JP2019115356A - サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 - Google Patents
サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019115356A JP2019115356A JP2019063498A JP2019063498A JP2019115356A JP 2019115356 A JP2019115356 A JP 2019115356A JP 2019063498 A JP2019063498 A JP 2019063498A JP 2019063498 A JP2019063498 A JP 2019063498A JP 2019115356 A JP2019115356 A JP 2019115356A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rsv
- codon
- gene
- sequence
- virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- FAMLGSIBNOAAAJ-AQYRVQIASA-N C[C@@H](CC(CCC/C=C/CC=C)=C)/N=C/[C@H](C)NC Chemical compound C[C@@H](CC(CCC/C=C/CC=C)=C)/N=C/[C@H](C)NC FAMLGSIBNOAAAJ-AQYRVQIASA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18522—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18561—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/18562—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
本願は、2013年3月14日に出願された米国仮出願第61/781,228号、および2013年10月14日に出願された米国仮出願第61/890,500号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれたものとする。
MGX1NX2LSX3IKX4RLQNLX5X6NDEVALLKITCYX7DKLIX8LTNALAKAX9IHTIKLNGIVFX10HVITSSX11X12CPX13NX14IVVKSNFTTMPX15LX16NGGYIX17EX18X19ELTHCSQX20NGX21X22X23DNCEIKFSX24X25LX26DSX27MTX28YX29X30QX31SX32LLGX33DLX34X35
(ここで、X1−X35は任意のアミノ酸を表すか、あるいは、
X1は、SまたはCであり;X2は、SまたはTでありであり;X3は、MまたはVであり;X4は、VまたはIであり;X5は、FまたはLであり;X6は、DまたはNであり;X7は、TまたはAであり;X8は、H、L、またはQであり;X9は、VまたはTであり;X10は、VまたはIであり;X11は、DまたはEであり;X12は、I、A、またはVであり;X13は、NまたはDであり;X14は、NまたはSであり;X15は、V、I、またはAであり;X16はQまたはRであり;X17はWまたは任意のアミノ酸であり;X18はMまたはLであり;X19はMまたはIであり;X20はPまたはLであり;X21はLまたはVであり;X22は、L、M、またはIであり;X23は、DまたはVであり;X24は、KまたはRであり;X25は、KまたはRであり;X26は、Sまたは任意のアミノ酸であり;X27は、TまたはVであり;X28は、NまたはDであり;X29は、MまたはIであり;X30は、NまたはSであり;X31は、LまたはIであり;X32は、EまたはDであり;X33は、FまたはLであり;X34は、NまたはHであり;X35は、PもしくはSであるか、または欠失する)
を有するNS1をコードする、本明細書に開示される核酸に関する。
MX1TX2X3X4X5X6TX7QX8LX9ITDMRPX10SX11X12X13X14IX15SLTX16X17IITHX18FIYLINX19ECIVX20KLDEX21QATX22X23FLVNYEMX24LLHX25VGSX26X27YKKX28TEYNTKYGTFPMPIFIX29HX30GFX31ECIGX32KPTKHTPIIX33KYDLNP
(ここで、X1−X33は任意のアミノ酸を表すか、あるいは、
X1はDまたはSであり;X2はT、A、またはKであり;X3はH、S、またはNであり;X4はNまたはPであり;X5はD、G、またはEであり;X6はTまたはNであり;X7はP、M、Q、S、またはAであり;X8はRまたはGであり;X9はMまたはIであり;X10はLまたはMであり;X11はL、M、またはIであり;X12はI、D、またはEであり;X13はTまたはSであり;X14はIまたはVであり;X15はIまたはTであり;X16はRまたはKであり;R17はDまたはEであり;R18はRまたはKであり;R19はHまたはNであり;X20はRまたはKであり;X21はRまたはKであり;X22はFまたはLであり;X23はTまたはAであり;X24はKまたはNであり;X25はKまたはRであり;X26はTまたはAであり;X27はKまたはIであり;X28はTまたはSであり;X29はNまたは任意のアミノ酸であり;X30はDまたはGであり;X31はLまたはIであり;X32はIまたはVであり;X33はYまたはHである)
を有するNS2をコードする本明細書に開示される核酸に関する。
弱毒生RSVワクチン候補には2つの大きな障害がある。すなわち、小児における免疫原性が不十分なこと、そして、安定性が不十分なために野生型配列へと遺伝的復帰が起こり、ワクチン接種を受けた個体から復帰突然変異体が脱落することである。ウイルス非構造(NS)タンパク質であるNS1およびNS2は独特であり、I型インターフェロンおよびT細胞応答を阻害する。ワクチンのためにNS1/NS2を変異させると、免疫原性が増幅される。しかし、これまでに開発されたNS1およびNS1/NS2欠失/ヌル変異組換えRSV株は過弱毒化(over−attenuated)されており、NS2ヌル変異はin vivoにおいて弱毒化が不十分である。
大腸菌におけるRSVの培養は、細菌人工染色体(BAC)を利用して達成してもよい。開示されるBACは、F遺伝子がRSV line 19株のアンチゲノム配列であることを除けば、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)A2株の全長アンチゲノム配列を含む。これをヘルパープラスミドと共に、感染性ウイルスの回収のためにリバースジェネティクス系において使用することができる。プラスミド上のアンチゲノム配列をウイルス回収に先だって変異させ、所望の変異を持ったウイルスを生成することができる。
典型的には、RSV粒子は、らせん状ヌクレオキャプシド内にウイルスゲノムを有し、該らせん状ヌクレオキャプシドは、マトリックスタンパク質、および糖タンパク質を含んだエンベロープによって囲まれている。野生型RSVのゲノムはNS1、NS2、N、P、M、SH、G、F、M2−1、M2−2、およびLタンパク質をコードする。G、F、およびSHは糖タンパク質である。F遺伝子はいくつかのウイルスワクチンに組み込まれている。RSVポリメラーゼ活性は大タンパク質(large protein)(L)およびリンタンパク質(P)からなる。前記ウイルスM2−1タンパク質は転写中に利用され、転写酵素複合体の構成要素となっているようである。前記ウイルスNタンパク質は新生RNAのキャプシド形成に用いられる。
ある態様において、本開示は細菌人工染色体を含むベクターおよび核酸に関する。複合ゲノム(complex genome)のマッピングおよび分析のための細菌クローニング系がShizuyaほか,Proc.Natl.Acad.Sci.,1992,89:8794−8797に開示されている。このBAC系(細菌人工染色体用)は、大腸菌と、ヒトDNAの大型断片をクローニングするのに有用であると記載された、その単コピープラスミドF因子とを基盤としたものである。F因子はoriS、repE、parA、およびparBといった自身の複製を調節する遺伝子をコードしている。oriSおよびrepE遺伝子はF因子の一方向性複製(unidirectional replication)を媒介する一方、parAおよびparBは、典型的には大腸菌ゲノムあたり1または2個の水準でコピー数を維持する。前記遺伝子および染色体は所望の機能的属性を有する突然変異、欠失、またはバリアントを含んでいてよいことが企図される。前記BACベクター(pBAC)は、典型的には、これらの遺伝子とともに、耐性マーカー、及び対象の核酸断片を制限酵素サイトへの連結によって組み込むためのプロモーターを含むクローニングセグメント、を含む。BAC系の例として、ShizuyaおよびKouros−Hehr,Keio J Med,2001,50(1):26−30に記載のものが挙げられる(参照により本明細書に取り込まれたものとする)。
複数ラウンドの化学的突然変異生成を利用して複数の変異をウイルスに導入することにより、いくつかの弱毒化RSV株が鼻腔内投与のための候補ワクチンとして開発されてきた。齧歯類、チンパンジー、成人、および小児における評価によって、これらの候補ワクチン株の一部が免疫原性を有し、弱毒化されている可能性があることが示されている。これらの弱毒化ウイルスのいくつかをヌクレオチド配列分析することにより、それぞれの弱毒化の度合いが、典型的には2箇所またはそれ以上のヌクレオチドおよびアミノ酸置換と関連していることが示されている。
これを図7に示す。図中、このウイルスがRSV A2およびRSV A2−line19Fよりも高い水準のRSV中和血清抗体を誘導することが示されている。図7Bには、このウイルスが、低い投与量(input dose)においても、一次感染から29日後に攻撃された際にRSV異種株による攻撃に対する完全な防御を提供することが示されている。この低い投与量による完全な防御は、他の2つのRSV株であるA2−K−line19FおよびA2−K−A2GFでは認められず、ブレイクスルー再感染(breakthrough reinfection)を許した。これらの2つのウイルスはFタンパク質以外はA2−line19F−I557Vに類似しており、このウイルスにコードされるI557V Fタンパク質が該表現型に重要であることが示唆される。
ヒトにおいて一般的でないコドンを使用し、後述のdNS1hおよびdNS2hと名付けたNS1およびNS2遺伝子を有する組換えRSVを作製した。RSVにおいて一般的でないコドンを使用し、後述のdNS1vおよびdNS2vと名付けたNS1およびNS2遺伝子を有する組換えRSVを作製した。図1に、最適配列を決定するのに使用した表を提供する。組換えRSVは、NS1およびNS2遺伝子のための次のヌクレオチド配列を用いて作製した。一般的でないヒトのコドンまたは一般的でないRSVのコドンのいずれかが望ましいRSVワクチン候補を生成するかどうかは、コドンを試験する前には予測不能であったことに留意することが重要である。RSV配列に対して一般的でないコドンを使用した実験では、予想外の、望ましくない発現増加の効果が得られた。ヒト配列に対して一般的でないコドンを使用した実験では、望ましい発現減少の効果が得られた。ヒト配列にとって一般的でないNSコドンとRSV配列にとって一般的でないNSコドンとを比較する実験では、ヒト配列にとって一般的でないNSコドンがワクチン開発において優先的であることが示された。
dNS1hヌクレオチド配列(配列番号6)では、420ヌクレオチド中の84ヌクレオチド(20%)、140コドン中の68コドン(48%)が野生型A2におけるNS1と相違する。
配列番号6
ATGGGTTCGAATTCGCTATCGATGATAAAAGTACGTCTACAAAATCTATTTGATAATGATGAAGTAGCGCTACTAAAAATAACGTGTTATACGGATAAACTAATACATCTAACGAATGCGCTAGCGAAAGCGGTAATACATACGATAAAACTAAATGGTATAGTATTTGTACATGTAATAACGTCGTCGGATATATGTCCGAATAATAATATAGTAGTAAAATCGAATTTTACGACGATGCCGGTACTACAAAATGGTGGTTATATATGGGAAATGATGGAACTAACGCATTGTTCGCAACCGAATGGTCTACTAGATGATAATTGTGAAATAAAATTTTCGAAAAAACTATCGGATTCGACGATGACGAATTATATGAATCAACTATCGGAACTACTAGGTTTTGATCTAAATCCGTAA
dNS1vヌクレオチド配列(配列番号7)では、420ヌクレオチド中の145ヌクレオチド(34%)、140コドン中の122コドン(87%)が野生型A2におけるNS1と相違する。
配列番号7
ATGGGGTCGAACTCGCTCTCGATGATCAAGGTCCGCCTCCAGAATCTCTTCGACAACGACGAGGTCGCGCTCCTCAAGATCACGTGTTACACGGACAAGCTCATCCACCTCACGAACGCGCTCGCGAAGGCGGTCATCCACACGATCAAGCTCAACGGGATCGTCTTCGTCCACGTCATCACGTCGTCGGACATCTGTCCGAACAACAACATCGTCGTCAAGTCGAACTTCACGACGATGCCGGTCCTCCAGAACGGGGGGTACATCTGGGAGATGATGGAGCTCACGCACTGTTCGCAGCCGAACGGGCTCCTCGACGACAACTGTGAGATCAAGTTCTCGAAGAAGCTCTCGGACTCGACGATGACGAACTACATGAACCAGCTCTCGGAGCTCCTCGGGTTCGACCTCAACCCGTAA
dNS2hヌクレオチド配列(配列番号9)では、420ヌクレオチド中の82ヌクレオチド(21%)、140コドン中の73コドン(58%)が野生型A2におけるNS1と相違する。
配列番号9
ATGGATACGACGCATAATGATAATACGCCGCAACGTCTAATGATAACGGATATGCGTCCGCTATCGCTAGAAACGATAATAACGTCGCTAACGCGTGATATAATAACGCATAAATTTATATATCTAATAAATCATGAATGTATAGTACGTAAACTAGATGAACGTCAAGCGACGTTTACGTTTCTAGTAAATTATGAAATGAAACTACTACATAAAGTAGGTTCGACGAAATATAAAAAATATACGGAATATAATACGAAATATGGTACGTTTCCGATGCCGATATTTATAAATCATGATGGTTTTCTAGAATGTATAGGTATAAAACCGACGAAACATACGCCGATAATATATAAATATGATCTAAATCCGTAA
dNS2vヌクレオチド配列(配列番号10)では、420ヌクレオチド中の103ヌクレオチド(27%)、140コドン中の92コドン(73%)が野生型A2におけるNS1と相違する。
配列番号10
ATGGACACGACGCACAACGACAACACGCCGCAGCGCCTCATGATCACGGACATGCGCCCGCTCTCGCTCGAGACGATCATCACGTCGCTCACGCGCGACATCATCACGCACAAGTTCATCTACCTCATCAACCACGAGTGTATCGTCCGCAAGCTCGACGAGCGCCAGGCGACGTTCACGTTCCTCGTCAACTACGAGATGAAGCTCCTCCACAAGGTCGGGTCGACGAAGTACAAGAAGTACACGGAGTACAACACGAAGTACGGGACGTTCCCGATGCCGATCTTCATCAACCACGACGGGTTCCTCGAGTGTATCGGGATCAAGCCGACGAAGCACACGCCGATCATCTACAAGTACGACCTCAACCCGTAA
感染性組換えRSV(rRSV)を、トランスフェクトされたプラスミドから回収することができる。RSVのN、P、L、およびM2 1タンパク質ならびに全長アンチゲノムRNAを同時発現させるだけでRSVの複製が起こる。感染性RSVは、N、P、L、およびM2−1タンパク質をコードするプラスミドならびにT7プロモーターの調節下のアンチゲノムcDNAを、安定にT7RNAポリメラーゼを発現するBHK−21細胞(BSR細胞)にコトランスフェクトしたものから生成してよい。現在の研究室では、典型的にはpBR322プラスミド(中程度コピー数;大腸菌あたり15〜20コピー)にクローニングされたRSVアンチゲノムcDNAを用いる。前記アンチゲノムcDNAをこのプラスミド内で維持するため、前記細菌は30℃において弱い通気下で増殖させる。にもかかわらず、プラスミド再構成およびクローン喪失は頻繁に起こる。
RSV−BAC pSynkRSV_line 19 Fは、改変katushka遺伝子(mKate2、蛍光タンパク質)、および簡便で標準的なクローニング法のための制限サイトを有する。pSynkRSVの構築のため、3つの核酸断片がDNA合成を行う企業であるGene Artにより合成された。次いで、これら3断片を細菌人工染色体(BAC)内にまとめる必要がある。該3断片を、pSynkRSV−BstBI_SacI(#1)、pSynkRSV−SacI_ClaI(#2)、およびpSynkRSV−ClaI_MluI(#3)と命名した。pSynkRSVを構築するために、pKBS3プラスミドをバックボーンとして用いる。図6A〜Eを参照のこと。pSynkRSVは、細菌内においてコピー数と分配を制御するために必要となる細菌人工染色体配列を有する。
次の4種の発現プラスミドが生成された:RSV核タンパク質(N)を発現するプラスミド、RSVリンタンパク質(P)を発現するプラスミド、RSVマトリックス2 ORF 1タンパク質(M2−1)を発現するプラスミド、およびRSV大ポリメラーゼ(L)を発現するプラスミド―pA2−Nopt、pA2−Popt、pA2−M2−1opt、およびpA2−Lopt。命名は、これらの遺伝子がRSVのA2株のものであり、また、これらのcDNAが、哺乳類細胞において発現量を増加させるために、ヒトのコドンバイアスに対して最適化されているという事実を反映している。cDNAからの組換えRSVの回収物には次の5つの成分が含まれる:全長RNA(pSynk−RSVl19Fにより提供されるもの等)、ならびにRSV N、P、M2−1、およびLタンパク質。前記の4種のヘルパープラスミドpA2−Nopt、pA2−Popt、pA2−M2−1opt、およびpA2−Loptは、RSVレスキューを促進するのに有用である。
OE1ウイルスゲノム(配列番号1)
RSVワクチン候補遺伝子型:
A2−mKate2−dNSh−deltaSH−A2G−line19F−I557V(標識化);および
A2−dNSh−deltaSH−A2G−line19F−I557V(非標識化)
OE2ウイルスゲノム(配列番号2)
RSVワクチン候補遺伝子型:
A2−mKate2−dNSh−deltaSH−dGm(50%)−line19F−I557V(標識化);および
A2−dNSh−deltaSH−dGm(50%)−line19F−I557V(非標識化)
OE3ウイルスゲノム(配列番号3)
RSVワクチン候補遺伝子型:
A2−mKate2−dNSh−deltaSH−dGm(75%)−line19F−I557V(標識化);および
A2−dNSh−deltaSH−dGm(75%)−line19F−I557V(非標識化)
OE4ウイルスゲノム(配列番号4)
RSVワクチン候補遺伝子型:
A2−mKate2−dNSh−deltaSH−dGm(100%)−line19F−I557V(標識化);および
A2−dNSh−deltaSH−dGm(100%)−line19F−I557V(非標識化)
Claims (1)
- 野生型ヒトRSVまたはバリアントのNS2をコードする単離組換え核酸であって、Glyを生成するコドンがGGTであり、Aspを生成するコドンがGATであり、Gluを生成するコドンがGAAであり、Hisを生成するコドンがCATであり、Ileを生成するコドンがATAであり、Lysを生成するコドンがAAAであり、Leuを生成するコドンがCTAであり、Asnを生成するコドンがAATであり、Glnを生成するコドンがCAAであり、Valを生成するコドンがGTAであり、もしくはTyrを生成するコドンがTATであるように、またはその組み合わせとなるように、ヌクレオチドが置換された単離組換え核酸。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021153882A JP7239948B2 (ja) | 2013-03-14 | 2021-09-22 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361781228P | 2013-03-14 | 2013-03-14 | |
US61/781,228 | 2013-03-14 | ||
US201361890500P | 2013-10-14 | 2013-10-14 | |
US61/890,500 | 2013-10-14 | ||
JP2016502442A JP6506249B2 (ja) | 2013-03-14 | 2014-03-14 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016502442A Division JP6506249B2 (ja) | 2013-03-14 | 2014-03-14 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021153882A Division JP7239948B2 (ja) | 2013-03-14 | 2021-09-22 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019115356A true JP2019115356A (ja) | 2019-07-18 |
JP6956965B2 JP6956965B2 (ja) | 2021-11-02 |
Family
ID=51581238
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016502442A Active JP6506249B2 (ja) | 2013-03-14 | 2014-03-14 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
JP2019063498A Active JP6956965B2 (ja) | 2013-03-14 | 2019-03-28 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
JP2021153882A Active JP7239948B2 (ja) | 2013-03-14 | 2021-09-22 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
JP2023025816A Pending JP2023062157A (ja) | 2013-03-14 | 2023-02-22 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016502442A Active JP6506249B2 (ja) | 2013-03-14 | 2014-03-14 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021153882A Active JP7239948B2 (ja) | 2013-03-14 | 2021-09-22 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
JP2023025816A Pending JP2023062157A (ja) | 2013-03-14 | 2023-02-22 | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US10232032B2 (ja) |
EP (2) | EP3798310A1 (ja) |
JP (4) | JP6506249B2 (ja) |
CN (2) | CN105189756B (ja) |
AU (3) | AU2014239583B2 (ja) |
CA (1) | CA2906606A1 (ja) |
ES (1) | ES2854673T3 (ja) |
HK (1) | HK1218428A1 (ja) |
PL (1) | PL2970981T3 (ja) |
WO (1) | WO2014152534A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL2970981T3 (pl) | 2013-03-14 | 2021-07-05 | Emory University | Rekombinowany RSV z cichymi mutacjami, szczepionki i związane z nimi sposoby |
SG11201803581VA (en) * | 2015-10-29 | 2018-05-30 | Univ Emory | Chimeric RSV, Immunogenic Compositions, and Methods of Use |
EP3464331B1 (en) * | 2016-05-30 | 2020-10-28 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized pre-fusion rsv f proteins |
WO2019162532A1 (en) * | 2018-02-26 | 2019-08-29 | Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover (Tiho) | Improved pneumovirus reverse genetics |
JP2022513025A (ja) * | 2018-11-13 | 2022-02-07 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | 安定化された融合前rsv fタンパク質 |
WO2020167813A1 (en) * | 2019-02-11 | 2020-08-20 | Emory University | Chimeric rsv and hmpv f proteins, immunogenic compositions, and methods of use |
WO2022217085A1 (en) * | 2021-04-08 | 2022-10-13 | Codagenix Inc. | Method of eliciting an immune response against respiratory syncytial virus |
US20220324917A1 (en) * | 2021-04-12 | 2022-10-13 | Sk Bioscience Co., Ltd. | Recombinant rsv live vaccine strain and the preparing method thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010523086A (ja) * | 2007-03-30 | 2010-07-15 | ザ・リサーチ・ファウンデーション・オブ・ステート・ユニヴァーシティー・オブ・ニュー・ヨーク | ワクチンに有用な弱毒化ウイルス |
JP2012507302A (ja) * | 2008-11-05 | 2012-03-29 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 生弱毒化呼吸器合胞体ウイルス |
Family Cites Families (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5583024A (en) | 1985-12-02 | 1996-12-10 | The Regents Of The University Of California | Recombinant expression of Coleoptera luciferase |
IL105456A (en) | 1992-04-21 | 1996-12-05 | American Home Prod | Vaccines of attenuated respiratory syncytial virus |
AT401526B (de) | 1993-02-10 | 1996-09-25 | Scheirer Winfried | Reagenzlösung zur stabilisierung der lumineszenz bei der luciferasemessung |
PT702085E (pt) | 1994-07-18 | 2004-04-30 | Karl Klaus Conzelmann | Virus de arn de cadeia negativa nao segmentada infeccioso recombinante |
US7465574B2 (en) | 1994-09-30 | 2008-12-16 | Medimmune, Llc | Recombinant RSV virus expression systems and vaccines |
US7846455B2 (en) | 1996-07-15 | 2010-12-07 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Attenuated chimeric respiratory syncytial virus |
US6264957B1 (en) | 1995-09-27 | 2001-07-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Product of infectious respiratory syncytial virus from cloned nucleotide sequences |
US6923971B2 (en) | 1995-09-27 | 2005-08-02 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Respiratory syncytial virus vaccines expressing protective antigens from promoter-proximal genes |
US6713066B1 (en) | 1996-07-15 | 2004-03-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of attenuated respiratory syncytial virus vaccines involving modification of M2 ORF2 |
US6689367B1 (en) | 1995-09-27 | 2004-02-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of attenuated chimeric respiratory syncytial virus vaccines from cloned nucleotide sequences |
US7485440B2 (en) | 1995-09-27 | 2009-02-03 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of attenuated respiratory syncytial virus vaccines involving modification of M2 ORF2 |
US6214805B1 (en) * | 1996-02-15 | 2001-04-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | RNase L activators and antisense oligonucleotides effective to treat RSV infections |
KR100658491B1 (ko) * | 1996-07-15 | 2006-12-18 | 더 가번먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카, 에즈 레프리젠티드 바이 더 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비시즈 | 클론닝된 뉴클레오타이드 서열로부터 약독화된 호흡기 세포 융합 바이러스 백신의 생산 |
US6699476B1 (en) | 1996-07-15 | 2004-03-02 | Peter L. Collins | Production of recombinant respiratory syncytial viruses expressing immune modulatory molecules |
US5976796A (en) | 1996-10-04 | 1999-11-02 | Loma Linda University | Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes |
US6074859A (en) | 1997-07-08 | 2000-06-13 | Kikkoman Corporation | Mutant-type bioluminescent protein, and process for producing the mutant-type bioluminescent protein |
US20040005542A1 (en) | 2001-06-22 | 2004-01-08 | Krempl Christine D | Respiratory syncytial virus vaccines expressing protective antigens from promotor- proximal genes |
AU2001263443A1 (en) | 2000-05-25 | 2001-12-03 | Med Immune, Inc. | F-protein epitope-based vaccine for respiratory syncytial virus infection |
WO2004087062A2 (en) | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Medimmune Vaccines, Inc. | Compositions and methods involving respiratory syncytial virus subgroup b strain 9320 |
EA011878B1 (ru) | 2003-12-24 | 2009-06-30 | Де Стат Дер Недерланден, Вертегенвордигд Дор Де Министер Ван Волксгезондхейд, Велзейн Ен Спорт | Респираторно-синцитиальный вирус с перекрестно компенсированным геномным дефицитом |
EP1797173B1 (en) * | 2004-10-08 | 2014-05-14 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Modulation of replicative fitness by using less frequently used synonymous codons |
US7951384B2 (en) | 2005-08-05 | 2011-05-31 | University Of Massachusetts | Virus-like particles as vaccines for paramyxovirus |
US8772256B2 (en) * | 2006-11-30 | 2014-07-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Codon modified immunogenic compositions and methods of use |
US8580270B2 (en) | 2008-09-30 | 2013-11-12 | University Of Massachusetts | Respiratory synctial virus (RSV) sequences for protein expression and vaccines |
EP3988115A3 (en) | 2009-07-15 | 2022-08-17 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Rsv f protein compositions and methods for making same |
US10227569B2 (en) | 2011-04-12 | 2019-03-12 | Emory University | Respiratory syncytial virus expression vectors |
LT2707385T (lt) | 2011-05-13 | 2017-12-11 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Iš anksto sulieti rsv f antigenai |
CA2840982C (en) | 2011-07-06 | 2022-06-07 | Vira BITKO | Human respiratory syncytial virus vaccine |
US8816081B2 (en) | 2012-08-06 | 2014-08-26 | Basf Se | Boron containing perylene monoimides, a process for their production, their use as building blocks for the production of perylene monoimide derivatives, monoimide derivatives and their use in dye-sensitized solar cells |
EP4190895A1 (en) | 2013-02-08 | 2023-06-07 | The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Attenuation of human respiratory syncytial virus by genome scale codon-pair deoptimization |
US9738689B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-08-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Prefusion RSV F proteins and their use |
CN112851766A (zh) | 2013-03-13 | 2021-05-28 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 融合前rsv f蛋白和其用途 |
PL2970981T3 (pl) | 2013-03-14 | 2021-07-05 | Emory University | Rekombinowany RSV z cichymi mutacjami, szczepionki i związane z nimi sposoby |
US9060975B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-23 | Mucosis Bv | Heat-stable respiratory syncytial virus F protein oligomers and their use in immunological compositions |
SG11201803581VA (en) | 2015-10-29 | 2018-05-30 | Univ Emory | Chimeric RSV, Immunogenic Compositions, and Methods of Use |
-
2014
- 2014-03-14 PL PL14770291T patent/PL2970981T3/pl unknown
- 2014-03-14 US US14/775,671 patent/US10232032B2/en active Active
- 2014-03-14 ES ES14770291T patent/ES2854673T3/es active Active
- 2014-03-14 JP JP2016502442A patent/JP6506249B2/ja active Active
- 2014-03-14 CN CN201480025415.2A patent/CN105189756B/zh active Active
- 2014-03-14 EP EP20203964.0A patent/EP3798310A1/en active Pending
- 2014-03-14 CN CN202110603289.6A patent/CN113322264B/zh active Active
- 2014-03-14 AU AU2014239583A patent/AU2014239583B2/en active Active
- 2014-03-14 EP EP14770291.4A patent/EP2970981B1/en active Active
- 2014-03-14 CA CA2906606A patent/CA2906606A1/en active Pending
- 2014-03-14 WO PCT/US2014/027447 patent/WO2014152534A1/en active Application Filing
-
2016
- 2016-06-03 HK HK16106371.8A patent/HK1218428A1/zh unknown
-
2019
- 2019-01-31 US US16/263,915 patent/US10792356B2/en active Active
- 2019-03-28 JP JP2019063498A patent/JP6956965B2/ja active Active
-
2020
- 2020-09-18 US US17/025,568 patent/US11471524B2/en active Active
- 2020-10-01 AU AU2020244533A patent/AU2020244533B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-22 JP JP2021153882A patent/JP7239948B2/ja active Active
-
2022
- 2022-10-14 US US18/046,743 patent/US20230302115A1/en active Pending
-
2023
- 2023-02-22 JP JP2023025816A patent/JP2023062157A/ja active Pending
- 2023-07-20 AU AU2023206177A patent/AU2023206177A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010523086A (ja) * | 2007-03-30 | 2010-07-15 | ザ・リサーチ・ファウンデーション・オブ・ステート・ユニヴァーシティー・オブ・ニュー・ヨーク | ワクチンに有用な弱毒化ウイルス |
JP2012507302A (ja) * | 2008-11-05 | 2012-03-29 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 生弱毒化呼吸器合胞体ウイルス |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2970981A4 (en) | 2017-02-22 |
AU2014239583B2 (en) | 2020-07-02 |
AU2020244533A1 (en) | 2020-10-29 |
US20190224306A1 (en) | 2019-07-25 |
CN113322264B (zh) | 2024-05-31 |
US11471524B2 (en) | 2022-10-18 |
JP6506249B2 (ja) | 2019-04-24 |
CA2906606A1 (en) | 2014-09-25 |
JP6956965B2 (ja) | 2021-11-02 |
JP2022023054A (ja) | 2022-02-07 |
US10232032B2 (en) | 2019-03-19 |
EP2970981B1 (en) | 2020-10-28 |
ES2854673T3 (es) | 2021-09-22 |
WO2014152534A1 (en) | 2014-09-25 |
PL2970981T3 (pl) | 2021-07-05 |
JP2023062157A (ja) | 2023-05-02 |
CN105189756B (zh) | 2021-06-11 |
US10792356B2 (en) | 2020-10-06 |
AU2014239583A1 (en) | 2015-10-15 |
US20160030549A1 (en) | 2016-02-04 |
HK1218428A1 (zh) | 2017-02-17 |
AU2020244533B2 (en) | 2023-04-20 |
EP3798310A1 (en) | 2021-03-31 |
JP2016513471A (ja) | 2016-05-16 |
AU2023206177A1 (en) | 2023-08-10 |
US20210100893A1 (en) | 2021-04-08 |
US20230302115A1 (en) | 2023-09-28 |
EP2970981A1 (en) | 2016-01-20 |
JP7239948B2 (ja) | 2023-03-15 |
CN105189756A (zh) | 2015-12-23 |
CN113322264A (zh) | 2021-08-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7239948B2 (ja) | サイレント変異を有する組換えrsv、ワクチン、およびそれに関連する方法 | |
US10626378B2 (en) | Respiratory syncytial virus expression vectors | |
US20230293660A1 (en) | Chimeric rsv, immunogenic compositions, and methods of use | |
US20220125909A1 (en) | Chimeric rsv and hmpv f proteins, immunogenic compositions, and methods of use | |
US20240082385A1 (en) | Rsv vaccines and methods of administering same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190424 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190424 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20191203 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200303 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200507 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201027 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210127 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210329 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210824 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210922 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6956965 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |