLドメインを有するヒト免疫不全ウイルス1型のgp41に対するヒトモノクローナル抗体FabフラグメントであるヒトIgG1 Fabフラグメント1DFB.pdbの原子座標(Heら、1992年、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、第89巻:7154〜7158頁)、インプットとしてプログラムに供給された。1.4オングストロームのプローブ半径が適用された。CH1ドメインの残基ALA20及びLYS26、ならびにCLドメインのPHE7及びTHR18についてのプログラムのアウトプットを以下の表Iに示す。
Claims (15)
- 少なくともVH及びCH1抗体ドメインを含む抗体重鎖(HC)に会合した、VL及びCL抗体ドメインから構成される抗体軽鎖(LC)の同種の軽鎖/重鎖(LC/HC)二量体を含む抗原結合分子(ABM)であって、会合は、VLドメイン及びVHドメイン、並びにCLドメイン及びCH1ドメインの対形成によるものであり、CLドメインの18位及びCH1ドメインの26位のアミノ酸は反対極性のものであり、ナンバリングはIMGTに従う、前記抗原結合分子。
- A
a)CLドメインが、少なくとも点突然変異T18X(Xは、R、H、若しくはKのいずれかである)を含有する、配列番号1と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCカッパであり;
b)CH1ドメインが、少なくとも点突然変異K26X(Xは、D若しくはEのいずれかである)を含有する、配列番号3と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む;又は
B
a)CLドメインが、少なくとも点突然変異K18X(Xは、D又はEのいずれかである)を含有する、配列番号2と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCラムダであり;
b)CH1ドメインが、26位のKが他のいずれのアミノ酸によっても置換されていないか、若しくは少なくとも点突然変異K26X(Xは、R又はHのいずれかである)を含有する、配列番号3と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む;又は
C
a)CLドメインが、18位のKが他のいずれのアミノ酸によっても置換されていないか、若しくは少なくとも点突然変異K18X(Xは、R又はHのいずれかである)を含有する、配列番号2に対して少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むCラムダであり;
b)CH1ドメインが、少なくとも点突然変異K26X(Xは、D又はEのいずれかである)を含有する、配列番号3と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項1に記載のABMであって、
ナンバリングがIMGTに従う、前記ABM。 - 同種のLC/HC二量体が、CLドメイン及びCH1ドメインの間に少なくとも1つのドメイン間ジスルフィド架橋を含む、請求項1又は2に記載のABM。
- CLドメインが点突然変異F7Xをさらに含み、XがS、A、又はVのいずれかであり、CH1ドメインが点突然変異A20Lをさらに含み、ナンバリングがIMGTに従う、請求項1〜3のいずれか一項に記載のABM。
- VLドメイン及びVHドメインが、界面領域内のアミノ酸の極性を変化させるいずれの点突然変異をも含有しない、請求項1〜4のいずれか一項に記載のABM。
- HCが、少なくとも1つのCH2ドメイン及び少なくとも1つのCH3ドメインをさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載のABM。
- 抗体Fab若しくは(Fab)2フラグメント、又はFc部分を含む全長抗体のいずれかであり、好ましくはABMが全長IgG抗体である、請求項1〜5のいずれかに記載のABM。
- 異なる抗原又はエピトープを認識する第1及び第2のFabアームを含むヘテロ二量体抗体であって、第1及び第2のFabアームの一方のみが同種のLC/HC二量体を含むヘテロ二量体抗体である、請求項1〜6のいずれかに記載のABM。
- 第1及び第2のFabアームの一方のみが、
a)CLドメインにおける点突然変異F7X(XはS、A、又はVのいずれかである);及び
b)CH1ドメインにおける点突然変異A20L
を含み、ナンバリングがIMGTに従う、請求項8に記載のABM。 - A
a)前記第1のFabアームが、請求項1又は2のいずれかにおいて特定される点突然変異によって特徴付けられる同種のLC/HC二量体を含み、CL及びCH1ドメインは請求項4において特定される点突然変異をさらに含み;
b)前記第2のFabアームが、a)の点突然変異のいずれも含まない、又は
B
a)前記第1のFabアームが、請求項1又は2のいずれかにおいて特定される点突然変異によって特徴付けられる同種のLC/HC二量体を含み、CL及びCH1ドメインは請求項4において特定される点突然変異をさらに含まず;
b)前記第2のFabアームが、請求項4において特定される点突然変異を含む、
請求項8又は9に記載のABM。 - CH2及びCH3ドメインをそれぞれ含む2つのHCであって、二量体化してFc領域となるHCをさらに含み、CH3ドメインが、
a)ヒトIgA及びIgG CH3配列の交互セグメントから構成される鎖交換設計ドメイン(SEED)CH3ヘテロ二量体;
b)1つ又は複数のノブ又はホール突然変異、好ましくはT366Y/Y407’T、F405A/T394’W、T366Y:F405A/T394’W:Y407’T、T366W/Y407’A、及びS354C:T366W/Y349’C:T366’S:L368’A:Y407’Vのいずれか;
c)第2のCH3ドメインのシステイン残基に共有結合し、これによりドメイン間ジスルフィド架橋を導入する、好ましくは両方のCH3ドメインのC末端を連結する、第1のCH3ドメインにおけるシステイン残基;
d)斥力電荷がヘテロ二量体形成を抑制する1つ又は複数の突然変異、好ましくはK409D/D399’K、K409D/D399’R、K409E/D399’K、K409E/D399’R、K409D:K392D/D399’K:E356’K又はK409D:K392D:K370D/D399’K:E356’K:E357’Kのいずれか;及び/又は
e)ヘテロ二量体形成及び/又は熱安定性について選択された1つ又は複数の突然変異、好ましくは
T350V:L351Y:F405A:Y407V/T350V:T366L:K392L:T394W、
T350V:L351Y:F405A:Y407V/T350V:T366L:K392M:T394W、
L351Y:F405A:Y407V/T366L:K392M:T394W、
F405A:Y407V/T366L:K392M:T394W、又は
F405A:Y407V/T366L:T394W
のいずれか
のうちの1つ又は複数を導入するように設計されており、
ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う、請求項8〜10のいずれか1項に記載のABM。 - 請求項1〜11のいずれかに記載のABMをコードする単離された核酸。
- 請求項12に記載の核酸を組み込んでいる発現カセット又はベクター。
- 請求項12に記載の核酸、又は請求項13に記載の発現カセット若しくはベクターを含む宿主細胞。
- 前記ABMを発現する条件下で請求項14に記載の宿主細胞を培養することにより、請求項1〜11のいずれか一項に記載のABMを生成する方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17154388 | 2017-02-02 | ||
EP17154388.7 | 2017-02-02 | ||
PCT/EP2018/052624 WO2018141894A1 (en) | 2017-02-02 | 2018-02-02 | Preferred pairing of antibody domains |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020505929A true JP2020505929A (ja) | 2020-02-27 |
JP7123063B2 JP7123063B2 (ja) | 2022-08-22 |
Family
ID=57965749
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019541726A Active JP7123063B2 (ja) | 2017-02-02 | 2018-02-02 | 抗体ドメインの好ましい対形成 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20190352429A1 (ja) |
EP (1) | EP3577137A1 (ja) |
JP (1) | JP7123063B2 (ja) |
KR (1) | KR20190113870A (ja) |
CN (1) | CN110382537B (ja) |
AU (1) | AU2018214208A1 (ja) |
BR (1) | BR112019013648A2 (ja) |
CA (1) | CA3050988A1 (ja) |
IL (1) | IL268401A (ja) |
MX (1) | MX2019007984A (ja) |
SG (1) | SG11201905259SA (ja) |
WO (1) | WO2018141894A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201903796B (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20180069839A (ko) | 2015-10-08 | 2018-06-25 | 자임워크스 인코포레이티드 | 카파 및 람다 경사슬을 포함하는 항원-결합 폴리펩티드 구조체 및 이의 용도 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014150973A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Eli Lilly And Company | Methods for producing fabs and bi-specific antibodies |
WO2016087650A1 (en) * | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Merck Patent Gmbh | Domain-exchanged antibody |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
AU777192B2 (en) * | 1994-05-27 | 2004-10-07 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Immunosuppressant target proteins |
ES2442615T5 (es) * | 2002-07-18 | 2023-03-16 | Merus Nv | Producción recombinante de mezclas de anticuerpos |
SI1713503T1 (sl) * | 2004-02-10 | 2013-12-31 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Inhibicija faktorja B, alternativna komplementa pot in relevantni postopki |
EP1999154B1 (en) | 2006-03-24 | 2012-10-24 | Merck Patent GmbH | Engineered heterodimeric protein domains |
BRPI0815567B8 (pt) | 2007-07-17 | 2021-05-25 | Merck Patent Gessellschaft Mit Beschraenkter Haftung | anticorpos híbridos anti-alfa v-integrina projetados, proteína de fusão e composição farmacêutica |
CN101348475B (zh) * | 2007-07-20 | 2011-03-30 | 重庆人本药物研究院 | 一种奥利司他合成方法、中间体化合物及其制备方法 |
RU2570633C2 (ru) | 2009-05-27 | 2015-12-10 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Три- или тетраспецифические антитела |
JP6167040B2 (ja) * | 2010-11-05 | 2017-07-19 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | Fcドメイン中に突然変異を有する、安定したヘテロ二量体抗体の設計 |
PL2773671T3 (pl) * | 2011-11-04 | 2022-01-24 | Zymeworks Inc. | Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerycznego z mutacjami w domenie fc |
RU2639287C2 (ru) * | 2012-06-27 | 2017-12-20 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Способ отбора и получения высокоселективных и мультиспецифичных нацеливающих групп с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные связывающие группировки, и их применения |
UY35148A (es) * | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Amgen Inc | Immunoglobulinas heterodiméricas |
-
2018
- 2018-02-02 WO PCT/EP2018/052624 patent/WO2018141894A1/en unknown
- 2018-02-02 JP JP2019541726A patent/JP7123063B2/ja active Active
- 2018-02-02 CA CA3050988A patent/CA3050988A1/en active Pending
- 2018-02-02 SG SG11201905259SA patent/SG11201905259SA/en unknown
- 2018-02-02 BR BR112019013648A patent/BR112019013648A2/pt unknown
- 2018-02-02 EP EP18704923.4A patent/EP3577137A1/en active Pending
- 2018-02-02 KR KR1020197025298A patent/KR20190113870A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-02-02 MX MX2019007984A patent/MX2019007984A/es unknown
- 2018-02-02 CN CN201880009856.1A patent/CN110382537B/zh active Active
- 2018-02-02 US US16/476,380 patent/US20190352429A1/en active Pending
- 2018-02-02 AU AU2018214208A patent/AU2018214208A1/en active Pending
-
2019
- 2019-06-12 ZA ZA2019/03796A patent/ZA201903796B/en unknown
- 2019-07-31 IL IL268401A patent/IL268401A/en unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014150973A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Eli Lilly And Company | Methods for producing fabs and bi-specific antibodies |
WO2016087650A1 (en) * | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Merck Patent Gmbh | Domain-exchanged antibody |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
NATURE BIOTECHNOLOGY, vol. 32, no. 2, JPN6021044780, February 2014 (2014-02-01), pages 191 - 198, ISSN: 0004777538 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7123063B2 (ja) | 2022-08-22 |
CN110382537A (zh) | 2019-10-25 |
CN110382537B (zh) | 2023-07-25 |
IL268401A (en) | 2019-09-26 |
US20190352429A1 (en) | 2019-11-21 |
BR112019013648A2 (pt) | 2020-01-21 |
ZA201903796B (en) | 2022-11-30 |
SG11201905259SA (en) | 2019-08-27 |
KR20190113870A (ko) | 2019-10-08 |
AU2018214208A1 (en) | 2019-07-11 |
WO2018141894A1 (en) | 2018-08-09 |
RU2019119391A3 (ja) | 2021-05-25 |
MX2019007984A (es) | 2019-10-15 |
EP3577137A1 (en) | 2019-12-11 |
CA3050988A1 (en) | 2018-08-09 |
RU2019119391A (ru) | 2021-03-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10982008B2 (en) | Domain-exchanged antibody | |
US10294307B2 (en) | Methods for producing fabs and bi-specific antibodies | |
US11623963B2 (en) | Cysteine engineered antigen-binding molecules | |
WO2020135556A1 (zh) | 抗体融合蛋白、制备方法及其应用 | |
US20240092899A1 (en) | Bispecific antibody | |
CN107949570A (zh) | 多特异性结合蛋白 | |
JP7076571B2 (ja) | 細胞エンゲージ結合分子 | |
JP7123063B2 (ja) | 抗体ドメインの好ましい対形成 | |
TW202400642A (zh) | 抗CD28x抗PSMA抗體 | |
WO2022125986A1 (en) | Orthogonal mutations for heterodimerization | |
KR20220017909A (ko) | 단백질 다량체화를 위한 변이체 도메인 및 그의 분리 | |
RU2792440C2 (ru) | Предпочтительное спаривание доменов антител | |
RU2792440C9 (ru) | Предпочтительное спаривание доменов антител | |
WO2016087648A1 (en) | Immunoglobulins with incorporated heterologous ch3 domains resulting in a prolonged half-life | |
TW202346337A (zh) | Ilt3及cd3結合劑以及其使用方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210201 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20211105 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220121 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220121 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220523 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220711 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220715 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220809 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7123063 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |