JP2019190935A - 酸化型・還元型アルブミンを指標とした糖尿病合併症の進行の予測方法 - Google Patents
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Abstract
Description
糖尿病合併症の進行を予測する方法であって、
(a1)糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を測定する工程;
(b1)工程(a1)とは異なる日に、糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を再測定する工程;
(c1)工程(a1)の測定値よりも工程(b1)の測定値が高い場合に、当該哺乳動物の糖尿病合併症が進行しているという基準を用いて、工程(a1)の測定値と工程(b1)の測定値とを比較する工程;
を含み、酸化型アルブミン%が下記式:
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
を用いて算出される、方法。
[2]
糖尿病哺乳動物がヒトであり、糖尿病合併症が、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害及び糖尿病に合併する心疾患からなる群から選択される、[1]に記載の方法。
[3]
試料が、血清、血漿、尿、リンパ液、髄液、唾液及び歯肉液からなる群から選択される、[1]又は[2]に記載の方法。
[4]
工程(a1)の1ヶ月以上後に工程(b1)が実施される、[1]から[3]のいずれかに記載の方法。
[5]
工程(a1)及び工程(b1)における測定が、分子ふるい(ゲルろ過)カラム、イオン交換カラム及びアフィニティカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)法、質量分析法、液体クロマトグラフィー−質量分析(LC−MS)法、免疫法、酵素法並びに比色法からなる群から選択される方法により実施される、[1]から[4]のいずれかに記載の方法。
[6]
工程(a1)及び工程(b1)において測定される試料が、20mM以上の酸及び塩を含み、pH6.0以上pH7.5以下である、[1]から[5]のいずれかに記載の方法。
[7]
糖尿病合併症が、糖尿病性腎症であり、さらに、糖尿病哺乳動物の尿タンパク値、尿アルブミン値、尿クレアチニン値及び推定糸球体濾過量(eGFR)のいずれか一以上を測定する工程を含む、[1]から[6]のいずれかに記載の方法。
[8]
糖尿病合併症が、糖尿病性網膜症であり、糖尿病哺乳動物について得られた眼底所見の結果を確認する工程をさらに含む、[1]から[6]のいずれかに記載の方法。
[9]
糖尿病哺乳動物における糖尿病合併症が進行するか否かを判断するためのデータ取得方法であって、
(a1)糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を測定する工程;
(b1)工程(a1)とは異なる日に、糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を再測定する工程;
(c1’)工程(a1)の測定値と工程(b1)の測定値とを比較する工程;
を含み、酸化型アルブミン%が下記式:
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
を用いて算出される、方法。
[10]
糖尿病合併症抑制物質のスクリーニング方法であって、
(a2)哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を測定する工程;
(b2)哺乳動物に候補物質を投与後、哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を再測定する工程;
(c2)工程(a2)の測定値と工程(b2)の測定値とを比較する工程;
(d2)工程(a2)の測定値よりも工程(b2)の測定値が低い場合に、工程(b2)で投与された候補物質を、糖尿病合併症抑制物質として選択する工程;
を含み、酸化型アルブミン%が下記式:
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
を用いて算出される、方法。
[11]
[1]から[10]のいずれかに記載の方法を実施するためのキットであって:
酸及び塩を含む、酸化型アルブミン及び還元型アルブミンを含む試料の安定化剤と、
分子ふるい(ゲルろ過)カラム、イオン交換カラム及びアフィニティカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)法、質量分析法、液体クロマトグラフィー−質量分析(LC−MS)法、免疫法、酵素法並びに比色法からなる群から選択される方法に用いる、酸化型アルブミン及び還元型アルブミンを含む試料の測定手段と、
を含むキット。
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
酸化型アルブミン%は、また、下記式を用いて算出した還元型アルブミン%を、100%から差し引いて算出することもできる。
還元型アルブミン%=[還元型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
さらに、後述のとおり、本実施形態において、酸化型アルブミン%の代わりに還元型アルブミン%を用いることもできる。
工程(b1)における酸化型アルブミンの測定は、工程(a1)と同様の手法を用いて行うことができ、工程(a1)と同一の糖尿病哺乳動物由来の試料について、工程(a1)における測定と同一の手法及び測定条件を用いて実施することが好ましい。
そのようなキットは、酸化型アルブミン及び還元型アルブミンを含む試料の安定化剤と、酸化型アルブミン及び還元型アルブミンを含む試料の測定手段とを含む。測定手段は、上記の方法について詳述したとおりである。
(1)安定化剤の調製
クエン酸、クエン酸ナトリウム及びグルコースを用いて、血液と混合後のクエン酸緩衝液濃度が70mM以上、グルコース濃度が50mM以下、及び血液と混合後のpHが6.0〜7.5の範囲になるように安定化剤を調整した。
糖尿病患者、164人から、(1)において調整された安定化剤が1.5ml入った採血管に血液を約2ml採取した。なお、この状態で還元型・酸化型アルブミンは室温で25時間安定であることを確認した。通常に採血した採血管と同様、遠心分離し、得られた血漿を−80℃で測定時まで保存した。
得られた血清サンプル又は血漿サンプルを用いて、HPLC(島津製作所製)で測定を行った。HPLCには、イオン交換基としてDEAE基(ジエチルアミノエチル基)を有するイオン交換樹脂が充填された陰イオン交換カラム(7.5mmΦ×50mmL)を使用した。以下のA液でカラムを平衡化後、サンプル3μLをロードし、以下の2種類の溶離液を用いたリニアグラジエント法によって測定した。
A液(アルブミン吸着液):60mM硫酸ナトリウムを含む25mMリン酸緩衝液
(pH6.0)
B液(アルブミン溶離液):1M MgCl2溶液
HNA%=[ヒト酸化型アルブミン/(ヒト還元型アルブミン+ヒト酸化型アルブミン)]x100
上記(2)と同様の手法で健常人について調製したサンプルを測定時まで−80℃で冷凍保存し、上記(3)の方法で同日内に10回分析を実施し、下記式を用いてHMA%を60算出して測定精度を確認したところ、平均値:79.9%、標準偏差(SD):0.24、変動係数(CV):0.30%であり、非常に高い測定精度であった。
ヒト還元型アルブミン%(HMA%)
=[ヒト還元型アルブミン/(ヒト還元型アルブミン+ヒト酸化型アルブミン)]x100
EDTA−NaF採血管を用い164名の糖尿病患者よりそれぞれ約2ml採血し、サンプル5μLをロードし、東ソー自動グリコヘモグロビン分析計G9(HPLC法)を用いて常法により測定した。
サンプルは164名の糖尿病患者の血清4μLを日立LABOSPECT008装置にロードし、ルシカGA−L試薬(酵素法、旭化成ファーマ)を用いて常法により測定した。
(1)糖尿病性神経障害と酸化型アルブミンの相関
実施例1で測定した164サンプルのHNA%値を、神経障害の有無に基づいて分類し、t検定により2群の鎖を検定した結果を図2Aに示す。図2A中、ダイヤモンドの上端と下端は95%信頼区間を示し、中央の長い線が群平均、その上下の2本の直線はオーバーラップマークと呼ばれる。2群間でオーバーラップマークが重ならない場合に有意差があると判定される。また、*:p<0.05である(以下、図2〜5中の他のダイヤモンド及び「*」についても同様)。
図2Aから明らかなとおり、糖尿病性神経障害の有無と、HNA%とは相関し、これまで客観的マーカーのなかった糖尿病性神経障害の発症に関して、HNA%の増加(すなわち、HMA%の低下)が指標となることが示された。
一方、比較例1及び2で測定したHbA1c値及びGA値についても同様に分類して分析したところ、糖尿病性神経障害の有無とこれらの値の違いに有意差は見られなかった(図2B、図2C)。
糖尿病性腎症の病期は、尿タンパク値又はアルブミン値に基づいて以下の5つに分類されるため(2013年12月改訂。日本糖尿病学会、糖尿病性腎症合同委員会)、これらの値に基づいて、糖尿病患者を糖尿病性腎症の病期を分類した。
糖尿病性網膜症の病期は、広く普及しているDavis分類では、眼底所見に基づき以下の3つに分けられる。
0:網膜症なし
1:単純網膜症(SDR)
2:増殖前網膜症以上(PPDR/PDR)
実施例1で測定した164サンプルのHNA%値を、各患者の採血時の心疾患の既往(糖尿病発症前の既往も含む)に基づいて分類し、t検定により2群の差を検定した結果を図5Aに示す。図5Aから明らかなとおり、糖尿病患者の心疾患の既往とHNA%値が相関し、糖尿病患者の心疾患の発症に関して、HNA%の増加(すなわち、HMA%の低下)が指標となることが示された。
Claims (11)
- 糖尿病合併症の進行を予測する方法であって、
(a1)糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を測定する工程;
(b1)工程(a1)とは異なる日に、糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を再測定する工程;
(c1)工程(a1)の測定値よりも工程(b1)の測定値が高い場合に、当該哺乳動物の糖尿病合併症が進行しているという基準を用いて、工程(a1)の測定値と工程(b1)の測定値とを比較する工程;
を含み、酸化型アルブミン%が下記式:
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
を用いて算出される、方法。 - 糖尿病哺乳動物がヒトであり、糖尿病合併症が、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害及び糖尿病に合併する心疾患からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 試料が、血清、血漿、尿、リンパ液、髄液、唾液及び歯肉液からなる群から選択される、請求項1又は2に記載の方法。
- 工程(a1)の1ヶ月以上後に工程(b1)が実施される、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(a1)及び工程(b1)における測定が、分子ふるい(ゲルろ過)カラム、イオン交換カラム及びアフィニティカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)法、質量分析法、液体クロマトグラフィー−質量分析(LC−MS)法、免疫法、酵素法並びに比色法からなる群から選択される方法により実施される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(a1)及び工程(b1)において測定される試料が、20mM以上の酸及び塩を含み、pH6.0以上pH7.5以下である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 糖尿病合併症が、糖尿病性腎症であり、さらに、糖尿病哺乳動物の尿タンパク値、尿アルブミン値、尿クレアチニン値及び推定糸球体濾過量(eGFR)のいずれか一以上を測定する工程を含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 糖尿病合併症が、糖尿病性網膜症であり、糖尿病哺乳動物について得られた眼底所見の結果を確認する工程をさらに含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 糖尿病哺乳動物における糖尿病合併症が進行するか否かを判断するためのデータ取得方法であって、
(a1)糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を測定する工程;
(b1)工程(a1)とは異なる日に、糖尿病哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を再測定する工程;
(c1’)工程(a1)の測定値と工程(b1)の測定値とを比較する工程;
を含み、酸化型アルブミン%が下記式:
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
を用いて算出される、方法。 - 糖尿病合併症抑制物質のスクリーニング方法であって、
(a2)哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を測定する工程;
(b2)哺乳動物に候補物質を投与後、哺乳動物由来の試料中の酸化型アルブミン%を再測定する工程;
(c2)工程(a2)の測定値と工程(b2)の測定値とを比較する工程;
(d2)工程(a2)の測定値よりも工程(b2)の測定値が低い場合に、工程(b2)で投与された候補物質を、糖尿病合併症抑制物質として選択する工程;
を含み、酸化型アルブミン%が下記式:
酸化型アルブミン%=[酸化型アルブミン/(還元型アルブミン+酸化型アルブミン)]x100
を用いて算出される、方法。 - 請求項1から10のいずれか一項に記載の方法を実施するためのキットであって:
酸及び塩を含む、酸化型アルブミン及び還元型アルブミンを含む試料の安定化剤と、
分子ふるい(ゲルろ過)カラム、イオン交換カラム及びアフィニティカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)法、質量分析法、液体クロマトグラフィー−質量分析(LC−MS)法、免疫法、酵素法並びに比色法からなる群から選択される方法に用いる、酸化型アルブミン及び還元型アルブミンを含む試料の測定手段と、
を含むキット。
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JP2015172603A (ja) * | 2012-06-11 | 2015-10-01 | プリベントエイジ ヘルスケア, エルエルシー | 糖尿病管理を改善するための方法 |
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Patent Citations (4)
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OETTL, K. ET AL.: "The redox state of human serum albumin in eye diseases with and without complications", ACTA OPHTHALMOLOGICA, vol. 89, JPN6019024188, 2011, pages 174 - 179, ISSN: 0004639475 * |
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