JP2018100316A - 切片転写シートおよび切片標本の作製方法 - Google Patents

Abstract

【課題】溶液浸透性材料を含む試料ブロックをシートに接着した状態で、試料ブロックを薄切りして切片を作製し、この切片を基材に転写することが可能であり、切片自動作製装置に適用可能な切片転写シートを提供する。【解決手段】不織布を含んで構成された第１基材層１０と、第１基材層１０の一方の面に形成された第１粘着層１２と、第１粘着層１２の第１基材層１０と反対側の面に形成され、開口部２２を有する第１剥離層１４と、を少なくとも有し、開口部２２の大きさに対応して、第１粘着層１２および第１基材層１０の厚み方向に貫通する切り込み部３８が形成されている、切片転写シート１である。【選択図】図１

Description

本発明は、生体組織等の切片標本等を作製するため等に用いられる切片転写シート、およびその切片転写シートを用いる切片標本の作製方法に関する。

現在、癌等による病変の診断においては、病理診断が不可欠であり、病理診断には患者の組織の切片標本が必要である。組織の切片標本は、通常、患者から採取した組織検体等の試料を凍結組織包埋剤やパラフィン等の包埋剤に凍結または包埋した試料ブロックをミクロトーム等によって薄切りし、スライドガラスに載せて免疫染色等で染色して作製し、顕微鏡等により観察して検査するものである。

病理診断を手術中に行う場合等があるため、病理診断の時間短縮が求められている。また、病理検査用の切片標本は現在、熟練した病理医等が手動で作製しているが、病理医の減少、高齢化、病理医の技術的な低下等の要因により、切片標本作製のばらつき等による問題が指摘されている。このため、切片標本の作製の自動化による、省力化、再現性の向上が早急に求められている。

例えば、特許文献１には、スライス片の付着されたキャリアテープをホルダーに接着し、さらに、ホルダーに接着されたキャリアテープを切断して分離しながら、キャリアテープを連結的に移送でき、しかも、連続移送されるスライス片の付着されたキャリアテープを簡単かつ能率よくホルダーに接着できる試料ブロックのスライス装置が記載されている。

また、特許文献２には、粘着フィルムを用いた薄切片の作製や染色処理を行う際の操作性を向上させるための粘着フィルムであり、ガイドに対応する非粘着部と、ガイドによって囲まれる開口に対応する粘着部を有するガイド付き粘着フィルムが記載されている。

しかしながら、自動で、凍結または包埋した組織切片を薄切りし、薄切りした組織切片をスライドガラスに転写することが極めて困難であるため、これまで全世界的に見ても、切片標本の作製における自動化装置の実用化はされつつも課題が残されている。

特開２００９−１６８７６２号公報 特開２００６−２６７０３９号公報

本発明の目的は、試料を含む試料ブロックをシートに接着した状態で、試料ブロックを薄切りして切片を作製し、この切片を基材に転写することが可能であり、切片自動作製装置に適用可能な切片転写シート、およびその切片転写シートを用いる切片標本の作製方法を提供することにある。

本発明は、溶液浸透性材料を含んで構成された第１基材層と、前記第１基材層の一方の面に形成された第１粘着層と、前記第１粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成され、開口部を有する第１剥離層と、を少なくとも有し、前記開口部の大きさに対応して、前記第１粘着層および前記第１基材層の厚み方向に貫通する切り込み部が形成されている、切片転写シートである。

前記切片転写シートにおいて、前記第１粘着層の粘着力は、０．８〜３Ｎ／ｃｍの範囲であることが好ましい。

前記切片転写シートにおいて、前記第１基材層の剛軟度は、２〜１２ｍｍの範囲であることが好ましい。

前記切片転写シートにおいて、前記溶液浸透性材料は、不織布であることが好ましい。

前記切片転写シートにおいて、前記第１粘着層は、金属イオンと、前記金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤とを含むことが好ましい。

前記切片転写シートにおいて、前記第１基材層の前記第１粘着層と反対側の面に形成された第２粘着層と、前記第２粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成された第２基材層と、をさらに有することが好ましい。

前記切片転写シートにおいて、第２基材層の剛軟度は、３〜１０ｍｍの範囲であることが好ましい。

前記切片転写シートにおいて、前記第１剥離層の前記第１粘着層と反対側の面に形成され、前記開口部を覆う第２剥離層をさらに有することが好ましい。

また、本発明は、溶液浸透性材料を含んで構成された第１基材層と、前記第１基材層の一方の面に形成された第１粘着層と、前記第１粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成され、開口部を有する第１剥離層と、を少なくとも有し、前記開口部の大きさに対応して、前記第１粘着層および前記第１基材層の厚み方向に貫通する切り込み部が形成されている切片転写シートにおける、前記開口部に露出した前記第１粘着層によって、試料を含む試料ブロックを接着した後に、前記試料ブロックを薄切りして切片を作製する薄切り工程と、前記切片に基材を付着する基材付着工程と、前記第１剥離層を剥離することによって、前記第１粘着層および前記第１基材層を前記切り込み部で切断する第１剥離層剥離工程と、前記第１粘着層を溶解させる溶解液を、前記第１基材層に含浸させて前記第１粘着層を溶解して前記第１基材層を剥離し、前記切片が前記基材に転写された切片標本を得る第１基材層剥離工程と、を含む、切片標本の作製方法である。

前記切片標本の作製方法において、前記第１粘着層の粘着力は、０．８〜３Ｎ／ｃｍの範囲であることが好ましい。

前記切片標本の作製方法において、前記第１基材層の剛軟度は、２〜１２ｍｍの範囲であることが好ましい。

前記切片標本の作製方法において、前記溶液浸透性材料は、不織布であることが好ましい。

前記切片標本の作製方法において、前記第１粘着層は、金属イオンと、前記金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤とを含むことが好ましい。

前記切片標本の作製方法において、前記切片転写シートは、前記第１基材層の前記第１粘着層と反対側の面に形成された第２粘着層と、前記第２粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成された第２基材層と、をさらに有することが好ましい。

前記切片標本の作製方法において、第２基材層の剛軟度は、３〜１０ｍｍの範囲であることが好ましい。

前記切片標本の作製方法において、前記切片転写シートは、前記第１剥離層の前記第１粘着層と反対側の面に形成され、前記開口部を覆う第２剥離層をさらに有することが好ましい。

本発明により、試料を含む試料ブロックをシートに接着した後に、薄切りして切片を作製し、この切片を基材に転写することが可能であり、切片自動作製装置に適用可能な切片転写シート、およびその切片転写シートを用いる切片標本の作製方法を提供することができる。

本発明の実施形態に係る切片転写シートの一例を示す概略構成図である。 本発明の実施形態に係る切片転写シートを用いて切片標本を作製する方法の一例を示す概略図である。 本発明の実施形態に係る切片転写シートを用いて切片標本を作製する方法の一例を示す概略図である。 本発明の実施形態に係る切片転写シートを用いて切片標本を作製する方法の他の例を示す概略図である。 本発明の実施形態に係る切片転写シートを用いて切片標本を作製する方法の他の例を示す概略図である。 本発明の実施形態に係る切片転写シートの製造方法の一例を示す概略図である。

本発明の実施の形態について以下説明する。本実施形態は本発明を実施する一例であって、本発明は本実施形態に限定されるものではない。

＜切片転写シートおよび切片標本の作製方法＞
本発明の実施形態に係る切片転写シートの一例の概略を図１に示し、その構成について説明する。

切片転写シート１は、溶液浸透性材料を含んで構成された第１基材層１０と、第１基材層１０の一方の面に形成された第１粘着層１２と、第１粘着層１２の第１基材層１０と反対側の面に形成され、開口部２２を有する第１剥離層１４と、を少なくとも有し、開口部２２の大きさに対応して、第１粘着層１２および第１基材層１０の厚み方向に貫通する切り込み部３８が形成されている。切片転写シート１は、第１基材層１０の第１粘着層１２と反対側の面に形成された第２粘着層１８と、第２粘着層１８の第１基材層１０と反対側の面に形成された第２基材層１６と、をさらに有していてもよい。また、切片転写シート１は、第１剥離層１４の第１粘着層１２と反対側の面に形成され、開口部２２を覆い、第１粘着層１２の粘着剤を保護するための第２剥離層２０をさらに有していてもよい。

切片転写シート１は、開口部２２に露出した第１粘着層１２によって、試料を含む試料ブロックを接着した後に、その状態で試料ブロックを薄切りして切片を作製し、スライドガラス等の基材に薄切りした切片を付着させた後、第１剥離層１４を剥離することによって、第１粘着層１２および第１基材層１０を切り込み部３８で切断して第２基材層１６とともに除去し、第１粘着層１２を溶解させる溶解液を、第１基材層１０に含浸させて第１粘着層１２を溶解して第１基材層１０を剥離し、切片が基材に転写された切片標本を得るためのものである。

本実施形態に係る切片転写シート１を用いて切片標本を作製する方法の一例について図２Ａ、図２Ｂを参照して説明する。切片転写シート１を用いて切片標本を作製する方法は、以下の方法に限定されるものではない。

まず、切片転写シート１が図２Ａ（ａ）に示すように第２剥離層２０を有する場合、切片転写シート１から第２剥離層２０を剥離する（第２剥離層剥離工程）。第２剥離層２０を剥離すると、図２Ａ（ｂ）に示すように、第１剥離層１４の開口部２２に第１粘着層１２が露出する。図２Ａ（ｃ）に示すように、試料３２を包埋剤により包埋した試料ブロック２４を、開口部２２に露出した第１粘着層１２により接着する（試料ブロック接着工程）。その後、ブレード３０等により、所定の厚みで試料ブロック２４を薄切りし、図２Ａ（ｄ）に示すように、第１粘着層１２に接着した、試料切片３４を含む包埋切片２６を作製する（薄切り工程）。図２Ｂ（ｅ）に示すように、スライドガラス等の基材２８を、試料切片３４を含む包埋切片２６に付着する（基材付着工程）。第１剥離層１４を第２基材層１６とともに剥離することによって、第１粘着層１２および第１基材層１０を切り込み部３８で切断して（第１剥離層剥離工程）、図２Ｂ（ｇ）に示すように、第１粘着層１２および第１基材層１０の一部を残存させる。例えば、第１粘着層１２および包埋剤を溶解させる有機溶剤等の溶解液を第１基材層１０に含浸させて第１粘着層１２および包埋剤を溶解して、図２Ｂ（ｇ）に示すように、第１基材層１０を剥離する（第１基材層剥離工程）。これにより、基材２８の一方の面に、試料切片３４が転写された切片標本３６が得られる。

本実施形態に係る切片転写シート１を用いて切片標本を作製する方法の他の例について図３Ａ、図３Ｂを参照して説明する。

まず、切片転写シート１が図３Ａ（ａ）に示すように第２剥離層２０を有する場合、切片転写シート１から第２剥離層２０を剥離する（第２剥離層剥離工程）。第２剥離層２０を剥離すると、図３Ａ（ｂ）に示すように、第１剥離層１４の開口部２２に第１粘着層１２が露出する。図３Ａ（ｃ）に示すように、第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離した後（第２基材層剥離工程）、図３Ａ（ｄ）に示すように、試料３２を包埋剤により包埋した試料ブロック２４を、開口部２２に露出した第１粘着層１２により接着する（試料ブロック接着工程）。その後、ブレード３０等により、所定の厚みで試料ブロック２４を薄切りし、図３Ｂ（ｅ）に示すように、第１粘着層１２に接着した、試料切片３４を含む包埋切片２６を作製する（薄切り工程）。図３Ｂ（ｆ）に示すように、スライドガラス等の基材２８を、試料切片３４を含む包埋切片２６に付着する（基材付着工程）。第１剥離層１４を剥離することによって、第１粘着層１２および第１基材層１０を切り込み部３８で切断して（第１剥離層剥離工程）、図３Ｂ（ｇ）に示すように、第１粘着層１２および第１基材層１０の一部を残存させる。例えば、第１粘着層１２および包埋剤を溶解させる有機溶剤等の溶解液を第１基材層１０に含浸させて第１粘着層１２および包埋剤を溶解して、図３Ｂ（ｈ）に示すように、第１基材層１０を剥離する（第１基材層剥離工程）。これにより、基材２８の一方の面に、試料切片３４が転写された切片標本３６が得られる。

このように、本実施形態に係る切片転写シート１を用いて切片標本を作製する方法では、開口部２２に露出した第１粘着層１２によって、試料３２を含む試料ブロック２４を接着した後に、その状態でブレード３０等を用いて試料ブロック２４を薄切りして、試料切片３４を含む包埋切片２６を切片転写シート１に保持する。その後、包埋切片２６にスライドガラス等の基材２８を付着し、第１剥離層１４を剥離することによって、第１粘着層１２および第１基材層１０を切り込み部３８で切断し、第１粘着層１２および包埋剤を溶解させる溶解液を、第１基材層１０に含浸させて第１粘着層１２を溶解して第１基材層１０を剥離し、試料切片３４が基材２８に転写された切片標本３６を得る。

［切片転写シートの特徴］
本実施形態に係る切片転写シート１は、例えば、以下の特徴を有する。

１．生体組織等の試料３２を包埋剤により包埋した試料ブロック２４を、切片転写シート１の第１粘着層１２に接着することができ、薄切りした試料切片３４を含む包埋切片２６を作製した後、スライドガラス等の基材２８へ試料切片３４の破壊を抑制した上で転写することができる。

このように、試料ブロック２４の接着のためには、後述するように、第１粘着層１２の粘着力の制御が重要である。また、図２Ｂ（ｅ）→（ｆ）のように、包埋切片２６に基材２８を付着した後に第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する場合、主に第２基材層１６の種類や厚みが、試料切片３４の組織等の破壊を抑制して剥離できるかに影響すると考えられる。

２．生体組織等の試料３２を包埋した試料ブロック２４を、切片転写シート１の第１粘着層１２に接着した状態で薄切りすることができる。

主に第１粘着層１２の粘着力および薄切り工程における切片転写シートの硬さが薄切り作業性に影響を与えると考えられる。図２Ｂ（ｅ）→（ｆ）のように、包埋切片２６に基材２８を付着した後に第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する場合、図２Ａ（ｃ）の薄切り工程では主に第２基材層１６の種類や厚みが、薄切り作業性に影響すると考えられる。図３Ａ（ｂ）→（ｃ）のように、薄切り工程の前に第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する場合、図３Ａ（ｄ）の薄切り工程では主に第１基材層１０の種類や厚みが、薄切り作業性に影響すると思われる。

また、切片転写シート１の構成および形状も薄切り作業性に影響を与えると考えられる。薄切り工程で第１粘着層１２が全面むき出しの場合は、薄切りの際にブレード３０等と第１粘着層１２の粘着剤が接触して、薄切りが困難となる。そこで、図２Ａ（ｂ），（ｃ）または図３Ａ（ｃ），（ｄ）に示すように、開口部２２を有する第１剥離層１４によって例えば額縁状に第１剥離層１４を形成して、ブレード３０と第１粘着層１２の粘着剤との接触をできるだけ少なくすることにより、容易に薄切り作業を行うことできる。

３．試料切片３４を含む包埋切片２６に基材２８を付着後、有機溶剤等の溶解液を第１基材層１０に含浸させて第１粘着層１２を溶解して、第１基材層１０を剥離することができる。

このように、有機溶剤等の溶解液を第１基材層１０に含浸させるためには、第１基材層１０の構成が重要である。

第１基材層１０としては、上記の通り、薄切り作業性、および有機溶剤を含浸させる等のために、溶液浸透性材料を含んで構成されている。溶液浸透性材料としては、不織布、薄葉紙、和紙、濾紙、印刷用紙等の紙、布、発泡体等の、溶液が浸透可能な材料が挙げられ、さらに前記材料と各種多孔質膜もしくは小さな穴が開いた樹脂フィルム（例えばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリエチレン（ＰＥ）等）等のフィルムとをラミネートしたものや、前記材料の片面（粘着剤塗布面）側に粘着剤バリヤ層を塗布したもの、前記材料にキシレン等の有機溶剤に可溶な樹脂を含浸したもの等が挙げられ、薄切り作業性、液浸透性、保存性、コスト等の観点から不織布や薄葉紙が好ましいが、これらの原料や製法については、特に限定されるものではない。

第１基材層１０の剛軟度は、２〜１２ｍｍの範囲であることが好ましく、４〜１０ｍｍの範囲であることがより好ましい。第１基材層１０の剛軟度が２ｍｍ未満であると、切片転写シートが柔らかすぎ、１２ｍｍを超えると、切片転写シートが硬すぎて、ブレード３０による薄切りを行うことが困難となる場合がある。ここで、剛軟度は、「ＪＩＳ Ｌ１０９６ 織物及び編物の生地試験方法」に記載されている剛軟度（Ａ法（４５°カンチレバー法））である。

第１粘着層１２に含まれる粘着剤としては、試料ブロック２４に対する接着性を発現する粘着剤であればよく、特に限定されるものではないが、好ましいものとしては、アクリル系粘着剤、ウレタン系粘着剤、シリコーン系粘着剤等の樹脂系粘着剤等が挙げられ、試料ブロック２４に対する接着性が良好である等の点から、アクリル系粘着剤がより好ましい。

第１粘着層１２は、試料ブロック２４への接着性のため凝集力を保持することと、有機溶剤等の溶解液に溶解することとを両立させるために、金属イオンと、金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤とを含むことが好ましい。金属イオンと、金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤とにより、疑似的架橋点を形成させることができる。

金属イオンとしては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属等が挙げられ、架橋状態の制御のしやすさ等の点から、カリウムが好ましい。

金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤としては、カルボキシル基、ヒドロキシル基等の架橋基を有する樹脂粘着剤が挙げられ、具体的には、例えば、（メタ）アクリル酸および（メタ）アクリル酸ヒドロキシエチルのうち少なくとも１つを必須成分として含むアクリル系共重合体粘着剤が好ましい。

例えば、第１粘着層１２に、水酸化カリウムや水酸化カルシウム等の金属水酸化物をアクリル系粘着剤等に添加し、金属とアクリル系粘着剤等のカルボキシル基等の架橋基との間にイオン結合を形成することによって、擬似的架橋点を形成すればよい。

第１粘着層１２の粘着力は、０．８Ｎ／ｃｍ以上であることが好ましく、０．８〜３Ｎ／ｃｍの範囲であることがより好ましい。第１粘着層１２の粘着力が０．８Ｎ／ｃｍ未満であると、試料ブロック２４の接着が弱くなる場合がある。第１粘着層１２の粘着力の上限は、強すぎても問題はなく、特に限定されるものではないが、例えば、３Ｎ／ｃｍである。

第１粘着層１２の厚みは、例えば、１０μｍ〜８０μｍの範囲であることが好ましく、３０μｍ〜６０μｍの範囲であることがより好ましい。第１粘着層１２の厚みが１０μｍ未満であると、試料ブロック２４との接着性が不十分となる場合があり、８０μｍを超えると、粘着剤が切片転写シート端部からはみ出し、加工性や保存性が低下する場合がある。

第１粘着層１２および包埋剤を溶解させる溶解液としては、第１粘着層１２および包埋剤を溶解することができ、試料切片３４への影響が少ないものであればよく、特に制限はないが、例えば、キシレン、Ｄ−リモネン、ピネン化合物等の有機溶剤等が挙げられる。

第２基材層１６としては、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム、ポリプロピレン（ＰＰ）フィルム等の樹脂フィルム等が挙げられる。図２Ｂ（ｅ）→（ｆ）のように、包埋切片２６に基材２８を付着した後に第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する場合、主に第２基材層１６の種類や厚みが、薄切り工程における薄切り作業性、および包埋切片２６に基材２８を付着した後に試料切片３４の組織等の破壊を抑制して剥離できるかに影響すると考えられる。図３Ａ（ｂ）→（ｃ）のように、薄切り工程の前に第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する場合には、第２基材層１６の種類や厚みは、切片自動作製装置での剥離しやすさに影響すると考えられる。

第２基材層１６の剛軟度は、例えば、３〜１０ｍｍの範囲であることが好ましく、４〜８ｍｍの範囲であることがより好ましい。第２基材層１６の剛軟度が３ｍｍ未満であると、切片転写シートが柔らかすぎ、１０ｍｍを超えると、切片転写シートが硬すぎて、ブレード３０による薄切りを行うことが困難となる場合があり、または、切片自動作製装置での剥離が困難となる場合がある。

第２粘着層１８に含まれる粘着剤としては、例えば、アクリル系粘着剤、ウレタン系粘着剤等の樹脂系粘着剤等が挙げられる。

第２粘着層１８の粘着力は、０．１Ｎ／ｃｍ〜１Ｎ／ｃｍの範囲であることが好ましく、０．３Ｎ／ｃｍ〜０．７Ｎ／ｃｍの範囲であることがより好ましい。第２粘着層１８の粘着力が０．１Ｎ／ｃｍ未満であると、第１基材層１０と接着しにくい場合があり、１Ｎ／ｃｍを超えると、第１基材層１０からの剥離が困難となる場合がある。

第２粘着層１８の厚みは、例えば、１０μｍ〜８０μｍの範囲であることが好ましく、２０μｍ〜５０μｍの範囲であることがより好ましい。第２粘着層１８の厚みが１０μｍ未満であると、第１基材層１０と接着しにくい場合があり、８０μｍを超えると、第１基材層１０からの剥離が困難となる、および、粘着剤が切片転写シート端部からはみ出し、加工性や保存性が低下する場合がある。

第１剥離層１４としては、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム、ポリプロピレン（ＰＰ）フィルム等の樹脂フィルム等が挙げられ、薄切り作業性や、切片自動作製装置での剥離しやすさ等の観点からポリエチレンテレフタレートフィルムが好ましい。

第１剥離層１４の剛軟度は、例えば、３〜１０ｍｍの範囲であることが好ましく、４〜８ｍｍの範囲であることがより好ましい。第１剥離層１４の剛軟度が３ｍｍ未満であると、切片転写シートが柔らかすぎ、１０ｍｍを超えると、切片転写シートが硬すぎて、ブレード３０による薄切りを行うことが困難となる場合があり、または、切片自動作製装置での剥離が困難となる場合がある。

第１剥離層１４の厚みは、例えば、２０μｍ〜８０μｍの範囲であることが好ましく、４０μｍ〜６０μｍの範囲であることがより好ましい。第１剥離層１４の厚みが２０μｍ未満であると、切片転写シートが柔らかすぎ、８０μｍを超えると、切片転写シートが硬すぎて、ブレード３０による薄切りを行うことが困難となる場合があり、または、切片自動作製装置での剥離が困難となる場合がある。

第２剥離層２０としては、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム、ポリプロピレン（ＰＰ）フィルム等の樹脂フィルム等が挙げられ、切片自動作製装置での剥離しやすさ等の観点からポリエチレンテレフタレートフィルムが好ましい。

第２剥離層２０の厚みは、例えば、２０μｍ〜８０μｍの範囲であることが好ましく、４０μｍ〜６０μｍの範囲であることがより好ましい。第２剥離層２０の厚みが２０μｍ未満であると、切片転写シートが柔らかすぎ、８０μｍを超えると、切片転写シートが硬すぎて、切片自動作製装置での剥離が困難となる場合がある。

開口部２２は、第１粘着層１２の第１基材層１０と反対側の面に第１剥離層１４を例えば額縁状等に形成することにより、正方形状、長方形状等に形成される。開口部２２の大きさは、開口部２２に露出した第１粘着層１２によって試料ブロック２４を接着できる程度の大きさであって、包埋切片２６の面積よりも大きければよく、特に制限はない。

本実施形態に係る切片転写シートは、２つ以上の切片転写シートが連続して形成されたフィルムとして提供されてもよい。連続フィルムとすることにより、切片自動作製装置においてロール供給が可能となる。

試料ブロック２４は、試料３２をパラフィン等の包埋剤により包埋したものである。試料ブロック２４は、公知の方法により作製すればよい。

試料３２は、病理診断等の診断対象、観察対象となるものであればよく、特に制限はないが、例えば、動物や植物等の細胞、植物の組織、動物の臓器、骨、歯、皮膚等の生体組織等が挙げられる。

試料３２を包埋して試料ブロック２４を形成するための包埋剤としては、公知のものを用いることができ、例えば、パラフィン、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）等の包埋剤が挙げられる。包埋剤を用いて公知の方法により試料ブロック２４を作製すればよい。

試料切片３４を含む包埋切片２６の厚みは、例えば、１μｍ〜１０μｍの範囲であり、好ましくは３μｍ〜５μｍの範囲である。

基材２８としては、試料切片３４を転写することができるものであればよく、特に制限はないが、例えば、スライドガラス等が挙げられる。

本実施形態に係る切片標本の作製方法によって作製した切片標本は、公知の免疫染色等で染色した後、顕微鏡等により観察して病理検査等を行えばよい。

上記の図２Ａ，２Ｂまたは図３Ａ，３Ｂに示したような切片標本を作製する方法を適用する切片自動作製装置により、本実施形態に係る切片転写シート１を用いて、切片標本を自動的に作製することができる。切片標本の作製の自動化により、省力化が達成され、切片標本作製のばらつきが抑制されて再現性が向上する。

切片自動作製装置は、例えば、ブレード３０等を用いて所定の厚みで試料ブロック２４を薄切りし、第１粘着層１２に接着した、試料切片３４を含む包埋切片２６を作製する薄切手段と、スライドガラス等の基材２８を包埋切片２６に付着する基材付着手段とを備える。切片自動作製装置は、切片転写シート１から第２剥離層２０を剥離する第２剥離層剥離手段と、第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する第２基材層剥離手段と、第１剥離層１４を剥離する第１剥離層剥離手段と、試料ブロック２４を開口部２２に露出した第１粘着層１２に接着する試料ブロック接着手段と、溶解液を第１基材層１０に含浸させて第１粘着層１２および包埋剤を溶解して、第１基材層１０を剥離する第１基材層剥離手段とのうち少なくとも１つをさらに備えてもよい。切片自動作製装置は、さらに、試料切片３４を免疫染色等で染色する染色手段を備えてもよい。

具体的には、切片自動作製装置は、例えば、切片転写シート１から第２剥離層２０を剥離する第２剥離層剥離手段と、第２剥離層２０が剥離された切片転写シート１の開口部２２に露出した第１粘着層１２に試料ブロック２４を接着する押圧具等の試料ブロック接着手段と、ブレード３０等を用いて所定の厚みで試料ブロック２４を薄切りし、包埋切片２６を作製する薄切手段と、スライドガラス等の基材２８を包埋切片２６に付着する基材付着手段と、第１剥離層１４〜第２基材層１６を剥離する第１剥離層剥離手段と、を備える。

または、切片自動作製装置は、例えば、切片転写シート１から第２剥離層２０を剥離する第２剥離層剥離手段と、第２基材層１６および第２粘着層１８を剥離する第２基材層剥離手段と、第２剥離層２０、第２基材層１６および第２粘着層１８が剥離された切片転写シート１の開口部２２に露出した第１粘着層１２に試料ブロック２４を接着する押圧具等の試料ブロック接着手段と、ブレード３０等を用いて所定の厚みで試料ブロック２４を薄切りし、包埋切片２６を作製する薄切手段と、スライドガラス等の基材２８を包埋切片２６に付着する基材付着手段と、第１剥離層１４〜第１基材層１０を剥離する第１剥離層剥離手段と、を備える。

＜切片転写シートの製造方法＞
切片転写シート１を製造する方法の一例について、図４を参照しながら、説明する。切片転写シート１を製造する方法は、以下の方法に限定されるものではない。

（工程１）
図４（ａ）に示すように、不織布等の第１基材層１０と第１剥離層１４となる剥離フィルムとを第１粘着層１２を介して貼合し、第１基材層１０の第１粘着層１２と反対側の面に、第２粘着層１８を有する第２基材層１６を貼合して貼合材５０を作製する。

（工程２）
図４（ｂ）に示すように、貼合材５０の第１剥離層１４側から、第２粘着層１８の表面（第１基材層１０側の面）まで半抜き加工（ハーフカット）を行い、半抜き加工（ハーフカット）部分の第１剥離層１４を除去して、開口部２２を形成する。

（工程３）
図４（ｃ）に示すように、表面に露出した第１粘着層１２の粘着剤を保護するために第２剥離層２０を貼合わせて、切片転写シート１が得られる。

以下、実施例および比較例を挙げ、本発明をより具体的に詳細に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。

＜実施例１＞
以下の方法で、切片転写シート１を作製した。

（工程１）
第１基材層１０として不織布（目付（坪量）：４０ｇ／ｍ^２、厚み：６０μｍ、剛軟度：５ｍｍ）と、第１剥離層１４となる剥離フィルム（ポリエチレンテレフタレートフィルム、厚み：５０μｍ、剛軟度：５ｍｍ）の剥離面とを第１粘着層１２（アクリル系粘着剤（綜研化学（株）製、ＳＫダイン１７１７ＤＴ）、厚み：４０μｍ、粘着力：１．５Ｎ／ｃｍ）を介して貼合し、粘着シートを形成した。さらに、第１基材層１０の第１粘着層１２と反対側の面に、第２粘着層１８（アクリル系粘着剤（綜研化学（株）製、ＳＫダイン１４９１Ｈ）、厚み：２０μm、粘着力：０．３Ｎ／ｃｍ）を有する第２基材層１６（材質：ポリプロピレン（ＰＰ）フィルム、厚み：６０μｍ、剛軟度：６ｍｍ）を貼合わせて、貼合材５０を作製した。

（工程２）
貼合材５０の第１剥離層１４側から、第２粘着層１８の表面（第１基材層１０側の面）まで半抜き加工（ハーフカット）を行い、半抜き加工（ハーフカット）部分の第１剥離層１４を除去して、第１剥離層１４を額縁状（長辺部幅：１１．５ｍｍ、短辺部幅：１２ｍｍおよび２９ｍｍ）とし、開口部２２（２２ｍｍ×５０ｍｍ）を形成した。

（工程３）
表面に露出した第１粘着層１２の粘着剤を保護するために第２剥離層２０（ポリエチレンテレフタレートフィルム、厚み：７５μｍ）を貼合わせて、切片転写シート１（４５ｍｍ×９１ｍｍ）を得た。

なお、粘着層の粘着力は、精密万能試験機（（株）島津製作所製、オートグラフＡＧＳ−Ｘ型）を用いて、ＪＩＳ−Ｚ０２３７に準拠し、パラフィンに貼り付けて測定した。基材層の剛軟度は、剛軟度試験機（大栄科学精器製作所製、ＣＡＮ−１ＭＣ型）を用いて、ＪＩＳ−Ｌ１０９６剛軟度Ａ法（カンチレバー法）に準拠し、測定した。各層の厚みは、デジタルマイクロメータ（ソニー製、Ｍ−３０型）を用いて測定した。粘着剤の溶解性については、２２ｍｍ×５０ｍｍサイズの各粘着シートをスライドガラスに貼り付け、貼り付けてから２０分以上放置後、キシレンに浸漬した状態で１０分撹拌し、スライドガラスに粘着剤が残存していないことを目視にて確認した。

＜実施例２〜７＞
第１基材層１０として、剛軟度の異なる不織布や印刷用紙を用いて、実施例１と同様にして、切片転写シートを作製した。比較例１では、第１基材層１０として、溶液非浸透性のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）を用いて、実施例１と同様にして、切片転写シートを作製した。

実施例１〜７、比較例１の切片転写シートについて、切片自動作製装置を用いて、常法により薄切り評価実験、剥離防止コート無しのスライドガラス（長辺７６ｍｍ×短辺２６ｍｍ、厚み０．９〜１．２ｍｍ）への転写実験を行った。また、上記方法で溶解液（キシレン）への溶解性評価（目視）を行った。切片・転写性、および溶解性は、下記の基準で評価した。結果を表１に示す。
（切片・転写性）
〇：切片・転写可能
△：切片・転写困難
×：切片・転写不可
（溶解性）
〇：５分以内に溶解する
×：溶解に１０分以上を要する

これらの結果より、第１基材層１０としては、溶液浸透性材料であり、切片・転写性、および溶解性と入手のしやすさから、不織布が最適であり、特に剛軟度が２〜１２ｍｍの不織布が好ましいことがわかった。

＜実施例８〜１０＞
第１粘着層１２の粘着剤として、実施例１とは異なる粘着剤を用いて、実施例１と同様にして、切片転写シートを作製した。実施例４，５では、実施例１と同じ粘着剤１００質量部に対して、架橋剤として水酸化カリウムそれぞれ１質量部、４質量部を添加し、金属とアクリル系粘着剤のカルボキシル基の架橋基との間にイオン結合を形成することができる粘着剤を使用した。実施例６では、実施例１と同じ粘着剤１００質量部に対して、架橋剤として水酸化カルシウム１質量部を添加し、金属とアクリル系粘着剤のカルボキシル基の架橋基との間にイオン結合を形成することができる粘着剤を使用した。

＜実施例１１〜１３＞
実施例１１では、実施例１と同じ粘着剤１００質量部に対して、架橋剤として水酸化カリウム５質量部を添加し、金属とアクリル系粘着剤のカルボキシル基の架橋基との間にイオン結合を形成することができる粘着剤を使用した。実施例１２では実施例１と同じ粘着剤１００質量部に対して、イソシアネート系架橋剤（東ソー（株）製：コロネートＬ−４５Ｅ）１質量部を添加した粘着剤を使用し、実施例１と同様にして、切片転写シートを作製した。実施例１３では、ウレタン系粘着剤（トーヨーケム（株）製、サイアバインＳＨ−１０１）１００質量部に対して、イソシアネート系架橋剤（トーヨーケム（株）製、サイアバインＴ−５０１Ｂ）１質量部を添加した粘着剤を使用し、実施例１と同様にして、切片転写シートを作製した。

実施例８〜１３の切片転写シートについて、上記実施例と同様にして、薄切り評価実験、スライドガラスへの転写実験、溶解液（キシレン）への溶解性評価（目視）を行った。切片・転写性、溶解性は、下記の基準で評価した。結果を表２に示す。
（切片・転写性）
〇：切片・転写可能
△：切片・転写困難
×：切片・転写不可
（溶解性）
〇：溶解する
×：未溶解物が残る

金属系架橋剤の添加量が多い場合は接着力が小さくなり、切片・転写性が劣る。また、粘着剤と架橋剤の組み合わせで架橋点が多い場合は、同様に接着力が小さくなり、さらに溶解性の低下が発現する。これらの結果より、第１粘着層１２に用いる粘着剤としては、アクリル系粘着剤にイオン結合を形成させたものが最適であり、粘着力は０．８Ｎ／ｃｍ以上が好ましいことがわかった。

＜実施例１４〜２１＞
第２基材層１６として、各種素材のフィルムを用いて、実施例１と同様にして、切片転写シートを作製した。

実施例１４〜２１の切片転写シートについて、上記実施例と同様にして、薄切り評価実験、スライドガラスへの転写実験を行った。結果を表３に示す。

実施例１９はフィルムの剛軟度が小さく、切片・転写性に劣り、実施例１８，２０，２１の薄切り評価は良好であったが、フィルムが厚いため、スライドガラスへの転写性に劣る。これらの結果より、第２基材層１６に用いる素材としては、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムとポリプロピレン（ＰＰ）フィルムが最適であり、剛軟度は３〜１０ｍｍの範囲が好ましいことがわかった。

このように、実施例の切片転写シートを用いることによって、切片自動作製装置により、試料を含む試料ブロックをシートに接着した状態で、試料ブロックを薄切りして切片を作製し、この切片を基材に転写することが可能となった。

１ 切片転写シート、１０ 第１基材層、１２ 第１粘着層、１４ 第１剥離層、１６ 第２基材層、１８ 第２粘着層、２０ 第２剥離層、２２ 開口部、２４ 試料ブロック、２６ 包埋切片、２８ 基材、３０ ブレード、３２ 試料、３４ 試料切片、３６ 切片標本、３８ 切り込み部、５０ 貼合材。

Claims (16)

1. 溶液浸透性材料を含んで構成された第１基材層と、
   前記第１基材層の一方の面に形成された第１粘着層と、
   前記第１粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成され、開口部を有する第１剥離層と、
   を少なくとも有し、
   前記開口部の大きさに対応して、前記第１粘着層および前記第１基材層の厚み方向に貫通する切り込み部が形成されていることを特徴とする切片転写シート。
2. 請求項１に記載の切片転写シートであって、
   前記第１粘着層の粘着力は、０．８〜３Ｎ／ｃｍの範囲であることを特徴とする切片転写シート。
3. 請求項１または２に記載の切片転写シートであって、
   前記第１基材層の剛軟度は、２〜１２ｍｍの範囲であることを特徴とする切片転写シート。
4. 請求項１〜３のいずれか１項に記載の切片転写シートであって、
   前記溶液浸透性材料は、不織布であることを特徴とする切片転写シート。
5. 請求項１〜４のいずれか１項に記載の切片転写シートであって、
   前記第１粘着層は、金属イオンと、前記金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤とを含むことを特徴とする切片転写シート。
6. 請求項１〜５のいずれか１項に記載の切片転写シートであって、
   前記第１基材層の前記第１粘着層と反対側の面に形成された第２粘着層と、
   前記第２粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成された第２基材層と、
   をさらに有することを特徴とする切片転写シート。
7. 請求項１〜６のいずれか１項に記載の切片転写シートであって、
   第２基材層の剛軟度は、３〜１０ｍｍの範囲であることを特徴とする切片転写シート。
8. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の切片転写シートであって、
   前記第１剥離層の前記第１粘着層と反対側の面に形成され、前記開口部を覆う第２剥離層をさらに有することを特徴とする切片転写シート。
9. 溶液浸透性材料を含んで構成された第１基材層と、前記第１基材層の一方の面に形成された第１粘着層と、前記第１粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成され、開口部を有する第１剥離層と、を少なくとも有し、前記開口部の大きさに対応して、前記第１粘着層および前記第１基材層の厚み方向に貫通する切り込み部が形成されている切片転写シートにおける、前記開口部に露出した前記第１粘着層によって、試料を含む試料ブロックを接着した後に、前記試料ブロックを薄切りして切片を作製する薄切り工程と、
   前記切片に基材を付着する基材付着工程と、
   前記第１剥離層を剥離することによって、前記第１粘着層および前記第１基材層を前記切り込み部で切断する第１剥離層剥離工程と、
   前記第１粘着層を溶解させる溶解液を、前記第１基材層に含浸させて前記第１粘着層を溶解して前記第１基材層を剥離し、前記切片が前記基材に転写された切片標本を得る第１基材層剥離工程と、
   を含むことを特徴とする切片標本の作製方法。
10. 請求項９に記載の切片標本の作製方法であって、
    前記第１粘着層の粘着力は、０．８〜３Ｎ／ｃｍの範囲であることを特徴とする切片標本の作製方法。
11. 請求項９または１０に記載の切片標本の作製方法であって、
    前記第１基材層の剛軟度は、２〜１２ｍｍの範囲であることを特徴とする切片標本の作製方法。
12. 請求項９〜１１のいずれか１項に記載の切片標本の作製方法であって、
    前記溶液浸透性材料は、不織布であることを特徴とする切片標本の作製方法。
13. 請求項９〜１２のいずれか１項に記載の切片標本の作製方法であって、
    前記第１粘着層は、金属イオンと、前記金属イオンと架橋可能な樹脂粘着剤とを含むことを特徴とする切片標本の作製方法。
14. 請求項９〜１３のいずれか１項に記載の切片標本の作製方法であって、
    前記切片転写シートは、
    前記第１基材層の前記第１粘着層と反対側の面に形成された第２粘着層と、
    前記第２粘着層の前記第１基材層と反対側の面に形成された第２基材層と、
    をさらに有することを特徴とする切片標本の作製方法。
15. 請求項９〜１４のいずれか１項に記載の切片標本の作製方法であって、
    第２基材層の剛軟度は、３〜１０ｍｍの範囲であることを特徴とする切片標本の作製方法。
16. 請求項９〜１５のいずれか１項に記載の切片標本の作製方法であって、
    前記切片転写シートは、
    前記第１剥離層の前記第１粘着層と反対側の面に形成され、前記開口部を覆う第２剥離層をさらに有することを特徴とする切片標本の作製方法。

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