JP2018532384A5 - - Google Patents
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Claims (39)
- リポタンパク質シグナルペプチダーゼ（Ｌｓｐ）の触媒活性を測定するためのアッセイ系であって、（ａ）組換え発現され、可溶性の、精製されたＬｓｐ酵素および（ｂ）Ｌｓｐ基質を含む、アッセイ系。
- 前記Ｌｓｐが、細菌Ｌｓｐである、請求項１に記載のアッセイ系。
- 前記Ｌｓｐが、大腸菌Ｌｓｐである、請求項２に記載のアッセイ系。
- 前記Ｌｓｐが、Ｈｉｓタグ付き融合タンパク質として発現する、請求項１に記載のアッセイ系。
- 前記Ｈｉｓタグ付き融合タンパク質がＮ末端Ｈｉｓ６タグを含む、請求項４に記載のアッセイ系。
- 前記Ｌｓｐが、界面活性剤によって可溶化されている、請求項１に記載のアッセイ系。
- 前記界面活性剤が、ｎ−ドデシルβ−Ｄ−マルトシド（ＤＤＭ）である、請求項６に記載のアッセイ系。
- 前記基質が、ペプチド、ペプチド模倣物、または、脂質修飾システイン残基を含有するタンパク質である、請求項１に記載のアッセイ系。
- 前記基質が、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）ドナー−アクセプター対で標識されている、請求項１に記載のアッセイ系。
- リポタンパク質シグナルペプチダーゼ（Ｌｓｐ）を阻害する作用剤を同定する方法であって、（ａ）組換え産生され、精製されたＬｓｐとＬｓｐ基質とを被験化合物の存在下で接触させる工程、および（ｂ）１または複数の前記被験化合物による前記基質のＬｓｐ切断の阻害を検出し、それにより、前記リポタンパク質シグナルペプチダーゼ（Ｌｓｐ）を阻害する作用剤を同定する工程を含む、方法。
- 前記Ｌｓｐが、細菌Ｌｓｐである、請求項１０に記載の方法。
- 前記Ｌｓｐが、大腸菌Ｌｓｐである、請求項１１に記載の方法。
- 前記Ｌｓｐが、Ｈｉｓタグ付き融合タンパク質である、請求項１０に記載の方法。
- 前記Ｈｉｓタグ付き融合タンパク質がＮ末端Ｈｉｓ６タグを含む、請求項１４に記載の方法
- 前記Ｌｓｐが、界面活性剤によって可溶化される、請求項１０に記載の方法。
- 前記界面活性剤が、ｎ−ドデシルβ−Ｄ−マルトシド（ＤＤＭ）である、請求項１６に記載の方法。
- 前記基質が、ペプチド、ペプチド模倣物、または、脂質修飾システイン残基を含有するタンパク質である、請求項１０に記載の方法。
- 前記基質が、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）ドナー−アクセプター対で標識されている、請求項１０に記載の方法。
- Ｌｓｐ触媒活性が蛍光共鳴エネルギー移動によって検出される、請求項１０に記載の方法。
- ハイスループット形式で実施される、請求項１０に記載の方法。
- 前記被験化合物が小さい有機化合物である、請求項１０に記載の方法。
- 前記同定された作用剤を殺菌活性について調べることをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
- 前記同定された作用剤を、細菌リポタンパク質ジアシルグリセリルトランスフェラーゼ（Ｌｇｔ）を阻害する能力について調べることをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
- 細菌細胞においてＬｓｐ触媒活性を阻害するための方法であって、前記細胞に存在するＬｓｐを化合物に阻害させる条件下で、前記細菌細胞をＬｓｐ阻害化合物と接触させる工程を含み、前記Ｌｓｐ阻害化合物が、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＳＲ−０１００００２７０７２８−１、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＢＢＳ−８またはＣｏｍｐｏｕｎｄ ＢＢＳ−２０、またはそれらの機能性変異体である、方法、但し、ヒト対象の内部に存在している細菌細胞内のＬｓｐ触媒活性を阻害するための方法は除く。
- 前記細菌細胞が、非ヒト対象の内部に存在している、請求項２４に記載の方法。
- 前記非ヒト対象が、前記細菌細胞による感染症に罹患している、請求項２５に記載の方法。
- 前記対象が、治療上有効な量の前記Ｌｓｐ阻害化合物を投与される、請求項２５に記載の方法。
- Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＳＲ−０１００００２７０７２８−１、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＢＢＳ−８またはＣｏｍｐｏｕｎｄ ＢＢＳ−２０、またはそれらの機能性変異体を含む、対象体内において細菌感染症を治療するための医薬組成物。
- 前記対象がヒトである、請求項２８に記載の医薬組成物。
- アッセイ系の触媒活性を測定することの可能な、活性界面活性剤で可溶化された膜貫通酵素を生成する方法であって、（ａ）前記活性膜貫通酵素を発現することの可能な発現ベクターを構築する工程；（ｂ）前記活性膜貫通酵素を前記ベクターから発現させる工程；
および（ｃ）界面活性剤に基づく系において前記活性膜貫通酵素を可溶化し精製し、それにより、アッセイ系の触媒比活性を測定することの可能な、活性膜貫通界面活性剤で可溶化された酵素を生成する工程を含む、方法。 - 前記膜貫通酵素がＬｓｐである、請求項３０に記載の方法。
- 前記酵素の触媒活性を測定するためのアッセイにおける請求項３０に従って生成された
前記膜貫通酵素の使用。 - 前記膜貫通酵素の特異的阻害剤を同定するためのハイスループットスクリーニングにお
ける、請求項３０に従って生成された前記膜貫通酵素の使用。 - 前記膜貫通酵素がＬｓｐである、請求項３３に従って生成された前記膜貫通酵素の使用。
- 改良された特性を備えるＬｓｐ阻害化合物を同定するための方法であって、（ａ）リードＬｓｐ阻害化合物の１または複数の構造類似体を合成する工程；（ｂ）機能アッセイを前記類似体に実施して、前記リード化合物のものと比較して改良された生物学的または薬学的特性を有する類似体を同定し、それにより、改良された特性を備えるＬｓｐ阻害化合物を同定する工程を含む、方法。
- 前記リードＬｓｐ阻害化合物が、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＳＲ−０１００００２７０７２８−１、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＢＢＳ−８、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ＢＢＳ−２０、またはそれらの機能性変異体である、請求項３５に記載の方法。
- 前記改良された生物学的または薬学的特性が、Ｌｓｐ触媒活性の阻害の向上である、請求項３５に記載の方法。
- 前記機能アッセイが、精製され、界面活性剤で可溶化されたＬｓｐ酵素を用いる、請求項３７に記載の方法。
- 前記改良された生物学的または薬学的特性が、安定性または血清半減期の増加である、請求項３５に記載の方法。
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