JP2019518438A5 - - Google Patents
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Claims (26)
- 対象からの試料中の非天然核酸の量を評価する方法であって、試料が非天然核酸および天然核酸を含み、方法が:
少なくとも6つの一塩基バリアント(SNV)の情報提供的標的のそれぞれについて、試料またはその一部に対して、少なくとも2つのプライマー対を用いた増幅に基づく定量アッセイを実施すること、ここで各プライマー対はフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含み、少なくとも2つのプライマー対の1つは、プライマーにおいてSNV標的の1つのアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の別のアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の1つのアレルを特異的に増幅し、少なくとも2つのプライマー対のもう1つは、SNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、および、
増幅に基づく定量アッセイからの結果を得るかまたは提供して、試料中の非天然核酸の量を決定すること、
を含み、
任意に、結果が、試料中の非天然核酸の量を含む、または、方法がさらに、試料中の非天然核酸の量を、結果に基づいて決定することを含む、前記方法。 - 対象からの試料中の非天然核酸の量を評価する方法であって、試料が非天然核酸および天然核酸を含み、方法が:
試料またはその一部に対して実施した、増幅に基づく定量アッセイからの結果を得ること、ここでアッセイは、少なくとも6つの一塩基バリアント(SNV)の情報提供的標的の増幅を含み、情報提供的標的のそれぞれについて少なくとも2つのプライマー対を用い、各プライマー対はフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含み、少なくとも2つのプライマー対の1つは、プライマーにおいてSNV標的の1つのアレルに対して3’ 末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の別のアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の1つのアレルを特異的に増幅し、少なくとも2つのプライマー対のもう1つは、SNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、および、
非天然核酸の量を、結果に基づいて評価すること、
を含み、
任意に、試料中の非天然核酸の量が、増幅に基づく定量アッセイの結果に基づく、前記方法。 - 方法がさらに、少なくとも6つのSNVの情報提供的標的を決定することを含む、および/または、方法がさらに、SNVの情報提供的標的のそれぞれについて少なくとも2つのプライマー対を得ることを含む、請求項1または2に記載の方法。
- 少なくとも6つのSNVの情報提供的標的が、少なくとも7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31または32のSNVの情報提供的標的である、
任意に、少なくとも6つのSNVの情報提供的標的が、35、34、33、32、31または30未満のSNVの情報提供的標的である、または、少なくとも6つのSNVの情報提供的標的が、25未満のSNVの情報提供的標的である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。 - 対象からの試料中の非天然核酸の量を評価する方法であって、試料が非天然核酸および天然核酸を含み、方法が:
少なくとも18の一塩基バリアント(SNV)標的のそれぞれについて、試料またはその一部に対して、少なくとも2つのプライマー対を用いた増幅に基づく定量アッセイを実施すること、ここで各プライマー対はフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含み、少なくとも2つのプライマー対の1つは、プライマーにおいてSNV標的の1つのア レルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の別のアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の1つのアレルを特異的に増幅し、少なくとも2つのプライマー対のもう1つは、SNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、および、
増幅に基づく定量アッセイからの結果を得るかまたは提供して、試料中の非天然核酸の量を決定すること、
を含み、
任意に、方法がさらに、試料中の非天然核酸の量を、結果に基づいて決定することを含む、および/または、結果が、試料中の非天然核酸の量を含む、前記方法。 - 対象からの試料中の非天然核酸の量を評価する方法であって、試料が非天然核酸および天然核酸を含み、方法が:
試料またはその一部に対して実施した、増幅に基づく定量アッセイからの結果を得ること、ここでアッセイは、少なくとも18の一塩基バリアント(SNV)標的の増幅を含み、標的のそれぞれについて少なくとも2つのプライマー対を用い、各プライマー対はフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含み、少なくとも2つのプライマー対の1つ は、プライマーにおいてSNV標的の1つのアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の別のアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の1つのアレルを特異的に増幅し、少なくとも2つのプライマー対のもう1つは、SNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、および、
非天然核酸の量を、結果に基づいて評価すること、
を含み、
任意に、試料中の非天然核酸の量が、増幅に基づく定量アッセイの結果に基づく、前記方法。 - 方法がさらに、(i)少なくとも18のSNV標的を決定すること、または、(ii)SNV標的のそれぞれについて少なくとも2つのプライマー対を得ることを含み、
任意に、少なくとも18のSNV標的が、少なくとも21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60、63、66、69、71、75、78 、81、84、87、90、93または96のSNV標的である、または、少なくとも18のSNV標的が、100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、85または80未満のSNV標的である、任意に、少なくとも18のSNV標的が75未満のSNV標的である、請求項5または6に記載の方法。 - 少なくとも2つのプライマー対のもう1つのプライマー対もまた、プライマーにおいてSNV標的の別のアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の1つのアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- (i)量が、試料中の非天然核酸の絶対値である、または、(ii)量が、試料中の非天然核酸の相対値である、任意に、量が、天然核酸または全核酸に対する非天然核酸の比率またはパーセンテージである、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 方法がさらに、非天然核酸および/または天然核酸の遺伝子型を得ることを含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 試料中の非天然核酸の量が、少なくとも1%または少なくとも1.3%または少なくとも1.5%または少なくとも2%である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 非天然核酸の遺伝子型が知られていないかまたは得られていない場合、方法がさらに
非天然の遺伝子型を予測すること、または、非天然の遺伝子型の予測に基づいて、結果を評価すること、
を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。 - 試料が無細胞DNA試料を含み、量が非天然無細胞DNAの量である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、(i)移植レシピエント、任意に、非天然核酸の量がドナー特異的無細胞DNAの量である、または、(ii)妊娠した対象であり、非天然核酸の量が胎児特異的無細胞DNAの量である、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 増幅に基づく定量アッセイが、リアルタイムPCRアッセイまたはデジタルPCRアッセイなどの定量的PCRアッセイである、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 方法がさらに、(i)対象におけるリスクを、試料中の非天然核酸の量に基づいて決定すること、(ii)対象に対する処置を、非天然核酸の量に基づき選択すること、(iii)非天然核酸の量に基づき対象を処置すること、(iv)非天然核酸の量に基づき、対象への処置に関する情報を提供すること、または、無処置を示唆すること、(v)対象における非天然核酸の量を、経時的にモニタリングすることまたはモニタリングを示唆すること、(vi)対象における非天然核酸の量を、その後の時点で評価すること、(vii)対象に投与する処置の効果を、非天然核酸の量に基づき評価すること、(viii)試料またはその一部を提供するまたは取得すること、(ix)核酸を試料から抽出すること、および/または、(x)SNV標的に対するプライマーを使用する増幅前ステップを含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 試料が、血液、血漿または血清を含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 組成物またはキットであって、少なくとも6つのSNVの情報提供的標的のそれぞれについてプライマー対を含み、ここで各プライマー対は、プライマーにおいてSNV標的の1つのアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の別のアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の1つのアレルを特異的に増幅する、 前記組成物またはキット。
- 少なくとも6つのSNVの情報提供的標的のそれぞれについて別のプライマー対をさらに含む、請求項18に記載の組成物またはキットであって、別のプライマー対がSNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、および/または、少なくとも6つのSNVの情報提供的標的が、少なくとも7、8、9、10、11、1 2、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25 、26、27、28、29、30、31または32のSNVの情報提供的標的である、任意に、少なくとも6つのSNVの情報提供的標的が、35、34、33、32、31、30、 29、28、27、26または25未満のSNVの情報提供的標的である、前記組成物またはキット。
- 少なくとも6つのSNVの情報提供的標的のそれぞれについて、別のプライマー対もまた、プライマーにおいてSNV標的の別のアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の1つのアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、請求項18または19に記載の組成物またはキット。
- 組成物またはキットであって、少なくとも18のSNV標的のそれぞれについてプライマー対を含み、ここで各プライマー対は、プライマーにおいてSNV標的の1つのアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の別のアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の1つのアレルを特異的に増幅する、前記組成物またはキット。
- 少なくとも18のSNV標的のそれぞれについて別のプライマー対をさらに含み、ここで別のプライマー対が、SNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、および/または、少なくとも18のSNV標的が、少なくとも21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60、63、66、69、71、75、78、81、84、87、90、93または96のSNV標的である、任意に、少なくとも18のSNV標的が、100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、85または80未満のSNV標的である、または、少なくとも18のSNV標的が75未満のSNV標的である、請求項21に記載の組成物またはキット。
- 少なくとも18のSNV標的のそれぞれについて、別のプライマー対もまた、プライマーにおいてSNV標的の別のアレルに対して3’末端から2番目のミスマッチを、しかしSNV標的の1つのアレルに対しては3’二重ミスマッチを含み、かつSNV標的の別のアレルを特異的に増幅する、請求項21または22に記載の組成物またはキット。
- (i)緩衝剤、(ii)ポリメラーゼ、(iii)プローブ、任意に、蛍光プローブ、および/または、(iv)使用説明書をさらに含み、任意に、使用説明書が、試料中の非天然核酸の量を決定するまたは評価するための説明書であり、試料が移植レシピエント由来または妊娠した対象由来である、請求項18〜23のいずれか一項に記載の組成物またはキット。
- 請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法で使用するための、請求項18〜24のいずれか一項に記載の組成物またはキット。
- 方法であって、 請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法に基づいて非天然核酸の量を得ること、および
対象におけるリスクを、レベルまたは量に基づいて評価すること、
を含む、前記方法。
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