JP2019505175A5 - - Google Patents
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Claims (15)
- 鳥の受精した未孵化卵の性別決定の方法であって、
(a)性染色体Z及びWの少なくとも一方の少なくとも1つの位置又は場所に組み込まれた少なくとも1つの外因性レポーター遺伝子を含む少なくとも1羽のトランスジェニック鳥動物を提供または取得する工程であって、前記レポーター遺伝子が、少なくとも1つの生物発光レポーター遺伝子である、工程と、
(b)前記トランスジェニック鳥対象から、又はその任意の細胞の、少なくとも1個の受精卵を取得する工程と、
(c)少なくとも1つの検出可能なシグナルが検出されるかどうかを前記卵内で決定する工程であって、前記少なくとも1つの検出可能なシグナルの検出が、前記鳥胚内で前記少なくとも1つのレポーター遺伝子の発現、それによって、前記染色体W又は染色体Zの存在を示す工程と、
を含む方法。 - 前記レポーター遺伝子がルシフェラーゼである、請求項1に記載の方法。
- 前記方法がさらに、工程(c)で検出される前記検出可能なシグナルの形成のために、工程(b)の前記卵に、前記生物発光レポーター遺伝子と適合性のある基質及び酵素のうちの少なくとも一方を提供する工程を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのトランスジェニック鳥対象が雌の鳥動物であり、
(a)前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が雌の染色体Zの少なくとも1つの位置に組み込まれ、それによって、検出可能なシグナルの検出が、前記未孵化卵内の前記胚が雄であることを示す;または
(b)前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が雌の染色体Wの少なくとも1つの位置に組み込まれ、それによって、検出可能なシグナルの検出が、前記未孵化卵内の前記胚が雌であることを示す、
請求項1に記載の方法。 - 前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、少なくとも1つのプログラム可能に遺伝子操作されたヌクレアーゼ(PEN)を用いて、前記トランスジェニック鳥対象の前記性染色体に組み込まれ、
好ましくは、前記PENが、クラスター化され、規則的に間隔が空いた短い回文構造の繰り返し(clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR))タイプIIシステムであり、
好ましくは、前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、少なくとも1つのCRISPR/CRISPR関連エンドヌクレアーゼ9(Cas9)システムによって媒介される相同性指向性修復(HDR)により前記トランスジェニック鳥動物の前記性染色体に組み込まれ、
好ましくは、前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、(a)少なくとも1つのCas9タンパク質をコードする少なくとも1つの核酸配列及び少なくとも1つのガイドRNA(gRNA)をコードする少なくとも1つの核酸配列を含む少なくとも1つの第1の核酸配列、並びに(b)少なくとも1つの前記レポーター遺伝子を含む少なくとも1つの第2の核酸配列を、前記鳥動物の少なくとも1つの細胞又は前記鳥動物に導入される少なくとも1つの細胞に共トランスフェクトすることによって、前記トランスジェニック鳥動物の性染色体に組み込まれる、
請求項1に記載の方法。 - 前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、(a)性染色体Wの遺伝子座1022859〜1024215の少なくとも1つの部位;または(b)性染色体Zの遺伝子座42172748〜42177748の少なくとも1つの部位に組み込まれる、請求項5に記載の方法。
- 性染色体Z及びWの少なくとも一方の少なくとも1つの遺伝子座に組み込まれた少なくとも1つの外因性レポーター遺伝子を含む鳥トランスジェニック動物であって、前記レポーター遺伝子が、少なくとも1つの生物発光レポーター遺伝子である、鳥トランスジェニック動物。
- 前記レポーター遺伝子がルシフェラーゼである、請求項7に記載のトランスジェニック動物。
- 前記少なくとも1羽のトランスジェニック鳥動物が雌であり、
(a)前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が雌染色体Zの少なくとも1つの位置に組み込まれている、または
(b)前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が雌染色体Wの少なくとも1つの位置に組み込まれている、
請求項7に記載のトランスジェニック動物。 - 前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、少なくとも1つのCRISPR/Cas9システムによって媒介されるHDRによる前記トランスジェニック鳥動物の前記性染色体に組み込まれており、
好ましくは、前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、(a)少なくとも1つのCas9タンパク質をコードする少なくとも1つの核酸配列及び少なくとも1つのgRNAをコードする少なくとも1つの核酸配列を含む少なくとも1つの第1の核酸配列、並びに(b)少なくとも1つの前記レポーター遺伝子を含む少なくとも1つの第2の核酸配列を、前記鳥動物の少なくとも1つの細胞又は前記鳥動物に導入される少なくとも1つの細胞に共トランスフェクトすることによって、前記トランスジェニック鳥対象の性染色体に組み込まれる、
請求項7に記載のトランスジェニック動物。 - 前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、(a)性染色体Wの遺伝子座1022859〜1024215の少なくとも1つの部位;または(b)性染色体Zの遺伝子座42172748〜42177748の少なくとも1つの部位に組み込まれている、請求項7〜10のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 性染色体Z及びWの少なくとも一方の少なくとも1つの遺伝子座に組み込まれた少なくとも1つの外因性レポーター遺伝子を含む細胞であって、前記レポーター遺伝子が、少なくとも1つの生物発光レポーター遺伝子であり、好ましくは、前記細胞は鳥細胞であり、好ましくは、前記鳥細胞は始原生殖細胞(PGC)である、細胞。
- 前記少なくとも1つのレポーター遺伝子がルシフェラーゼであり、
前記レポーター遺伝子が、(a)性染色体Wの遺伝子座1022859〜1024215の少なくとも1つの部位;または(b)性染色体Zの遺伝子座42172748〜42177748の少なくとも1つの部位に組み込まれている、
請求項12に記載の細胞。 - (a)少なくとも1つのCas9タンパク質をコードする少なくとも1つの核酸配列と少なくとも1つのガイドRNA(gRNA)をコードする少なくとも1つの核酸配列とを含む、少なくとも1つの第1の核酸配列;および
(b)少なくとも1つのレポーター遺伝子を含む少なくとも1つの第2の核酸配列、
を含むキットであって、
好ましくは、前記レポーター遺伝子は、少なくとも1つの生物発光レポーター遺伝子であり、
好ましくは、前記少なくとも1つのレポーター遺伝子が、前記性染色体の少なくとも1つの非コード領域に組み込まれ、前記少なくとも1つのgRNAが、配列番号1及び2のいずれか1つに示す核酸配列を含み、
好ましくは、(i)前記gRNAが配列番号1に示す核酸配列を含み、前記第2の核酸配列内に含まれる前記少なくとも1つのレポーター遺伝子は、その5’及び3’で、それぞれ配列番号4及び5に示すアミノ酸配列を含む相同アームが隣接している;または(ii)前記gRNAが配列番号2に示す核酸配列を含み、前記第2の核酸配列内に含まれる前記少なくとも1つのレポーター遺伝子は、その5’及び3’で、それぞれ配列番号6及び7に示すアミノ酸配列を含む相同アームが隣接している、
キット。 - 性染色体Z及びWの少なくとも一方の少なくとも1つの遺伝子座に組み込まれた少なくとも1つの外因性レポーター遺伝子を含む1羽のトランスジェニック鳥動物の作製に使用するための、請求項14に記載のキット。
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