JP2019501860A - 変形性関節症のための相乗的組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、関節炎、関節リウマチ、または変形性関節症の１つまたは複数の関連する状態の治療のための相乗的組成物に関する。より具体的には、新規の相乗的組成物は、治療有効量の、ａ）プロアントシアニジンを単独で、または多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むタマリンダス・インディカ種子のアルコール／水アルコール抽出物と、ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物の組み合わせを含み、ｃ）任意選択で薬学的、機能学的または栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する。本発明はまた、相乗的組成物を使用して関節炎、関節リウマチ、または変形性関節症の１つまたは複数の関連する状態を治療する方法に関する。

Description

本発明は、関節炎、関節リウマチ、又は変形性関節症の１又は複数の関連する状態の治療のための相乗的組成物に関する。より具体的には、本発明は、治療有効量のタマリンダス・インディカ（Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ）種子抽出物及びクルクマ・ロンガ（Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ）根茎抽出物の組み合わせを、任意選択で賦形剤／担体／希釈剤と共に含む相乗的組成物に関する。

変形性関節症（ＯＡ）は関節変性疾患であり、それが引き起こす疼痛及び機能障害のために、他の関節疾患より多くの人々に影響を及ぼす。変形性関節症は、変性関節疾患及び変性骨疾患の最も広く見られる形態の１つである。米国疾病対策センターによると、ＯＡは、２５歳以上の成人の１３．９％、６５歳以上の３３．６％（１，２４０万人）の人々に影響を及ぼす。病的状態は、骨の肥大及び関節包の肥厚に関連する、滑膜関節内の関節軟骨の局部的な損失領域によって特徴付けられる。変形性関節症の原因は、細胞とサイトカイン、成長因子、炎症メディエータ、メタロプロテイナーゼ、及び軟骨分解酵素等の可溶性メディエータとの複雑な相互作用を伴うと考えられている。この複雑な相互作用は、身体外傷、手術、感染、又は他の疾患プロセスによって更に引き起こされ得る。より進んだ段階では、変形性関節症は、関節マトリックスを最初に攻撃する軟骨細胞によるタンパク質分解酵素及びコラーゲン分解酵素の同化から生じる軟骨の不整及びフィブリル化によって特徴付けられる。

この疾患の進行は、疼痛及び腫れを引き起こす比較的軽度の症状から、極度の衰弱及び身体不能までの範囲に及び得る。関節の緩衝組織の完全な破壊もまた、骨侵食につながる可能性がある。この疾患の高い罹患率は、苦しんでいる個人に影響を及ぼすだけでなく、医療業界へのコスト増加及び職場での生産性の低下をもたらす。ＯＡ症例の約３５〜５０％が、遺伝子的に決定される可能性がある。他の危険因子には、過剰体重、関節損傷、過度の機械的ストレス、歯列不正、女性、及び老化が挙げられる（非特許文献１）。軟骨、骨及び滑膜の異常が絡み合うことで、関節の変性につながる。

変形性関節症の治療レジメンは、細胞性／炎症性サイトカインの相互作用を直接媒介し、疾患の進行を永続させる薬学的治療を含む。市販薬及び処方薬は症状軽減のために提供されているが、多くの副作用を引き起こす。高用量の非ステロイド抗炎症薬、例えば、アスピリン、イブプロフェン又はアセトアミノフェンを長期間使用すると、吐き気、消化管出血、場合によっては肝障害につながる可能性がある。コルチコステロイド等のより強力な処方薬は、骨粗鬆症、白内障及び血糖上昇につながる可能性がある。

タマリンダス・インディカ Ｌ．一般名：インディアンタマリンド、タマリンド。
タマリンド（タマリンダス・インディカ）は、単型種であり、タマリンド属には１種しか存在しないことを意味する。この熱帯植物は、主にアフリカの原産で、アフリカ大陸全体に広がっている。スーダンやインドでは、野生で生育している。タマリンド（タマリンダス・インディカ Ｌ．）は常緑樹で、成長は遅いが長く生存する植物であり、高さ１５〜２５メートル、円周７．５メートルまでの大きさになり得る。タマリンドは根が深く、ざらざらした濃い灰色の樹皮で枝はしっかりしており、強風にも耐えるような柔軟性がある。タマリンドの木は、３〜７歳の年齢で果実を実らせ始める。果実は、種子によって再び実る。実の生産は１５歳で安定する。木は４０〜６０歳まで生産性がある。タマリンドの種子は硬く、茶色で、保護用の内果皮層に包まれている。葉鞘は、一般に、直径が各１ｃｍの２〜１０個の種子を含有する。Ｔ．インディカの一般的に使用される部分は、花、果実の果肉、種子、葉、根、幹又は樹皮である。

特許文献１は、タマリンダス・インディカ種皮の抽出方法を開示している。

ウコン、即ち、薬草クルクマ・ロンガＬ．（ショウガ科）の粉末根茎は、インド料理やアジア料理に幅広く使用されており、着色料や着香料としても使用されている。粉末ウコン又はその抽出物は、市販されている多くの植物性サプリメントに含まれている。アーユルヴェーダ医学では、ウコンは伝統的に炎症、皮膚創傷及び腫瘍の治療に使用されている（非特許文献２）。クルクミノイドは、クルクマ・ロンガに見られる主要な活性化合物である。ウコン抽出物及びクルクミノイドは、抗菌、抗炎症、抗酸化及び抗癌作用を有することが報告されている。総クルクミノイドを含むＣ．ロンガのアルコール抽出物が、本発明を実証するために使用される。総クルクミノイドに富む他の溶媒抽出物又は画分もまた、使用することができる。

米国特許出願第２００８／０２８６３８７号明細書

Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｓｔｅｏａｒｃｈａｅｏｌｏｇｙ，２００７，１７：４３７−４５０ Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．，５７：１−７，１９９１

しかし、抗関節炎活性を増強するためのタマリンダス・インディカ種子及びクルクマ・ロンガ根茎に由来する抽出物を含む組成物に関する、発明者の知る限りの最も優れた先行技術は存在しない。

従って、本発明の主な目的は、タマリンダス・インディカ及びクルクマ・ロンガ由来の抽出物又は画分の治療上有効な組み合わせを含む、相乗的機能性組成物又は栄養補助組成物を提供することである。

上記の欠点を改善するために、本発明は、治療有効量の、
ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むタマリンダス・インディカ種子のアルコール／水アルコール抽出物と、
ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、の組み合わせを含み、
ｃ）任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態の予防又は治療に有用な薬学的、機能学的または栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する新規の相乗的組成物を開示する。

一態様では、プロアントシアニジン化合物を含むタマリンダス・インディカ種子抽出物を調製するために使用されるアルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノール並びにそれらの混合物からなる群から選択される。クルクマ・ロンガ抽出物は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、アセトン、酢酸エチル及び上記抽出物に由来する総クルクミノイドに富むその画分からなる群から選択される溶媒を使用してクルクマ・ロンガ根茎から調製されてもよい。

本発明の組成物を配合するために使用することができる薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤は、界面活性剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、防腐剤、安定剤、緩衝剤、ポリマー、着色剤、風味剤、懸濁剤および薬物送達システムから選択されてもよい。

好ましい態様では、本発明の相乗的組成物は、（ａ）２０％〜８０％の範囲で変化するタマリンダス・インディカ種子抽出物と、（ｂ）２０％〜６０％の範囲で変化するクルクマ・ロンガ根茎抽出物とを含み、（ｃ）任意選択で０〜３０％の範囲で変化する賦形剤／担体を含有する。

代替の態様では、本発明は、ａ）主としてプロアントシアニジンからなる１〜９９重量％のアルコール又は水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類からなる１〜５０重量％の水抽出物と、を含み、任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ及び変形性関節症から選択される少なくとも１つの疾患状態の治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規の相乗的タマリンダス・インディカ種子抽出物を提供する。

更に別の態様では、本発明は、患者の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態を予防又は治療するための方法を提供し、該方法は、ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むタマリンダス・インディカ種子のアルコール／水アルコール抽出物と、ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、を含み、任意選択で必要性のある患者に薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する有効量の相乗的組成物を患者に投与することを含む。

更なる態様では、本発明は、必要性のある患者の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される疾患状態を治療するための方法を提供し、該方法は、ａ）主としてプロアントシアニジンからなる１〜９９重量％のアルコール又は水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類からなる１〜５０重量％の水抽出物と、を含み、任意選択で薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する有効量の新規の相乗的タマリンダス・インディカ種子抽出物を患者に投与することを含む。

本発明による新規の相乗的組成物は、経口的又は局所的に投与されるように配合されてもよい。従って、医薬／機能性組成物は、様々な投与経路のために錠剤、軟質ゲル、カプセル、顆粒、粉末、液体、溶液、クリーム、ローション、噴霧剤、移植、又は経皮パッチの形態で調製されてもよい。

更に別の態様では、本発明は、治療有効量の、ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むアルコール又は水アルコール抽出物から選択されるタマリンダス・インディカ種子抽出物と、ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物の組み合わせを含み、ｃ）任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態の予防又は治療のための薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する新規の相乗的組成物の使用を提供する。

本発明の１又は複数の実施形態の詳細が、以下の説明に記載される。本発明の他の特徴又は利点は、以下のいくつかの実施形態の詳細な説明から明らかとなり、また、添付の特許請求の範囲からも明らかとなるであろう。

Ｔ．インディカ種子のメタノール抽出物（抽出物１）から単離及び特徴付けされた様々なフラバノール及びプロアントシアニジン化合物を示す図である。 ラット足浮腫（Ａ）、足浮腫の阻害率（Ｂ）及び体重負荷率（Ｃ）を棒グラフで表した図である。各バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ、ｎ＝６を示す。＃＃ｐ＜０．０１ｖｓ正常対照（Ｇ１）；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１ｖｓＡＩＡ対照（Ｇ２）、ワンウェイＡＮＯＶＡ、ダネット検定。Ｇ３及びＧ４は、２００及び４００ｍｇ／ｋｇ体重の組成物１１を補充した処置群であり、Ｇ５は、１０ｍｇ／ｋｇ体重のプレドニゾロンを補給した処置群である。

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術の当業者によって一般的に理解される意味と同一の意味を有する。

炎症は、体内に侵入した病原体、損傷細胞又はアレルギー性因子等の刺激に対する脈管組織の応答である。これは、有害な病原体又は因子を除去し、組織を保護するための生物体による防御機構である。炎症促進性サイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ並びにＣＤ４＋、Ｔｈ２サブセット由来のＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３リンホカイン等は、炎症性疾患の免疫病因の重要な因子であると考えられている［Ｋｎｉｇｈｔ Ｄ Ａら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１０８：７９７−８０３］。

５−リポキシゲナーゼは、炎症プロセスの枢要な工程であるアラキドン酸からのロイコトリエンの合成に重要な酵素である。ロイコトリエンは、炎症性疾患の枢要なメディエータである。５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）の活性化及び遺伝子発現は、炎症性疾患状態の原因である。そのため、５−ＬＯＸのブロック又は下方調節は、炎症状態の治療及びコントロールのための有効な治療アプローチである。

腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、マクロファージによって主に産生される重要な多面的な炎症促進性サイトカインである。ＴＮＦαは、急性期タンパク質であり、サイトカインのカスケードを開始させ、血管透過性を増加させ、それによってマクロファージ及び好中球を感染部位に動員するケモタキシンである。しかし、高レベルのＴＮＦαは、有害な効果を有し、多くの疾患状態につながるであろう。そのため、ＴＮＦαは、広範囲の炎症性疾患に対する新規の治療を開発するための重要なターゲットである。

マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、あらゆる種類の細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲン及びプロテオグリカンを分解することができ、軟骨の疾患及び炎症を引き起こす可能性がある亜鉛依存性エンドペプチダーゼである。ＭＭＰは、主として３つの主要な群、線維芽細胞コラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ゼラチナーゼＡ（ＭＭＰ−２）及びゼラチナーゼＢ（ＭＭＰ−９）を含むゼラチナーゼ類、及びストロメリシン−１（ＭＭＰ−３）を含むストロメリシン類に大別される。ＭＭＰ−３タンパク質の発現は、ＯＡの病原メカニズムに密接に関連している。そのため、これは変形性関節症の早期診断および治療の重要な指標となり得る。

抗炎症及び抗変形性関節症活性を有する新規の化合物の探索中、本発明者らは、タマリンダス・インディカ種子のアルコール抽出物がいくつかの予期せぬ特性を有することを見出した。抽出培地としてメタノール（抽出物１）又はエタノール（抽出物１Ａ）を用いて産出したＴ．インディカ粉末種子原料の抽出物は、分光光度法（ＵＳＰ ２９−ＮＦ ２４ ２５５２ページ）に従って分析した場合、主にプロアントシアニジン（ＰＡＣ）を含有している。フラッシュ及び分取ＨＰＬＣシステムでの広範なクロマトグラフィーによる抽出物の精製、続いてｗａｔｅｒ Ｘｅｖｏ Ｇ２ ＱＴＯＦ質量分析計でのＮＭＲおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析は、図１に要約するように、カテキン、エピカテキン、プロシアニジンＢ２（二量体）、プロシアニジンＣ１（三量体）、プロシアニジン（四量体）、プロシアニジン（五量体）及びプロシアニジン（六量体）の存在を示した。アセトン、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール及びそれらの混合物から選択された水性アルコール若しくは他の有機溶媒、又は水の割合が低いそれらの水溶液による抽出もまた、プロアントシアニジン含有抽出物を生じた。一方、Ｔ．インディカ種子の水抽出物（抽出物４）は、主に多糖類化合物を有し、プロアントシアニジン化合物はごくわずかな量である。タマリンド種子多糖類（ＴＳＰ）を含有するタマリンド種子抽出物又は画分は、独特の特性を有する。同様に、プロアントシアニジン（ＰＡＣ）化合物を含有するＴ．インディカ種子のメタノール又はエタノール抽出物もまた、独特の特性を示し、以下の表（表１）に示すように、ＴＳＰ含有抽出物又は画分とは異なる。

本発明で使用されるタマリンダス・インディカ種子抽出物／画分は、アルコール又は水アルコールを用いたタマリンダス・インディカ種子に由来する抽出物、又はタマリンド種子のアルコール抽出物及び水抽出物を含有する混合抽出物であり得る。独自の方法において、本発明で使用するＴ．インディカ種子抽出物は、Ｔ．インディカ種子を粉末化し、次いで、メタノール又はエタノール等のアルコールで粉末を抽出して抽出物１又は抽出物１Ａをそれぞれ得ることによって得ることができる。アルコール抽出後の残った種子残留物をその後水で抽出し、タマリンド種子残留物の水抽出物（抽出物２／抽出物２Ａ）を得た。あるいは、種子粉末を直接水で抽出すると、抽出物４が得られた。Ｔ．インディカ種子のアルコール抽出物は、非常に強力な５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）及びシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害活性を示し、表３、表４及び表５に要約するように、ＴＮＦα及びＭＭＰ−３の強力な阻害も示した。比較したＴ．インディカ種子の水抽出物（抽出物２／抽出物２Ａ／抽出物４）は、上記の研究において劣った有効性を示した。濃縮したアルコール抽出物及び水抽出物を所望の比率で混合し、新しい抽出物（抽出物３、５、６及び７）を得た。あるいは、抽出溶液を混合して蒸発させ、混合した新しい抽出物を得た。アルコール抽出物（抽出物１）と水抽出物（抽出物２）とをそれぞれ１：１および１０：１の比率で混合することによって、抽出物３及び抽出物５が得られる。本発明の一部として調製された異なる抽出物を、表２に要約する。驚くべきことに、そのプロアントシアニジン含有アルコール抽出物（抽出物１又は抽出物１Ａ）又はそれらの画分をタマリンド種子多糖類含有水抽出物（抽出物２又は抽出物４）又はそれらの画分と混合することによって得られたＴ．インディカの混合抽出物（抽出物３、抽出物５、抽出物６及び抽出物７）は、独特の／改善された生物学的特性を示すことが見出された。混合抽出物、即ち、抽出物３、抽出物５及び抽出物６は、例えば、表５に要約する個々の抽出物が示す２６．０２％（抽出物１）、０％（抽出物２）及び０％（抽出物４）阻害と比較して、２５μｇ／ｍｌ濃度のヒト滑膜細胞ＳＷ９８２において、それぞれ４６．７１％、３９．５８％及び４６．５２％のＭＭＰ−３阻害率を示した。同様に、混合抽出物、即ち、抽出物３、抽出物５、抽出物６及び抽出物７は、表３に要約する個々の抽出物、抽出物１、抽出物２及び抽出物４がそれぞれ示すＩＣ５０に対する１５．６２μｇ／ｍＬ、＞１００μｇ／ｍＬ及び＞１００μｇ／ｍＬと比較して、それぞれ１２．０２、１３．０５、１０．７２及び１１．０８μｇ／ｍＬの最大阻害濃度の半分（ＩＣ_５０）でより強力な５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示した。これは、プロアントシアニジンを含有するＴ．インディカの抽出物又は画分が、多糖類を含有する抽出物又は画分と相乗作用することを明らかにしている。

驚くべきことに、タマリンダス・インディカ種子抽出物を含有する組成物が、クルクマ・ロンガ抽出物と混合された場合に相乗作用を示すことも見出された。総クルクミノイドを含むＣ．ロンガのアルコール抽出物が、本発明を実証するために使用される。総クルクミノイドに富む他の溶媒抽出物又は画分もまた使用することができる。例えば、それぞれ１：１及び２：１でＴ．インディカメタノール抽出物（抽出物１）及びクルクマ・ロンガメタノール抽出物（抽出物８）を含有する組成物１及び組成物２は、個々の成分、抽出物１（１５．６２μｇ／ｍＬ）及び抽出物８（１７．９６μｇ／ｍＬ）（表３）と比較して、それぞれ８．９８及び７．８１μｇ／ｍＬの最大阻害濃度の半分（ＩＣ_５０）を示した。そのため、組成物により示される有効性は対応する個々の成分より優れており、Ｔ．インディカ及びＣ．ロンガの抽出物による５−リポキシゲナーゼ酵素の相乗的阻害を示唆している。同様に、他の組成物（組成物３〜７）もまた阻害を示し、表３に要約する対応する個々の成分によってもたらされる相加効果より優れていることが見出された。更に、タマリンダス・インディカ種子抽出物はまた、クルクマ・ロンガ根茎抽出物と混合された場合にサイトカインＴＮＦαの相乗的阻害も示した。組成物１〜１０はＴＮＦαの優れた阻害を示し、これは、同様の用量で対応する個々の成分が示す阻害より優れており、及び／又は個々の成分について推定された相加効果より優れている。例えば、組成物１、２、３及び４は、対応する個々の成分、タマリンダス・インディカ種子メタノール抽出物（抽出物１）及びクルクマ・ロンガメタノール抽出物（抽出物８）がそれぞれ示す４８．１３％及び７８．７８％の阻害と比較して、１０μｇ／ｍｌ濃度でそれぞれＴＮＦαの９９．２％、８１．９４％、６５．０９％及び９５．２５％の阻害を示した。同様に、Ｔ．インディカ種子混合抽出物（抽出物５）に由来する組成物６及び組成物８もまた、それらの個々の成分、抽出物５（３４．２７％）及び抽出物８（７８．７８％）と比較し、それぞれ９１．１４％及び８６．６９％のＴＮＦα阻害の相乗的活性を示した。他の組成物もまた、表４に要約するように改善されたＴＮＦα阻害を示した。本発明の組成物を更に試験して、ヒト滑膜細胞ＳＷ９８２におけるＭＭＰ−３を阻害するそれらの有効性を評価した。タマリンダス・インディカ種子メタノール抽出物（抽出物１）に由来する組成物１、２及び４並びにＴ．インディカ種子混合抽出物（抽出物５）に由来する組成物６及び組成物８もまた、２５μｇ／ｍｌ濃度でのＭＭＰ−３産生においてそれぞれ１０２．１％、９９．２％、９５．０７％、１０６．３８％及び１１５．２７％減少のＭＭＰ−３の完全な阻害を示した。比較におけるそれらの個々の成分、抽出物１、抽出物５及び抽出物８は、それぞれＭＭＰ−３の２６．０２％、３９．６％及び８２．８１％の阻害を示した。インビトロでの本発明の組成物によって示される改善された有効性は、関節炎のアジュバント誘発モデルを用いてインビボで更に確認された。クルクマ・ロンガ抽出物（抽出物８）及びＴ．インディカ抽出物（抽出物５）を含有する組成物６は、表６に要約するその個々の成分、抽出物５及び抽出物８と比較して、関節炎のアジュバント誘発モデルにおいて優れた有効性を示した。最後に、賦形剤と共にＴ．インディカ種子混合抽出物５及びクルクマ・ロンガ抽出物を含有する組成物１１は、図２Ａ及び図２Ｂに示すように、体重１ｋｇにつき用量２００ｍｇ及び４０ｍｇでそれぞれ足浮腫の２２．３％減及び３０．３％減という足浮腫の用量依存的阻害を示した。体重負荷能力の割合は、誘発前及び処置の２０日目に全ての群において、両足圧力差痛覚測定器（Ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ Ｍｅｔｅｒ）（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．，ＣＡ）を用いて測定し、データを表７及び図２Ｃに要約した。組成物１１は体重負荷の用量依存的改善を示し、４００ｍｇ／ｋｇ処置群は、疾患対照群と比較して体重負荷において統計的に有意な改善を示した。

前述のことから、アルコール抽出物及び多糖類含有水抽出物を含有するプロアントシアニジンを含むＴ．インディカ種子の混合抽出物、及びタマリンド種子抽出物およびクルクマ・ロンガ抽出物を含む組成物は、炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解に対して改善された治療を提供することが明らかである。

主な実施形態において、本発明は、Ｔ．インディカ種子抽出物をクルクマ・ロンガ、ジンジャー・オフィシナーレ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、アンノナ・スクアモサ（Ａｎｎｏｎａ ｓｑｕａｍｏｓａ）、アンドログラフィス・パニクラタ（Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）、ウィタニア・ソムニフェラ（Ｗｉｔｈａｎｉａ ｓｏｍｎｉｆｅｒａ）から選択される植物材料に由来する少なくとも１つの抽出物、好ましくは、クルクマ・ロンガの抽出物と組み合わせて含む相乗的組成物に関する。他の主な実施形態では、本発明は、プロアントシアニジンを含有する有機溶媒抽出物を、選択された比率で多糖類を含有するタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と混合することによって得られたタマリンダス・インディカ種子の改良抽出物を提供する。

従って、本発明は、治療有効量の、
ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むタマリンダス・インディカ種子のアルコール／水アルコール抽出物と、
ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、の組み合わせを含み、
ｃ）任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態の予防又は治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規の相乗的組成物を開示する。

タマリンダス・インディカ種子及びクルクマ・ロンガ根茎抽出物を含む変形性関節症の治療のための本相乗的組成物はまた、栄養補助組成物として配合されてもよい。

他の実施形態では、タマリンダス・インディカ抽出物とクルクマ・ロンガ根茎抽出物との間の比率は、１：１０〜１０：１の範囲で変化する。

好ましい実施形態では、本発明は、タマリンダス・インディカ抽出物又は１０〜８０重量％の範囲のその画分と、クルクマ・ロンガ抽出物又は２０〜８０重量％の範囲の画分とからなり、任意選択で０〜３０％の範囲で変化する賦形剤／担体を含有する、相乗的栄養補助／薬草組成物を提供する。

別の好ましい実施形態では、相乗的組成物は、（ａ）４０％〜７０％の範囲で変化するタマリンダス・インディカ種子抽出物と、（ｂ）２０％〜４０％の範囲で変化するクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、を含み、（ｃ）任意選択で０〜１５％の範囲で変化する賦形剤／担体を含有する。

更に別の好ましい実施形態では、相乗的組成物は、ａ）６０％のタマリンダス・インディカ種子抽出物と、ｂ）３０％のクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、ｃ）１０％の賦形剤／担体と、を含む。

他の主な実施形態によると、本発明は、ａ）主としてプロアントシアニジンからなる１〜９９重量％のアルコール又は水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類からなる１〜５０重量％の水抽出物と、を含み、任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ及び変形性関節症から選択される少なくとも１つの疾患状態の治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規の相乗的タマリンダス・インディカ種子抽出物を提供する。

別の実施形態では、薬草の抽出物又は画分、Ｔ．インディカの種子及びＣ．ロンガの根茎を調製するために使用することができる溶媒は、酢酸エチル、アセトン、酢酸、エタノール又はメタノール等のＣ１〜Ｃ５アルコール、水及びそれらの混合物から選択することができる。具体的には、プロアントシアニジン化合物を含むタマリンダス・インディカ種子抽出物を調製するために使用することができるアルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノール並びにそれらの混合物からなる群から選択されてもよい。クルクマ・ロンガ抽出物は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、アセトン、酢酸エチル及び上記抽出物に由来する総クルクミノイドに富むその画分から選択される溶媒を使用してクルクマ・ロンガ根茎から調製されてもよい。

本明細書で使用される用語「担体／賦形剤」又は「薬学的に許容される担体」は、当業者に周知の希釈剤、賦形剤、許容される薬剤等を指し、医薬組成物の調製に使用することができる。

相乗的組成物は、様々な投与経路のために、薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤と共に薬用ドロップ、錠剤、フィルムコーティング錠剤、カプセル、軟質カプセル、顆粒、粉末、丸薬、溶液、乳剤、注射液、注射、軟膏、クリーム、噴霧剤、吸入剤、軟質ゲル、液体、ローション、移植、又は経皮パッチの形態で調製される。組成物の調製のために使用できる薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤は、界面活性剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、防腐剤、安定剤、緩衝剤、ポリマー、着色剤、風味剤、懸濁剤及び薬物送達システムから選択されてもよい。

本発明は更に、本明細書に記載のタマリンダス・インディカ種子抽出物及びクルクマ・ロンガ根茎抽出物を含み、任意選択で関節炎又は関節リウマチの１又は複数の要素の予防、制御及び治療のための薬学的に許容される担体を含有する組成物を提供する。関節炎の非限定的な例には、関節リウマチ（軟部組織リウマチおよび非関節リウマチ、線維筋痛症、結合組織炎、筋肉リウマチ、筋筋膜痛、上腕骨上顆炎、五十肩、ティーツェ症候群、筋膜炎、腱炎、腱滑膜炎、滑液包炎等）、若年性慢性関節炎、関節疾患、脊椎関節症（強直性脊椎炎）、変形性関節症、高尿酸血症、及び急性痛風、慢性痛風、全身性エリテマトーデス並びに変性性関節炎に関連する関節炎が挙げられる。

更に別の実施形態では、本発明はまた、タマリンダス・インディカ又はタマリンダス・インディカ種子抽出物及びクルクマ・ロンガ根茎抽出物を含み、任意選択で賦形剤／希釈剤を含有する組成物に由来する改良抽出物を投与することによって、必要性のある対象又は哺乳動物の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、およびコラーゲン分解を含むが、これらに限定されない炎症に関連する炎症及び疾患状態を治療する方法を提供する。

従って、本発明は、必要性のある患者の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される疾患状態を治療するための方法を提供し、該方法は、ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むタマリンダス・インディカ種子のアルコール／水アルコール抽出物と、ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物とを含み、任意選択で薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する有効量の新規の相乗的組成物を患者に投与することを含む。

別の実施形態では、本発明は、必要性のある患者の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される疾患状態を治療するための方法を提供し、該方法は、ａ）主としてプロアントシアニジンからなる１〜９９重量％のアルコール又は水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類からなる１〜５０重量％の水抽出物とを含み、任意選択で薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する有効量の新規の相乗的タマリンダス・インディカ種子抽出物を患者に投与することを含む。

更に別の実施形態では、本発明は、治療有効量の、ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むアルコール又は水アルコール抽出物から選択されるタマリンダス・インディカ種子抽出物と、ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物の組み合わせを含み、ｃ）任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態の予防又は治療のための薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する新規の相乗的組成物の使用を提供する。

更なる実施形態では、本発明は、ａ）プロアントシアニジンを含む１〜９９重量％の種子アルコール又は種子水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類を含有する１〜５０重量％の水抽出物とを含み、任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ及び変形性関節症から選択される少なくとも１つの疾患状態の治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する新規のタマリンダス・インディカ種子抽出物の使用を提供する。

治療のための最も適切な経路及び投与量は、当業者によって容易に決定されるであろう。投与量は、治療される症状の性質及び状態、治療される患者の年齢及び全身的な身体状態、投与経路、並びに以前に実施された療法に依存する。

本発明の相乗的組成物はまた、経口的に送達することができ、その剤形は固形又は液状とすることができる。固形組成物には、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、顆粒等が含まれる。経口剤形には、うがい薬及び薬用ドロップも含まれる。カプセルには、硬質及び軟質カプセルが含まれる。そのような経口固形組成物は、単独で、あるいは希釈剤、キレート剤、崩壊剤、潤滑剤、安定剤及び共溶媒と組み合わせて使用して、当技術分野で公知の方法を使用することによって必要な剤形を形成することができる。

固形の担体、希釈剤又は賦形剤の好ましい例としては、これらに限定されないが、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース、黄色デキストリン、白色デキストリン、エアロゾル、微晶質セルロース、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、ラクトース、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アカシア、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ群、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸、カルシウム塩、色素、フレーバ、及び防腐剤が挙げられる。

液状担体（希釈剤）の好ましい例としては、蒸留水、生理食塩水、グルコース水溶液、アルコール（例えば、エタノール）、プロピレングリコール及びポリエチレングリコール、並びに油性担体、例えば、種々の動物油及び植物油、白軟パラフィン、パラフィン及びワックスが挙げられる。

本発明の別の実施形態は、上記の様々な製剤、栄養補助、食品及び飲料組成物中の本発明の組成物の量が均一でなくてもよく、製剤の性質によって異なることを提供し、ヒト又は動物に提案される組成物の投与量は、例えば、約０．００１％〜９９％、より好ましくは約０．００１〜９０ｗｔ％の組成物の投与量である。

以下の具体的な実施例は、一例に過ぎず、何であれ決して本開示の残りの部分を制限するものでないと解釈されるべきである。さらなる詳述なしに、当業者は、本明細書の説明に基づき、本発明を最大限に利用できると考えられる。

実施例１：タマリンダス・インディカのアルコール抽出物の調製

植物材料の乾燥種子（１．０Ｋｇ）を粗粉に粉砕し、アルコール（メタノール、８Ｌ）により６０〜６５℃で２時間抽出した。抽出プロセスは、植物材料に対してアルコールを１：５〜１：７Ｗ／Ｖの比率で使用して３回繰り返した。全ての抽出物を混合し、混合したアルコール抽出物を精密濾過し、透明な抽出物を真空下で５０〜５５℃で蒸発させて濃厚なペーストを得た。上記材料を高真空下で８〜１０時間乾燥させて、乾燥粉末としてアルコール抽出物（抽出物１、１３０ｇ）を得た。

次に、残留物に残った種子を水（８Ｌ）で抽出した。抽出は、水（６Ｌ）で２回繰り返した。水抽出物を混合して、精密濾過した。抽出物を真空下で蒸発させ、残留物を真空乾燥機において７５〜８５℃で最終乾燥させて水抽出物（抽出物２、３０ｇ）を得た。これらの２つの抽出物（抽出物１および抽出物２）を１：１で混合し、篩過して混合して均質な粉末（抽出物３）を得た。

タマリンダス・インディカ種子のエタノール抽出物および種子残留物の水を、上述の方法を用いて調製して、それぞれ１１９．２ｇのエタノール抽出物（抽出物１Ａ）及び３６．４ｇの水抽出物（抽出物２Ａ）を得た。エタノールプロセスからの抽出物の化学的プロフィールは、メタノールプロセスから得られたものと正確に一致した。

アセトン、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノール等の他の溶媒もまた、多かれ少なかれ同様の化学的プロフィールを有する抽出物を調製するために使用することができる。

抽出物１の物理的及び化学的パラメータは、標準的な手順を用いて評価される。プロアントシアニジン（ＰＡＣ）含量は、ＵＶ分光光度法（ＵＳＰ ２９−ＮＦ ２４ ２５５２ページ）を用いて評価し、多糖類含量は、以下の試験手順に従って重量法を用いて評価した。

多糖類の推定手順：
約２．５ｇのサンプルを２５０ｍｌのビーカに秤量し、１５ｍｌの水を加え、時計皿でビーカを覆い、溶液をウォーターバスで加熱して固体を溶解させた。溶液を冷却し、遠心分離して透明な液体を２５０ｍｌのビーカに回収し、２５ｍｌの８０％メタノールを加えてよく混合し、次いで５０ｍｌの９５％メタノールを加え、マグネチックスターラで１時間攪拌した。沈殿物を予め乾燥させてワットマンＮｏ．１濾紙に秤量して定量的に濾過し、ビーカおよび濾紙を２×２５ｍｌの８０％メタノールで洗浄した。残留物を１０５℃±２℃で１時間、オーブンで乾燥させ、冷却して沈殿物を秤量した。式：多糖の割合＝残留物の重量／サンプルの重量×１００を用いて、多糖類の割合を計算した。抽出物１の多糖類含量は、０％である。

プロアントシアニジン（プロシアニジン）の推定手順：
１．０ｍｌの標準及びサンプル溶液（プロシアニジン濃度９５μｇ／ｍｌ）の各々並びにメタノールを、３つの別々の１０ｍｌバイアルに移した。各バイアルに、６．０ｍｌの試薬Ａ（９５：５の比率のブタノールと塩酸との混合物）及び０．２５ｍｌの試薬溶液Ｂ（２％硫酸鉄アンモニウムと１７．５ｍｌとの塩酸の混合物）を加えた。混合してバイアルを水浴で４０分間加熱し、すぐに室温に冷却し、試薬Ａで容量１０ｍｌに希釈した。ブランクとしてメタノール含有溶液を用いて、標準溶液及びサンプル溶液から得た溶液の吸光度を測定した。抽出物の総プロシアニジンの割合は、以下の式を用いて計算した。

総プロシアニジン＝サンプルの吸光度／標準の吸光度×標準の濃度／サンプルの濃度×標準の純度（参考：ＵＳＰ ３７ ＮＦ３２ ５４８４ページ）。抽出物１のプロアントシアニジン含量は＞９０％である。

メタノール抽出物の特性を表１に要約する。抽出物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー及び分取ＨＰＬＣ精製を用いて集中的に精製して、いくつかのフラバノイド及びプロアントシアニジン化合物を得た。選択されたフラバノール及びプロアントシアニジン化合物の構造をＸｅｖｏ Ｇ２ ＱＴＯＦ質量分析計でＮＭＲ及びＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を用いて特徴付けし、構造を図１に要約した。質量分析は、タマリンド種子のアルコール抽出物中にカテキン、エピカテキン、プロシアニジン二量体、プロシアニジン三量体、プロシアニジン四量体、プロシアニジン五量体及びプロシアニジン六量体の存在を示した。

実施例２
タマリンダス・インディカ水抽出物の調製

植物材料の乾燥種子（１．０Ｋｇ）を粗粉に粉砕し、水（８Ｌ）により８５〜９５℃で２時間抽出した。抽出は、水（６Ｌ）で２回繰り返した。水抽出物を混合して、精密濾過した。抽出物を真空下で蒸発させ、残留物を真空乾燥機において７５〜８５℃で最終乾燥させて直接水抽出物（抽出物４、９０ｇ）を得た。抽出物４のプロアントシアニジンおよび多糖類含量は、上記の手順を用いて測定した。プロアントシアニジン含量：０．３６％。多糖類含量：２４．４９％。

実施例３
タマリンダス・インディカ混合抽出物の調製

タマリンダス・インディカ混合抽出物（抽出物３）。
タマリンダス・インディカ種子のメタノール抽出物（抽出物１、１ｇ）をタマリンダス・インディカ種子残留物の水抽出物（抽出物２、１ｇ）と混合し、混合物を均一に混合して抽出物３を得た。

タマリンダス・インディカ混合抽出物（抽出物５）。
タマリンダス・インディカ種子のメタノール抽出物（抽出物１、１０ｇ）をタマリンダス・インディカ種子残留物の水抽出物（抽出物２、１ｇ）と混合し、混合物を均一に混合して抽出物５を得た。

タマリンダス・インディカ混合抽出物（抽出物６）。
タマリンダス・インディカ種子のメタノール抽出物（抽出物１、１０ｇ）をタマリンダス・インディカ種子の水抽出物（抽出物４、１ｇ）と混合し、混合物を均一に混合して抽出物６を得た。

タマリンダス・インディカ混合抽出物（抽出物７）。
タマリンダス・インディカ種子のメタノール抽出物（抽出物１、１０ｇ）をタマリンダス・インディカ種子残留物の水抽出物（抽出物２、２ｇ）と混合し、混合物を均一に混合して抽出物７を得た。

上記の成分の比率を変えた組成物は、同一の方法を用いて調製することができる。

実施例４
クルクマ・ロンガのアルコール抽出物の調製

植物材料の乾燥根茎（１．０Ｋｇ）を粗粉に粉砕し、メタノール（９Ｌ）により６０〜６５℃で２時間抽出した。抽出方法は、植物材料に対してメタノールを１：６Ｗ／Ｖの比率で使用して３回繰り返した。全ての抽出物を混合し、混合したアルコール抽出物を精密濾過し、透明な抽出物を真空下で５０〜５５℃で蒸発させて緩いペーストを得た。上記材料を高真空下で６〜８時間乾燥させて、濃厚なペースト（９５ｇ；抽出物８、２０．１％総クルクミノイド）を得た。

クルクマ・ロンガ根茎のアセトン、エタノール、酢酸エチル及びメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）は、それぞれアセトン抽出物（７２ｇ、３０％総クルクミノイド）、エタノール抽出物（８０ｇ、２４％総クルクミノイド）、酢酸エチル抽出物（６４ｇ、２９．７％総クルクミノイド）およびＭＩＢＫ抽出物（８９ｇ、２２％総クルクミノイド）を得るために、同一の実験手順を用いて調製された。

上記の抽出物をアセトン洗浄し、総クルクミノイドを６０％まで濃縮した抽出物を得た。ＩＰＡ／メタノール中で繰り返し結晶化させると、総クルクミノイドを＞９５％含有する濃縮抽出物が得られた。

実施例５
組成物１：タマリンダス・インディカのアルコール抽出物（抽出物１）とクルクマ・ロンガのアルコール抽出物（抽出物８）とを１：１の比率で混合して、組成物１を調製した。

実施例６
組成物２：タマリンダス・インディカのメタノール抽出物（抽出物１）とクルクマ・ロンガのメタノール抽出物（抽出物８）とを２：１の比率で混合して、組成物２を調製した。

実施例７
組成物３：タマリンダス・インディカのアルコール抽出物（抽出物１）とクルクマ・ロンガのアルコール抽出物（抽出物８）とを３：１の比率で混合して、組成物３を調製した。

実施例８
組成物４：タマリンダス・インディカのメタノール抽出物（抽出物１）とクルクマ・ロンガのメタノール抽出物（抽出物８）とを１：３の比率で混合して、組成物４を調製した。

実施例９
組成物５：タマリンダス・インディカの抽出物５とクルクマ・ロンガのアルコール抽出物（抽出物８）とを３：１の比率で混合して、組成物５を調製した。

実施例１０
組成物６：タマリンダス・インディカの抽出物５とクルクマ・ロンガのメタノール抽出物（抽出物８）とを２：１の比率で混合して、組成物６を調製した。

実施例１１
組成物７：タマリンダス・インディカの抽出物６とクルクマ・ロンガのアルコール抽出物（抽出物８）とを３：１の比率で混合して、組成物７を調製した。

実施例１２
組成物８：タマリンダス・インディカ種子の抽出物５とクルクマ・ロンガのメタノール抽出物（抽出物８）とを１：２の比率で混合して、組成物８を調製した。

実施例１３
組成物９：タマリンダス・インディカ種子の抽出物７とクルクマ・ロンガのアルコール抽出物（抽出物８）とを３：１の比率で混合して、組成物１を調製した。

実施例１４
組成物１０：タマリンダス・インディカ種子の抽出物７とクルクマ・ロンガのメタノール抽出物（抽出物８）とを１：３の比率で混合して、組成物１を調製した。

実施例１５
組成物１１：タマリンダス・インディカ種子抽出物６０部［タマリンダス・インディカ種子のメタノール抽出物（抽出物１）５４部＋タマリンダス・インディカ種子残留物の水抽出物（抽出物２）６部）］、クルクマ・ロンガのメタノール抽出物（抽出物８）３０部、微晶質セルロース８部及びシリカ（Ｓｙｌｏｉｄ ２４４ＦＰ）２部を混合して、組成物１１を調製した。

実施例１６
５−リポキシゲナーゼ酵素（５−ＬＯＸ）阻害活性
Ｔ．インディカ種子抽出物の抽出物１〜抽出物７及びクルクマ・ロンガ根茎（抽出物８）の抽出物を含有する組成物１〜９の相乗的抗炎症活性

Ｌｉｐ Ｙｏｎｇ Ｃｈｕｎｇらの方法（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４７（１２），１１４２−１１４８、および２００９）を用いて、５−リポキシゲナーゼ酵素阻害活性を測定した。アッセイ混合物は、５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中に８０μＭリノール酸及び十分な量のジャガイモ５−リポキシゲナーゼを含んでいた。５μＬの５−ＬＯＸ酵素を、１７５μＬの５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ緩衝液に加えた。５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ緩衝液に５μＬリノール酸（最終濃度１４０μＭ）を加え、続いて暗所において２５℃で２０分インキュベートすることによって反応を開始した。反応混合物の全量は、１８５μＬである。新しく調製したＦＯＸ試薬６５μＬを加えることによって、アッセイを終了した。２０分間のインキュベート後、Ｘマークマイクロプレート分光光度計（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を使用して、５９５ｎｍで吸光度を読み取った。反応を１２０秒間モニターし、リノール酸を加える２分前に種々の濃度の試験物質をインキュベートすることによって、試験物質抽出物及び組成物の阻害能力を測定した。全てのアッセイを３回行った。試験物質について得られた曲線の傾きと対照の傾きを比較することによって、阻害率を計算した。組成物１〜９並びにＴ．インディカ種子抽出物（抽出物１〜抽出物７）及びクルクマ・ロンガ根茎抽出物（抽出物８）の阻害率（ＩＣ_５０値）を、表３に要約する。

表３の上記５−リポキシゲナーゼ阻害活性値は、５−リポキシゲナーゼ酵素の阻害におけるタマリンダス・インディカ抽出物及びクルクマ・ロンガ抽出物を含む組成物の相乗効果を明白に示している。この実験の結果は、抽出物の組成物が個々の抽出物より大きい５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示すことを示した。

実施例１７
タマリンダス・インディカ抽出物（抽出物１〜７）及びタマリンダス・インディカ抽出物及びクルクマ・ロンガ抽出物を含有する組成物（組成物１〜１０）によるインビトロでの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の阻害。

抽出物及び組成物の抗炎症活性を、細胞ベースのインビトロアッセイで評価した。簡潔には、ＴＨＰ−１ヒト単球細胞を洗浄し、１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したフェノールレッドを含まないダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に再懸濁した。同数の細胞を９６ウェルＴＣプレートの各ウェルに加え、この細胞に対し、抽出物及び組成物の様々な濃度の試験物質（０．５〜５０μｇ／ｍｌの範囲；５０ｍｇ／ｌ ｍＬのＤＭＳＯの各試験化合物を含有するストック溶液から培地中に調製された溶液）を用い、２時間の前処理を行った。炎症応答は、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで３７℃で４時間、５％ＣＯ_２の存在下で処理することにより誘発された。ビヒクル対照培養ウェルには、培地中の０．１％ＤＭＳＯを与えた。細胞培養上清を回収し、分泌型炎症促進性サイトカイン、ＴＮＦαについて評価した。ＴＮＦ−α濃度は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡによって供給された高度に特異的且つ高感度の酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）キットによって定量的に測定された。酵素免疫アッセイは、この業者により提供されたプロトコルに基づいて行われた。ＴＮＦ−αレベルに対する成分濃度についてのプロットから、ＴＮＦ−αの５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）を測定した。表４は、細胞ベースのインビトロモデルにおけるＴＮＦ−αの５０％阻害（ＩＣ_５０）についての抽出物及び組成物の濃度の比較を示している。

実施例１８
マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（ＭＭＰ−３）活性の阻害

ＭＭＰ−３は、ＩＬ−１β誘発ヒト滑膜細胞ＳＷ９８２において評価された。簡潔には、ＳＷ９８２細胞を、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン及び１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）を含むＤＭＥＭ中で培養した。実験の１日前に、９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＳＡ）に、１ウェルあたり５０００個の細胞を播種した。培養培地を、１％ウシ胎児血清を含有する新鮮なＤＭＥＭと交換した。抽出物及び組成物を２．５μｇ〜１００μｇ／ｍｌの範囲の培地で連続希釈し、５％ＣＯ_２により３７℃で２時間細胞とプレインキュベートし、次いで１０ｎｇ／ｍｌヒト組換えＩＬ−１β（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．）で２４時間刺激した。培養上清を採取し、これを用いてＥＬＩＳＡ開発キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．，ＵＳＡ）によりＭＭＰ−３産生を測定した。無細胞培養上清中のＭＭＰ−３濃度は、公知の濃度のＭＭＰ−３から生成された標準曲線に光学密度を補間することによって定量的に推定した。阻害率データを（表５）に要約する。

実施例１９
Ｓｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットにおけるＴ．インディカ抽出物（抽出物５）及びその相乗的組成物６のアジュバント誘発性関節炎に対する有効性

Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、床敷滅菌済みのステンレス鋼製トップグリルを備えたポリプロピレン製ケージ（３匹／ケージ）に収容した。動物には、げっ歯類用ペレット飼料及びミネラルウォーターを自由に与えた。実験に入る前に動物を３日間順化させた後、両足圧力差痛覚測定器による後肢体重負荷能力の測定のために、動物を実験者及び実験環境に慣れ／適応させた。４２匹の動物群を検査し、３６匹の健康なＳＤラットを研究のために選択し、足容積、即ち正常対照、ビヒクル対照、及び試験物質［タマリンダス・インディカ抽出物（抽出物５；４００ｍｇ）、クルクマ・ロンガ抽出物（抽出物８；４００ｍｇ）、並びにタマリンダス・インディカ抽出物（抽出物５）及びクルクマ・ロンガ抽出物（抽出物８）を含有する組成物６（４００ｍｇ）］を補充した３つの群に基づいて、６つの異なる群の１つに無作為に割り当てた。被験物質、対照物質又はビヒクルの投与の７日後、即ち８日目に、左後肢の足底下部に不完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）中の熱殺菌した結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（３００μｇ／動物）の０．１ｍＬ懸濁液を１回皮下注射することにより、Ｇ１を除く全ての群のラットにおいて関節炎が誘発された。対照群動物に、０．１ｍＬ生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム）を注射した。ビヒクル、被験物質及び対照薬物は、研究が終了するまで、即ち３５日間投与された。足容積は、０日目（処置前）及び３５日目にプレチスモメータ（Ｐａｎ Ｌａｂ，ＬＥ７５００）によって測定した。最終足容積と初期足容積との間の差を、浮腫容積とみなした。試験化合物のインビボ抗炎症応答を、ＣＭＣ補充対照群で観察された足浮腫と比較したときの足浮腫の阻害率を計算することによって推定した。データを表６に要約する。組成物６は、個々の成分、抽出物５及び抽出物８と比較して、足浮腫の優れた阻害を示した。

実施例２０
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおけるアジュバント誘発性関節炎に対する組成物１１の抗炎症活性。

Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、床敷滅菌済みのステンレス鋼製トップグリルを備えたポリプロピレン製ケージ（３匹／ケージ）に収容した。動物には、げっ歯類用ペレット飼料及びミネラルウォーターを自由に与えた。実験に入る前に動物を３日間順化させた後、両足圧力差痛覚測定器による後肢体重負荷能力の測定のために、動物を実験者及び実験環境に慣れ／適応させた。３５匹の動物群を検査し、３０匹の健康なＳＤラットを研究のために選択し、足容積、即ち正常対照（Ｇ１）、ビヒクル対照（Ｇ２）、並びに試験物質組成物１１（２００ｍｇ、４００ｍｇ）及び対照薬物プレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ５）を補充した２つの群（Ｇ３及びＧ４）に基づいて、５つの異なる群の１つに無作為に割り当てた。被験物質、対照物質又はビヒクルの投与の７日後、即ち８日目に、左後肢の足底下部に５０μＬ完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）を１回皮下注射することにより、Ｇ１を除く全ての群のラットにおいて関節炎が誘発された。対照群動物に、０．１ｍＬ生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム）を注射した。ビヒクル、被験物質及び対照薬物は、研究が終了するまで、即ち２０日間投与された。足容積は、０日目（処置前）及び２０日目にプレチスモメータ（Ｐａｎ Ｌａｂ，ＬＥ７５００）によって測定した。最終足容積と初期足容積との間の差を、浮腫容積とみなした。試験化合物のインビボ抗炎症応答を、ＣＭＣ補充対照群で観察された足浮腫と比較したときの足浮腫の阻害率を計算することによって推定した。組成物１１は、図２Ａ及び図２Ｂに要約するように、疾患対照群（Ｇ２）と比較して足浮腫の統計的に有意な用量依存的阻害を示した。２００ｍｇ及び４００ｍｇの組成物１１を補充した処置群は、足浮腫の２２．３％及び３０．３％の阻害を示したが、比較のプレドニゾロンは６９．７％の阻害を示した。体重負荷能力の割合は、誘発前及び処置の２０日目に全ての群において、両足圧力差痛覚測定器（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．，ＣＡ）を用いて測定した。データを表７及び図２Ｃに要約した。組成物１１は、体重負荷の用量依存的改善を示し、４００ｍｇ／ｋｇ処置群は、疾患対照群（Ｇ２）と比較して体重負荷において統計的に有意な改善を示した。

Claims (13)

1. 治療有効量の、
   ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むアルコール又は水アルコール抽出物から選択されるタマリンダス・インディカ種子抽出物と、
   ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、
   の組み合わせを含み、
   ｃ）任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態の予防又は治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規の相乗的組成物。
2. プロアントシアニジン化合物を含むタマリンダス・インディカ種子抽出物を調製するために使用される前記アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノール並びにそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の新規の相乗的組成物。
3. クルクマ・ロンガ抽出物が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、アセトン、酢酸エチル及び前記抽出物に由来する総クルクミノイドに富むその画分からなる群から選択される溶媒を使用してクルクマ・ロンガ根茎から調製される、請求項１に記載の新規の相乗的組成物。
4. 前記薬学的、機能学的または栄養学的に許容される担体／賦形剤が、界面活性剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、防腐剤、安定剤、緩衝剤、ポリマー、着色剤、風味剤、懸濁剤及び薬物送達システムから選択される、請求項１に記載の新規の相乗的組成物。
5. 前記組成物が、（ａ）２０％〜８０％の範囲で変化するタマリンダス・インディカ種子抽出物と、（ｂ）２０％〜６０％の範囲で変化するクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、を含み、（ｃ）任意選択で０〜３０％の範囲で変化する賦形剤／担体を含有する、請求項１に記載の新規の相乗的組成物。
6. 前記組成物が、（ａ）４０％〜７０％の範囲で変化するタマリンダス・インディカ種子抽出物と、（ｂ）２０％〜４０％の範囲で変化するクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、を含み、（ｃ）任意選択で０〜１５％の範囲で変化する賦形剤／担体を含有する、請求項１に記載の新規の相乗的組成物。
7. 前記組成物が、ａ）６０％のタマリンダス・インディカ種子抽出物と、ｂ）３０％のクルクマ・ロンガ根茎抽出物と、ｃ）１０％の賦形剤／担体と、を含む、請求項１に記載の新規の相乗的組成物。
8. ａ）プロアントシアニジンを含む１〜９９重量％の種子アルコール又は種子水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類を含有する１〜５０重量％の水抽出物とを含み、任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ及び変形性関節症から選択される少なくとも１つの疾患状態の治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規のタマリンダス・インディカ種子抽出物。
9. 前記組成物が、経口的又は局所的に投与されるように配合される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の新規の相乗的組成物。
10. 必要性のある患者の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される疾患状態を治療するための方法であって、治療有効量のタマリンダス・インディカ種子抽出物及びクルクマ・ロンガ根茎抽出物の組み合わせを含み、任意選択で請求項１に記載の薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する有効量の新規の相乗的組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。
11. 必要性のある患者の炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される疾患状態を治療するための方法であって、請求項８に記載の有効量の新規のタマリンダス・インディカ種子抽出物を前記患者に投与することを含む、方法。
12. 治療有効量の、ａ）プロアントシアニジンを単独で、あるいは多糖類を含むタマリンダス・インディカ種子の水抽出物と組み合わせて含むアルコール又は水アルコール抽出物から選択されるタマリンダス・インディカ種子抽出物と、ｂ）クルクミノイドを含むクルクマ・ロンガ根茎抽出物の組み合わせを含み、ｃ）任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ、変形性関節症、慢性非関節リウマチ、及びコラーゲン分解から選択される少なくとも１つの状態の予防又は治療のための薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規の相乗的組成物の使用。
13. ａ）プロアントシアニジンを含む１〜９９重量％の種子アルコール又は種子水アルコール抽出物と、ｂ）主に多糖類を含有する１〜５０重量％の種子水抽出物とを含み、任意選択で炎症、関節炎、関節痛、関節リウマチ及び変形性関節症から選択される少なくとも１つの疾患状態の治療に有用な薬学的、機能学的又は栄養学的に許容される担体／賦形剤を含有する、新規のタマリンダス・インディカ種子抽出物の使用。

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