JP2020505007A - コアギュローゲンを含まない、清澄化リムルスアメボサイトライセート - Google Patents
コアギュローゲンを含まない、清澄化リムルスアメボサイトライセート Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020505007A JP2020505007A JP2019536071A JP2019536071A JP2020505007A JP 2020505007 A JP2020505007 A JP 2020505007A JP 2019536071 A JP2019536071 A JP 2019536071A JP 2019536071 A JP2019536071 A JP 2019536071A JP 2020505007 A JP2020505007 A JP 2020505007A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lal
- clarified
- coagulogen
- centrifuging
- substantially free
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000012480 LAL reagent Substances 0.000 title claims abstract description 281
- 108010045487 coagulogen Proteins 0.000 title claims abstract description 142
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 141
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 133
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 92
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims abstract description 82
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 47
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 32
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 19
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims description 79
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 78
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 59
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 56
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 49
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 30
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 claims description 26
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 25
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 23
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 23
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 21
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical group NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 14
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 12
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 12
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 11
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 8
- -1 vaccines Substances 0.000 claims description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 6
- 108010065152 Coagulase Proteins 0.000 claims description 5
- 241000239218 Limulus Species 0.000 claims description 5
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 claims description 5
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 claims description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 31
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 26
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 25
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 23
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 14
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 5
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 5
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 5
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- LOHQECMUTAPWAC-UHFFFAOYSA-N coagulin Natural products C1C(C)=C(CO)C(=O)OC1C1(C)C(C2(C)CCC3C4(C(=O)CC=CC4=CCC43)C)(O)CCC24O1 LOHQECMUTAPWAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 4
- 238000011050 LAL assay Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- QRMZSPFSDQBLIX-UHFFFAOYSA-N homovanillic acid Chemical compound COC1=CC(CC(O)=O)=CC=C1O QRMZSPFSDQBLIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000012454 limulus amebocyte lysate test Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 101710112984 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- ZTOBILYWTYHOJB-WBCGDKOGSA-N 3',6'-bis[[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy]spiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C2C3(C4=CC=CC=C4C(=O)O3)C3=CC=C(O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O4)O)C=C3OC2=C1 ZTOBILYWTYHOJB-WBCGDKOGSA-N 0.000 description 2
- KZZWQCKYLNIOBT-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-nitrobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(O)=O)=C1 KZZWQCKYLNIOBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AKASINKCIWHQEP-UHFFFAOYSA-N 7-amino-4-methoxychromen-2-one Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2OC AKASINKCIWHQEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 101710159910 Movement protein Proteins 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 2
- 101710090398 Viral interleukin-10 homolog Proteins 0.000 description 2
- BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N Zwittergent 3-14 Chemical group CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 2
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 108010055222 clotting enzyme Proteins 0.000 description 2
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 2
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000012471 diafiltration solution Substances 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- DEKPYXUDJRABNK-UHFFFAOYSA-N dimethyl 5-aminobenzene-1,3-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC(N)=CC(C(=O)OC)=C1 DEKPYXUDJRABNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007893 endotoxin activity Effects 0.000 description 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 2
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CWRWJDAEKWYUJT-CGKXPTHNSA-N 1-(9S,13S,12-oxophytodienoyl)-2-(7Z,10Z,13Z)-hexadecatrienoyl-3-(beta-D-galactosyl)-sn-glycerol Chemical compound C([C@H](OC(=O)CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CC)COC(=O)CCCCCCC[C@@H]1[C@@H](C(=O)C=C1)C\C=C/CC)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O CWRWJDAEKWYUJT-CGKXPTHNSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJVBZCCNLAAMOV-UHFFFAOYSA-N 2h-1,2-benzothiazine Chemical compound C1=CC=C2C=CNSC2=C1 UJVBZCCNLAAMOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 1
- QULZFZMEBOATFS-DISONHOPSA-N 7-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyphenoxazin-3-one Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(N=C2C(=CC(=O)C=C2)O2)C2=C1 QULZFZMEBOATFS-DISONHOPSA-N 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- DNZFESRTJRPWGZ-UHFFFAOYSA-N C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3NC12.S1NC=CC2=C1C=CC=C2 Chemical compound C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3NC12.S1NC=CC2=C1C=CC=C2 DNZFESRTJRPWGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000589601 Francisella Species 0.000 description 1
- 241001183186 Fusobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000239220 Limulus polyphemus Species 0.000 description 1
- 241000239205 Merostomata Species 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000588656 Neisseriaceae Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920012266 Poly(ether sulfone) PES Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000947836 Pseudomonadaceae Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- NFIKTSWJXJTUBZ-ZEQRLZLVSA-N benzyl n-[2-[(2s)-2-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]carbamate Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC2=CC=3OC(=O)C=C(C=3C=C2)C)CCN1C(=O)CNC(=O)OCC1=CC=CC=C1 NFIKTSWJXJTUBZ-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 108010072542 endotoxin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 1
- 150000002386 heptoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 206010040560 shock Diseases 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008718 systemic inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/50—Lipopolysaccharides; LPS
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
基質+H2O+酵素→ペプチド+pNA(黄色)
[0063]いくつかの実施形態において、グラム陰性菌エンドトキシンは、LAL中の酵素前駆体の活性化を間接的に触媒することが可能である。活性化の最初の速度は、存在するエンドトキシンの濃度によって決まる可能性がある。
清澄化LAL−coを使用したエンドトキシン検出の改善
[0099]実質的にコアギュローゲンを含まないLAL(LAL−co)及び清澄化LAL−coを含有するサンプルの発色エンドトキシンアッセイ(chromogenic endotoxin assay)の反応速度及び感度を、図1に示すように、96ウェルプレート上で試験した。行A〜Fは、エンドトキシン標準の量を増加させることを含む。50%のLAL−co又は清澄化LAL−coを含有する第1の溶液を発色基質を含有する第2の溶液と合わせて第3の最終溶液を形成し、その後、第3の溶液をエンドトキシンを含有するサンプルと接触させた。図1の列1〜3では、第3の溶液は、50%の清澄化LAL−coの第1の溶液、及び50%の第2の溶液を含有していた(すなわち、第3の最終溶液の25%が清澄化LAL−coを含有していた)(50/50/50溶液)。図1の列4〜6では、第3の溶液は、80%の清澄化LAL−coの溶液、及び20%の第2の溶液を含有していた(すなわち、第3の最終溶液の40%が清澄化LAL−coを含有している)(50/80/20溶液)。図1の列7〜9では、第3の溶液は、50%の全LAL−coの溶液、及び50%の第2の溶液を含有していた(すなわち、最終溶液の25%が全LAL−coを含有している)。図1の列10〜12では、第3の溶液は、80%の全LAL−coの溶液、及び20%の第2の溶液を含有している(すなわち、最終溶液の40%が全LAL−coを含有している)。
清澄化LAL−coの調製
[00101]図3は、清澄化LAL−coを調製する方法を示す概略図である。最初に、溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイトの複数バッチをプールし、LALデイプールを形成した。LALデイプールを、4℃において2000rpmで8分間遠心分離した。上澄みを注意深く除去し、バッファーと合わせた。得られた溶液を、30kDamPESメンブランフィルターを使用したタンジェンシャルフローろ過(TFF)によりろ過した。保持液は、LAL−coを含有していた。その後、保持液を4℃において5000rpmで5分間遠心分離し(図2参照)、上澄みを保管容器に移し、4℃において保管した。
実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALを形成するために使用するLALデイプールの安定性
[00102]清澄化LAL−coを形成するために使用するLALデイプールの安定性を、0.0005EU/mL及び0.005EU/mL標準を使用して調査した。LALデイプールを1年間、2年間、及び3年間保管し、清澄化LAL−coを形成するために使用した。示した期間の終わりに、清澄化LAL−coサンプルを使用して50%の清澄化LAL−coを含有する溶液を形成し、その後溶液をLAL発色試薬と80:20の比率で混合して96ウェルプレートに入れ、その後405nmにおける吸光度を測定するインキュベートプレートリーダーに入れた。その反応を黄色の外観により経時的に自動的に監視した。
[00104]連続的なタンジェンシャルフローろ過のさまざまなダイアフィルトレーション容量(DV)を調査し、(ブランクと0.005EU/mL標準とを比較して)どの容量が、1200秒の反応時間を達成しながらにして最良の感度を示したかを決定した。図10参照。4DVを超えるとコアギュローゲンが除去され、1200秒未満の反応時間を達成することを発見した。5、6、及び7DVが、所望の反応時間を示すと同時に、最も高い感度を示してダイアフィルトレーション容量を最小化した。
[00106]未ろ過LAL組成物中には、多数のタンパク質が存在することが知られている。いくつかの既知のタンパク質の一覧を図14に示す。Iwanaga Sら、Frontiers in Bioscience 3. 973:973〜984(1998)。30kDa未満の分子量のタンパク質は、影付きにされている。他の小分子の除去が性能向上に寄与するかどうかを決定するための調査を実施した。LAL組成物を、30kDaフィルター又は10kDaフィルターのいずれかを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過に供した。予想通り、SDS−PAGEは、コアギュローゲン(およそ20kDa)は30kDaフィルターを使用して除去されるが、10kDaフィルターでは除去されないことを実証した。図15参照。30kDaフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過は、未ろ過LAL及び10kDaフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過の両方と比較して、反応時間を減少させることが示された。30kDaフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過はまた、未ろ過LAL及び10kDaフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過の両方と比較して、ブランクと0.005EU/mLサンプルとの間の分離を改善した。
[00107]遠心分離速度が反応速度及び分離に及ぼす影響を評価した。LAL組成物を調製し、その後、10,000×g、20,000×g、30,000×g又は40,000×gのいずれかにおいて、30分間遠心分離した。その後、ブランク及び0.005EU/mL標準の両方を使用して、反応時間及び分離に関して保持液を試験した。それぞれの保持液の光学密度もまた、測定した。結果は、図17及び図18でわかる。未清澄化材料は、遠心分離した保持液よりも高い光学密度を有する。分離と遠心分離速度との間の相関もまた観察し、この場合、遠心分離速度を増加させると、ブランクと0.005EU/mL標準との間のより大きな分離がもたらされる。清澄化された保持液の性能を評価するために実施する、405nMにおける吸光プレートリーダーを利用したカイネティック-比色法アッセイ(Kinetic chromogenic assays)(デルタt(秒):30、デルタmOD:50)は、遠心分離が、エンドトキシンとは無関係に基質が切断されることに寄与する何かを除去していることを示唆しており、これは清澄化ステップのさらなる効果を示唆するものである。
[00108]実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALを凍結及び解凍することにより引き起こされる、性能に対する影響を調査した。本明細書に記載されている方法(30kDaの連続的なTFF、30,000×gにおいて遠心分離)により調製した保持液の活性を、凍結前、及びその後保持液を凍結して室温において解凍した後に測定した。結果を図19に示す。この調査は、凍結/解凍前後の同等の性能を示唆していた。
Claims (85)
- 清澄化リムルスアメボサイトライセート(LAL)を含む組成物であって、実質的にコアギュローゲンを含まない、組成物。
- バッファーをさらに含み、30%〜60%(v/v)の清澄化LALを含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記バッファーが、トリスバッファーである、請求項2に記載の組成物。
- 前記バッファーが、約25mM〜約50mMの濃度である、請求項2又は3に記載の組成物。
- 界面活性剤をさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記界面活性剤が、両性イオン界面活性剤である、請求項5に記載の組成物。
- 前記界面活性剤が、約0.002%〜約0.02%の濃度を有する、請求項5又は6に記載の組成物。
- 約50%の清澄化LALを含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組成物。
- 発色基質をさらに含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記発色基質が、3個を超えるアミノ酸と共有結合したp−ニトロアニリン(pNA)である、請求項9に記載の組成物。
- 前記発色基質が、Ac−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAである、請求項10に記載の組成物。
- 前記発色基質が、約0.11mg/mL〜約0.77mg/mLの濃度を有する、請求項9〜11のいずれか一項に記載の組成物。
- 凍結乾燥されている、請求項1〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- 水溶液中にある、請求項1〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- a.請求項1に記載の清澄化リムルスアメボサイトライセート(LAL)と、
b.バッファーと、
c.界面活性剤と、
d.発色基質とを含む組成物であって、
30%〜50%のLAL(v/v)及び10%〜30%(v/v)の発色基質を含む、組成物。 - 35%〜45%のLAL及び15%〜25%の発色基質を含む、請求項15に記載の組成物。
- 40%のLAL及び20%の発色基質を含む、請求項15に記載の組成物。
- 清澄化LALを含み、実質的にコアギュローゲンを含まない組成物であって、
a.溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイト由来の溶液を4℃において2,000rpmで8分間遠心分離し、上澄みを生成するステップと、
b.(a)の上澄みをバッファーと合わせるステップと、
c.(b)の組み合わせを30kDaメンブランフィルターを使用したタンジェンシャルフローろ過に供し、保持液を生成するステップと、
d.(c)の保持液を4℃において5,000rpmで5分間遠心分離し、上澄みを生成するステップであり、前記上澄みが、実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALである、ステップとを含む、
方法により生成される、組成物。 - 清澄化LALを含み、実質的にコアギュローゲンを含まない組成物であって、
a.溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイト由来の溶液を得るステップと、
b.(a)の溶液をバッファーと合わせるステップと、
c.(b)の組み合わせを20kDa〜50kDaメンブランフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過(TFF)に供し、保持液を生成するステップと、
d.(c)の保持液を20,000×g超において25分を超える間遠心分離し、上澄みを生成するステップであり、前記上澄みが、実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALである、ステップとを含む、
方法により生成される、組成物。 - 前記連続的なTFF(c)が、少なくとも4のダイアフィルトレーション容量を含む、請求項19に記載の方法。
- ステップ(c)の前記連続的なTFF(c)が、少なくとも6のダイアフィルトレーション容量を含む、請求項19又は20に記載の方法。
- 発色アッセイを使用して、サンプル中のエンドトキシンを検出する方法であって、前記方法が、
a.前記サンプルをリムルスアメボサイトライセート(LAL)及び発色基質を含む試薬と接触させるステップと、
b.前記サンプル中のエンドトキシンの存在下における前記発色基質の変化によって生じる発色効果を測定するステップとを含み、
前記LALが、清澄化されており、実質的にコアギュローゲンを含まない、方法。 - 前記基質が、3個を超えるアミノ酸と共有結合したp−ニトロアニリン(pNA)である、請求項22に記載の方法。
- 前記発色基質が、Ac−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAである、請求項22又は23に記載の方法。
- 前記発色基質の前記変化が、酵素反応により起こる、請求項22〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記酵素反応が、ポリペプチドからの発色団の切断である、請求項25に記載の方法。
- 発色効果を測定する前記ステップが、380nm〜420nmにおける吸光度を測定することによって達成される、請求項22〜26のいずれか一項に記載の方法。
- 発色効果を測定する前記ステップが、405nmにおける吸光度を測定することによって達成される、請求項22〜27のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試薬が、液体である、請求項22〜28のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試薬が、水性液体である、請求項22〜29のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試薬が、凍結乾燥され、その後、前記サンプルと接触させるステップに先立って水性液体中で再構成される、請求項22〜30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記LALが、凍結乾燥され、その後、前記サンプルと接触させるステップに先立って再構成される、請求項22〜31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記LALが、凍結され、その後、サンプルと接触させるステップに先立って解凍される、請求項22〜31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発色基質が、凍結乾燥され、その後、サンプルと接触させるステップに先立って再構成される、請求項22〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、生物学的サンプルである、請求項22〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、非経口剤形、ワクチン、抗生剤、治療用タンパク質、治療用核酸、治療用抗体、及び生物学的製剤からなる群から選択される、請求項22〜35のいずれか一項に記載の方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない前記清澄化LALが、SDS−PAGE及びタンパク質染色によって測定される場合に、前記LAL中の総タンパク質に対して5%(wt/wt)未満のコアギュローゲンを有する、請求項1〜36のいずれか一項に記載の組成物又は方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない前記清澄化LALが、SDS−PAGE及びタンパク質染色によって測定される場合に、前記LAL中の総タンパク質に対して2%(wt/wt)未満のコアギュローゲンを有する、請求項1〜36のいずれか一項に記載の組成物又は方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない前記清澄化LALが、SDS−PAGE及びタンパク質染色によって測定される場合に、前記LAL中の総タンパク質に対して0.5%(wt/wt)未満のコアギュローゲンを有する、請求項1〜36のいずれか一項に記載の組成物又は方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない前記清澄化LALが、5μg/μL未満のコアギュローゲン濃度を有する、請求項1〜39のいずれか一項に記載の組成物又は方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない前記清澄化LALが、3μg/μL未満のコアギュローゲン濃度を有する、請求項1〜39のいずれか一項に記載の組成物又は方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない前記清澄化LALが、2μg/μL未満のコアギュローゲン濃度を有する、請求項1〜39のいずれか一項に記載の組成物又は方法。
- 前記発色アッセイが、シングルキュベット分光測定、マルチキュベット分光測定、又はマイクロプレートリーダーを使用して行われる、請求項22〜42のいずれか一項に記載の方法。
- 前記発色効果を標準と比較して、前記サンプル中のエンドトキシンの量を求めるステップをさらに含む、請求項22〜43のいずれか一項に記載の方法。
- 発色アッセイを使用して、生物学的サンプル中のエンドトキシンを検出する方法であって、前記方法が、
a.前記生物学的サンプルを清澄化LAL及びAc−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAを含む試薬と接触させるステップと、
b.前記サンプル中のエンドトキシンの存在下におけるAc−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAからのpNAの酵素切断によって生じる405nmにおける吸光度の変化を測定するステップとを含み、
前記LALが、実質的にコアギュローゲンを含まない、方法。 - 前記試薬が、バッファー及び界面活性剤をさらに含む、請求項45に記載の方法。
- (a)の前に、バッファー、界面活性剤、及び清澄化LALを含む溶液が、Ac−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAを含む溶液と混合される、請求項45又は46に記載の方法。
- バッファー、界面活性剤、及び清澄化LALを含む前記溶液が、45%〜55%の清澄化LALを含む、請求項47に記載の方法。
- バッファー、界面活性剤、及び清澄化LALを含む前記溶液が、50%の清澄化LALを含む、請求項48に記載の方法。
- 前記試薬が、15%〜25%のAc−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAを含む、請求項45〜49のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試薬が、20%のAc−Ile−Glu−Ala−Arg−pNAを含む、請求項50に記載の方法。
- 0.0001EU/mL〜1.0EU/mLエンドトキシンの感度を有する、請求項45〜51のいずれか一項に記載の方法。
- a.清澄化されており、実質的にコアギュローゲンを含まないリムルスアメボサイトライセート(LAL)と、
b.発色基質と、
c.前記LAL及び発色基質を使用してエンドトキシンを検出するための説明書と
を含む、キット。 - 前記LALが、凍結乾燥されている、請求項53に記載のキット。
- 前記LALが、水溶液中にある、請求項53に記載のキット。
- 前記LAL及び前記発色基質が、単一の容器に入れてある、請求項53〜55のいずれか一項に記載のキット。
- 前記LALを含む滅菌容器をさらに含む、請求項53〜56のいずれか一項に記載のキット。
- 前記滅菌容器が、滅菌バイアルである、請求項57に記載のキット。
- 対照標準エンドトキシンをさらに含む、請求項53〜58のいずれか一項に記載のキット。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化リムルスアメボサイトライセート(LAL)を生成する方法であって、
a.溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイト由来の溶液を2〜10℃において1000〜3000rpmで2〜15分間遠心分離し、上澄みを生成するステップと、
b.(a)の上澄みをバッファーと合わせるステップと、
c.(b)の組み合わせを20kDa〜50kDaフィルターを使用してろ過し、保持液を生成するステップと、
d.(c)の保持液を2〜10℃において3000〜7000rpmで2〜10分間遠心分離し、上澄みを生成するステップであり、前記上澄みが、実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALを含む、ステップとを含む、
方法。 - (a)の遠心分離する前記ステップが、2000rpmにおいて遠心分離するステップを含む、請求項60に記載の方法。
- (a)の遠心分離する前記ステップが、8分間遠心分離するステップを含む、請求項60又は61に記載の方法。
- (a)の遠心分離する前記ステップが、4℃において遠心分離するステップを含む、請求項60〜62のいずれか一項に記載の方法。
- (c)のろ過する前記ステップが、30kDaフィルターを使用するステップを含む、請求項60〜63のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、5000rpmにおいて遠心分離するステップを含む、請求項60〜64のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、5分間遠心分離するステップを含む、請求項60〜65のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、4℃において遠心分離するステップを含む、請求項60〜66のいずれか一項に記載の方法。
- 前記バッファーが、トリスバッファー又はMESバッファーである、請求項60〜67のいずれか一項に記載の方法。
- 前記バッファーが、約7.0〜8.0のpHを有する、請求項60〜68のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ろ過が、タンジェンシャルフローろ過(TFF)である、請求項60〜69のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TFFが、350ml/分〜500ml/分の流量で実施される、請求項70に記載の方法。
- 前記フィルターが、修飾ポリエーテルスルホン(mPES)メンブランフィルターである、請求項60〜71のいずれか一項に記載の方法。
- 実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化リムルスアメボサイトライセート(LAL)を生成する方法であって、
a.溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイト由来の溶液を得るステップと、
b.(a)の溶液をバッファーと合わせるステップと、
c.(b)の組み合わせを20kDa〜50kDaメンブランフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過(TFF)に供し、保持液を生成するステップと、
d.(c)の保持液を20,000×g超において25分を超える間遠心分離し、上澄みを生成するステップであり、前記上澄みが、実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALである、ステップとを含む、
方法。 - 実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化リムルスアメボサイトライセート(LAL)を生成する方法であって、
a.溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイト由来の溶液を得るステップと、
b.(a)の溶液をバッファーと合わせるステップと、
c.(b)の組み合わせを20kDa〜50kDaメンブランフィルターを使用した連続的なタンジェンシャルフローろ過(TFF)に供し、保持液を生成するステップと、
d.(c)の保持液を20,000×g超において遠心分離し、上澄みを生成するステップであり、前記上澄みが、実質的にコアギュローゲンを含まない清澄化LALである、ステップとを含む、
方法。 - (a)の前記溶液が、溶解されたアメリカカブトガニ由来のアメボサイトを2〜10℃において1000〜3000rpmで2〜15分間遠心分離するステップから入手した、上澄みを含む、請求項73又は74に記載の方法。
- (a)の遠心分離する前記ステップが、2000rpmにおいて遠心分離するステップを含む、請求項75に記載の方法。
- (a)の遠心分離する前記ステップが、8分間遠心分離するステップを含む、請求項75又は76に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、2〜10℃において遠心分離するステップを含む、請求項73〜77のいずれか一項に記載の方法。
- (c)の前記連続的なTFFが、少なくとも4のダイアフィルトレーション容量を含む、請求項73〜78のいずれか一項に記載の方法。
- (c)の前記連続的なTFFが、少なくとも6のダイアフィルトレーション容量を含む、請求項73〜79のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、40,000×gにおいて遠心分離するステップを含む、請求項73〜80のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、30分間遠心分離するステップを含む、請求項73〜81のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の遠心分離する前記ステップが、少なくとも20分間遠心分離するステップを含む、請求項74〜81のいずれか一項に記載の方法。
- 前記バッファーが、トリスバッファー又はMESバッファーである、請求項73〜83のいずれか一項に記載の方法。
- 前記バッファーが、約7.0〜8.0のpHを有する、請求項73〜84のいずれか一項に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022166858A JP2023002669A (ja) | 2017-01-11 | 2022-10-18 | コアギュローゲンを含まない、清澄化リムルスアメボサイトライセート |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762445136P | 2017-01-11 | 2017-01-11 | |
US62/445,136 | 2017-01-11 | ||
PCT/US2018/013310 WO2018132562A1 (en) | 2017-01-11 | 2018-01-11 | Coagulogen-free clarified limulus amebocyte lysate |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022166858A Division JP2023002669A (ja) | 2017-01-11 | 2022-10-18 | コアギュローゲンを含まない、清澄化リムルスアメボサイトライセート |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020505007A true JP2020505007A (ja) | 2020-02-20 |
JP2020505007A5 JP2020505007A5 (ja) | 2021-02-12 |
JP7507560B2 JP7507560B2 (ja) | 2024-06-28 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04134265A (ja) * | 1990-09-27 | 1992-05-08 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | カブトガニ・アメボサイト・ライセートの調製法 |
WO2012057609A1 (en) * | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Universiti Malaysia Terengganu | Process for the preparation of amoebocyte lysate from the haemolymph of the horseshoe crab |
JP2019526052A (ja) * | 2016-08-03 | 2019-09-12 | ロンザ ウォーカーズヴィル,インコーポレーテッド | 実質的にコアギュローゲンを含まないリムルスアメボサイトライセートを使用してエンドトキシンを検出する方法 |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04134265A (ja) * | 1990-09-27 | 1992-05-08 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | カブトガニ・アメボサイト・ライセートの調製法 |
WO2012057609A1 (en) * | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Universiti Malaysia Terengganu | Process for the preparation of amoebocyte lysate from the haemolymph of the horseshoe crab |
JP2019526052A (ja) * | 2016-08-03 | 2019-09-12 | ロンザ ウォーカーズヴィル,インコーポレーテッド | 実質的にコアギュローゲンを含まないリムルスアメボサイトライセートを使用してエンドトキシンを検出する方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CLIN CHIM ACTA, 1985, VOL. 149, NO. 1, PP. 55-65, JPN6021051598, ISSN: 0004672939 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20180208964A1 (en) | 2018-07-26 |
CN110192110B (zh) | 2023-01-10 |
KR102545029B1 (ko) | 2023-06-19 |
JP2023002669A (ja) | 2023-01-10 |
EP3552021B1 (en) | 2022-10-26 |
WO2018132562A1 (en) | 2018-07-19 |
IL267593A (en) | 2019-08-29 |
EP3552021A1 (en) | 2019-10-16 |
KR20190104387A (ko) | 2019-09-09 |
CN110192110A (zh) | 2019-08-30 |
US20220267824A1 (en) | 2022-08-25 |
US11352656B2 (en) | 2022-06-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7044222B2 (ja) | 実質的にコアギュローゲンを含まないリムルスアメボサイトライセートを使用してエンドトキシンを検出する方法 | |
JP2023002669A (ja) | コアギュローゲンを含まない、清澄化リムルスアメボサイトライセート | |
US20190271699A1 (en) | Methods and compositions for the detection of microbial contaminants | |
JP5334412B2 (ja) | 腹膜透析溶液中の微生物汚染物を検出するための方法および組成物 | |
EP1977244B1 (fr) | Distinction des meningites bacteriennes et virales | |
US6270982B1 (en) | Methods and compositions for the detection of bacterial endotoxins | |
JP7507560B2 (ja) | コアギュローゲンを含まない、清澄化リムルスアメボサイトライセート | |
US10473663B2 (en) | Heat-treated limulus amebocyte lysates | |
IE44448B1 (en) | Gonococcal pili processes for the preparation thereof and the use thereof | |
JP6358942B2 (ja) | エンドトキシンの測定用試薬及びエンドトキシンの測定方法 | |
RU2321860C2 (ru) | Способ для определения уровня эндотоксина в растворе гемоглобина | |
Vanhaecke et al. | Endotoxin testing |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190705 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20190705 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20190920 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201224 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201224 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220104 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220331 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220802 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221018 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20221018 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20221025 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20221101 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20221209 |
|
C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20221213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240411 |