JP2018199733A - セルライト処置用コラゲナーゼ - Google Patents

Abstract

【課題】セルライト処置用コラゲナーゼを提供すること。
【解決手段】処置を必要としている被験体においてセルライトを処置する方法であって、有効量の精製されたコラゲナーゼをセルライトのコラーゲン性隔膜ネットワーク(collagenous septa network)に送達する工程を含む方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、セルライト処置用コラゲナーゼに関する。

優先権
本願は、２００６年２月２２日に米国特許商標庁に出願された出願番号６０／７７５，６９０号に対して優先権を主張する。

政府の支持
本発明は、国立衛生研究所からの助成金M01RR10710によって、一部支持された。米国政府は、本発明に対して一定の権利を有する。

発明の背景
大腿部および臀部の皮膚の陥凹形成、すなわち「マットレス現象」は、一般的にセルライトといわれる。この状態は共通であり、そうでなければ健康な個体に現れ、男性よりはるかに高い頻度で女性が罹患する。セルライト除去のための、処方箋が不要な局所療法が多くある。これらの製品および処方箋が不要な局所への適用は、役に立たず、費用がかかり、実際に、適切なプラセボコントロールされた臨床試験を経たことがない。局所レチノールならびにカフェインおよびルスコゲニン（ruscogenine）を含むレチノールの、最近のランダム化されたプラセボコントロールされた試験（trail）はまた、セルライトの除去に関する価値を示せなかった。

セルライトの処置が首尾よくあるべき場合、状態の基本的病理生理学は、明確な定義を必要とする。Rosenbaumらが、セルライトの形態学および生化学の調査に着手したのは、ほんの１９９９年であった（非特許文献１）。７人の健康な成人被験体、女性５人および男性２人、４人が罹患し、３人が罹患していない、が、大腿部の超音波検査、局所的インビボ皮下脂肪組織代謝の測定、および局所麻酔下での大腿部の全層くさび状生検を受けた。セルライトの存在は、大腿部の後外側の皮膚の陥凹形成の証拠として定義された。陥凹形成がはっきりわからない少なくとも直径３ｃｍのあらゆる連続領域が、罹患していないとして定義された。全ての罹患した個体において、大腿部の罹患した領域および罹患していない領域両方を含むように、研究が実施された。くさび状生検の顕微鏡的試験および大腿部のインビボ超音波検査の両方は、罹患した被験体において、下層脂肪組織の突出および皮膚支帯への突出の拡散パターンを示したが、罹患していない被験体においては示さなかった。この研究はまた、女性が、真皮の直下に不規則かつ不連続な結合組織の拡散パターンを有したが、男性における結合組織の同じ層は、平坦かつ連続的であったことを示した。この結合組織層は、罹患していない個体に対して、罹患した個体においては、より不規則かつ不連続であった。個体の罹患部位と非罹患部位の間で、皮下脂肪組織形態、脂肪分解応答性、または局所血流に有意な違いは見られなかった。この研究は、セルライトの特徴である、真皮への脂肪組織の不規則な突出を女性が進行しやすくなる真皮結合組織の構造的特徴において性的二形性があることを示した。この研究は、セルライトの原因論において、脂肪組織生理学、血流、または脂肪組織生化学に何らの主たる役割の証拠もないが、女性の大腿部および臀部の結合組織が、真皮の下の小さな脂肪組織沈着の違いを倍化させるような構造をしていると結論付けた。

この結論は、３９個の剖検検体を顕微鏡的に試験したPierardらの仕事によって実証された（非特許文献２）。彼らのコントロール群は、セルライトの形跡を示さない４人の成人女性および１１人の成人男性からなった。彼らは、真皮の皮下境界面の塊りだらけの（lumpy）外観が大腿部および臀部の性に関連する（女性の）特徴を示しているようであったと述べている。セルライトは、このマットレス現象によって顕微鏡的に同定され、皮下組織を区画化する焦点（focally）拡大された線維硬化型ストランド（strand）として示された。彼らは、これらの構造が脂肪蓄積によって引き起こされる持続的皮下圧に対する反応プロセスを示し得ると推測した。

Querleuxらによるより最近の研究において、インビボ磁気共鳴画像化および分光学による皮下脂肪組織の剖検および生理学が、性およびセルライトの存在に関して研究された（非特許文献３）。これらの著者らは、線維状隔膜（septae）ネットワークの３Ｄ再構築によって、セルライトを有する女性では、皮膚表面に対して垂直方向のセプタエのパーセンテージがより高いことが示されたと結論付けた。

Rosenbaum, M. Prieto, V., Hellmer, J., Boschmann, M., Krueger, J., Leibel, R. L., Ship, A. G., An Exploratory Investigation of the Morphology and Biochemistry of Cellulite, Plastic & Reconst Surg 101 (7): 1934-9, 1998 Pierard-Franchimont, C., Pierard G. E., Henry, F., Vroome, V. & Cauwenbergh, G. A Randomized, Placebo-Controlled Trial of Topical Retinol in the Treatment of Cellulite, Amer. J. Clin. Dermatology, 1(6): 369-74, 2000 Querleux, B., Cornillon, C., Jolivet, O., Bittoun, J., Anatomy and Physiology of Subcutaneous Adipose Tissue by in vivo Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy: Relationship with Sex and Presence of Cellulite, Skin Research And Tech 8(2): 118-124, May 2002

現在までに、セルライトの有効な処置はない。セルライトの処置のためのかかる方法を提供することが、本発明の課題である。

発明の要旨
本発明は、コラゲナーゼ注射が、ヒトのセルライトのコラーゲンセプタエネットワークを溶解し、セルライトを処置し、および平坦な皮膚の外観を回復するのに有効であるという発見に関する。本発明は、処置を必要とする被験体においてセルライトを処置する方法に関し、該方法は、セルライトを処置するための医薬の製造において有効量の精製されたコラゲナーゼを注入する工程を含む。コラゲナーゼは、好ましくは、精製されており、プロテアーゼおよび／またはヒアルロニダーゼ等の他の酵素を実質的に含まない。

即ち、本発明の要旨は、
〔１〕処置を必要としている被験体においてセルライトを処置する方法であって、有効量の精製されたコラゲナーゼをセルライトのコラーゲン性隔膜ネットワーク(collagenous septa network)に送達する工程を含む方法、
〔２〕コラゲナーゼ（クロストリジオペプチダーゼＡ）が細菌クロストリジウム・ヒストリチカム(Clostridium hisolyticum)に由来する、〔１〕記載の方法、
〔３〕精製されたコラゲナーゼが単独で投与される、〔１〕記載の方法、
〔４〕精製されたコラゲナーゼが、トリアムシノロン(traimcinolone)または他のコルチコステロイドの非存在下で投与される、〔１〕記載の方法、
〔５〕精製されたコラゲナーゼが少なくとも約７００ＳＲＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、〔１〕記載の方法、
〔６〕精製されたコラゲナーゼが少なくとも約１０００ＳＲＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、〔１〕記載の方法、
〔７〕精製されたコラゲナーゼが少なくとも約１５００ＳＲＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、〔１〕記載の方法、
〔８〕精製されたコラゲナーゼが少なくとも約１００００ＡＢＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、〔１〕記載の方法、
〔９〕精製されたコラゲナーゼが、約１．０ｍＬの体積で注入される、〔１〕記載の方法、
〔１０〕精製されたコラゲナーゼが複数の部位で注入される、〔１〕記載の方法、
〔１１〕精製されたコラゲナーゼがコラゲナーゼＩおよびコラゲナーゼＩＩから構成される、〔１〕記載の方法、
〔１２〕注入が、皮膚の陥凹形成を特徴とするセルライトの領域に送達される、〔９〕記載の方法、
〔１３〕被験体がヒト患者である、〔１〕記載の方法、
〔１４〕処置が約４〜６週間後に繰り返される、〔１〕記載の方法、
〔１５〕コラゲナーゼの少なくとも一回の投与を受けた１ヵ月後に、患者がセルライトの出現の目視による有意な減少を達成する、〔１〕記載の方法、
〔１６〕精製されたコラゲナーゼが約５００ＳＲＣ単位／ｍｇ〜約１５，０００ＳＲＣ単位／ｍｇを含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、〔１〕記載の方法
に関する。

本発明により、セルライト処置用コラゲナーゼが提供される。

発明の詳細な説明
本発明は、コラゲナーゼ注射が、ヒトのセルライトのコラーゲンセプタエネットワークを溶解し、セルライトを処置し、および平坦な皮膚の外観を回復するのに有効であるという発見に関する。本発明は、処置を必要とする被験体においてセルライトを処置する方法に関し、該方法は、大腿部および／または臀部に有効量のコラゲナーゼを注入する工程を含む。本発明はまた、セルライトを処置するための医薬の製造におけるコラゲナーゼの使用に関する。

コラゲナーゼ注射は、デュピュイトラン病、癒着性関節包炎、およびペーロニー病等の疾患の処置に提案されてきた。これらの疾患は全て、コラーゲンコード（collagen cord）またはプラークと関連する。（Wegman, Thomas.L. U.S.Pat. No 5,589,171 Dec. 31, 1996, U.S.Pat No.6,086,872 July 11, 2000, U.S.Pat. No. 6,022,539, Feb. 8, 2000, Adhesive Capsulitis-Patent Pending、この全ては、その全体を参照によって本明細書中に援用される）。

コラゲナーゼ注射はまた、哺乳動物の精巣から調製された可溶性酵素産物であるヒアルロニダーゼと合わせた場合、セルライトの処置に提案されてきた（Pinelle, Sheldon R. U.S. Pat. No. 4,645,668 Mar. 27, 1985を参照）。該特許は、女性患者のみに対してヒアルロニダーゼ（１５０単位）と併用して低用量のコラゲナーゼ（１００単位）を用いた、セルライトに対するデータのある１つの実施例を開示した。注射された後のセルライトの改善のさらなる詳細はない。

精製されたクロストリジウムのコラゲナーゼの病変内注入の使用は、デュピュイトラン病における手（片方または両方）の屈曲拘縮変形の矯正の臨床試験において、臨床的に安全かつ効果的であることが示された。さらに、精製されたクロストリジウムのコラゲナーゼの関節包外注入の使用は、癒着性関節包炎（有痛性肩拘縮症）の処置における回復注射の臨床試験において、臨床的に安全かつ効果的であることが示され、陰茎の拘縮変形であるペーロニー病の臨床試験において、他のヒトによっても使用されてきた。

発明者、Badalamente博士の公開されたデュピュイトラン病に関する仕事は、提案された発明に対して理論的解釈を構成する（Starkweather, K., Lattuga, S., Hurst, L.C., Badalamente, M.A., Guilak, F., Sampson, S.P., Dowd, A., Wisch, D. Collagenase in the Treatment of Dupuytren's Disease: An in vitro Study, J. Hand Surg. 21A:490-95, 1996; Badalamente, M.A., Hurst, L.C., Enzyme Injection as a Non-operative Treatment for Dupuytren's Disease, J. Drug-Delivery 3(l):35-40, 1996; Hurst, L.C., Badalamente, M.A. (invited authorship) Non-operative Treatment of Dupuytren's Disease. Hand Clinics, G.M. Rayan (ed). W.B. Saunders 15(1), 97-107, 1999; Hurst, L.C., Badalamente, M.A. (invited editors & authorship), Dupuytren's Disease, R. Tubinana, R. Tubiana, C. Leclercq, L.C. Hurst, M.A. Badalamente (eds), Martin Dunitz Publisher, London (2000); Badalamente, M.A., Hurst, L.C. Enzyme Injection as a Non-operative Treatment of Dupuytren's Disease, J. Hands Surg. 25A(4);629-36, 2000; Badalamente, M.A., Hurst, L.C, Hentz, V.R. Collagen as a Clinical Target: Non-operative Treatment of Dupuytren's Disease. J. Hand Surg. 27A(5):788-98, 2002）。デュピュイトラン病において、疾病特有症候の線維状コード（cord）は、しばしば脂肪組織の隔膜様配置を伴って散在される。これらは、種々の大きさのマットレス型の「塊（lump）」として臨床的に存在し、デュピュイトラン病において、硬結（nodule）といわれる。精製されたクロストリジウムのコラゲナーゼ注入の後、伸長圧（pressure in extension）を受けた際に、コラーゲンのコードが分解（dissolve）し、断裂するだけでなく、線維脂肪性硬結がまた分解（resolve）し、無害な再吸収をされることは、デュピュイトラン病についての第２相および第３相両方の試験における一貫した臨床的所見であった。従って、セルライトの領域に皮下注射されたコラゲナーゼは、大腿部および／または臀部の皮膚の平坦な外観を回復するための、この状態の安全かつ効果的な処置であるはずと仮定された。

コラゲナーゼは、コラーゲンを消化する特異的な能力を有する酵素である。コラゲナーゼの好ましい形態は、クロストリジウム ヒストリチカム（Clostridium histoliticum）による発酵に由来し、参照によって本明細書中に援用される２００６年１月２０日に出願された米国出願番号６０／７６３，４７０号（代理人登録番号４０２４．３００１ＵＳ）に開示される技術等のクロマトグラフィー技術によって精製される。クロストリジウム ヒストリチカムによって天然に産生されるコラゲナーゼは、一旦精製されると、電気泳動ＳＤＳゲル上で泳動されると、２つの（tow）明瞭なピークを示す。コラゲナーゼＩおよびコラゲナーゼＩＩといわれるのは、これら２つの明瞭なピークである。

１ｍｇあたり５０単位のミニマムアッセイ（minimum assay）を有する滅菌凍結乾燥されたコラゲナーゼ粉末は、市販されている。該アッセイは、バッチごとにかなり変化し得るが、処置のための所望の濃度を調製する際に、薬学的に許容され得る担体、例えば通常の生理食塩水、と使用する粉末の重量を決定する際に考慮される。

コラゲナーゼは、コラゲナーゼに対して不活性である、薬学的に許容される液体担体に加えられる。例は、通常の生理食塩水、ＮａＣｌ／ＣａＣｌ_２水性バッファ、デキストラン水溶液、ヘタスターチ水溶液である。

注入に使用される精製されたコラゲナーゼの１つの形態は、「コラゲナーゼＡＢＣ Ｉ」および「コラゲナーゼＡＢＣ ＩＩ」といわれる２つの細菌性コラーゲナーゼからなる。両方のコラゲナーゼは、細菌クロストリジウム ヒストリチカムの発酵から単離および精製され、同じメタロプロテアーゼに属する。

コラゲナーゼＡＢＣ Ｉは、公知の配列の約１０００アミノ酸からなる単一のポリペプチド鎖である。これは、実測分子量１１５キロダルトン（ｋＤ）、等電点（ｐＩ）５．６３〜５．６８、および吸光係数１．４８０を有する。その合成基質に対する活性挙動から、コラゲナーゼＡＢＣ Ｉは、文献のクラスＩクロストリジウム ヒストリチカムコラゲナーゼであると決定された。

コラゲナーゼＡＢＣ ＩＩもまた、推定配列の約１０００アミノ酸からなる単一のポリぺプチド鎖である。これは、実測分子量１１０ｋＤ、等電点５．４６〜５．５７、および吸光係数１．５７６を有する。コラゲナーゼＡＢＣ ＩＩは、機能的に、文献のクラスＩＩクロストリジウム ヒストリチカムコラゲナーゼに属する。

薬物物質は、コラゲナーゼＡＢＣ ＩおよびコラゲナーゼＡＢＣ ＩＩに対して１対１の質量比を有し、吸光係数１．５２８を有し得る。両方のコラゲナーゼは、それらの活性にとって、堅く結合した亜鉛および緩く結合したカルシウムを必要とする。コラゲナーゼＡＢＣ ＩおよびコラゲナーゼＡＢＣ ＩＩは、免疫学的に交差反応せず、全ての型のコラーゲンに対して非常に広い加水分解反応性を有する。各コラゲナーゼは、異なる特異性を示すが、一緒になって、コラーゲンに対して相乗的活性を示す。

注入のための凍結乾燥されたコラゲナーゼ（collagen）は、凍結乾燥製剤として調製された精製されたクロストリジウムのコラゲナーゼであり、コラゲナーゼ活性１０００ＡＢＣ単位あたり約０．１ｍｇのラクトース一水和物ＵＳＰを含み得る。

好ましいコラゲナーゼ組成物は、約１対１の質量比でコラゲナーゼＩとコラゲナーゼＩＩの混合物を含み、約５００ＳＲＣ単位／ｍｇ〜約１５０００ＳＲＣ単位／ｍｇ、好ましくは少なくとも約７００ＳＲＣ単位／ｍｇ、より好ましくは少なくとも約１０００ＳＲＣ単位／ｍｇ、さらにより好ましくは少なくとも約１５００ＳＲＣ単位／ｍｇの比活性を有する。１ＳＲＣ単位は、ラットの尾のコラーゲンを、２５℃、ｐＨ７．４で１分あたり１ナノモルのロイシンに等価なニンヒドリン反応性（reaction）物質に可溶化する。コラゲナーゼは、ＡＢＣ単位でも記載されてきた。コラゲナーゼの有効性アッセイ（potency assay）は、ｐＨ７．２、３７℃で２０〜２４時間の未変性コラーゲン（ウシの腱由来）の消化に基づく。切断されるペプチド結合の数は、ニンヒドリンとの反応によって測定される。可溶化消化コントロールによって放出されるアミノ基は、減算される。正味の１ＡＢＣ単位のコラゲナーゼは、１分あたり１．０９ナノモルのロイシンに等価なニンヒドリン反応性物質を可溶化する。１ＳＲＣ単位は、約６．３ＡＢＣ単位と等しい。

コラゲナーゼは、好ましくは、薬学的に許容され得る液体担体中の注射を介して投与される。好ましくは、担体は、コラゲナーゼと相互作用しないか、または不活性化しない。例は、通常の生理食塩水、ＮａＣｌ／ＣａＣｌ_２水性バッファ（０．９％ ＮａＣｌおよび２ｍＭ ＣａＣｌ_２を含む）である。例えば、凍結乾燥製剤は、１０００ＡＢＣ単位あたり０．１ｍｇのラクトース一水和物を含み得る。以下に使用される各ガラスバイアルは、５１５０ＡＢＣ単位のコラゲナーゼを含んでいた。

本発明に従って、液体担体中のコラゲナーゼは、被験体の大腿部の後外側のセルライトの領域に注入される。使用されるコラゲナーゼの量および濃度は、セルライトのコラーゲンセプタネットワークを分解および溶解するのに有効である。

注入は、滅菌したものであり、１．０ｍｌを超えない。全投薬量は、大腿部のセルライト陥凹部が最も明らかな５つの異なる点で、大腿部の後外側に注入される。目的は、コラゲナーゼの良好な分布を確実にするためである。患者は、好ましくは、ベッドで約１時間、好ましくは２時間以上、反対側の大腿部の外側を下にして横になる。

他の態様において、コラゲナーゼは、セルライトの領域に、局所的（locally）または局所的（topically）に、例えば経皮パッチまたは局所クリームまたは局所軟膏で投与され得るか、あるいはマイクロカプセルまたはマイクロスフィア（michrosphere）などの経時的にコラゲナーゼを放出するインプラントを介して投与され得る。

１つの態様において、患者は、大腿部の後外側に少なくとも１０×１０ｃｍのセルライトの領域を有することを特徴とする。本発明は、大腿部の後外側の１０×１０ｃｍのセルライトの領域（are）において、正常かつ平坦な皮膚外観の回復の改善を達成し得る。

本発明の別の態様において、コラゲナーゼは、セルライトの領域に、局所的（locally）または局所的（topically）に、例えば経皮パッチまたは局所クリームまたは局所軟膏で投与され得るか、あるいはマイクロカプセルまたはマイクロスフィア（michrosphere）などの経時的にコラゲナーゼを放出するインプラントを介して投与され得、トライアムシナロン（traimcinolone）または他のコルチコステロイドの非存在下で投与される。

単回処置の結果が不十分と考えられる場合、同じ手順、コラゲナーゼの総量および濃度が、４〜６週間間隔で繰り返され得る。大腿部の後外側以外のセルライトの領域はまた、処置、すなわち４〜６週間間隔での繰り返し処置を必要とし得る。例えば、大腿部の前部および臀部は、セルライトの領域を含み得る。

（実施例）
方法
十名の患者が研究プロトコールに参加した。全てが女性で、平均年齢は４１歳＝１０歳。平均ボディマス指数（ＢＭＩ）は２８であった。

封入に必要な大腿部の後外側のセルライトの最小限の領域(are)は１０×１０ｃｍであった。全ての患者は、最小で１０×１０ｃｍの領域を超える大腿部の後外側のセルライトの領域を有していた。処置領域のベースラインのデジタル写真を撮影した。無菌的な様式で、１０，０００ＡＢＣ単位（０．５８ｍｇ）を１０×１０ｃｍの標的セルライトの領域における５箇所に注入した。注入の全流体体積は１．０ｍＬであった。用いたバッファは無菌の０．９％のＮａＣｌおよび２ｍＭのＣａＣｌ₂であった。全ての患者を、注入後一日目、一週間目、一ヶ月目、三ヶ月目および六ヶ月目にフォローする(are flowed)。処置後の写真を連続して撮影する。

最初のコラゲナーゼの注入後４〜６週間の時間間隔に到達した場合、患者は、美容上の対称性のために、反対側で類似のコラゲナーゼの注入を受けることを選択するという選択肢を有していた。大腿部の標的領域におけるセルライトの減少／消失の検証は、目視検査および写真による裏付けによってなされた。

処置されたセルライトの標的領域を、１０×１０ｃｍの標的処置領域の四つの等しい四半部に分割した。四半部に基づく目視検査によって、標的処置領域におけるセルライトの減少／消失を定量化した。例えば、４／４＝処置に応答した四半部がない、３／４＝３四半部が処置に応答した、２／４は２四半部が処置に応答した、１／４＝１四半部が処置に応答した、０／４＝全ての四半部が処置に応答した。セルライトの後外側の標的領域に残っている任意のセルライトの実際の領域(are)をｃｍでも測定した。裏付けのために、写真も用いた。

結果
全ての患者が、コラゲナーゼの注入後に標的大腿部のセルライトの減少を体験した。表１は、処置された患者の大腿部の四半部におけるセルライトが減少するという結果を示す。注入された領域(are)のセルライトの出現の有意な減少があった。セルライト領域(are)は、１日目までにベースラインと比較して７７％減少した。この結果はより長期間維持された。ベースラインと比較して、セルライトの領域は１週間で７４％、１ヶ月で８９％、３ヶ月で８６％、そして６ヶ月で７６％減少した。

有害事象としては、注入領域における圧痛、斑状出血および軽度の浮腫が挙げられ、これらはそれぞれ平均で１０日、１８日および６日で消散した。

コラゲナーゼの（単回または複数回の）注入を受けた患者においては、大腿部の後外側のセルライトの減少の有意な改善が見られた。本研究によって、セルライトの領域へのコラゲナーゼの注入は安全かつ効果的な方法であることが示された。

本発明をその好ましい態様に関して詳細に示し説明してきたが、当業者であれば、添付された特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を逸脱することなく、種々の形式および細部の改変がその中で成されてもよいことを理解する。

Claims (16)

1. 処置を必要としている被験体においてセルライトを処置する方法であって、有効量の精製されたコラゲナーゼをセルライトのコラーゲン性隔膜ネットワーク(collagenous septa network)に送達する工程を含む方法。
2. コラゲナーゼ（クロストリジオペプチダーゼＡ）が細菌クロストリジウム・ヒストリチカム(Clostridium hisolyticum)に由来する、請求項１記載の方法。
3. 精製されたコラゲナーゼが単独で投与される、請求項１記載の方法。
4. 精製されたコラゲナーゼが、トリアムシノロン(traimcinolone)または他のコルチコステロイドの非存在下で投与される、請求項１記載の方法。
5. 精製されたコラゲナーゼが少なくとも約７００ＳＲＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、請求項１記載の方法。
6. 精製されたコラゲナーゼが少なくとも約１０００ＳＲＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、請求項１記載の方法。
7. 精製されたコラゲナーゼが少なくとも約１５００ＳＲＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、請求項１記載の方法。
8. 精製されたコラゲナーゼが少なくとも約１００００ＡＢＣ単位を含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、請求項１記載の方法。
9. 精製されたコラゲナーゼが、約１．０ｍＬの体積で注入される、請求項１記載の方法。
10. 精製されたコラゲナーゼが複数の部位で注入される、請求項１記載の方法。
11. 精製されたコラゲナーゼがコラゲナーゼＩおよびコラゲナーゼＩＩから構成される、請求項１記載の方法。
12. 注入が、皮膚の陥凹形成を特徴とするセルライトの領域に送達される、請求項９記載の方法。
13. 被験体がヒト患者である、請求項１記載の方法。
14. 処置が約４〜６週間後に繰り返される、請求項１記載の方法。
15. コラゲナーゼの少なくとも一回の投与を受けた１ヵ月後に、患者がセルライトの出現の目視による有意な減少を達成する、請求項１記載の方法。
16. 精製されたコラゲナーゼが約５００ＳＲＣ単位／ｍｇ〜約１５，０００ＳＲＣ単位／ｍｇを含む投与量で注入され、一回以上の注入で加えられる、請求項１記載の方法。