JP2018528232A

JP2018528232A - 治療薬としての未成熟終結コドンの抑制剤およびその使用のための方法

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Publication number: JP2018528232A
Application number: JP2018515435A
Authority: JP
Inventors: ロベルジュ，ミシェル; バラダラン−ヘラヴィ，アリレザ; ディネッシュバルギ，アルーナ; ジー．ウィザース，ステファン; チェ，クンホ; ディー．ツィマーマン，カーラ
Original assignee: ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア
Priority date: 2015-09-25
Filing date: 2016-09-23
Publication date: 2018-09-27
Also published as: EP3353188A1; WO2017049386A1; CA2999339A1; CN108350013A; US20180258123A1; AU2016327461A1

Abstract

本発明では、本明細書に提示された構造を有する複数群の化合物が提供される。また、未成熟終結コドンを抑制するためのそのような化合物の使用、ならびに本明細書に記載のそのような化合物を含む治療方法が提供される。【代表図】図２

Description

本発明は、種々のがんなどのＲＮＡ中の未成熟終結コドン(ＰＴＣ)に随伴する医学的状態を含む、様々な適応症の治療または改善における治療用化合物および組成物、およびその使用のための方法に関する。具体的には、本発明は、全長タンパク質産生物の翻訳を少なくとも部分的に復活させる療法および治療の方法に関する。

関連出願との相互参照
本願は、２０１５年９月２５日出願の米国仮特許出願第６２／２３２，７８９号の利益を主張するものである。

ゲノム学の進展により、我々を苦しめる稀少遺伝子疾患の多くに関わる分子的な傷そのものを特定することはじきにルーチンとなろう。残念ながら、これらの疾患の殆どに治療がなく、カナダでは約３０％の患者が幼少時に死亡する。そして、それぞれの疾患の患者の数が少ないこと、および新薬の開発にかかるコストが高いことから、疾患特異的な治療を開発することは極めて難しい。疾患をもたらす変異の約１０％は、ＰＴＣを持ち込むナンセンス変異である。

欧州稀少疾患機構の推定では、２０００人中１人未満に影響を及ぼすものとして定義される少なくとも５０００の稀少遺伝子疾患があり、約４０００もの遺伝子が特定されてきた（オンライン版ヒトのメンデル遺伝データベース）。稀少遺伝子疾患は、人口の５〜６％に、またはＥＵで約２５００万人、米国で１６００万人、およびカナダで１８００万人に、影響を及ぼすものと考えられる。稀少遺伝子疾患の９５％には特異的な治療がないものと推定されている。さらに、稀少分類のない遺伝子疾患もまた、ナンセンス変異を有する。ヒト遺伝子変異データベース（ＨＧＭＤ２００７−ＭｏｒｔＭ．ら、２００８年）に掲載されている遺伝子コード領域に影響を及ぼすおよそ４３，０００の疾患関連一塩基対置換の２０．３％が、ＰＴＣであるものと推定されている。

これらの疾患のほぼ全てで、患者の約１０〜１１％がナンセンス点変異を有する。これらの変異は、アミノ酸コドンをＰＴＣ（すなわちＵＡＡ、ＵＡＧ、およびＵＧＡ）に変える。ＰＴＣは、結果として、何らかのタンパク質が産生する場合に非機能性タンパク質を産生させるだけでなく、ナンセンス媒介性ｍＲＮＡ崩壊（ＮＭＤ）を介してｍＲＮＡの安定性を減少させることがある。正常な終結コドンに影響を及ぼすことなくアミノ酸をＰＴＣに挿入できる化合物によって、機能性の全長タンパク質の産生を可能にすることができる。ナンセンス変異抑制ともＰＴＣリードスルーとも呼ばれるこのアプローチによって、複数の疾患にわたる多数の患者のための単一の治療を開発する可能性がもたらされる。実際に、これらの患者の一部は、そのような療法の恩恵を受けそうにないと思われる。例えば、不可逆性の神経損傷を伴って生まれた小児である。しかし、稀少遺伝子疾患の５０％では、疾患の発症は小児期に起こって次第に悪化するため、これらの患者は、ナンセンス抑制療法から最も恩恵を受ける立場にある人々である。

ナンセンス抑制の治療潜在性は、遺伝性障害に限定されない。ナンセンス変異はまた、孤発性がんの症例の約１０％で腫瘍抑制遺伝子に起こるが、孤発性がんは、集団の４０％に影響を及ぼし、稀少とは程遠い。例を挙げると、タンパク質ｐ５３のＲ２１３Ｘ変異は、ヒトのがん全てのうち１％に存在する。これは、全世界の約２２０，０００例に相当し（Ｈｏｅ，Ｋ．Ｋ．、Ｖｅｒｍａ，Ｃ．Ｓ．およびＬａｎｅ，Ｄ．Ｐ．、２０１４年）、理論的にはナンセンス抑制療法の恩恵を受けることができよう。さらに別の７０のがんドライバー腫瘍抑制遺伝子が特定されている（ＶｏｇｅｌｓｔｅｉｎＢら、２０１３年）。腫瘍の配列解析および変異分析は、依然として、がん診断に用いるにはルーチンではない。しかしながら、個別医療の概念はがん分野で大きく歩み始めており、がんのナンセンス変異を特定することが今後１０年でルーチンになってゆくことが期待される。

したがって、遺伝子疾患が少なくとも部分的にナンセンス変異によって引き起こされる一部の場合では、ナンセンス変異を標的とすることによって、稀少遺伝子疾患の「稀少な」要素を取り除くことができよう。ナンセンス抑制は、一部のがんの治療で役立つ可能性がある。

ＰＴＣのリードスルーを可能にする化合物は、ＰＴＣを有する特定の遺伝子ではなくＰＴＣの機序に基づき、複数の疾患にわたる多数の患者のために同じ治療を使用する可能性をもたらす。

高濃度のアミノグリコシド抗生物質は、一部の酵母遺伝子（ＳｉｎｇｈＡら、１９７９年）で、および哺乳類細胞のレポーター遺伝子（ＢｕｒｋｅＪＦおよびＭｏｇｇＡＥ．、１９８５年）で、ＰＴＣリードスルーを誘導することが３０年前に示された。ゲンタマイシンを使用してＣＦＴＲ遺伝子にＰＴＣを有する嚢胞性線維症患者を治療する可能性が示されたのは、ゲンタマイシンを使用して、患者由来の気管支上皮細胞株でＣＦＴＲタンパク質の発現を内在性遺伝子から誘導した際（ＢｅｄｗｅｌｌＤＭら、１９９７年）、ヒトのＣＦＴＲのＧ５４２Ｘ導入遺伝子を担持したマウスで機能の回復を誘導した際（ＤｕＭら、２００２年）、および患者でＣＦＴＲの塩化物のコンダクタンスの増加を誘導した際（ＣｌａｎｃｙＪＰら、２００１年；およびＷｉｌｓｃｈａｎｓｋｉＭら、２００３年）である。同様に、パロモマイシン、ジェネティシン（Ｇ４１８）およびＰＴＣ１２４（３−［５−（２−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−安息香酸）は、全てナンセンス抑制性を有することが報告されている（ＫａｒｉｊｏｌｉｃｈＪおよびＹｕ，Ｙ−Ｔ、２０１４年）。全ての場合で、改善性は小さく、患者の応答は様々であった（ＬｉｎｄｅＬら、２００７年）。効能に乏しいこと、高用量のゲンタマイシンには腎臓および耳の毒性があることが認識されていること、および静脈内または筋肉内の投与が必要であることから、さらに開発するには制約がありそうに思われる。

ゲンタマイシンによるリードスルーは、ｍｄｘマウスで示されたが（Ｂａｒｔｏｎ−ＤａｖｉｓＥＲら、１９９９年）、そのマウスでは、ＰＴＣがマウスジストロフィン遺伝子内へ導入されてヒトデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）のモデルとされていた。ＤＭＤ患者での最初の小規模な試験では、ゲンタマイシンは何も効果を示さなかった。他の２つでは、患者によってはジストロフィンの発現を示した（ＭａｌｉｋＶら、２０１０年）が、発現のレベルは、患者を改善するには不充分であった。この場合もやはり、用量制限毒性が一層の開発を妨げていた。

毒性の低減されたアミノグリコシド誘導体、例えば（ＳｈｕｌｍａｎＥら、２０１４年；およびＸｕｅＸら、２０１４年）の開発、および非アミノグリコシドＲＴ化合物、例えばＲＴＣ１３、ＲＴＣ１４、ＧＪ７１、ＧＪ７２やＰＴＣ１２４など（ＧａｔｔｉＲＡ．、２０１２年；およびＷｅｌｃｈＥＭら、２００７年）の発見に、多くの取り組みが費やされてきた。これらの化合物は、いくつかの細胞培養および動物疾患モデルでタンパク質の産生を増加させたが、多くの場合、その産生は、内在性遺伝子の発現をみるためのウェスタン・ブロッティングでは検出の限界にあり、遺伝子、細胞株、およびＰＴＣ変異によって応答が様々であった。

さらに、リードスルー療法に向けた数多くのアプローチがある。例えば、リードスルー薬剤、サプレッサーｔＲＮＡ、ＰＴＣ偽ウリジン化、およびナンセンス媒介性ｍＲＮＡ崩壊の阻害である（Ｋｅｅｌｉｎｇ，Ｋ．Ｍ．ら、２１０４年）。

ＰＴＣ１２４（Ｔｒａｎｓｌａｒｎａ（商標））は、臨床試験に入っている唯一の新しい化合物である。経口で生物が利用することができ、アミノグリコシドに比べて良好な安全性プロファイルを有している。ＰＴＣ１２４のＰＴＣのＲＴ活性は、その発見に使用されたタイプのルシフェラーゼレポーターアッセイではアーティファクト的な活性があること、および他のレポーターアッセイでは示すことのできるＲＴ活性がないことから、困難を背負っている（ＭｃＥｌｒｏｙＳＰら、２０１３）。しかしながら、上位のモデル系では活性を示しており、そのようなものとして、ｍｄｘマウスでジストロフィン発現および筋肉機能が増加したこと（ＷｅｌｃｈＥＭら、２００７年）、およびＧ５４２Ｘ−ｈＣＦＴＲマウスの腸でＣＦＴＲタンパク質が発現し、塩化物のコンダクタンスが増加したこと（ＤｕＭら、２００８）が挙げられる。最近では、ＣＦＴＲでの第３相臨床試験（ＫｅｒｅｍＥ．、２０１４年）およびＤＭＤ患者での第２ｂ相試験（ＢｕｓｈｂｙＫら、２０１４年）はどちらも、統計的有意性には至らなかった。しかし、後ろ向き解析では、欧州連合でＤＭＤ治療について認可されたサブグループに薬効の兆しが暗示されており、これは、第３相試験の完了（２０１５年半ば）と追加の安全性および薬効のデータの提出（ＲｙａｎＮＪ．、２０１４）とを条件としている。

全般的には、現在利用できるＲＴ化合物は、２つの大きな制約を受ける。すなわち、低活性を呈することであり、典型的には野生型（ｗｔ）タンパク質のレベルの５％未満を誘導する活性であること；および供試される遺伝子疾患系のうち少数のサブセットでのみ予測外の活性を示すことである。

本発明は、本明細書に記載の化合物が未成熟終結コドンを抑制するという発見に部分的に基づく。具体的には、本明細書で特定された化合物は、未成熟終止コドンをリードスルーする能力を示す。

一実施形態に従って、提供されるのは、１）ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩であって、ここで、化合物は、式ＩＩの構造：

を有し、上式で、Ｍは、

である場合がある化合物、またはその医薬的に許容可能な塩と；２）医薬的に許容可能な賦形剤または医薬的に許容可能な担体とを含む医薬組成物である。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、１）ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩であって、ここで、化合物は、式Ｉの構造：

を有し、上式で、Ｒは、ＯＨまたはＮＨ_２である場合があり；

ＲがＯＨである際に、Ｍは

である場合があり、ＲがＮＨ_２である際に、Ｍは

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善する方法である。方法は、ＲＮＡ中のＰＴＣに随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩であって、ここで化合物は、式ＩＩの構造：

を有し、上式で、Ｍは、

である場合がある化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、それを必要とする対象に投与することを含む。あるいは、方法は、式Ｉの化合物を有することがある。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、ＲＮＡ配列中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）のリードスルーを促進する方法である。方法は、ＲＮＡ中のＰＴＣに随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量の化合物またはその医薬的に許容可能な塩であって、ここで、化合物は、式ＩＩの構造：

を有し、上式で、Ｍは、

である場合がある化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、それを必要とする対象に投与することを含む。あるいは、化合物は、式Ｉのものであってもよい。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、細胞で機能性タンパク質の産生を促進する方法である。ここで、タンパク質は、未成熟終結コドン（ＰＴＣ）を含むヌクレオチド配列によってコードされ、方法は、式ＩＩの構造：

を有し、上式で、Ｍは、

である場合がある有効量の化合物に細胞を、それを必要とする対象に接触させることを含む。あるいは、化合物は、式Ｉのものであってもよい。あるいは、化合物は、式Ｉのものであってもよい。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは化合物である。ここで、化合物は、構造:

を有する。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは医薬組成物である。ここで、医薬組成物は、構造

を有する化合物、およびステロイドを含む。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善する方法である。ここで、方法は、ＲＮＡ中のＰＴＣに随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量で、化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を、ステロイドと組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含み、化合物は、構造

を有する。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量での化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の使用である。ここで、化合物は、構造ＩＩ：

を有し、上式で、Ｍは、

である場合がある。あるいは、化合物は、式Ｉのものであってもよい。

さらに別の実施形態に従って、提供されるのはＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態の治療「または改善のための医薬の製造における化合物の使用である。ここで、化合物は、式ＩＩの構造：

を有し、上式で、Ｍは、

さらに別の実施形態に従って、提供されるのは、（ａ）式ＩＩの構造：

を有し、上式で、Ｍは、

である場合がある化合物；および（ｂ）ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するための説明書を含む、商業用パッケージである。あるいは、化合物は、式Ｉのものであってもよい。

化合物は、以下のうち１つまたは複数から選択されてもよい。

医学的状態は、表１または表２に列挙された状態のうち１つまたは複数から選択されてもよい。医学的状態は、表１または表２から選択されてもよい。医学的状態は、表１から選択されてもよい。医学的状態は、表２から選択されてもよい。

医学的状態は、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ＤＮＡ修復疾患、炎症性疾患、コラーゲン疾患、腎臓疾患、肺疾患、眼疾患、心血管疾患、血液疾患、代謝性疾患、神経筋疾患、新生物性疾患、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択されてもよい。

医学的状態は、毛細血管拡張性運動失調症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ドラべ症候群、筋強直性ジストロフィー、多発性硬化症、小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、テイ・サックス病、神経組織変性症、パーキンソン病、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、移植片対宿主病、原発性免疫不全症、重症複合免疫不全症、ＤＮＡリガーゼＩＶ欠損症、ナイミーヘン染色体不安定障害、色素性乾皮症（ＸＰ）、関節リウマチ、血友病、フォン・ヴィルブランド病、サラセミア（例えばβ−サラセミア）、家族性赤血球増加症、腎結石症、骨形成不全症、硬変症、神経線維腫、水疱病、リソソーム蓄積病、ハーラー病、家族性コレステロール血症、小脳運動失調症、結節性硬化症、免疫欠損、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、色素性網膜症、網膜色素変性症、アミロイドーシス、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、糖尿病、家族性赤血球増加症、ニーマン・ピック病、表皮水疱症、マルファン症候群、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、脊髄性筋萎縮症、がん、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択されてもよい。

医学的状態は、がんとしてもよい。がんは、頭頸部、眼、皮膚、口、のど、食道、胸部、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎のものとしてもよい。がんは、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌腫、絨毛癌腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来腫瘍、または多発性骨髄種でとしてもよい。がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤血球白血球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、または多発性骨髄種としてもよい。

未成熟終結コドンは、ＵＧＡまたはＵＡＧとしてもよい。未成熟終結コドンは、ＵＧＡとしてもよい。未成熟終結コドンは、ＵＡＧとしてもよい。未成熟終結コドンは、ＵＡＡとしてもよい。

方法は、ステロイドを対象に投与することをさらに含んでいてもよい。ステロイドは、以下：メドロキシプロゲステロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸コルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、ダナゾール、フルドロコルチゾン、ミフェプリストン、酢酸メゲストロール、およびプロゲステロンのうち１つまたは複数から選択されてもよい。化合物は、

としてもよい。化合物は、

ゲンタマイシンＣ１、Ｃ１ａ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｂ、Ｂ１、Ａ、Ｇ４１８、Ｘ２、シソマイシン、ガラミン、および環Ｃの構造、ならびにＧ４１８と組み合わせて供試したいくつかのステロイドの構造を示す図である。図１の続きの図。９６穴プレートの免疫蛍光アッセイを用いたゲンタマイシンＢ１およびＸ２によるＰＴＣリードスルーの誘導を示す図である。ここで、グラフに示されないものは、リードスルー活性を持たない。ウェスタン分析によって測定されたゲンタマイシンＢ１、ゲンタマイシンＸ２、Ｇ４１８、およびゲンタマイシンによる全長ｐ５３の誘導を示す図である。ここでは、全長（ＦＬ）型および切頭型ｐ５３（ＴＲ）のバンドの強度を、非処理細胞で見られる切頭型ｐ５３のバンドの強度に対して示し、レーンの下に提示する。ウェスタン分析を用いたＧ４１８、ゲンタマイシン、ゲンタマイシンＢ１、およびゲンタマイシンＸ２によるＰＴＣリードスルーの誘導を示す図である。ここでは、図３Ａに観察された全長ｐ５３の量を、ｌｏｇスケール上の異なる化合物の濃度に対してプロットした。ステロイド（Ａ）デキサメタゾン、および（Ｂ）ベタメタゾンおよび酢酸メドロキシプロゲステロン（メドロキシプロ）と組み合わせたゲンタマイシンＧ４１８による全長ｐ５３の誘導を示す図である。ゲンタマイシンＢ１およびゲンタマイシンＸ２による未成熟終結コドン（ＰＴＣ）リードスルーの誘導を示す図である。図５の続きの図。図５の続きの図。ＴＧＡ、ＴＡＧ、およびＴＡＡの終結コドンにおけるゲンタマイシンＢ１によるＰＴＣリードスルーの誘導を示す図である。種々のがん細胞株−ＳＷ９００、ＮＣＩ−Ｈ１６８８、ＥＳＳ−１、ＳＫ−ＭＥＳ−１、ＨＣＣ１９３７、Ｈ１２９９、およびＨＣＴ１１６におけるＰＴＣリードスルーの誘導を示す図である。ｉｎｖｉｖｏアッセイにおけるマウスでのＰＴＣリードスルーの誘導を示す図である。稀少遺伝子疾患患者由来の細胞におけるゲンタマイシンＢ１によるＰＴＣリードスルーの誘導を示す図である。ここでは、パネルＡおよびＢは神経セロイドリポフスチン症を示し、パネルＣはデュシェンヌ型筋ジストロフィーを示し、パネルＤはシムケ免疫性骨異形成症を示す、パネルＥは劣性栄養障害性表皮水疱症を示す。

実施形態によっては、本明細書に記載の化合物を使用して、種々のがんなどのＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を含む様々な適応症を、治療または改善してもよい。様々な状態は、表１に見出されるものにしてもよい。

表１−ＰＴＣに随伴する医学的状態

表２−ＰＴＣに随伴する医学的状態のショートリスト

上記の医学的状態の全てをもたらすコドン変化は、当技術分野で公知であり、ＰＴＣをもたらす新しいコドン変化は今もなお発見されている。しかしながら、そのような全てのＰＴＣに対し、本明細書に記載の化合物がある程度のリードスルー活性を有することが期待される。

本明細書に記載されるような化合物は、遊離の形態であってもその塩の形態であってもよい。実施形態によっては，本明細書に記載されるような化合物は、医薬的に許容可能な塩の形態であってもよく、この形態は当技術分野で公知である（ＢｅｒｇｅＳ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（１９７７年）、６６（１）：１〜１９）。本明細書に使用されるような医薬的に許容可能な塩としては、例えば、親化合物の所望の薬理活性を有する塩（親化合物の生物学的効果および／または性質を保持し、生物学的におよび／またはそれ以外に望ましくないところがない塩）が挙げられる。本明細書に記載されるような塩を形成することが可能な１つまたは複数の官能基を有する化合物は、例えば、医薬的に許容可能な塩として形成されることがある。１つまたは複数の塩基性官能基を含有する化合物は、例えば、医薬的に許容可能な有機または無機の酸と共に医薬的に許容可能な塩を形成することが可能であることがある。医薬的に許容可能な塩は、例えば、以下に限定されないが、酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、酪酸、桂皮酸、クエン酸、ショウノウ酸、ショウノウスルホン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジエチル酢酸、ジグルコン酸、ドデシルスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルコヘプタン酸、グルコン酸、グリセロリン酸、グリコール酸、ヘミスルホン酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、イソニコチン酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、ペクチン酸、３−フェニルプロピオン酸、リン酸、ピクリン酸、ピメリン酸、ピバル酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、硫酸、スルファミン酸、酒石酸、チオシアン酸、またはウンデカン酸に由来する場合がある。１つまたは複数の酸性官能基を含有する化合物は、医薬的に許容可能な塩基と共に医薬的に許容可能な塩を形成することが可能である場合があり、そのような塩基としては、例えば、以下に限定されないが、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属に基づく無機塩基、または１級アミン化合物、２級アミン化合物、３級アミン化合物、４級アミン化合物、置換アミン、天然に生じた置換アミン、環状アミン、もしくは塩基性イオン交換樹脂などの有機塩基がある。医薬的に許容可能な塩は、例えば、以下に限定されないが、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガンもしくはアルミニウムなどの医薬上許容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩、アンモニア、ベンザチン、メグルミン、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、イソプロピルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、グルカミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、プロカイン、Ｎ−エチルピペリジン、テオブロミン、テトラメチルアンモニウム化合物、テトラエチルアンモニウム化合物、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、モルホリン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−エチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、１−エフェナミン、Ｎ，Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミン、またははポリアミン樹脂に由来する場合がある。実施形態によっては、本明細書に記載されるような化合物は、酸性基と塩基性基の療法を含有することがあり、内塩または双性イオンの形態であることがあり、そのようなものとしては例えば、以下に限定されないが、ベタインがある。本明細書に記載されるような塩は、当業者に公知の従来のプロセスで調製されてもよく、そのようなプロセスは、例えば、以下に限定されないが、遊離形態を有機酸もしくは無機酸または塩基と反応させることによるか、または他の塩からの陰イオン交換もしくは陽イオン交換によって行われる。当業者は、塩の調製が、化合物の単離および精製の間にｉｎｓｉｔｕで起こることもあれば、塩の調製が、単離および精製された化合物を別々に反応することによって起こることもあることを認識されよう。

実施形態によっては、本明細書に記載されるような化合物およびその異なる全ての形態（例えば、遊離形態、塩、多形体、異性体）は、例えば、溶媒和物などの溶媒付加形態であることがある。溶媒和物は、化合物またはその塩と物理的に会合した、化学量論的または非化学量論的のどちらか量の溶媒を含有する。溶媒は、例えば、以下に限定されないが、医薬的に許容可能な溶媒としてもよい。例えば、溶媒が水である際には水和物が形成され、また、溶媒がアルコールである際には、アルコラートが形成される。

実施形態によっては、本明細書に記載されるような化合物およびその異なる全ての形態（例えば、遊離形態、塩、溶媒和物、異性体）には、結晶形態および非晶質形態が含まれることがあり、そのようなものとしては例えば、多形体、擬似多形体、立体配座多形体、非晶質形態、またはそれらの組合せがある。多形体には、同じ元素組成の化合物の異なる結晶充填配列が含まれる。多形体は、通常は、異なるＸ線回折パターン、赤外線スペクトル、融点、密度、硬度、結晶の形状、光学特性および電気的特性、安定性、および／または溶解性を有する。当業者は、再結晶溶媒、結晶化速度、および保存温度を含む様々な要因によって単一の結晶形態が優位となる場合があることを理解されよう。

ＰＴＣリードスルー化合物は、タンパク質コード配列中のＰＴＣのリードスルーによって全長タンパク質を産生することを化合物が可能にするならば、治療上の利点を提供することがある。ここで、全長タンパク質は、配列のバリエーションがある場合があり、天然のタンパク質と同じでない場合がある。一般に、リードスルーによって産生される全長タンパク質は、機能性であり、野生型タンパク質の代わりをすることができる。場合によっては、全長タンパク質の通常の総量の、ここではタンパク質の総量のたった５％程度が、ＰＴＣに随伴する医学的状態ではない対象の通常産生するものである。しかし、ＰＴＣに随伴する医学的状態に応じて、全長タンパク質の通常の総量のたった１％程度が、治療上の利点を持つには充分であることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約１％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約２％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約３％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約４％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約５％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約６％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約７％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約８％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約９％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。もしＰＴＣリードスルー化合物が、タンパク質コード配列中にＰＴＣのリードスルーをもたらして、全長タンパク質の通常の総量の少なくとも約１０％を産生したならば、治療上の利点は達成されることがある。

あるいは、ＰＴＣリードスルー化合物は、化合物がタンパク質コード配列中のＰＴＣの充分なリードスルーによって、対象に多少の治療上の利点を与えるか、または多少の治療結果を達成することを可能にするならば、治療上の利点をもたらすことがある。治療上の利点は、多少の治療結果を測定することによって、機能的に決定されてもよい。治療結果は、医薬的有効量または予防的有効量の化合物に起因することがあり、そのようなものとしては、例えば、腫瘍サイズの低減、寿命の増加、症状の発症もしくは疾患の発症の遅延、代謝効率の増加、または平均余命の増加が挙げられる。医薬的有効量の化合物または予防的有効量の化合物は、対象の病態、年齢、性別、疾患に関連のないまたは関連する他の健康上の要因、および体重；および対象で所望の応答を誘起する化合物の能力によって変わることがある。

さらに、リードスルー効率は、ＴＡＧでよりもＴＧＡでの方が大きい場合があり、状況によっては、ＴＡＡで何のリードスルーもない場合がある。したがって、治療を、特定の終止コドンに合わせてもよい。

実施形態によっては、本明細書に記載されるような化合物およびその異なる全ての形態（例えば、遊離形態、塩、溶媒和物、多形体、プロトン化形態）は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体、個々のエナンチオマー、個々のジアステレオマー、ラセミ化合物、ジアステレオマー混合物、およびそれらの組合せなどの異性体を含み、利便性のために例示された式の記載に限定されるものではない。

例えば、ゲンタマイシンＢ１は、以下のように表されることがある。

実施形態によっては、化合物には、類似体、異性体、立体異性体、または関連誘導体が含まれることがある。実施形態によっては、化合物を別の化合物と併せて使用して、医薬組成物を形成してもよい。

実施形態によっては、本明細書に記載されるような医薬組成物は、そのような化合物の塩、好ましくは医薬的または生理的に許容可能な塩を含んでいてもよい。医薬製剤は、典型的には、注射によろうが、吸入によろうが、経口投与によろうが、灌注によろうが、または選択された治療に適した他の方式によろうが、製剤の投与方式に許容可能な１つまたは複数の担体、賦形剤、または希釈剤を含むことになる。適した担体、賦形剤、または希釈剤（本明細書では互換的に使用）は、そのような投与方式で使用するために当技術分野で公知のものである。

適した医薬組成物は、当技術分野で公知の手段、およびその投与方式、および熟練の施術者によって決定された用量によって、配合されてもよい。非経口投与のために、化合物は、滅菌された水もしくは生理食塩水に、またはビタミンＫに使用されるものなど非水溶性の化合物に使用される医薬的に許容可能なビヒクルに溶解されてもよい。経腸投与のために、化合物は、錠剤、カプセル、または液体溶解形態で投与されてもよい。錠剤またはカプセルは、腸溶コーティングされていてもよいし、徐放性用の配合としてもよい。数多くの適切な情報が公知であり、そのようなものとしては、放出される化合物を被包しているポリマー性またはタンパク質性の微粒子、軟膏、ペースト、ゲル、ハイドロゲル、または化合物を投与するために局所でまたは局所的に使用できる溶液が挙げられる。徐放性パッチまたは埋込物を採用して、長期間にわたる放出を可能にすることもある。当業者に公知の数多くの手法が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅ＆ＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙｂｙＡｌｆｏｎｓｏＧｅｎｎａｒｏ、第２０版、ＬｉｐｐｅｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、（２０００年）に記載されている。非経口投与の配合は、例えば、賦形剤、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、野菜由来の油脂、または水素化ナフタレンを含有することがある。生体適合性かつ生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを使用して、化合物の放出を制御してもよい。調節化合物に用いる他の潜在的に有用な非経口デリバリ・システムとしては、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み可能な注入システム、およびリポソームが挙げられる。吸入のための配合は、賦形剤、例えばラクトースを含有していてもよいし、例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココレートおよびデオキシコレートを含有する水溶液としてもよいし、点鼻剤の形態でまたはゲルとして投与するための油性溶液としてもよい。

本明細書に記載されるような化合物もしくは医薬組成物、または本明細書に記載されるような使用のためのものは、埋込物、移植片、プロテーゼ、ステントなどの医療デバイスまたは器具によって投与されてもよい。さらに、そのような化合物または組成物を含有および放出することが意図された埋込物が考案されることもある。一例としては、ある期間にわたって化合物を放出するように適合させた、ポリマー材料で作製された埋込物があろう。

本明細書に記載されるような「有効量」の医薬組成物は、治療的有効量または予防的有効量を含む。「治療的有効量」は、腫瘍サイズの低減、寿命の増加、または平均余命の増加などの所望の治療結果を達成するための、投薬量および必要な期間での有効な量を指す。化合物の治療的有効量は、対象の病態、年齢、性別、および体重；および対象で所望の応答を誘起する化合物の能力などの要因によって変わることがある。投薬レジメンは、最適な治療応答を与えるよう調整されてもよい。治療的有効量は、化合物の任意の毒性効果または有害な効果に治療的に有益な効果がまさるものであることもある。「予防的有効量」は、所望の予防結果（例えば、腫瘍の縮小、寿命の増加、平均余命の増加、または未成熟終結コドンに随伴する医学的状態の進行の防止）を達成するための、投薬量および必要な期間での有効な量を指す。典型的には、予防的有効量が治療的有効量よりも少なくなるように、疾患の前にまたはより初期の段階で、予防的な用量を対象に使用する。

軽減させる状態の重症度と共に投薬量の値が変わることがあることに留意されたい。任意の具体的な対象のために、個々の要望、および投与を行う者または組成物の投与を監督する者の専門的な判断に従って、時間をかけて特定の投薬レジメンを調整してもよい。本明細書に記述される投薬量の幅は、例示に過ぎず、医療施術者によって選択されることのある投薬量の幅を制限するものではない。組成物中の活性化合物（複数可）の量は、対象の病態、年齢、性別、および体重などの要因によって変わることがある。投薬レジメンを、最適な治療応答を与えるように調整してもよい。例えば、単独のボーラスを投与してもよいし、時間をかけていくつかの分割用量を投与してもよいし、治療状況の緊急性によって示される通りに用量を比例的に低減または増加させてもよい。投与を簡便とし、投薬量を均一にするために、非経口組成物を単位剤形で配合することが有利である場合がある。

実施形態によっては、本明細書に記載されるような化合物およびその異なる全ての形態は、例えば、以下に限定されないが、表１または表２に挙げられた群から選択される少なくとも１つの適応症に用いる他の治療方法と組み合わせて使用されることがある。

一般に、本明細書に記載されるような化合物は、実質的な毒性を引き起こすことなく使用されるべきである。本明細書に記載されるような化合物の毒性は、標準的な手法を使用して、例えば、細胞培養物または実験動物で試験して、治療指標、すなわちＬＤ５０（集団の５０％に致死性を示す用量）とＬＤ１００（集団の１００％に致死性を示す用量）との比率を決定することによって決定することができる。しかし、状況によっては、例えば重度の疾患状態などでは、実質的に過剰な組成物を投与することが適切である場合がある。本明細書に記載されるような化合物によっては、多少の濃度で毒性であることがある。用量設定研究を用いて、毒性濃度および非毒性濃度を決定してもよい。特定の化合物または組成物の細胞株間または動物モデルでの特異性を調べることによって、毒性を評価してもよい。

本明細書に記載されるような化合物は、対象に投与されてもよい。本明細書で使用される際に、「対象」は、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなどとしてもよい。対象は、未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態であることが疑われるかまたはそうなるリスクがある場合がある。

本明細書で使用される際に、「未成熟終結コドンに随伴する医学的状態」は、ナンセンスコドンによって全体または一部に引き起こされる任意の医学的状態として定義されていることがある。上記ナンセンスコドンは、結果として、ｍＲＮＡ安定性の減少、ならびに非機能性タンパク質をもたらすタンパク質の短縮を生じることがあり、上記非機能性タンパク質は、次々にその医学的状態を直接的または間接的に生じることがある。例えば、未成熟終結コドンに随伴する医学的状態は、表１または表２から選択されてもよい。

約５０００種程度のそのような遺伝子疾患があり、以下のような広範なカテゴリーにグループ分けされることがある：自己免疫疾患、血液疾患、コラーゲン疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、肺疾患、または中枢神経系疾患。遺伝子による遺伝性疾患の場合の１／３が、未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に関係する（ＦｒｉｓｃｈｍｅｙｅｒＰＡおよびＤｉｅｔｚＨＣ、１９９９年）。多くの場合、ナンセンス変異が効果を及ぼす主要な機序は、ナンセンス媒介性ｍＲＮＡ崩壊（ＮＭＤ）とよばれる監視機序によるそのｍＲＮＡの分解を経るものである（ＣｈａｎｇＹＦら、２００７年；ＩｓｋｅｎＯおよびＭａｑｕａｔＬＥ、２００７年；ＲｅｂｂａｐｒａｇａｄａＩおよびＬｙｋｋｅ−ＡｎｄｅｒｓｅｎＪ、２００９年；ＲｅｈｗｉｎｋｅｌＪら、２００６年；およびＭｕｈｌｅｍａｎｎＯら、２００８年）。

未成熟終結コドンに随伴する様々な医学的状態のための診断方法は、当技術分野で公知である。状態に応じて、遺伝子的な診断は、容易に利用できることもあるし、直接的なシーケンシングによって決定されることもある。例えば、医学的状態は、中枢神経系疾患、毛細血管拡張性運動失調症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ドラべ症候群、筋強直性ジストロフィー、多発性硬化症、小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、テイ・サックス病、神経組織変性症、パーキンソン病、自己免疫疾患、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、移植片対宿主病、原発性免疫不全症、重症複合免疫不全症、ＤＮＡリガーゼＩＶ欠損症、ＤＮＡ修復性障害、ナイミーヘン染色体不安定障害、色素性乾皮症（ＸＰ）、炎症性疾患、関節リウマチ、血液疾患、血友病、フォン・ヴィルブランド病、サラセミア（例えばβ−サラセミア）、家族性赤血球増加症、腎結石症、コラーゲン疾患、骨形成不全症、硬変症、神経線維腫、水疱病、リソソーム蓄積病、ハーラー病、家族性コレステロール血症、小脳運動失調症、結節性硬化症、免疫欠損、腎臓疾患、肺疾患、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、色素性網膜症、網膜色素変性症、アミロイドーシス、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、糖尿病、家族性赤血球増加症、ニーマン・ピック病、表皮水疱症、マルファン症候群、神経筋疾患、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、脊髄性筋萎縮症、がん、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択されてもよい。さらに、ここで、未成熟終結コドンに随伴する医学的状態は、がんであり、がんは、頭頸部、眼、皮膚、口、のど、食道、胸部、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎のものであるがんのうち１つまたは複数から選択される。あるいは、がんは、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌腫、絨毛癌腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来腫瘍、または多発性骨髄種から選択されてもよい。ＰＴＣがその状態に関わっているか否かを決定するための試験は、当業者に公知である。

供試されたおよび供試される化合物を下記表ＡおよびＢにそれぞれ挙げる。

本明細書に使用されるようなゲンタマイシン錯体およびゲンタマイシンＣ錯体としては、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ１ａ、およびゲンタマイシンＣ２（約８０％の錯体）が挙げられ、最も著しい抗微生物活性を有することが報告されている。残りの約２０％の錯体は、ゲンタマイシンＡ、Ｂ、Ｘなどから作製される。厳密な組成は、異なる生産ランの間で、および生産者に基づき、変わることがある。

本発明の様々な代替の実施形態および例が本明細書に記載されている。これらの実施形態および例は、例示的なものであって、本発明の範囲を限定するものと解されるべきではない。

材料および方法
ヒト細胞株におけるｐ５３のＰＴＣリードスルー
化合物をヒト細胞におけるＰＴＣリードスルーについて供試した。ここでは、ＴＰ５３遺伝子のエクソン６でＴＧＡ（Ｒ２１３Ｘ）についてホモ接合体である乳癌ＨＤＱ−Ｐ１細胞（Ｗａｎｇら、２０００年）を選択したが、この選択は、アミノグリコシドＧ４１８によるリードスルーの証拠（Ｆｌｏｑｕｅｔ，Ｃ．ら、２０１１年）が確かなものであると思われることに基づく。定量的自動キャピラリー電気泳動システムを使用したウェスタン分析により、ＨＤＱ−Ｐ１細胞が極めて僅かなレベルの切頭型ｐ５３を発現し、全長ｐ５３を発現しないこと、および５０μＭのＧ４１８が全長ｐ５３の形成を誘導すると共に切頭型ｐ５３のレベルを増加させること（Ｆｌｏｑｕｅｔ，Ｃ．ら、２０１１）が示された。

ｐ５３のＣ末に位置する核局在配列および四量体化ドメインは、ｐ５３を核に保持させる一因であり（Ｓｈａｕｌｓｋｙ，Ｇら、１９９０年；Ｌｉａｎｇ，Ｓ．ＨおよびＣｌａｒｋ，Ｍ．Ｆ．、２００１年）、Ｒ２１３で切り縮められたｐ５３は、これらの配列を失っている。ｐ５３のＲ２１３Ｘリードスルーのハイスループットでの分析を可能にするために、自動９６穴蛍光顕微鏡アッセイを構築して核のｐ５３シグナルを検出し定量した。Ｇ４１８は、リードスルーの誘導に一致して、濃度依存的な核のｐ５３増加を誘導した。７２時間の曝露の間、５０μＭのＧ４１８は、９％の細胞で核の５３の発現を誘導すると共に、２５０μＭのＧ４１８は、ほぼ全ての細胞で核のｐ５３の発現を誘導した。

自動ｐ５３免疫蛍光９６穴プレートアッセイ
１０％ＦＢＳおよび１×Ｇｉｂｃｏ（商標）抗生物剤−抗真菌剤を含有するＤＭＥＭ中で培養したＨＤＱ−Ｐ１細胞を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＶｉｅｗ（商標）９６穴プレートのウェル当たり４０００個で播種した。翌日、供試化合物を含有する新鮮な培養培地で、培地を置換した。７２時間後、培養培地を吸引除去し、３％パラホルムアルデヒド、０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００および１．５μｇ／ｍｌｅａｓｔＨｏｅｃｈｓｔ３３３２３を含むリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．２（ＰＢＳ）を用いて、細胞を２０分間、室温で固定した。細胞をＰＢＳで１回リンスし、ＰＢＳ中３％ＢＳＡのブロッキング溶液を用いて２時間、室温でインキュベーションした。ブロッキング溶液を吸引除去し、ブロッキング溶液中０．１μｇ／ｍＬＤＯ−１ｐ５３マウスモノクローナルｐ５３抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚ（商標））を用いて、細胞を９０分間、室温でインキュベーションした。ウェルを１回、ＰＢＳで５分間洗浄し、ブロッキング溶液中Ａｌｅｘａ４８８コンジュゲートヤギ抗マウス抗体（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＡ１１０２９（商標））を用いて細胞を９０分間、室温でインキュベーションした。ウェルを１回、ＰＢＳで５分間洗浄し、７５μＬのＰＢＳを添加し、黒色の接着膜でプレートを覆い、４°Ｃで一晩保存した。ＣｅｌｌｏｍｉｃｓＡｒｒａｙＳｃａｎＶＴＩ（商標）自動蛍光イメージャを使用して、核のｐ５３の免疫蛍光強度を測定した。

簡潔に述べれば、Ｈｏｅｃｈｓｔ（商標）およびＧＦＰ（ＸＦ５３）チャネルで２０×対物レンズを用いて、イメージを得た。各ウェルについて１５視野のイメージを得た。これは、約２０００個の細胞に相当する。

ＣｏｍｐａｒｔｍｅｎｔＡｎａｌｙｓｉｓｂｉｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを使用して、核を特定しその境界を定めた。次いで、核のＡｌｅｘａ４８８（商標）の蛍光強度を測定し、非処理細胞由来の核の蛍光強度（５０〜７５、実験に依る）を閾値として用いて平均核蛍光強度または陽性核の％として表した。

自動電気泳動ウェスタン分析アッセイ
ＨＤＱ−Ｐ１細胞を、ＴＣ処理６穴プレートのウェル当たり１００，０００個の細胞で播種した。翌日、供試化合物を含有する新鮮培地で培地を置換し、４８時間から９６時間インキュベーションした。培地を吸引除去し、単層の細胞を１ｍＬの氷冷ＰＢＳでリンスした。８０μＬの溶解緩衝液（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．５、１５０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭＥＧＴＡ、１％（ｖ／ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ１００（商標）、２．５ｍＭピロリン酸ナトリウム、新鮮な１ｍＭＮａ３ＶＯ４を補充した１ｍＭベータ−グリセロリン酸、１ｍＭジチオスレイトール、および１×ｃｏｍｐｌｅｔｅプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＲｏｃｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（商標））を用いて細胞を溶解した。１８，０００ｇ、４°Ｃで１５分間の遠心分離によって、溶解物を予備的に清澄にした。上清を収集し、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いてタンパク質を定量して、溶解物を１ｍｇ／ｍＬタンパク質となるように調整した。キャピラリー電気泳動およびウェスタン分析の条件は、製造業者の試薬を用い、ユーザマニュアル（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅＷＥＳ（商標））に従って実施した。簡潔に述べれば、５．６μＬの細胞溶解物を１．４μＬの蛍光マスターミックスと混合し、９５°Ｃで５分間加熱した。試料、ブロッキング試薬、洗浄緩衝液、ＤＯ−１ｐ５３抗体（０．５μｇ／ｍＬ）およびビンキュリン抗体（１：２０００、Ｒ＆Ｄクローン７２８５２６）、二次抗体、および化学発光基質を、製造業者の提供するマイクロプレートに分注した。電気泳動による分離および免疫検出は、デフォルト設定を用いて自動で実施した。内蔵されたＣｏｍｐａｓｓ（商標）ソフトウェア（Ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｐｌｅ（商標））を用いて、データを解析した。切頭型および全長のｐ５３のピーク強度を、ローディング対照として使用したビンキュリンのピークの強度に正規化した。結果を擬似ブロットおよび電気泳動像として示す。

場合によっては、いくつかの抗体を用いて、従来のウェスタン・ブロッティングの手順を使用した（例えば図４）。

供試化合物
ゲンタマイシン、ゲンタマイシンＡ、Ｂ、Ｂ１、Ｃ１、Ｃ１ａ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｘ２、シソマイシン、ならびにゲンタマイシン断片のガラミンおよび環Ｃ（図１を参照）は、ＭｉｃｒｏＣｏｍｂｉＣｈｅｍから入手した。Ｇ４１８は、Ｓｉｇｍａ（商標）から入手した。ベタメタゾン、デキサメタゾン、および酢酸メドロキシプロゲステロンは、Ｓｉｇｍａ（商標）から得た。ゲンタマイシンＢ１は、ＭｉｃｒｏＣｏｍｂｉＣｈｅｍ（商標）から購入した（カタログ＃ＭＣＣ３４３６）。ゲンタマイシンＸ２は、Ｔｏｋｕ０Ｅ（カタログ＃Ｇ０３６）から得た。Ｇ４１８は、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ由来である（カタログ＃１１８１１−０２３）。ゲンタマイシンは、Ｓｉｇｍａ由来である（カタログ＃Ｇ１２６４）。

免疫蛍光Ｐ５３試験
図５の方法：ＴＰ５３遺伝子にホモ接合のＲ２１３Ｘナンセンス変異を有するヒトＨＤＱ−Ｐ１乳癌細胞を、３つの異なるバッチの医薬ゲンタマイシン硫酸塩に、または医薬ゲンタマイシンから精製したゲンタマイシンの主要部および小部分の構成成分に、７２時間曝露した。次いで、細胞を固定し、Ｈｏｅｃｈｓｔ（商標）３３３２３を用いてＤＮＡを染色し、ＳａｎｔａＣｒｕｚのＤＯ−１ｐ５３抗体を用いた免疫蛍光標識によって核のｐ５３を検出した。Ｂａｒａｄａｒａｎ−Ｈｅｒａｖｉら（２０１６年）に記載されるようにＣｅｌｌｏｍｉｃｓ（商標）ＶＴＩ９６穴イメージャを使用して、ｐ５３−陽性核を決定した。ｐ５３陽性核のパーセントは、ＰＴＣリードスルーの程度の測定量である。パネルＥおよびＦ：ＨＤＱ−Ｐ１細胞を、ゲンタマイシンのバッチ、ゲンタマイシンＢ１、またはゲンタマイシンＸ２に、７２時間曝露し、Ｂａｒａｄａｒａｎ−Ｈｅｒａｖｉら（２０１６年）に記載のＳａｎｔａＣｒｕｚ（商標）ＤＯ−１ｐ５３抗体を用いたｐ５３ウェスタン分析に供して、切頭型ｐ５３および全長ｐ５３の形成を測定した。ここで、全長ｐ５３は、ＰＴＣリードスルー産生物である。パネルＦのｙ軸は、全長ｐ５３のシグナル強度を示し、化学発光単位として表されている。

ゲナタマイシンＢ１を用いる未成熟終止コドン試験
図６の方法：ＴＧＡ、ＴＡＧ、またはＴＡＡのナンセンス変異を２１３位のアミノ酸に担持するｐ５３発現構築体を用いて、ＮＣＩ−Ｈ１２９９ヒト非小細胞肺癌細胞を一過的にトランスフェクションした。トランスフェクション試薬のみに曝露した（模擬）か、またはＷＴのｐ５３発現物を一過的にトランスフェクションした細胞を、対照として含めた。標示された濃度のゲンタマイシンＢ１またはＵＳＰゲンタマイシン硫酸塩（Ｓｉｇｍａ（商標））に４８時間、細胞を曝露し、Ｂａｒａｄａｒａｎ−Ｈｅｒａｖｉら（２０１６年）に記載されるように切頭型ｐ５３および全長ｐ５３（リードスルー産物）の形成を決定した。全長ｐ５３および切頭型ｐ５３の量を、非処理細胞における全長（ＷＴの）または切頭型ｐ５３の量に比較して表した。

ゲナタマイシンＢ１を用いる未成熟終止コドン試験
図７の方法：ホモ接合のＴＰ５３ナンセンス変異ｓ（すなわちＳＷ９００、ＮＣＩ−Ｈ１６８８、ＥＳＳ−１、ＳＫ−ＭＥＳ−１、ＨＣＣ１９３７、Ｈ１２９９、およびＨＣＴ１１６）を有する各種ヒトがん細胞株を、標示された濃度のゲンタマイシンＢ１またはＧ４１８に３日間、６日間、または１３日間、標示の通りに曝露し、切頭型ｐ５３（下方矢印）および全長ｐ５３（上方矢印，リードスルー産物）の形成を、Ｂａｒａｄａｒａｎ−Ｈｅｒａｖｉら（２０１６年）に記載されるように決定した。ナンセンス変異を細胞株名の下に標示した。１１６ｋＤａ付近に泳動するビンキュリンをタンパク質のローディング対照として使用した。

ｉｎｖｉｖｏにおけるＰＴＣリードスルーの誘導
図８の方法：Ｒ２１３Ｘ（ＴＧＡ）ナンセンス変異を担持したＴＰ５３発現構築体を安定的に発現する２００万個のＮＣＩ−Ｈ１２９９ヒト非小細胞肺癌細胞を、免疫無防備のＮＲＧ（ＮＯＤ−Ｒａｇ１^ｎｕｌｌＩＬ２ｒｇ^ｎｕｌｌ）マウスの腰部に皮下移植した。パネルＡ：腫瘍異種移植片がおよそ０．２〜０．５立方センチメートルのサイズに達した際に、標示された用量で生理食塩水、ゲンタマイシンＢ１、またはＵＳＰゲンタマイシン硫酸塩を、５日連続でマウスに腹腔内注射した。最後の注射の７２時間後、マウスを屠殺し、切頭型ｐ５３（ＴＲ−ｐ５３）および全長ｐ５３（ＦＬ−ｐ５３）の量を、Ｂａｒａｄａｒａｎ−Ｈｅｒａｖｉら（２０１６年）に記載されるようにウェスタン分析によって決定した。パネルＢ：腫瘍異種移植片がおよそ０．２〜０．５立方センチメートルのサイズに達した際に、生理食塩水、ゲンタマイシンＢ１、またはＵＳＰゲンタマイシン硫酸塩を１回、マウスに腹腔内注射した。最後の注射の４８時間後、マウスを屠殺し、切頭型ｐ５３および全長ｐ５３の量をウェスタン分析によって決定した。生理食塩水処理したマウスに対する全長ｐ５３の量を各レーンの下に標示する。ビンキュリンをタンパク質ローディング対照として使用した。

稀少遺伝子疾患の患者由来の細胞におけるゲンタマイシンＢ１によるＰＴＣリードスルーの誘導
図９の方法：パネルＡおよびＢ：ＴＰＰ１（トリペプチジルペプチダーゼＩ）遺伝子に複合ヘテロ接合性ナンセンス変異（Ｒ１２７Ｘ／Ｒ２０８Ｘ）を有した神経セロイドリポフスチン症患者由来のＧＭ１６４８５初代線維芽細胞を、１０日間にわたって２５μｇ／ｍＬゲンタマイシンＢ１または１００μｇ／ｍＬゲンタマイシンに曝露した。細胞溶解物を調製し、Ｌｏｊｅｗｓｋｉら（２０１４年）の記載に改変を加えてＴＰＰ１酵素活性を決定した。すなわち、溶解物を５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．０で１：５に希釈し、３７℃で１時間、プレインキュベーションした。プレインキュベーション後、ＧＭ１６４８５溶解物から得た２０μｇの総タンパク質または非罹患者（ＷＴ）由来の線維芽細胞の溶解物から得た５μｇの総タンパク質を、終濃度６２．５μＭのＡｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−７−アミド−４−メチルクマリンを含有する１５０μＬの５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．０中、３７℃で２時間、インキュベーションした。ＴＥＣＡＮＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００（商標）分光光度計を使用し、励起波長３６０ｎｍおよび発光波長４６０ｎｍを用いて、蛍光を測定した。タンパク質濃度および時間について生成物の形成が線形となる条件下で、アッセイを実施した。ＴＰＰ１活性を、２人の非罹患者（ＷＴ）由来の非処理の初代線維芽細胞の活性平均に比較して表した（パネルＡ）。パネルＢでは、ＴＰＰ１の形成について、Ｂａｒａｄａｒａｎ−Ｈｅｒａｖｉら（２０１６年）にあるように、Ａｂｃａｍ（商標）ａｂ５４６８５ α−ＴＰＰ１抗体を用いた自動キャピラリー電気泳動ウェスタン分析によって、同じ細胞抽出物を分析した。また、ＧＭ１６４８５に用いたタンパク質の量の２０％を使用して、ＷＴ線維芽細胞由来の抽出物も分析した。

パネルＣ：ナンセンス変異（ＤＭＤ：Ｅ２０３５Ｘ）を有するデュシェンヌ型筋ジストロフィー患者由来のＨＳＫ００１筋芽細胞を筋管に分化させて、標示された濃度のゲンタマイシンＢ１またはゲンタマイシンに３日間曝露し、Ａｂｃａｍ（商標）ａｂ１５２７７ α−ジストロフィン抗体を使用した自動キャピラリー電気泳動ウェスタン分析によって、ジストロフィンの発現レベルを決定した。ＷＴの筋管から得た抽出物も分析し、その際に、５％の量のタンパク質をＤＭＤ細胞に使用した。ベータアクチンをローディング対照として使用した。

パネルＤ：ホモ接合のＳＭＡＲＣＡＬ１ナンセンス変異（Ｒ１７Ｘ）を有するシムケ免疫性骨異形成症の患者由来のＳＤ１２３線維芽細胞を、標示された濃度のゲンタマイシンＢ１またはゲンタマイシンに６日間曝露し、ＣｏｒｎｅｌｉｕｓＢｏｅｒｋｏｅｌ博士（ブリティッシュコロンビア大学）から供与された抗ＳＭＡＲＣＡＬ１抗体を使用したウェスタン・ブロッティングによって、ＳＭＡＲＣＡＬ１のレベルを決定した。ＷＴの線維芽細胞から得た抽出物も分析し、その際に、１０％の量のタンパク質をＳＩＯＤ細胞に使用した。ベータアクチンをローディング対照として使用した。

パネルＥ：ホモ接合のＱ２５１Ｘナンセンス変異をＣＯＬ７Ａ１遺伝子上に有する劣性栄養障害性表皮水疱症の患者由来のＥＢ１４ケラチノサイトを、標示された濃度のゲンタマイシンＢ１またはゲンタマイシンと共に７２時間インキュベーションし、ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ２３４１９２コラーゲン７抗体を使用したウェスタン・ブロッティングによって、細胞性コラーゲン７を測定した。ＷＴのケラチノサイトから得た抽出物も分析し、その際に、１０％の量のタンパク質をＥＢ１４細胞に使用した。

化合物の合成案
ゲンタマイシン類似体（すなわち表Ｂを参照）の合成案を示す。これは、デオキシストレプタミンに結合しているガロサミンを含む擬似二糖のα−グリコシル化を介するものであり、化学的または酵素的のどちらかで行う。これは、選択的に保護された二糖に接近する必要があり、この二糖では、グリコシル化されるアルコールが遊離し、一方で、他方のアルコールおよびアミンが保護されている。この二糖への１つのルートは、当業者に公知の適切なブロッキング基（Ｃｂｚ、Ｂｏｃなど）を用いて全てのアミンを初めに保護し、次いで、Ｌｅｙ試薬を用いてストレプタミン部分内のｓｙｎ−ジオールを保護することを含むことになろう。続いて、残りのアルコールを保護し、Ｌｅｙ保護基を選択的に除去することによって、２つの遊離アルコールと共に擬似二糖が脱離することになる。１，２−ｓｙｎ結合生成物（この場合はα−グルコ）を生じるための条件下におけるこのグリコシル化によって、２つのグリコシドの混合物が生じる可能性があり、ここから目的とする１つを分離し、保護基を除去することができよう。

あるいは、種々のα−グリコシドホスホリラーゼ、α−グルコシダーゼを用いて（トランス−グリコシル化モードでランする）、デオキシストレプタミンに結合しているガロサミンを含む擬似二糖の直接的な酵素的グリコシル化を実施してもよいし、または、入手可能なαグルコース転移酵素が成功することがある。そのような酵素の大きなライブラリが組み上げられて、そのような「スクリーニング・アプローチ」を実行可能なものとしている。成功すれば、この合成は、ひときわ簡潔で拡大縮小の可能な合成ルートを提供する可能性がある。

実施例１：ｐ５３リードスルーアッセイ
９６穴プレートアッセイを用いてＰＴＣリードスルーについて、ゲンタマイシン、ゲンタマイシンＡ、Ｂ、Ｂ１、Ｃ１、Ｃ１ａ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｘ２、シソマイシン、ならびにゲンタマイシン断片のガラミンおよび環Ｃ（図１を参照）を試験した。比較のため、Ｇ４１８、すなわちＰＴＣリードスルーの強力な誘導剤であることで知られる関連アミノグリコシドを、陽性対照として使用した。Ｇ４１８は認可薬剤ではない。

図２に示されるように、ゲンタマイシンは、供試濃度でＰＴＣリードスルーを誘導しなかったが、この濃度は２００μＭを超えないものであった。しかし、図３Ａに示されるように、３ｍＭでは活性があった。ゲンタマイシンＡ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ１ａ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、シソマイシン、ガラミン、および環Ｃは、全く活性を示さなかった（データ示さず）。Ｇ４１８は、２５〜２００μＭの濃度範囲で活性を示した。ゲンタマイシンＸ２は活性を示したが、Ｇ４１８よりも強力なものではなかった。ゲンタマイシンＢ１は非常に強い活性を示し、Ｇ４１８よりもやや強力であった。そのため、ゲンタマイシン薬剤のＰＴＣリードスルー活性は、小部分の構成成分Ｂ１およびＸ２の存在に大きく起因する。同様に、図３Ｂでは、ウェスタン分析を使用して、Ｇ４１８、ゲンタマイシン、ゲンタマイシンＢ１、およびゲンタマイシンＸ２によるＰＴＣリードスルーの誘導が示されている。ここでは、図３Ａで観察された全長ｐ５３の量を、ｌｏｇスケールの異なる化合物の濃度に対してプロットした。

図３Ａに示されるように、ウェスタン分析を用いて９６穴プレートアッセイの結果を確認した。ここでは、ＨＤＱ‐Ｐ１細胞は、Ｒ２１３で切り縮められた非常に少量のｐ５３タンパク質を含有し、全長ｐ５３を含まなかった。ＰＴＣリードスルーの誘導の結果、全長ｐ５３が出現した。自動定量キャピラリー電気泳動ウェスタンシステムを用いて、ウェスタン分析を実施した。その結果は、９６穴プレートアッセイを確定するものであり、ゲンタマイシンＢ１が全長ｐ５３の出現を誘導すること、およびそれはＧ４１８またはＸ２よりも強力であることを示す。３ｍＭにおけるゲンタマイシンの活性を比較のために示す。

この結果は、ＰＴＣリードスルーの医療適用のために重要である。ゲンタマイシンは、腎毒性および耳毒性があることが公知である。（ＫｏｈｌｈｅｐｐＳ．Ｊ．ら、１９８４年）は、主なゲンタマイシンであるＣ、Ｃ１ａ、およびＣ２の腎毒性を調べており、腎毒性が主にＣ２によって引き起こされることを見出した。どの程度のゲンタマイシンＢ１が腎毒性または耳毒性を持つのかは依然として公知ではないものの、ゲンタマイシンＢ１を用いた患者の治療はゲンタマイシンを用いた治療よりも低い用量でＰＴＣリードスルーを誘導することが予想される。この用量では、典型的には０．５〜３％のＢ１を含有するに過ぎない（ＭｉｃｒｏＣｏｍｂｉＣｈｅｍ（商標）、私信）。ゲンタマイシンの代わりにゲンタマイシンＢ１を用いる治療は、毒性のあるゲンタマイシンＣ２を省くことにより、高いＰＴＣリードスルーとより低い毒性との両方を達成するはずである。

毒性を回避するために、ゲンタマイシンの血漿中濃度のモニタリングが推奨される。大まかな研究では、ゲンタマイシンの血漿中レベルが典型的には１と１２μｇ／ｍＬの間（２〜２４μＭ）であること、および長期治療の間は約１０μＭを上回る濃度を避けるべきであることが示されている。リードスルーを示すゲンタマイシンＢ１の濃度（３μＭ以上）は、この範囲内にある。

実施例２：ステロイドを用いたｐ５３リードスルーアッセイ
図４に示されるように、Ｇ４１８は、デキサメタゾン（５μＭ）、ベタメタゾン（５μＭ）、または酢酸メドロキシプロゲステロン（メドロキシプロ）（５μＭ）と組み合わせて、２５μＭの濃度でＰＴＣリードスルーの大幅な向上を示す。その際、デキサメタゾン、ベタメタゾンのみ、およびメドロキシプロのみでは、リードスルー活性を示さない。

実施例３：ステロイドを用いたｐ５３リードスルーアッセイ
図５に提示された結果は、２つのゲンタマイシンのバッチは、１ｍｇ／ｍＬで低いＰＴＣリードスルー活性を示し、一方で、第３のバッチは不活性であったこと（図５Ａ、Ｂ、Ｅ、およびＦ−バッチ２を参照）を示す。また、この結果は、ゲンタマイシンＢ１およびゲンタマイシンＸ２が強力なＰＴＣリードスルー活性を示すことを示す（図５Ｃ〜Ｆを参照）。

実施例４：終止コドンを比較するリードスルーアッセイ
図６の結果は、ｓｈｏｗｔｈａｔ５０μｇ／ｍＬおよび１００μｇ／ｍＬのゲンタマイシンＢ１が、３つの未成熟終結コドン（すなわちＴＧＡ、ＴＡＧ、およびＴＡＡ）全てにおいてＰＴＣリードスルーを誘導することを示す。しかし、ＴＡＡ終止コドンを用いると、リードスルーに僅かな低下が現れた。

実施例５：細胞のタイプを比較するリードスルーアッセイ
図７は、ＴＰ５３遺伝子の異なる位置（すなわちＳＷ９００、ＮＣＩ−Ｈ１６８８、ＥＳＳ−１、ＳＫ−ＭＥＳ−１、ＨＣＣ１９３７、Ｈ１２９９、およびＨＣＴ１１６）にナンセンス変異を有する種々のがん細胞株で、ゲンタマイシンＢ１がＰＴＣリードスルーを誘導できることを示す。ゲンタマイシンＢ１は、様々ながん細胞株で、一貫して終止コドンのリードスルーを示した。

実施例６：ＩｎＶｉｖｏリードスルーアッセイ
図８に示されるように、ゲンタマイシンＢ１は、ｉｎｖｉｖｏで腫瘍異種移植片に未成熟終結コドンリードスルーを誘導することができる。ゲンタマイシンＢ１は、リードスルーを５０ｍｇ／ｋｇから示し（図８Ａを参照）、２００ｍｇ／ｋｇおよび４００ｍｇ／ｋｇ（図８Ｂを参照）で示したが、一方で、ゲンタマイシンにはリードスルーが検出されなかった。Ｂ１には毒性が観察されなかったが、４００ｍｇ／ｋｇのゲンタマイシンは急性毒性を誘導したため、星印で表示されているように、投与のすぐ後にマウスを屠殺しなければならなかった。

実施例７：稀少遺伝子疾患患者由来の細胞におけるゲンタマイシンＢ１によるＰＴＣリードスルーの誘導
図９ＡおよびＢは、ＴＰＰ１（トリペプチジルペプチダーゼＩ）遺伝子ヘテロ接合性ナンセンス変異（Ｒ１２７Ｘ／Ｒ２０８Ｘ）を有する神経セロイドリポフスチン症患者由来のＧＭ１６４８５初代線維芽細胞を示す。ここでは、線維芽細胞を２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシンＢ１または１００μｇ／ｍＬのゲンタマイシンに１０日間にわたって曝露した後、ＴＰＰ１活性について細胞抽出物の蛍光を測定した。２人の非罹患者（ＷＴ）から得た非処理の初代線維芽細胞の活性平均と比較して、活性を表した（Ａ）。図９Ｂは、自動キャピラリー電気泳動ウェスタン分析によって、同じ細胞抽出物をＴＰＰ１の形成について分析したものを示す。図９Ｃは、ナンセンス変異（ＤＭＤ：Ｅ２０３５Ｘ）を有するデュシェンヌ型筋ジストロフィー患者由来のＨＳＫ００１筋芽細胞を筋管に分化させて、標示濃度のゲンタマイシンＢ１またはゲンタマイシンに３日間曝露し、続いて生じたジストロフィン発現のレベルを、自動キャピラリー電気泳動ウェスタン分析によって、ＷＴの筋管およびローディング対照と比較して決定したことを示す。図９Ｄは、ホモ接合性のＳＭＡＲＣＡＬ１ナンセンス変異（Ｒ１７Ｘ）を有するシムケ免疫性骨異形成症の患者から得たＳＤ１２３線維芽細胞を、標示濃度のゲンタマイシンＢ１またはゲンタマイシンに６日間曝露した後、ＳＭＡＲＣＡＬ１のレベルを、ウェスタン・ブロッティングによって、ＷＴの筋管およびローディング対照と比較して決定したことを示す。図９Ｅは、ホモ接合性のＱ２５１Ｘナンセンス変異をＣＯＬ７Ａ１遺伝子上に有する劣性栄養障害性表皮水疱症の患者から得たＥＢ１４ケラチノサイトを、標示濃度のゲンタマイシンＢ１またはゲンタマイシンと共に７２時間インキュベーションした後、細胞性コラーゲン７を、ウェスタン・ブロッティングによって、ＷＴのケラチノサイトと比較して測定したことを示す。供試した全ての遺伝子疾患で、ゲンタマイシンＢ１はリードスルーを誘導した。

本発明の様々な実施形態が本明細書に記載されているとはいえ、当業者の一般常識に従い、多くの適応および改変が本発明の範囲内で行われることになる。そのような改変には、実質的に同じ方法で同じ結果を実現するための、本発明の任意の態様についての公知の等価物の置換が含まれる。数字範囲は、範囲を規定する数字を含む。語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープン・エンドの用語として本明細書で使用されており、実質的には句「含むがそれらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｂｕｔｎｏｔｌｉｍｉｔｅｄｔｏ）」と等価であり、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、対応の意味を有する。本明細書で使用される際に、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特段明確に指示のない限り、複数の言及を含む。それゆえ、例えば、「物（ａｔｈｉｎｇ）」への言及には、１つを超えるそのような物が含まれる。本明細書における参照文献の引用は、そのような参照文献が本発明の実施形態の先行技術であることを認めるものではない。本発明は、上に記載されたような、および実施例および図面に関連する、全ての実施形態および変形を実質的に含む。

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Claims

１）ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量の化合物またはその医薬的に許容可能な塩であって、前記化合物は、式Ｉの構造：
を有し、
上式で、ＲはＯＨまたはＮＨ_２であり、
ＲがＯＨである際に、Ｍは
であり、ＲがＮＨ_２である際に、Ｍは
である、化合物と；
２）医薬的に許容可能な賦形剤または医薬的に許容可能な担体と
を含む医薬組成物。
前記化合物は、以下：
および
のうち１つまたは複数から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記化合物は、以下：
のうち１つまたは複数から選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
前記医学的状態は、表１または表２から選択される、請求項１、２、または３に記載の医薬組成物。
前記医学的状態は、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ＤＮＡ修復疾患、炎症性疾患、コラーゲン疾患、腎臓疾患、肺疾患、眼疾患、心血管疾患、血液疾患、代謝性疾患、神経筋疾患、新生物性疾患、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項１、２、または３に記載の医薬組成物。
前記医学的状態は、毛細血管拡張性運動失調症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ドラべ症候群、筋強直性ジストロフィー、多発性硬化症、小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、テイ・サックス病、神経組織変性症、パーキンソン病、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、移植片対宿主病、原発性免疫不全症、重症複合免疫不全症、ＤＮＡリガーゼＩＶ欠損症、ナイミーヘン染色体不安定障害、色素性乾皮症（ＸＰ）、関節リウマチ、血友病、フォン・ヴィルブランド病、サラセミア（例えばβ−サラセミア）、家族性赤血球増加症、腎結石症、骨形成不全症、硬変症、神経線維腫、水疱病、リソソーム蓄積病、ハーラー病、家族性コレステロール血症、小脳運動失調症、結節性硬化症、免疫欠損、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、色素性網膜症、網膜色素変性症、アミロイドーシス、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、糖尿病、家族性赤血球増加症、ニーマン・ピック病、表皮水疱症、マルファン症候群、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、脊髄性筋萎縮症、がん、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
前記がんは、頭頸部、眼、皮膚、口、のど、食道、胸部、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎のものである、請求項６に記載の医薬組成物。
前記がんは、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌腫、絨毛癌腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来腫瘍、または多発性骨髄種である、請求項６に記載の医薬組成物。
前記がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤血球白血球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、または多発性骨髄種である、請求項６に記載の医薬組成物。
前記未成熟終結コドンは、ＵＧＡまたはＵＡＧである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記未成熟終結コドンはＵＧＡである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記未成熟終結コドンはＵＡＧである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記未成熟終結コドンはＵＡＡである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善する方法であって、前記方法は、ＲＮＡ中のＰＴＣに随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量で化合物またはその医薬的に許容可能な塩を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記化合物は、式Ｉの構造：
を有し、
上式で、ＲはＯＨまたはＮＨ_２であり、
ＲがＯＨである際に、Ｍは
であり、ＲがＮＨ_２である際に、Ｍは
である、方法。
方法。
前記化合物は、以下：
またはその医薬組成物のうち１つまたは複数から選択される、請求項１４に記載の方法。
前記化合物は、以下：
のうち１つまたは複数から選択される、請求項１４または１５に記載の方法。
前記医学的状態は、表１または表２から選択される、請求項１４、１５、または１６に記載の方法。
前記医学的状態は、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ＤＮＡ修復疾患、炎症性疾患、コラーゲン疾患、腎臓疾患、肺疾患、眼疾患、心血管疾患、血液疾患、代謝性疾患、神経筋疾患、新生物性疾患、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項１４、１５、または１６に記載の方法。
前記医学的状態は、毛細血管拡張性運動失調症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ドラべ症候群、筋強直性ジストロフィー、多発性硬化症、小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、テイ・サックス病、神経組織変性症、パーキンソン病、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、移植片対宿主病、原発性免疫不全症、重症複合免疫不全症、ＤＮＡリガーゼＩＶ欠損症、ナイミーヘン染色体不安定障害、色素性乾皮症（ＸＰ）、関節リウマチ、血友病、フォン・ヴィルブランド病、サラセミア（例えばβ−サラセミア）、家族性赤血球増加症、腎結石症、骨形成不全症、硬変症、神経線維腫、水疱病、リソソーム蓄積病、ハーラー病、家族性コレステロール血症、小脳運動失調症、結節性硬化症、免疫欠損、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、色素性網膜症、網膜色素変性症、アミロイドーシス、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、糖尿病、家族性赤血球増加症、ニーマン・ピック病、表皮水疱症、マルファン症候群、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、脊髄性筋萎縮症、がん、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項１８に記載の方法。
前記がんは、頭頸部、眼、皮膚、口、のど、食道、胸部、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎のものである、請求項１９に記載の方法。
前記がんは、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌腫、絨毛癌腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来腫瘍、または多発性骨髄種である、請求項１９に記載の方法。
前記がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤血球白血球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、または多発性骨髄種である、請求項１９に記載の方法。
前記未成熟終結コドンは、ＵＧＡまたはＵＡＧである、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の方法。
前記未成熟終結コドンはＵＧＡである、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の方法。
前記未成熟終結コドンはＵＡＧである、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の方法。
前記未成熟終結コドンはＵＡＡである、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の方法。
前記方法は、ステロイドを対象に投与することをさらに含む、請求項１４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
前記ステロイドは、以下：メドロキシプロゲステロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸コルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、ダナゾール、フルドロコルチゾン、ミフェプリストン、酢酸メゲストロール、およびプロゲステロンのうち１つまたは複数から選択される、請求項２７に記載の方法。
構造：
を有する化合物。
構造
を有する化合物、およびステロイドを含む、医薬組成物。
前記ステロイドは、以下：メドロキシプロゲステロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸コルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、ダナゾール、フルドロコルチゾン、ミフェプリストン、酢酸メゲストロール、およびプロゲステロンのうち１つまたは複数から選択される、請求項３０に記載の医薬組成物。
ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善する方法であって、前記方法は、ＲＮＡ中のＰＴＣに随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量で、化合物またはその医薬的に許容可能な塩を、ステロイドと組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含み、前記化合物は、
の構造を有する、方法。
前記医学的状態は、表１または表２から選択される、請求項３２に記載の方法。
前記医学的状態は、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ＤＮＡ修復疾患、炎症性疾患、コラーゲン疾患、腎臓疾患、肺疾患、眼疾患、心血管疾患、血液疾患、代謝性疾患、神経筋疾患、新生物性疾患、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項３２または３３に記載の方法。
前記医学的状態は、毛細血管拡張性運動失調症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ドラべ症候群、筋強直性ジストロフィー、多発性硬化症、小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、テイ・サックス病、神経組織変性症、パーキンソン病、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、移植片対宿主病、原発性免疫不全症、重症複合免疫不全症、ＤＮＡリガーゼＩＶ欠損症、ナイミーヘン染色体不安定障害、色素性乾皮症（ＸＰ）、関節リウマチ、血友病、フォン・ヴィルブランド病、サラセミア（例えばβ−サラセミア）、家族性赤血球増加症、腎結石症、骨形成不全症、硬変症、神経線維腫、水疱病、リソソーム蓄積病、ハーラー病、家族性コレステロール血症、小脳運動失調症、結節性硬化症、免疫欠損、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、色素性網膜症、網膜色素変性症、アミロイドーシス、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、糖尿病、家族性赤血球増加症、ニーマン・ピック病、表皮水疱症、マルファン症候群、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、脊髄性筋萎縮症、がん、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項３４に記載の方法。
前記がんは、頭頸部、眼、皮膚、口、のど、食道、胸部、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎のものである、請求項３５に記載の方法。
前記がんは、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌腫、絨毛癌腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来腫瘍、または多発性骨髄種である、請求項３５に記載の方法。
前記がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤血球白血球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、または多発性骨髄種である、請求項３５に記載の方法。
前記未成熟終結コドンは、ＵＧＡまたはＵＡＧである、請求項３２〜３８のいずれか１項に記載の方法。
前記未成熟終結コドンはＵＧＡである、請求項３２〜３９のいずれか１項に記載の方法。
前記未成熟終結コドンはＵＡＧである、請求項３２〜３９のいずれか１項に記載の方法。
前記未成熟終結コドンはＵＡＡである、請求項３２〜３８のいずれか１項に記載の方法。
前記ステロイドは、以下：メドロキシプロゲステロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸コルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、ダナゾール、フルドロコルチゾン、ミフェプリストン、酢酸メゲストロール、およびプロゲステロンのうち１つまたは複数から選択される、請求項３２〜４２のいずれか１項に記載の方法。
ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するために有効な量の化合物またはその医薬的に許容可能な塩の使用であって、前記化合物は、式Ｉの構造：
を有し、
上式で、ＲはＯＨまたはＮＨ_２であり、
ＲがＯＨである際に、Ｍは
であり、ＲがＮＨ_２である際に、Ｍは
である、使用。
ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）に随伴する医学的状態を治療または改善するための医薬の製造における化合物の使用であって、前記化合物は、式Ｉの構造：
を有し、
上式で、ＲはＯＨまたはＮＨ_２であり、
ＲがＯＨである際に、Ｍは
であり、ＲがＮＨ_２である際に、Ｍは
である、使用。
前記化合物は、以下：
および
またはその医薬組成物のうち１つまたは複数から選択される、請求項４４または４５に記載の使用。
前記化合物は、以下：
のうち１つまたは複数から選択される、請求項４４、４５、または４６に記載の使用。
前記医学的状態は、表１または表２から選択される、請求項４４〜４７のいずれか１項に記載の使用。
前記医学的状態は、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ＤＮＡ修復疾患、炎症性疾患、コラーゲン疾患、腎臓疾患、肺疾患、眼疾患、心血管疾患、血液疾患、代謝性疾患、神経筋疾患、新生物性疾患、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項４４〜４７のいずれか１項に記載の使用。
前記医学的状態は、毛細血管拡張性運動失調症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ドラべ症候群、筋強直性ジストロフィー、多発性硬化症、小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、テイ・サックス病、神経組織変性症、パーキンソン病、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、移植片対宿主病、原発性免疫不全症、重症複合免疫不全症、ＤＮＡリガーゼＩＶ欠損症、ナイミーヘン染色体不安定障害、色素性乾皮症（ＸＰ）、関節リウマチ、血友病、フォン・ヴィルブランド病、サラセミア（例えばβ−サラセミア）、家族性赤血球増加症、腎結石症、骨形成不全症、硬変症、神経線維腫、水疱病、リソソーム蓄積病、ハーラー病、家族性コレステロール血症、小脳運動失調症、結節性硬化症、免疫欠損、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、色素性網膜症、網膜色素変性症、アミロイドーシス、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、糖尿病、家族性赤血球増加症、ニーマン・ピック病、表皮水疱症、マルファン症候群、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、脊髄性筋萎縮症、がん、およびナンセンス変異（複数可）によって引き起こされる任意の遺伝性障害からなる群より選択される、請求項４９に記載の使用。
前記がんは、頭頸部、眼、皮膚、口、のど、食道、胸部、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎のものである、請求項５０に記載の使用。
前記がんは、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞腫、胆管癌腫、絨毛癌腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮性癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来腫瘍、または多発性骨髄種である、請求項５０に記載の使用。
前記がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤血球白血球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、または多発性骨髄種である、請求項５０に記載の使用。
前記未成熟終結コドンは、ＵＧＡまたはＵＡＧである、請求項４４〜５３のいずれか１項に記載の使用。
前記未成熟終結コドンはＵＧＡである、請求項４４〜５４のいずれか１項に記載の使用。
前記未成熟終結コドンはＵＡＧである、請求項４４〜５４のいずれか１項に記載の使用。
前記未成熟終結コドンはＵＡＡである、請求項４４〜５３のいずれか１項に記載の使用。
前記方法は、ステロイドを対象に投与することをさらに含む、請求項４４〜５７のいずれか１項に記載の使用。
前記ステロイドは、以下：メドロキシプロゲステロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸コルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、ダナゾール、フルドロコルチゾン、ミフェプリストン、酢酸メゲストロール、およびプロゲステロンのうち１つまたは複数から選択される、請求項５８に記載の使用。
（ａ）式Ｉの構造
を有し、
上式で、ＲはＯＨまたはＮＨ_２であり、
ＲがＯＨである際に、Ｍは
であり、ＲがＮＨ_２である際に、Ｍは
である化合物；
および（ｂ）ＲＮＡ中の未成熟終結コドン（ＰＴＣ）随伴する医学的状態を治療または改善するための説明書を含む、商業用パッケージ。