JP2018161649A - 磁性体粒子の操作方法および磁性体粒子操作用デバイス - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、容器(10)内に装填された液体(31)中で、磁性体粒子(71)を分散させるための磁性体粒子の操作方法に関し、容器(10)の外壁面の近傍で磁石(9)を移動させることにより、磁性体粒子(71)に運動エネルギーを与えて、液体(31)中で磁性体粒子(71)を分散させる。磁性体粒子は、目的物質を選択的に固定可能な粒子である。
【選択図】図3−1
Description
容器10は、外部からの磁場操作によって容器内の磁性体粒子を移動可能であり、液体を保持できるものであれば、その材質や形状は特に限定されない。例えば、試験管等の管状の容器や、エッペンドルチューブ等の錐形状の容器を用いることができる。また、内径1〜2mm程度、長さ50mm〜200mm程度の直管状構造体(キャピラリー)や、幅1〜2mm程度、深さ0.5〜1mm程度、長さ50mm〜200mm程度の直線状溝が形成された平面板材の上面に、別の平面板材を貼り合わせた構造体等を用いることもできる。なお、容器の形状は管状や面状に限定されず、粒子の移動経路が、十字あるいはT字等の分岐を有する構造であってもよい。
磁性体粒子71は、液体中の目的物質を選択的に固定可能な粒子である。粒子表面への目的物質の固定方法は特に限定されず、物理固定、化学固定等の各種公知の固定化メカニズムが適用可能である。例えば、ファンデルワールス力、水素結合、疎水相互作用、イオン間相互作用、π−πスタッキング等の種々の分子間力により、粒子の表面あるいは内部に目的物質が固定される。核酸、タンパク質、糖、脂質、抗体、受容体、抗原、リガンド、細胞等の目的物質は、分子認識等により、粒子表面に固定されてもよい。例えば、目的物質が核酸である場合は、シリカコーティングされた磁性体粒子を用いることにより、粒子表面に核酸を選択的に固定できる。また、目的物質が、抗体(例えば、標識抗体)、受容体、抗原およびリガンド等である場合、粒子表面のアミノ基、カルボキシル基、エポキシ基、アビジン、ビオチン、ジゴキシゲニン、プロテインA、プロテインG等により、目的物質を粒子表面に選択的に固定できる。
容器内に装填された液体は、磁性体粒子表面への目的物質の固定や、目的物質の抽出、精製、反応、分離、検出、分析等の化学操作の場を提供する。液体としては、水溶液や、水と有機溶媒の混合溶液等の水系液体が好ましく用いられる。液体は、これら化学操作のための単なる媒体として機能し得る他に、化学操作に直接関与するか、あるいは当該操作に関与する化合物を成分として含んでいてもよい。液体に含まれる物質としては、磁性体粒子の表面に固定されるべき目的物質や、磁性体粒子表面に固定された目的物質と反応する物質、当該反応によって磁性体粒子の表面に固定された物質と更に反応する物質、反応試薬、蛍光物質、各種の緩衝剤、界面活性剤、塩類、およびその他の各種補助剤、並びに、アルコール等の有機溶剤等を例示することができる。水系液体は、水、水溶液、水懸濁液等の任意の態様で提供され得る。なお、以下では核酸等の目的物質を含む液体を「液体試料」と記載する場合がある。
以下では、図1(A)〜(C)を参照しながら、液体試料31中で磁性体粒子71を分散させ、磁性体粒子71の表面に目的物質として核酸を固定させる例を中心に説明する。まず、図1(A)に示すように、容器10内に、液体試料31および磁性体粒子71が装填される。これらの装填順序は特に制限されない。例えば、予め容器10内に細胞溶解液等の溶液を装填しておき、そこに血液等を添加した後、磁性体粒子を添加することができる。先に容器10内に血液等を装填し、そこに細胞溶解液および磁性体粒子を順次あるいは同時に添加することもできる。また、容器10内に細胞溶解液とともに、磁性粒子を装填しておき、そこに血液等を添加してもよい。予め容器10内に細胞溶解液とともに、磁性体粒子を装填したものをキットとして準備しておくこともできる。液体試料および磁性体粒子を容器10内に装填した後は、容器10の上部を蓋で塞ぎ、デバイスを密閉系とすることにより、外部からの汚染を防止することが好ましい。
目的物質が固定された磁性体粒子71は、液体試料31から分離され、別の工程に供される。例えば、核酸の分離・精製では、磁性体粒子71を洗浄液中で洗浄して表面に付着した夾雑物を洗浄除去した後、溶出液中で磁性体粒子に固定されていた核酸を遊離溶出させることにより、目的物質である核酸を回収できる。回収された核酸は、必要に応じて濃縮や乾固等の操作を行った後、分析や反応等に供することができる。
本発明の方法は、前述の特許文献2(WO2012/086243)に開示されているような、水系液体層と、ゲル状媒体層とが交互に重層されたデバイスを用いた目的物質の分離・精製にも適用できる。このようなデバイスを用いる場合は、密閉系で一連の操作を実施できるため、開放系で行われるピペット操作に比べて、コンタミネーションの危険性を低減できる。
容器内に、磁性体粒子と液体とを装填するだけで、図1または図2に示すような、溶解/固定のためのデバイスを作成できる。容器内に装填される液体は、例えば、核酸抽出液等の細胞を溶解可能な液体である。この液体は、磁性体粒子の凝集を防ぐためのアルコール等が添加されたものでもよい。特に、目的物質の溶解/固定の際の酵素処理を省略する場合は、予めデバイス内に核酸抽出液等の液体と磁性体粒子とを共存させた状態でデバイスを提供できるため、操作用デバイスの作製も容易である。
13,113 凹凸構造
20 追従機構
25 バネ(弾性体)
71,171 磁性体粒子
31,131 液体試料
9 磁石
150 核酸抽出用粒子操作デバイス
121〜123 ゲル状媒体
130 液体層(核酸抽出液)
132,133 液体層(洗浄液)
134 液体層(核酸溶出液)
Claims (14)
- 容器内に装填された液体中で、磁性体粒子を分散させるための磁性体粒子の操作方法であって、
前記磁性体粒子は、目的物質を選択的に固定可能な粒子であり、
前記容器の外壁面の近傍で磁石を移動させることにより、前記磁性体粒子に運動エネルギーを与えて、液体中で磁性体粒子を分散させる、磁性体粒子の操作方法。 - 前記容器の外壁面の近傍で磁石を移動させながら、前記容器に振動を与えることにより、液体中で磁性体粒子を分散させる、請求項1に記載の磁性体粒子の操作方法。
- 前記容器は外壁面に凹凸構造を有し、
前記凹凸構造に沿って磁石を移動させることにより、前記容器に振動が与えられる、請求項2に記載の磁性体粒子の操作方法。 - 弾性体に連結された磁石を前記凹凸構造に当接させながら往復運動させることにより、前記容器に振動が与えられる、請求項3に記載の磁性体粒子の操作方法。
- 前記磁性体粒子が選択的に固定し得る前記目的物質が、核酸、タンパク質、糖、脂質、抗体、受容体、抗原、リガンドおよび細胞からなる群から選択される1以上である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の磁性体粒子の操作方法。
- 前記液体中に前記目的物質が含まれており、
前記液体中で前記磁性体粒子を分散させることにより、前記磁性体粒子に前記目的物質が固定される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の磁性体粒子の操作方法。 - 前記液体が、細胞を溶解可能な成分を含む、請求項6に記載の磁性体粒子の操作方法。
- 請求項6または7に記載の方法により、磁性体粒子の表面に目的物質が選択的に固定された後、
前記目的物質が固定された前記磁性体粒子が、溶出液に接触させられることにより、前記目的物質が前記溶出液中に溶出される、磁性体粒子の操作方法。 - 容器内にゲル状媒体層と液体層とが交互に配置されたデバイス内において、
請求項6または7に記載の方法により、第一の液体層内の目的物質が磁性体粒子の表面に選択的に固定された後、
磁場操作により、第一の液体層内の磁性体粒子が、ゲル状媒体内へ移動させられるステップ;
磁場操作により、前記ゲル状媒体層の内部に存在する前記磁性体粒子が、第二の液体層内へ移動させられるステップ;および
前記磁性体粒子が第二の液体層内で分散させられるステップ
を有する、磁性体粒子の操作方法。 - 外壁面に凹凸構造を有する容器内に、液体と、目的物質を選択的に固定可能な磁性体粒子とが装填されている、磁性体粒子操作用デバイス。
- 外壁面に凹凸構造を有する容器内に、ゲル状媒体層と液体層とが交互に配置されており、
さらに、前記容器内において移動されるべき磁性体粒子が前記容器内に装填されている、磁性体粒子操作用デバイス。 - 前記容器内に装填された液体が、細胞を溶解可能な液体である、請求項10または11に記載の磁性体粒子操作用デバイス。
- 請求項10〜12のいずれか1項に記載の粒子操作用デバイスを作製するためのキットであって、
外壁面に凹凸構造を有する容器;液体;および磁性体粒子を含む、磁性体粒子操作デバイス作製用キット。 - さらに、ゲル状媒体を含む、請求項13に記載の磁性体粒子操作デバイス作製用キット。
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