JP2019203842A - 試薬選択支援装置、細胞分析システム、試薬の選択の支援方法、コンピュータプログラム及び記憶媒体 - Google Patents

試薬選択支援装置、細胞分析システム、試薬の選択の支援方法、コンピュータプログラム及び記憶媒体 Download PDF

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Abstract

【課題】専門的な知識を有する検査者でなくとも、検査オーダーに応じた適切な複数の蛍光色素の組み合わせを選択することを可能にする。【解決手段】複数の測定項目を含むオーダー情報を取得する取得部（１０１）と、前記複数の測定項目に対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定する処理部（１０Ａ）と、決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する出力部（１７）と、を備える試薬選択支援装置（１００）により、課題を解決する。【選択図】図４

Description

本開示は、試薬選択支援装置、細胞分析システム、試薬の選択の支援方法、コンピュータプログラム及び記憶媒体に関する。
フローサイトメトリーは、例えば下記特許文献１に開示されるように、蛍光免疫染色と組み合わせることにより、細胞表面や細胞内に存在する様々な抗原を検出することができ、細胞の分析には特に有用である。
より多くの抗原を効率よく測定するため、フローサイトメトリーでは、一般的に１回のアッセイで複数の抗原を検出できるマルチカラーフローサイトメトリーを行う。
近年、ヒトゲノムの全配列の解明と、遺伝子組換え動物の作成技術の進歩により、細胞において発現量が低い分子であっても疾患との関連が解析できるようになった。また、近年、フローサイトメータに搭載される光源の数が増えたこと、光を分光するためのダイクロイックミラー等の検出に用いられる光学系が進歩したことにより、一度に検出できる蛍光色素数が増加した。細胞に存在する様々な分子の分析において、フローサイトメトリーは、１回のアッセイで多数種の抗原を分析できる有用なツールとなっている。
フローサイトメトリーは、疾患の診断、疾患の病期の判定、及び治療方針の決定に大きく貢献している技術である。フローサイトメトリーの普及により、腫瘍細胞の細胞系統を正確に知ることができるようになり、以前は細胞の形態観察、酵素染色、及び免疫染色に基づいて行われていた造血器腫瘍の診断は、その多くが細胞表面マーカーのプロファイリングに基づく診断に移行した。疾患の診断のためには多数種の抗原の分析が必要であり、フローサイトメトリーによる測定項目として、１回の検査オーダーで複数種の抗原の分析が依頼されることが通常である。
例えばＢ細胞系腫瘍であるか否かを同定するだけでも、１検体当たり１０から３０種の表面マーカーを検出する必要がある。さらに、標的とする全ての表面マーカーを検出するためには、１検体につき、１アッセイあたり標識蛍光色素が抗原ごとに異なる数〜１０種の検出抗体を使用したマルチカラーフローサイトメトリーを、複数回、検出抗体を換えて行う必要がある。
しかし、１回のアッセイで多数種の抗原を検出するためには、検出対象の細胞種に合わせて抗原を選択することはもちろんのこと、検出抗体がその標的抗原以外で同時に検出される抗原と交差反応性を示すことがないこと等を予め知っておく必要がある。さらに、検査時に手元に保有している検出抗体により可能な検出抗体の組み合わせを選択しなければならない。
このような現状から、現在、フローサイトメトリーは、検出抗体の特性やフローサイトメータの関する知識を持つ測定者が専任で行っており、検査オーダーされる測定項目に応じた、検出抗体試薬の選択も、このような専門的な知識を有する測定者が専任で行っているのが実情である。
特開２０１１−８５５８７号公報
上記に加え、例えばマルチカラーフローサイトメトリーのように、１回のアッセイで異なる複数の標的分子（例えば抗原）を異なる蛍光色素を使って検出する場合、標的分子ごとに１細胞における存在量が異なる場合がある。また、蛍光色素についても、その蛍光強度は色素によって１０倍以上の差が認められる。したがって、蛍光強度の強い蛍光色素を、存在量の多い標的分子の検出に用いてしまうと、同時にアッセイされる存在量の少ない標的分子が検出できない畏れがあるという課題がる。このため、１回のアッセイをどのような蛍光色素の組み合わせで行うか測定前に決める必要がある。しかし、現在、この蛍光色素の組み合わせは、測定者の経験に基づいて決定されている。
病院の検査の現場には「必要な時に、迅速に、いつでも安定した検査結果を提供する」というニーズが求められている。しかしながら、フローサイトメトリーを用いる検査は、年々煩雑化しているため、専任の測定者以外の者が、１回のアッセイにおいてどのような蛍光色素の組み合わせで行うか決定することは困難である。このためフローサイトメトリーの技術が高度化するにつれて、病院の検査の現場における上記ニーズから大きく逸脱している。
また、特許文献１の方法は、フローサイトメータ等の機器のセットアップを簡略化することを目的とした方法ではあるものの、ある程度の専門的な知識を有する測定者を前提とした方法であり、初心者を対象としたユーザフレンドリーな方法ではない。特許文献１の方法は、そもそも病院の検査の現場に求められている上記したニーズを満足するものではない。
マルチカラーフローサイトメトリーの場合、第１の蛍光と比べて第２の蛍光が極端に低い場合、強い第１の蛍光から生じる蛍光が第２の蛍光を検出する検出器に漏れこむため、弱い第２の蛍光の検出において、例えば光が漏れ込む等の悪影響を与えることが問題となる。
本開示は、細胞分析に使用される複数の蛍光試薬の組み合わせを支援し、測定者のスキルに依存せず、複数種の蛍光試薬の組み合わせを決定することを課題とする。
本開示のある実施形態は、細胞測定に用いる試薬の選択を支援する試薬選択支援装置（１００，１００Ｂ）に関する。試薬選択支援装置（１００，１００Ｂ）は、複数の測定項目を含むオーダー情報を取得する取得部（１０１）と、前記複数の測定項目に対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定する処理部（１０Ａ，１０Ｂ）と、決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する出力部とを備える。本実施形態により、測定者の細胞分析技術の熟練度によらず１回のアッセイに使用する複数の蛍光試薬の組み合わせを決定することができる。
好ましくは、前記細胞の核酸または前記細胞に存在する抗原である。このようにすることで、測定項目に応じて、核酸又は抗原を標的分子とした測定は検査オーダー頻度が高い検査オーダーであり、検査オーダーの頻度が高い細胞分析を支援することができる。
好ましくは、前記蛍光色素の特性が染色指数であり、前記標的細胞の特性が細胞に存在する分子の量であり、処理部（１０Ａ，１０Ｂ）は、前記第１蛍光色素の染色指数と、測定対象細胞に存在する第１の測定項目に対応する第１標的分子の量を反映する値と、に基づいて、前記第１蛍光色素による明るさに関する情報を算出し、前記第２蛍光色素の染色指数と、測定対象細胞に存在する第２の測定項目に対応する第２標的分子の量を反映する値と、に基づいて、第２蛍光色素による明るさに関する情報を算出し、前記第１蛍光色素による明るさに関する情報と前記第２蛍光色素による明るさに関する情報とに基づいて前記組み合わせを決定する。好ましくは、前記第１標的分子の量を反映する値及び前記第２標的分子の量を反映する値が、測定対象細胞に存在する各標的分子の絶対分子数、または各標的分子の相対分子数である。このようにすることで、蛍光色素の情報と標的分子の情報について最新の情報を取得することができる。
試薬選択支援装置（１００，１００Ｂ）は、前記第１蛍光色素の染色指数と、前記第２蛍光色素の染色指数と、を記憶した記憶部を備える。試薬選択支援装置（１００，１００Ｂ）は、前記測定対象細胞に存在する第１測定項目に対応する第１標的分子の量を反映する値と、前記測定対象細胞に存在する第２測定項目に対応する第２標的分子の量を反映する値と、を記憶した記憶部を備える。このような構成とすることにより、試薬選択支援装置（１００，１００Ｂ）がネットワークに常時接続していなくても蛍光試薬の選択を支援することができる。
処理部（１０Ａ，１０Ｂ）は、第１の蛍光試薬と第２の蛍光試薬の組み合わせを、第１蛍光色素の明るさに関する情報および第２蛍光色素の明るさに関する情報の分散に基づいて決定する。このような構成とすることで、１細胞から発せられる蛍光シグナルについて各蛍光試薬間でできる限り差が少ない蛍光試薬の組み合わせを決定することができる。
好ましくは、前記試薬は蛍光色素により標識された抗体を含む。好ましくは、一種類の抗原を検出するための抗体を含む。本開示によれば、カクテル抗体を用いなくても、適切な蛍光色素の組み合わせにより複数の抗原を同時に検出することができる。
前記試薬は、複数種類の抗体を含む。このような構成とすることにより、カクテル抗体を用いた場合であっても、試薬を選択することができる。
好ましくは、前記処理部（１０Ａ，１０Ｂ）は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、前記出力部（１７）は、前記組み合わせを、蛍光試薬に含まれる試薬残量に基づく優先度で出力する。このようにすることで、試薬の残量を考慮して、試薬の選択を行うことができる。
前記処理部（１０Ａ，１０Ｂ）は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、前記出力部（１７）は、前記組み合わせを蛍光試薬の使用期限に基づく優先度で出力する。このようにすることで、試薬の使用期限を考慮して、試薬の選択を行うことができる。
前記処理部（１０Ａ，１０Ｂ）は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、前記出力部（１７）は、前記組み合わせを蛍光試薬のコストに基づく優先度で出力する。このようにすることで、ランニングコストを考慮して、試薬の選択を行うことができる。
前記処理部は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、前記出力部は、前記組み合わせをユーザの指定した設定に基づく優先度で出力する。このようにすることで、ユーザの優先度を考慮して、試薬の選択を行うことができる。
試薬選択支援装置（１００Ｂ）は、蛍光色素蛍光色素の特性の情報を受信する通信部（１５１）を備える。このようすることで、試薬選択支援装置（１００Ｂ）は、常に新しい情報に基づいて蛍光試薬の組み合わせを決定することができる。
試薬選択支援装置（１００Ｂ）は、測定対象細胞に存在する標的分子の特性の情報を受信する通信部を備える。このようすることで、試薬選択支援装置（１００Ｂ）は、常に新しい情報に基づいて蛍光試薬の組み合わせを決定することができる。
本開示のある実施形態は、試薬選択支装置（１００，１００Ｂ）と、フローサイトメトリー法により細胞を測定する測定部（２３）を有する細胞分析装置（２００）と、を備える細胞分析システム（１０００，４０００）に関する。好ましくは、前記測定部（２３）は、同じ細胞から得られる前記第１蛍光色素から生じる蛍光および前記第２蛍光色素から生じる蛍光を測定する。このようにすることで、煩雑化しているフローサイトメトリー検査において、経験の浅い測定者であっても検査を行うことができる。
本開示のある実施形態は、複数の測定項目を含むオーダー情報を取得し、前記複数の測定項目に含まれる第１の測定項目対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定し、決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する、細胞測定に用いる試薬の選択の支援方法に関する。
本開示のある実施形態は、コンピュータに、複数の測定項目を含むオーダー情報を取得する処理、前記複数の測定項目に対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定する処理、および決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する処理、処理を実行させる。前記コンピュータプログラムは、記憶媒体に記憶されていてもよい。
本開示に関する試薬選択支援方法、及びコンピュータプログラムによれば、専門的な知識を有する検査者でなくとも、検査オーダーに応じた適切な蛍光試薬の組み合わせを選択することが可能となる。
本開示によれば、複数の蛍光を同時に測定する場合において、それぞれの蛍光の明るさを同程度として測定することにより、漏れ込みの影響を抑えより高精度に測定することが可能となる。また、専門的な知識を有する検査者でなくとも、検査オーダーに応じた適切な蛍光試薬の組み合わせを選択することが可能となる。
本開示の概要を示す図である。 第１の実施形態に係る細胞分析システムを説明するための模式図である。 支援装置のハードウェア構成を示すブロック図である。 第１の実施形態に係る細胞分析システムの機能を説明するためのブロック図である。 蛍光試薬の組み合わせの候補を決定する手順を示すフローチャートの例である。 標的分子の情報を示すリストテーブルの例である。 蛍光色素の情報を示すリストテーブルの例である。 蛍光試薬の選択リスト及び測定機器の選択リストの例である。 蛍光試薬の組み合わせの候補を決定する手順を示すフローチャートの例である。 蛍光試薬の候補の例である。 優先順位の選択リストの例である。 フローサイトメータの光学系の一例を示す概略図である。 第２の実施形態に係る細胞分析システムを説明するための模式図である。 第２の実施形態に係る細胞分析システムの機能を説明するためのブロック図である。 サーバを介した蛍光色素の情報及び標的分子の情報の更新手順を示すフローチャートの例である。 サーバを介した蛍光色素の情報及び標的分子の情報の更新手順を示すフローチャートの例である。
以下、本発明の実施の形態を、添付の図面を参照して詳細に説明する。なお、以下の説明及び図面において、同じ符号は同じ又は類似の構成要素を示すこととし、よって、同じ又は類似の構成要素に関する説明を省略する。
＜細胞分析＞
本開示は、依頼者から依頼された細胞分析において、細胞の測定を支援することに関する。はじめに細胞分析の概略について説明する。本開示における細胞分析は、研究及び診断を目的として行われる細胞の測定を含む。細胞分析は、複数の測定項目を測定することを含み、前記測定項目は測定対象の細胞を検出（好ましくは同定）することができる標的分子に対応する。したがって、本開示における細胞分析は、複数の標的分子を検出することを含む。前記標的分子は細胞に存在するものである限り制限されない。前記標的分子は細胞膜上、細胞膜中、細胞内のいずれに存在していてもよい。前記標的分子は細胞内小器官（核、核膜、核小体、ミトコンドリア、小胞体、ゴルジ体、リソソーム、細胞膜、細胞質等）そのものであってもよい。前記標的分子は、例えば遺伝子導入等により獲得された分子であってもよい。前記標的分子は、好ましくは、抗原、及び核酸よりなる群から選択される少なくとも一種である。
また、複数の測定項目（標的分子）は、複数種の測定項目（標的分子）を意図する。複数種の標的分子は、それぞれ同一又は異なる生体分子（イオン（水素イオン、カルシウムイオン、マグネシウム、ナトリウムイオン、カリウムイオン、塩化物イオン、亜鉛イオン、銅イオン、鉄イオン等）、タンパク質、糖鎖、脂質、糖タンパク質、糖脂質、リポタンパク質、及び核酸等）であり、好ましくは異なる生体分子である。
標的分子は、その物性に応じた公知の方法により検出することができる。検出は、例えば標的分子に由来する蛍光色素の蛍光シグナルを所定の検出器で受光することにより、検出することができる。ここで、蛍光色素には、その色素自体が励起光の照射により蛍光シグナルを発する物質と、その色素自体は蛍光シグナルを発しないものの、細胞内に取り込まれた後、細胞内の環境で蛍光シグナルを発する物資に変化する色素が含まれる。
例えば、標的分子がタンパク質、糖鎖、脂質、糖タンパク質、糖脂質、リポタンパク質等である場合には、免疫学的な手法で蛍光色素を標的分子に結合させることができる。免疫学的な手法として、好ましくは蛍光抗体法である。標的分子が糖鎖、糖タンパク質、糖脂質等である場合には、レクチン活性を利用した手法で蛍光色素を標的分子に結合させることができる。レクチン活性を利用した手法として好ましくは蛍光標識されたレクチンを使用した蛍光レクチン法である。標的分子が核酸である場合、ハイブリダイゼーション法、ＰＣＲ法、標識ヌクレオチドを用いたラベリング法等で、標的核酸に蛍光色素を結合させることができる。標的核酸の検出方法として好ましくは蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法、及び蛍光エンドラベリング法（ＴＵＮＥＬ法含む）である。標的分子が脂質、糖脂質等である場合には、Ｎｉｌｅ Ｒｅｄ等の蛍光色素を標的分子に結合させることができる。
抗体や核酸に結合させる蛍光色素としては、例えばｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ誘導体、ｒｈｏｄａｍｉｎｅ誘導体、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、Ｃｙ色素、Ａｌｅｘａ（登録商標） Ｆｌｕｏｒ、ＭｅｇａＳｔｏｋｅｓ（商標） Ｄｙｅ、Ｏｙｓｔｅｒ（商標）、ＤｙＬｉｇｈｔ（商標）、ＨｉＬｙｔｅ（商標） Ｆｌｕｏｒ、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ（商標）、Ｑｄｏｔ（登録商標）、ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）、ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ（ＡＰＣ）、ＰｅｒＣＰ、Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ（ＴＲＩＴＣ）、及びこれらのタンデム色素を挙げることができる。より具体的には、ＡＭＣＡ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４０５、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｋｒｏｍｅ Ｏｒａｎｇｅ、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ４２１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ５１０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ６０５、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ６５０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ７１１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ７８５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ｑｄｏｔ（Ｒ）６０５、ＦＩＴＣ、ＰＥ／ＲＤ１、ＥＣＤ／ＰＥ−ＴｅｘａｓＲｅｄ、ＰＣ５／ＳＰＲＤ／ＰＥ−Ｃｙ５、ＰＣ５．５／ＰＥ−Ｃｙ５．５、ＰｅｒＣＰ、ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、ＰＥ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００、ＰＣ７／ＰＥ−Ｃｙ７、ＰＥ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０、ＴＲＩＴＣ、Ｃｙ３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、ＡＰＣ、ＡＰＣ７／ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＡＰＣ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ７００、ＡＰＣ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ７５０等を挙げることができる。
標的分子がイオンである場合、各イオンを検出するイオンプローブを使用することができる。イオンプローブは、蛍光シグナルを発することができる。カルシウムイオンプローブとして、例えばＦｕｒａ ２、Ｆｌｕｏ ３、Ｉｎｄｏ １、Ｒｈｏｄ ２、Ｆｕｒａ Ｒｅｄ等を挙げることができる。亜鉛プローブとしては、Ｚｉｎｑｕｉｎ ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒやＤａｎｓｙｌａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ−ｃｙｃｌｅｎ等を挙げることができる。水素イオンプローブとしては、ｐＨプローブであるＢＣＥＣＦ、ＳＮＡＲＦ−１等を挙げることができる。ナトリウムイオンプローブとしては、ＳＢＦＩを挙げることができる。カリウムイオンプローブとしては、ＰＢＦＩを挙げることができる。
標的分子が細胞内小器官である場合、細胞内小器官を特異的に染色する蛍光染色法で検出することができる。細胞内小器官が核である場合、蛍光染色法として、Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ （ＰＩ）、Ｅｔｈｉｄｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ （ＥＢ）、Ａｃｒｉｄｉｎｅ ｏｒａｎｇｅ （ＡＯ）、４’，６−ｄｉａｍｉｄｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ （ＤＡＰＩ）、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８、Ｖｙｂｒａｎｔ（登録商標） ＤｙｅＣｙｃｌｅ（商標） Ｖｉｏｌｅｔ、ＹＯＹＯ−１、ＣＰＯ、Ｐｙｒｏｎｉｎ Ｙ （Ｐｙｒｏｎｉｎ Ｇ）、７−Ａｍｉｎｏ−Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ（７−ＡＡＤ）、Ｅｔｈｉｄｉｕｍ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ−１、ＳＹＴＯ ９ Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｔａｉｎ、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ、ＬＤＳ ７５１、ＤＲＡＱ５（商標）、ＤＲＡＱ７（商標）、ＴＯ−ＰＲＯ（登録商標）−３ Ｓｔａｉｎ等を挙げることができる。
また、遺伝子導入等により獲得されうる標的分子としてＥＢＦＰ、ＥＣＦＰ、Ｋｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＡｍＣｙａｎ、ＥＧＦＰ、ＺｓＧｒｅｅｎ、ＥＹＦＰ、ｍＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ＤｓＲｅｄ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍｃｈｅｒｒｙ、Ｅ２−Ｃｒｉｍｓｏｎ、Ｋｅｉｍａ−Ｒｅｄ、Ｋｕｓａｂｉｒａ−Ｏｒａｎｇｅ等を挙げることができる。
上述した方法は、標的分子に直接蛍光色素を結合させ、その蛍光シグナルを検出する方法である。一方で、蛍光色素による標的分子の検出は、上記態様に限定されない。例えば、前記標的分子の機能によってもたらされる、又は標的分子の機能を反映する現象を、蛍光色素を使って検出することにより、標的分子の存在を間接的に検出することができる。例えば、前記標的分子が細胞増殖に関わる場合には、ＣＦＳＥ等により細胞増殖を検出してもよい。例えば、標的分子がミトコンドリアの膜電位に関わる場合には、ＪＣ−１、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ−１２３等により、ミトコンドリアの膜電位を検出してもよい。例えば、前記標的分子が、細胞内の酸化還元反応に関わる場合には、ｍＣｌＢ、ＣＭＦＤＡ等により細胞内のチオール活性を検出してもよい。標的分子が、細胞の生死に関連する場合には、Ｃａｌｃｅｉｎ−ＡＭ、ＰＫＨ２６、ＦＤＡ等により、細胞の生死を検出することができる。例えば、前記標的分子が細胞膜の膜電位を変化させる場合には、ＤｉＯＣ２（３）、ＤｉＢＡＣ４（３）等により細胞膜の膜電位を検出することができる。例えば、前記標的分子が細胞内の活性酸素の生成に関する場合には、ＤＣＦＨ−ＤＡ、ＤＨＲ等により、活性酸素の生成を検出することができる。
前記標的分子を検出するために使用される、蛍光色素が結合している抗体、蛍光色素が結合している核酸又は蛍光シグナルを発する染色物質等を含む試薬を蛍光試薬と呼ぶ。蛍光試薬は、検査オーダーに含まれる測定項目に応じて、複数の蛍光試薬を適宜組み合わせることができる。好ましくは、標的分子を抗原として検出する場合、前記抗原の検出に用いられる抗体を検出抗体と呼ぶ。検出抗体を含む蛍光試薬は、１つの抗原を検出するための検出抗体を含むシングル抗体試薬であり得る。ある態様において、検出抗体を含む蛍光試薬は、２つ以上の抗原を検出するための複数の検出抗体を含むカクテル抗体試薬でありうる。また、複数の標的分子を検出するために、複数のシングル抗体試薬を組み合わせてもよい。別の態様として、複数の標的分子を検出するために、１又は複数のシングル抗体試薬とカクテル抗体試薬を組み合わせてもよい。別の態様として、複数の標的分子を検出するために、複数のカクテル抗体試薬を組み合わせてもよい。
カクテル抗体試薬とは、異なる又は同一の抗原に結合しうる複数種の抗体の混合物を含む試薬である。例えば、１つのカクテル抗体試薬には２から６種の抗体が含まれうる。ここで、１つのカクテル抗体試薬に含まれる各抗体は少なくとも１抗体が１抗原に結合する。また、カクテル抗体試薬に含まれる抗体は、２以上の抗体が１蛍光色素に結合してもよい。１つのカクテル抗体試薬に含まれる抗体の数をカクテル数と呼ぶ。また、シングル抗体試薬とは、抗原に結合しうる１種類の抗体を含む試薬である。
各蛍光試薬は、その蛍光試薬が対応する標的分子の情報（名称、Ｇｅｎｅ ＩＤ、標的分子が関連する疾患、各細胞種における１細胞あたりの標的分子の量を反映する値、アイソフォームがある場合には各細胞種における１細胞あたりに存在するアイソフォームごとの分子の量を反映する値等）、蛍光色素の情報（蛍光色素の種類、試薬メーカーごと及び測定機器ごとの蛍光強度、励起光波長、蛍光波長の情報等）、使用期限、ロット番号、メーカー名、価格（１アッセイあたりのランニングコスト等を含む）希釈が必要な場合には希釈倍率等の情報と紐付けられていてもよい。これらの情報は、測定項目に関連する情報に紐付けられていてもよい。標的分子の量を反映する値は、好ましくは分子数である。以下、便宜上、「標的分子の量を反映する値」を「標的分子の分子数」と称することがある。
蛍光シグナルを受光する所定の検出器は、目的とする蛍光シグナルを受光できる受光部を備え、受光した蛍光シグナルを後述する処理部に受け渡すことができるものである限り制限されない。例えば、検出器として好ましくは、蛍光顕微鏡、蛍光イメージスキャナ、フローサイトメータ等の細胞分析装置２００である。細胞分析装置として、好ましくは、フローサイトメータである。
前記細胞分析は、さらに検体から測定試料を調製する前処理を含んでいてもよい。検体は、個体から採取される細胞、組織、細胞を含む体液等である限り制限されない。前処理は、検体若しくは検体に由来する細胞を希釈、又は固定等した細胞試料と蛍光試薬を混合することにより、細胞分析装置２００で測定可能な測定試料（蛍光色素と結合した細胞の浮遊液）を調製するための処理である。検体として好ましくは、末梢血、骨髄等である。例えばマルチカラーフローサイトメトリーの場合、一般的に１つの細胞試料について、検査オーダーに含まれる複数の全ての測定項目を１〜数回のアッセイに分けて数測定項目ずつ測定を行う。検査オーダーに含まれる複数の全ての測定項目のセットをパネルともいう。１回のアッセイで測定される数測定項目のセットをサブパネルともいう。例えば、パネルが２０項目の測定項目を含む場合、一般的に前記測定項目を４〜１０項目のサブパネルに分けて、１サブパネルずつ細胞の測定を行う。
［開示の概要］
図１に、本開示における細胞分析において使用される蛍光試薬の選択の支援装置（以下、「試薬選択支援装置」とする）１００の動作（図１Ａ）と画面表示の１例（図１Ｂ）を示す。測定者は、検査オーダーを受け取ると、依頼内容に応じて測定項目を設定する。試薬選択支援装置１００は、例えば測定者による入力により、測定項目の内容を取得する（図１ＡステップＳ１）。図１Ｂに示す例では、検査オーダー（細胞種別はＣＤ４陽性Ｔ細胞であり、この依頼を満足する測定項目（標的分子の種類）は、Ｔ細胞の表面抗原であるＣＤ４とＣＤ２８である。次に試薬選択支援装置１００は、図１ＡステップＳ２において標的分子の特性（好ましくは、測定対象の細胞１つあたりに存在する標的分子の量に関する情報）を、図１ＡステップＳ３において蛍光色素の特性（好ましくは、蛍光の種類とその蛍光強度に関する情報）を取得する。図１Ｂに示す例では、標的分子の量の特性は、ＣＤ４が、ＣＤ４陽性Ｔ細胞１つあたりどのくらいの分子数で存在するかについての情報と、ＣＤ２８が、ＣＤ２８陽性Ｔ細胞１つあたりどのくらいの分子数で存在するかについての情報である。また、図１Ｂに示す例では、蛍光色素の特性は、使用可能な蛍光色素についての各種蛍光色素の蛍光強度の情報である。図１ＡステップＳ４において試薬選択支援装置１００は、検査に適した蛍光式の組み合わせの候補を出力する。図１Ｂに示す例では、ＣＤ４とＣＤ２８とを同じアッセイ内で測定する際に適している蛍光試薬の組み合わせとして、ＰｅｒＣＰとＰＥを出力する。
例えば、図１Ｂにおいては、第３列に示すように、ＣＤ４の１細胞あたりの分子数（「分子数／１細胞」で表すことがある）は、１００，０００であるのに対して、ＣＤ２８の分子数／１細胞は、２０，０００である。つまり、ＣＤ２８の分子数／１細胞は、ＣＤ４の１／５である。このような場合、ＣＤ４に対して、ＣＤ２８を検出する蛍光強度よりも蛍光強度の強い蛍光色素を結合させてしまうと、蛍光シグナルの検出時に、ＣＤ２８に由来する蛍光シグナルが検出されない畏れがある。
このようなリスクを回避するため、本開示においては、１つの測定対象細胞に存在する異なる標的分子を、１回のアッセイ内で標的分子ごとに異なる蛍光色素を使って検出する際に、いずれの標的分子に由来する蛍光シグナルも検出できる蛍光試薬の組み合わせを決定する。具体的には、各蛍光色素の蛍光強度と、各標的分子の１細胞あたりの分子数に基づいて複数の蛍光色素の適切な組み合わせの候補を出力する。このようにすることで、細胞分析の経験が浅い者であっても、適切な蛍光試薬の組み合わせで細胞分析を行うことができる。
＜第１の実施形態＞
［構成の概要］
本開示の第１の実施形態は、試薬選択支援装置１００に関する。図２に示すように試薬選択支援装置１００は、細胞分析装置２００と接続されて、細胞分析システム１０００を構成してもよい。試薬選択支援装置１００は、依頼者端末３００と、ネットワーク９９を通じて互いに接続されていてもよい。
試薬選択支援装置１００は、例えば汎用コンピュータで構成されており、後述するフローチャートに示す手順に基づいて、複数の測定項目に応じた適切な蛍光試薬の組み合わせを出力する。測定者は、試薬選択支援装置１００によって決定された蛍光試薬の組み合わせに基づいて、細胞試料に蛍光試薬を混合し測定試料２９を調製する。調製された測定試料２９は、試料容器２８に格納され、細胞分析装置２００にセットされ、細胞の測定が行われる。なお、試薬選択支援装置１００はコンピュータに限らず、例えばタブレット端末等の携帯端末としてもよい。
［試薬選択支援装置のハードウェア構成］
図３に試薬選択支援装置１００の構成の例を示す。試薬選択支援装置１００は、処理部１０Ａを備える。また試薬選択支援装置１００は、入力部１６と、出力部１７とを備えていてもよい。
処理部１０Ａは、後述するデータ処理を行うＣＰＵ（Central Processing Unit）１１と、データ処理の作業領域に使用するメモリ１２と、後述するプログラム及び処理データを記憶する補助記憶部１３と、各部の間でデータを伝送するバス１４と、外部機器とのデータの入出力や通信を行うインタフェース部１５（以下、「Ｉ／Ｆ部」と記す）とを備えている。インタフェース部１５の中で通信を行うインタフェース部を通信部１５１とする。入力部１６及び出力部１７は、処理部１０Ａに接続されている。本開示においてメモリと補助記憶部１３とをあわせて記憶部と呼ぶことがある。例示的には、入力部１６と出力部１７とは一体化されて、タッチパネル式の入力表示装置として構成することができる。
また、処理部１０Ａは、以下の図５及び図９で説明する各ステップの処理を行うために、本開示に係るプログラムを、例えば実行形式（例えばプログラミング言語からコンパイラにより変換されて生成される）で補助記憶部１３に予め記憶しており、処理部１０Ａは、補助記憶部１３に記憶したプログラムを使用して処理を行う。
以下の説明においては、特に断らない限り、処理部１０Ａが行う処理は、補助記憶部１３又はメモリ１２に格納されたプログラムに基づいて、実際にはＣＰＵ１１が行う処理を意味する。ＣＰＵ１１はメモリ１２を作業領域として必要なデータ（処理途中の中間データ等）を一時記憶し、補助記憶部１３に演算結果等の長期保存するデータを適宜記憶する。
［試薬選択支援装置の機能ブロック］
図４に試薬選択支援装置１００の機能ブロックを例示する。試薬選択支援装置１００の処理部１０Ａは、測定項目取得部１０１と、候補蛍光色素決定部１０２と、出力制御部１０３と、蛍光試薬指定受付部１０４とを備える。測定項目取得部１０１、出力制御部１０３及び蛍光試薬指定受付部１０４はＩ／Ｆ部１５に、候補蛍光色素決定部１０２はＣＰＵ１１にそれぞれ対応する。これらの機能ブロックは、本開示に係るプログラムを処理部１０Ａの補助記憶部１３にインストールし、又はメモリ１２に一時的に記憶し、このプログラムをＣＰＵ１１が実行することにより実現される。
測定項目取得部１０１は、例えば入力部１６から又はネットワーク９９を介して依頼者端末から検査オーダーの内容を受け付ける。候補蛍光色素決定部１０２は、例えば後述する各ステップにしたがって、蛍光試薬の組み合わせの候補を決定する。出力制御部１０３は、決定された候補を出力する。蛍光試薬指定受付部１０４は、測定者から指定される蛍光試薬の組み合わせの候補の選択を受け付ける。
第１の実施形態では、蛍光色素情報及び標的分子情報データベース４０１（以下、「蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１」と記す）は、処理部１０Ａの補助記憶部１３又はメモリ１２に記憶されている。蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１は、予め補助記憶部１３に記憶されていてもよい。蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１には、前記「細胞の測定」で述べた、蛍光色素の情報と、標的分子の情報が記憶されている。
［蛍光試薬の組み合わせの候補を決定する方法］
以下に、検査項目が図１に示すＣＤ４陽性Ｔ細胞であり、測定項目がＣＤ４及びＣＤ２８であり、蛍光試薬が抗体試薬である場合を一例として、処理部１０Ａが行う、蛍光試薬の組み合わせの候補を決定する方法を説明する。
図５に示すステップＳ１１において、処理部１０Ａは測定者が入力部１６から入力した検査オーダーに含まれる複数の測定項目に関する情報を取得する。測定項目に関する情報は、例えば標的分子の名称等である。あるいは、処理部１０Ａは依頼者が依頼者端末３００の入力部３０１から入力した検査オーダーをネットワーク９９を介して取得してもよい。検査オーダーは、例えばテキスト形式のデータで依頼者端末３００のデータ送受信部３０２から送信される。
処理部１０Ａは、ステップＳ１２において検査オーダーに含まれる細胞種に応じて、蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１に格納されている標的分子の情報から、リストを選択する。
図６に標的分子の情報を掲載したリストテーブルの例を示す。図６に示す標的分子の情報には、細胞種ごとにその細胞種を検出又は同定することができる標的分子の種類と前記標的分子の１細胞あたりの分子数が含まれる。ここで、例えば、ＣＤ４陽性Ｔ細胞とＣＤ８陽性細胞とに発現するＣＤ２８は、Ｔ細胞のサブタイプによって分子数／１細胞が異なっている。また、ＣＣＲ５は１細胞に分子量の異なる２つのアイソフォームが存在している。したがって、標的分子の情報は、細胞種ごとに、アイソフォームがある場合には、各アイソフォームの分子数／１細胞が記憶される。
処理部１０Ａは、ステップＳ１３において、蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１からと蛍光色素の情報を取得する。
図７に蛍光色素の情報を掲載したリストテーブルの例を示す。図７Ａは、各蛍光色素の種類とＡ社のＣＤ４抗体を使って求めた各蛍光色素の平均染色指数（ステインインデックス）を示す。図７Ｂは、各蛍光色素の種類とＢ社のＣＤ４抗体を使って求めた各蛍光色素の平均染色指数を示す。染色指数は、蛍光強度を示す値の１つである。染色指数は、フローサイトメトリーのアプリケーションにおいて、様々な蛍光色素の蛍光強度を相互に比較できるよう正規化した値である。ネガティブポピュレーションの平均蛍光強度（ＭＦＩ）からポジティブポピュレーションのＭＦＩを減じた値を、ネガティブポピュレーションの標準偏差（ＳＤ）に２を乗じた値で除して求めることができる。
図７に示すように、染色指数は、蛍光試薬のメーカー等及び測定機器等によって異なる。このため、処理部１０Ａは、測定者が使用する蛍光試薬のメーカー及び測定機器に応じて、蛍光色素の情報のリストを選択する。蛍光試薬のメーカー及び測定機器は予め補助記憶部１３に記憶されていてもよい。また、測定者が、例えば図８に示す画面の例のように、プルダウンリストから蛍光試薬のメーカー及び測定機器を選択し、処理部１０Ａが選択された情報を受け取ってもよい。
処理部１０Ａは、ステップＳ１４において、複数の測定項目に関連する情報、すなわち各測定項目に対応する標的分子の情報に基づいて、各標的分子の１細胞あたりの分子数に基づいて、複数の蛍光試薬の組み合わせを決定する。第１の測定項目を測定するために用いられる第１蛍光色素（第１の標的分子に結合した第１蛍光色素）と、前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目を測定するために用いられる第２蛍光色素（第２の標的分子に結合した第２蛍光色素）とを含む複数の蛍光試薬の組み合わせを決定する。好ましくは、前記複数の蛍光試薬の組み合わせは、１細胞における第１蛍光色素の明るさと第２蛍光色素の明るさとに基づいて決定される。
蛍光試薬の組み合わせを決定する方法の具体例を図９に示す。蛍光の明るさは、例えば、各標的分子の１細胞あたりの分子数と、各蛍光色素の蛍光強度を乗算し求めることができる。ここで、各標的分子の１細胞あたりの分子数は、絶対値であっても、他の標的分子の１細胞あたりの分子数との相対値であってもよい。例えば、図６に示すＣＤ４陽性Ｔ細胞を例にすると、各標的分子の分子数の絶対値は、ＣＤ４：１００，０００、ＣＤ２８：２０，０００、ＣＣＲ５上段：４，０００及びＣＣＲ５上段：２４，０００である。これをＣＤ２８の分子数の絶対値を１として、他の標的分子の分子数を相対値で表すと、ＣＤ４：５、ＣＤ２８：１、ＣＣＲ５上段：０．２及びＣＣＲ５上段：１．２となる。以下、標的分子の１細胞あたりの分子数が絶対値である場合を例にして各ステップを説明する。
処理部１０Ａは、図９に示すステップＳ１４１において、図６に示す第１の標的分子の分子数に図７に示す各蛍光色素の染色指数を乗算する。また、処理部１０Ａは、ステップS１４２において、図６に示す第２の標的分子の分子数に図７に示す各蛍光色素の染色指数を乗算する。ここで、説明の便宜上ステップＳ１４１を先に記載しているが、ステップＳ１４１とＳ１４２は、どちらを先に行ってもよい。
測定すべき標的分子が２つである場合には、ステップＳ１４３で「ＹＥＳ」に進み、ステップＳ１４４において、処理部１０Ａは、第１の標的分子について求められた乗算値と、第２の標的分子について求められた乗算値を比較する。
続いて、ステップＳ１４５において、処理部１０Ａは、異なる蛍光色素であって、第１の標的分子について求められた乗算値と第２の標的分子について求められた乗算値の差が少ない蛍光色素を第１の標的分子及び第２の標的分子に結合されるべき蛍光色素として決定する。前記差は、各乗算値の分散であることが好ましい。
標的分子として第３番目以降の分子が検査オーダーに含まれる場合には、ステップＳ１４３で「ＮＯ」に進み、ステップＳ１４６で、第３以降の標的分子それぞれについて、ステップＳ１４１及びステップＳ１４２にと同様に各標的分子の分子数と各蛍光色素の染色指数との乗算値を算出する。
続いて、処理部１０Ａは、ステップＳ１４３に進み、測定すべき標的分子について全て乗算値を算出したら「ＹＥＳ」に進み、ステップＳ１４４において、処理部１０Ａは、算出された全ての乗算値を各標的分子について相互に比較し、ステップＳ１４５に進む。標的分子が３以上の場合には、例えば、各乗算値の最大値と最小値の差、若しくは各乗算値の分散がより小さい組み合わせを候補として決定することができる。
続いて、処理部１０Ａは、ステップＳ１５において、ステップＳ１４又はステップ１４５において決定した組み合わせの候補を出力する。候補の例を図１０に示す。出力される候補は１つであっても複数であってもよい。候補は、決定結果として記憶部に出力され、メモリ１２に揮発的に（一時的に）記憶されるか、補助記憶部１３に不揮発的に記憶されてもよい。候補は、決定結果として出力部１７に出力されてもよい。さらに候補は、また、決定結果として通信部１５１に出力されてネットワーク９９を介して他の端末に送信されてもよい。
これらの候補の決定は、検査に先立って予め決定されていてもよい。この場合、処理部１０Ａは、検査の度に複数の候補の決定を行う必要がなく、検査が簡便となる。
また、図１０に示すように、処理部１０Ａは、ステップＳ１４５において、複数の候補を決定してもよい。この場合、処理部１０Ａは、ステップＳ１５において複数の候補をそのまま決定結果として出力してもよい。あるいは、処理部１０Ａは、複数の候補の中から最も好ましい候補を決定して出力してもよい。複数の候補の中から最も好ましい候補を決定する基準は、例えば、複数の蛍光色素の明るさの分散が最も小さい候補、ランニングコストが最も安いもの、１アッセイで使用される複数の蛍光試薬の中で最も短い使用期限を有する候補、試薬の残量がある候補及び測定者が使用を希望する蛍光色素と標的分子の組み合わせを含む候補から選択される１以上とすることができる。
例えば、図１０に示すように、第１候補は複数の蛍光色素の明るさの間で分散が最も小さく、ランニングコストも第２候補と比較して安いが、試薬残量がなく、第１候補では検査オーダーを遂行することができない。このような場合には、処理部１０Ａは、第１候補ではなく第２候補を出力することができる。また、図１０に示す候補の並び又は表示は、測定者からの優先順位の入力により並べ替える、又は試薬残量等の関係で使用できない組み合わせを非表示にする等変更してもよい。
図１１に測定者が優先順位を入力する際に表示される画面の例を示す。測定者はプルダウンリストからランニングコスト、試薬使用期限、試薬残量、ユーザが使用したい蛍光色素等の優先させたい項目を入力部１６から選択し、処理部１０Ａはこの入力を受け付けることにより、複数の候補の中から最適な候補を出力することができる。
このように、複数の候補を出力する処理は、測定時に測定者が検査室にある蛍光試薬の状況を見ながら、最も検査に効率のよい組み合わせを使用できるため好ましい。
図７に示したように、蛍光試薬のメーカーにより、蛍光試薬に含まれる蛍光色素の強度が異なる。したがって、図９に示したステップＳ１４１、Ｓ１４２、及びＳ１４３において、蛍光試薬メーカーごとに蛍光強度と標的分子の分子数の乗算値を算出し、１回にアッセイされる複数の蛍光試薬の組み合わせが明るさ、蛍光試薬の使用期限、試薬残量、又はランニングコストを考慮して好ましい蛍光試薬の組み合わせの候補を出力してもよい。
［支援プログラム］
本開示は、図５に示すステップS１１からステップＳ１５、又は図５及び図９に示すステップS１１からステップＳ１４、ステップＳ１４１からステップＳ１４５及びステップＳ１５の処理をコンピュータに事項させる支援プログラムを含む。
さらに、本開示のある実施形態は、前記支援プログラムを記憶した、記憶媒体等のプログラム製品に関する。すなわち、前記コンピュータプログラムは、ハードディスク、フラッシュメモリ等の半導体メモリ素子、光ディスク等の記憶媒体に記憶される。前記記憶媒体へのプログラムの記憶形式は、前記提示装置が前記プログラムを読み取り可能である限り制限されない。前記記憶媒体への記憶は、不揮発性であることが好ましい。前記記憶媒体はプログラム製品として提供されてもよい。
［細胞分析装置の構成］
細胞分析装置２００は、吸引部２１と、流体回路２２と、測定部２３とを備える。細胞分析装置２００は、試料容器２８に収容された測定試料２９を吸引部２１によって吸引し、吸引した測定試料２９を流体回路２２によって流体搬送し、搬送した測定試料２９を測定部２３において測定する。
本実施形態では、細胞分析装置２００の制御は試薬選択支援装置１００が兼任して行う。すなわち、測定部２３によって検出された光学的情報は、試薬選択支援装置１００へ送信され、試薬選択支援装置１００が、測定部２３から送信された光学的情報に基づいて、細胞の数や各抗原に対応する測定を行う。試薬選択支援装置１００は、細胞分析装置２００の制御のための処理手順と、測定部２３から送信された測定値の測定のための処理手順とを規定したコンピュータプログラムを、後述する補助記憶部１３に予め記憶している。試薬選択支援装置１００は、後述するＣＰＵ１１によりコンピュータプログラムを実行することにより、細胞分析装置２００の制御を行う。
吸引部２１は、例えば、測定試料等の吸引及び吐出が可能なノズルである。流体回路２２は、流体の流路であり、流体は例えばシリンジポンプにより搬送される。細胞分析システム１０００は、例えば、フローサイトメータである。フローサイトメータは、フローサイトメトリー法により試料を光学的に測定する。フローサイトメータは、抗体試薬にカクテル抗体試薬を用いることにより、試料から放出される複数種類の蛍光を同時に測定することができ、測定時間を短縮することができる。
測定部２３が備える蛍光検出用の受光素子（例えば、フォトマルチプライアチューブ）の数は、細胞分析装置２００が対応可能な蛍光色素の数に応じて決められている。例えば、細胞分析装置２００が、１回のアッセイあたり１０色の蛍光色素に対応可能であれば、細胞分析装置２００は、測定部２３に合計１０個の蛍光検出用の受光素子を備える。以下、図１２を参照して、複数の蛍光を同時に測定するケースを一例として、フローサイトメータの光学系を説明する。図１２において符号７７で表される点線は、本来ある受光素子の図を省略していることを意味する
図１２に、測定部２３の一例として、フローサイトメータの光学系の一例を示す。フローサイトメータは、測定試料中の細胞を含有する細胞含有液を受け入れるセル２７と、セル２７を通過する細胞に光を照射する光源２０１、２２４と、細胞に由来する光の光学的情報を検出して電気信号に変換された検出信号を出力する受光素子２００Ａ〜２００Ｆとを備える。実際の光源は２つだけではなく４つであるが、説明の便宜上光源２０１、２２４を例として説明する。また、図１２のフローサイトメータに関する以下の説明では、測定試料２９が血液と抗体試薬との混合物である場合を一例として説明する。
細胞は、所定の光を照射された際に１又は２以上の光を発することが好ましい。所定の光を照射された際に細胞から発せられる光を、細胞に由来する光と総称する。前記細胞に由来する光には散乱光及び発光などが含まれる。細胞に由来する光は、どのような波長の光であってもよいが、４００ｎｍ〜８５０ｎｍの範囲にピーク波長を有する光であることが好ましい。より具体的には、前記細胞に由来する光は蛍光であることが好ましい。前記細胞に由来する光は、細胞に含まれる物質自体が発する光であってもよい。あるいは、前記細胞に由来する光は、細胞を上記細胞の測定で述べた蛍光試薬に含まれていた蛍光色素が発する光を細胞に由来する光として検出してもよい。また、細胞に由来する光は、抗原ごとにピーク波長が異なることが好ましい。第１の実施態様において、細胞に由来する蛍光は、蛍光試薬に含まれる各抗体に標識されている蛍光色素に由来する。
細胞含有液とは、試料からフローサイトメータ内に吸引された測定試料を含む液であり、必要に応じて希釈液を含む。光学的情報とは、細胞から発せられる１又は２以上の光波長スペクトルに含まれる情報である。光波長スペクトルにはその光波長スペクトルに含まれる個々の光波長、光波長領域、及びそのそれぞれの光波長、又は光波長領域の強さが含まれる。個々の光波長、及び波長領域は、後述する１又は２以上の受光素子のいずれが受光したかによって特定することができる。また、それぞれの光波長、又は光波長領域の強さは、受光した前記受光素子が出力する電気信号によって特定することができる。
以下、細胞に由来する光が散乱光及び蛍光である場合を例として具体的に説明する。光源２０１から出射された光は、コリメートレンズ２０２、ダイクロイックミラー２０３、集光レンズ２０４を経てセル２７に照射される。セル２７を通過する細胞に由来する光の前方散乱光は、集光レンズ２０５により集光され、ビームストッパー２０６、ピンホール板２０７、バンドパスフィルタ２０８を経て受光素子２００Ａに入射する。
一方、セル２７を通過する細胞に由来する光の側方散乱光及び側方蛍光は、集光レンズ２０９により集光される。側方散乱光は、ダイクロイックミラー２１０、２１１、２１２、ピンホール板２０３、バンドパスフィルタ２１４を経て受光素子２００Ｂに入射する。波長が５２０ｎｍ以上、５４２ｎｍ以下の側方蛍光は、ダイクロイックミラー２１０、２１１を透過してダイクロイックミラー２１２で反射され、ピンホール板２１５、バンドパスフィルタ２１６を経て受光素子２００Ｃに入射する。また、波長が５７０ｎｍ以上、６２０ｎｍ以下の側方蛍光は、ダイクロイックミラー２１０を透過してダイクロイックミラー２１１で反射され、ピンホール板２１７、バンドパスフィルタ２１８を経て受光素子２００Ｄに入射する。さらに波長が６７０ｎｍ以上、８００ｎｍ以下の側方蛍光は、ダイクロイックミラー２１０で反射され、ダイクロイックミラー２１９を透過してピンホール板２２０、バンドパスフィルタ２２１を経て受光素子２００Ｅに入射する。
光源２２４から出射された光は、コリメートレンズ２２５、ダイクロイックミラー２０３、集光レンズ２０４を経てセル２７に照射される。セル２７を通過する細胞に由来する光の側方蛍光は、集光レンズ２０９により集光される。６６２．５ｎｍ以上、６８７．５ｎｍ以下の側方蛍光はダイクロイックミラー２１０で反射され、ダイクロイックミラー２１９で反射された後、ピンホール板２２２、バンドパスフィルタ２２３を経て受光素子２００Ｆに入射する。
図１２に示す一例では、光源２０１には４８８ｎｍの波長のレーザダイオードを用い、光源２２４には６４２ｎｍの波長のレーザダイオードを用いている。セル２７にはシースフローセルを用いている。前方散乱光を受光する受光素子２００Ａにはフォトダイオードを用い、側方散乱光を受光する受光素子２００Ｂにはアバランシェフォトダイオード（avalanche photodiode、ＡＰＤ）を用いている。側方蛍光を受光する受光素子２００Ｃ〜２００Ｆにはフォトマルチプライアチューブ（Photo Multiplier Tube、ＰＭＴ）を用いている。
このように、図１２に示すフローサイトメータでは、説明の便宜上、側方蛍光を受光する受光素子２００Ｃ〜２００Ｆの数は４個である。しかし実際には１０個である。したがって、この例に示すフローサイトメータは、蛍光検出用の４個の受光素子を備え、１回のアッセイあたり、４色の蛍光を同時に測定することができる。しかし実際には、フローサイトメータは、蛍光検出用の１０個の受光素子を備え、１回のアッセイあたり、１０色の蛍光を同時に測定することができる。
各受光素子２００Ａ〜２００Ｆから出力されるそれぞれの検出信号は、増幅回路（図示せず）において増幅され、Ａ／Ｄ変換器（図示せず）においてＡ／Ｄ変換されてデジタルデータ化される。デジタルデータ化された検出信号は、本実施形態では試薬選択支援装置１００に送信され、細胞の測定が行われる。増幅回路は、例えばオペアンプ等から構成される既知の増幅回路である。
光源は、１つであっても２つ以上であってもよい。しかし実際のフローサイトメータは４つの抗原を搭載する。光源は、細胞に由来する光の波長領域に応じて選択される。光源が２以上である場合には、これらの光源は異なるピーク波長を有する光を発することが好ましい。
フォトダイオード、ダイクロイックミラー、及びバンドパスフィルタの数は、細胞に由来する光のピーク波長の数に応じて変更することができる。また、フォトダイオード、ダイクロイックミラー、及びバンドパスフィルタの種類も、細胞に由来する光のピーク波長、又は波長領域、及びその強さに応じて選択することができる。
試薬選択支援装置１００は、測定部２３が散乱光や蛍光を検出する際の検出感度に関する情報、検出された蛍光試薬の組み合わせに応じた蛍光補正に関する情報、及び検出される細胞の分布領域を選択するためのゲーティングに関する情報を測定部２３に送り、これらの情報に基づいて測定部２３が抗原に応じて適切な光学的情報を取得できるように制御する。
［細胞分析装置の動作の概要］
第１の実施形態では、細胞分析装置２００が使用することが可能な蛍光試薬の情報（「細胞の測定」の項で既述）は、試薬選択支援装置１００に記憶されている。まず、例えば医師が、患者がある疾患（例えば、白血病）に罹患しているか否かを判断するために必要な検査オーダーを、処理部１０Ａが取得する。試薬選択支援装置１００は、受信した検査オーダーに対応する複数の測定項目に応じて、複数の蛍光試薬の組み合わせを出力する。
その後、測定者は、前記組み合わせにしたがって、測定試料２９を調製し、細胞分析装置２００にセットする。細胞分析装置２００により、各標的分子の測定が行われる。
［依頼者端末］
さらに、細胞分析システム１０００は、依頼者端末３００と、ネットワーク９９を通じて互いに接続されていてもよい。依頼者端末３００を介して例えば医師から指示される検査オーダーは、ネットワークを通じて細胞分析システム１０００に送信される。依頼者端末３００は、例えばＣＰＵ及びメモリを有する汎用コンピュータで構成されている。検査対象の検体は、別途、測定者に渡される。依頼者端末３００は、入力された検査オーダーを試薬選択支援装置１００に送信する。また、細胞分析システム１０００は、測定結果を依頼者端末３００に送信してもよい。
依頼者端末３００は、検査オーダーの入力を受け付ける入力部３０１と、検査オーダーを試薬選択支援装置１００に送信するデータ送受信部３０２とを備える。依頼者端末３００は、汎用コンピュータであるため、ハードウェアの構成は、図３に示す試薬選択支援装置１００と同様であるので、省略する。
＜第２の実施形態＞
第２の実施形態では、標的分子の情報及び蛍光色素の情報を試薬選択支援装置１００Ｂが外部のサーバ４００から取得する。外部のサーバ４００は、例えばＣＰＵ、メモリ及び補助記憶部を有する汎用コンピュータで構成されている。
図１３に第２の実施形態に係る細胞分析システム４０００の例を示す。細胞分析システム４０００は、試薬選択支援装置１００Ｂと、細胞分析装置２００と、サーバ４００とを備える。試薬選択支援装置１００Ｂと、細胞分析装置２００とは、細胞分析システム１０００Ｂを構成する。サーバ４００と細胞分析システム１０００Ｂは、ネットワーク９９を通じて互いに接続されている。細胞分析システム４０００は細胞分析システム１０００Ｂとネットワーク９９で接続された依頼者端末３００を備えていてもよい。細胞分析装置２００は第１の実施形態と共通である。試薬選択支援装置１００Ｂのハードウェアの構成は、試薬選択支援装置１００と同様である。
図１４に第２の実施形態に係る試薬選択支援装置１００Ｂの機能ブロックを示す。処理部１０Ｂは、第１の実施形態に係る処理部１０Ａと同様に、測定項目取得部１０１と、候補蛍光色素決定部１０２と、出力制御部１０３と、蛍光試薬指定受付部１０４を備える。さらに処理部１０Ｂは、蛍光色素情報及び標的分子情報取得部１０５を備える。測定項目取得部１０１、出力制御部１０３、蛍光試薬指定受付部１０４及び蛍光色素情報及び標的分子情報取得部１０５はＩ／Ｆ部１５に、候補蛍光色素決定部１０２はＣＰＵ１１にそれぞれ対応する。これらの機能ブロックは、本発明に係るプログラムを処理部１０Ｂの補助記憶部１３又はメモリ１２にインストールし、このプログラムをＣＰＵ１１が実行することにより実現される。
試薬選択支援装置１００Ｂの動作は、蛍光色素の情報及び標的分子の情報をサーバ４００から取得する点を除き、試薬選択支援装置１００と同様であるので、試薬選択支援装置１００の動作の説明をここに援用する。
サーバ４００は、蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１を試薬選択支援装置１００Ｂに送信するデータ送受信部４０２、ＣＰＵ（図示せず）を備えた処理部（図示せず）を備える。蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１はサーバ４００の補助記憶部に記憶されている。
図１４に示す機能ブロックを用いて説明すると、第２の実施形態では、蛍光色素情報及び標的分子情報取得部１０５が、外部のサーバ４００から蛍光色素情報及び標的分子情報を取得し、処理部１０Ｂの補助記憶部１３又はメモリ１２に記憶する。外部のサーバ４００に記憶する蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１を最新の状態に更新することにより、試薬選択支援装置１００Bも、常に最新の蛍光色素情報及び標的分子情報ＤＢ４０１に基づいて、複数の蛍光試薬の組み合わせを決定することができる。複数の蛍光試薬の組み合わせの候補を決定する方法は第１の実施形態と同じである。機能ブロックである蛍光色素情報及び標的分子情報取得部１０５が行う処理は、実際には図４に示す処理部１０Ｂが行う。
以上、細胞分析システム４０００によると、第１の実施形態に係る細胞分析システムによる効果に加えてさらに、細胞分析装置２００の測定に使用される蛍光色素情報及び標的分子情報を、常に最新の状態に保つことができる。
［サーバによる蛍光色素情報及び標的分子情報の更新］
図１５を用いて、サーバ４００における蛍光色素情報及び標的分子情報の更新と試薬選択支援装置１００Ｂとの第１の更新フローについて説明する。第１の更新フローは、試薬選択支援装置１０Ｂから更新情報の有無をサーバ４００に問い合わせる。
図１５において、支援装置１００Ｂの起動及び初期動作処理（ステップＳ２１）が終了すると、処理部１０Ｂは通信部１５１を解してサーバ４００に蛍光色素の種類及び蛍光強度等を含む蛍光色素の情報、及び標的分子の種類及び標的分子の１細胞あたりの分子数等の標的分子の情報が更新されているか問い合わせる（ステップＳ２２）。サーバ４００のＣＰＵは、試薬選択支援装置１００Ｂからの問い合わせに応じ、前記情報に更新があるか否かを判定する（ステップＳ４１）。サーバ４００のＣＰＵは、更新がある（ＹＥＳ）場合にはステップＳ４２に進み更新データを試薬選択支援装置１００Ｂに送信する。更新がない（ＮＯ）場合にはステップＳ４３に進み更新データがない旨を試薬選択支援装置１００Ｂに送信する。処理部１０Ｂは更新データあるか否かを判定する（ステップＳ２３）。処理部１０Ｂは更新データがある（ＹＥＳ）場合には、ステップＳ２４に進み更新データを記憶部に記憶する。処理部１０Ｂは更新データがない（ＮＯ）場合には、更新処理を終了する。
図１６を用いて、サーバ４００における蛍光色素情報及び標的分子情報の更新と試薬選択支援装置１００Ｂとの第２の更新フローについて説明する。第２の更新フローでは、サーバ４００は、情報に更新があった場合に、サーバ４００から試薬選択支援装置１００Ｂにアクセスして更新データを送信する。
図１６において、サーバ４００のＣＰＵは、蛍光色素の種類及び蛍光強度等を含む蛍光色素の情報、及び標的分子の種類及び標的分子の１細胞あたりの分子数等の標的分子の情報が更新されているかを判定する（ステップＳ４１）。サーバ４００のＣＰＵは、更新がある（ＹＥＳ）場合にはステップＳ４２に進み更新データを試薬選択支援装置１００Ｂに送信する。更新がない（ＮＯ）場合には処理を終了する。試薬選択支援装置１００Ｂは起動及び初期動作処理（ステップＳ３１）の終了後、サーバ４００から更新データを受信しているかを判定する（ステップＳ３２）。更新データがある（ＹＥＳ）場合には、ステップＳ３３に進み更新データを記憶部に記憶する。更新データがない（ＮＯ）場合には、更新処理を終了する。
ここで、サーバ４００から送信される更新データは、蛍光色素の種類及び蛍光強度等を含む蛍光色素の情報、及び標的分子の種類及び標的分子の１細胞あたりの分子数等の標的分子の情報であってもよいが、蛍光強度と標的分子の１細胞あたりの分子数との乗算値であってもよい。
試薬選択支援装置１００Ｂは、複数の蛍光試薬の組み合わせの候補として決定した結果を、例えば細胞分析装置２００の機器に関する情報と共にサーバ４００に送信し、サーバ４００は、送信された結果や機器の情報を記憶してもよい。蛍光強度は、測定機器によっても変動するため、サーバ４００は、様々な測定機器における蛍光強度の情報を取得し、データベース化することができる。
＜その他の実施形態＞
以上、本発明を特定の実施の形態によって説明したが、本発明は上記した実施の形態に限定されるものではない。
上記第１及び第２の実施の形態では、処理部１０Ａ，１０Ｂは一体の装置として実現されているが、処理部１０Ａ，１０Ｂは一体の装置である必要はなく、ＣＰＵ１１、メモリ１２、補助記憶部１３等が別所に配置され、これらがネットワークで接続されていてもよい。処理部１０Ａ，１０Ｂと、入力部１６と、出力部１７とについても、一ヶ所に配置される必要は必ずしもなく、それぞれ別所に配置されて互いにネットワークで通信可能に接続されていてもよい。
上記第１及び第２の実施の形態では、測定項目取得部１０１、候補蛍光色素決定部１０２、出力制御部１０３、蛍光試薬指定受付部１０４及び蛍光色素情報及び標的分子情報取得部１０５の各機能ブロックは、単一のＣＰＵ１１で実行されているが、これら各機能ブロックは単一のＣＰＵ１１で実行される必要は必ずしもなく、複数のＣＰＵで分散して処理されてもよい。
上記第１及び第２の実施の形態では、図５及び図９で説明する各ステップの処理を行うためのプログラムを補助記憶部１３に予め記憶しているが、プログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ等の、コンピュータ読み取り可能であって一時的でない有形の記憶媒体（図示せず）から処理部１０Ａ，１０Ｂにインストールしてもよいし、処理部１０Ａ，１０Ｂをネットワーク９９と接続し、ネットワーク９９を介して例えば外部のサーバ４００からプログラムをダウンロードしてインストールしてもよい。
上記第１及び第２の実施の形態では、入力部１６と出力部１７とは一体化されてタッチパネル式の表示装置として実現されているが、入力部１６をキーボード又はマウス等で構成し、出力部１７を液晶ディスプレイ等で構成してもよい。又は、出力部１７をプリンター等で構成し、試薬選択支援装置１００によって決定された蛍光試薬の組み合わせの候補を印刷してもよい。
１０Ａ，１０Ｂ 処理部
１２ メモリ
１３ 補助記憶部
１４ バス
１５ インタフェース部
１５１ 通信部
１６ 入力部
１７ 出力部
２１ 吸引部
２２ 流体回路
２３ 測定部
２７ シースフローセル
２８ 試料容器
２９ 試料
９９ ネットワーク
１００，１００Ｂ 試薬選択支援装置
１０１ 測定項目取得部
１０２ 蛍光色素組み合わせ候補決定部
１０３ 出力制御部
１０４ 蛍光試薬指定受付部
１０５ 蛍光色素情報及び標的分子情報取得部
２００ 測定装置本体
３００ 依頼者端末
３０１ 入力部
３０２ データ送受信部
４００ サーバ
４０１ 蛍光色素情報及び標的分子情報データベース
４０２ データ送受信部
１０００，１０００Ｂ 細胞分析システム

Claims (21)

  1. 細胞測定に用いる試薬の選択を支援する試薬選択支援装置であって、
    複数の測定項目を含むオーダー情報を取得する取得部と、
    前記複数の測定項目に対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定する処理部と、
    決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する出力部と、
    を備える試薬選択支援装置。
  2. 前記測定項目は、前記細胞の核酸または前記細胞に存在する抗原である、請求項１に記載の試薬選択支援装置。
  3. 前記蛍光色素の特性が染色指数であり、前記標的細胞の特性が細胞に存在する分子の量であり、
    前記処理部は、
    前記第１蛍光色素の染色指数と、測定対象細胞に存在する第１の測定項目に対応する第１標的分子の量を反映する値と、に基づいて、前記第１蛍光色素による明るさに関する情報を算出し、
    前記第２蛍光色素の染色指数と、測定対象細胞に存在する第２の測定項目に対応する第２標的分子の量を反映する値と、に基づいて、第２蛍光色素による明るさに関する情報を算出し、
    前記第１蛍光色素による明るさに関する情報と前記第２蛍光色素による明るさに関する情報とに基づいて前記組み合わせを決定する、
    請求項１又は２に記載の試薬選択支援装置。
  4. 前記第１蛍光色素の染色指数と、前記第２蛍光色素の染色指数と、を記憶した記憶部を備える、請求項３に記載の試薬選択支援装置。
  5. 前記測定対象細胞に存在する第１測定項目に対応する第１標的分子の量を反映する値と、前記測定対象細胞に存在する第２測定項目に対応する第２標的分子の量を反映する値と、を記憶した記憶部を備える、請求項３または４に記載の試薬選択支援装置。
  6. 前記第１標的分子の量を反映する値及び前記第２標的分子の量を反映する値が、測定対象細胞に存在する各標的分子の絶対分子数、または各標的分子の相対分子数である、請求項３から５のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  7. 前記処理部は、第１の蛍光試薬と第２の蛍光試薬の組み合わせを、第１蛍光色素の明るさに関する情報および第２蛍光色素の明るさに関する情報の分散に基づいて決定する、請求項３から６のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  8. 前記試薬は、蛍光色素により標識された抗体を含む、請求項１から７いずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  9. 前記試薬は、一種類の抗原を検出するための抗体を含む、１から８いずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  10. 前記試薬は、複数種類の抗体を含む、１から９いずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  11. 前記処理部は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、
    前記出力部は、前記組み合わせを、蛍光試薬に含まれる試薬残量に基づく優先度で出力する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  12. 前記処理部は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、
    前記出力部は、前記組み合わせを蛍光試薬の使用期限に基づく優先度で出力する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  13. 前記処理部は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、
    前記出力部は、前記組み合わせを蛍光試薬のコストに基づく優先度で出力する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  14. 前記処理部は、前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを複数決定し、
    前記出力部は、前記組み合わせをユーザの指定した設定に基づく優先度で出力する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  15. 蛍光色素蛍光色素の特性の情報を受信する通信部を備える、請求項１から１４のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  16. 測定対象細胞に存在する標的分子の特性の情報を受信する通信部を備える、請求項１から１５のいずれか一項に記載の試薬選択支援装置。
  17. 請求項１から１６のいずれか一項に記載の試薬選択支装置と、
    フローサイトメトリー法により細胞を測定する測定部を有する細胞分析装置と、
    を備える、細胞分析システム。
  18. 前記測定部は、同じ細胞から得られる前記第１蛍光色素から生じる蛍光および前記第２蛍光色素から生じる蛍光を測定する、請求項１７に記載の細胞分析システム。
  19. 複数の測定項目を含むオーダー情報を取得し、
    前記複数の測定項目に対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定し、
    決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する、
    細胞測定に用いる試薬の選択の支援方法。
  20. コンピュータに、
    複数の測定項目を含むオーダー情報を取得する処理、
    前記複数の測定項目に対応する第１標的分子を測定するために用いられる第１蛍光試薬、および前記第１の測定項目とは異なる第２の測定項目に対応する第２標的分子を測定するために用いられる第２蛍光試薬の組み合わせを、前記第１標的分子の特性および前記第１蛍光色素に含まれる第１蛍光色素の特性を反映した情報と、前記第２標的子の特性および前記第２蛍光色素に含まれる第２蛍光色素の特性を反映した情報と、に基づいて決定する処理、および
    決定した前記第１蛍光試薬および前記第２蛍光試薬の組み合わせを出力する処理、
    を実行させる、コンピュータプログラム。
  21. 請求項２０に記載のコンピュータプログラムを記憶した記憶媒体。
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