JP2017527824A - 表面多孔性粒子（ｓｐｐ）上に結合した、高効率で、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ｈｉｌｉｃ）基材 - Google Patents
表面多孔性粒子（ｓｐｐ）上に結合した、高効率で、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ｈｉｌｉｃ）基材 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017527824A JP2017527824A JP2017523196A JP2017523196A JP2017527824A JP 2017527824 A JP2017527824 A JP 2017527824A JP 2017523196 A JP2017523196 A JP 2017523196A JP 2017523196 A JP2017523196 A JP 2017523196A JP 2017527824 A JP2017527824 A JP 2017527824A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hilic
- spp
- phase
- ultrastable
- interaction chromatography
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 244
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 102
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 50
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 48
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 38
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 108010053950 Teicoplanin Proteins 0.000 claims description 15
- DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N chembl2367892 Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(O)C=C(C=4)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CC=4C=C(Cl)C(O5)=CC=4)C(=O)N3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1Cl)=CC=C1OC1=C(O[C@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O3)NC(C)=O)C5=CC2=C1 DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N 0.000 claims description 15
- -1 cyclic oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229960001608 teicoplanin Drugs 0.000 claims description 15
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 claims description 14
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 claims description 14
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 claims description 12
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 claims description 12
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 10
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 8
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 7
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 6
- 150000001924 cycloalkanes Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 6
- VUOPFFVAZTUEGW-SRXUPNLNSA-N 32p08cbb99 Chemical compound C=1C([C@@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C3=CC=C(C=C3)OC=3C=C4C=C(C=3O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]5[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O5)O)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@H]3[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CO3)O)OC3=CC=C(C=C3)[C@@H](O)[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C=5C=C(C(=C(O)C=5)C)OC=5C(O)=CC=C(C=5)[C@@H](N)C(=O)N3)C(=O)N[C@H]4C(=O)N2)O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@H](N)C2)C(=O)N[C@@H](C2=CC(O)=C3)C(=O)OC)=CC=C(O)C=1C2=C3O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O VUOPFFVAZTUEGW-SRXUPNLNSA-N 0.000 claims description 5
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 claims description 5
- OOBFYEMEQCZLJL-IIWQOWOFSA-O boromycin Chemical compound C([C@@H]1C[C@@H]([C@H](O1)C)OC(=O)[C@@H]1O2)CC[C@@H](O)C(C)(C)[C@@H](O3)CC[C@@H](C)[C@]3(O3)[C@H]4O[B-]32O[C@@]1(O1)[C@H](C)CC[C@H]1C(C)(C)[C@@H](O)CC\C=C/C[C@@H]([C@@H](C)OC(=O)[C@H]([NH3+])C(C)C)OC4=O OOBFYEMEQCZLJL-IIWQOWOFSA-O 0.000 claims description 5
- 108010062729 ristocetin A Proteins 0.000 claims description 5
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 claims description 5
- 108700026106 teicoplanin aglycone Proteins 0.000 claims description 5
- 229950002309 teicoplanin aglycone Drugs 0.000 claims description 5
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 4
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PXPNHLLQELPDFI-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphanium propane-1-sulfonate Chemical compound CCCS([O-])(=O)=O.[PH2+](c1ccccc1)c1ccccc1 PXPNHLLQELPDFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 239000007771 core particle Substances 0.000 abstract description 2
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 120
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 36
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 32
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 29
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 14
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 13
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 12
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229940114124 ferulic acid Drugs 0.000 description 11
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M (E)-Ferulic acid Natural products COC1=CC(\C=C\C([O-])=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M 0.000 description 10
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 description 10
- KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N ferulic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 description 10
- QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N trans-isoferulic acid Natural products COC1=CC=C(C=CC(O)=O)C=C1O QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 9
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 8
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 8
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 7
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 7
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 6
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 6
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 5
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical class O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 5
- FRGPKMWIYVTFIQ-UHFFFAOYSA-N triethoxy(3-isocyanatopropyl)silane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN=C=O FRGPKMWIYVTFIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 5
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 4
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Substances C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- BPSIOYPQMFLKFR-UHFFFAOYSA-N trimethoxy-[3-(oxiran-2-ylmethoxy)propyl]silane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOCC1CO1 BPSIOYPQMFLKFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 4
- BYHDDXPKOZIZRV-UHFFFAOYSA-N 5-phenylpentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1=CC=CC=C1 BYHDDXPKOZIZRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 238000002507 cathodic stripping potentiometry Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940065721 systemic for obstructive airway disease xanthines Drugs 0.000 description 3
- TZZGHGKTHXIOMN-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilyl-n-(3-trimethoxysilylpropyl)propan-1-amine Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCNCCC[Si](OC)(OC)OC TZZGHGKTHXIOMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 2
- 101150101537 Olah gene Proteins 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000010420 shell particle Substances 0.000 description 2
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LMCLOFYKMUMICC-MCDZGGTQSA-N (2R,3R,4S,5R)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol 1H-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1.C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O LMCLOFYKMUMICC-MCDZGGTQSA-N 0.000 description 1
- FSSPGSAQUIYDCN-UHFFFAOYSA-N 1,3-Propane sultone Chemical compound O=S1(=O)CCCO1 FSSPGSAQUIYDCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- QSJFDOVQWZVUQG-XLPZGREQSA-N 3',5'-cyclic dTMP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@H]2C1 QSJFDOVQWZVUQG-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- DHXNZYCXMFBMHE-UHFFFAOYSA-N 3-bromopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCBr DHXNZYCXMFBMHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 101100206458 Mus musculus Them4 gene Proteins 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- QTUOYBXDUHAXBB-UHFFFAOYSA-N diphosphanium sulfate Chemical compound [PH4+].[PH4+].[O-]S([O-])(=O)=O QTUOYBXDUHAXBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- NLWBJPPMPLPZIE-UHFFFAOYSA-N methyl 4-(bromomethyl)benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(CBr)C=C1 NLWBJPPMPLPZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- FCLYZQXPJKJTDR-UHFFFAOYSA-N potassium;diphenylphosphanide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P([K])C1=CC=CC=C1 FCLYZQXPJKJTDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000008053 sultones Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003558 thiocarbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/30—Partition chromatography
- B01D15/305—Hydrophilic interaction chromatography [HILIC]
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
- B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
- B01J20/103—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate comprising silica
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
- B01J20/24—Naturally occurring macromolecular compounds, e.g. humic acids or their derivatives
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
- B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
- B01J20/28057—Surface area, e.g. B.E.T specific surface area
- B01J20/28061—Surface area, e.g. B.E.T specific surface area being in the range 100-500 m2/g
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
- B01J20/28078—Pore diameter
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
- B01J20/28078—Pore diameter
- B01J20/28083—Pore diameter being in the range 2-50 nm, i.e. mesopores
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/282—Porous sorbents
- B01J20/283—Porous sorbents based on silica
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
- B01J20/288—Polar phases
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
- B01J20/289—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers bonded via a spacer
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/29—Chiral phases
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
- B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
- B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
- B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
- B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
- B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
- B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
- B01J20/3263—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure containing at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. an heterocyclic or heteroaromatic structure
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3285—Coating or impregnation layers comprising different type of functional groups or interactions, e.g. different ligands in various parts of the sorbent, mixed mode, dual zone, bimodal, multimodal, ionic or hydrophobic, cationic or anionic, hydrophilic or hydrophobic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3291—Characterised by the shape of the carrier, the coating or the obtained coated product
- B01J20/3293—Coatings on a core, the core being particle or fiber shaped, e.g. encapsulated particles, coated fibers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/40—Aspects relating to the composition of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/46—Materials comprising a mixture of inorganic and organic materials
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本発明は、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）に関し、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）はコアシェル、多孔性シェル、またはフューズドコア粒子とも呼ばれ、ＨＰＬＣカラムの製造に用いられる最新の支持体である。全多孔性粒子（ＦＰＰ）上の同様の固定相に比べて、より高い効率およびより短い保持時間を有する、加水分解に安定な、高選択性表面多孔性粒子（ＳＰＰ）親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）固定相が提供される。
Description
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１４年７月１７日に出願された、米国仮特許出願第６２／０２５，９９０号に対する優先権の利益を主張し、その内容が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１４年７月１７日に出願された、米国仮特許出願第６２／０２５，９９０号に対する優先権の利益を主張し、その内容が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）に関し、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）はコアシェル、多孔性シェル、またはフューズドコア粒子とも呼ばれ、ＨＰＬＣカラムの製造に用いられる最新の支持体である。
歴史的に見て、シェル粒子の概念は、１９６０年代の間に、Ｈｏｒｖａｔｈらによって最初に提案され、シェル粒子は、巨大な生体分子を分析するためのイオン交換材料として開発された。例えば、Ｊ．Ｊ．Ｄｅｓｔｅｆａｎｏ、Ｔ．Ｊ．ＬａｎｇｌｏｉｓおよびＪ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｓｃｉ．４６（２００８）２５４、Ｘ．Ｌ．Ｗａｎｇ、Ｗ．Ｅ．ＢａｒｂｅｒおよびＷ．Ｊ．Ｌｏｎｇ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２２８（２０１２）７２、Ｆ．ＧｒｉｔｔｉおよびＧ．Ｇｕｉｏｃｈｏｎ、ＬＣＧＣ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ．７（２０１２）５８６、ならびにＣ．Ｇ．Ｈｏｒｖａｔｈ、Ｂ．Ａ．ＰｒｅｉｓｓおよびＳ．Ｒ．Ｌｉｐｓｋｙ、Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．３９（１９６７）１４２２（これらの各内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
ＳＰＰ技術は、Ｋｉｒｋｌａｎｄによって発展し、Ｋｉｒｋｌａｎｄは、１９７０年代に５０μｍの粒子を、１９９０年代に５μｍの粒子を調製した。例えば、Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ、Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．４１（１９６９）２１８、Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ、Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．４３（１９７１）Ａ３６、およびＪ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ、Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．６４（１９９２）１２３９（これらの各内容は、参照により組み込まれる）を参照のこと。
高品質な全多孔性粒子（ＦＰＰ）の製造が同時に進展したことによって、ＳＰＰの製造、適用、および使用は抑制された。例えば、Ｂ．Ｃｈａｕｖｅ、Ｄ．Ｇｕｉｌｌａｒｍｅ、Ｐ．Ｃｌｅｏｎ、およびＪ．Ｌ．Ｖｅｕｔｈｅｙ、Ｊ Ｓｅｐ Ｓｃｉ．３３（２０１０）７５２（その内容は、参照により組み込まれる）を参照のこと。直径３μｍ（１９９０年代）、および２μｍ未満（２００４年代）のＦＰＰが、高圧（例えば、１０００ｂａｒ）運転が可能な液体クロマトグラフと共に主流となった。しかしながら、近時の進展により、ＳＰＰ技術はＨＰＬＣ充填剤の最先端となった。例えば、ＳＰＰサイズが、１．７、２．６または２．７μｍ、多孔性シェル厚が、それぞれ０．２３、０．３５および０．５μｍであるカラムが、今日では入手可能である。例えば、Ｓ．Ｆｅｋｅｔｅ、Ｅ．ＯｌａｈおよびＪ．Ｆｅｋｅｔｅ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２２８（２０１２）５７（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
この時代のＳＰＰは、多孔層に包まれた固形内部コアから構成される形態によって、クロマトグラフ性能を著しく改善した。例えば、図１を参照のこと。ＳＰＰは、バンド拡散に対する全ての寄与を減少させることができ、このような寄与には縦方向拡散、渦分散、および固定相物質移動の寄与に基づくものが含まれる。固形コアが存在することにより、分析物の移動行路が短くなり、物質移動が乏しいことによりバンド拡散が減少し、それによって著しく効率を損なうことなく高流速で分析を行うことが可能となる。さらに、ＳＰＰは一般に非常に狭い粒度分布で生産され、渦拡散によるバンド拡散が低減される。表面多孔性粒子が充填されたカラムは、方法の頑健性を保ちつつ、効率を改善することによって、ハイスループットな分離に使用されてきた。例えば、Ａ．Ｐｅｒｉａｔ、Ｉ．Ｋｏｈｌｅｒ、Ｊ．Ｌ．ＶｅｕｔｈｅｙおよびＤ．Ｇｕｉｌｌａｒｍｅ、ＬＣＧＣ Ｅｕｒｏｐｅ．５（２０１３）１７（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
近年、ＳＰＰによるＨＰＬＣカラムに関する論文数は増加している。例えば、Ｊ．Ｒｕｔａ、Ｄ．Ｚｕｒｌｉｎｏ、Ｃ．Ｇｒｉｖｅｌ、Ｓ．Ｈｅｉｎｉｓｃｈ、Ｊ．Ｌ．ＶｅｕｔｈｅｙおよびＤ．Ｇｕｉｌｌａｒｍｅ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．１２２８（２０１２）２２１、Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ、Ｓ．Ａ．Ｓｃｈｕｓｔｅｒ、Ｗ．Ｌ．ＪｏｈｎｓｏｎおよびＢ．Ｅ．Ｂｏｙｅｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ．３（２０１３）３０３、Ｄ．Ｖ．ＭｃＣａｌｌｅｙ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１１９３（２００８）８５、Ｅ．Ｏｌａｈ、Ｓ．Ｆｅｋｅｔｅ、Ｊ．ＦｅｋｅｔｅおよびＫ．Ｇａｎｚｌｅｒ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２１７（２０１０）３６４２、Ｆ．Ｇｒｉｔｔｉ、Ａ．Ｄ．Ｐｅｒｅｉｒａ、Ｐ．ＳａｎｄｒａおよびＧ．Ｇｕｉｏｃｈｏｎ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２１７（２０１０）６８３、ならびにＦ．Ｇｒｉｔｔｉ、Ｉ．Ｌｅｏｎａｒｄｉｓ、Ｄ．Ｓｈｏｃｋ、Ｐ．Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ、Ａ．ＳｈａｌｌｉｋｅｒおよびＧ．Ｇｕｉｏｃｈｏｎ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．１２１７（２０１０）１５８９（これらの各内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
多くの、ないし比較的少数のＳＰＰ ＨＩＬＩＣカラムが種々の会社から購入可能であるが、上市されたＨＩＬＩＣ充填材の大多数は単なる非修飾シリカである。例えば、Ｆｅｋｅｔｅ、Ｅ．ＯｌａｈおよびＪ．Ｆｅｋｅｔｅ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２２８（２０１２）５７を参照のこと。シリカゲルは、いつでも許容できるＨＩＬＩＣ分離をもたらすわけではない。例えば、Ｈ．Ｘ．Ｑｉｕ、Ｌ．Ｌｏｕｋｏｔｋｏｖａ、Ｐ．Ｓｕｎ、Ｅ．Ｔｅｓａｒｏｖａ、Ｚ．ＢｏｓａｋｏｖａおよびＤ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２１８（２０１１）２７０、ならびにＨ．Ｑｉｕら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２１８（２０１１）８０７５−８０８２（これらの各内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
さらに、シリカゲルは、ＨＩＬＩＣ分離に必要な、水を含有する移動相と共に用いた場合、安定ではない。この不安定性は、基礎となるシリカが緩やかに溶解すること、および分離した分析物の保持が絶えず変化することによって示される（実施例の表１を参照のこと）。これは、市販用のＨＩＬＩＣ固定相としては全く容認できるものではない。さらに、この傾向は、ＳＰＰについてはより重大である。よって、より新しく、より有望な、ＳＰＰ支持体上のＨＩＬＩＣ分離作用物質を製造し、評価することは、適時かつ重要なことである（例えば、図１〜３を参照のこと）。これは、示すように、表面を溶解から保護し、かつ、シリカのようなむき出しの支持体、または他の保護されていないもしくは保護の少ない支持体に比べて、より広いＨＩＬＩＣ選択性およびより高い効率を有する、超安定な、共有結合したＨＩＬＩＣ相を使用することによって実現される。
本出願において、ネイティブの、および誘導体化した、シクロフルクタン、シクロデキストリン、大環状抗生物質、および両性イオンに基づくＨＩＬＩＣ固定相を、支持体としてのＳＰＰに結合した場合の選択性および安定性について評価した（図１〜３を参照のこと）。カラムを順相（ＮＰ）モードにおいても試験し、水系移動相および非水系移動相の性能に対する影響も評価した。安定性、効率、分析時間、および分離度に関する結果を評価し、ＳＰＰに基づく新たなＨＩＬＩＣカラムの明らかな優位性を実証した。
さらに、このようなＨＩＬＩＣ結合ＳＰＰは、全粒子径の大きさが、約０．５〜約２０μｍ、好ましくは約１．３〜約１０μｍ、より好ましくは約１．７〜約５．０μｍの範囲のＳＰＰで製造することができる。本発明によるＳＰＰ−ＣＳＰは、全粒子径が、例えば、約０．５μｍ、約０．６μｍ、約０．７μｍ、約０．８μｍ、約０．９μｍ、約１．０μｍ、約１．１μｍ、約１．２μｍ、約１．３μｍ、約１．４μｍなどのＳＰＰで製造することができる。いくつかの粒子、例えば約１．７、約２．７、および約４．０μｍの粒子の走査型電子顕微鏡写真を図３に示す。
ネイティブシクロフルクタン−６（ＣＦ６）は、ＨＩＬＩＣモードでの極性化合物の分離における強力な選択剤であると報告されている。ＦＰＰに化学結合したＣＦ６に基づくカラムは、市販（ＦＲＵＬＩＣ−Ｎ）されており、市販の一般的なカラムよりも、いくつかの化合物、例えば、核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、キサンチン、βブロッカー、および炭水化物などの分離に関して優れていることが実証されている。
同様に、シクロデキストリンおよび誘導体化シクロデキストリン（ＣＤ）によって、優秀なＨＩＬＩＣ相が作製されることが示されている。挙げられたＨＩＬＩＣ選択剤のその他２種は、両性イオン型（例えば、カチオン部分とアニオン部分の両方を含むもの）、およびバンコマイシンのような大環状抗生物質型である。例えば、Ｒ．Ｊ．Ｓｏｕｋｕｐ−Ｈｅｉｎら、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ６６（２００７）４６１、および米国特許第４，５３９，３９９号（これらの各内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。表１に、本出願で示されるＨＩＬＩＣ選択剤のクラスの一覧を示す。
ＨＩＬＩＣ選択剤の各クラスに関する代表的／例示的な構造を図４〜８に示す。
ＨＩＬＩＣ選択剤の各クラスに関する代表的／例示的な構造を図４〜８に示す。
本発明は、第１に、加水分解に安定な、共有結合した、高選択性ＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相の調製を提供する。さらに、これらのＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相は、全多孔性粒子（ＦＦＰ）上の同様の固定相に比べて、より高い効率およびより短い保持時間を有する。
無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、無水トルエン、無水ピリジン、３−（トリエトキシシリル）プロピルイソシアネート、酢酸アンモニウム（ＮＨ４ＯＡｃ）、トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＴＦＡ）、ならびに本研究で使用した全ての分析物（５−フェニル吉草酸、フェルラ酸、ピリドキシン、Ｌ−アスコルビン酸、ウラシル、アデノシン、シトシン、チミジン３’：５’環状モノホスフェート（ｃＴＭＰ）、アデノシン２’：３’環状モノホスフェート（ｃＡＭＰ）、グアノシン２’：３’環状モノホスフェート（ｃＧＭＰ）、およびシチジン２’：３’環状モノホスフェート（ｃＣＭＰ）は、シグマアルドリッチ社（ミルウォーキー、ＷＩ）から購入した。１，２−ビス（トリクロロシリル）エタンは、Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。１，３−ビス（クロロジメチルシリル））プロパンおよびビス（３−トリメトキシシリルプロピル）アミンは、Ｇｅｌｅｓｔ社（モリスビル、ＰＡ）から入手した。ＣＦ６、シクロデキストリン、および大環状糖ペプチドは、ＡＺＹＰ，ＬＬＣ（アーリントン、ＴＸ）から供給された。クロマトグラフ分離に使用した、アセトニトリル（ＡＣＮ）、ヘプタン（Ｈｅｐ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、およびエタノール（ＥｔＯＨ）は、ＥＭＤ（ギブスタウン、ＮＪ）から入手した。水は、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水精製システム（ミリポア社、ビルリカ、ＭＡ）によって精製した。
全てのクロマトグラフ分離は、クォータナリポンプ、オートサンプラー、および多波長紫外可視検出器を備えたアジレントＨＰＬＣシリーズ１２６０システム（アジレント・テクノロジー社、サンタクララ、ＣＡ）で実施した。データの取得および解析には、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェア・バージョンＲｅｖ．Ｂ．０３．０２［３４１］を用いた。注入量は、全ての分析で０．５であった。温度は、３０℃に維持した。ＨＩＬＩＣモードで用いた移動相（ＭＰ）の組成は、環状ヌクレオチドの場合を除き、ＡＣＮ ７５〜９５％および２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ ５〜２５％であり、環状ヌクレオチドのための移動相（ＭＰ）の組成は、ＡＣＮ／１００ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（７０／３０、ｖ／ｖ）であった。順相で行う分離には、種々の比率のＨｅｐ／ＩＰＡおよびＨｅｐ／ＥｔＯＨを用い、フェルラ酸の分析については、ＴＦＡ ０．１％をＥｔＯＨ相に加えた。
ネイティブＣＦ６を、Ｈ．Ｘ．Ｑｉｕ、Ｌ．Ｌｏｕｋｏｔｋｏｖａ、Ｐ．Ｓｕｎ、Ｅ．Ｔｅｓａｒｏｖａ、Ｚ．Ｂｏｓａｋｏｖａ、およびＤ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．１２１８（２０１１）２７０の開示に従い、シリカゲルに化学結合した。シクロデキストリンに基づくＣＳＰは、米国特許第４，５３９，３９９号に開示されているように、Ｄ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇに従って合成した。大環状抗生物質ＣＳＰは、米国特許第５，６２６，７５７号（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、Ｄ．Ｗ． Ａｒｍｓｔｒｏｎｇに従って合成した。両性イオン性固定相は、Ｑｉｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ １２１８（２０１１）８０７５〜８０８２の開示に従って合成した。
以下の実施例は、種々の安定な、結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）に基づくＨＩＬＩＣ固定相を調製するための合成である。
シクロフルクタンに基づく、安定な、結合したＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相の調製
シクロフルクタンは、１８〜２４個のヒドロキシル基を有する環状オリゴ糖である。これらのヒドロキシル基は、シクロフルクタン（またはシクロフルクタン誘導体）をＳＰＰシリカに共有結合させるための、反応性官能基として使用することができる。シクロフルクタンは、ネイティブ形態で、または誘導体化形態で、ＨＩＬＩＣ選択剤として使用することができる。シクロフルクタン分子の誘導体化は、ＳＰＰシリカ上へのシクロフルクタン分子の固定化の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。誘導体化基は、典型的には、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、またはヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／もしくは環状アルカンであるが、これらに限定されず、前記誘導体化基は、数々の化学結合（例えば、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、および尿素結合）によってシクロフルクタンに結合させる。
シクロフルクタンは、１８〜２４個のヒドロキシル基を有する環状オリゴ糖である。これらのヒドロキシル基は、シクロフルクタン（またはシクロフルクタン誘導体）をＳＰＰシリカに共有結合させるための、反応性官能基として使用することができる。シクロフルクタンは、ネイティブ形態で、または誘導体化形態で、ＨＩＬＩＣ選択剤として使用することができる。シクロフルクタン分子の誘導体化は、ＳＰＰシリカ上へのシクロフルクタン分子の固定化の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。誘導体化基は、典型的には、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、またはヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／もしくは環状アルカンであるが、これらに限定されず、前記誘導体化基は、数々の化学結合（例えば、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、および尿素結合）によってシクロフルクタンに結合させる。
ネイティブおよび誘導体化シクロフルクタンは、同様にして、ＳＰＰシリカに結合させる。まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロフルクタン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（１２ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、シクロフルクタン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したシクロフルクタンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）およびＴＥＡ（１０ｍＬ）中に再懸濁した。最後に、シクロフルクタン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）中に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したシクロフルクタンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
第３の結合戦略により、シクロフルクタンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロフルクタン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに８ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
シクロデキストリンに基づく、安定な、結合したＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相の調製
シクロデキストリンは、１８〜２４個のヒドロキシル基を有する環状オリゴ糖である。これらのヒドロキシル基は、シクロデキストリン（またはシクロデキストリン誘導体）をＳＰＰシリカに共有結合させるための、反応性官能基として使用することができる。シクロデキストリンは、ネイティブ形態で、または誘導体化形態で、ＨＩＬＩＣ選択剤として使用することができる。シクロデキストリン分子の誘導体化は、ＳＰＰシリカ上へのシクロデキストリン分子の固定化の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。上述のように、誘導体化基は、典型的には、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、またはヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／もしくは環状アルカンであるが、これらに限定されず、上述のように、前記誘導体化基は、数々の化学結合（例えば、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、および尿素結合）によってシクロデキストリンに結合させる。
シクロデキストリンは、１８〜２４個のヒドロキシル基を有する環状オリゴ糖である。これらのヒドロキシル基は、シクロデキストリン（またはシクロデキストリン誘導体）をＳＰＰシリカに共有結合させるための、反応性官能基として使用することができる。シクロデキストリンは、ネイティブ形態で、または誘導体化形態で、ＨＩＬＩＣ選択剤として使用することができる。シクロデキストリン分子の誘導体化は、ＳＰＰシリカ上へのシクロデキストリン分子の固定化の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。上述のように、誘導体化基は、典型的には、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、またはヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／もしくは環状アルカンであるが、これらに限定されず、上述のように、前記誘導体化基は、数々の化学結合（例えば、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、および尿素結合）によってシクロデキストリンに結合させる。
ネイティブおよび誘導体化シクロデキストリンは、同様にして、ＳＰＰシリカに結合させる。まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロデキストリン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（１２ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、シクロデキストリン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したシクロデキストリンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）およびＴＥＡ（１０ｍＬ）中に再懸濁した。最後に、シクロデキストリン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）中に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したシクロデキストリンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
第３の結合戦略により、シクロデキストリンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロデキストリン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに８ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
糖ペプチドに基づく、安定な、結合したＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相の調製
大環状糖ペプチド（例えば、テイコプラニン、ボロマイシン、リストセチンＡ、ダルババシン、およびバンコマイシン）は、糖ペプチド（または糖ペプチドアナログ、例えばテイコプラニンアグリコン）をＳＰＰシリカに共有結合させるために使用することができる、アミン官能基およびヒドロキシル官能基を有している。大環状糖ペプチドをＳＰＰシリカ上に化学的に固定化するために使用することができる、数々の結合化学反応が存在する（例えば、エーテル、カルバメート、チオエーテル、チオカルバメート、エステル、トリアゾール、および尿素）。下記に、ＨＩＬＩＣ選択剤のモデルとしてテイコプラニンを用いた、結合戦略の例を示す。
大環状糖ペプチド（例えば、テイコプラニン、ボロマイシン、リストセチンＡ、ダルババシン、およびバンコマイシン）は、糖ペプチド（または糖ペプチドアナログ、例えばテイコプラニンアグリコン）をＳＰＰシリカに共有結合させるために使用することができる、アミン官能基およびヒドロキシル官能基を有している。大環状糖ペプチドをＳＰＰシリカ上に化学的に固定化するために使用することができる、数々の結合化学反応が存在する（例えば、エーテル、カルバメート、チオエーテル、チオカルバメート、エステル、トリアゾール、および尿素）。下記に、ＨＩＬＩＣ選択剤のモデルとしてテイコプラニンを用いた、結合戦略の例を示す。
まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、テイコプラニン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解し、ＴＥＡ（３ｍＬ）を加えた。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（１２ｍｍｏｌ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、テイコプラニン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したテイコプラニンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）中に再懸濁し、ＴＥＡ（１０ｍＬ）を加えた。最後に、テイコプラニン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）中に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したテイコプラニンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
第３の結合戦略により、テイコプラニンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、テイコプラニン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに８ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
イオン型の、安定な、結合したＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相の調製
荷電型またはイオン型の、安定な、結合したＨＩＬＩＣ固定相は、数々の合成技術および結合技術によって作製することができる。ここで、多点結合によってＳＰＰシリカに結合した、アニオン性シクロフルクタンに基づくＨＩＬＩＣ固定相を製造するための、誘導体化および結合戦略の例を示す。示されるＨＩＬＩＣ選択剤の第１のモデルは、安息香酸官能化シクロフルクタン６である。実施例は、数々のイオン性ＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を製造するために使用することができる技術を示す。
荷電型またはイオン型の、安定な、結合したＨＩＬＩＣ固定相は、数々の合成技術および結合技術によって作製することができる。ここで、多点結合によってＳＰＰシリカに結合した、アニオン性シクロフルクタンに基づくＨＩＬＩＣ固定相を製造するための、誘導体化および結合戦略の例を示す。示されるＨＩＬＩＣ選択剤の第１のモデルは、安息香酸官能化シクロフルクタン６である。実施例は、数々のイオン性ＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を製造するために使用することができる技術を示す。
安息香酸誘導体化シクロフルクタン６を製造し、その後、以下の結合方法のいずれかによってＳＰＰシリカに結合させた。まず、７５℃で２００ｍＬの無水ＤＭＦに溶解しているシクロフルクタン６（４．２ｇ）に、ＮａＨ（２．１２ｇ）を加えた。懸濁液を、７５℃で４５分間撹拌した。次いで、メチル４−（ブロモメチル）ベンゾエート（２０ｇ）を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、溶液をシクロフルクタン−ＮａＨ懸濁液に注意深く加え、反応液を７５℃に２０時間加熱し、その後、反応液を冷却し、あらゆる固形物をろ過した。溶媒をろ液から除去し、黄色がかった粗製物を得た。次いで、粗製エステル化産物を、水、メタノール、および水酸化ナトリウムを用いて、カルボン酸形態に加水分解した。その後、誘導体化シクロフルクタンを、ＳＰＰシリカに結合させた。まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロフルクタン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（１２ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、シクロフルクタン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したシクロフルクタンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）およびＴＥＡ（１０ｍＬ）中に再懸濁した。最後に、シクロフルクタン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）中に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したシクロフルクタンＨＩＬＩＣ相が生じる。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
第３の結合戦略により、シクロフルクタンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロフルクタン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに８ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
両性イオン型の、安定な、結合したＳＰＰ ＨＩＬＩＣ固定相の調製
両性イオン性ＨＩＬＩＣ相は、ＨＩＬＩＣリガンドを浸出から保護する何らかの措置を講じない限り、加水分解に対して不安定である。そのためのいくつかの手法が、（前述したように）存在する。本実施例において、硫酸ホスホニウム両性イオン（３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスホニウムプロピルスルホネート）は、バイポーダルシランを使って、ＳＰＰシリカに、安定的な形態で化学結合させる。具体的には、空気の入らない条件下で、２５．８ｍＬの０．５Ｍカリウムジフェニルホスフィドを５００ｍＬ丸底フラスコ中に移した。次に、アルゴン下で、前記ホスフィドの撹拌を行いながら、１２０ｍＬの無水ＴＨＦを加えた。１０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した２．３５ｇのプロパンスルトンをゆっくり加えることによって、前記ホスフィドを両性イオンに変換した。前記スルトンは、３．３分間、一滴ずつ加えた。得られた白色の懸濁液を、（両性イオンをさらに沈殿させるために）冷凍庫中で保管した。白色の懸濁液を、アルゴン下で、ガラスフリット漏斗でろ過し、ジエチルエーテルで洗浄した。
両性イオン性ＨＩＬＩＣ相は、ＨＩＬＩＣリガンドを浸出から保護する何らかの措置を講じない限り、加水分解に対して不安定である。そのためのいくつかの手法が、（前述したように）存在する。本実施例において、硫酸ホスホニウム両性イオン（３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスホニウムプロピルスルホネート）は、バイポーダルシランを使って、ＳＰＰシリカに、安定的な形態で化学結合させる。具体的には、空気の入らない条件下で、２５．８ｍＬの０．５Ｍカリウムジフェニルホスフィドを５００ｍＬ丸底フラスコ中に移した。次に、アルゴン下で、前記ホスフィドの撹拌を行いながら、１２０ｍＬの無水ＴＨＦを加えた。１０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した２．３５ｇのプロパンスルトンをゆっくり加えることによって、前記ホスフィドを両性イオンに変換した。前記スルトンは、３．３分間、一滴ずつ加えた。得られた白色の懸濁液を、（両性イオンをさらに沈殿させるために）冷凍庫中で保管した。白色の懸濁液を、アルゴン下で、ガラスフリット漏斗でろ過し、ジエチルエーテルで洗浄した。
得られた両性イオン（５．３ｇ）を、５００ｍＬフラスコに移し、６０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。固形物が完全に溶解してから、２．３ｇの３−ブロモプロピオン酸（１０ｍＬ ＤＭＦ中）を加え、この混合物を１００℃で終夜加熱した。反応後、ＫＢｒをろ過し、得られた粘性液体を、８０℃で回転蒸発させた。褐色の液体を熱ＴＨＦ、ＡＣＮ、およびヘプタンで洗浄した。真空下で終夜乾燥させた後、３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスフィノプロピルスルホネートの白色結晶を得た。次工程において、無水ジクロロメタン中で、５．２４ｇの粗３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスフィノプロピルスルホネートを、１．５５ｇの塩化オキサリルと、砕氷上で４時間反応させた。溶媒を、室温で、真空除去した。アシル化産物を、無水ＤＭＦ中で、４．１ｇのビス（３−トリメトキシシリルプロピル）アミンと直ちに混合した。ヒューニッヒ塩基を加えてＨＣｌを吸収した。得られた修飾シランを、ディーン・スターク・トラップを用いて共沸蒸留によってあらかじめ乾燥してあるトルエン中で、７ｇのＳＰＰシリカと共に還流した。得られたＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相を乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
ＨＩＬＩＣ相を安定化させるための典型的な結合戦略を示す２つの概略図を、図９および図１０に示す。これらは、シリカ表面を保護するために十分な立体容積を有するＨＩＬＩＣ選択剤の使用と合わせて、安定性が向上したＨＩＬＩＣ固定相を提供するために極めて重要である。
提示した安定化技術による安定性特性を表２に示す。
図１１〜１３は、出願人らの「安定性戦略」が成功していることを表す、追加の代表的なデータを示す。図１１は、むき出しのＳＰＰシリカの保持時間ドリフトを示す。図１２は、非従来型シランを用いた、加水分解に安定な、高効率の、結合した両性イオン性ＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相の形成の例を示す。図１３は、多点結合を用いた、加水分解に安定な、高効率の、結合したイオン性誘導体化シクロフルクタンＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相の形成の例を示す。
表３に、このような、安定な、結合したＨＩＬＩＣ選択剤のモデル例となる、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したネイティブＣＦ６に関する、いくつかの粒子特性および表面被覆度データを示す。ＳＰＰは、ＦＰＰと比較して、はるかに表面積が小さいことに注目されたい。しかしながら、ＳＰＰに関して、ＨＩＬＩＣ選択剤の相対的被覆度（すなわちμｍｏｌ／ｍ２）は同等である。
本発明によれば、ＳＰＰのポアサイズは、約１００Å〜約３００Å、好ましくは約１００Å〜約１５０Å、より好ましくは約１１０Å〜約１３０Åの範囲である。本発明によるＳＰＰは、約１２０Åのポアサイズを有する。また、本発明によれば、ＳＰＰの表面積は、約１００ｍ２／ｇ〜約５００ｍ２／ｇ、好ましくは約１００ｍ２／ｇ〜約４００ｍ２／ｇ、約１００ｍ２／ｇ〜約３００ｍ２／ｇ、または約１００ｍ２／ｇ〜約２００ｍ２／ｇ、より好ましくは約１１０ｍ２／ｇ〜約１５０ｍ２／ｇの範囲である。本発明によるＳＰＰの表面積は、約１２０ｍ２／ｇである。
以下の段落およびその各図面によって、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣに基づく、安定な、結合した材料の、より高い効率（より高い理論段数（Ｎ）およびより短い保持時間（分析時間）での分離をもたらすという点における、優位性の例を説明する。
図１４は、極性分析物である５−フェニル吉草酸およびフェルラ酸の、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＦＰＰおよびＳＰＰに結合した場合に得られる、分離の比較を示す。ピークの頂点の値は、カラムの段数（Ｎ）に関する効率に相当する。移動相は、ＡＣＮ／２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（８５／１５）からなり、流速＝７５０μＬ／分、Ｔ＝３０℃であった。同等の分離度が、３つ全てのクロマトグラムで観察されたが、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を用いた分離は、はるかに短時間で完了したことに注目されたい。この優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴わずに効率が向上した結果である。
図１５は、極性ヌクレオベース（ウラシルおよびシトシン）およびヌクレオシド（アデノシン）の、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＦＰＰおよびＳＰＰに結合した場合に得られる、分離の比較を示す。ピークの頂点の値は、カラムの段数（Ｎ）に関する効率に相当する。移動相は、ＡＣＮ／２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（７５／２５）からなり、流速＝７５０μＬ／分、Ｔ＝３０℃であった。同等の分離度が、３つ全てのクロマトグラムで観察されたが、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を用いた分離は、はるかに短時間で完了したことに注目されたい。この優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴わずに効率が向上した結果である。
図１６は、極性環状ヌクレオチドの、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＦＰＰおよびＳＰＰに結合した場合に得られる、分離の比較を示す。ピークの頂点の値は、カラムの段数（Ｎ）に関する効率に相当する。移動相は、ＡＣＮ／２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（７０／３０）からなり、流速＝７５０μＬ／分、Ｔ＝３０℃であった。ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を使用した場合、同等の／改善された分離度が観察されたことに注目されたい。また、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を用いた分離は、はるかに短時間で完了した。この優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴わずに効率が向上した結果である。
図１７は、極性分析物であるピリドキシンおよびアスコルビン酸の、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＦＰＰおよびＳＰＰに結合した場合に得られる、分離の比較を示す。ピークの頂点の値は、カラムの段数（Ｎ）に関する効率に相当する。移動相は、ＡＣＮ／２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（７５／２５）からなり、流速＝７５０μＬ／分、Ｔ＝３０℃であった。同等の分離度が、３つ全てのクロマトグラムで観察されたが、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を用いた分離は、はるかに短時間で完了したことに注目されたい。この優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴わずに効率が向上した結果である。
図１８は、極性ヌクレオベース（ウラシルおよびシトシン）およびヌクレオシド（アデノシン）の、シクロデキストリンに基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＦＰＰおよびＳＰＰに結合した場合に得られる、分離の比較を示す。各ピークのそばの値は、カラムの段数（Ｎ）に関する効率に相当する。移動相は、ＡＣＮ／２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（９０／１０）からなり、流速＝７５０μＬ／分、Ｔ＝２５℃であった。同等の分離度が、３つ全てのクロマトグラムで観察されたが、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を用いた分離は、はるかに短時間で完了したことに注目されたい。この優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴わずに効率が向上した結果である。
図１９は、極性キサンチン（キサンチンおよびヒポキサンチン）の、シクロデキストリンに基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＦＰＰおよびＳＰＰに結合した場合に得られる、分離の比較を示す。各ピークのそばの値は、カラムの段数（Ｎ）に関する効率に相当する。移動相は、ＡＣＮ／２５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ（９０／１０）からなり、流速＝７５０μＬ／分、Ｔ＝２５℃であった。同等の分離度が、３つ全てのクロマトグラムで観察されたが、ＳＰＰ−ＨＩＬＩＣ相を用いた分離は、はるかに短時間で完了したことに注目されたい。この優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴わずに効率が向上した結果である。
図２０は、極性ヌクレオシドおよびヌクレオベースの、安息香酸官能化シクロフルクタンに基づく、安定化し、結合したイオン性ＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＳＰＰに結合した場合に得られる、著しい高効率を示す。移動相は、ＣＡＮ／１０ｎＭ ＮＨ４ＯＡｃ（８５／１５）からなり、流速＝１．５ｍＬ／分、Ｔ＝２５℃であった。また、１．７という換算理論段高さは、ＨＩＬＩＣ分離についてこれまでに得られた最高値であることに注目されたい。
図２１は、一アミノ酸多型を有する極性ペプチド（エンケファリン）の、テイコプラニンに基づく、安定化し、結合した大環状糖ペプチド両性イオン性ＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける分離を示す。この例は、安定化した相がＳＰＰに結合した場合に得られる、著しい高効率を示す。移動相は、ＡＣＮ／水（８０／２０）からなり、流速＝１．０ｍＬ／分、Ｔ＝２５℃であった。
安定なＨＩＬＩＣ ＳＰＰカラムの優位性を実証するための別の方法は、カイネティックプロット（ｖａｎ Ｄｅｅｍｔｅｒプロットおよび関連するプロット）によるものである。図２２および２３は、それぞれＨＩＬＩＣモードと標準的な順相モードの双方における、２種の類似する全多孔性粒子固定相と比較した、（シクロフルクタン６に基づく）超安定なＨＩＬＩＣ ＳＰＰ固定相に関するｖａｎ Ｄｅｅｍｔｅｒプロットを示す。ＳＰＰ固定相は、全ての流速において最も低いＨＥＴＰ（またはＨ）カーブをもたらし、より高い流速において最も小さい傾きを有することに注目されたい。結果として、これらのＳＰＰ相は、最大の理論段数（Ｎ）（１分あたり）をもたらす（図２４）。よって、これらの相では、分析はより少ない時間で完了する。
より具体的には、図２２は、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合した選択剤を用いた順相モードにおける、（ＨＥＴＰに関する）効率の、フェルラ酸用の移動相の流速への依存性を示す。この例は、ＦＰＰとＳＰＰとの比較を示す。ここから分かるように、ＳＰＰ材料の場合、より高い流速においてＨＥＴＰは最小となる。試験した全ての流速において、ＳＰＰカラムの効率は、試験したカラム中で最大であり、ＳＰＰカラムは、高流速において、物質移動バンド拡散効果の点で注目すべき改善を示した。
図２３は、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける、（ＨＥＴＰに関する）効率の、フェルラ酸用の移動相の流速への依存性を示す。この例は、ＦＰＰとＳＰＰとの比較を示す。ここから分かるように、ＳＰＰ材料の場合、より高い流速においてＨＥＴＰは最小となる。試験した全ての流速において、ＳＰＰカラムの効率は、試験したカラム中で最大であり、ＳＰＰカラムは、高流速において、物質移動バンド拡散効果の点で改善を示した。
図２４は、シクロフルクタン６に基づく、安定化し、結合したＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける、段数（１分間あたり）の、フェルラ酸用の移動相の流速への依存性を示す。この例は、ＦＰＰとＳＰＰとの比較を示す。ＳＰＰカラムが、総分析時間の短縮をもたらすことに注目すべきである。この例は、各化合物に関して、移動相の流速に対する単位時間当たりの段数を示すことによって、このことを明確に示す。ここから分かるように、分析に費やした時間あたりの、得られる段数は、ＦＰＰカラムよりも、ＳＰＰカラムのほうがはるかに高い。
最後に、図２５は、安定化し、結合した、シクロフルクタン６に基づくＨＩＬＩＣ選択剤を用いたＨＩＬＩＣにおける、図１４〜１７で分離された全ての分析物に関する隣接するピークの選択性を示す。この例は、ＦＰＰとＳＰＰとの比較を示し、選択性は、以下の分離された分析物のペアに基づいて算出した：１）ウラシル−アデノシン、２）アデノシン−シトシン、３）５−フェニル吉草酸−フェルラ酸、４）ピリドキシン アスコルビン酸、５）ｃＴＭＰ−ｃＡＭＰ、６）ｃＡＭＰ−ｃＧＭＰ、７）ｃＧＭＰ−ｃＣＭＰ。ここから分かるように、選択性は、ＦＰＰカラムとＳＰＰカラムとの間で実質的に等しい。選択性が、カラムへのＣＦ６の絶対的な充填量（質量％）に従わないことは明らかである（表２）。本発明は、安定化され、ＳＰＰ上に結合したＨＩＬＩＣ相に関し、同等の相対的被覆度（μｍｏｌ／ｍ２）を有し、同等の選択性をもたらすであろうことを初めて示すものである。
以下は、本発明によるいくつかの実施形態である。
実施形態１。ＨＩＬＩＣ選択剤に結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態２。ＳＰＰが、約０．５μｍ〜約２０μｍの粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態３。ＳＰＰが、約１．３μｍ〜約１０μｍの粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態４。ＳＰＰが、約１．７μｍ〜約５．０μｍの粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態５。ＳＰＰが、約１．７、約２．７、および約４．０μｍからなる群から選択される粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態６。ＳＰＰが、約１．７μｍの粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態７。ＳＰＰが、約２．７μｍの粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態８。ＳＰＰが、約４．０μｍの粒子径を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態９。ＳＰＰが、約１００Å〜約３００Åのポアサイズを有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１０。ＳＰＰが、約１００Å〜約１５０Åのポアサイズを有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１１。ＳＰＰが、約１１０Å〜約１３０Åのポアサイズを有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１２。ＳＰＰが、約１２０Åのポアサイズを有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１３。ＳＰＰが、約１５０ｍ２／ｇ〜約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１４。ＳＰＰが、約１２０ｍ２／ｇの表面積を有する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１５。ＨＩＬＩＣ選択剤が、炭水化物および誘導体、オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、荷電型またはイオン型、ならびに両性イオン型からなる群から選択される、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１６。ＨＩＬＩＣ選択剤が、シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、スルホン化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）、スルホン化シクロデキストリン、および３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスホニウムプロピルスルホネートからなる群から選択される、実施形態１５の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１７。ＨＩＬＩＣ選択剤が、ネイティブまたは誘導体化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）、およびネイティブまたは誘導体化シクロデキストリンからなる群から選択される、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態１８。誘導体化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）および誘導体化シクロデキストリンの誘導体化基が、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、ならびにヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／または環状アルカンからなる群から選択される、実施形態１７の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相）
実施形態１９。表面多孔性粒子（ＳＰＰ）が、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、または尿素結合によってＨＩＬＩＣ選択剤に結合する、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態２０。保持時間ドリフトが、３．０％未満の変化である、実施形態１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態２１。保持時間ドリフトが、１．０％未満の変化である、請求項１の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
実施形態２２。表面多孔性粒子（ＳＰＰ）に共有結合した、高効率で、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）基材を含む、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）。
実施形態２３。基材が、ＨＩＬＩＣ選択剤を含む、実施形態２２の表面多孔性粒子（ＳＰＰ）。
実施形態２４。全多孔性粒子（ＦＰＰ）上の同様の固定相に比べて、より高い効率およびより短い保持時間を有する、加水分解に安定な、高選択性表面多孔性粒子（ＳＰＰ）親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）固定相。
実施形態２５。ＨＩＬＩＣ充填剤が、非修飾シリカではなく、それによって、ＳＰＰ表面を溶解から保護し、かつ、むき出しの支持体およびシリカを含む全多孔性支持体に比べて、より広いＨＩＬＩＣ選択性およびより高い効率を有する、実施形態３の、加水分解に安定な、高選択性ＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相。
実施形態２６。ＨＩＬＩＣ選択剤に結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相に、分子を接触させることを含む、極性分子の分離方法。
実施形態２７。シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、スルホン化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）、スルホン化シクロデキストリン、および３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスホニウムプロピルスルホネートからなる群から選択されるＨＩＬＩＣ選択剤を選択すること、キラル選択剤を表面多孔性粒子に共有結合させること、およびそれによって超安定なＨＩＬＩＣ ＳＰＰ固定相を得ること、を含む、ＨＩＬＩＣ選択剤に結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相の製造方法。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に記載したが、この記載は例示にすぎない。本明細書に記載した本発明のさらなる改変に当業者は気づくであろうし、そのような全ての改変は、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内であるとみなされる。
Claims (27)
- ＨＩＬＩＣ選択剤に結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約０．５μｍ〜約２０μｍの粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１．３μｍ〜約１０μｍの粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１．７μｍ〜約５．０μｍの粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１．７、約２．７、および約４．０μｍからなる群から選択される粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１．７μｍの粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約２．７μｍの粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約４．０μｍの粒子径を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１００Å〜約３００Åのポアサイズを有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１００Å〜約１５０Åのポアサイズを有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１１０Å〜約１３０Åのポアサイズを有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１２０Åのポアサイズを有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１５０ｍ２／ｇ〜約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＳＰＰが、約１２０ｍ２／ｇの表面積を有する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＨＩＬＩＣ選択剤が、炭水化物および誘導体、オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、荷電型またはイオン型、ならびに両性イオン型からなる群から選択される、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＨＩＬＩＣ選択剤が、シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、スルホン化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）、スルホン化シクロデキストリン、および３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスホニウムプロピルスルホネートからなる群から選択される、請求項１５に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- ＨＩＬＩＣ選択剤が、ネイティブまたは誘導体化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）、およびネイティブまたは誘導体化シクロデキストリンからなる群から選択される、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- 誘導体化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）および誘導体化シクロデキストリンの誘導体化基が、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、ならびにヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／または環状アルカンからなる群から選択される、請求項１７に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相）。
- 表面多孔性粒子（ＳＰＰ）が、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、または尿素結合によってＨＩＬＩＣ選択剤に結合する、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- 保持時間ドリフトが、３．０％未満の変化である、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- 保持時間ドリフトが、１．０％未満の変化である、請求項１に記載の、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相。
- 表面多孔性粒子（ＳＰＰ）に共有結合した、高効率で、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）基材を含む、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）。
- 基材が、ＨＩＬＩＣ選択剤を含む、請求項２２に記載の表面多孔性粒子（ＳＰＰ）。
- 全多孔性粒子（ＦＰＰ）上の同様の固定相に比べて、より高い効率およびより短い保持時間を有する、加水分解に安定な、高選択性表面多孔性粒子（ＳＰＰ）親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）固定相。
- ＨＩＬＩＣ充填剤が、非修飾シリカではなく、それによって、ＳＰＰ表面を溶解から保護し、かつ、むき出しの支持体およびシリカを含む全多孔性支持体に比べて、より広いＨＩＬＩＣ選択性およびより高い効率を有する、請求項３に記載の、加水分解に安定な、高選択性ＳＰＰ ＨＩＬＩＣ相。
- ＨＩＬＩＣ選択剤に結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、共有結合した、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相に、分子を接触させることを含む、極性分子の分離方法。
- シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、スルホン化シクロフルクタン（ｃｙｃｌｏｆｒｕｔａｎ）、スルホン化シクロデキストリン、および３−Ｐ，Ｐ−ジフェニルホスホニウムプロピルスルホネートからなる群から選択されるＨＩＬＩＣ選択剤を選択すること、キラル選択剤を表面多孔性粒子に共有結合させること、およびそれによって超安定なＨＩＬＩＣ ＳＰＰ固定相を得ること、を含む、ＨＩＬＩＣ選択剤に結合した表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）相の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462025990P | 2014-07-17 | 2014-07-17 | |
| US62/025,990 | 2014-07-17 | ||
| PCT/US2015/041028 WO2016011427A1 (en) | 2014-07-17 | 2015-07-17 | High efficiency, ultra-stable, bonded hydrophilic interaction chromatography (hilic) matrix on superficially porous particles (spps) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017527824A true JP2017527824A (ja) | 2017-09-21 |
| JP2017527824A5 JP2017527824A5 (ja) | 2018-11-22 |
Family
ID=55079114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017523196A Pending JP2017527824A (ja) | 2014-07-17 | 2015-07-17 | 表面多孔性粒子（ｓｐｐ）上に結合した、高効率で、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ｈｉｌｉｃ）基材 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10265643B2 (ja) |
| EP (1) | EP3169431A4 (ja) |
| JP (1) | JP2017527824A (ja) |
| WO (1) | WO2016011427A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10618920B2 (en) * | 2016-06-03 | 2020-04-14 | Agilent Technologies, Inc. | Functionalized particles having modified phases |
| US10436684B2 (en) * | 2016-09-19 | 2019-10-08 | Agilent Technologies, Inc. | Functionalized support for analytical sample preparation |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010071707A (ja) * | 2008-09-17 | 2010-04-02 | Shiseido Co Ltd | 親水性相互作用クロマトグラフィー用充填剤 |
| WO2012033194A1 (ja) * | 2010-09-09 | 2012-03-15 | ダイセル化学工業株式会社 | 水溶性生体関連物質の分離方法 |
| JP2012530809A (ja) * | 2009-06-17 | 2012-12-06 | ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | 分離剤としてのシクロフルクタン用の組成物および方法 |
| JP2013535544A (ja) * | 2010-07-26 | 2013-09-12 | ウオーターズ・テクノロジーズ・コーポレイシヨン | 粒度分布の狭い実質的に非多孔質のハイブリッドコアを含む表面多孔質材料 |
| US20130324700A1 (en) * | 2011-01-28 | 2013-12-05 | Dailian Institute of Chemical Physics, Chinese Aca of Sciences | Zwitterionic stationary phase for hydrophilic interaction liquid chromatography and preparation method thereof |
| JP2014029313A (ja) * | 2012-07-20 | 2014-02-13 | Mitsubishi Chemicals Corp | クロマトグラフィー用分離剤 |
| JP2014070073A (ja) * | 2012-09-27 | 2014-04-21 | Agilent Technologies Inc | 加水分解に安定なイオン交換固定相およびその使用 |
| CN103816878A (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-28 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种咪唑两性离子核-壳型亲水作用固定相及其制备和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8608967B2 (en) | 2011-03-03 | 2013-12-17 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Multiple stationary phase matrix and uses thereof |
| US20150136700A1 (en) * | 2012-05-15 | 2015-05-21 | Waters Technologies Corporation | Chromatographic materials |
-
2015
- 2015-07-17 US US15/326,927 patent/US10265643B2/en active Active
- 2015-07-17 WO PCT/US2015/041028 patent/WO2016011427A1/en active Application Filing
- 2015-07-17 EP EP15821602.8A patent/EP3169431A4/en not_active Ceased
- 2015-07-17 JP JP2017523196A patent/JP2017527824A/ja active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010071707A (ja) * | 2008-09-17 | 2010-04-02 | Shiseido Co Ltd | 親水性相互作用クロマトグラフィー用充填剤 |
| JP2012530809A (ja) * | 2009-06-17 | 2012-12-06 | ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | 分離剤としてのシクロフルクタン用の組成物および方法 |
| JP2013535544A (ja) * | 2010-07-26 | 2013-09-12 | ウオーターズ・テクノロジーズ・コーポレイシヨン | 粒度分布の狭い実質的に非多孔質のハイブリッドコアを含む表面多孔質材料 |
| WO2012033194A1 (ja) * | 2010-09-09 | 2012-03-15 | ダイセル化学工業株式会社 | 水溶性生体関連物質の分離方法 |
| US20130324700A1 (en) * | 2011-01-28 | 2013-12-05 | Dailian Institute of Chemical Physics, Chinese Aca of Sciences | Zwitterionic stationary phase for hydrophilic interaction liquid chromatography and preparation method thereof |
| JP2014029313A (ja) * | 2012-07-20 | 2014-02-13 | Mitsubishi Chemicals Corp | クロマトグラフィー用分離剤 |
| JP2014070073A (ja) * | 2012-09-27 | 2014-04-21 | Agilent Technologies Inc | 加水分解に安定なイオン交換固定相およびその使用 |
| CN103816878A (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-28 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种咪唑两性离子核-壳型亲水作用固定相及其制备和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| QIAO LIZHEN ET AL.: "Development and evaluation of new imidazolium-based zwitterionic stationary phases for hydrophilic i", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1286, JPN6019019872, 19 April 2013 (2013-04-19), pages 137 - 145, ISSN: 0004186432 * |
| RISLEY S. DONALD AND STREGE A. MARK: "Chiral Separations of Polar Compounds by Hydrophilic Interaction Chromatography with Evaporative Lig", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 72, no. 8, JPN6019019870, 15 April 2000 (2000-04-15), US, pages 1736 - 1739, XP002602235, ISSN: 0004186433, DOI: 10.1021/AC9911490 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3169431A4 (en) | 2018-03-14 |
| WO2016011427A1 (en) | 2016-01-21 |
| WO2016011427A9 (en) | 2016-03-24 |
| EP3169431A1 (en) | 2017-05-24 |
| US20170203234A1 (en) | 2017-07-20 |
| US10265643B2 (en) | 2019-04-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4869247B2 (ja) | 混合様式アニオン交換型分離材料 | |
| US20080293959A1 (en) | Compositions useful as chromatography stationary phases | |
| US20140116932A1 (en) | Novel Liquid Chromatographic Media and Methods of Synthesizing the Same | |
| JPH0626666B2 (ja) | ビデンテート シラン変性構造表面 | |
| Colón et al. | Allyl-functionalized hybrid silica monoliths | |
| US9340562B1 (en) | Chromatographic material and method for preparation thereof | |
| EP2021093B1 (en) | A method for generating metal chelating affinity ligands | |
| KR20170020372A (ko) | 친화성 크로마토그래피용 담체 | |
| JP5015426B2 (ja) | 金属キレートアフィニティリガンドの合成方法 | |
| Kacprzak et al. | Triazolo-linked cinchona alkaloid carbamate anion exchange-type chiral stationary phases: Synthesis by click chemistry and evaluation | |
| Bäurer et al. | Stable-bond polymeric reversed-phase/weak anion-exchange mixed-mode stationary phases obtained by simultaneous functionalization and crosslinking of a poly (3-mercaptopropyl) methylsiloxane-film on vinyl silica via thiol-ene double click reaction | |
| JPH04230852A (ja) | クロマトグラフィ用分離材料 | |
| JP2017527824A (ja) | 表面多孔性粒子（ｓｐｐ）上に結合した、高効率で、超安定な親水性相互作用クロマトグラフィー（ｈｉｌｉｃ）基材 | |
| US8133390B2 (en) | Reversed endcapping and bonding of chromatographic stationary phases using hydrosilanes | |
| US10272364B2 (en) | Superficially porous particle (SPP) chiral phases for liquid chromatography | |
| JP2012509479A (ja) | フェノキシアルキル、アルコキシフェニルアルキルまたはフェノキシフェニルアルキルリガンドベースの新規クロマトグラフィー媒体 | |
| JPH07260762A (ja) | 高速液体クロマトグラフィー用充填剤及びその製造法 | |
| JP6109604B2 (ja) | オクタヒドロビナフチル誘導体 | |
| US7459579B2 (en) | Method of separating optically active dihydroxy-heptenoic acid esters | |
| JP2708466B2 (ja) | 光学分割方法 | |
| WO2002012171A1 (en) | Method for preparing chiral compound by asymmetric ring opening reactions of epoxides | |
| KR20240140846A (ko) | 대규모 역상 hplc 정제를 위한 신규 정지상 | |
| US20210347645A1 (en) | Macroporous Controlled Porosity Silica Gel Suitable For Oligonucleotide Synthesis | |
| US20090078633A1 (en) | Chromatographic stationary phases | |
| JP6199140B2 (ja) | 充填剤の製造方法、充填剤及びカラム |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170222 |
|
| RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20170222 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180620 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180620 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181012 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190527 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190604 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190820 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20191105 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191129 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20200107 |