JP2019154307A - インジェクションピペット - Google Patents
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Abstract
Description
図1は、本発明によるインジェクションピペットの外観、構成を示す図であり、(a)は、インジェクションピペットの全体を示す図、(b)は面取り前のインジェクションピペットの先端部の拡大を示す断面図、(c)は面取り済みのインジェクションピペットの先端部の拡大を示す断面図である。
次に、インジェクションピペット1の作成について述べる。図1に示すインジェクションピペット1の作成には、外径1mm、ガラス管肉厚約50μm、即ち、ガラス管の外径に対する内径の割合が90%のガラス管(以下、「ガラス管A」と記す。)を用いる。ガラス管をガラス管引き伸ばし機にセッティングし、目的の形状に合わせたプログラムにより、ガラス管を細く引き伸ばす。
次に、インジェクションピペットが接続された圧電微小駆動装置の構成について説明する。
次に、哺乳類おける卵細胞質内注入法での顕微授精の準備及び操作について述べる。尚、以下に述べる卵細胞質内注入法では、哺乳類としてブタを用いたものである。卵細胞質内注入法は、圧電素子48(ピエゾ)を使用した圧電微小駆動装置30を用いており、圧電微小駆動装置30は、顕微鏡に設けられたXYZθマニピュレータ55に取り付けられている。
次に、圧電微小駆動装置を用いたブタ精子の不動化について述べる。顕微授精における精子の不動化操作は、精子の尾部に物理的な圧迫や衝撃を与えて、精子の動きを止めることによりその後の操作を簡便にさせると同時に尾部の細胞膜へ傷をつけて、卵子活性化因子を精子から放出させるものである。
ブタ顕微授精に用いるインジェクションピペットの違いが顕微授精操作および胚発生に及ぼす影響について調査を行った。
次に、圧電微小駆動装置を用いた精子の卵子細胞質内への顕微注入操作について説明する。図5は、圧電微小駆動装置を用いた精子の卵子細胞質内への顕微注入を説明する図である。
次に、顕微注入した卵子の処理について述べる。最初に、卵子細胞質内への顕微注入操作後に、精子を注入した卵子60の生存数を確認する。
顕微授精胚の数に応じてPZM 50-100uLで作製したドロップ1つに30−50個ずつ分けて、38.5℃、5%CO2、5%O2、90%N2の条件に設定したインキュベータで体外培養する。顕微授精胚における分割胚を調べる場合には、2日目で顕微鏡観察により計数する。胚盤胞発生率は、体外培養後6日目で顕微鏡観察した胚盤胞の個数を計数する。
3 先端部
5 円環部
6 角部
7、8 面取り
10 外側面部
11 内側面部
15 曲げ部
18 基部
30 圧電微小駆動装置(PMM)
35 ピペットホルダ
36 ホルダグリップ
40 スライドベース
41 クランプネジ
45 ドライブユニット
47 鍔部
48 圧電素子(ピエゾ)
49 慣性体
55 XYZθマニピュレータ
60 卵子
61 透明帯
64 卵細胞質膜
65 卵細胞質
66 第一極体
67 囲卵腔
68 ホールディングピペット
70 精子
75 (コンベンショナルピペットの)尖端部
CV コンベンショナルピペット
do インジェクションピペットの外径
di インジェクションピペットの内径
t インジェクションピペットのガラス厚
dimin インジェクションピペットの最小内径
Claims (7)
- 哺乳類に対する卵細胞質内注入法に使用され、かつ、圧電素子の駆動によって当該圧電素子に連結された慣性体による衝撃力により微小駆動されるインジェクションピペットであって、
当該インジェクションピペットの先端表面に設けられ、細胞の膜に接する円環部は、前記インジェクションピペットの先端側の軸方向に対して直交する方向に形成されてなり、かつ、前記インジェクションピペットの外側面部から前記円環部への移行は面取りがなされていることを特徴とするインジェクションピペット。 - 前記インジェクションピペットは、前記円環部から内側面部への移行は面取りがなされていることを特徴とする請求項1に記載のインジェクションピペット。
- 前記インジェクションピペットはガラス管であり、先端に熱を加えて表面を溶解させることにより前記面取りがなされていることを特徴とする請求項1又は請求項2に記載のインジェクションピペット。
- 前記インジェクションピペットの内径は、卵細胞質の中に注入する精子の頭部の最大直径よりも大きいことを特徴とする請求項1乃至請求項3のうち、いずれか1に記載のインジェクションピペット。
- 前記インジェクションピペットの内径は、卵細胞質の中に注入する精子の頭部の最大直径よりも大きく、かつ、当該精子を前記インジェクションピペットの先端から出し入れするのに最低限必要な所定のクリアランスを前記精子の頭部の直径の値以外に有し、
前記インジェクションピペットの外径に対する内径の割合は90%以上100%未満であることを特徴とする請求項1乃至請求項3のうち、いずれか1に記載のインジェクションピペット。 - 前記インジェクションピペットは、前記圧電素子の駆動による前記慣性体から生じる衝撃力により微小駆動される他、前記インジェクションピペットが接続されたマニピュレータによる位置決め操作が可能であることを特徴とする請求項1乃至請求項5のうち、いずれか1に記載のインジェクションピペット。
- 前記圧電素子に置換して電歪素子の駆動によって当該電歪素子に連結された慣性体による衝撃力により微小駆動されることを特徴とする請求項1乃至請求項6のうち、いずれか1に記載のインジェクションピペット。
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