CN106397589A - 一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用 - Google Patents

一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106397589A
CN106397589A CN201610928657.3A CN201610928657A CN106397589A CN 106397589 A CN106397589 A CN 106397589A CN 201610928657 A CN201610928657 A CN 201610928657A CN 106397589 A CN106397589 A CN 106397589A
Authority
CN
China
Prior art keywords
narrow sense
polyclonal antibody
borrelia burgdoyferi
sense borrelia
aqueous solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610928657.3A
Other languages
English (en)
Inventor
徐海君
赵蕊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Bei Infa Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Hangzhou Bei Infa Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Bei Infa Biotechnology Co Ltd filed Critical Hangzhou Bei Infa Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610928657.3A priority Critical patent/CN106397589A/zh
Publication of CN106397589A publication Critical patent/CN106397589A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56905—Protozoa
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用，本发明将狭义伯氏疏螺旋体接种培养基扩大培养后获得菌体抗原，将菌体抗原免疫大白兔，免疫程序结束后收集兔血清，获得所述多克隆抗体。本发明制备的狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体特异性好，效价高，能有效检出莱姆病螺旋体，有很强的应用前景。

Description

一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，以及该抗体在制备莱姆病螺旋体的检测试剂中的应用。
背景技术
莱姆病(LD)是北半球一种重要的自然疫源性疾病，广泛分布于美洲、欧洲和东亚地区，其主要通过蜱虫叮咬吸血时将伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi sensu lato)传播给哺乳动物宿主。人类对莱姆病普遍易感，且感染后能导致皮肤、关节、心血管和中枢神经系统等多系统疾病。由于基因组序列的差异，3种致病基因型狭义伯氏疏螺旋体(B.burgdorferi sensu stricto)、伽氏疏螺旋体(B.garinii)和阿氏疏螺旋体(B.afzelii)所引起的临床症状相差较大，B.burgdorferi s.s.主要引起莱姆关节炎，B.garinii主要引起神经功能紊乱，而B.afzelii主要侵犯皮肤组织(Busch U.,Hizo-Teufel C.,Boehmer R.,Fingerle V.,Nitschko H.,Wilske B.,and Preac-MursicV..1996.Three species of Borrelia burgdorferi sensu lato(Borrelia burgdorferisensu stricto,B.afzelii,and B.garinii)identified from cerebrospinal fluidisolates by pulsed-field gel electrophoresis and PCR.J.Clin.Microbiol.34,1072-1078.；Steere A.C..2001.Lyme disease.N.Engl.J.Med.345,115-125.；SteereA.C.,Coburn J.,and Glickstein L..2004.The emergence of Lymedisease.J.Clin.Invest.113,1093-1101.)。
我国自1986年首次发现莱姆病的存在以来，已经证实有20多个省、市、自治区存在莱姆病的自然疫源地，人群中有该病的发生和流行，B.garinii、B.afzelii、B.burgdorferis.s等多种基因型莱姆病螺旋体均有发现(万康林，张哲夫，张金声，窦桂兰，王宏英，侯学霞，朱桂凤.1998.中国20个省、区、市动物莱姆病的初步调查研究.中国媒介生物学及控制杂志.9,366-370.)。由于莱姆病临床症状复杂多样、易于误诊或漏诊，已经成为我国一种重要的虫媒传播疾病。
目前，莱姆病的实验室诊断方法主要有病原体分离、血清学诊断、PCR鉴定等。其中，以美国国家疾控中心推荐的两步血清法应用最为广泛，即首先利用酶联免疫吸附试验(ELISA)或间接免疫荧光法(IFA)对患者血清筛查，最后利用有较好特异性和灵敏度的蛋白印迹试验(WB)进行确诊。这些血清学检测方法都建立在抗原抗体特异性结合的基础上，利用荧光、酶标等显色技术达到检测的目的。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，它通过以下方法制备得到：
(1)抗原制备：将狭义伯氏疏螺旋体菌株接种至BSK-II培养基，在33-37℃、体积浓度为5％的恒温培养箱培养至菌体浓度1-2×108cfu/ml，获得培养液；然后将培养液在4℃、3200rcf离心25min，收集沉淀并用NaCl水溶液重悬清洗两次；接着用含甲醛的NaCl水溶液重悬菌体后于60℃水浴中温育约1h，并不时摇动；4℃、3200rcf离心25min，收集菌体沉淀，再用NaCl水溶液洗涤三次，获得狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原；所述NaCl水溶液中，NaCl的质量浓度为0.9％；所述含甲醛的NaCl水溶液中，甲醛的质量浓度为0.3％-0.5％；
(2)动物免疫：获得的狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原用质量浓度为0.9％的NaCl水溶液重悬，免疫注射用菌体抗原悬浮液浓度5×108-10×108cfu/ml；首次免疫，取500μl悬浮液与等量弗氏完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫均取500μl悬浮液与等量弗氏不完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；首次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫注射时间间隔分别为21天、14天、7天；
(3)血清获取：第四次免疫完成后7天，用质量浓度为5％-15％的水合氯醛的水溶液，按照5-10ml/kg的剂量麻醉新西兰大白兔，用采血针进行颈动脉采集全血；全血室温凝固后，4℃放置过夜，3000rcf离心10min，吸取上清，得狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，-80℃保存备用。
上述狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体可用于制备莱姆病螺旋体的检测试剂。
本发明的有益效果是，本发明提供了一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，以及该抗体在制备莱姆病螺旋体的检测试剂中的应用。本发明制备的多克隆抗体特异性好，效价高，能有效检出莱姆病螺旋体，有很强的应用前景。
附图说明
图1为莱姆病螺旋体的免疫荧光检测结果图，图中，A为加入狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi B31A3多克隆抗体检测莱姆病螺旋体效果图；B为未加入狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi B31A3多克隆抗体的对照组。
图2为幼蜱中肠莱姆病螺旋体的免疫荧光检测结果图，图中，A为吸食感染B.burgdorferi B31A3小鼠血液的幼蜱带菌效果图；B.吸食健康小鼠血液的幼蜱的中肠效果图。
具体实施方式
本发明提供了一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，它通过以下方法制备得到：
(1)抗原制备：将狭义伯氏疏螺旋体菌株接种至BSK-II培养基，在33-37℃、体积浓度为5％的恒温培养箱培养至菌体浓度1-2×108cfu/ml，获得培养液；然后将培养液在4℃、3200rcf离心25min，收集沉淀并用NaCl水溶液重悬清洗两次；接着用含甲醛的NaCl水溶液重悬菌体后于60℃水浴中温育约1h，并不时摇动；4℃、3200rcf离心25min，收集菌体沉淀，再用NaCl水溶液洗涤三次，获得狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原；所述NaCl水溶液中，NaCl的质量浓度为0.9％；所述含甲醛的NaCl水溶液中，甲醛的质量浓度为0.3％-0.5％。
所述狭义伯氏疏螺旋体菌株来源广泛，本发明中优选为B.burgdorferi B31A3(Elias A.F.,Stewart P.E.,Grimm D.,Caimano M.J.,Eggers C.H.,Tilly K.,BonoJ.L.,Akins D.R.,Radolf J.D.,Schwan T.G.,and Rosa P..2002.Clonal polymorphismof Borrelia burgdorferi strain B31 MI:implications for mutagenesis in aninfectious strain background.Infect Immun.70,2139-2150.)。
(2)动物免疫：获得的狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原用质量浓度为0.9％的NaCl水溶液重悬，免疫注射用菌体抗原悬浮液浓度5×108-10×108cfu/ml；首次免疫，取500μl悬浮液与等量弗氏完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫均取500μl悬浮液与等量弗氏不完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；首次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫注射时间间隔分别为21天、14天、7天。
所述免疫的方法多种多样，如：皮下注射法、肌肉注射法、腹腔注射法等。用于免疫的动物可以是鼠、兔、羊、马、猪、驴等可用于免疫的动物，所用免疫原的计量视具体免疫动物而定。
(3)血清获取：第四次免疫完成后7天，用质量浓度为5％-15％的水合氯醛的水溶液，按照5-10ml/kg的剂量麻醉新西兰大白兔，用采血针进行颈动脉采集全血；全血室温凝固后，4℃放置过夜，3000rcf离心10min，吸取上清，得狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，-80℃保存备用。
效价测定方法如下：采用间接ELISA法对狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体效价进行测定。酶标板用狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原包被，阳性血清和阴性血清按1:1000，1:4000，1:8000，1:16000，1:32000，1:64000，1:128000稀释，以阳性血清浓度OD值大于阴性血清OD值2倍作为阳性判定标准。所用酶标二抗为羊抗兔IgG(H+L)-HRP，阳性血清为狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，阴性血清为新西兰大白兔免疫前血清。
上述狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体可用于制备莱姆病螺旋体的检测试剂。
用本发明提供的狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体检测莱姆病螺旋体的方法为：(1)将莱姆病螺旋体或疑似携带莱姆病螺旋体的饱血蜱虫组织在免疫组化玻片上自然干燥10-30min；(2)60-65℃固定30min；(3)将免疫组化玻片置于丙酮中固定5min，室温干燥10-20min；(4)加100μl PST封闭液于样品上，将免疫组化玻片置于密封黑盒中并保持潮湿，37℃孵育30min；所述PST封闭液为每100ml中含有5g牛血清蛋白，50μl Tween-20的PBS溶液；(5)移除PST封闭液，加入100μl一抗工作液，37℃孵育45-60min，所述一抗工作液为狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体用PST封闭液作1：100稀释；(6)移除一抗工作液，用PBS清洗样品3次，每次5min；(7)加入100μl二抗工作液，37℃孵育45-60min，所述二抗工作液为羊抗兔IgG(H+L)荧光抗体用PST封闭液做1:200稀释；(8)移除二抗工作液，用PBS清洗样品3次，每次5min(9)封片后置于荧光显微镜下观察。
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1.狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体制备
(1)抗原制备：将狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi B31A3菌株接种至50ml BSK-II培养基(美国Sigma-Aldrich公司)中，在33℃、5％CO2恒温培养箱培养至菌体浓度2×108cfu/ml，获得培养液；然后将培养液在4℃，3200rcf离心25min，收集沉淀并用质量浓度0.9％NaCl水溶液重悬清洗两次；接着用含0.3％-0.5％甲醛的0.9％NaCl水溶液重悬菌体后于60℃水浴中温育1h，并不时摇动；4℃，3200rcf离心25min，收集菌体沉淀，用0.9％NaCl水溶液洗涤三次，获得狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原；
(2)动物免疫：将获得的狭义伯氏疏螺旋体用10ml 0.9％NaCl水溶液重悬，免疫注射用全菌抗原悬浮液浓度10×108cfu/ml；首次免疫，取500μl悬浮液与等量弗氏完全佐剂乳化混合，与新西兰大白兔背部多点皮内注射；第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫均取500μl悬浮液与等量弗氏不完全佐剂乳化混合，与新西兰大白兔背部多点皮内注射；首次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫注射时间间隔分别为21天、14天、7天；
(3)血清获取：第四次免疫完成后7天，用10％水合氯醛，按照10ml/kg的剂量麻醉新西兰大白兔，用采血针进行颈动脉采集全血；全血室温凝固后，4℃放置过夜，3000rcf离心10min，吸取上清，至此获得狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，-80℃保存备用；
(4)效价测定：采用间接ELISA法对狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体效价进行测定。酶标板用狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原包被，阳性血清和阴性血清按1:1000，1:4000，1:8000，1:16000，1:32000，1:64000，1:128000稀释，以阳性血清浓度OD值大于阴性血清OD值2倍作为阳性判定标准。所用酶标二抗为羊抗兔IgG(H+L)-HRP(美国JacksonImmunoResearch公司)，阳性血清为狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，阴性血清为新西兰大白兔免疫前血清。ELISA结果显示，所获得的狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体效价大于1:64000。
实施例2.莱姆病螺旋体的免疫荧光检测
(1)将狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi B31A3菌株接种至15ml BSK-II培养基(美国Sigma-Aldrich公司)中，在33℃、5％CO2恒温培养箱培养至菌体浓度5×107cfu/ml，获得菌体培养液；
(2)将步骤(1)的菌体培养液在4℃，3200rcf离心25min，收集沉淀并用15ml质量浓度0.9％NaCl水溶液重悬清洗，重复两次，最终离心获得菌体；
(3)将步骤(2)获得的菌体用10ml 0.9％NaCl水溶液重悬，取10μl悬浮液均匀涂布在免疫组化玻片上，自然干燥10min；
(4)将步骤(3)获得的免疫组化玻片在60℃固定30min；
(5)将步骤(4)获得的免疫组化玻片置于丙酮中固定5min，室温干燥20min；
(6)加100μl PST封闭液于样品上，将免疫组化玻片置于密封黑盒中并保持潮湿，37℃孵育30min；所述PST封闭液为每100ml中含有5g牛血清蛋白，50μl Tween-20的PBS溶液；
(7)移除PST封闭液，加入100μl一抗工作液，37℃孵育60min，所述一抗工作液为狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体用PST封闭液作1：100稀释；
(8)移除一抗工作液，用PBS清洗免疫组化玻片3次，每次5min；
(9)加入100μl二抗工作液，37℃孵育60min，所述二抗工作液为羊抗兔IgG(H+L)-Alexa Fluor 488(美国Jackson ImmunoResearch公司)用PST封闭液做1:200稀释；
(10)移除二抗工作液，用PBS清洗免疫组化玻片3次，每次5min；
(11)封片后置于荧光显微镜下观察，具体如图1所示。图1的A显示，本发明的狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体与实验室培养的狭义伯氏疏螺旋体菌的温育后，再与绿色荧光标记的二抗反应，成功检测出了狭义伯氏疏螺旋体菌(绿色荧光)；B显示，狭义伯氏疏螺旋体菌直接与绿色荧光标记的二抗温育，无绿色荧光杂交结果，作为对照组。
实施例3.幼蜱中肠莱姆病螺旋体的免疫荧光检测
(1)收集饱血后掉落的幼蜱，随机取10只解剖中肠组织；
(2)将中肠组织用PBS溶液清洗3次后，置于免疫组化玻片上自然干燥20min；
(3)将步骤(2)获得的免疫组化玻片60℃固定30min；
(4)将免疫组化玻片置于丙酮中固定5min，室温干燥20min；
(5)加100μl PST封闭液于中肠组织上，将免疫组化玻片置于密封黑盒中并保持潮湿，37℃孵育30min；所述PST封闭液为每100ml中含有5g牛血清蛋白，50μl Tween-20的PBS溶液；
(6)移除PST封闭液，加入100μl一抗工作液，37℃孵育60min，所述一抗工作液为狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体用PST封闭液作1：100稀释；
(7)移除一抗工作液，用PBS清洗中肠组织3次，每次5min；
(8)加入100μl二抗工作液，37℃孵育60min，所述二抗工作液为羊抗兔IgG(H+L)-Alexa Fluor 488(美国Jackson ImmunoResearch公司)用PST封闭液做1:200稀释；
(9)移除二抗工作液，用PBS清洗中肠组织3次，每次5min；
(10)封片后置于荧光显微镜下观察，具体如图2所示。图2的A显示，解剖带菌蜱的中肠，然后狭义伯氏疏螺旋体菌多克隆抗体与蜱中肠温育，再与绿色荧光标记的二抗反应，绿色荧光显示的是螺旋体菌，说明可成功检测到蜱携带菌；B显示，解剖无菌的蜱的中肠，然后抗体与蜱中肠温育，再与绿色荧光标记的二抗反应，无绿色杂交反应，说明制备的抗体具有特异性。
本实施例中，饱血蜱虫通过以下步骤获得：用高剂量莱姆病螺旋体B.burgdorferiB31A3(1×107cfu/鼠)人工接种3只C3H/HeN小鼠，在10天和21天后取小鼠耳朵组织于含有1×Antibiotic Mmixture for Borrelia的BSK-H培养基中培养，33℃的5％CO2恒温培养箱培养一周左右，于暗视野显微镜下确认小鼠成功感染莱姆螺旋体。之后，每只阳性带菌鼠上放置200只左右无菌幼蜱，使其充分吸血至掉落。
以上描述对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、同等替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，其特征在于，通过以下方法制备得到：
(1)抗原制备：将狭义伯氏疏螺旋体菌株接种至BSK-II培养基，在33-37℃、体积浓度为5％的恒温培养箱培养至菌体浓度1-2×108cfu/ml，获得培养液；然后将培养液在4℃、3200rcf离心25min，收集沉淀并用NaCl水溶液重悬清洗两次；接着用含甲醛的NaCl水溶液重悬菌体后于60℃水浴中温育约1h，并不时摇动；4℃、3200rcf离心约25min，收集菌体沉淀，再用NaCl水溶液洗涤三次，获得狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原；所述NaCl水溶液中，NaCl的质量浓度为0.9％；所述含甲醛的NaCl水溶液中，甲醛的质量浓度为0.3％-0.5％。
(2)动物免疫：获得的狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原用质量浓度为0.9％的NaCl水溶液重悬，免疫注射用菌体抗原悬浮液浓度5×108-10×108cfu/ml；首次免疫，取500μl悬浮液与等量弗氏完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫均取500μl悬浮液与等量弗氏不完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；首次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫注射时间间隔分别为21天、14天、7天。
(3)血清获取：第四次免疫完成后7天，用质量浓度为5％-15％的水合氯醛的水溶液，按照5-10ml/kg的剂量麻醉新西兰大白兔，用采血针进行颈动脉采集全血；全血室温凝固后，4℃放置过夜，3000rcf离心10min，吸取上清，得狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，-80℃保存备用。
2.一种权利要求1所述狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体在制备莱姆病螺旋体的检测试剂中的应用。
CN201610928657.3A 2016-10-31 2016-10-31 一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用 Pending CN106397589A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610928657.3A CN106397589A (zh) 2016-10-31 2016-10-31 一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610928657.3A CN106397589A (zh) 2016-10-31 2016-10-31 一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106397589A true CN106397589A (zh) 2017-02-15

Family

ID=58012571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610928657.3A Pending CN106397589A (zh) 2016-10-31 2016-10-31 一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106397589A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1261896A (zh) * 1997-06-30 2000-08-02 杜雷安教育基金会行政处 诊断和预防莱姆病用的组合物的表面抗原和蛋白质
CN101374858A (zh) * 2005-11-29 2009-02-25 弗吉尼亚州立大学 多价嵌合ospc疫苗原及诊断抗原
CN102791727A (zh) * 2009-11-17 2012-11-21 爱贝斯股份有限公司 用于检测莱姆病抗体的肽和方法
CN103998459A (zh) * 2011-11-04 2014-08-20 爱贝斯股份有限公司 检测莱姆病抗体的肽和方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1261896A (zh) * 1997-06-30 2000-08-02 杜雷安教育基金会行政处 诊断和预防莱姆病用的组合物的表面抗原和蛋白质
CN101374858A (zh) * 2005-11-29 2009-02-25 弗吉尼亚州立大学 多价嵌合ospc疫苗原及诊断抗原
CN102791727A (zh) * 2009-11-17 2012-11-21 爱贝斯股份有限公司 用于检测莱姆病抗体的肽和方法
CN103998459A (zh) * 2011-11-04 2014-08-20 爱贝斯股份有限公司 检测莱姆病抗体的肽和方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHARLES S. PAVIA ET AL.: "Antiborrelial Activity of Serum from Rats Injected with the Lyme Disease Spirochete", 《THE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES》 *
STEVEN D. LOVRICH ET AL.: "Borreliacidal activity of sera from hamsters infected with the lyme disease spriochete", 《INFECTION AND IMMUNITY》 *
郝琴 等: "中国莱姆病螺旋体特异性单克隆抗体的制备及初步鉴定", 《中国人兽共患病学报》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hoogkamp-Korstanje et al. Incidence of human infection with Yersinia enterocolitica serotypes O3, O8, and O9 and the use of indirect immunofluorescence in diagnosis
Melnick Application of tissue culture methods to epidemiological studies of poliomyelitis
CN105296441B (zh) 一种牛病毒性腹泻病毒毒株及其应用
CN103436496B (zh) 抗牛支原体的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及应用
CN110218668A (zh) 一种惰性载体沙门氏菌及其潜在应用
Han et al. Establishment of an antibody avidity test to differentiate vaccinated cattle from those naturally infected with Mycoplasma bovis
CN106066398A (zh) 一种a型产气荚膜梭菌毒素抗体的间接elisa检测方法
RU2607006C1 (ru) Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae
CN106093439B (zh) 一种猪链球菌间接血凝检测试剂盒及其应用
CN103773736B (zh) 分泌抗鸭源ndv分离株单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立
Sechter et al. Edwardsiella tarda isolated in Israel between 1961 and 1980
Liao et al. Systemic cat scratch disease
CN116042536B (zh) 一种牛疱疹病毒4型毒株及其培养方法和应用
CN106397589A (zh) 一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用
Cottew Recovery and identification of caprine and ovine mycoplasmas
CN106198971A (zh) 结核分枝杆菌抗原蛋白Rv2351c的应用
Mitui et al. Studies on haemophilus infection in swine I. Application of the latex agglutination test to the diagnosis of Haemophilus pleuropneumoniae (H. Parahaemolyticus) infection
Matsunaga et al. Experimental infection of young rabbits with rabbit parvovirus
CN105198969A (zh) 一种1型鸭甲肝病毒vp3蛋白的b细胞表位及其鉴定方法和应用
CN106432487A (zh) 一种伽氏疏螺旋体多克隆抗体及应用
Tobin et al. Immunoelectroosmophoresis in the diagnosis of meningococcal infections
CN105929179B (zh) 一种粪肠球菌间接血凝检测试剂盒及其应用
CN105866437B (zh) 一种屎肠球菌间接血凝检测试剂盒及其应用
Lück et al. Isolation of Legionella pneumophila serogroup 3 from pericardial fluid in a case of pericarditis
CN105759054A (zh) 一种用于检测牛布鲁菌病的elispot检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170215