JP2020101426A

JP2020101426A - 吸光光度検出器

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Publication number: JP2020101426A
Application number: JP2018239147A
Authority: JP
Inventors: 大輔真仁田; Daisuke Manita; 貴文池田; Takafumi Ikeda; 孝四郎庄司; Koshiro Shoji
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 2018-12-21
Filing date: 2018-12-21
Publication date: 2020-07-02
Anticipated expiration: 2038-12-21
Also published as: JP7215146B2

Abstract

【課題】高感度かつ高精度な液体クロマトグラフ用吸光光度検出器を提供する。【解決手段】ＬＥＤデバイス１０１を発光源として有する発光部と、測定試料を保持するフローセル１０３と、発光部が照射する光をフローセルへ導き、フローセルを透過した光を光分岐素子１０４に入光し２つに分岐した光の一方を、第一波長の光を選択的に出力する波長選択素子１０５を通して受光する受光素子１０６を有する受光部と、分岐した光の他方を、第二波長の光を選択的に出力する波長選択素子１０７を通して受光する受光素子１０８を有する受光部と、第一波長の透過光量および第二波長の透過光量に基づいて測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部１０９とを備えた吸光光度検出器であって、発光部が、４１５ｎｍの波長の光を発生する発光素子と、発光素子が照射する光で励起し５１５〜６８０ｎｍのいずれかの波長の光を発生する蛍光体とを含んで構成される。【選択図】図１

Description

本発明は、光源にＬＥＤを使用して複数の波長域の光が出力可能な検出器に関するものである。

液体クロマトグラフィーに吸光光度検出器を用いる場合、溶離液の切り替え時に発生するノイズ、送液ポンプの脈動に起因して発生するノイズ、電気的なノイズ、またはベースラインのうねりやドリフト、等による測定精度への影響を抑制するために、測定波長光で分析成分を検出する際に同時に参照波長光を用いて検出し、測定値のずれを補正する方法がとられる。一般的に測定波長は測定成分の吸収極大波長付近に設定し、参照波長は測定成分が示す吸収スペクトルの影響を受けないように測定波長より１００ｎｍ以上の間隔をとって設定することが多い。

ＬＥＤは、吸光光度検出器の光源として用いた場合、ハロゲンランプや重水素ランプに比べて長寿命、高発光効率、低発熱等の特長を有するため、最近多用されている。しかし、単色のＬＥＤを単体で用いる場合は発光波長帯域が極めて狭いことから、光量の多いピーク波長付近に測定波長を設定すると、測定波長から１００ｎｍ以上の間隔をとって参照波長を設定することができないという課題がある。

特許文献１は、ＬＥＤを光源として２波長を用いて測定する際に、パルス出力が可能な主波長用ＬＥＤと副波長用ＬＥＤの２つを異なるタイミングで出力する検出器を開示している。しかし、出力波長が異なる複数のＬＥＤを使用した場合は、測定波長光量と参照波長光量の比率に差が生じ、同一試料を測定した場合でも異なる測定結果となる危険性があった。

特許文献２は、青色ＬＥＤと特殊蛍光体とを組み合わせて十分な発光強度スペクトルを有する白色発光素子を一つの光源とし、フローセルの上流と下流の異なる検出部で測光する検出器を開示している。しかしながら、一方の検出部で測定波長により測光し、他方の検出部で参照波長により測光する方式を適用すると、２箇所の検出部を通過する間に試料状態が変化し、測定波長による吸光度と参照波長による吸光度の打ち消し効果が低減するといった問題があった。

ＷＯ２０１４−１５７２８２号公報特開平１１−３０４６９６号公報

本発明の課題は、高感度かつ高精度な吸光光度検出器を提供することにある。

前記課題を解決するためになされた本発明は、以下の発明を包含する：
すなわち本発明の第一の態様は、
ＬＥＤデバイスを単一の発光源として有する発光部と、
測定試料を保持する光透過性のフローセルと、
前記発光部が照射する光を前記フローセルへ導き、前記フローセルを透過した光を光分岐素子に入光し２つに分岐した光の一方を、第一波長の光を選択的に出力する波長選択素子１を通して受光する受光素子１を有する受光部１と、
前記２つに分岐した光の他方を、第二波長の光を選択的に出力する波長選択素子２を通して受光する受光素子２を有する受光部２と、
前記第一波長の透過光量１および前記第二波長の透過光量２に基づいて前記測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部と、
を備えた液体クロマトグラフ用の吸光光度検出器であって、
前記発光部が、少なくとも４１５ｎｍの波長の光を発生する発光素子と、
前記発光素子が照射する光で励起し５１５〜６８０ｎｍのいずれかの波長の光を発生する蛍光体と、
を含んで構成されることを特徴とする。

次に、本発明の第二の態様は、
ＬＥＤデバイスを単一の発光源として有する発光部と、
測定試料を保持する光透過性のフローセルと、
前記発光部が照射する光を光分岐素子に入光し２つに分岐した光の一方を、第一波長の光を選択的に出力する波長選択素子１を通して前記フローセルへ導き、前記フローセルを透過した光を受光する受光素子１を有する受光部１と、
前記２つに分岐した光の他方を、第二波長の光を選択的に出力する波長選択素子２を通して光路セルへ導き、前記光路セルを透過した光を受光する受光素子２を有する受光部２と、
前記第一波長の透過光量１および前記第二波長の透過光量２に基づいて前記測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部と、
を備えた液体クロマトグラフ用の吸光光度検出器であって、
前記発光部が、少なくとも４１５ｎｍの波長の光を発生する発光素子と、
前記発光素子が照射する光で励起し５１５〜６８０ｎｍのいずれかの波長の光を発生する蛍光体と、
を含んで構成されることを特徴とする。

発光源として発光素子および蛍光体を含んで構成される単一のＬＥＤデバイスを備えた吸光光度検出器を用いて参照波長を測定波長より１００ｎｍ以上長く設定することにより、高感度かつ高精度なヘモグロビン類の測定が可能になる。

本発明の吸光光度検出器の一態様を示した図である。本発明の吸光光度検出器の別の態様を示した図である。本発明の吸光光度検出器を組み入れた液体クロマトグラフの構成を示した図である。アルミネート系黄緑色蛍光体をコートした発光素子の発光スペクトルを示した図である。アルミネート系黄緑色蛍光体をコートした発光素子を用いて、測定波長を４１５ｎｍ、参照波長を６００ｎｍにて測定し得られたクロマトグラムを示した図である。測定波長、参照波長および演算後のノイズ・ドリフトのレベルを示したクロマトグラムを示した図である。全血中のヘモグロビンの吸収スペクトルを示した図である。窒化物系橙色蛍光体をコートした発光素子の発光スペクトルを示した図である。窒化物系橙色蛍光体をコートした発光素子を用いて、測定波長を４１５ｎｍ、参照波長を６００ｎｍにて測定し得られたクロマトグラムを示した図である。窒化物系橙色蛍光体をコートした発光素子を用いて、測定波長を４１５ｎｍ、参照波長を６５０ｎｍにて測定し得られたクロマトグラムを示した図である。窒化物系赤色蛍光体をコートした発光素子の発光スペクトルを示した図である。窒化物系赤色蛍光体をコートした発光素子を用いて、測定波長を４１５ｎｍ、参照波長を６５０ｎｍにて測定し得られたクロマトグラムを示した図である。ブロード特性を有する青色ＬＥＤの発光スペクトルを示した図である。ブロード特性を有する青色ＬＥＤを用いて、測定波長を４１５ｎｍ、参照波長を５００ｎｍにて測定し得られたクロマトグラムを示した図である。

以下に本発明を詳細に説明する。

ＬＥＤデバイスとは、発光素子に対し、透明シリコン樹脂、透明フッ素樹脂、透明エポキシ樹脂等に蛍光体を混合し発光素子の上部を包囲するようにコートする等の方法でモールドを行い、パッケージに実装してランプ化したものを指す。形状は、一般的な砲弾型、帽子型、チップ型、フラックス型などが例示される。

発光素子とは、半導体発光素子（ＬＥＤチップ）を指し、青色の発光素子より短い波長の光を発する、紫色から青紫色の発光素子が好適に使用できる。波長でいえば、ピーク波長が３８０〜４５０ｎｍ程度、好ましくは４００〜４３０ｎｍ程度の発光素子が、ヘモグロビン類（オキシヘモグロビン類）の極大吸収波長４１５ｎｍにおける検出光量が十分に確保できる点において適している。

蛍光体は、アルミネート系、シリケート系、ＹＡＧ（イットリウムアルミニウムガーネット）系などの緑色発光蛍光体（ピーク波長が５２０〜５５０ｎｍ程度）または黄色発光蛍光体（ピーク波長が５５０〜５８０ｎｍ程度）、窒化物系の橙色発光蛍光体（ピーク波長が５８０〜６２０ｎｍ程度）または赤色発光蛍光体（ピーク波長が６２０〜６８０ｎｍ程度）等が例示される。蛍光体は発光素子から発生する光で励起され、５１５〜６８０ｎｍのいずれかの波長の光を含んだ光を発生する。

フローセルは、形状が一般的な円柱型、直方体型または垂台型等に成形されたものが例示できる。材質は石英ガラスやプラスチック等で製造されたものを使用することができ、少なくとも光源から照射した光が透過し得るものであれば完全な透過性を有するものでなく、一部分が透過性のものでも良い。光路セルは、形状および材質においてはフローセルと同等のものが好ましい。

光分岐素子は、波長に応じて光を透過または反射することによって、光をスペクトル的に分離する素子を指し、ダイクロイックミラーやハーフミラーなどが例示される。例えばロングパスダイクロイックミラーは、カットオフ波長よりも短い波長の光に対しては高い反射率を示し、カットオフ波長よりも長い波長の光では高い透過率を示す。ショートパスダイクロイックミラーは、カットオフ波長よりも短い波長の光の透過率は高く、カットオフ波長よりも長い波長の光の反射率は高くなる。

波長選択素子は、特定の波長帯の光のみを選択的に透過する、スペクトル半値幅が５〜２０ｎｍ程度のバンドパスフィルタ（干渉フィルタ）などが例示される。

受光素子とは、光を電気に変換する一般的な半導体光検出器を指し、フォトダイオード、フォトトランジスタなどが例示される。受光部とは、プリント基板上に受光素子を搭載したものを指す。

演算部は、受光部が出力するアナログ信号の取得、デジタル信号への変換、変換された値の解析、クロマトグラム化、測定値への換算と出力等を行う。例えば２波長測定の場合は、測定波長光の受光部から得られる出力電圧、参照波長光の受光部から得られる出力電圧、およびそれらの出力電圧の比に対して対数変換し、変換した値を解析後、クロマトグラム化、さらに測定値に換算し出力する。

本発明の光学系は以下の構成が例示できる。

一つの態様（光学系１）としては、図１に示すような、ＬＥＤデバイス１０１、ＬＥＤデバイス１０１から照射する光を平行光に変換するコリメートレンズ１０２、コリメートレンズ１０２を通過した光を入射する、測定試料を保持するフローセル１０３、フローセル１０３を通過した光を２つに分岐するためのロングパスダイクロイックミラー１０４、分岐した一方の光から測定波長光を得るためのバンドパスフィルタ１０５、測定波長光を受光検出する受光素子を有する受光部１０６、分岐した他方の光から参照波長光を得るためのバンドパスフィルタ１０７、参照波長光を受光検出する受光素子を有する受光部１０８、受光部１０６および受光部１０８が出力する信号を入力し測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部１０９により構成される。

別の態様（光学系２）としては、図２に示すような、ＬＥＤデバイス２０１、ＬＥＤデバイス２０１から照射する光を平行光に変換するコリメートレンズ２０２、コリメートレンズ２０２を通過した光を２つに分岐するためのロングパスダイクロイックミラー２０４、分岐した一方の光から測定波長光を得るためのバンドパスフィルタ２０７、バンドパスフィルタ２０７を通過した光を入射するフローセル２０３、フローセル２０３を通過した光を受光検出する受光素子を有する受光部２０８、分岐した他方の光から参照波長光を得るためのバンドパスフィルタ２０５、バンドパスフィルタ２０５を通過した光を入射する参照用光路セル２１０、参照用光路セル２１０を通過した光を受光検出する受光素子を有する受光部２０６、受光部２０６および受光部２０８が出力する信号を入力し測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部２０９により構成される。

上述した光学系１または光学系２で構成される本発明の吸光光度検出器を備えた液体クロマトグラフは、波長選択素子１により出力した４１５ｎｍの第一波長を測定波長とし、波長選択素子２により出力した５１５〜６８０ｎｍのいずれか、好ましくは６００〜６５０ｎｍのいずれかの第二波長を参照波長とすることでヘモグロビン類の測定を好適に行える。

以下、実施例等を用いて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の態様はこれらに限定されるものではない。

図３は本発明の効果を確認した際に用いた液体クロマトグラフの概略図である。
溶離液は、１液（Ｇ９溶離液ＨＳｉ第１液東ソー株式会社）３０１、２液（Ｇ９溶離液ＨＳｉ第２液東ソー株式会社）３０２、３液（Ｇ９溶離液ＨＳｉ第３液東ソー株式会社）３０３を使用した。
各溶離液を送液ポンプ（ＤＰ−８０２０東ソー株式会社）３０６を用いて流速２．０ｍＬ/分で送液した。各溶離液は脱気装置３０４を通じて脱気し、３液、２液、１液の順序で電磁弁（３０５ａ、３０５ｂ、３０５ｃ）を切り替えてステップグラジエント溶出を行った。測定対象物である血液中の安定型糖化ヘモグロビンを測定するために、注入バルブを含むオートサンプラー（ＡＳ−８０２０東ソー株式会社）３０７を用いて健常人血を２００倍に希釈した試料を注入した。試料注入は５μＬのサンプルループを使用した。血液中のヘモグロビン成分の吸着脱離を行うための充填剤として陽イオン交換樹脂ＴＳＫｇｅｌＳＰ−ＮＰＲ（東ソー株式会社）を充填したカラム３０８に試料を注入し、分離したヘモグロビン各成分を図１の光学系を有する吸光光度検出器３０９（フローセルの形状は、内径が１．０ｍｍかつ光路長が１０ｍｍの円柱状）にて検出した。検出器から出力する信号として、測定波長光から得られる出力電圧Ｖｓａｍ、参照波長光から得られる出力電圧Ｖｒｅｆ、測定波長光から得られる出力電圧と参照波長光から得られる出力電圧の比に対して対数変換した換算出力Ｖｏｕｔ（ｌｏｇ（Ｖｒｅｆ／Ｖｓａｍ））を得た。Ｖｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔのアナログ信号はＬＣ−８０２０（東ソー株式会社）を備えたコントローラーで取得し、出力値の解析、描写、データ処理や各ユニットの制御はＬＣ−８０２０ｍｏｄｅｌ２（東ソー株式会社）で行った。

（実施例１）
青紫色発光素子（ピーク波長約４３０ｎｍ）の上部を、アルミネート系黄緑色蛍光体（ピーク波長約５５０ｎｍ）を含む透明シリコン樹脂でモールドしたＬＥＤデバイスを用い、測定波長用のバンドパスフィルタの出力波長を４１５ｎｍ、参照波長用のバンドパスフィルタの出力波長を６００ｎｍとし、全血中の安定型糖化ヘモグロビンを測定した。ＬＥＤデバイスの発光スペクトルを図４、検出器にて得られたＶｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムを図５に示した。
参照波長光から得られる出力Ｖｒｅｆを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークは、測定波長光から得られる出力Ｖｓａｍを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークの１．３３％であり、参照波長側における測り込みが小さいことが確認できた。また、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムから不安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０１）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０２）、ヘモグロビンＡ０ピーク（４０３）が得られることが確認できた。

高感度かつ高精度な測定を達成するためには、ベースラインのドリフトやノイズを小さくすることが必須である。参照波長を測定波長より１００ｎｍ以上長く設定するメリットを示す１例として、上記検出条件にて溶離液を３液から２液、１液の順序で電磁弁により切り替えてノイズおよびドリフトを評価し、Ｖｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔの各出力電圧により得られたベースラインのクロマトグラムを図６に示した。Ｖｓａｍは、ドリフト０．０８ｍＶ、最大ノイズ０．０７３ｍＶ、切り替えノイズ０．１７ｍＶであり、Ｖｒｅｆは、ドリフト０．０８ｍＶ、最大ノイズ０．０６７ｍＶ、切り替えノイズ０．３１ｍＶであった。一方、Ｖｏｕｔは、ドリフト０．０１ｍＶ、最大ノイズ０．０１１ｍＶ、切り替えノイズ０．０３ｍＶであり、Ｖｓａｍを、Ｖｒｅｆを用いて補正・算出することによりドリフトの８８％、最大ベースラインノイズの８５％、切り替えノイズの８２％を低減することが可能となり、高感度かつ高精度な測定が達成される。

さらに、全血中のヘモグロビン類の測定に６００ｎｍ以上の参照波長を用いるメリットを示すため、全血中のヘモグロビンの吸収スペクトルを、分光光度計（ＵＶ−２６００島津製作所）を用いて測定し、結果を図７に示した。得られた吸収スペクトルにおいて約４１５ｎｍを中心とする波長域と５２０ｎｍ〜６００ｎｍの波長域においてヘモグロビンに固有の吸収を示し、６００ｎｍ以上では顕著な吸収を示さないため、６００ｎｍ以上の波長域を参照波長に設定することによりヘモグロビン濃度の影響が軽減され、参照波長側への測り込みの少ない、より高精度な測定が可能となる。

（実施例２）
蛍光体を窒化物系橙色蛍光体（ピーク波長約６２０ｎｍ）に変更した以外は、実施例１と同様の条件で全血中の安定型糖化ヘモグロビンを測定した。ＬＥＤデバイスの発光スペクトルを図８、検出器にて得られたＶｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムを図９に示した。
参照波長光から得られる出力Ｖｒｅｆを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークは、測定波長光から得られる出力Ｖｓａｍを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークの１．３７％であり、参照波長側における測り込みが小さいことが確認できた。また、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムから不安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０１）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０２）、ヘモグロビンＡ０ピーク（４０３）が得られることが確認できた。

（実施例３）
測定波長用のバンドパスフィルタの出力波長を４１５ｎｍ、参照波長用のバンドパスフィルタの出力波長を６５０ｎｍに変更した以外は実施例２と同様の条件で全血中の安定型糖化ヘモグロビンを測定した。検出器にて得られたＶｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムを図１０に示した。
参照波長光から得られる出力Ｖｒｅｆを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークは、測定波長光から得られる出力Ｖｓａｍを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークの０．１２％であり、参照波長側における測り込みが小さいことが確認できた。また、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムから不安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０１）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０２）、ヘモグロビンＡ０ピーク（４０３）が得られることが確認できた。

（実施例４）
蛍光体を窒化物系赤色蛍光体（ピーク波長約６６０ｎｍ）に変更した以外は、実施例３と同様の条件で全血中の安定型糖化ヘモグロビンを測定した。ＬＥＤデバイスの発光スペクトルを図１１、検出器にて得られたＶｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムを図１２に示した。
参照波長光から得られる出力Ｖｒｅｆを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークは、測定波長光から得られる出力Ｖｓａｍを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークの０．１５％であり、参照波長側における測り込みが小さいことが確認できた。また、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムから不安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０１）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０２）、ヘモグロビンＡ０ピーク（４０３）が得られることが確認できた。

（比較例１）
比較例１では、蛍光体を含有しない、ブロード特性を有する青色発光素子からなるＬＥＤデバイスを光源として使用した。本ＬＥＤデバイスの発光スペクトルを図１３に示した。
約４６０ｎｍを中心波長とするＬＥＤデバイスであるが、５６０ｎｍ以降の波長帯ではほとんど発光しないことがわかった。したがって、この光源では、５６０ｎｍ以上の波長を参照波長に設定することが不可能であった。バンドパスフィルタの出力波長は、測定波長に４１５ｎｍを、参照波長に５００ｎｍを用いた。本ＬＥＤデバイスを実装した吸光光度検出器を用いて全血中の安定型糖化ヘモグロビンを測定した。検出器にて得られたＶｓａｍ、Ｖｒｅｆ、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムを図１４に示した。
参照波長光から得られる出力Ｖｒｅｆを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークは、測定波長光から得られる出力Ｖｓａｍを用いて検出したヘモグロビンＡ０ピークの１３．６６％であり実施例１〜４と比較して参照波長側における測り込みが大きいことが確認された。また、Ｖｏｕｔによるクロマトグラムから不安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０１）、安定型ヘモグロビンＡ１ｃピーク（４０２）、ヘモグロビンＡ０ピーク（４０３）が得られることが確認できた。

１０１、２０１：ＬＥＤデバイス
１０２、２０２：コリメートレンズ
１０３、２０３：フローセル
１０４、２０４：ダイクロイックミラー
１０５、１０７、２０５、２０７：バンドパスフィルタ
１０６、１０８、２０６、２０８：受光部
１０９、２０９：演算部
２１０：参照用光路セル
３０１：１液
３０２：２液
３０３：３液
３０４：脱気装置
３０５ａ、３０５ｂ、３０５ｃ：電磁弁
３０６：送液ポンプ
３０７：オートサンプラー
３０８：カラム
３０９：吸光光度検出器
４０１：不安定型ヘモグロビンＡ１ｃのピーク
４０２：安定型ヘモグロビンＡ１ｃのピーク
４０３：ヘモグロビンＡ０のピーク

Claims

ＬＥＤデバイスを単一の発光源として有する発光部と、
測定試料を保持する光透過性のフローセルと、
前記発光部が照射する光を前記フローセルへ導き、前記フローセルを透過した光を光分岐素子に入光し２つに分岐した光の一方を、第一波長の光を選択的に出力する波長選択素子１を通して受光する受光素子１を有する受光部１と、
前記２つに分岐した光の他方を、第二波長の光を選択的に出力する波長選択素子２を通して受光する受光素子２を有する受光部２と、
前記第一波長の透過光量１および前記第二波長の透過光量２に基づいて前記測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部と、
を備えた液体クロマトグラフ用の吸光光度検出器であって、
前記発光部が、少なくとも４１５ｎｍの波長の光を発生する発光素子と、
前記発光素子が照射する光で励起し５１５〜６８０ｎｍのいずれかの波長の光を発生する蛍光体と、
を含んで構成されることを特徴とする前記吸光光度検出器。
ＬＥＤデバイスを単一の発光源として有する発光部と、
測定試料を保持する光透過性のフローセルと、
前記発光部が照射する光を光分岐素子に入光し２つに分岐した光の一方を、第一波長の光を選択的に出力する波長選択素子１を通して前記フローセルへ導き、前記フローセルを透過した光を受光する受光素子１を有する受光部１と、
前記２つに分岐した光の他方を、第二波長の光を選択的に出力する波長選択素子２を通して光路セルへ導き、前記光路セルを透過した光を受光する受光素子２を有する受光部２と、
前記第一波長の透過光量１および前記第二波長の透過光量２に基づいて前記測定試料中における測定成分の測定値に換算する演算部と、
を備えた液体クロマトグラフ用の吸光光度検出器であって、
前記発光部が、少なくとも４１５ｎｍの波長の光を発生する発光素子と、
前記発光素子が照射する光で励起し５１５〜６８０ｎｍのいずれかの波長の光を発生する蛍光体と、
を含んで構成されることを特徴とする前記吸光光度検出器。
請求項１または２に記載の吸光光度検出器を備えた液体クロマトグラフによるヘモグロビン類の測定方法であって、
前記波長選択素子１により出力した４１５ｎｍの第一波長を測定波長とし、前記波長選択素子２により出力した５１５〜６８０ｎｍのいずれかの第二波長を参照波長とすることを特徴とする前記方法。
請求項１または２に記載の吸光光度検出器を備えた液体クロマトグラフによるヘモグロビン類の測定方法であって、
前記波長選択素子１により出力した４１５ｎｍの第一波長を測定波長とし、前記波長選択素子２により出力した６００〜６５０ｎｍのいずれかの第二波長を参照波長とすることを特徴とする前記方法。