JP2019048811A - ライム病抗体の検出のためのペプチドおよび方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、参照によってその全体が本明細書に組み入れられる2011年11月4日出願の米国仮出願第61/556,061号の恩典を主張する。
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、参照によってその全体が本明細書に組み入れられる:配列表のコンピューター読取り可能なフォーマットコピー(ファイル名:ABAX_039_01WO_SeqList_ST25.txt、記録日:2012年11月2日、ファイルサイズ45キロバイト)。
ライム病は、重大な公衆衛生問題となっている衰弱性状態である。この疾患は、病原性ボレリア(Borrelia)細菌(スピロヘータ)による感染によって引き起こされ、ボレリア感染したマダニ属(Ixodes)マダニの様々な種の刺咬によって伝搬される。ライム病の正確な早期の検出は、効果的な処置にとって重要である。ライム病の診断のために十分な唯一の臨床症状は、独特の環状(bulls-eye)外観を有する紅斑である遊走性紅斑の存在である。しかしながら、遊走性紅斑は、感染初期にのみ存在し、その時期ですら、全ての感染個体に出現するわけではない。ベル麻痺のようなライム病に関連している他の臨床症状は、単独でも、組み合わせても、遊走性紅斑が存在しない場合に、臨床的診断を決定するために十分に特異的ではない。
を含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である。
を含み、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、n6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、X18はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X23はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X28はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X31はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、X32はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、c35はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc38はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である。
の配列を含む、単離されたペプチドであって、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、単離されたペプチド。
[本発明1002]
付加的なN末端ペプチド配列を含む、単離されたペプチドであって、付加的なN末端ペプチド配列が天然VlsE配列または非VlsEボレリア(Borrelia)抗原である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1003]
付加的なN末端ペプチド配列がn1-n2-S-P-n5-n6-P(SEQ ID NO:149)の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにn6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1002の単離されたペプチド。
[本発明1004]
付加的なC末端ペプチド配列を含む、単離されたペプチドであって、付加的なC末端ペプチド配列が天然VlsE配列または非VlsEボレリア抗原である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1005]
付加的なC末端ペプチド配列が
の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、c2はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc5はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1004の単離されたペプチド。
[本発明1006]
付加的なC末端ペプチド配列が
の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、c3はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc6はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1004の単離されたペプチド。
[本発明1007]
少なくとも30個、35個、40個、または45個のアミノ酸を含む、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1008]
リガンドにコンジュゲートされている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1009]
ビオチン化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1010]
ストレプトアビジンにコンジュゲートされている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1011]
固体支持体に付着しているかまたは固定化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1012]
ビーズ、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路に付着しているかまたは固定化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1013]
SEQ ID NO:3〜146からなる群より選択される配列を含む、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1014]
の配列からの少なくとも30個、35個、40個、または45個の連続したアミノ酸を含む、単離されたペプチドであって、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、n6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、X18はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X23はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X28はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X31はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、X32はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、c35はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc38はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1015]
第一の単離されたペプチドと第二の単離されたペプチドとを含む、単離されたペプチドの混合物であって、第一の単離されたペプチドが第二の単離されたペプチドとは異なり、第一および第二の単離されたペプチドが、
の配列を各々含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、混合物。
[本発明1016]
3種類またはそれ以上の異なる単離されたペプチドを含む、単離されたペプチドの混合物であって、単離されたペプチドの各々が、
の配列を含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、混合物。
[本発明1017]
単離されたペプチドの各々がリガンドにコンジュゲートされている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1018]
単離されたペプチドのうちの1種類または複数種類がビオチン化されている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1019]
単離されたペプチドのうちの1種類または複数種類がストレプトアビジンにコンジュゲートされている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1020]
単離されたペプチドの各々が固体支持体に固定化されている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1021]
以下の工程を含む、試料中の、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出するための方法:
試料を本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程;および
該単離されたペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が該試料中に存在することを表す、工程。
[本発明1022]
ボレリア抗原が、ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)種、ボレリア・アフゼリ(Borrelia afzelli)種、またはボレリア・ガリニ(Borrelia garinii)種に由来する、本発明1021の方法。
[本発明1023]
単離されたペプチドが固体支持体に固定化されている、本発明1021の方法。
[本発明1024]
固体支持体が、ビーズ、ラテラルフローアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
検出する工程が、(i)ELISAアッセイを実施すること、(ii)ラテラルフローアッセイを行うこと、(iii)凝集アッセイを実施すること、(iv)ウエスタンブロット、スロットブロット、もしくはドットブロットを実施すること、または(v)分析用ローターを通じて試料を流すことを含む、本発明1021の方法。
[本発明1026]
試料がヒト、イヌ、またはウマの対象に由来する、本発明1021の方法。
[本発明1027]
試料が血液、血清、脳脊髄液、尿、または唾液の試料である、本発明1021の方法。
[本発明1028]
試料を、2種類またはそれ以上の本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程を含む、本発明1021の方法。
[本発明1029]
以下の工程を含む、対象においてライム病を診断するための方法:
対象由来の試料を本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程;および
該ペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、対象がライム病を有することを表す、工程。
[本発明1030]
1種類または複数種類の本発明1001の単離されたペプチドと、該1種類または複数種類の単離されたペプチドのエピトープを認識する抗体に結合することができる標識試薬とを含む、キット。
[本発明1031]
前記1種類または複数種類の単離されたペプチドが固体支持体に付着している、本発明1030のキット。
[本発明1032]
前記1種類または複数種類の単離されたペプチドが、ビーズ、チューブもしくはウェル、ラテラルフローアッセイ装置、または分析用ローターに付着している、本発明1030のキット。
[本発明1033]
標識試薬が、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗ヒトIgG抗体または抗イヌIgG抗体である、本発明1030のキット。
[本発明1034]
検出可能な標識がコロイド金粒子である、本発明1033のキット。
本発明のさらなる局面および態様は、以下の詳細な説明から明白になるであろう。
本明細書において使用されるように、以下の用語は、以下の意味を有するものとする。
本発明は、ボレリアVlsEタンパク質のIR6ドメインにおけるある配列バリアントが、広範囲のボレリア種に対する抗体応答のロバストな検出を提供するという発見に一部分基づく。従って、一つの局面において、本発明は、ボレリア抗原を認識する抗体に結合することができるペプチドを提供する。
を含むかまたはそれからなり、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である。
、およびJobe et al.(2003)Clin Diagn Lab Immunol 10,573-8(その内容は参照によって本明細書に組み入れられる)によって報告されたような、アミノ酸161〜210に含有されている1つまたは複数のエピトープが含まれる。米国特許第6,716,574号(その内容は参照によって本明細書に組み入れられる)に記載されたOspCペプチドも使用され得る。FlaB(p41)においては、残基120〜235のような、主要な交差反応性エピトープを含有しないことが示された他の適当な領域が、同定されている。例えば、Crother et al.((2003)Infect.Immun.71,3419-3428;Wang et al.(1999))Clin Microbial Rev 12,633-653;ならびに米国特許第5,618,533号、第5,643,733号、第5,643,751号、第5,932,220号、および第6,617,441号(各々の内容は、参照によって本明細書に組み入れられる)を参照のこと。直鎖状エピトープまたは立体エピトープのいずれかを保持するその他のペプチドは、当技術分野において公知である。具体的には、例えば、OspC、BBK32、またはDbpAの可変領域から、付加的な非天然エピトープ配列を同定する方法は、例えば、米国特許第7,887,815号に記述されている。
n1-n2-S-P-n5-n6-P(SEQ ID NO:149)
またはその断片(例えば、C末端断片)であり、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにn6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である。
またはその断片(例えば、N末端断片)であり、ここで、c2はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc5はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である。他の態様において、付加的なC末端ペプチド配列は、SEQ ID NO:151の配列
またはその断片(例えば、N末端断片)であり、ここで、c3はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc6はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である。
を含むかまたはそれからなり、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、n6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、X18はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X23はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X28はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X31はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、X32はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、c35はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc38はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である。
別の局面において、本発明は、試料中のボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出する方法を提供する。ある態様において、方法は、試料を本発明のペプチドと接触させる工程、および該ペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が試料中に存在することを表す、工程を含む。ある態様において、ボレリア抗原は、感染性ボレリア種に由来する。ある態様において、ボレリア抗原は、狭義のボレリア・ブルグドルフェリ、ボレリア・アフゼリ、またはボレリア・ガリニのような病原性ボレリア種に由来する。B.ルシタニエ(B. lusitaniae)およびB.バライシアネ(B. valaisianae)のようなライム病に関連付けられているボレリアのその他の種も、本発明のペプチドと特異的に反応することができる抗体を誘導するのであれば、本発明の方法を使用して検出され得る。従って、「病原性ボレリア」という用語は、本明細書において使用されるように、ライム病を引き起こす任意のそのようなボレリア種をさすことが理解されるべきである。
さらに別の局面において、本発明はキットを提供する。ある態様において、キットは、本発明のペプチドを含む。ある態様において、キットは、2種類、3種類、4種類、またはそれ以上の異なる本発明のペプチドを含む。ペプチドは、SEQ ID NO:1またはSEQ ID NO:2の配列を含むことができる。ある態様において、ペプチドは、固体支持体に付着しているかまたは固定化されている。例えば、ある態様において、固体支持体は、ビーズ(例えば、コロイド粒子もしくはコロイドナノ粒子)、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、分析用ローター中の流路、またはチューブもしくは(例えば、プレート中の)ウェルである。
Claims (34)
- 付加的なN末端ペプチド配列を含む、単離されたペプチドであって、付加的なN末端ペプチド配列が天然VlsE配列または非VlsEボレリア(Borrelia)抗原である、請求項1記載の単離されたペプチド。
- 付加的なN末端ペプチド配列がn1-n2-S-P-n5-n6-P(SEQ ID NO:149)の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにn6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、請求項2記載の単離されたペプチド。
- 付加的なC末端ペプチド配列を含む、単離されたペプチドであって、付加的なC末端ペプチド配列が天然VlsE配列または非VlsEボレリア抗原である、請求項1記載の単離されたペプチド。
- 少なくとも30個、35個、40個、または45個のアミノ酸を含む、請求項1記載の単離されたペプチド。
- リガンドにコンジュゲートされている、請求項1記載の単離されたペプチド。
- ビオチン化されている、請求項1記載の単離されたペプチド。
- ストレプトアビジンにコンジュゲートされている、請求項1記載の単離されたペプチド。
- 固体支持体に付着しているかまたは固定化されている、請求項1記載の単離されたペプチド。
- ビーズ、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路に付着しているかまたは固定化されている、請求項1記載の単離されたペプチド。
- SEQ ID NO:3〜146からなる群より選択される配列を含む、請求項1記載の単離されたペプチド。
- の配列からの少なくとも30個、35個、40個、または45個の連続したアミノ酸を含む、単離されたペプチドであって、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、n6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、X18はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X23はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X28はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X31はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、X32はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、c35はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc38はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、請求項1記載の単離されたペプチド。
- 第一の単離されたペプチドと第二の単離されたペプチドとを含む、単離されたペプチドの混合物であって、第一の単離されたペプチドが第二の単離されたペプチドとは異なり、第一および第二の単離されたペプチドが、
の配列を各々含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、混合物。 - 単離されたペプチドの各々がリガンドにコンジュゲートされている、請求項15または16記載の混合物。
- 単離されたペプチドのうちの1種類または複数種類がビオチン化されている、請求項15または16記載の混合物。
- 単離されたペプチドのうちの1種類または複数種類がストレプトアビジンにコンジュゲートされている、請求項15または16記載の混合物。
- 単離されたペプチドの各々が固体支持体に固定化されている、請求項15または16記載の混合物。
- 以下の工程を含む、試料中の、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出するための方法:
試料を請求項1記載の単離されたペプチドと接触させる工程;および
該単離されたペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が該試料中に存在することを表す、工程。 - ボレリア抗原が、ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)種、ボレリア・アフゼリ(Borrelia afzelli)種、またはボレリア・ガリニ(Borrelia garinii)種に由来する、請求項21記載の方法。
- 単離されたペプチドが固体支持体に固定化されている、請求項21記載の方法。
- 固体支持体が、ビーズ、ラテラルフローアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路である、請求項23記載の方法。
- 検出する工程が、(i)ELISAアッセイを実施すること、(ii)ラテラルフローアッセイを行うこと、(iii)凝集アッセイを実施すること、(iv)ウエスタンブロット、スロットブロット、もしくはドットブロットを実施すること、または(v)分析用ローターを通じて試料を流すことを含む、請求項21記載の方法。
- 試料がヒト、イヌ、またはウマの対象に由来する、請求項21記載の方法。
- 試料が血液、血清、脳脊髄液、尿、または唾液の試料である、請求項21記載の方法。
- 試料を、2種類またはそれ以上の請求項1記載の単離されたペプチドと接触させる工程を含む、請求項21記載の方法。
- 以下の工程を含む、対象においてライム病を診断するための方法:
対象由来の試料を請求項1記載の単離されたペプチドと接触させる工程;および
該ペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、対象がライム病を有することを表す、工程。 - 1種類または複数種類の請求項1記載の単離されたペプチドと、該1種類または複数種類の単離されたペプチドのエピトープを認識する抗体に結合することができる標識試薬とを含む、キット。
- 前記1種類または複数種類の単離されたペプチドが固体支持体に付着している、請求項30記載のキット。
- 前記1種類または複数種類の単離されたペプチドが、ビーズ、チューブもしくはウェル、ラテラルフローアッセイ装置、または分析用ローターに付着している、請求項30記載のキット。
- 標識試薬が、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗ヒトIgG抗体または抗イヌIgG抗体である、請求項30記載のキット。
- 検出可能な標識がコロイド金粒子である、請求項33記載のキット。
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