JP2019500871A - 薄膜フローセル - Google Patents
薄膜フローセル Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019500871A JP2019500871A JP2018530563A JP2018530563A JP2019500871A JP 2019500871 A JP2019500871 A JP 2019500871A JP 2018530563 A JP2018530563 A JP 2018530563A JP 2018530563 A JP2018530563 A JP 2018530563A JP 2019500871 A JP2019500871 A JP 2019500871A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- membrane
- flow cell
- cell system
- plate
- reference surface
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000010409 thin film Substances 0.000 title description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims abstract description 61
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 274
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 87
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 54
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 49
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 24
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 claims description 11
- 239000004713 Cyclic olefin copolymer Substances 0.000 claims description 10
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 158
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 67
- 239000010408 film Substances 0.000 description 59
- 230000008569 process Effects 0.000 description 34
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 10
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 9
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 9
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- -1 etc.) Substances 0.000 description 4
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- UGACIEPFGXRWCH-UHFFFAOYSA-N [Si].[Ti] Chemical compound [Si].[Ti] UGACIEPFGXRWCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000003466 welding Methods 0.000 description 3
- WKBPZYKAUNRMKP-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(2,4-dichlorophenyl)pentyl]1,2,4-triazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1C(CCC)CN1C=NC=N1 WKBPZYKAUNRMKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 229910000676 Si alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000004049 embossing Methods 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000007769 metal material Substances 0.000 description 2
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004812 Fluorinated ethylene propylene Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007766 curtain coating Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- HQQADJVZYDDRJT-UHFFFAOYSA-N ethene;prop-1-ene Chemical group C=C.CC=C HQQADJVZYDDRJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910021389 graphene Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007756 gravure coating Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000003754 machining Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002991 molded plastic Substances 0.000 description 1
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920009441 perflouroethylene propylene Polymers 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 1
- 238000007764 slot die coating Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920003051 synthetic elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000005061 synthetic rubber Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000007666 vacuum forming Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502761—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip specially adapted for handling suspended solids or molecules independently from the bulk fluid flow, e.g. for trapping or sorting beads, for physically stretching molecules
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502715—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by interfacing components, e.g. fluidic, electrical, optical or mechanical interfaces
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
- B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1484—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry microstructural devices
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/149—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry specially adapted for sorting particles, e.g. by their size or optical properties
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
- G01N21/03—Cuvette constructions
- G01N21/05—Flow-through cuvettes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/48707—Physical analysis of biological material of liquid biological material by electrical means
- G01N33/48721—Investigating individual macromolecules, e.g. by translocation through nanopores
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/08—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a stream of discrete samples flowing along a tube system, e.g. flow injection analysis
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/34—Microscope slides, e.g. mounting specimens on microscope slides
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/06—Fluid handling related problems
- B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
- B01L2200/0668—Trapping microscopic beads
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/10—Integrating sample preparation and analysis in single entity, e.g. lab-on-a-chip concept
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/12—Specific details about manufacturing devices
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0636—Integrated biosensor, microarrays
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0654—Lenses; Optical fibres
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0848—Specific forms of parts of containers
- B01L2300/0851—Bottom walls
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/12—Specific details about materials
- B01L2300/123—Flexible; Elastomeric
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/16—Surface properties and coatings
- B01L2300/168—Specific optical properties, e.g. reflective coatings
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/18—Means for temperature control
- B01L2300/1805—Conductive heating, heat from thermostatted solids is conducted to receptacles, e.g. heating plates, blocks
- B01L2300/1822—Conductive heating, heat from thermostatted solids is conducted to receptacles, e.g. heating plates, blocks using Peltier elements
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
- B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
- B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
- B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
- B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
- B01L2400/049—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics vacuum
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6452—Individual samples arranged in a regular 2D-array, e.g. multiwell plates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
- G01N21/6458—Fluorescence microscopy
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Fluid Mechanics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
配列決定ステージおよび顕微鏡を含む配列決定装置。配列決ステージは、平坦な基準面を有する基準プレートを有する。顕微鏡の光軸は、基準面に対して垂直である。配列決定ステージは、フィルムの第1の側部に固定された複数のDNA鋳型を有する可撓性フィルムを受け取り、複数のDNA鋳型の少なくともいくつかを、顕微鏡の光軸に対して垂直である物体平面内に有する平坦な基準面に対して可撓性フィルムを保持するように構成される。
Description
関連出願の相互参照
本出願は、その内容が参照により本明細書の援用される、2015年12月28日に出願された、「薄層フローセルシステム」と題する米国仮特許出願第62/271,423号の利益を請求する。
本出願は、その内容が参照により本明細書の援用される、2015年12月28日に出願された、「薄層フローセルシステム」と題する米国仮特許出願第62/271,423号の利益を請求する。
発明の分野
本発明は、概して、合成による配列決定又は他の配列決定プロセスを実行するための装置に関し、より具体的には、このような機器で使用されるフローセルに関する。
本発明は、概して、合成による配列決定又は他の配列決定プロセスを実行するための装置に関し、より具体的には、このような機器で使用されるフローセルに関する。
関連技術の説明
DNA配列決定装置を用いてDNA分子配列を決定する。このような装置は、臨床研究、診断、いわゆる「パーソナライズド・メディカル」(個人の遺伝的内容に合わせた治療など)などに有用である。DNA配列決定を実施するための現在の装置は、DNA配列を形成する塩基対を分析するために様々な技術を使用する。例えば、一部の装置は、フローセル内の固定された一本鎖DNA分子断片(DNA鋳型)の配列決定を実行します。フローセルは、本質的に、DNA鋳型が一連の核酸塩基伸長プロセスを受ける小さなチャンバである。それぞれの連続した伸長を検出して、各DNA鋳型の塩基対配列を決定する。フローセルは、伸長プロセス中、及び検査プロセス中にDNA鋳型を保持する環境を提供し、各伸長した塩基対を読み取る。
DNA配列決定装置を用いてDNA分子配列を決定する。このような装置は、臨床研究、診断、いわゆる「パーソナライズド・メディカル」(個人の遺伝的内容に合わせた治療など)などに有用である。DNA配列決定を実施するための現在の装置は、DNA配列を形成する塩基対を分析するために様々な技術を使用する。例えば、一部の装置は、フローセル内の固定された一本鎖DNA分子断片(DNA鋳型)の配列決定を実行します。フローセルは、本質的に、DNA鋳型が一連の核酸塩基伸長プロセスを受ける小さなチャンバである。それぞれの連続した伸長を検出して、各DNA鋳型の塩基対配列を決定する。フローセルは、伸長プロセス中、及び検査プロセス中にDNA鋳型を保持する環境を提供し、各伸長した塩基対を読み取る。
合成による配列決定装置の多くは、非光学系も知られているが、核酸塩基の伸長を検出するために顕微鏡などの光学系を使用する。典型的な光学装置は、可視化学標識を使用して各伸長塩基対の同一性を決定する。例えば、DNA分子を構成する各核酸塩基(アデニン、グアニン、シトシン及びチミン)は、顕微鏡を介して見える独特な蛍光プローブで標識されてもよい。DNA鋳型が伸長されるたびに標識が読み取られ、次に標識が除去されて次の塩基対伸長のための経路が作られる。
最新の「次世代」装置では、単一のフローセルで何百万ものDNA鋳型を同時に処理できる。DNA鋳型は、フローセル内でランダムに秩序づけられてもよいし、特定の所定の位置に配列されてもよい。固定化されたDNA鋳型を保持するために様々なフローセル設計が開発されているが、通常それらはいくつかの共通の特徴を含む。典型的なフローセルは、剛性の流路、チャネルを囲む光学的に透明なカバー、及び適切な試薬が通過してDNA鋳型の成長及び伸長を制御する流体入口及び流体出口を含む。このようなフローセルの例は、米国特許第8,481,259号、同第8,940,481号及び同第9,146,248号、米国特許出願公開第2009/0298131号及び同第2014/0267669号に見出され、これらの全ては参照により本明細書に組み込まれる。
塩基対延長の光学的検出を用いる配列決定装置は、非常に小さく、光をほとんど放射しない標識を検出できなければならない。所望の倍率を得るために顕微鏡タイプの光学系がしばしば使用されるが、そのような装置は、高倍率、低光環境、及び異なるDNA鋳型を区別するための光学的精度の必要性を考慮に入れるため、極めて高い公差で動作しなければならない。この環境では、光路は、典型的には、非常に浅い被写界深度(すなわち、焦点が合っているか又は少なくとも許容可能に鮮明な近物体と遠物体との間の距離)を有する。この環境では、被写界深度内にないフローセル上に固定化されたDNA鋳型はいずれも判読不能である可能性がある。したがって、典型的なフローセルは、DNA鋳型が固定化されている表面の平坦性を最大にするために、非常に高い公差に製造された剛性の熱的及び寸法的に安定な材料から構築される。これは、光学読み取りプロセスの間に焦点を合わせるであろうDNA鋳型の集団を最大にする。フローセルはまた、典型的には、(少なくとも読み取りプロセスで使用される光の波長に対して)高い光透過性、フローセル内で行われる化学反応を支援する効率的な熱伝達特性、光学的忠実度を改善するための多層コーティング、インサイチュDNA鋳型部位又は足場などを有する。
本発明者らは、配列決定装置及び同様の装置のためのフローセルの技術水準を進歩させる必要性が引き続き存在すると判断した。
1つの例示的な態様では、配列決定装置のためのフローセルシステムが提供され、フローセルシステムは、1つ以上の液体試薬を通過させるように構成された流体出口と、1つ以上の液体試薬を受容するように構成された流体入口と、1つ以上の液体試薬を受け入れるように構成された流体入口と、流体入口と流体出口の間を伸長して、流体接続するチャネルを含み、チャネルの少なくとも一部が、固定化された複数のDNA鋳型を受容するように構成された可撓性材料を含む膜を含む。
別の例示的な態様では、配列決定装置のためのフローセルが提供される。フローセルは、剛性材料を含むフローセルプレートを有し、フローセルプレートの少なくとも一部は透明プレート領域を含み、可撓性材料の膜はフローセルプレートに膜の周囲領域に取り付けられ、膜の少なくとも一部は透明プレート領域に面し、膜は、フローセルプレートから離れた方向に移動可能であり、フローセルプレートと膜との間にチャネルを形成する。フローセルは、1つ以上の液体試薬を受容するように構成された流体入口と、1つ以上の液体試薬を通過させるように構成された流体出口とを有することができる。流体入口及び流体出口の少なくとも一方は、フローセルプレートを通るそれぞれの通路であってもよい。膜は、環状オレフィンコポリマーなどのポリマーであってもよい。膜は、1μm〜100μm、4μm〜50μm、又は10μm〜20μmの厚さを有することができる。膜は、化学的処理、DNA鋳型足場、又は可視マーカーを含む光学的コーティングなどの1つ以上のコーティングを有することができる。フローセルプレートに面する膜の表面は、その上に固定化された複数のDNA鋳型を有することができる。フローセルプレートは、付随する配列決定装置の一部に嵌合するように構成され、かつ寸法決めされてもよく、膜は、膜に差圧が加えられると、関連付けられた配列決定装置の基準面と接触するように構成される。
別の例示的な態様では、配列決定装置のためのフローセルが提供される。フローセルは、第1の可撓性材料の第1の膜であって、第1の膜の少なくとも一部分が透明膜領域を有し;第2の可撓性材料の第2の膜であって、第2の膜の少なくとも一部分が透明膜領域に面している周縁部で第1の膜に接続されていて;フローセルに作動可能に連結された流体入口;及びフローセルに作動可能に連結された流体出口を有する。第1の膜及び第2の膜のそれぞれの部分は、互いに離れて移動可能であり、流体入口から流体出口まで延びるチャネルを形成する。第1の膜及び第2の膜は、環状オレフィンコポリマーであってもよい。第1の膜及び第2の膜はそれぞれ、1μm〜100μm、4μm〜50μm、又は10μm〜20μmの厚さを有することができる。第1の膜及び第2の膜の少なくとも1つは、化学処理、DNA鋳型足場、又は可視マーカーを含む光学コーティングなどの1つ以上のコーティングを有することができる。第1の膜及び第2の膜の少なくとも1つは、その上に固定化されたそれぞれ複数のDNA鋳型を有することができる。第1の膜及び第2の膜のそれぞれは、その上に固定化されたそれぞれ複数のDNA鋳型を有することができる。第1の膜及び第2の膜は、周縁部で互いに接着された膜材料の別個のシート、折り畳まれた膜材料の単一シート、又は膜材料の単一のチューブであってもよい。フローセルは、付随する配列決定装置の一部に嵌合するように構成及び寸法決めされてもよく、第1の膜は、第1の膜を横切る差圧を加えると、付随する配列決定装置上の第1の基準面と接触するように配置されてもよく、第2の膜は、第2の膜を横切る差圧を加えると、付随する配列決定装置上の第2の基準面と接触するように構成されてもよい。
別の例示的な態様では、配列決定装置のためのフローセルが提供される。フローセルは、可撓性材料の膜;膜の第1の側部に面する空洞を有するカバーアセンブリ;及び膜の第1の面側部に対向する膜の第2の側部に面する基準プレートを有する。基準プレート及びカバーアセンブリの少なくとも一方は、カバーアセンブリと基準プレートとの間に膜を保持するように選択的に移動可能であり、流体入口から流体出口に延びる空洞内に通路を形成する。膜は、環状オレフィンコポリマーであってもよい。膜は、1μm〜100μm、4μm〜50μm、又は10μm〜20μmの厚さを有することができる。膜は、化学的処理、DNA鋳型足場、又は可視マーカーを含む光学的コーティングなどの1つ以上のコーティングを有することができる。膜の表面は、複数のDNA鋳型がその上に固定化されてもよい。カバーアセンブリは、カバープレートを含み、カバープレートの少なくとも一部は透明なカバー領域であり、空洞を形成するためにカバープレートから延びるギャップスペーサを含み得る。流体入口及び流体出口は、カバーアセンブリを通る通路であってもよい。基準プレートは、空気ポンプに接続された1つ以上の空気通路を有して、膜の第2の側部に陰圧を発生させ、それによって膜を基準プレートと接触させるようにすることができる。膜は、膜の供給部の別個の部分であってもよく、膜のスプールロールであって、膜の供給部の個別の部分をカバーアセンブリと基準プレートとの間から移動させるように構成されてもよい。
別の例示的な態様では、配列決定装置のための平坦なフローセル物体平面を提供するための方法が提供される。この方法は、膜の第1の側部に複数のDNA鋳型を受容するように構成された可撓性材料を含む膜を提供する工程;膜の第1の側部に対向する膜の第2の側部を平坦な基準面に押し付ける工程を含む。膜は、環状オレフィンコポリマーなどのポリマーであってもよい。膜は、1μm〜100μm、4μm〜50μm、又は10μm〜20μmの厚さを有することができる。膜は、化学的処理、DNA鋳型足場、又は可視マーカーを含む光学的コーティングなどの1つ以上のコーティングを有することができる。この方法はまた、複数のDNA鋳型を膜に固定化することを含むことができる。この方法はまた、膜の第1の側部がフローセルプレートに面している剛性材料のフローセルプレートに膜を取り付けることを含むことができ、その結果、少なくとも差圧を膜に加えて、膜の第2の側部を平坦な基準面に対して押し付ける場合、膜とフローセルプレートは、流体入口と流体出口との間に通路を形成する。この方法はまた、流体入口と流体出口との間に通路を形成するために、周縁部で膜に隣接して接続された第2の可撓性材料の第2の膜を提供する工程;及び第2の膜に差圧を加えて、第2の平坦な基準面に対して第2の膜を押圧する工程を含み得る。この方法はまた、平坦な基準面と、空洞を含むカバーアセンブリとの間に膜を保持することを含み得て、空洞及び膜は一緒になって、流体入口と流体出口との間に通路を形成する。この方法はまた、平坦な基準面から離してカバーアセンブリを移動させる工程;平坦な基準面とカバーアセンブリとの間から膜を除去する工程;平坦な基準表面とカバーアセンブリとの間に新しい膜を配置する工程;カバーアセンブリを平坦な基準面に向けて移動させて、新しいフローセルを形成する工程を含み得る。この方法では、平坦な基準面に対して膜の第1の面と反対側に膜の第2の側部を押し付けることは、膜の第1の側部と膜の第2の側部との間に差圧を加えることによって行うことができる。差圧を加えることは、膜の第2の側部を減圧に曝露し、膜の第1の側部を高圧に曝露するか、又はその両方によって行うことができる。平坦な基準面に対して膜の第1の側部の反対側の膜の第2の側部を加圧することは、平坦な基準面に対して膜を引き伸ばすことによって行うことができる。
別の例示的な態様では、配列決定装置のためのフローセルが提供される。フローセルは、複数のDNA鋳型がその上に固定化された可撓性材料を含む膜を有する。膜は、環状オレフィンコポリマーであってもよい。膜は、1μm〜100μm、4μm〜50μm、又は10μm〜20μmの厚さを有することができる。膜は、化学的処理、DNA鋳型足場、又は可視マーカーを含む光学的コーティングなどの1つ以上のコーティングを有することができる。膜は、平坦な物体平面に沿って複数のDNA鋳型の少なくともいくつかを位置付けるように移動可能であってもよい。膜は、平坦な基準面に隣接して移動させて、平坦な物体平面に沿ってDNA鋳型を配置するように構成されてもよい。フローセルはまた、剛性材料のフローセルプレートを含むことができ、フローセルプレートの少なくとも一部は、透明プレート領域を含み;膜は、膜の周辺領域でフローセルに取り付けられてもよく、膜の少なくとも一部が透明なプレート領域に面し、膜は、フローセルプレートから離れていく方向に移動可能であり、フローセルプレートと膜との間にチャネルを形成することができる。フローセル膜は、第1の膜;周辺部で第1の膜に接続された第2の膜、ここで、第2の膜の少なくとも一部は第1の膜に面し;フローセルに作動可能に連結された流体入口;フローセルと動作可能に関連付けられた流体出口を含み得て;第1の膜及び第2の膜のそれぞれの部分は互いに離れるように移動可能であり、流体入口から流体出口まで延びるチャネルを形成する。第1の膜及び第2の膜は、周縁部で互いに接着された膜材料の別個のシート、折り畳まれた膜材料の単一シート、又は膜材料の単一のチューブであってもよい。フローセルは、その上に固定化されたDNA鋳型を有する膜の第1の側部に面する空洞を有するカバーアセンブリ;膜の第1の側部に対向する膜の第2の側部に面する基準プレートを含み得て;ここで、基準プレート及びカバーアセンブリの少なくとも一方が、カバーアセンブリと基準プレートとの間に膜を保持するように選択的に可動であり、流体入口から流体出口に延びる空洞内に通路を形成する。膜は、膜材料の供給部の別個の部分であってもよい。
別の例示的な態様では、平坦な基準面を有する基準プレートを有する配列決定ステージと、平坦な基準面に対して垂直である光軸を有する顕微鏡とを有する配列決定装置が提供される。配列決定ステージは、膜の第1の側部に固定された複数のDNA鋳型を有する可撓性膜を受容し、光軸に対して垂直である物体平面に複数のDNA鋳型の少なくともいくつかを有する平坦な基準面に対して可撓性膜を保持するように構成される。平坦な基準表面は、0.05%の平坦度を有することができ、これは、表面の所定のスパンにわたる最大「ピークから谷」の高さ変化として計算される(例えば、50mmの距離にわたって0.025mm以下の高さの変化)。他の好ましい平坦度及び他の測定技術(例えば、平均線からの粗さプロファイルの逸脱の算術平均)は、他の実施形態で使用することができる。配列決定ステージは、少なくとも1つの真空源に接続されたより多くの空気通路を有して、膜の第1の側部の反対側にある膜の第2の側部に減圧を生成し、膜の第2の側部を平坦な基準面に対して差圧を生じさせることができる。空気通路は平坦な基準面を通過することができる。可撓性膜は、剛性材料のフローセルプレート上に提供され得、膜は、膜の周辺領域においてフローセルプレートに取り付けられ、膜の第1の側部は、フローセルプレートに面し、膜は、フローセルプレートから離れる方向に移動可能であり、フローセルプレートと膜との間にチャネルを形成する。膜は、第1の膜;周辺部で第1の膜に接続された膜、ここで、第2の膜の少なくとも一部は、第1の膜の第1の側部に面している、を含み得て、ここで、第1の膜及び第2の膜の少なくとも一部は、互いに離れて移動可能であり、第1の膜と第2の膜との間で伸長するチャネルを形成する。配列決定ステージは、膜の第1の側部に面した空洞を含むカバーアセンブリを含むことができ、ここで、基準プレート及びカバーアセンブリの少なくとも1つは、カバーアセンブリと基準プレートとの間で膜を保持するために選択的に移動可能であり、流体入口から流体出口まで延びる空洞内に通路を形成する。カバーアセンブリは、カバープレートと、カバープレートから延びるギャップスペーサとを含むことができ、空洞を形成する。流体入口及び流体出口は、カバーアセンブリを通る通路であってもよい。膜は、膜材料の供給部の別個の部分であってもよい。
他の代替物は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
本発明のこの概要の列挙は、これ又は任意の関連する又は関連のない適用の請求を制限することを意図するものではない。請求された発明の他の態様、実施形態、改変及び特徴は、本明細書の開示を考慮して当業者には明らかである。
例示的な実施形態のより良い理解は、添付の図面を参照することによって理解することができ、同様の参照番号は同様の部分を示す。図面は例示的なものであり、決して請求項を限定するものではない。
本発明者らは、典型的な配列決定装置で使用される精密に製造されたフローセルが、そのような装置を操作するコストを大幅に増加させることを見出した。特に、単一の装置は、各自動運転中に処理されるDNA鋳型を保持するために多数のフローセルが必要となる場合があり、そのようなフローセルは再利用できない可能性がある。典型的な光学装置の狭い被写界深度内で適切な光学的読み取りを確実にするために、DNA鋳型を保持するための1つ以上の平坦な基準プレートを提供するために、各フローセルは厳しい公差に作製される必要がある。フローセルはまた、高価な及び/又は機械材料が困難な材料を必要とすることがある。
例示的な既存のフローセルはガラスで形成される。ガラスフローセルは機能的であるが、ガラス上に使用される多層光学コーティングを作製するプロセスが複雑であるため、特に費用効果的ではない。さらに、製造スケーラビリティは比較的限られています。プラスチックフローセルもまた知られており、射出成形技術を使用することにより、比較的高いスケーラビリティ及び潜在的に低いベースコストを提供する。しかしながら、プラスチックフローセルは、部品が成形空洞から射出されるときに生じる急激で不均一な冷却のために、高い物理的公差で製造することが依然として困難である。また、射出成形されたプラスチック部品(約0.5mm)の最小厚さは、フローセル内外での熱伝達効率を低下させ、フローセル内で行われる化学プロセスを損なう可能性がある。別のタイプの既知のフローセルは、金属ベース(例えば、チタン−シリコン合金)及び透明カバー(例えば、ホウケイ酸ガラス)などのハイブリッド構造を使用する。このようなフローセルは、高価な材料を使用することがあり、製造コストが高くなり、構成要素の異種性質が、異なる表面エネルギー又は層間剥離を引き起こす熱膨張係数などの困難を引き起こす可能性がある。フローセルを形成するための異種材料の使用はまた、両面にDNA鋳型を固定するための適切な表面化学物質を選択することをより困難にし(場合によっては望ましいが、必ずしも必要ではない)、したがって、配列決定をフローセル内の単一表面に限定する。
本発明者らは、次世代配列決定装置が、大量の膜コーティング工業プロセスなどに適合する薄いプラスチック膜などの薄膜に基づく、より費用効果の高いフローセルを使用することにより利益を得ることができると判断した。特定の例示的な実施形態の説明が続くが、本発明の範囲はいずれかの特定の例に限定されず、当業者に理解されるように、実施例は、本開示の観点から、様々な方法で組み合わせて修正することができることが理解される。
図1及び2は、剛性のフローセルプレート102及び薄膜104を含むフローセル100の第1の例示的な実施形態を示す。フローセルプレート102は、少なくとも1つの流体入口106及び少なくとも1つの流体出口108を含み得る。フローセルプレート102は、ガラス(例えば、ホウケイ酸ガラスなど)、プラスチック(例えば、ポリカーボネートなど)、又は他の適切な材料を含むことができる。フローセルプレート102はまた、好ましくは、光学読み取りプロセスで使用される波長の範囲において高度に光学的に透明であり、自己蛍光特性が低い。この目的のために、フローセルプレート102は完全に透明な材料で作られてもよいが、膜104の上にあるフローセルプレート102の少なくとも一部が透明であればよい。フローセルプレート102はまた、当該技術分野で知られているように、光学性能を高めるために適切なコーティングで処理されてもよい。フローセルプレート102は、プラスチックの射出成形及び機械加工、又はガラスのフロートキャスティングなどの任意の適切なプロセスによって作製することができる。例えば、プラスチックフローセルプレート102は、流体入口106及び流体出口108がフローセルプレート102の残りと同時に形成される射出成形プロセスを使用して、適切な光学特性を有するように都合よく形成されることが期待される。流体入口106と流体出口108はまた、試薬供給部への流体接続を形成するための一体型又は取り付けられた取付具及び器具内の廃棄導管を含み得る。また、流体入口106及び流体出口108は、常に開いたままであってもよく、又は時折閉鎖又は密閉されてもよいことも想定される。
膜104は、流体入口106及び流体出口108を囲む周辺領域120に沿ってフローセルプレート102の底面に取り付けられた柔軟な薄膜材料を含み、その結果、流体入口106を通過する試薬が、流体出口108を通って出る前に、膜104とフローセルプレート102との間の空間に入る。膜104は、好ましくは、環状オレフィンコポリマーなどの材料を含む。典型的な環状オレフィンコポリマーには、米国ケンタッキー州フィレンツェのTOPAS Advanced Polymers,Incから入手可能なTOPAS(商標)、及び米国ケンタッキー州LouisvilleのZeon Chemicals,L.P.から入手可能なZEONORTMが含まれる。他の可能な材料には、ポリプロピレン、ポリエチレン、環式オレフィンポリマー(例えば、日本合成ゴム社のARTON、及び米国ケンタッキー州ルイスビルのZeon Chemicals、LPのZEONEX(商標))、ポリエチレンテレフタレート、フッ素化エチレンプロピレン、及び本明細書に記載の目的に適した薄膜に形成することができる他の材料が含まれる。
膜104は、本明細書に記載される用途において有益であり得る特定の特性を有するように選択され得る。例えば、膜104は、好ましくは低い自己蛍光特性を有する(すなわち、それは、塩基対読み取りプロセス中に有意な蛍光バックグラウンドを生成しない)。膜104はまた、好ましくは、以下により詳細に記載されるように、可撓性であり、真空を使用して容易に関節接合される。膜104は、1〜100マイクロメートル(「μm」)、より好ましくは4〜50μm、最も好ましくは10〜20μmの厚さを有することができる。このような厚さは、圧力差を利用した操作を可能にし、比較的効率的な熱伝達を提供しながら、適切な強度を提供することが期待される。また、膜104は、かなり均一な膜厚さ及び低い熱収縮特性を有することも好ましい。例えば、一実施形態では、膜の温度を15分間150℃に上昇させることによって、又は無制限線形熱収縮を測定するためのASTMインターナショナルのアクティブスタンダードASTM D2732などの他の試験を用いることによって測定した場合、膜104は縦方向及び横方向に2%未満収縮し得る。他の実施形態では、他の値及び試験方法を使用することができる。膜104はまた、フローセルに組み込まれる前に、その物理的特性を均質化するのを助けるために、使用前に熱処理(例えば、アニール)されてもよい。
膜104は、フローセルプレート102の周囲に接続され、流体入口106から流体出口108まで延びる流体密封チャネル200を形成する。膜104は、熱接着、接着接合、超音波溶接等によってフローセルプレート102に永久的に接続されてもよい。あるいは、膜104は、膜104を適切なクランプ構造を用いてフローセルプレート102の周囲に挟むことによって、フローセルプレート102に一時的に接続されてもよい。
1つ以上のコーティング又は処理を膜104に適用することができる。例えば、膜104は、様々な技術を使用して化学物質のいくつかの層でコーティングすることができる。化学物質は、スロットダイコーティング、カーテンコーティング、グラビアコーティング、フレキソグラフィー印刷及び輪転グラビア印刷などの様々なロールツーロール膜プロセスによって適用することができる。コーティングは、様々な機能を果たすように選択することができる。例えば、迅速なオートフォーカスを提供するのを助けるために、視覚マーカー(例えば、グリッドパターン又は順序付けられたスポット)を含む光学コーティングを膜104に適用することができる。コーティング又は処理はまた、DNA鋳型コロニーを増殖させるための足場を形成するために提供され得て、このような足場は、膜104上のコロニーの密度を最大にしながらDNA鋳型コロニーの重複を最小化するようにパターン化され得る。例えば、スキャフォールドパターンを膜104に熱成形して、DNA鋳型を捕捉するための物理的位置を提供することができ、又は膜104を化学結合部位のパターンで処理してDNA鋳型を特定の位置に固定することなどができる。膜104はまた、エンボス加工技術を使用してウェルを形成することによって、又はDNA鋳型コロニーの位置付け又は固定化を補助するため、又は他の利益を提供するために格子様層を加えることなどにより構造操作によって処理することができる。他の代替物は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
図2に示すように、フローセル100の膜104部分は、その上にDNA鋳型202が固定されている基材表面を提供する。DNA鋳型202は、(図2の左側に示すような)規則正しいパターンであってもよく、(図2の右側に示すように)ランダムに分布してもよい。当然に、フローセル100が、鋳型足場コーティング、ビーズウェルなどを介してDNA鋳型の規則的な分布を提供するように構成されている場合でさえ、いくつかのランダム分布が起こり得る。
フローセル100は、基準プレート110と共に使用される。基準プレート110は、平坦な基準面112を備えて形成され、平坦な基準面112には、膜104が少なくともいくつかの装置動作段階で押圧される。DNA鋳型が固定されている物体面(すなわち、膜104の上面)の全体的な平面度は、基準面112の平坦度及び膜104の厚さの均一性によって規定される。これは、各フローセルが、所望の平坦性を得るために極めて高い公差で製造されていた従来のフローセル設計よりもはるかに優れた利点を提供する。それは、単一の基準面112のみを製造する必要があり、フローセル100は、比較的均一な厚さの膜材料を有するだけで、DNA鋳型202の撮像対象平面Pへの配置を確実にすることができるからである。
基準面112は、非常に高い平坦度(すなわち、表面平坦度の非常に低い変動)を有するように機械加工又は他の方法で形成された金属材料(例えば、チタン−シリコン合金)を含むことができる。あるいは、基準面112は、グラフェンシート又は劈開された雲母面のような自然に平坦な材料を含むことができる。さらに他の実施形態では、基準面112は、所望の平坦度に機械加工されるか又は他の方法で製造されるガラス、プラスチック又はセラミックシートを含むことができる。好ましい実施形態では、基準面112は、高い熱伝導率を有し、面の所定のスパンにわたる最大「ピークから谷」の高さの変動(例えば、50ミリメートルの距離に亘って0.025ミリメートル以下の高さの変化)として算出される0.05%の平坦性に機械加工された、例えばチタンシリコンなどの金属材料を含む。他の実施形態では、他の材料、平坦度値及び測定技術(例えば、平均線からの粗さプロファイルの逸脱の算術平均)を使用することができる。
膜104は、膜104と基準面112との間の密閉された空間に適用される真空差を用いて基準面112に押し付けられてもよい。例えば、基準板110は、基準プレート110を通過する多数の真空通路114を含み得て、これらは、真空ポンプ(図示せず)に接続され、膜104の下面に陰圧を生成する。真空通路114は、単純な円形の開口部、又は他の適切な形状を含み得る。通路114はまた、基準面112に沿った溝122を含むことができる。異なる実施形態では、開口部及び/又は溝の任意の適切な組み合わせを使用することができる。この陰圧は、膜104の少なくとも一部を基準面112と緊密に接触させるように圧力差を生じさせる。膜104全体が基準面112に押し付けられる必要はないが、膜104の残りの部分と共通の物体平面内に位置していなくてもよく、基準ペア読み取りプロセスの間に焦点が合っていなくてもよい。
一実施形態では、圧力差は、膜104の上部に対する膜104の底部の圧力降下として、0.5〜5ポンド/平方インチ(「psi」)、より好ましくは1〜2psiであってもよい。また、膜104の底面に真空を適用する代わりに(又はそれに沿って)、正の圧力を膜104の上面に加えることも想定される。陽圧は、例えば、チャネル200を通過する試薬を所望の量に加圧して、膜104の少なくとも一部を基準面112と密接に接触させるのに十分な圧力差を生じさせることによって行うことができる。さらに、いくつかの実施形態では、試薬は、陰圧下でチャネル200を通って引き込まれてもよく、この場合、圧力差は、基準面112に対して所定の位置に、膜を移動させる圧力差を得るために十分な量だけチャネル200内に発生する陰圧を超えることによって提供され得る。他の選択肢は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
前述の記載から、圧力差は、膜104をフローセルプレート102から遠ざけてチャネル200を形成することを理解する。圧力差は、膜104(又は両方)を弾性的又は塑性変形させて、所望のフローセルチャネル200の形状を得ることができる。このような変形は、膜104を加熱することによって補助され得る。例えば、フローセル100は、加熱ブロック内に配置され、配列決定プロセスが始まる前に、チャネル200の一般的な形状を形成するために圧力差を受けるか、又は配列決定プロセスのステップとしてなされ得る。この変形はまた、膜104をフローセルプレート102に取り付ける前に、チャネル200のような形状になるように膜104を予め形成することによって補助されてもよい。これは、膜104をチャネル200のおよその形状に真空成形又はエンボス加工することにより、又は他の公知の製造方法を用いて形成することができる。
インサイチュ配列決定を可能にするために、基準プレート110は、好ましくは、加熱及び/又は冷却システムに接続される。例えば、基準プレート110は、熱電気ヒートポンプ204(すなわち、いわゆる「ペルチェ」デバイス)に取り付けられるか、又はその一部として形成されてもよい。ヒートポンプ204は、チャンバ200の内容物を加熱する(及び任意に冷却する)ために、基準プレート110を加熱する(及び任意に冷却する)ために作動させることができる。好ましい実施形態では、ヒートポンプ204及び基準プレート110は、チャネル200内の温度を、4℃〜99℃の範囲、より好ましくは室温(名目上22℃)〜80℃の範囲に制御するように構成される。
フローセル100はまた、フローセル100と基準プレート110との間に嵌合するギャップスペーサ116と組み合わせて使用することができる。ギャップスペーサ116は、ギャップスペーサ116を垂直に貫通する開口部118を形成する平坦な、好ましくは連続した壁を含む。ギャップスペーサ116は、フローセル100及び基準プレート110にそれぞれ当接するように、精密に製造された上面及び下面を有することができる。図2に示すように、ギャップスペーサ116を使用して、フローセルチャネル200の高さHを画定することができる。いくつかの実施形態では、チャネル高さHは、10〜200μm、より好ましくは50〜150μm、最も好ましくは80〜120μmであってもよい。
ギャップスペーサ116は、図示のように別個の部品として設けられてもよい。この実施形態では、ギャップスペーサ116は、配列決定動作間でチャネル200の高さを変更するために交換可能であってもよい。また、配列決定動作中にチャネルの高さを変更することが望ましい場合、ギャップスペーサ116は、例えば垂直に移動するラックに取り付けられることによって、基準プレート110に移動可能に接続されてもよい。このような動きは、例えば、図3〜4Bの実施形態に関してより詳細に説明するように、流抵抗を周期的に減少させるようにチャネル高さHを変更することが望ましい場合がある。このような実施形態では、基準プレート110とギャップスペーサ116との間の相対移動を可能にするために、例えば、基準プレート110をギャップスペーサ開口部118内に完全に嵌合するように成形することができる。あるいは、ギャップスペーサ116は、基準プレート110又はフローセル100の永久部分として形成されてもよい。例えば、ギャップスペーサ116は、フローセルの底面に接着又は他の方法で取り付けられ、フローセルプレート102に対して所定位置に膜104をクランプするために使用される。別の例として、ギャップスペーサ116は、基準プレート110の一体部分として機械加工されてもよい。ギャップスペーサ116は、好ましくは、金属又はプラスチックのような一般に剛性の材料から形成され、材料は、配列決定及び塩基対読み取り操作に影響を及ぼし得る熱膨張及び収縮を最小にするように選択され得る。
ギャップスペーサ開口部118の形状は、差圧が印加される場合、特に、膜104がフローセルプレート102と基準プレート110との間の空間にしっかりと形成されるような柔軟性を有する実施形態では、チャネル200の形状及びサイズを画定するように選択されてもよい。例えば、ギャップスペーサ開口部118は、流体入口106と流体出口108との間の狭いチャネル200として構成されてもよく、又は比較的広いチャネル200を形成してもよい。チャネルの形状は、必要に応じて変更することもできる。例えば、図示されたチャネル200は、開口部118を充填する長方形の形状を有する。別の例として、チャネル200は、流体入口106及び流体出口108に隣接する比較的大きなリザーバと、リザーバ間に延びる比較的狭い通路とを有する「ドッグボーン」又は「ダンベル」形状を有してもよい。また、差圧が加えられる場合、膜104を別個の通路に変形させる基準プレート110から上方に延びる隆起部を設けることなどにより、チャネル200を複数の別個のチャネルに分割することも考えられる。チャネル200のサイズを変更することは、フローセルで実施される配列決定操作の数、ならびに試薬消費の速度に影響し得る。
ギャップスペーサ116はまた、真空が膜104を基準面112に対して適切に引っ張ることができるように、膜104の下面が収容された一般的に密閉されたチャンバを形成するために、他の部品と協働することができる。この目的のために、ギャップスペーサ116は、フローセル100及び基準プレート110に対して気密シールを形成するシール208を含むことができる。ギャップスペーサ116はまた、(空気通路114と同様の)1つ以上の空気通路を含み得て、これを通じて、真空が膜104の下面に適用され得る。本開示を考慮すれば、当業者には他の選択肢が明らかとなる。例えば、フローセルプレート102の底部にシールを設けて、ギャップスペーサ116又は基準プレート110の対応する表面と係合して、密閉された真空チャンバを形成することができる。
使用時には、ギャップスペーサ116が基準プレート110上に配置され、フローセル100がギャップスペーサ116上に配置され、膜104が基準面112に面している。クランプ又は他の機構を設けて、フローセル100を適所に保持してもよい。次に、圧力差は、基準プレート110を通る真空通路114を通って真空を引くなどして、膜104の2つの側面に加えられる。圧力差は、膜114の少なくとも作動部分(すなわち、配列決定用塩基対の読み取りに使用される部分)を基準面112と接触させるように促す。したがって、膜104の作用部分は、基準面112の平坦度及び膜104の厚さの均一性によって画定される平坦な形状をとる。
配列決定処理は、膜104が基準面112に対して平坦になった後に開始することが好ましい。配列決定処理は、任意の適切なプロトコルに従うことができ、膜104上にDNA鋳型を固定化し、チャネル200を通って試薬を通過させ、チャネル200の内容物を加熱及び/又は冷却することなどの処理ステップを含んでもよい。化学反応の具体的な詳細は、本開示とは無関係であり、本明細書に記載されていない。しかしながら、配列決定処理の例は、米国特許出願公開第2013/0301888号、第2013/0316914号、及び第2014/0045175号、米国特許第9,017,973号に記載され、これらの全ては参照により本明細書に援用される。また、いくつかの実施形態では、処理のいくつかのステップは、膜104が基準面112に押し付けられる前に実行されてもよいことが理解される。例えば、DNA鋳型202は、膜104がフローセルプレート102に接続される前に膜104に固定化されてもよい。別の例として、ある種の化学反応をフローセルチャネル200内で行うことができ、次いで差圧を加えて、各塩基対読み取りを行う前に膜104を平坦化する。他の代替案は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
配列決定処理の間に周期的に、顕微鏡206又は他の光学装置を用いて、DNA鋳型202上の伸長した塩基対を読み取る。この読み取り工程の間、平坦な基準面112及び膜104の比較的均一な厚さが協働して、顕微鏡の光軸Aに垂直に配向された物体面Pを与える。顕微鏡206は、その焦点平面を物体面Pに整列させて、DNA鋳型202が顕微鏡206の焦点深度内にあるように操作することができる。平坦な物体平面Pは、顕微鏡の被写界深度内にあるDNA鋳型の集団を増加させ、より多くの塩基対延長を正確に読み取る能力を高める。
前述の実施形態は、従来の精密製造フローセルよりも一定の利点を提供することができる。例えば、フローセル100は、塩基対読み取り処理を容易にする均一で平坦な表面を提供するために、装置上の単一の精密製造された基準面112と関連して比較的安価な膜を使用することができる。これは、精密製造された平坦な表面を有するフローセルを使用するシステムと比較して、コストを削減し、性能を向上させることが期待される。また、フローセル100の製造速度及び利用可能性を高めることができる直接的な製造技術を使用して、フローセル100を比較的迅速に製造することができることも期待される。
フローセル100を精密に製造する必要性を減らすことの利点が望ましいが、それにも関わらず、いくつかの実施形態において、フローセル100にフローセルプレート102の底部に精密製造された平坦な表面を設けることができることは理解され、この表面は、固定化されたDNA鋳型コロニーをイメージング化のための共通の平面に保持するためにも使用できる。他の代替物は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
フローセル300の第2の実施形態を図3〜4Bに示す。このフローセル300は、上部膜302及び下部膜304を含む。図3では、下部膜304を示すために、上部膜302の一部分306が図示の目的のために切り取られている。上部膜302及び下部膜304は、周縁部308の周りに互いに取り付けられている。この実施形態では、上部膜302及び下部膜304は、互いに接合された別個の材料シートであるが、他の実施形態では、膜302、304は、単一シートの別々の部分であってもよく、それは、それ自体の上に折り畳まれ、周縁部の一部を形成する折り目を有する。膜302、304はまた、周縁部308の側部を形成する連続的な表面を有する材料の連続的なチューブとして提供されてもよい。
フローセル300はまた、流体入口310及び流体出口312を含む。流体入口310及び流体出口312は、上部膜302と下部膜304との間の適所に捕捉される固定具(例えば、チューブ)として、又は他の適切な構造又は構造の組み合わせを使用して、下部膜304を通る通路として上部膜302(図示されている)を通る通路として形成されてもよい。示される実施形態では、流体入口310及び流体出口312は、膜を貫通するそれぞれの開口部に結合されたフランジを有する射出成形チューブとして提供されるが、他の構造を使用することもできる。例えば、流体入口310及び流体出口312は、試薬を注入及び除去するために針が通される自己治癒ゴムブロックを含むことができる。
周囲部308は、上部膜302と下部膜304とを接合して、流体入口310から流体出口312まで伸びる上部膜302と下部膜304との間に位置するチャネル400を形成する。この実施例では、周辺部308は、細長い十字形状を有するが、他の実施形態では、長方形、楕円形、又は他の形状を使用することができる。例えば、フローセル300は、「ドッグボーン」又は「ダンベル」形状を含むことができる。フローセル300はまた、複数の平行なチャネル400を提供するために、フローセル300の流れ方向に沿って延びる結合ストリップを含むことができる。
この実施形態では、上部膜302及び下部膜304の少なくとも1つ(好ましくは上部膜302)は、塩基対読み取り処理で使用される波長において光学的に透明である。上部膜302及び下部膜304も同じ材料であってもよいし、異なっていてもよい。上部膜302及び下部膜304は、膜材料(例えば、環状オレフィンコポリマーなど)及び上記のような化学的コーティング及び処理、又は他の適切な材料及びコーティング及び処理を含むことができる。外周部308は、接着結合、超音波溶接、熱溶接、又は他の適切な処理及び材料によって形成された永久的な結合であってもよい。外周308はまた、適切な形状のマンドレルの間に膜302、304を一緒に挟んで形成された一時的な結合であってもよく、次いで配列決定及び読み取り処理が完了した後にマンドレルを解放し膜302、304を除去する。必要に応じて、フローセル300は、フローセル300を適所に保持するための装置の関連するピン(図示せず)の上に嵌合するか、又は他にはフローセル300を操作するために使用され得るアンカー穴314などの追加の特徴を含むことができる。
上部膜302及び下部膜304の一方又は両方はまた、第1の実施形態に関連して上述したような化学コーティング又は他の処理で処理することができる。例えば、下部膜304は、DNA鋳型402がフローセルチャネル400のこの部分にのみ結合するように、DNA鋳型足場で処理される領域316を含むことができる。あるいは、DNA鋳型402は、上部膜302と下部膜304の両方の内部表面上に固定化され得て、塩基対の伸長及び読み取りに利用可能なDNA鋳型コロニーの数を最大にする。この実施形態では、上部膜302及び下部膜304は、同じ材料組成及び表面処理を有し、DNA鋳型402を固定化及び画像化するための同一の表面を提供することができる。
フローセル300は、上部基準プレート404及び下部基準プレート406と共に使用される。上部基準プレート404及び下部基準プレート406の少なくとも1つは、塩基対読み取りプロセスで使用される波長で光学的に透明である。上側基準プレート404の下面は、比較的高い平坦度を有するように製造された平坦な上側基準面408を含む。同様に、下部基準プレート406の上面は、比較的高い平坦性を有するように製造された平坦な下部基準面410を含む。好ましい実施形態では、上側基準面408及び下側基準面はそれぞれ、0.05%の平坦度を有し、これは、表面の所定のスパンにわたる最大「ピークから谷まで」高さ変化として計算される(例えば、50mmの距離にわたって0.025mm以下の高さの変化)。その他の好ましい平坦度値及び他の測定技術(例えば、平均線からの粗さプロファイルの逸脱の算術平均)は、他の実施形態で使用することができる。しかしながら、膜302、304の1つにのみDNA鋳型を固定することが望ましい場合、基準プレート404、406のうちの1つに平坦な基準面を設けることが必要である。基準プレート404、406の一方又は両方は、上述のような熱電ヒートポンプ又は同様のデバイスに接続されるか、又はその一部として形成されてもよい。
上側基準プレート404及び下側基準プレート406は、好ましくは、配列決定装置の一部として提供され、これらは、装置と一体的に形成され得るか、又は交換可能な部品として提供され得る。基準板404、406は、第1の例示的な実施形態に関連して先に説明したような任意の適切な材料で作ることができるが、塩基対読み取りプロセスを可能にするために、少なくとも1つは透明である(例えば、ホウケイ酸ガラス)。上部基準プレート404及び下部基準プレート406は、低い自己蛍光特性を有して、それらが塩基対読み取りプロセスの間に過度の量のバックグラウンド光を生成しないことも好ましい。
使用時には、フローセル300は、図4Aに示すように、上部基準プレート404に隣接する上部膜302、及び下部基準プレート406に隣接する下部膜304とともに配置される。この位置では、フローセルチャネル400内の陽圧及びフローセル300の外側の陰圧の一方又は両方が、上部基準面408に接触する上部膜302、及び下部基準面410に接触する下部膜304を保持するために使用される。陰圧は、上述されるように、上部基準プレート404及び下部基準プレート406の一方又は両方を通って伸びる真空通路(図示せず)によって加えられてもよい。陽圧は、1つ以上のポンプ、バルブなどを使用して適切な陽圧でチャネル400内の試薬を維持することによって提供され得る。一実施形態では、上部基準面408及び下部基準面410に対してそれぞれ上部膜302及び下部膜304を保持するために、0.5〜5psi、より好ましくは1〜2psiの圧力差が使用される。
フローセルチャネル400の高さHは、上部基準面408と下部基準面410との間の距離と、上部膜302及び下部膜304の厚さによって規定される。上部基準プレート404及び下部基準プレート406は、配列決定動作の間に互いに対して所定の位置に固定され、この場合、チャネル高さHは一定のままである。あるいは、いくつかの実施形態では、上部基準プレート404及び下部基準プレート406は、図4A及び図4Bに示すように、フローセルのチャネル高さHを変更するために互いに対して移動可能であってもよい。これは、本開示を考慮すると当業者には理解されるように、モータ駆動ラックなどの従来のロボット機構を使用して達成され得る。
可動基準プレート404、406を設けることにより、一定の利点を提供することが期待される。例えば、基準プレート404、406は、図4Aに示すように、基準プレート404、406が比較的近接している第1の位置と、4Bに示すように、基準プレート404、406が比較的遠い第2の位置との間を移動することができる。第1の位置は、比較的低いチャネル高さHを提供する。これは、第2の位置と比較して、相対的に高い領域対体積比(すなわち、チャネル400の体積に対する、上部膜302及び下部膜304の内面の合計表面積の比)を与える。高い面積対体積比は、DNA鋳型402上で所望の化学プロセスを実施するのに必要な試薬の量を減少させ、装置の操作コストを低減させることができる。これは、特定の試薬が有意な部分の操作コストを含み得るためである。第1の位置はまた、それぞれの基準面408、410に密接している膜302、304の面積を増加させ、膜302、304の操作部分のサイズを増加させ、結果として顕微鏡の焦点面の被写界深度内にあるDNA鋳型の集団数を増加させる。これは、顕微鏡206又は他の光学系による迅速で正確な塩基対読み取りを容易にする。
図4Bに示される第2の位置は、第1の位置と比較して、面積対容積比が比較的小さい。これにより、チャネル400内の流抵抗が低減され、流入口310から流出口312への圧力降下が比較的小さい状態でチャネルを介して試薬を圧送することができる。流抵抗が減少することにより、より簡単でより正確な試薬圧送が容易になる。減少した流抵抗は、試薬圧送プロセスの間に膜302、304からDNA鋳型402を剥がす可能性のあるせん断力の大きさを減少させる、膜302、304に隣接する液体速度の大きさを減少させることも期待される。
図3の実施形態は、第1の実施形態と本質的に同じ方法で使用される。しかしながら、所望であれば、配列決定プロセス中にチャンバ400の表面対体積比を変更するために追加のステップを追加することができる。この実施形態はまた、第1の実施形態と同様の利点を提供する。例えば、上部膜302及び下部膜304は、配列決定プロセス中に平坦な基準面408、410と接触するように押し付けられるが、他の点では要求される平坦度公差にまで作られる必要はない。これは、フローセルのコストを低減し、システムの光学性能を改善することができる。さらに、第2の実施形態は、フローセルプレート102を外部基準面408で置き換え、フローセル300に平坦な上面を設ける必要なしに、DNA鋳型を上部膜上に固定して正確に画像化することができる。2つの接合された膜の使用はまた、2つの膜を一緒に接合するための簡単な接着技術を使用してフローセル300を製造する能力を向上させることができ、フローセル300の使い捨て性も改善する。他の代替物及び利点は、本開示に照らして当業者に明らかとなる。
第3の実施形態を図5A及び5Bに示す。ここでは、フローセル500は、カバー504と基準プレート506との間の適所に捕捉された膜502によって形成される。ギャップスペーサ508は、カバー504と基準プレート506との間に配置される。カバー504とギャップスペーサ508は、フローセル500が形成される空洞を画定するアセンブリを形成する。カバー504は空洞の頂部を形成し、ギャップスペーサ508は空洞の外周形状を形成する。カバー504及びギャップスペーサ508は、空洞の形状によって画定されるフローセル通路510を形成するために膜502に隣接して配置される。ギャップスペーサ508の高さは、フローセル通路510の高さHを規定する。
膜502、カバー504、基準プレート506及びギャップスペーサ508は、先の実施形態で説明したものと同様に作成されてもよいし、又は異なる構造を有してもよい。例えば、膜502は、様々な化学的コーティング又は処理を有する環状オレフィンコポリマー材料を含むことができる。カバー504は、光学コーティングなどを含み、好ましくは自己蛍光特性が低い透明材料を含む。基準プレート506は、好ましくは0.05%の平坦度を有する精密製造された平坦な基準面512を含み、これは、表面の所定のスパンにわたる最大「ピークから谷まで」の高さの変化として計算される(例えば、50mmの距離にわたって0.025mm以下の高さの変化)。他の好ましい平坦度値及び他の測定技術(例えば、平均線からの粗さプロファイルの逸脱の算術平均)は、他の実施形態で使用することができる。ギャップスペーサ508は、任意の適切な材料(例えば、金属、セラミック又はプラスチック)を含むことができ、カバー504の一体部分として、カバー504への取り付けとして、又は完全に別個の部品として提供することができる。ギャップスペーサ508は、カバー504とギャップスペーサ508との間、及びギャップスペーサ508と膜502との間に流体密封接続を形成するために、ガスケットなどの1つ以上のシール(図示せず)を含むことができる。ギャップスペーサ508はまた、先の実施形態に関連して論じたように、長方形、「ドッグボーン」形状、「ダンベル」形状、複数のチャネルなどの任意の望ましい周囲形状を有することができる。
カバー504、基準プレート506、及びギャップスペーサ508のうちの1つ以上は、装置の一体的又は動作可能な部分として提供されてもよい。例えば、カバー504、基準プレート506、及びギャップスペーサ508は、複数の連続した独自の配列決定操作中、装置に取り付けられ、装置上にとどまることができる。
フローセル500はまた、流体入口514及び流体出口516を含む。流体入口514及び流体出口516は、(図示の)カバー504を通る通路として、又は基準プレート506又はギャップスペーサ508などの他の部分を通る通路として形成することができる。
差圧は、膜502を平坦な基準面512に押し付けるために使用される。差圧は、流路510の内容物を加圧するか、膜502の底面の圧力を低下させるか、又はその両方によって発生させることができる。基準プレート506は、好ましくは、本明細書で前述したような1つ以上の真空通路524を含む。基準プレート506はまた、上述のような熱電ヒートポンプ又は同様のデバイス(又はその一部)に接続されてもよい。
この実施形態は、それ自体、使い捨てフローセルの必要性を排除する。代わりに、フローセル500は、使い捨て膜502と、再使用可能なカバー504及びギャップスペーサ508との組み合わせとして形成される。膜502は、上述の実施形態と同様に、基準面512と相互作用して、顕微鏡又は他の撮像システムの光路に垂直な平坦な物体面を形成し、DNA鋳型518の大きな集団が顕微鏡の被写界深度内にあることを保証する他の実施形態と同様に、膜502によって形成されるプレートの平坦度は、基準面512の平坦度及び膜502の厚さの均一性によって決定される。
使用時には、膜502は、流体入口514から流体出口516まで延びるチャネル510を形成するために、基準表面512の上方で、カバー504及びギャップスペーサ508の下に配置される。配列決定は、例えば、膜502上にDNA鋳型518を固定化し、試薬をチャネル510に通し、チャネル510の内容物を加熱及び/又は冷却するなどして、チャネル510内で行われる。配列決定の間、顕微鏡又は他の適切な光学系によって、カバー504を介して塩基対延長物が読み取られる。本明細書中に記載される他の実施形態と同様に、塩基対読み取りは、定期的に又は連続的に実施され得る。少なくとも塩基対読み取りステップの間、差圧が膜502を基準面512に対して保持するために加えられる。
新しい配列決定操作を開始することが望ましい場合、カバー504及びギャップスペーサ508は、基準プレート506から離れるように移動される。これにより、ギャップスペーサ508と膜502との間のシールが破壊され、チャンバ510内の残留流体が急速に放出される。チャンバ510が開くときに流体の動きを制御するために、基準プレート506内に又はそれに隣接して形成された1つ以上の流体ダクト(図示せず)を設け、基準プレート506は、傾動プラットフォーム上に配置されてもよいし、又はガイド流体の除去を助けるような角度で取り付けられてもよい。カバー504、ギャップスペーサ508、及び他の部品はまた、フッ素化化合物のナノメートル厚の層(例えば、デラウェア州ウィルミントンのEI du Pont de Nemours and Companyから入手可能なTEFLON(登録商標)AF非晶質フッ素樹脂)などの材料で被覆され得て、操作サイクル間のキャリーオーバーを低減するのに役立つ。カバー504及びギャップスペーサ508は、漂白化学化合物で洗浄して、配列決定実行間の交差汚染を排除することができる。例えば、カバー504及びギャップスペーサ508は、ロボットを使用して移動させて、配列決定実行間に漂白化合物の浴中にそれらを入れることができる。既存の膜502は除去され廃棄されて、新しい膜502が基準プレート506上に置かれ、新しいDNA鋳型コロニーの成長又は配置を開始する。
示された例示的な実施形態は、膜502を除去し、交換するためにスプールシステムを使用する。膜502は、供給スプール520と巻き取りスプール522との間に延びる。供給スプール520は未使用膜502を保持し、巻き取りスプール522は使用済み膜502を保持する。カバー504及びギャップスペーサ508が膜502から離れるように移動されると、1つ以上のモータM1、M2を使用してスプール520、522の一方又は両方を操作して、膜502の使用済み部分を基準プレート508から除去し、膜502の新しい部分を基準プレート508上に進める。例えば、モータM1は時計回りに(図5Bで見て)回転させて膜502の使用済み部分を巻くことができ、モータM2(設けられている場合)又は適切な抗力ブレーキを使用して膜502に張力を加えて、それを基準面512上で概ね平坦にすることができる。
膜502は、他の機構を使用して置き換えることができることが理解される。例えば、膜502は、個々のシートとして提供されてもよく、折り畳まれたり分解されたりすることなく動きを容易にするのに役立つように、フレームなどを使用してそれらの周囲で補強されてもよい。別の例として、シート502は、その周囲に保持される大きなシートを含むことができ、シート502の異なる部分は、各配列決定を実行中にフローセル位置に選択的に配置される。他の代替物は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
第3の実施形態は、消耗品資源の使用をさらに低減し、さらに運用コストを低減することが期待される。
前述の実施形態は、平坦な基準面に対して膜を平坦に保持するために差圧を使用するものとして説明したが、他の実施形態は、これを達成するために差圧を使用しなくてもよい。例えば、図5A及び図5Bの実施形態は、真空通路524を省略し、その代わりに、基準面512にわたって膜502をしっかりと引き伸ばすことによって変更することができる。他の代替物は、本開示を考慮すれば当業者には明らかである。
図6は、実施形態を装置600にどのように統合することができるかを示す。装置600は、前述の実施形態のいずれか又はその変形として構成された配列決定ステージ602を含む。例えば、ステージ602は、剛性プレートに取り付けられた膜を有する自立型フローセル606を受け入れる固定された基準面/ギャップスペーサアセンブリ604を備えることができる。又は、ステージ604は、固定された基準面608、可動カバー/ギャップスペーサアセンブリ610、及び交換可能な膜供給部612を備えることができる。ステージ604はまた、下部基準面614及び固定又は可動上部基準面616を含むことができ、これは、上部膜及び下部膜に接合された上部を含む自立型フローセル618を受け入れる。
配列決定ステージ602は、熱電ヒートポンプなどの加熱デバイス620に関連付けられている(好ましくは、その上に搭載されている)。エアポンプ、遠心ファンなどの真空源622を設けて、膜を関連する基準面に押し付けるために膜の底部に真空を引くことができる。ステージ602は、第1流体ポンプシステム626を介して試薬供給源624に接続され、第2流体ポンプシステム630を介して試薬廃棄物628に接続されてもよい。撮像システム632(例えば、顕微鏡、光源、ミラー、カメラなど)は、ステージ602の上に取り付けられ、ロボットユニット634に移動可能に取り付けられてもよい。
フローセル、可動基準プレート、可動カバーなどの様々な部品を移動させるために、1つ以上のロボットユニット636が設けられてもよい。適切な電源、電子制御装置、ネットワークインターフェースなども、装置600とともに設けることができる。本開示を考慮すると、当業者には他の代替物が明らかである。
フローセル、可動基準プレート、可動カバーなどの様々な部品を移動させるために、1つ以上のロボットユニット636が設けられてもよい。適切な電源、電子制御装置、ネットワークインターフェースなども、装置600とともに設けることができる。本開示を考慮すると、当業者には他の代替物が明らかである。
本開示は、単独で又は一緒に使用され得る、多数の新規で有用であり、非自明な特徴及び/又は特徴の組み合わせを記載する。実施形態は、ハイスループット核酸配列決定システムに関連する商品のコストを低減するのに特に有用であると予想されるが、他の利益が提供されてもよく、低減されたコストは必ずしもすべての実施形態で必要とされるわけではない。本明細書に記載された実施形態は、合成プロセスによる配列決定の文脈において一般的に説明されているが、化学的標識の視覚的観察を用いる他の配列決定プロセスでの使用のために実施形態を構成することができる。
本明細書に記載の実施形態はすべて例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。本明細書に記載された発明は、様々な等価な方法で修飾され、適合され得、そのような改変及び適合は全て、本開示及び添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されることが理解される。
本明細書に記載の実施形態はすべて例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。本明細書に記載された発明は、様々な等価な方法で修飾され、適合され得、そのような改変及び適合は全て、本開示及び添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されることが理解される。
Claims (22)
- 配列決定装置のためのフローセルシステムであって、フローセルシステムは、
1つ以上の液体試薬を受容するように構成された流体入口;
前記1つ以上の液体試薬を通過させるように構成された流体出口;及び
流体入口と流体出口の間に延在し、流体接続しているチャネル
を含み、ここで、
チャネルの少なくとも一部は、その上に固定化された複数のDNA鋳型を受容するように構成された可撓性材料を含む膜を含む、上記フローセルシステム。 - 前記膜が、ポリマー又は環状オレフィンコポリマーを含む、請求項1に記載のフローセルシステム。
- 前記膜が、1μm〜100μmの厚さを有する、請求項1に記載のフローセルシステム。
- 前記膜が、4μm〜50μmの厚さを有する、請求項1に記載のフローセルシステム。
- 前記膜が、10μm〜20μmの厚さを有する、請求項1に記載のフローセルシステム。
- 前記膜が、複数のDNA鋳型を含む膜の少なくとも一部が平坦な物体平面にある位置に移動可能である、請求項1に記載のフローセルシステム。
- 平坦な基準面をさらに備え、前記膜が、前記平坦な基準面上の前記膜の部分を位置決めするように移動可能であり、それによって前記DNA鋳型を前記平坦な物体平面に配置する、請求項6に記載のフローセルシステム。
- 前記平坦な基準面が、前記平坦な基準面の所定のスパンにわたって最大ピークから谷までの高さ変動によって計算すると、0.05%の平坦度を有する、請求項7に記載のフローセルシステム。
- 前記平坦な基準面と動作可能に付随する1つ以上の空気通路と、前記1つ以上の空気通路に流体接続された1つ以上の空気ポンプとをさらに備え、前記膜の側部に陰圧を発生させるように構成され、それにより、平坦な基準面上に前記膜の部分を位置決めする、請求項7にフローセルシステム。
- 剛性材料を含むフローセルプレートであって、フローセルプレートの少なくとも一部が透明プレート領域を含むフローセルプレートをさらに含み、
ここで、前記膜は、前記フローセルプレートに前記膜の周辺領域で取り付けられ、前記膜の少なくとも一部は前記透明プレート領域に面しており、前記膜と前記フローセルプレートとの間にチャネルを形成し、複数のDNA鋳型を含む膜の一部が、フローセルプレートから離れる方向に移動可能であり、平坦な物体平面上に膜の部分を配置する、請求項1に記載のフローセルシステム。 - 前記流体入口及び前記流体出口の少なくとも1つが、前記フローセルプレートを通るそれぞれの通路を含む、請求項10に記載のフローセルシステム。
- 前記フローセルプレートが、関連した配列決定装置の一部に嵌合するように構成され、寸法決めされ、前記膜は、膜を横切る差圧を加えると、付随する配列決定装置上の基準面と接触するように配置される、請求項10に記載のフローセルシステム。
- 前記膜が、第1の膜部分と第2の膜部分とを含み、前記第1の膜部分と前記第2の膜部分は、それぞれの周縁部において互いに接続されて、前記第1の膜と前記第2の膜との間にチャネルを形成する、請求項1に記載のフローセルシステム。
- 前記第1の膜部分及び前記第2の膜部分が、前記周縁部において互いに接着された膜材料の別々のシート、折り畳まれた膜材料の単一シート、又は膜材料の単一のチューブを含む、請求項13に記載のフローセルシステム。
- 前記フローセルは、関連配列決定装置の一部に嵌合するように構成され、寸法決めされており、前記第1の膜部分は、第1の膜部分を横切る差圧を加えると、付随する配列決定装置上の第1の基準面と接触して配置されるように構成され、第2の膜部分は、第2の膜部分を横切る差圧を加えると、付随する配列決定装置の第2の基準面と接触して配置されるように構成される、請求項13に記載のフローセルシステム。
- 前記第1の基準面及び前記第2の基準面の少なくとも一方が平坦な表面を含む、請求項15に記載のフローセルシステム。
- カバーと膜との間にチャネルを形成するように膜の第1の側部に面するように構成されたカバー;及び
膜の第1の側部に対向する膜の第2の側部に面するように構成された基準プレート
をさらに含む、請求項1に記載のフローセルシステム。 - 前記カバー及び前記基準プレートの少なくとも1つが、前記膜を除去するように選択的に移動可能である、請求項17に記載のフローセルシステム。
- 前記膜が、膜材料の供給部の別個の部分を含む、請求項18に記載のフローセルシステム。
- 前記膜材料の供給部が、前記膜材料の供給部の別個の部分を、前記カバーと前記基準プレートとの間から移動させるために回転するように構成された膜材料のスプールロールを含む、請求項19に記載のフローセルシステム。
- 前記カバーがカバープレートを含み、前記カバープレートの少なくとも一部は、透明なカバー領域と、前記カバープレートから伸長して前記膜の前記第1の側部に面する空洞を形成するギャップスペーサとを含み、前記ギャップスペーサは、カバープレートに恒久的に取り付けられているか、又はカバープレートから選択的に取り外し可能である、請求項17に記載のフローセルシステム。
- 前記流体入口及び前記流体出口が、前記カバーを通るそれぞれの通路を含む、請求項17に記載のフローセルシステム。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562271423P | 2015-12-28 | 2015-12-28 | |
US62/271,423 | 2015-12-28 | ||
PCT/US2016/068674 WO2017117105A1 (en) | 2015-12-28 | 2016-12-27 | Thin-film flowcells |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019500871A true JP2019500871A (ja) | 2019-01-17 |
Family
ID=59087609
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018530563A Pending JP2019500871A (ja) | 2015-12-28 | 2016-12-27 | 薄膜フローセル |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170182493A1 (ja) |
EP (1) | EP3397945A1 (ja) |
JP (1) | JP2019500871A (ja) |
KR (1) | KR20180097640A (ja) |
CN (1) | CN108449934A (ja) |
AU (1) | AU2016381447A1 (ja) |
CA (1) | CA3006027A1 (ja) |
WO (1) | WO2017117105A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020532722A (ja) * | 2017-09-01 | 2020-11-12 | エムジーアイ テック カンパニー リミテッドMGI Tech Co., Ltd. | シリコンセンサと一体型の注入形成型のマイクロ流体/流体カートリッジ |
WO2024062641A1 (ja) * | 2022-09-22 | 2024-03-28 | 株式会社 東芝 | イメージセンサーのカバー部材、観察システム、および観察方法 |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3472351B1 (de) | 2016-06-15 | 2020-10-28 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Einzelmolekülnachweis bzw. -quantifizierung durch dna-nanotechnologie |
CN106195321B (zh) * | 2016-08-30 | 2017-09-22 | 博奥颐和健康科学技术(北京)有限公司 | 一种液体存储和释放组件及液体存储和释放芯片 |
EP3421131A1 (en) * | 2017-06-30 | 2019-01-02 | Blink AG | A sample cartridge for incubating and/or analyzing a dispersion of particles, cells or droplets |
US20210078003A1 (en) * | 2018-01-26 | 2021-03-18 | Qiagen Gmbh | Sequencing flowcells |
WO2020033182A1 (en) * | 2018-08-06 | 2020-02-13 | Corning Incorporated | Patterned microfluidic devices and methods for manufacturing the same |
EP3921639A4 (en) * | 2019-02-06 | 2022-03-16 | Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. | LIQUID SENSOR ASSEMBLY, APPARATUS, AND METHODS |
CN115537307A (zh) * | 2021-06-30 | 2022-12-30 | 深圳市真迈生物科技有限公司 | 芯片、应用及制备芯片的方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7390457B2 (en) * | 2002-10-31 | 2008-06-24 | Agilent Technologies, Inc. | Integrated microfluidic array device |
KR20050088476A (ko) * | 2002-12-30 | 2005-09-06 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 병원균 검출과 분석을 위한 방법과 기구 |
US8953159B2 (en) * | 2008-10-03 | 2015-02-10 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Surface enhanced raman spectroscopy nanodome biosensors and methods of manufacturing the same |
WO2013134741A2 (en) * | 2012-03-08 | 2013-09-12 | Cyvek, Inc. | Methods and systems for manufacture of microarray assay systems, conducting microfluidic assays, and monitoring and scanning to obtain microfluidic assay results |
US20140155297A1 (en) * | 2012-02-24 | 2014-06-05 | Cambrian Genomics, Inc. | Method and apparatus for light based recovery of sequence verified dna |
US9150907B2 (en) * | 2012-04-27 | 2015-10-06 | General Electric Company | Microfluidic flow cell assemblies and method of use |
CA2898453C (en) * | 2013-03-13 | 2021-07-27 | Illumina, Inc. | Multilayer fluidic devices and methods for their fabrication |
EP2799535A1 (en) * | 2013-04-29 | 2014-11-05 | FOM Institute for Atomic and Molecular Physics | Microstructured membrane for use in a flow cell |
-
2016
- 2016-12-21 US US15/386,490 patent/US20170182493A1/en not_active Abandoned
- 2016-12-27 KR KR1020187020191A patent/KR20180097640A/ko unknown
- 2016-12-27 AU AU2016381447A patent/AU2016381447A1/en not_active Abandoned
- 2016-12-27 EP EP16882496.9A patent/EP3397945A1/en not_active Withdrawn
- 2016-12-27 JP JP2018530563A patent/JP2019500871A/ja active Pending
- 2016-12-27 CN CN201680072259.4A patent/CN108449934A/zh active Pending
- 2016-12-27 WO PCT/US2016/068674 patent/WO2017117105A1/en active Application Filing
- 2016-12-27 CA CA3006027A patent/CA3006027A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-03-28 US US15/938,514 patent/US20180214872A1/en not_active Abandoned
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020532722A (ja) * | 2017-09-01 | 2020-11-12 | エムジーアイ テック カンパニー リミテッドMGI Tech Co., Ltd. | シリコンセンサと一体型の注入形成型のマイクロ流体/流体カートリッジ |
JP7169345B2 (ja) | 2017-09-01 | 2022-11-10 | 深▲セン▼華大智造科技股▲ふん▼有限公司 | シリコンセンサと一体型の注入形成型のマイクロ流体/流体カートリッジ |
WO2024062641A1 (ja) * | 2022-09-22 | 2024-03-28 | 株式会社 東芝 | イメージセンサーのカバー部材、観察システム、および観察方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20170182493A1 (en) | 2017-06-29 |
CN108449934A (zh) | 2018-08-24 |
AU2016381447A1 (en) | 2018-06-21 |
US20180214872A1 (en) | 2018-08-02 |
EP3397945A1 (en) | 2018-11-07 |
WO2017117105A1 (en) | 2017-07-06 |
KR20180097640A (ko) | 2018-08-31 |
CA3006027A1 (en) | 2017-07-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2019500871A (ja) | 薄膜フローセル | |
AU2019392932B2 (en) | Flow cell device and use thereof | |
JP6654681B2 (ja) | 試料導入から結果出力までのプロセス化を提供する単一構造バイオチップおよび製造方法 | |
JP6181370B2 (ja) | サンプル取得、処理及び反応のためのアッセイカード | |
Lei | Materials and fabrication techniques for nano-and microfluidic devices | |
US20210387184A1 (en) | Flow cell systems and devices | |
Cai et al. | Rapid prototyping of cyclic olefin copolymer based microfluidic system with CO 2 laser ablation | |
JP2008008880A (ja) | プラスチック製マイクロチップ、及びその製造方法、並びにそれを利用したバイオチップ又はマイクロ分析チップ | |
Park et al. | A titer plate-based polymer microfluidic platform for high throughput nucleic acid purification | |
US9506870B2 (en) | Flow-channel device for detecting light emission | |
JP2002515351A (ja) | ミクロ構造化されたフィルム | |
JP2017217617A (ja) | 流路デバイス | |
JP2021058880A (ja) | マイクロフィルタ、製造方法、及びマイクロ濾過ユニット | |
JP2010247056A (ja) | マイクロチップ | |
JPWO2009125757A1 (ja) | マイクロチップ及びマイクロチップの製造方法 | |
JP4622617B2 (ja) | マイクロチャネル基板作製用鋳型の作製方法 | |
JP2021062417A (ja) | マイクロ流路デバイスの製造方法及びマイクロ流路デバイス | |
JP2012185073A (ja) | 試料観測装置及び試料観測方法 | |
Nemati et al. | Solvent immersion imprint lithography: A high-performance, semi-automated procedure | |
GB2511944A (en) | Analytical method and device with a movable plunger | |
Duarte | Label-free cell sorting using carbon-electrode dielectrophoresis and centrifugal microfluidics | |
Gencturk et al. | Fabrication protocol for thermoplastic microfluidic devices: nanoliter volume bioreactors for cell culturing | |
JP2007062253A (ja) | マイクロチップの基板形成用金型の製造方法及び該金型を用いたマイクロチップの基板の製造方法 | |
JP2008039625A (ja) | 細胞電気生理センサおよびその製造方法 | |
Anderson | The fabrication & characterization of an electrokinetic microfluidic pump from SU-8, a negative epoxy-based photoresist |