JP2018536650A - 抗d因子抗体変異体コンジュゲート及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2015年10月30日に出願された米国仮出願第62/249,020号及び2015年11月4日に出願された米国仮出願第62/250,965号の優先権の利益を主張し、これら両出願の全内容を出典明示により援用する。
本出願は、アスキーフォーマットで電子的に提出され、全内容が出典明示により本願に援用される配列表を含む。2016年10月27日に作成された前記アスキーコピーはP33044−WO.txtという名称であり、172,164バイトのサイズである。
HVR−L1:ITSTDIDDDMN(配列番号5);
HVR−L2:GGNTLRP(配列番号6);
HVR−L3:LQSDSLPYT(配列番号7);
HVR−H1:GYTFTNYGMN(配列番号8);
HVR−H2:WINTYTGETTYADDFKG(配列番号9);及び
HVR−H3:EGGVNN(配列番号10)。
その対応する変異体は、以下の置換のうちの一又は複数を含む:
(a) 配列番号5のD5S、
(b) 配列番号5のD7E、
(c) 配列番号5のD8S(a、b及びcは配列番号22で示される)、
(d) 配列番号9のD13E(配列番号23)、
(e) 配列番号7のD4E(配列番号24)、又は
(f) 配列番号10のN5S(配列番号25)。
幾つかの実施態様において、前記参照抗D因子抗体は、配列番号54−74及び116からなる群から選択される重鎖定常ドメインのアミノ酸配列を含む。
本出願の全体を通じて用いられる用語は、当技術分野の当業者にとり通常の及び典型的な意味として解釈されるものである。しかしながら、以下の用語については、出願人は、以下のとおり定義するものとする。
A) 24−34(L1)、50−52(L2)、91−96(L3)、26−32(H1)、53−55(H2)及び96−101(H3)(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))、
B) L1の24−34、L2の50−56、L3の89−97、H1の31−35B、H2の50−65及びH3の95−102(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))、
C) 30−36(L1)、46−55(L2)、89−96(L3)、30−35(H1)、47−58(H2)、93−100a−j(H3)(MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996))。
画分X/Y × 100
式中、Xは、配列アラインメントプログラムALIGN−2を用い、A及びBのアラインメントでのプログラムにおいて、同一マッチとして記録されたアミノ酸残基の数であり、Yは、Bのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さが、アミノ酸配列Bの長さと等しくない場合、Bに対するAのアミノ酸配列同一性(%)は、Aに対するBのアミノ酸配列同一性(%)と等しくないことが理解される。特に断りのない限り、本明細書で用いられる全てのアミノ酸配列同一性(%)の値は、ALIGN−2コンピュータプログラムを用いて、直前の段落で述べたようにして得られる。
幾つかの態様において、本開示は、一又は複数の抗D因子抗体又はその変異体を含むコンジュゲートの産生及び使用に関する。本開示のコンジュゲートの形成への使用に適する抗D因子抗体及びその変異体は、参照により全開示内容が本明細書に援用される米国特許出願第14/700853号(2015年4月30日出願)に記載されている。
(1) 疎水性:ノルロイシン、met、ala、val、leu、ile、
(2) 中性の親水性:cys、ser、thr、asn、gln、
(3) 酸性:asp、glu、
(4) 塩基性:his、lys、arg、
(5) 鎖配向に影響する残基:gly、pro、及び
(6) 芳香族:trp、tyr、phe。
抗D因子抗体において、本明細書で望ましいと同定される特性を有する抗体は、インビトロ又はインビボで、D因子結合親和性及びD因子阻害活性など、望ましい性質に関してスクリーニングされ得る。
幾つかの態様において、本開示のコンジュゲートで用いられる抗D因子抗体変異体は、それらが由来する親抗D因子抗体と競合する。前記親抗D因子抗体と同じエピトープと結合する抗D因子抗体変異体も提供される。
抗D因子抗体又はその変異体若しくは断片(例えば抗原結合断片)がD因子と結合し、生物学的効果(例えば副経路溶血の阻害)を及ぼし得るか否かを決定するために、実施例2に記載のものを含むウサギRBCを用いた溶結阻害アッセイを用いてもよい。かかる溶血阻害は、標準分析を使用して決定され得る(Kostavasili et al. (1997) J of Immunology 158:1763-72、Wiesmann et al. (2006) Nature 444:159-60を参照)。かかるアッセイにおける補体活性化は、血清又は血漿で行ってもよい。血清又は血漿中のD因子の適正濃度(Pascual et al. (1998) Kidney International 34:529-536、Complement Facts Book, Bernard J. Morley and Mark J. Walport, editors, Academic Press (2000)、Barnum et al. (1984) J. Immunol. Methods, 67: 303-309)は、Pascual et al. (1998) Kidney International 34:529-536及びBarnum et al. (1984) J. Immunol. Methods 67:303-309などの参考文献に記載のものを含む、当該技術分野で公知の方法により常套的に決定できる。本開示は、一般に、D因子が関与する生物活性を阻害できる抗体に関する。例えば18μg/mlの濃度で(血液中のヒトD因子のモル濃度の約1.5倍に相当、D因子に対する抗D因子抗体のモル比が約1.5:1)、抗体による他の補体価の顕著な阻害を観察することができる(米国特許第6956107号明細書参照)。
a.マルチアーム型ポリマー
幾つかの態様において、本開示のコンジュゲートは、マルチアーム型ポリマーで前記抗体又はその変異体を活用させることにより本明細書に記載の前記抗D因子抗体又は抗体変異体を誘導体化することにより作られることができる。いうまでもないが、前記コンジュゲートに望ましいサイズを与えるか、又は本明細書に記載の選択された平均分子量を有するいかなるマルチアーム型ポリマーも、本開示の抗体−ポリマーコンジュゲートの構築への使用に適する。
式中、各mは前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、nは約1から約10の整数である。
式中、各mは前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000に、又は約3から約250、又は、約50から約200、又は約100から約150の整数であり、nは約1から約10の整数である。
式中、各mは前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、nは約1から約10の整数である。
式中、各mは前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数である。
式中、各mは前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、nは約1から約10の整数であり、各R1は独立して存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基であり、少なくとも一つのR2は末端反応性基である。幾つかの実施態様において、R2は、チオール反応性基、アミノ反応性基及びそれらの組合せからなる群から選択される。
かかる実施態様において、前記オクタマーは、一般式(Ib)の構造を有する:
式中、m、R1及びR2は、上記で定義されるとおりである。具体的には、一実施態様において、各mは、前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、各R1は独立して存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基であり、少なくとも一つのR2は末端反応性基である。幾つかの実施態様において、R2は、チオール反応性基、アミノ反応性基及びそれらの組合せからなる群から選択される。
R1及びR2は、まとめると、
及びそれらの組合せからなる群から選択され、式中、各iは独立して0−10の整数であり、jは0−10の整数であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、各R1は結合基である。
式中、R1及びR2は、まとめると、
であり、i、j及びR2は本明細書で定義されるとおりである。
幾つかの実施態様において、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは2であり、jは2又は3であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。
幾つかの実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは一般式(Ia)又は(Ib)の構造を有し、式中、R1及びR2は、まとめると、
であり、i及びjは上記のとおり定義される。一実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは一般式(Ia)又は(Ib)の構造を有し、式中、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは2であり、jは2である。
式中、各mは、前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、nは約1から約10の整数であり、各R1は独立して存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基であり、少なくとも一つのR2は末端反応性基である。幾つかの実施態様において、R2は独立してチオール反応性基、アミノ反応性基及びそれらの組合せからなる群から選択される。
幾つかの実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、nが3である一般式(IIa)の構造を有する。別の実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、nが2である一般式(IIa)の構造を有し、前記マルチアーム型PEGはテトラマーである。別の実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、nが4である一般式(IIa)の構造を有し、前記マルチアーム型PEGはヘキサマーである。別の実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、nが6である一般式(IIa)の構造を有し、前記マルチアーム型PEGはオクタマーである。一般式(IIa)の構造を有するオクタマーは、ヘキサグリセリン(HG)コア構造を有し、本明細書ではHGオクタマーとも称する。
R1及びR2は、まとめると、
及びそれらの組合せからなる群から選択され、各iは独立して0約10の整数であり、jは0約10の整数であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、各R1は結合基である。
であり、i、j及びR2は本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは2であり、jは2又は3であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。
であり、i及びjは上記のとおり定義される。幾つかの実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、一般式(IIa)の構造を有し、式中、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは2であり、jは2である。
式中、各mは、前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、nは約1から約10の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基であり、少なくとも一つのR2は末端反応性基である。幾つかの実施態様において、R2はチオール反応性基、アミノ反応性基及びそれらの組合せからなる群から独立して選択される。
及びそれらの組合せからなる群から選択され、各iは独立して0−10の整数であり、jは0−10の整数であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、各R1は結合基である。
であり、i、j及びR2は本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは2であり、jは2又は3であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。
であり、i及びjは上記のとおり定義される。幾つかの実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、一般式(IIIa)の構造を有し、式中、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは3であり、jは2である。
式中、各mは、前記ポリオール(PEG)の特定のアームの長さ又はサイズを意味し、独立して約45から約1000、又は約3から約250、又は約50から約200、又は約100から約150の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基であり、少なくとも一つのR2は末端反応性基である。幾つかの実施態様において、R2はチオール反応性基、アミノ反応性基及びそれらの組合せからなる群から独立して選択される。
R1及びR2は、まとめると、
及びそれらの組合せからなる群から選択され、各iは独立して0−10の整数であり、jは0−10の整数であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、各R1は結合基である。
であり、i、j及びR2は、本明細書で定義されるとおりである。幾つかの実施態様において、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは2であり、jは2又は3であり、R2は本明細書で定義されるとおりである。
であり、i及びjは上記のとおり定義される。幾つかの実施態様において、前記官能化されたマルチアーム型PEGは、一般式(IVa)の構造を有し、式中、R1及びR2は、まとめると、
であり、iは3であり、jは2である。
幾つかの実施態様において、本開示は、本発明で開示される一又は複数の抗D因子抗体又は抗体変異体、及び一又は複数のマルチアーム型ポリオールを含むコンジュゲートに関し、前記コンジュゲートは、少なくとも一つの抗D因子抗体又は抗体変異体を前記ポリオールに共有結合的に連結することにより調製される。幾つかの実施態様において、前記マルチアーム型ポリオールはPEGである。幾つかの実施態様において、前記PEGはオクタマーである。幾つかの実施態様において、前記PEGは、一般式(Ia)、(Ib)、(IIa)、(IIIa)又は(IVa)の構造を有する。
1)PEG中のアーム数
2)PEG上の末端反応性基の数及び/又は反応性
3)PEGのコア構造、並びに/又は
4)PEG化反応条件。
前記PEG化タンパク質は、SDS−PAGE、ゲル濾過、NMR、ペプチドマッピング、液体クロマトグラフィー−質量分析及びインビトロ生物学的アッセイにより特徴を明らかにすることができる。ファビレーションの程度は、典型的には最初にSDS−PAGEにより示される。10%のSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動は、典型的には溶離バッファー(10mMのトリス−HCl(pH8.0)、100mMのNaCl)中で行う。どの残基がPEG化されているかを示すため、トリプシンやLysCプロテアーゼなどのプロテアーゼを用いたペプチドマッピングを実施できる。このように、PEG化及び非PEG化抗体の試料をLys−Cプロテアーゼなどのプロテアーゼで消化し、得られたペプチドを逆相HPLCなどの技術により分離することができる。産生されたペプチドのクロマトグラフィーパターンを、抗D因子ポリペプチド用に事前に決定されたペプチドマップと比較することができる。
本開示のコンジュゲートを用いた治製剤は、貯蔵のため、凍結乾燥剤又は水溶液として調製されてもよく、その際には、望ましい純度の前記コンジュゲートと、当該技術分野で典型的に使用される任意の「薬学的に許容される」担体、賦形剤又は安定剤(全てをまとめて「賦形剤」と称する)とを混合することにより調製される。例えば、緩衝剤、安定剤、防腐剤、等張剤、非イオン性界面活性剤、抗酸化剤及び他の種々の添加剤が挙げられる。(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, A. Osol, Ed. (1980)を参照)。かかる添加剤は、使用される投与量及び濃度において、レシピエントに無毒でなければならない。
本開示の他の実施形態は、本開示の抗体、又はその変異体、又はその断片(例えば抗原結合性断片)が標的とする症状の治療、予防及び/又は診断に有用な材料を含む製造品である。例えば、本開示は、補体関連障害の治療、予防及び/又は診断に有用な材料を含む製造品に関する。前記製造品は、容器と、当該容器上の、又はそれに関連するラベル又は添付文書とを含む。適切な容器としては、例えばボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。前記容器は、種々の材料(例えばガラス又はプラスチック)から製造され得る。前記容器は、前記補体関連の症状の治療、予防及び/又は診断に効果的である組成物を保持するものであり、滅菌アクセスポートを有してもよい(例えば前記容器は、皮下注射用ニードルにより穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい)。前記組成物中の少なくとも一つの活性剤は、本開示の抗D因子抗体コンジュゲートである。前記ラベル又は添付文書は、前記組成物が特定の症状の治療、予防及び/又は診断に有用であることを示す。
本開示のコンジュゲートは、哺乳動物を処置するのに用いられ得る。幾つかの実施態様において、前記コンジュゲートは、例えば前臨床データを得るために、ヒト以外の哺乳動物に投与される。処置を受ける典型的なヒト以外の哺乳動物としては、前臨床研究に供される、ヒト以外の霊長類、イヌ、ネコ、げっ歯動物及び他の哺乳動物が挙げられる。かかる哺乳動物は、前記抗体を用いる処置を受ける疾患用の確立された動物モデルであってもよく、又は、目的の前記抗体の毒性研究用のものであってもよい。これらの実施態様の各々において、用量漸増研究を前記哺乳動物に対して行ってもよい。
ランパリズマブ、すなわち、D因子の液蔬菜との結合を通じて強力にD因子及び補体活性化第2経路を阻害するヒト化抗D因子Fab断片は、現在地図状萎縮(GA)(進行したドライ型AMDの形態)の処置のために現在臨床試験が行われている。ランパリズマブ(FCFD4515S、以下「aFD」)は抗体のFab断片であり、214残基の軽鎖(配列番号1)及び223残基の重鎖(配列番号2)を含む。
有望な単一及び組合せ変異体を用いて、D因子(fD)結合親和性及びD因子活性の阻害能力を試験した。
固定化されているaFD.WTへの、D因子及びその変異体の結合動態及び結合定数KDを、Biacore(登録商標)T200装置を用い、表面プラスモン共鳴(SPR)測定により測定した。製造業者により提供されるプロトコールに従い、抗huFab捕捉(GEヘルスケア社、Cat. # 28−9583−25)を用いて、抗体Fab断片をSeries S CM5センサーチップに固定した。2倍希釈系列で0.39nMから25nMまでヒトD因子の濃度を変化させた溶液を注入した60μLアリコートについて記録したセンサーグラムから結合動態を算出した。流速は30μL/分、ランニングバッファーはHBS−P+、分析温度は25℃、リアルタイムでの比較セル減算を採用し、D因子注入後の解離を10分間追跡した。ランニングバッファーの注入において観察されたセンサーグラムの減算後、BiaEvalソフトウェアv4.1(GEヘルスケア社)を用い、1:1モデルに従いデータを解析し、動態及び結合定数を算出した。
aFD.WT及び変異体を用いて、副経路(AP)溶血アッセイを用いてD因子誘導性の補体活性化を阻害する能力を試験した。ウサギ赤血球(Er)を用いた前記AP溶血アッセイは、過去に報告されている。Pangburn (1998), Methods. Enzymol. 162:639、Katschke et al. (2009) J. Biol. Chem. 284:10473。Er(Colorado Serum社)を0.5%のウシ皮膚ゼラチン/ベロナールバッファー(GVB)で3回洗浄し、再懸濁した。aFDの希釈液を2×希釈系列で調製し、96ウェルポリプロピレンプレートに添加した。Er懸濁液をGVB/0.1M EGTA/0.1M MgCl2と混合し、前記プレートに添加した。補体活性化は、古典経路を経由するいかなる補体活性化も回避するため、C1qを低減させたヒト血清の添加により開始させた(CompTech; GVBで1:3希釈)。室温での30分間のインキュベート後、10mMのEDTA/GVB溶液を添加して反応を停止させた。前記プレートを遠心分離し、上清を移した。前記上清の吸光度を412nmで測定した。最大に対する50%阻害を生じさせるAFD.Ab濃度(IC50)を、非直鎖回帰分析により測定した。
SPRはまた、所定の条件下での時間経過に伴うAFD.Ab変異体のfDへの全結合量の測定にも用いた。これらの測定の標準誤差は±10%である。図2Aは、pH5.5で、aFD.WT並びにAFD.Ab変異体D30E(AFD.v2)及びTM(AFD.v6)において、1カ月間で結合性の喪失が約40%であったが、一方で、長期間(70日)の経過においても、SIESD(AFD.v8)及びSIESD.N103S(AFD.v14)の場合には結合性の喪失が約15%程度と小さかったことを示す。比較として、抗VEGF抗体Fab断片(aVEGF)は、70日以上にわたり結合性の喪失を示さなかった。pH7.4の条件への塩の添加は、aFD.WT及びaVEGFの場合、結合性喪失を加速すると考えられた(データ示さず)。図2Bで示すように、PBSの存在下では(Fabタンパク質濃度が100mg/ml)、D30E(AFD.v2)及びTM(AFD.v6)は、aFD.WTで観察される場合と同等の、結合性喪失率を示した。37℃で10週後の結合性喪失は、aFD.WTでは約30%であり、抗D因子のD30E(AFD.v2)及びTM(AFD.v6)変異体では20%であった。37℃で10週後の結合性喪失は、SIESD.N103Sではわずか10%であり(AFD.14;図2B)、実験誤差を超えるものではなく、また同じ条件下でaVEGFの場合に観察された結果に等しかった。PBS中の100mg/mLのFab濃度での熱ストレス試験をSIESD(AFD.v8)において繰り返し、70日に及ぶデータを収集した。図2Cで示すように、70日における結合性喪失は、SIESD(AFD.v8)では10%未満だった。
上記の親和性アッセイに基づき、幾つかの抗D因子抗体変異体を単独及び組合せで選択し、更なる安定性分析を行った。
最初に、試料を低イオン強度及びpH6における溶解度について試験した。最初に、Amicon Centriprep YM−10遠心濾過ユニットを用いて、試料を〜100 mg/mLの濃度で、20mMのHis−HCl(pH5バッファー)を用い調製した。pH5及び低イオン強度を有するこれらの溶液は、目視検査により混濁を示さなかった。試料を10分間14,000xgで遠心分離し、あらゆる不溶性物質をペレット化した。ペレットは観察されず、溶液中のタンパク質濃度をUV吸光度測定値により決定した。試料(〜1mL)を10K MWCO(Pierce社)のSlide−A−Lyzerカセットに置き、4℃で一晩、20mMのHisバッファー(pH6)1Lで透析し、続いて混濁の有無を目視検査した。撮影した溶液の写真を図6に示す。pH6及び低イオン強度条件(20mMのHis−HCl(pH6)中、〜100mg/ml)では、aFD.WT及びD30E(AFD.v2)の溶液は顕著に混濁していたが、TM(AFD.v6)溶液は混濁が少なく、SIESD(AFD.v8)の溶液は透明だった(図6)。上記のように遠心分離した後、aFD.WT及びAFD.v2ではかなりのペレットが、TM(AFD.v6)では少量のペレットが視覚的に観察され、SIESD(AFD.v8)ではペレットが存在しなかった。上清中のタンパク質濃度をUV吸光度測定値により決定した(表3)。aFD.WT及びD30E(AFD.v2)は50mg/mlより低い溶解度を示し、TM(AFD.v6)では100mg/mLに近い溶解度を示し、またSIESD(AFD.v8)はこれらの条件下で完全に可溶性だった。pH5での開始濃度に対するpH6での透析後のSIESD(AFD.v8)のタンパク質濃度の減少が少なかったことは、ペレットが遠心分離後に観察されなかったことから、AFD.v8の沈殿よりもむしろ透析による希釈の影響を反映するものである。
長時間作用性送達系で見られ得る種々の条件への変異体の曝露を模倣するため、抗体を37℃で数週間、pH及び塩条件を変化させて負荷をかけた。
具体的には、抗体を以下の5つの異なる製剤組成で評価した:
製剤1:10mg/mL、pH2.5の10mMのリン酸バッファー、
製剤2:10mg/mL、pH5.5の10mMのヒスチジンHCl、
製剤3:10mg/mL、pH7.4の10mMのリン酸塩バッファー(「低塩」)、
製剤4:10mg/mL、pH7.4のPBS(「高塩」: 10mMのリン酸塩、137mMのNaCl)、及び
製剤5:100mg/mL、pH7.4 PBS。
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)を用い、試験した抗体の凝集体及びモノマーの形成を定量化した。TSK−GEL Super SW2000(Tosoh Biosci社)カラムを用いた。製造業者の指示(www.tskgel.com)に基づく材料及び条件を用いた。
HVR配列のリストを示す(変異体中の置換を下線で示す)。
上記の安定性試験結果に基づき、AFD.v8を用い、低イオン強度、pH5.5バッファー中で、熱(37℃)ストレス試験を行い、高濃度製剤への適合性を評価した。約100mg/mLのAFD.v8の溶液を調製し、20mMの塩酸ヒスチジン(His−HCl)(pH5.5)で透析し、次にAmicon YM−10遠心濾過ユニットを用いて濃縮した。前記濾過ユニットの除去後のタンパク質濃度を280nmでの吸光度測定値により、272mg/mLと決定した。滅菌済みSpin−X(Costar社)遠心チューブフィルターを用い、100μLのアリコートを0.22μm酢酸セルロースフィルターで濾過した。スナップキャップ付きエッペンドルフチューブ内の濾過液をパラフィン封入し、37℃に維持した温暖な部屋に置いた。0、1、2、4及び8カ月の所定の時期にチューブを取り出し、貯蔵バッファー(10mMのHis−HCl、pH5.5、10%のトレハロース、0.01%のポリソルベート20)を900μL添加して10倍希釈し、分析実行まで約−70℃で冷凍保存した。試料を用い、イオン交換クロマトグラフィー(IEC)により電荷変異体の生成を、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)により凝集体の存在を、表面プラスモン共鳴音(SPR)測定値により抗原結合能の維持、またペプチドマッピングにより可変ドメインの特異的な化学的変化を、それぞれ解析した。IECは実施例3(段落[00292])に記載のように、SECは実施例3(段落[00294])に記載のように実施した。SPR及びペプチドマッピングは後述のように実施した。
AFD.v8の試料を、1.5mLのエッペンドルフチューブ中で、1mg/mLまで、RCMバッファー(6MのグアニジンHCl、360mMのトリス、2mMのEDTA、pH8.6)で希釈した。20mMの最終濃度となるよう1Mのジチオスレイトール(DTT)を添加し、次に1時間37℃でインキュベートし、還元反応を開始させた。還元の後、50mMの最終濃度となるように1Mのヨード酢酸(IAA)を添加し、15分間室温、暗所でインキュベートし、アルキル化反応を実施した。還元及びアルキル化された試料を、G−25 Minitrapカラムを用いて、消化バッファー(25mMのトリス、2.0MのCaCl2、pH8.2)でバッファー交換した。トリプシン 対 タンパク質比率1:40(質量)でトリプシンを添加し、消化物を4時間37℃でインキュベートし、反応を完了させた。
Thermo Orbitrap Q Exactive質量分析計と連結させたWaters H−Class Acquityを用い、LC/MS−MS分析を行った。10μgのトリプシン消化された試料を、Waters Acquity UPLC CSHカラムにロードし、以下のLC条件で分析した:
移動相A−H20中の0.1%のFA
移動フェーズB−ACN中の0.1%のFA
カラム温度:77℃
流速:0.2mL/分。
固定化されているヒトD因子との結合における機能的活性を、SPR測定値により評価した。Series S CM5センサーチップをBiacore(登録商標)T200 instrument1(GEヘルスケア社)に装着し、前記製造業者のプロトコールに従い、1Xランニングバッファーで初期化し、70%のグリセロールで標準化した。アミンカップリングキットを用いて、製造業者により提供される材料及び提案されるプロトコールに従い、前記センサーチップ表面を抗原とのアミン結合のために活性化した。前記センサーチップのフローセル上に、10mMの酢酸ナトリウム(pH5)中のfD(2.4mg/mL)の希釈により調製した、100μg/mLのfDを含む溶液を注入し、ヒトD因子(fD)を共有結合的に固定させた。流速は10μL/分であり、70μLの量を用いて注入した。これにより、複数の実験にわたり、約5000共鳴単位(RU)の典型的なfDの結合密度が得られた。未反応のアミンカップリング部位を、70μLの1Mのエタノールアミンの注入によりブロックした。
この熱ストレス試験の結果は、AFD.v8が高濃度製剤中で安定な分子であることを示す。80%超の抗原結合能が、37℃で4カ月後にも維持されていた(図10A)。4カ月後においてもごくわずかな凝集体形成しか起こらず、タンパク質はSECによるとほぼ100%モノマーであった(図10B)。酸性種が約15%に増加し(図10B、酸性(%)−IEC)、塩基性種が約20%に増加していた(図10B、塩基性(%)−IEC)ことから示されるように、若干の化学的変化が4カ月後で生じていた。37℃で8カ月後、酸性及び塩基性種の更なる増加、モノマー含量の低下及びD因子結合能の低下が見られた。ペプチドマッピングは、前記酸性種が主にCDR−H3のAsn−103(カバット番号付けに従えばAsn−101)の脱アミド化から生じ(図10B、CDR−H3 N101の脱アミノ化(%))、一方、塩基性変異体では、重鎖のN末端のピログルタミン酸形成(図10B、HC−E1スクシンイミド(%))及びCDR−H3の残基Glu−99(カバット番号付けに従えばGlu−95)の異性化(図10B、CDR−H3 E97の異性化(%))から生じることを示唆する。Asn−103及びGlu−99(カバット番号付けに従えばそれぞれAsn−101及びGlu−95)は、ランパリズマブとD因子との共結晶構造中でD因子と接触しているが(Katschke KJ, Jr., Wu P, Ganesan R, Kelley RF, Mathieu MA, Hass PE, Murray J, Kirchhofer D, Weismann C, van Lookeren Campange M, "Inhibiting alternative pathway complement activation by targeting the factor D exosite"、J. Biol. Chem. (2012) 287:12886-92)、重鎖のN末端はそうではないため、Asn−103の脱アミド化及びGlu−99の異性化は、モノマー含有量の減少と同様に、8カ月後におけるD因子との結合性喪失に直接影響すると考えられる。にもかかわらず、これらの化学的及び物理的変化の速度が遅いこと、低温では更なる速度減少が予想されることを考え合わせると、AFD.v8の高濃度液体製剤は、2−8℃での保存、又は約−20℃での凍結が、許容される貯蔵期限を提供するものと考えられる。
ウサギにおける、AFD.v8及びAFD.v14のインビボpK試験を実施した。ヒト化抗体は、反復投与すると、又は製剤の持続的送達により曝露量が増加すると、ウサギにとり免疫原性となるため、単回投与実験からpKパラメータを決定した。
硝子体内投与にとり低い粘性が重要であるため、SIESD(AFD.v8)及びSIESD.N103S(AFD.v14)の粘性を、pH5.5(低塩バッファー)中、タンパク質濃度を変化させて測定した。粘度測定は、TA Instruments社製の、25℃に温度制御された円錐状及びプレート状レオメーターにて、1000s−1の剪断速度を用いて行った。
上記の実施例で記載したaFD.WT及び変異体は、Fab断片である。それらの軽鎖及び重鎖(VL及びVH)の可変ドメインは、図1Bで示すように配列間で変動するが、それらの定常ドメインCL及びCH1は同じままである。特に、重鎖のCH1ドメインは、図1A(配列番号2)、図1C(配列番号27)及び図1D(配列番号29)で示すようにスレオニン残基で終わる。PEG化などのポリマーコンジュゲーションのためのAFD.Ab変異体を調製するため、Fab断片の重鎖を、Fab’相対物のヒンジ領域由来の最初のシステイン残基を付加することにより更に修飾して(例えばAFD.v8のCys修飾HC(Fab−C)(配列番号30)、及びAFD.v14のCys修飾HC(Fab−C)(配列番号32))、付加した当該システインをPEGポリマーの結合部位として用いる。したがって、得られた断片は、マルチアーム型PEGの1本のアームとコンジュゲートできる。前記Fab断片の重鎖はまた、Fab’相対物のヒンジ領域由来の最初の4つの残基(すなわちCys−Pro−Pro−Cys)(配列番号21)を付加することにより修飾され(例えばAFD.v8のCys−Pro−Pro−Cys−修飾HC(配列番号31)、及びAFD.v14のCys−Pro−Pro−Cys−修飾HC(配列番号33))、付加された2つのCysが両方ともPEGとの結合部位として用いられ、2つのPEG分子の取り付けできる修飾AFD.Ab Fab断片が得られる。
実施例7で調製したCys修飾HC(配列番号32)を含む前記AFD.v14変異体(ここでは「Cys修飾AFD.v14変異体」又は「AFD.v14.C」と称する)を、様々なコア構造を有する市販のマレイミド官能化マルチアーム型PEGとコンジュゲートした。
表8に詳細に示すマレイミド官能化マルチアーム型PEGを、コンジュゲーション反応に用いた:
実施例7で調製したCys修飾AFD.v14変異体を、Gamma Plus樹脂を使用して捕捉し、5倍カラム量の6.5mMのGSH(pH8.5)で洗浄し、C−端末システインのブロックを除去し、Fab−Cダイマー構造を破壊し、続いて0.1Mの酢酸(pH2.9)で溶出した。Cys修飾AFD.v14モノマーを、25mMの酢酸ナトリウム(pH5.0、0.05%のTritonX−100+0.05%のTritonX−114)中、SPセファロース高性能強カチオン交換樹脂(GEヘルスケア社)を用い、更に19時間単離し、エンドトキシンを除去した。20倍カラム量にわたり、0−20%の、25mMの酢酸ナトリウム(pH5.0+1MのNaCl)の濃度勾配で溶出を実施した。ブロックを除去されたC−端末システインを有するモノマーのFab−Cを次に、1MのHEPES(pH7.2)を用いてpH6.5に滴定し、PEG化用に調製した。前記Cys修飾AFD.v14 Fab−Cを次に、25mMの酢酸ナトリウム(pH6.5、150mMのNaCl、4mMのEDTA)中で、約5mg/mLの濃度で、マレイミド官能化マルチアーム型PEGとコンジュゲートさせた。前記Cys修飾AFD.v14変異体は、Fab−Cダイマー化に起因するシステイン反応性の喪失を最小化するため、更なる濃縮を行わなかった。室温に平衡化した後、前記マレイミド官能化マルチアーム型PEGを25mMの酢酸ナトリウム(pH5.0)中に再懸濁し、10mg/mLの濃度とした。マレイミド開環を回避するため、pHを6以下に維持した。PEGを可溶化した後、Fab−Cプールに、PEG:Fab−Cが0.1125:1のモル比となるよう添加した。前記混合物を次に、穏やかに振盪しながら室温で一晩静置した。翌日、コンジュゲート効率(# Fab/PEG)をSEC−MALSにより確認した。
実施例8で調製した前記コンジュゲートを精製し、SEC−MALSを使用して分析し、PEG化を確認し、異なるPEGコア構造におけるコンジュゲート効率を測定した。別途指示がない限り、コンジュゲート効率は、300×8mmのShodex OH pak SB−804を用いたサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)により、イソクラティック条件下、リン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH7.2、150mMのNaCl)を使用した0.8mL/分のランで測定した。モル質量は、Wyatt Technology社のインライン静的マルチアングルレーザー光散乱(Multi−Angle laser Light Scattering)(MALS)を使用し測定した。準弾性光散乱(Quasi−Elastic Light Scattering、QELS)(99.0°の測定による単一光子計測モジュール、Wyatt Technology社)を用い、光子相関分光法により、流体半径(RH)を測定した。生データは、Wyatt社の独自のAstraソフトウェアを使用して加工し、その際、モル質量及びRH定数はリツキシマブ標準を使用して設定した。
実施例8で調製したCys修飾AFD.v14−8ARM(TP)−PEG−MALコンジュゲート(TPコア構造を含む)(以下「AFD.v14 TPコンジュゲート」又は「AFD.v14.C+TPオクタマー」)を、20mMのHis−酢酸(pH5.5、50mMのNaCl、イソクラティック勾配)にて、Sephacryl S−300 HR(GEヘルスケア社)カラム上で、SECを使用して精製した。モル質量及びコンジュゲート効率は、Wyatt Technology社のインライン静的マルチアングルレーザー光散乱(Multi−Angle laser Light Scattering)(MALS)及びShodex OH pak SB−804を使用し測定した(図14C)。生データは、Wyatt社の独自のAstraソフトウェアを使用して加工し、その際、モル質量定数はリツキシマブ標準を使用して設定した。モル質量は、各PEGに連結したAFD.v14変異体の平均数の推定に用いた。結果を図14A、14B及び14C、並びに表9に示す。
実施例8で調製したCys修飾AFD.v14−8ARM−PEG−MALコンジュゲート(HGコア構造(JenKem社)を含む)(以下「AFD.v14 HGコンジュゲート」又は前記「AFD.v14.C+HGオクタマー」)を、20mMのHis−酢酸(pH5.5、50mMのNaCl、イソクラティック勾配)にて、Sephacryl S−300 HR(GEヘルスケア社)カラム上で、SECを使用して精製した。モル質量及びコンジュゲート効率を、東ソーG3000PWカラム及びWyatt Technology社のインライン静的MALSインライン静的MALSを使用して測定した。準弾性光散乱(QELS)(99.0°の測定による単一光子計測モジュール、Wyatt Technology社)を用い、光子相関分光法により、流体半径(RH)を測定した。生データは、Wyatt社の独自のAstraソフトウェアを使用して加工し、その際、モル質量定数はリツキシマブ標準を使用して設定した。モル質量は、各PEGに連結したAFD.v14変異体の数の推定に用いた。結果を図15A、15B及び15C、並びに表10に示す。
実施例8で調製したCys修飾AFD.v14−HGEO−400MAコンジュゲート(Sunbright(登録商標)HGEO−400MA PEGを含む)(以下「AFD.v14 HGEOコンジュゲート」又は「AFD.v14.C+HGEOオクタマー」)を、20mMのHis−酢酸(pH5.5、50mMのNaCl、イソクラティック勾配)中、Sephacryl S−300 HR(GEヘルスケア社)カラム上でのSECにより精製した。モル質量、コンジュゲート効率及びRHは、Sephacryl S−400HRを用い、PBS(pH7.4)中の0.25mL/分のランにより、上記のように測定した。
製剤の粘性を有意に増加させることなく、硝子体内用の製剤中のFab濃度を増加させる一つの方法は、製剤中の高度にファビレート(fabylated)されたコンジュゲートのパーセンテージを上昇させることである。本実施例では、陽イオン交換クロマトグラフィーを用い、高度にファビレートされたコンジュゲートの濃縮を行った。
実施例8で調製した、8ARM−(TP)−PEG−MAL(TPコア構造を含む)、8ARM−PEG−MAL(HGコア構造(JenKem社)を含む)又は前記Sunbright(登録商標)−DX−400MA PEG(ブタンジオールコア構造を含む;「AFD.v14 DXコンジュゲート」又は「AFD.v14.C+DXオクタマー」と称する)のいずれかを含むコンジュゲートの特性を、SEC−MALSを使用して比較した。HG及びDXコンジュゲートを、20mMのHis−酢酸(pH5.5、50mMのNaCl、イソクラティック勾配)中、Sephacryl S−300 HR(GEヘルスケア社)カラムを用いたSECにより精製した。TPコンジュゲートの場合、実施例9aで述べたように、Sephacryl S−300 HRによる精製後のプール画分(「CEXロード」)、並びに、実施例10で述べたようにCEX富化後に得られたプール画分(「TPファイナル」)を用いた。モル質量及びコンジュゲーション効率は、Wyatt TechnologyのMALS及び300×8mmのShodex OH pak SB−804 HQによる、イソクラティック条件下、リン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH7.2、150mMのNaCl)を使用した0.8mL/分のランにより測定した。RHは上記のように測定した。結果を図22A、22B及び表13に示す。
低い粘性が硝子体内投与にとり重要であるため、実施例8で調製した、PEGオクタマー(JenKem Technology社(米国)の8ARM(HG)−PEG−MAL;AFD.v14.C+HGオクタマー)又はPEGテトラマー(NOF America社のSunbright(登録商標)PTE−400MA)のいずれかとコンジュゲートさせたCys修飾AFD.v14変異体(AFD.v14.C)の粘性を、pH7.4のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)溶液中、タンパク質濃度を変化させて測定した。粘度測定は、TA Instruments社製の、40℃に温度制御されたコーン及びプレート型レオメーターにて、1000s−1の剪断速度を用いて行った。結果を図23に示す。
長時間作用性送達系にありがちな条件への、AFD.v14コンジュゲートの曝露を模倣するため、AFD.v14.C+TPオクタマーの試料(実施例8で調製)に対し、37℃で数週間、2つの異なるpH及び塩条件を負荷した。具体的には、以下の製剤においてコンジュゲートを評価した:
材料及び試薬:
AFD.v14.C+TPオクタマー試料を使用前に−70℃から解凍した。シアン化カリウム(KCN)及び3−(2−フロイル)キノリン−2−カルボキシアルデヒド(FQ)試薬は、Molecular Probes社(Eugene,OR,USA)から購入した。一塩基及び二塩基のリン酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド(DMSO)、ジチオスレイトール(DTT)及びN−エチルマレイミドは、シグマアルドリッチ社(St. Louis,MO,USA)から購入した。ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、0.1M 水酸化ナトリウム(NaOH)及び0.1M 塩酸(HCl)試薬は、J.T. Baker社 (Phillipsburg,NJ,USA)から購入した。交換可能な濾過ゲルは、Beckman Coulter社 (Fullerton,CA,USA)から購入した。
Millipore精製システム(Billerica,MA,USA)により得た脱イオン水(18.2MΩ)を用いて水溶液を調製した。0.1Mのリン酸ナトリウム(pH6.7)反応バッファー及び4%のSDSの溶液を、0.2μm膜フィルター(Millipore社、Bedford,MA,USA)で濾過し、使用直前に希釈した。20mMの蛍光FQの原液を、ジメチルスルホキシド(DMSO)中に調製し、−20℃、暗所で保存した。アリコートを解凍し、使用前に水で希釈した。
AFD.v14.C+TPオクタマー(300μg)の溶液を、NAP−5ゲル濾過カラム(GEヘルスケア社、Piscataway、NJ、米国)を用いて、0.5mLのリン酸ナトリウム反応バッファーでバッファー交換し、製剤中の潜在的な競合成分を除去した。脱塩されたコンジュゲートの250μLアリコートを、30μLの150mMのN−エチルマレイミド/4%SDS溶液と混合し、70℃で5分間インキュベートし、変性条件下でのスルフィドの再シャッフリングをコントロールした(Michels, D.A., Brady, L.J., Guo, A., Balland, A., Anal Chem 2007, 79, 5963-5971を参照)。10μLの2.5mMのFQ及び30mMのKCN試薬を、SDS−AFD.v14溶液に添加し、最終溶液を、1%のSDSによる3倍希釈の前に、50℃で10分間インキュベートし、反応をクエンチした。還元分析の場合、希釈された試料のアリコートを、70℃で10分間、50mMのDTTとインキュベートた。
AFD.v14.C+TPオクタマーの試料の分離は、40℃で熱制御されたカートリッジ中の、50μmのID、31.2cm(21cmの有効長)の溶融シリカキャピラリーで実施した(Polymicro technologies社、Phoenix,AZ,USA)。完全自動化したBeckman PA800+システム(Beckman Coulter社、Brea,CA,USA)にLIF検出器を装着し、32 Karat version 9.1を使用し、装置を制御した。前記LIF探知器では、488nmの励起を有する3.5mWのArレーザーを使用し、600±20nmのバンドパスフィルター(Edmund Optics社、Barrington,NJ,USA)により放出光を集めた。ネガティブモード(逆極性)で電圧を印加した。試料溶液を、5kVで25秒間、動電学的に導入し、17kVで分離した。ランの間、キャピラリーを、0.1MのNaOH、0.1MのHCl及びBeckmanゲルバッファーで、それぞれ、5分、1分、1分及び10分、洗浄した(Michels, et al., Anal Chem 2007, 79, 5963-5971、Michels, et al., Electrophoresis 2012, 33, 815-826を参照)。
以下の材料をGEヘルスケア社から購入した:Series S CM5センサーチップ(cat#BR−1005−30)、10×Biacore(登録商標)ランニングバッファー(cat#BR−1006−71)、0.1MのHepes(pH7.4)、1.5MのNaCl、0.5%のポリソルベート(登録商標)20、再生溶液(cat#BR−1003−55):10mMのGly−HCl(pH2.1)、及びアミン結合キット(cat#BR−1000−50)。Series S CM5センサーチップを、Biacore(登録商標)T200装置(GEヘルスケア社)に装着し、前記製造業者のプロトコールに従い、1Xランニングバッファーで初期化し、70%のグリセロールで標準化した。アミンカップリングキットを用いて、製造業者により提供される材料及び提案されるプロトコールに従い、前記センサーチップ表面を抗原とのアミン結合のために活性化した。10mMの酢酸ナトリウム(pH5)によるヒトD因子(fD)(PUR#20491、2.4mg/mL)の希釈により調製した、100μg/mLのfDを含む溶液を注入し、fDを共有結合的に固定させた。流速は10μL/分であり、70μLの量を用いて注入した。これにより、複数の実験にわたり、約5000共鳴単位(RU)の典型的なfDの結合密度が得られた。未反応のアミンカップリング部位を、70μLの1Mのエタノールアミンの注入によりブロックした。BiacoreT200評価用ソフトウェアの較正依存的な濃度分析ルーチンを用い、抗体Fabの抗原結合活性濃度を測定した。原液から5μg/mLにまで質量ベースで希釈し、続いて連続2倍希釈系列により2.5、1.25、0.625、0.313、0.156及び0.078μg/mLの試料を産生し、AFD.v14.C+TPオクタマーの標準曲線を作成した。重量ベースの希釈により試験試料を調製し、約0.5、1.0又は1.5μg/mLのタンパク質濃度を得た。1Xランニングバッファーを使用し、全試料(200μL量)を調製した。25℃に維持され、1Xランニングバッファーで初期化したセンサーチップにより、60μLのアリコートを、10μL/分の流速で特異性抗原の表面上に注入した。特定の抗原と結合した抗体を、前記試料注入が終了する頃のSPRシグナルから測定した。各結合サイクルの終わりに、10mMのGly−HCl(pH2.1)を30μL注入して、抗体−抗原複合体を解離させ、結合した抗体を溶出させた。AFD.v14.C+TPオクタマーの標準曲線を用い、4パラメータ関数を用い、抗体濃度に対するSPRシグナルの相関を求め、データ分析した。前記標準曲線から算出されたパラメータを用いて、観察されたSPRシグナルに基づく試験試料の抗原結合性濃度を算出した。この濃度と吸光度測定値で決定されたタンパク質濃度との比が、結合比率(分数)又は結合(%)となる。
実施例8で調製し、実施例9a及び10に記載のように精製した、AFD.v14.C+TPオクタマーのインビボpK試験を、カニクイザルで実施した。単回投与実験からPKパラメータを測定した。非コンジュゲートの未修飾AFD.v14(SIESD.N103S)をコントロールとして用いた。前記動物の飼育は、ジェネンテック社の動物のケア及び使用委員会(Genentech Institutional Animal Care and Use Committee)ガイドラインに従い行った。
カニクイザル(28匹のオス、2kgから4kg、投薬時の年齢約2−7歳 )を、4つの投薬群のうちの一つに割り当てた。群1(コントロール)の動物(4匹)には、30ゲージのニードル(100μlの投薬ボリューム)により、AFD.v14を、5mg/眼(10mg/動物)で両眼の硝子体内に単回投与した。群2及び3の動物(各群の10匹物)には、30ゲージのニードルを通して、AFD.v14.C+TPオクタマーを1又は4mg/眼(2又は8mg/動物)(それぞれFab重量ベース)で両眼の硝子体内に投与した(各眼に50μlずつを2回注入、100μlの全量ボリューム)。動物を鎮静化し(10mg/kgのケタミンHCl、0.5mg/kgのジアゼパム)、注入前に局所プロパラカイン処置を行った。次に、AFD.v14又はAFD.v14.C+TPオクタマーを、レンズ後方に向けられたニードルにより、角膜輪部の4mm後方の強膜及び毛様体扁平部を通して、中部硝子体に投与した。群4の動物(4匹)には、0.4mg/動物でAFD.v14.C+TPオクタマーを単回静脈内ボーラス投与(1mL)した。静脈内投与の際、AFD.v14.C+TPオクタマーは、10mMのコハク酸ナトリウム、10%のトレハロース及び0.05%のTween−20(pH5.0)として製剤化した。
Gyrolab XPアッセイを用いて、カニクイザル血清、硝子体液、眼房水及び網膜ホモジェネート中のAFD.v14及びAFD.v14.C+TPオクタマーを定量化した。試料を試料バッファー(リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、0.5%のウシ血清アルブミン(BSA)、15ppmのプロクリン(シグマアルドリッチ社)、0.05%のTween 20、0.25%のCHAPS、50μg/mLのmuIgG(Equitech Bio社、Cat. #SLM66)、5mMのEDTA(pH7.4))中に1:4−1:3000で希釈した。前記AFD.v14及びAFD.v14.C+TPオクタマーの標準曲線は、試料バッファーで2.06−1500ng/mLにAFD.v14又はAFD.v14.C+TPオクタマーを連続希釈することにより作成した。捕捉及び検出試薬として、PBS/0.01%のTween 20/0.02%のNaN3中のビオチンコンジュゲート=ヤギ抗ヒトIgG(HC+LC、Bethyl、Cat#A80−319B)、及びRexxip F(Gyrolab)中の25nMのAlexa−抗−CDR(クローン234、Genentech)を、100μg/mL適用した。Gyrolab Bioaffy 200 CDにおいてアッセイを行い、洗浄ステップではPBS/0.01%のTween 20/0.02%のNaN3、続いてGyros pH11洗浄バッファーを使用した。1%のPMT設定で、製造業者の説明書に従い、前記装置を作動させ、データ分析を行った。AFD.v14及びAFD.v14.C+TPオクタマーの濃度は、その標準曲線の5パラメータ回帰から決定した。最小限の定量化可能濃度は、カニクイザルの血清、硝子体液、眼房水及び網膜ホモジェネート中のAFD.v14及びAFD.v14.C+TPオクタマーにおいて8.24ng/mL(0.16nM)であった。
サンドイッチELISAを用いて、カニクイザルの血清、硝子体液、眼房水及び網膜のホモジェネート中のD因子(fD)を定量化した。マウス抗ヒトD因子クローン4676(Genentech社)をコーティングバッファー(0.05Mの炭酸ナトリウム、pH9.6)で1μg/mLに希釈し、384ウェルMaxisorpプレート(Thermo Scientific社、Cat#. 464718)中、4℃で一晩インキュベートした。プレートをPBS+0.05%のTween 20で洗浄し、0.5%のウシ血清アルブミン(BSA)を含むPBSで2時間インキュベートし、ブロッキングした。これと以降の全てのインキュベートは、穏やかに撹拌しながら室温で実施した。カニクイザルのfDの標準曲線は、試料バッファーで0.04−5ng/mLにfDを連続希釈することにより作成した(アッセイバッファーには、500ng/mLの治療剤AFD.v14及び50μg/mLのマウスIgGを補充した)。血清試料及びコントロールを、試料バッファーで最低1:100まで希釈した。硝子体液、眼房水及び網膜のホモジェネート試料、並びにコントロールを、試料バッファーで最低1:10まで希釈した。希釈された標準、コントロール及び試料を次に、2時間プレート上でインキュベートし、AFD.Abに対するビオチンコンジュゲート=マウス抗CDR mAb(クローン242、1μg/mL)を用いて1時間、続いてHigh Sensitivity SA−HRP(3ng/mL、Pierce社、Cat.#21130)により1時間反応させ、プレートに結合したfD/AFD.Ab複合体を検出した。最終的な洗浄後、テトラメチルベンジジンペルオキシダーゼ基質(Moss社、Pasadena,MD)を添加し10−15分間発色させ、1Mのリン酸で反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを用いて、450nmの吸光度について(参照波長620nm)、前記プレートを分析した。fDの濃度は、標準曲線の4パラメータ回帰により算出した。カニクイザル血清中の最小限の定量化可能な濃度は3.9ng/mL(0.16nM)であった。カニクイザルの硝子体液、眼房水及び網膜ホモジェネートの最小限の定量化可能な濃度は0.39ng/ml(0.016nM)であった。
Cys修飾Fab変異体を含むAFD.Ab変異体又はコンジュゲートのD因子の阻害能力は、D因子依存的なB因子活性化の時間分解蛍光エネルギー移動(TR−FRET)アッセイで決定される。
ランパリズマブは従来、カニクイザルで一過性の全身補体機能を阻害することが示されている(Loyet, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2014, Vol. 351, pp. 527-537を参照)。本実施例において、抗D因子抗体変異体又はAFD.Abコンジュゲートの硝子体内投与による、全身補体副経路(AP)活性に対する影響を、カニクイザルで評価した。
AFD.Ab変異体及びコンジュゲートを、分子の前記薬動学(PK)及び薬力学(PD)を評価するために、単回IVT又はIV投与により、中国起源の雄のカニクイザル(M. fascicularis)に投与した。本試験はCovance Laboratories社(Madison,WI)で実施した。全ての処置は、米国の農業及び動物福祉に関する規則(9CFR3)、実験動物の飼育及び使用、並びに実験動物福祉局のガイドに従い実施した。
Gyrolab XPアッセイを用いて、カニクイザル血清中のAFD.v14、AFD.v14.C+TPオクタマー及びAFD.v14.C+HGオクタマーを定量化した。試料を試料バッファー(リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、0.5%のウシ血清アルブミン(BSA)、15ppmのプロクリン(シグマアルドリッチ社)、0.05%のTween 20、0.25%のCHAPS、50μg/mLのmuIgG(Equitech Bio社、Cat. #SLM66)、5mMのEDTA(pH7.4))中に1:4−1:3000で希釈した。前記AFD.v14とAFD.v14 TPとHGコンジュゲート標準曲線は、試料バッファーで2.06−1500ng/mLにAFD.v14、AFD.v14.C+TPオクタマー又はAFD.v14.C+HGオクタマーを連続希釈することにより作成した。捕捉及び検出試薬として、PBS/0.01%のTween 20/0.02%のNaN3中のビオチンコンジュゲート=ヤギ抗ヒトIgG(HC+LC、Bethyl、Cat#A80−319B)、及びRexxip F(Gyrolab)中の25nMのAlexa−抗−CDR(クローン234、Genentech)を、100μg/mL適用した。Gyrolab Bioaffy 200 CDにおいてアッセイを行い、洗浄ステップではPBS/0.01%のTween 20/0.02%のNaN3、続いてGyros pH11洗浄バッファーを使用した。1%のPMT設定で、製造業者の説明書に従い、前記装置を作動させ、データ分析を行った。AFD.v14、AFD.v14.C+TPオクタマー及びAFD.v14.C+HGオクタマーの濃度は、その標準曲線の5パラメータ回帰から決定した。最小限の定量化可能な濃度は、カニクイザル血清のAFD.v14、AFD.v14.C+TPオクタマー及びAFD.v14.C+HGオクタマーにおいて8.24ng/mL(0.16nM)であった。
サンドイッチELISAを用いて、カニクイザル血清中のD因子(fD)を定量化した。マウス抗ヒトD因子クローン4676(Genentech社)をコーティングバッファー(0.05Mの炭酸ナトリウム、pH9.6)で1μg/mLに希釈し、384ウェルMaxisorpプレート(Thermo Scientific社、Cat#. 464718)中、4℃で一晩インキュベートした。プレートをPBS+0.05%のTween 20で洗浄し、0.5%のウシ血清アルブミン(BSA)を含むPBSで2時間インキュベートし、ブロッキングした。これと以降の全てのインキュベートは、穏やかに撹拌しながら室温で実施した。カニクイザルのfDの標準曲線は、試料バッファーで0.04−5ng/mLにfDを連続希釈することにより作成した(アッセイバッファーには、500ng/mLの治療剤AFD.v14及び50μg/mLのマウスIgGを補充した)。血清試料及びコントロールを、試料バッファーで最低1:100まで希釈した。希釈された標準、コントロール及び試料を次に、2時間プレート上でインキュベートし、AFD.Abに対するビオチンコンジュゲート=マウス抗CDR mAb(クローン242、1μg/mL)を用いて1時間、続いてHigh Sensitivity SA−HRP(3ng/mL、Pierce社、Cat.#21130)により1時間反応させ、プレートに結合したfD/AFD.Ab複合体を検出した。最終的な洗浄後、テトラメチルベンジジンペルオキシダーゼ基質(Moss社、Pasadena,MD)を添加し10−15分間発色させ、1Mのリン酸で反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを用いて、450nmの吸光度について(参照波長620nm)、前記プレートを分析した。fDの濃度は、標準曲線の4パラメータ回帰により算出した。カニクイザル血清中の最小限の定量化可能な濃度は3.9ng/mL(0.16nM)であった。
AFD.v14及びAFD.v14.C+TPオクタマーによる、AP活性を阻害能力を、Pangburn(Methods Enzymol, 1988, 162:639-653)及びKatschkeら(J. Biol. Chem., 2009, 284:10473-10479)によりデザインされ、記載されるように、(ヒト又はサル)の血清をウサギ赤血球と結合させる溶血アッセイにより評価した。補体活性化が古典的な補体経路(CP)を介して生じないことを確実にするため、C1qを枯渇させたヒト血清(Complement Technologies,Tyler,TX)を用い、またバッファー中にEGTAを含有させ、CP活性に必要なカチオンであるカルシウムをキレート化させた。
AFD.v14.C+HGオクタマー又はAFD.v14.C+TPオクタマーの投薬後の全身性AP活性のあらゆる潜在的阻害の、経時変化及び投薬量への依存性を評価するため、プレートベースのWIESLAB Complement System AP ELISA(このアッセイによるデータを「AP補体活性(%)」として図35に示す)又は、上記のインビトロAP溶血アッセイと同様のエクスビボアッセイ(このアッセイによるデータを「溶血相対値(%)」として図35に示す)を行った。しかしながら、このアッセイでは、外因のAFD.v14.C+HGオクタマー又はAFD.v14.C+TPオクタマーの希釈曲線を血清試料に加える代わりに、前記試料自体を連続希釈し、何らかの溶血性活性の阻害が生じた場合、AFD.v14.C+HGオクタマー又はAFD.v14.C+TPオクタマーの注入量に起因するものとした。
全fD及び治療剤に対する溶血相対値(%)を、図35A(ランパリズマブ、10mg/眼)、図35B(AFD.v14、25mg/眼)及び図35C(AFD.v14.C+TPオクタマー、3.9mg/眼)に示す。ランパリズマブのデータ(図35A)は、Loyet, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2014, 351:527-537で記載されるように、ランパリズマブの10mg/眼でのIVT投与後に得られた比較データである。図35Bから分かるように、AFD.v14の25mg/眼の投与は、一過性の全身AP活性を阻害し、投与後24時間には活性がベースラインに戻っており、ランパリズマブで観察された結果と類似している(図35A)。その代わり、全身性AP阻害は、AFD.v14.C+TPオクタマーの3.9mg/眼の投与後には認められなかった(図35C)。いかなる特定の理論にも拘束されないが、Fab(例えばランパリズマブ及びAFD.v14)と比較した、コンジュゲートで得られた眼からのより緩慢なクリアランスは、早い時点でAFD.AbをfDにより飽和状態にさせ、全身的な補体阻害を防止するものと考えられる。
Claims (109)
- 一又は複数のポリオールに共有結合的に連結されている一又は複数の抗D因子抗体変異体を含むコンジュゲートであって、
コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体変異体が、参照抗D因子抗体の超可変領域(HVR)内に少なくとも1つの標的アスパラギン酸(D又はAsp)残基の置換を含み、標的Asp残基が異性化しやすいとして同定され、置換がAspからグルタミン酸(E又はGlu)への置換であり、各抗体変異体が、参照抗D因子抗体と比較して、D因子との結合親和性の顕著な損失なく、改善された安定性を示し、
ポリオールが、マルチアーム型ポリオールである、コンジュゲート。 - Asp残基が、Asp−Xaaモチーフ内に存在し、XaaがAsp、Gly、His、Ser又はThrである、請求項1に記載のコンジュゲート。
- 標的Asp残基が、Asp−Aspモチーフの第1のAspである、請求項2に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体変異体が、参照抗D因子抗体のHVR内に更なる少なくとも1つのAsp残基からセリン(S又はセリン)への置換を更に含み、得られる抗体変異体が、参照抗D因子抗体と比較して、低い負電荷を有し、改善された溶解度を示す、請求項1に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体変異体が、参照抗D因子抗体のHVR内に脱アミド化しやすいアスパラギン(N又はAsn)残基からの一又は複数のセリンの置換を更に含む、請求項1に記載のコンジュゲート。
- 参照抗D因子抗体が、配列番号3の軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項1に記載のコンジュゲート。
- 参照抗D因子抗体が、配列番号4の重鎖可変ドメイン配列を更に含む、請求項6に記載のコンジュゲート。
- 参照抗D因子抗体が、配列番号1の軽鎖配列及び配列番号2の重鎖配列を含む、請求項7に記載のコンジュゲート。
- 参照抗D因子抗体が、配列番号1の軽鎖配列並びに配列番号34−53及び115からなる群から選択される重鎖配列を含む、請求項7に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体変異体が、配列番号11の軽鎖HVR1(HVR−L1)配列及び配列番号12の重鎖HVR2(HVR−H2)配列を含む、請求項8又は請求項9に記載のコンジュゲート。
- 抗体変異体が、配列番号13の軽鎖HVR3(HVR−L3)配列を更に含む、請求項10に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体変異体が、配列番号14の軽鎖HVR1(HVR−L1)配列及び配列番号12の重鎖HVR2(HVR−H2)配列を含む、請求項8又は請求項9に記載のコンジュゲート。
- 抗体変異体が、配列番号15の重鎖HVR3(HVR−H3)配列を更に含む、請求項12に記載のコンジュゲート。
- 一又は複数のポリオールに共有結合的に連結されている一又は複数の抗D因子抗体変異体を含むコンジュゲートであって、
コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体変異体が、参照抗D因子抗体のHVR内に一又は複数の位置での置換を含み、前記参照抗D因子抗体が、配列ITSTDIDDDMN(配列番号5)を含む軽鎖HVR−1、配列GGNTLRP(配列番号6)を含む軽鎖HVR−2、配列LQSDSLPYT(配列番号7)を含む軽鎖HVR−3、配列GYTFTNYGMN(配列番号8)を含む重鎖HVR−1、配列WINTYTGETTYADDFKG(配列番号9)を含む重鎖HVR−2、及び配列EGGVNN(配列番号10)を含む重鎖HVR−3を含み、前記置換が、(a)配列番号5の位置5のアミノ酸がSである(a、b及びcは配列番号22に開示される)、(b)配列番号5の位置7のアミノ酸がEである、(c)配列番号5の位置8のアミノ酸がSである、(d)配列番号9の位置13のアミノ酸がEである(配列番号23)、(e)配列番号7の位置4のアミノ酸がEである(配列番号24)、又は(f)配列番号10の位置5のアミノ酸がSである(配列番号25)置換のうちの一又は複数であり、
ポリオールが、マルチアーム型ポリオールである、コンジュゲート。 - 前記置換が、
(i)置換(b)−(d)、
(ii)置換(b)−(e)、
(iii)置換(a)−(d)、並びに
(iv)置換(a)−(d)及び(f)
からなる群から選択される、請求項14に記載のコンジュゲート。 - 変異体が、配列番号54−74及び116からなる群から選択される重鎖定常ドメインのアミノ酸配列を含む、請求項14又は請求項15に記載のコンジュゲート。
- 一又は複数のポリオールに共有結合的に連結されている一又は複数の抗D因子抗体を含むコンジュゲートであって、
コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体が、
a)配列番号16、18又は19の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を含む抗D因子抗体、及び
b)配列番号17又は20の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を含む抗D因子抗体
からなる群から独立して選択され、
ポリオールが、マルチアーム型ポリオールである、コンジュゲート。 - コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体が、配列番号16、18又は19の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列及び配列番号17又は20の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を含む、請求項17に記載のコンジュゲート。
- 軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、配列番号19に由来し、重鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、配列番号17に由来する、請求項18に記載のコンジュゲート。
- 軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、配列番号19に由来し、重鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、配列番号20に由来する、請求項18に記載のコンジュゲート。
- 少なくとも1つの抗D因子抗体が、配列番号55−74及び116からなる群から選択される重鎖定常ドメインのアミノ酸配列を含む、請求項17から20の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 一又は複数のポリオールに共有結合的に連結されている一又は複数の抗D因子抗体を含むコンジュゲートであって、
コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体が、
配列番号11又は14の配列を有するHVR−L1、配列番号6の配列を有するHVR−L2、及び配列番号7又は13の配列を有するHVR−L3を含む可変軽鎖、並びに配列番号8の配列を有するHVR−H1、配列番号9又は12の配列を有するHVR−H2、及び配列番号10又は15の配列を有するHVR−H3を含む可変重鎖を有し、
ポリオールが、マルチアーム型ポリオールである、コンジュゲート。 - コンジュゲートの各抗D因子抗体が、
(i)配列番号14の配列を有するHVR−L1、配列番号6の配列を有するHVR−L2及び配列番号7の配列を有するHVR−L3を含む可変軽鎖と、配列番号8の配列を有するHVR−H1、配列番号12の配列を有するHVR−H2及び配列番号10の配列を有するHVR−H3を含む可変重鎖と、を有する抗D因子抗体、並びに、
(ii)配列番号14の配列を有する配列番号HVR−L1のHVR−L1配列、配列番号6の配列を有するHVR−L2及び配列番号7の配列を有するHVR−L3を含む可変軽鎖と、配列番号8の配列を有するHVR−H1、配列番号12の配列を有するHVR−H2及び配列番号15の配列を有するHVR−H3を含む可変重鎖を有する抗D因子抗体、
からなる群から独立して選択される、請求項22に記載のコンジュゲート。 - 少なくとも1つの抗D因子抗体が、配列番号55−74及び116からなる群から選択される重鎖定常ドメインのアミノ酸配列を有する、請求項22又は請求項23に記載のコンジュゲート。
- 一又は複数のポリオールに共有結合的に連結されている一又は複数の抗D因子抗体を含むコンジュゲートであって、
コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体が、
(i)配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号27のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、
(ii)配列番号28のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、
(iii)配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、
(iv)配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号31のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、
(v)配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖並びに配列番号75−92及び117からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、
(vi)配列番号28のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号32のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、
(vii)配列番号28のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号33のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体、並びに
(vii)配列番号28のアミノ酸配列を有する軽鎖並びに配列番号93−110及び118からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体
からなる群から選択され、
ポリオールが、マルチアーム型ポリオールである、コンジュゲート。 - コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体が、配列番号28のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号32のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体である、請求項25に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗D因子抗体が、配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗D因子抗体である、請求項25に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体が、Fab、Fab’、Fab’−SH、Fab−C、Fab−CSH及びその組合せからなる群から選択される抗体断片である、請求項1から27の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体断片が、C’末端に1つのシステイン残基を含む、請求項28に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体断片が、C’末端に配列番号21のアミノ酸配列を含む、請求項28に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートの少なくとも1つの抗体断片が、C’末端に配列番号111−114からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項28に記載のコンジュゲート。
- ポリオールが、システイン残基の遊離スルフヒドリル基において、抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも1つに共有結合的に連結されている、請求項1から31の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- システイン残基が操作されたシステインである、請求項32に記載のコンジュゲート。
- システイン残基が、抗D因子抗体又は抗体変異体の定常ドメインに存在する、請求項32又は請求項33に記載のコンジュゲート。
- システイン残基が、抗D因子抗体又は抗体変異体のC’末端に存在する、請求項32から34の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートが、抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも2つを含み、ポリオールが、システイン残基の遊離スルフヒドリル基において、各抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項32から35の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 抗体変異体のうちの少なくとも1つが、参照抗D因子抗体の定常ドメイン内に少なくとも1つのアミノ酸残基の置換を含み、アミノ酸残基がCysで置換されている、請求項1から16の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- ポリオールが、置換されたシステイン残基の遊離スルフヒドリル基において、抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項37に記載のコンジュゲート。
- ポリオールが、リジン残基の遊離アミノ基において、抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも1つに共有結合的に連結されている、請求項1から38の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- リジン残基が、抗D因子抗体又は抗体変異体の定常ドメイン内に存在する、請求項39に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも2つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項1から40の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも3つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項41に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも4つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項42に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも5つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項43に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも6つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項44に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの少なくとも7つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項45に記載のコンジュゲート。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの8つが、ポリオールに共有結合的に連結されている、請求項46に記載のコンジュゲート。
- マルチアーム型ポリオールが、ダイマー、テトラマー、ヘキサマー及びオクタマーからなる群から選択される、請求項1から47の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- マルチアーム型ポリオールがオクタマーである、請求項48に記載のコンジュゲート。
- ポリオールがポリエチレングリコールである、請求項1から49の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、約500D−約300,000Dの重量平均分子量を有する、請求項50に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、約20,000D−約60,000Dの重量平均分子量を有する、請求項51に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、約40,000Dの重量平均分子量を有する、請求項52に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、一般式(Ia):
(式中、各mは独立して3−250の整数であり、nは1−10の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基である)の構造を有し、少なくとも1つのR2が、末端反応性基であり、抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項50から53の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - ポリエチレングリコールが、一般式(Ib):
(式中、各mは独立して3−250の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基である)の構造を有し、少なくとも1つのR2が、末端反応性基であり、抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項50から53の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - ポリエチレングリコールが、一般式(IIa):
(式中、各mは独立して3−250の整数であり、nは1−10の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基である)の構造を有し、少なくとも1つのR2が、末端反応性基であり、抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項50から53の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - nが6である、請求項56に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、一般式(IIIa):
(式中、各mは独立して3−250の整数であり、nは1−10の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基である)の構造を有し、少なくとも1つのR2が、末端反応性基であり、抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項50から53の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - nが2である、請求項58に記載のコンジュゲート。
- nが4である、請求項58に記載のコンジュゲート。
- nが6である、請求項58に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、一般式(IVa):
(式中、各mは独立して3−250の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して水素又は末端反応性基である)の構造を有し、少なくとも1つのR2が、末端反応性基であり、抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項50から53の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - mが50−200の整数である、請求項54から62の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- mが100−150の整数である、請求項63に記載のコンジュゲート。
- 少なくとも1つのR1が結合基であり、R1及びR2がまとめると、
並びにその組合せからなる群から選択され、式中、各iは独立して0−10の整数であり、jは0−10の整数である、請求項54から64の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - 各R2が独立してチオール反応性基、アミノ反応性基及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項54から65の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 各R2が独立して、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフルオロメタンスルホネート、トシレート、アジリジン、エポキシド、ピリジルジスルフィド、スクシンイミジルエステル、−NH2、アルデヒド、ハロアセテート、ハロアセトアミド及びパラ−ニトロフェニルカーボネートからなる群から選択される、請求項66に記載のコンジュゲート。
- R2がマレイミドである、請求項67に記載のコンジュゲート。
- R1及びR2がまとめると、
であり、iは0−10の整数であり、jは0−10の整数である、請求項54から68の何れか一項に記載のコンジュゲート。 - R2基のうちの少なくとも7つが、抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの1つに共有結合的に連結されている、請求項54から58又は請求項61から69の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- R2基のうちの8つが、抗D因子抗体又は抗体変異体のうちの1つに共有結合的に連結されている、請求項70に記載のコンジュゲート。
- ポリエチレングリコールが、一般式(Ib):
(式中、各mは独立して3−250の整数であり、各R1は独立して、存在しないか又は結合基であり、各R2は独立して、水素又は末端反応性基である)の構造を有し、少なくとも1つのR2が、末端反応性基であり、抗D因子抗体又は抗体変異体に共有結合的に連結されている、請求項26又は請求項27に記載のコンジュゲート。 - R1及びR2がまとめると、
であり、iは0−10の整数であり、jは0−10の整数である、請求項72に記載のコンジュゲート。 - iが2であり、jが2である、請求項73に記載のコンジュゲート。
- コンジュゲートが、少なくとも1つの抗D因子抗体又は抗体変異体をマルチアーム型ポリオールに共有結合的に連結することによって調製される、請求項1から74の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- マルチアーム型ポリオールが、ダイマー、テトラマー、ヘキサマー及びオクタマーからなる群から選択される、請求項75に記載のコンジュゲート。
- ポリオールがポリエチレングリコールである、請求項75又は請求項76に記載のコンジュゲート。
- 請求項1から77の何れか一項に記載のコンジュゲートを含む薬学的製剤。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体の濃度が、少なくとも100mg/mlである、請求項78に記載の薬学的製剤。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体の濃度が、少なくとも200mg/mlである、請求項79に記載の薬学的製剤。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体の濃度が、少なくとも300mg/mlである、請求項80に記載の薬学的製剤。
- 抗D因子抗体又は抗体変異体の濃度が、約50mg/ml−約300mg/mlである、請求項78に記載の薬学的製剤。
- 請求項78から82の何れか一項に記載の薬学的製剤及び患者の硝子体内に製剤を送達するための手段を含み、それにより、製剤の効果が長期間にわたり患部で維持される、眼内送達用長時間作用性送達デバイス。
- 対象における補体関連障害の治療用医薬の製造における、請求項78から82の何れか一項に記載の製剤、又は請求項83に記載のデバイスの使用。
- 補体関連障害が全身性障害である、請求項84に記載の使用。
- 補体関連障害が眼性疾患である、請求項85に記載の使用。
- 眼性疾患が、ドライ型及びウエット型(非滲出性及び滲出性)を含む加齢性黄斑変性(AMD)、糖尿病性網膜症、虚血関連網膜症、脈絡膜血管新生(CNV)、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病理学的近視、フォン・ヒッペル−リンダウ病、眼性ヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症(CRVO)、角膜血管新生及び網膜血管新生からなる群から選択される、請求項86に記載の使用。
- 眼性疾患が、中期ドライ型AMD及び地図状萎縮(GA)からなる群から選択される、請求項87に記載の使用。
- 療法における使用のための請求項1から77の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 対象における補体関連障害を治療する方法における使用のための請求項1から77の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 対象における全身性補体関連障害を治療する方法における使用のための請求項1から77の何れか一項に記載のコンジュゲート。
- 補体関連障害が補体関連の眼性症状である、請求項91に記載のコンジュゲート。
- 補体関連の眼性症状が、ドライ型及びウエット型(非滲出性及び滲出性)を含む加齢性黄斑変性(AMD)、脈絡膜血管新生(CNV)、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、虚血関連網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病理学的近視、フォン・ヒッペル−リンダウ病、眼性ヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症(CRVO)、角膜血管新生及び網膜血管新生からなる群から選択される、請求項92に記載のコンジュゲート。
- 補体関連の眼性症状が、中期ドライ型AMD及び地図状萎縮(GA)からなる群から選択される、請求項92に記載のコンジュゲート。
- 対象に、有効量の、請求項1から77の何れか一項に記載のコンジュゲート又は請求項78から82の何れか一項に記載の薬学的製剤を投与することを含む、対象における補体関連障害を治療する方法。
- 補体関連障害が全身性障害である、請求項95に記載の方法。
- 補体関連障害が補体関連の眼性症状である、請求項95に記載の方法。
- 補体関連の眼性症状が、ドライ型及びウエット型(非滲出性及び滲出性)を含む加齢性黄斑変性(AMD)、脈絡膜血管新生(CNV)、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、虚血関連網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病理学的近視、フォン・ヒッペル−リンダウ病、眼性ヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症(CRVO)、角膜血管新生及び網膜血管新生からなる群から選択される、請求項97に記載の方法。
- 補体関連の眼性症状が、中期ドライ型AMD及び地図状萎縮(GA)からなる群から選択される、請求項97に記載のコンジュゲート。
- 移植可能なポート送達システムを用いてコンジュゲート又は薬学的製剤を投与することを含む、請求項95から99の何れか一項に記載の方法。
- コンジュゲート又は薬学的製剤を硝子体内投与によって投与することを含む、請求項95から100の何れか一項に記載の方法。
- 硝子体内投与が、狭口径ニードルを通じてなされる、請求項101に記載の方法。
- 狭口径ニードルが、約30、29、28、27、26、25、24、23又は22ゲージである、請求項102に記載の方法。
- 個体に更なる治療剤を投与することを更に含む、請求項95から103の何れか一項に記載の方法。
- 更なる治療剤が、ANG2アンタゴニスト、TIE2アンタゴニスト、VEGFアンタゴニスト及び補体第2成分アンタゴニストからなる群から選択される、請求項104に記載の方法。
- 更なる治療剤が抗ANG2抗体である、請求項104に記載の方法。
- 更なる治療剤が抗TIE2抗体である、請求項104に記載の方法。
- 更なる治療剤が、VEGFトラップ及び抗VEGF抗体からなる群から選択される、請求項104に記載の方法。
- 更なる治療剤が、補体第2成分アンタゴニストであり、補体第2成分アンタゴニストが、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8及びC9からなる群から選択される補体成分を阻害する、請求項104に記載の方法。
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US10369825B2 (en) * | 2017-06-06 | 2019-08-06 | Kyocera Document Solutions Inc. | Systems and methods for supply quality measurement |
WO2020109343A1 (en) | 2018-11-29 | 2020-06-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy for treatment of macular degeneration |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007516195A (ja) * | 2003-06-30 | 2007-06-21 | ドマンティス リミテッド | ポリペプチド |
JP2011521623A (ja) * | 2008-04-28 | 2011-07-28 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ヒト化抗d因子抗体とその用途 |
WO2014148895A1 (en) * | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Biocerox Products B.V. | Humanized anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof |
WO2015142637A1 (en) * | 2014-03-21 | 2015-09-24 | Eli Lilly And Company | Il-21 antibodies |
Family Cites Families (150)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4741900A (en) | 1982-11-16 | 1988-05-03 | Cytogen Corporation | Antibody-metal ion complexes |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
GB8430252D0 (en) | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Beecham Group Plc | Compounds |
US5206344A (en) | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
JP2703764B2 (ja) | 1986-04-28 | 1998-01-26 | シータス オンコロジー コーポレイション | 補体成分C5aに対するモノクローナル抗体 |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US5256642A (en) | 1988-04-01 | 1993-10-26 | The Johns Hopkins University | Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof |
NZ230747A (en) | 1988-09-30 | 1992-05-26 | Bror Morein | Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5166322A (en) | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
US5244800A (en) | 1990-04-27 | 1993-09-14 | The Uab Research Foundation | Crystals of human complement factor d that are triclinic |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
DK0590058T3 (da) | 1991-06-14 | 2004-03-29 | Genentech Inc | Humaniseret heregulin-antistof |
AU2147192A (en) | 1991-06-28 | 1993-01-25 | Genentech Inc. | Method of stimulating immune response using growth hormone |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
EP0625200B1 (en) | 1992-02-06 | 2005-05-11 | Chiron Corporation | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
US5456909A (en) | 1992-08-07 | 1995-10-10 | T Cell Sciences, Inc. | Glycoform fractions of recombinant soluble complement receptor 1 (sCR1) having extended half-lives in vivo |
MX9305070A (es) | 1992-08-21 | 1994-04-29 | Genentech Inc | Compocicion farmaceutica que contiene un antagonista de lfa-1 para el tratamiento de transtornos o desordenes mediados por el lfa-1 |
AU6048294A (en) | 1992-11-25 | 1994-06-22 | Amgen Boulder Inc. | Modified insulin-like growth factors |
US5861156A (en) | 1993-01-08 | 1999-01-19 | Creative Biomolecules | Methods of delivering agents to target cells |
EP0708655A1 (en) | 1993-04-07 | 1996-05-01 | Amgen Boulder Inc. | Methods of using insulin-like growth factor binding proteins |
US5856300A (en) | 1994-05-12 | 1999-01-05 | T Cell Sciences, Inc. | Compositions comprising complement related proteins and carbohydrates, and methods for producing and using said compositions |
US5679546A (en) | 1993-09-24 | 1997-10-21 | Cytomed, Inc. | Chimeric proteins which block complement activation |
US5627264A (en) | 1994-03-03 | 1997-05-06 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric complement inhibitor proteins |
WO1995025540A1 (en) | 1994-03-23 | 1995-09-28 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Method for reducing immune and hemostatic dysfunctions during extracorporeal circulation |
US5534615A (en) | 1994-04-25 | 1996-07-09 | Genentech, Inc. | Cardiac hypertrophy factor and uses therefor |
US5919623A (en) | 1994-04-27 | 1999-07-06 | St. James's And Seacroft University Hospitals Nhs Trust | Nucleic acid mutation assays |
US6074642A (en) | 1994-05-02 | 2000-06-13 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis |
US5679345A (en) | 1994-06-02 | 1997-10-21 | The Johns Hopkins University | Method for preventing complement-dependent rejection of organ or tissue transplants |
WO2001004311A1 (en) | 1999-07-07 | 2001-01-18 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
US5679564A (en) | 1994-10-05 | 1997-10-21 | Antex Biologics, Inc. | Methods for producing enhanced antigenic campylobacter bacteria and vaccines |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
DE69635026T2 (de) | 1995-09-21 | 2006-05-24 | Genentech Inc., San Francisco | Varianten des menschlichen wachstumshormons |
US7122636B1 (en) | 1997-02-21 | 2006-10-17 | Genentech, Inc. | Antibody fragment-polymer conjugates and uses of same |
US20050197285A1 (en) | 1997-03-07 | 2005-09-08 | Rosen Craig A. | Human secreted proteins |
US6472520B2 (en) | 1997-03-21 | 2002-10-29 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Rat PEG-3 promoter |
US6884879B1 (en) | 1997-04-07 | 2005-04-26 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF antibodies |
AU743758B2 (en) | 1997-04-07 | 2002-02-07 | Genentech Inc. | Anti-VEGF antibodies |
US5994511A (en) * | 1997-07-02 | 1999-11-30 | Genentech, Inc. | Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides |
IL133974A0 (en) | 1997-07-14 | 2001-04-30 | Bolder Biotechnology Inc | Derivatives of growth hormone and related proteins |
US6410708B1 (en) | 1997-11-21 | 2002-06-25 | Genentech, Inc. | Nucleic acids encoding A-33 related antigen polypeptides |
NZ503033A (en) | 1997-08-26 | 2003-01-31 | Gliatech Inc | Inhibition of complement activation using anti-properdin agents |
US8088386B2 (en) | 1998-03-20 | 2012-01-03 | Genentech, Inc. | Treatment of complement-associated disorders |
US7419663B2 (en) | 1998-03-20 | 2008-09-02 | Genentech, Inc. | Treatment of complement-associated disorders |
US8007798B2 (en) | 1997-11-21 | 2011-08-30 | Genentech, Inc. | Treatment of complement-associated disorders |
US7282565B2 (en) | 1998-03-20 | 2007-10-16 | Genentech, Inc. | PRO362 polypeptides |
US7192589B2 (en) | 1998-09-16 | 2007-03-20 | Genentech, Inc. | Treatment of inflammatory disorders with STIgMA immunoadhesins |
ATE410512T1 (de) | 1997-11-21 | 2008-10-15 | Genentech Inc | Plättchen-spezifische antigene und deren pharmazeutische verwendung |
US7005504B2 (en) | 1998-01-22 | 2006-02-28 | Genentech, Inc. | Antibody fragment-peg conjugates |
JP2002502589A (ja) | 1998-02-09 | 2002-01-29 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ, インコーポレイテッド | 45個のヒト分泌タンパク質 |
US6956107B2 (en) | 1998-02-20 | 2005-10-18 | Tanox, Inc. | Inhibitors of complement activation |
US7112327B2 (en) | 1998-02-20 | 2006-09-26 | Tanox, Inc. | Inhibition of complement activation |
EP2277920B1 (en) | 1998-02-20 | 2014-06-11 | Genentech, Inc. | Inhibitors of complement activation |
PT1490386E (pt) | 1998-03-10 | 2008-11-24 | Genentech Inc | Novos polipéptidos e ácidos nucleicos que os codificam |
WO2000012703A2 (en) | 1998-08-27 | 2000-03-09 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Protein transport-associated molecules |
US6376653B1 (en) | 1998-09-28 | 2002-04-23 | Smithkline Beecham Plc | Tie2 antagonist antibodies |
IL142794A0 (en) | 1998-12-16 | 2002-03-10 | Genentech Inc | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
IL143031A0 (en) | 1998-12-22 | 2002-04-21 | Genentech Inc | Methods and compositions for inhibiting neoplastic cell growth |
PL209786B1 (pl) | 1999-01-15 | 2011-10-31 | Genentech Inc | Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna |
KR20010103046A (ko) | 1999-03-08 | 2001-11-17 | 제넨테크, 인크. | 면역 관련 질환 치료용 조성물 및 치료 방법 |
NZ514091A (en) | 1999-03-11 | 2004-01-30 | Rmf Dictagene S | Vascular adhesion molecules and modulation of their function |
US6642353B1 (en) | 1999-03-17 | 2003-11-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Peptide ligands for the erythropoietin receptor |
AU1604401A (en) | 1999-11-19 | 2001-05-30 | Human Genome Sciences, Inc. | 18 human secreted proteins |
EP1661997A1 (en) | 1999-12-01 | 2006-05-31 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
CA2399969A1 (en) | 2000-02-10 | 2001-08-16 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Mixtures of caspase inhibitors and complement inhibitors and methods of use thereof |
US6821775B1 (en) | 2000-02-11 | 2004-11-23 | Genvec, Inc. | Viral vector encoding pigment epithelium-derived factor |
ES2329010T3 (es) | 2000-03-23 | 2009-11-20 | Genentech, Inc. | Inhibidores anti-c2/c2a de la activacion del complemento. |
ATE412185T1 (de) | 2000-04-29 | 2008-11-15 | Univ Iowa Res Found | Diagnostika und therapeutika für makula degeneration erkrankungen |
CA2412211A1 (en) | 2000-06-23 | 2002-01-03 | Genetech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis |
AU2001271973A1 (en) | 2000-07-20 | 2002-02-05 | Kevin P. Baker | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis |
PT1325033E (pt) | 2000-10-10 | 2010-04-15 | Genentech Inc | Inibição da activação do complemento c5 para o tratamento e a prevenção da rejeição diferida de um xenoenxertos ou de uma rejeição vascular aguda |
DK1324776T4 (en) | 2000-10-12 | 2018-05-28 | Genentech Inc | CONCENTRATED PROTEIN FORMULATIONS WITH REDUCED VISCOSITY |
EP1326897A2 (en) | 2000-10-13 | 2003-07-16 | Biogen, Inc. | Humanized anti-lt-beta-r antibodies |
EP1345968A2 (en) | 2000-12-28 | 2003-09-24 | Altus Biologics Inc. | Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them |
US20040077575A1 (en) | 2002-01-11 | 2004-04-22 | Giordano Giovan Giacomo | Inhibition of pathological angiogenesis in vivo |
US6867189B2 (en) | 2001-07-26 | 2005-03-15 | Genset S.A. | Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders |
BRPI0211953B8 (pt) | 2001-08-17 | 2021-05-25 | Genentech Inc | anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno que se liga a c5 e c5a sem a prevenção da formação de c5b, linhagem celular, composição farmacêutica, bem como método in vitro para inibir a atividade de c5a e método de diagnóstico in vitro |
JP2005508162A (ja) | 2001-10-02 | 2005-03-31 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | Apo−2リガンド変異体とその使用法 |
EP1556076A4 (en) | 2002-06-24 | 2009-07-08 | Genentech Inc | APO-2 LIGAND / TRAIL VARIANTS AND ITS USES |
AU2003294210A1 (en) | 2002-07-31 | 2004-05-04 | Seattle Genetics, Inc | Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders |
TWI323265B (en) | 2002-08-06 | 2010-04-11 | Glaxo Group Ltd | Antibodies |
WO2004022594A2 (en) | 2002-09-06 | 2004-03-18 | Cytos Biotechnology Ag | Immune modulatory compounds and methods |
US7816497B2 (en) | 2002-10-30 | 2010-10-19 | University Of Kentucky | Compositions and methods for inhibiting drusen complement components C3a and C5a for the treatment of age-related macular degeneration |
US7595430B2 (en) | 2002-10-30 | 2009-09-29 | University Of Kentucky Research Foundation | Methods and animal model for analyzing age-related macular degeneration |
EP2422812A1 (en) | 2003-02-21 | 2012-02-29 | Genentech, Inc. | Methods for preventing and treating tissue damage associated with ischemia-reperfusion injury |
RU2232991C1 (ru) | 2003-04-09 | 2004-07-20 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" | Способ определения функциональной активности фактора d комплемента человека |
KR100512483B1 (ko) | 2003-05-07 | 2005-09-05 | 선바이오(주) | 신규한 폴리에틸렌글리콜-말레이미드 유도체의 합성방법 |
US7709610B2 (en) | 2003-05-08 | 2010-05-04 | Facet Biotech Corporation | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
EP2267028A3 (en) | 2003-06-30 | 2011-07-27 | Domantis Limited | Dual specific single domain antibodies (dAb) conjugated to PEG |
WO2005014849A2 (en) | 2003-07-03 | 2005-02-17 | Euro-Celtique, S.A. | Genes associated with responses to neuropathic pain |
US20050106667A1 (en) | 2003-08-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
WO2005044853A2 (en) | 2003-11-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
WO2005025509A2 (en) | 2003-09-11 | 2005-03-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and materials for treating autoimmune diseases and conditions |
US20050169921A1 (en) | 2004-02-03 | 2005-08-04 | Leonard Bell | Method of treating hemolytic disease |
US20090087854A1 (en) | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Perlegen Sciences, Inc. | Methods for genetic analysis |
US7127355B2 (en) | 2004-03-05 | 2006-10-24 | Perlegen Sciences, Inc. | Methods for genetic analysis |
US7794713B2 (en) | 2004-04-07 | 2010-09-14 | Lpath, Inc. | Compositions and methods for the treatment and prevention of hyperproliferative diseases |
KR101270829B1 (ko) | 2004-09-23 | 2013-06-07 | 제넨테크, 인크. | 시스테인 유전자조작 항체 및 접합체 |
EP1836312B1 (en) | 2004-11-18 | 2011-10-12 | Yale University | Methods and compositions for diagnosing age-related macular degenration |
WO2006071856A2 (en) | 2004-12-23 | 2006-07-06 | Glycofi, Inc. | Immunoglobulins comprising predominantly a man5glcnac2 glycoform |
EP1833994A4 (en) | 2005-01-04 | 2009-09-02 | Hitachi Chemical Co Ltd | ROLLING CIRCLE GAINING OF A PRIMER GENERATION |
US8088579B2 (en) | 2005-02-14 | 2012-01-03 | University Of Iowa Research Foundation | Complement factor H for diagnosis of age-related macular degeneration |
CN101495651A (zh) | 2005-06-08 | 2009-07-29 | 匹兹堡大学 | 染色体10q26上的年龄-相关黄斑病变(ARM)易感基因 |
WO2007044668A2 (en) | 2005-10-08 | 2007-04-19 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Compstatin and analogs thereof for eye disorders |
CA2624393C (en) | 2005-11-04 | 2016-01-05 | Genentech, Inc. | Use of complement pathway inhibitors to treat ocular diseases |
US20070190057A1 (en) | 2006-01-23 | 2007-08-16 | Jian Wu | Methods for modulating mannose content of recombinant proteins |
AR059066A1 (es) | 2006-01-27 | 2008-03-12 | Amgen Inc | Combinaciones del inhibidor de la angiopoyetina -2 (ang2) y el inhibidor del factor de crecimiento endotelial vascular (vegf) |
US20080146501A1 (en) | 2006-02-13 | 2008-06-19 | University Of Iowa Research Foundation | Protective complement proteins and age-related macular degeneration |
AU2007233709A1 (en) | 2006-03-31 | 2007-10-11 | Novartis Ag | Organic compounds |
JP5216002B2 (ja) | 2006-06-16 | 2013-06-19 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 硝子体内投与に適したvegfアンタゴニスト製剤 |
US20100129379A1 (en) * | 2006-09-25 | 2010-05-27 | John Carpenter | Stabilized antibody formulations and uses thereof |
PL2907827T3 (pl) | 2006-11-02 | 2019-03-29 | Genentech, Inc. | Humanizowane przeciwciała przeciw czynnikowi D i ich zastosowanie |
JP2010526555A (ja) | 2007-05-11 | 2010-08-05 | タフツ・メディカル・センター | 加齢関連黄斑変性と関係するポリヌクレオチド及び患者のリスクを評価する方法 |
AR066660A1 (es) | 2007-05-23 | 2009-09-02 | Genentech Inc | Prevencion y tratamiento de condiciones del ojo asociadas con su complemento |
NZ581097A (en) * | 2007-05-24 | 2012-03-30 | Ablynx Nv | Amino acid sequences directed against rank-l and polypeptides comprising the same for the treatment of bone diseases and disorders |
US20090203001A1 (en) | 2007-08-24 | 2009-08-13 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for diagnosing and treating macular degeneration |
AU2009251499B2 (en) | 2008-04-18 | 2015-07-16 | The General Hospital Corporation | Polymorphisms associated with age-related macular degeneration and methods for evaluating patient risk |
US20110294682A1 (en) | 2008-04-28 | 2011-12-01 | The General Hospital Corporation | Polynucleotides Associated With Age-Related Macular Degeneration and Methods for Evaluating Patient Risks |
CN101724144A (zh) | 2008-11-03 | 2010-06-09 | 北京键凯科技有限公司 | 新型的多臂聚乙二醇及其制备方法和应用 |
US20120003641A1 (en) | 2008-11-05 | 2012-01-05 | Graham Robert R | Genetic polymorphisms in age-related macular degeneration |
WO2010075519A2 (en) | 2008-12-23 | 2010-07-01 | Massachusetts Eye & Ear Infirmary | Allelic variants associated with advanced age-related macular degeneration |
MX2011006726A (es) | 2009-01-02 | 2011-07-20 | Alcon Res Ltd | Implante oftalmico recargable in situ. |
WO2010085542A2 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Novartis Ag | Biomarkers related to age-related macular degeneration (amd) |
EP2391419B1 (en) | 2009-01-29 | 2019-06-12 | ForSight Vision4, Inc. | Posterior segment drug delivery |
WO2010132459A2 (en) | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Cleveland Clinic Foundation | Biomarkers for assessment of age-related macular degeneration |
CN102471783A (zh) | 2009-07-02 | 2012-05-23 | 新西兰郎泽科技公司 | 醇生产方法 |
EP2963128A1 (en) | 2009-07-10 | 2016-01-06 | The Regents of the University of Michigan | Compositions and methods for diagnosing and treating macular degeneration |
US20120190578A1 (en) | 2009-08-06 | 2012-07-26 | Washington University | Plasma Complement Components as Expression Markers for Age-Related Macular Degeneration and Related Phenotypes |
BR112012003026A2 (pt) | 2009-08-12 | 2016-08-16 | Pure Bioscience | formulações e métodos de emprego de desinfetante anidro. |
US20110165648A1 (en) | 2009-11-04 | 2011-07-07 | Menno Van Lookeren Campagne | Co-crystal structure of factor D and anti-factor D antibody |
MX2012005791A (es) * | 2009-11-19 | 2012-07-03 | Merck Serono Sa | Anticuerpos humanizados contra el receptor alfa de la interleucina 22 humana. |
US10584181B2 (en) | 2009-12-04 | 2020-03-10 | Genentech, Inc. | Methods of making and using multispecific antibody panels and antibody analog panels |
CN103755949B (zh) | 2009-12-25 | 2016-04-13 | 天津键凯科技有限公司 | 多臂聚乙二醇衍生物及其与药物的结合物和凝胶 |
AU2011295715B9 (en) * | 2010-09-03 | 2017-02-23 | Abbvie Stemcentrx Llc | Novel modulators and methods of use |
HUE032938T2 (hu) | 2010-11-01 | 2017-11-28 | Hoffmann La Roche | Az idõskori makuladegeneráció elõrehaladottá súlyosbodásának elõrejelzése poligénes kockázati pontszám alapján |
CN103619881B (zh) * | 2011-04-07 | 2017-07-28 | 安姆根有限公司 | 新的egfr结合蛋白 |
EP3461839A1 (en) | 2011-10-14 | 2019-04-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-htra1 antibodies and methods of use |
JP6051998B2 (ja) | 2012-03-30 | 2016-12-27 | 日油株式会社 | マルチアーム型ポリエチレングリコール誘導体、その中間体及び製造方法 |
US10093978B2 (en) | 2013-08-12 | 2018-10-09 | Genentech, Inc. | Compositions for detecting complement factor H (CFH) and complement factor I (CFI) polymorphisms |
MX2016002720A (es) * | 2013-09-06 | 2016-06-08 | Hoffmann La Roche | Metodo para mejorar la estabilidad del anticuerpo. |
CR20160561A (es) * | 2014-05-01 | 2017-05-03 | Genentech Inc | Variantes del anticuerpo anti-factor d y sus usos |
WO2017075259A1 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Genentech, Inc. | Anti-factor d antibody formulations |
AU2016344146A1 (en) | 2015-10-30 | 2018-05-10 | Genentech, Inc. | Methods of measuring Factor D activity and potency of Factor D inhibitors |
US10654932B2 (en) | 2015-10-30 | 2020-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-factor D antibody variant conjugates and uses thereof |
US10407510B2 (en) | 2015-10-30 | 2019-09-10 | Genentech, Inc. | Anti-factor D antibodies and conjugates |
-
2016
- 2016-10-27 US US15/336,522 patent/US10654932B2/en active Active
- 2016-10-27 JP JP2018522067A patent/JP2018536650A/ja active Pending
- 2016-10-27 CN CN201680077318.7A patent/CN108472382A/zh active Pending
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- 2016-10-27 WO PCT/US2016/059179 patent/WO2017075252A1/en active Application Filing
-
2018
- 2018-12-27 HK HK18116633.9A patent/HK1257422A1/zh unknown
-
2019
- 2019-12-30 US US16/730,018 patent/US10961313B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007516195A (ja) * | 2003-06-30 | 2007-06-21 | ドマンティス リミテッド | ポリペプチド |
JP2011521623A (ja) * | 2008-04-28 | 2011-07-28 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ヒト化抗d因子抗体とその用途 |
WO2014148895A1 (en) * | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Biocerox Products B.V. | Humanized anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof |
WO2015142637A1 (en) * | 2014-03-21 | 2015-09-24 | Eli Lilly And Company | Il-21 antibodies |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108472382A (zh) | 2018-08-31 |
US20170143843A1 (en) | 2017-05-25 |
HK1257422A1 (zh) | 2019-10-18 |
US10961313B2 (en) | 2021-03-30 |
EP3368090A1 (en) | 2018-09-05 |
WO2017075252A1 (en) | 2017-05-04 |
US20200115462A1 (en) | 2020-04-16 |
US10654932B2 (en) | 2020-05-19 |
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