JP2019041692A - 菌従属栄養ラン科植物の人工栽培 - Google Patents
菌従属栄養ラン科植物の人工栽培 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019041692A JP2019041692A JP2017169159A JP2017169159A JP2019041692A JP 2019041692 A JP2019041692 A JP 2019041692A JP 2017169159 A JP2017169159 A JP 2017169159A JP 2017169159 A JP2017169159 A JP 2017169159A JP 2019041692 A JP2019041692 A JP 2019041692A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- artificial cultivation
- heterotrophic
- humus
- medium
- fungus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Cultivation Of Plants (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Description
クロヤツシロランの人工栽培の結果を図2に示す。クロヤツシロランの種子は発芽しプロトコームを形成した。塊茎原基はプロトコーム形成後、ボール状になったプロトコームの頂上部より苞を形成し、それが割れて形成された。根もプロトコームの左右両サイドより発達した。開花後も根の一つは優先的に連続的に伸長した。塊茎は播種後4か月ほどで発育をストップし、シュート形成が起こる。抽苔後一か月で開花し、さく果は自然条件下で開花後約20−30日後成熟し裂開する。詳細は、クロヤツシロランは杉培地で播種から発芽まで17日〜約2か月を要し、プロトコーム、塊茎原基、根、開花、結実は播種後それぞれ、20−65日、25−80日、30−82日、154−299日、194−321日を要した。クロヤツシロランの花の中には播種後154日で咲くものもあった。人工培養法では、生育開花促進効果がみられ、大きな塊茎個体では年三回開花・結実するものもみられた。これら発育スピードは1年に1回咲く自然条件下と比較してかなりの効果的なスピードアップとなった。さらに栄養条件や生育環境が悪い場合、開花に数年、もしくは開花しない、塊茎が消失、菌と出会えず発芽しないこともあることから画期的な培養システムといえる。
アキザキヤツシロランの人工栽培の結果を図2に示す。アキザキヤツシロランは杉、モウソウチク培地で、播種後から発芽まで8−36日、その後プロトコーム、塊茎原基、根、開花、結実は播種後それぞれ、33−53日、44−79日、50−83日、154−340日、245日を要した。杉培地は開花・結実に有効であった。また、アキザキとクロヤツシロランは同じ培地で共に生育することが可能であることが確認された(図3参照)。アキザキヤツシロランはプロトコーム時にクロヤツシロラン塊茎と同じ菌糸を共有することが確認された(図3に示す黒矢印: クロヤツシロラン、白矢印:アキザキヤツシロラン)。また、クロヤツシロランとアキザキヤツシロランは同じ培地で同じような生育スピードを示すことも確認された。このことは菌根菌とヤツシロラン類の種特異性が低いことを示しているものと思われる。
ハルザキヤツシロランの人工栽培の結果を図2に示す。ハルザキヤツシロランは杉培地・スダジイ培地では播種から発芽まで13−30日要し、プロトコーム、塊茎原基、根形成は播種後それぞれ、15−32日、30−45日、30−45日を要した。なお、発芽は自然条件下よりも早いことを確認した。
さらに、本実施形態による人工栽培方法を用いて以下のような実験結果を得た。
(ア)神奈川県で採取した培地(杉の丸太20、杉の球果30、杉の腐葉土40)にて、神奈川県(培地と同じ場所)で採取したクロヤツシロランと静岡県(培地と異なる場所)で採取したクロヤツシロランの人工栽培が可能であることを確認した。
(イ)徳島県で採取した培地(スダジイの丸太20、杉の球果30、スダジイの腐葉土40)にて、徳島県(培地と同じ場所)で採取したハルザキヤツシロランと静岡県(培地と異なる場所)で採取したアキザキヤツシロランの人工栽培が可能であることを確認した。
(ウ)高知県で採取した培地(モウソウチクの丸太20、杉の球果30、モウソウチクの腐葉土40)にて、静岡県(培地と異なる場所)で採取したアキザキヤツシロランの人工栽培が可能であることを確認した。
プロトコームを用いてCTAB法でゲノムを抽出した。菌が保持するrDNA中ITS領域をITS1F−ITS4BプライマーおよびTakaRa Ex Taq キットを用いて増幅した。PCR反応液は、DNA抽出物2μl、 Ex Taq polymerase 0.05μl、 各プライマー 10μM、dNTP mix 0.25μM、10x buffer を収量10μlになるように調整した。反応液をicyclerによりサイクル前の熱変性を94℃で5分、熱変性を94℃で30秒、アニーリングを55℃で30秒、伸長反応を72℃で1分のサイクルを30回行ったのち、最後の伸長を72℃で7分間行った。PCR産物は、EconoSpinを用いて精製した。精製したPCR産物でダイレクトシークエンスを行った。得られたDNA配列はBLAST検索を行った。GeneBankより得られた複数の配列に基づいてClustalXで系統樹を作成した。
本研究における人工培養方を用いて、オニノヤガラ属のヤツシロラン類の菌根菌同定を試みた。ITS領域から得た配列に基づき菌根菌の同定を行った。図4は、クロヤツシロラン(神奈川県)およびハルザキヤツシロラン(徳島県)のプロトコームと育成キット100の培地より同定した菌根菌のテーブルである。クロヤツシロラン(神奈川県)およびハルザキヤツシロラン(徳島県)のプロトコームから得られたITS配列は、それぞれ学名(Diplomitoporus rimosus)と学名(Thelepurus membranaeus)と99%以上の相同率で一致した。これらの菌根菌は、それぞれのスギ培地およびスダジイ培地からも同様の結果が検出された。この結果は、人工培養方を用いることでオニノヤガラ属のヤツシロラン類の生長に必要な菌を同定するためにも効率的であることがわかった。学名(Diplomitoporus rimosus)および学名(Theleporus membranaeus)のそれぞれの菌根菌は、いずれもPolyporalesタマチョレイタケ目の一種であることに共通性がある。したがって、これらの菌根菌の名前をNCBIから検索して同種の登録されているITS領域のゲノム配列を比較させてClastalWで解析しNJplotで系統樹の作成を行った。その結果は、これら2種はあまり近い関係にあるわけではないことがわかった。また、菌根菌の同定において、他種の菌も検出された。アキザキヤツシロランおよびハルザキヤツシロランのプロトコームから得られたITS配列において、学名(Trechispora)、学名(Corticium)、学名(Mycena spp)の菌根菌も検出された。しかし、検出されたこれらの菌種とは相同性が低かったため、オニノヤガラ属のヤツシロラン類の生育において依存した関係性があることを見出すことはできなかった。しかし、これらをもってオニノヤガラ属のヤツシロラン類が生長を良好に行う上で非特異的に複数の菌根菌との共生関係を保持しているということが示唆された。
・クロヤツシロラン
杉培地にて人工栽培に成功し、同一個体で年3回の開花・結実が可能であることが確認された。また、菌根菌の一つは、学名(Diplomitoporus rimosus)であることが確認された。
・アキザキヤツシロラン
杉培地、モウチク培地にて人工栽培に成功した。また、菌根菌の一つは、学名(Gerronema stronbodes)であることが確認された。
・ハルザキヤツシロラン
杉培地、スダジイ培地にて人工栽培に成功した。また、菌根菌の一つは、学名(Theleporus membranaeus)であることが確認された。
(ア)ヤツシロランの塊茎に適量の50%メタノールを加え、乳鉢で破砕する(塊根1g当たり、メタノール10ml使用)。
(イ)破砕後の塊根と抽出液をナスフラスコに移し、80℃の熱水中で還流しながら、10分程度抽出を行う。
(ウ)所定の濾紙を用いて抽出液を濾過し、粗抽出液とする。
(エ)粗抽出液に等量の石油エーテルを加え、分液漏斗を用いて分画し、水層を分液する(本例では3回繰り返す)。
(オ)水層に等量の酢酸エチルを加え、分液漏斗を用いて分画し、水層を分液する(本例では3回繰り返す)。
(カ)得られた水層をエバポレーターにより濃縮させる。
(キ)50%メタノールで再懸濁し、粗精製液とする。
以上の方法によって、ヤツシロランの塊茎からガストロジンを抽出した。また、開花直前の塊茎から、最も高濃度のガストロジン抽出液を取り出すことができた。なお、上記以外の方法でガストロジンを抽出する場合があってもよい。
また、本実施形態による菌従属栄養ラン科植物の人工栽培方法は、オニノヤガラの人工栽培においても有効であることも確認した。
11a 蓋
11b 筺体
12 ビニール
13 水分吸収材
20 丸太
30 球果
40 腐葉土
Claims (4)
- 菌従属栄養ラン科植物の培地として、腐植進行中の原木と複数の腐植進行中の球果を用い、
前記培地がある室内環境を温度15℃〜30℃、かつ湿度70%以上にする、菌従属栄養ラン科植物の育成方法。 - 請求項1に記載の育成方法を用いて培養したヤツシロラン。
- 請求項1に記載の育成方法を用いて培養したオニノヤガラ。
- ヤツシロランの塊茎から抽出したガストロジン(英名Gastrodin)。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017169159A JP7045007B2 (ja) | 2017-09-04 | 2017-09-04 | 菌従属栄養ラン科植物の人工栽培 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017169159A JP7045007B2 (ja) | 2017-09-04 | 2017-09-04 | 菌従属栄養ラン科植物の人工栽培 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019041692A true JP2019041692A (ja) | 2019-03-22 |
JP7045007B2 JP7045007B2 (ja) | 2022-03-31 |
Family
ID=65812612
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017169159A Active JP7045007B2 (ja) | 2017-09-04 | 2017-09-04 | 菌従属栄養ラン科植物の人工栽培 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7045007B2 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110089388A (zh) * | 2019-04-29 | 2019-08-06 | 保山华大智慧农业科技股份有限公司 | 一种天麻无土栽培基质 |
CN110089393A (zh) * | 2019-04-29 | 2019-08-06 | 保山华大智慧农业科技股份有限公司 | 一种天麻种子育苗营养基质 |
JP2021040525A (ja) * | 2019-09-10 | 2021-03-18 | 有限会社最上蘭園 | 新規子嚢菌Pezizales sp.,及び新規子嚢菌Pezizales sp.と根粒菌Rhizobium sp.の共生を利用した減肥料栽培及び減農薬及び無農薬栽培方法 |
CN112772326A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-05-11 | 云南中医药大学 | 一种高寒山区白及种子育苗的方法 |
CN116076344A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-05-09 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种利用丝核菌促进金线莲原球茎分化与菌根化繁育及栽培的方法 |
JP2023099425A (ja) * | 2021-12-31 | 2023-07-13 | 西南林業大学 | オニノヤガラの有機栽培方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010273648A (ja) * | 2009-05-29 | 2010-12-09 | Japan Health Science Foundation | 栽培装置、及び、栽培方法 |
-
2017
- 2017-09-04 JP JP2017169159A patent/JP7045007B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010273648A (ja) * | 2009-05-29 | 2010-12-09 | Japan Health Science Foundation | 栽培装置、及び、栽培方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
"Artificial Cultivation System for Gastrodia spp. and Identification of Associated Mycorrhizal Fungi", INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGY, vol. 9, no. 4, JPN6021034718, 16 September 2017 (2017-09-16), pages 27 - 34, ISSN: 0004591077 * |
福永 裕一、澤 進一郎、澤 完: "四国におけるハルザキヤツシロラン,アキザキヤツシロラン及びクロヤツシロランの分布", 分類, vol. 8, JPN7021003590, 2008, pages 141 - 147, ISSN: 0004591076 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110089388A (zh) * | 2019-04-29 | 2019-08-06 | 保山华大智慧农业科技股份有限公司 | 一种天麻无土栽培基质 |
CN110089393A (zh) * | 2019-04-29 | 2019-08-06 | 保山华大智慧农业科技股份有限公司 | 一种天麻种子育苗营养基质 |
JP2021040525A (ja) * | 2019-09-10 | 2021-03-18 | 有限会社最上蘭園 | 新規子嚢菌Pezizales sp.,及び新規子嚢菌Pezizales sp.と根粒菌Rhizobium sp.の共生を利用した減肥料栽培及び減農薬及び無農薬栽培方法 |
CN112772326A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-05-11 | 云南中医药大学 | 一种高寒山区白及种子育苗的方法 |
JP2023099425A (ja) * | 2021-12-31 | 2023-07-13 | 西南林業大学 | オニノヤガラの有機栽培方法 |
JP7393043B2 (ja) | 2021-12-31 | 2023-12-06 | 西南林業大学 | オニノヤガラの有機栽培方法 |
CN116076344A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-05-09 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种利用丝核菌促进金线莲原球茎分化与菌根化繁育及栽培的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7045007B2 (ja) | 2022-03-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7045007B2 (ja) | 菌従属栄養ラン科植物の人工栽培 | |
Pavlou et al. | Biological control of root and stem rot of greenhouse cucumber, caused by Fusarium oxysporum f. sp. radicis-cucumerinum, by lettuce soil amendment | |
Morte et al. | Biotechnology and cultivation of desert truffles | |
CN101669430B (zh) | 暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法 | |
CN103087927A (zh) | 一种促进带叶兜兰种子共生萌发的真菌及其应用 | |
CN105754864B (zh) | 白及菌根真菌及其应用 | |
CN101914456A (zh) | 促进兰科植物种子萌发的一株真菌 | |
Benca | Cultivation techniques for terrestrial clubmosses (Lycopodiaceae): conservation, research, and horticultural opportunities for an early-diverging plant lineage | |
CN105191792A (zh) | 扁桃斑鸠菊的快速繁殖方法 | |
CN101401522A (zh) | 杏黄兜兰无菌苗菌根化方法 | |
Chu | The effects of arbuscular mycorrhizal fungi inoculation on Euterpe oleracea Mart.(açaí) seedlings | |
CN101803520B (zh) | 一种实现块根植物根系功能分离的栽培方法 | |
Singh et al. | Augmented growth of long pepper in response to arbuscular mycorrhizal inoculation | |
Pereira et al. | Using common mycorrhizal networks for controlled inoculation of Quercus spp. with Tuber melanosporum: the nurse plant method | |
Ombodi et al. | Effects of mycorrhiza inoculation and grafting for sweet pepper (Capsicum annuum L.) crop under low-tech greenhouse conditions | |
Peccatti et al. | Effect of Trichoderma spp. on the propagation of Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek | |
CN106489748A (zh) | 一种平铺白珠树的组培快速繁殖方法 | |
Shimaoka et al. | Artificial cultivation system for Gastrodia spp. and identification of associated mycorrhizal fungi | |
Deb | Orchids of Nagaland, propagation, conservation and sustainable utilization: a review | |
CN101914457A (zh) | 促进白芨种子萌发的一株真菌 | |
CN100998290B (zh) | 培育抗根结线虫番茄的方法 | |
JP2022077963A (ja) | 植物苗、育苗方法、培土、および植物育成方法 | |
CN106718548A (zh) | 一种无刺花椒树苗培育方法 | |
Lopachev et al. | Efficiency of growth biostimulators in production of planting material of northern white cedar | |
CN104350921A (zh) | 一种人造段木栽培天麻的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20170925 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200826 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210721 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210909 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220109 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220202 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220304 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7045007 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |