JP2017525366A - 試料の分割及び分析のためのデバイス及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、開示が全体として本明細書に参照により組み込まれている、2014年8月20日出願の米国仮特許出願第62/039,638号に対する優先権を主張する。
(式I)MPN/100mL=(P×100)/(NT)1/2
上記の式中、Pは陽性のチューブの数であり、Nは陰性のチューブ内の試料の体積(mL)であり、Tはすべてのチューブ内の試料の体積(mL)であり、MPNは最確数である。この方法の主な欠点は、少数のチューブしか使用しないときに、95%信頼限界の範囲が大きくなることである。そのような信頼限界は、式IIを使用して概略的に計算される。
(式II)Log(MPN)±1.96(0.58/n1/2)
上記の式中、nは試験数である。
実施形態Aは、
基材を含み、基材が第1の主表面を有する基部と、
第1の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、
接着剤を介して基材に結合された、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、その複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む、カバーフィルムと、
基材とカバーフィルムとの間に配置され、複数の区画の各区画が、複数の区画のうちの少なくとも1つの他の区画との液体連通を防止する封止部によって画定されている、複数の閉鎖区画と、
閉鎖区画のうちの2つ以上の中に配置された水性液とを含み、
封止部が、カバーフィルムと感圧接着剤との間の接触によって形成されている、デバイスである。
基材を含み、基材が第1の主表面を有する基部と、
第1の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、
接着剤を介して基材に結合された、弾性回復率が20%以下のポリマーカバーフィルムと、
基材とカバーフィルムとの間に配置され、複数の区画の各区画が、複数の区画のうちの少なくとも1つの他の区画との液体連通を防止する封止部によって画定されている、複数の閉鎖区画と、
閉鎖区画のうちの2つ以上の中に配置された水性液とを含み、封止部がカバーフィルムと感圧接着剤との間の接触によって形成されている、デバイスである。
予め定められた体積の液体を、非水溶性の感圧接着剤で被覆された基材と、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムとの間に載せる工程であって、その複合フィルムがエチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む、前記工程と、
カバーフィルムに外部手段を付勢させて、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程とを含む方法である。
予め定められた体積の液体を基材の第1の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第1の表面と、弾性回復率が20%以下であるポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程とを含む方法である。
予め定められた体積の液体を基材の第1の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第1の表面と、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、その複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む前記ポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
複数の区画のうちの少なくとも1つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程とを含む方法である。
液体試料を基材の第1の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第1の表面と、弾性回復率が20%以下であるポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
(ii)カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
複数の区画のうちの少なくとも1つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程とを含む方法である。
予め定められた体積の液体を基材の第1の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第1の表面と、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、その複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む前記ポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を押し付けて、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
微生物の少なくとも1回の細胞分裂を促進する条件下に、液化及び分割した試料をインキュベートする工程とを含む方法である。
試料を液体栄養培地に混ぜ合わせて試料を液化する工程と、
液化した試料を基材の第1の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第1の表面と、弾性回復率が20%以下であるポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を押し付けて、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
微生物の少なくとも1回の細胞分裂を促進する条件下に、液化及び分割した試料をインキュベートする工程とを含む方法である。
非水溶性の感圧接着剤層が被覆された第1の主表面を有する基材と、
複合ポリマーフィルムとを含み、
ポリマーフィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含み、
粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、キットである。
非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第1の主表面を有する基材と、
弾性回復率が20%以下のポリマーフィルムとを含むキットである。
ポリマーフィルムが基材に取り付けられ、
存在する場合、スペーサ要素が、基材とカバーフィルムとの間に配置されている、実施形態BF〜BMのいずれか1つのキットである。
基材と、
基材に取り付けられた複合ポリマーフィルムと、
第1の層と第2の層との間に配置されたリザーバと、
リザーバ内へそれを通して液体を導入することができるポートとを備え、
リザーバ内で、基材が、基材に接着させた感圧接着剤層と、接着剤層上へ被覆された実質的に水分がない二次層とを含み、
二次層が、接着剤と複合ポリマーフィルムとの間の接着を防止し、
ポリマーフィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含み、
粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、パウチである。
基材と、
基材に取り付けられたポリマーフィルムと、
基材とポリマーフィルムとの間に配置されたリザーバと、
リザーバ内へそれを通して液体を導入することができるポートとを備え、
リザーバ内で、基材が、基材に接着させた感圧接着剤層と、接着剤層上へ被覆された実質的に水分がない二次層とを含み、
二次層が、接着剤と複合ポリマーフィルムとの間の接着を防止し、
ポリマーフィルムの弾性回復率が20%以下である、パウチである。
基材及びカバーフィルムの準備
実質的に平面の第1の表面を有する厚さ0.05mm(2ミル)の二軸延伸ポリプロピレン(Biaxially oriented polypropylene、BOPP、0.05mm(2ミル))を、基材として使用した。第1の表面上で、フィルムを厚さ0.05mm(2ミル)の非水溶性のシリコーンベースの感圧接着剤、シリコーンポリウレアで被覆した。非水溶性のシリコーンポリウレア接着剤は、どちらも全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第5,461,134号及び第6,007,914号に記載されている方法に従って準備した。
BACTO(商標)Trypticase Soy Broth(Becton,Dickinson and Company;Franklin Lakes,New Jersey)中にEscherichia coli(ATCC #25922,American Type Tissue Collection;Manassas,Virginia)を一晩培養したものを、0.5mg/mLの4−メチルウンベリフェリル−β−D−グルクロニド(Sigma−Aldrich Corp.;St.Louis,MO)で希釈することによって、水溶液を準備した。この試験溶液は、1マイクロリットル当たり約1〜100の細菌を有した。
以下の段落に記載の内容を除いて、上記の実施例1に記載した通り培養デバイスを構築した。
区画内の微生物のインキュベート及び増殖の検出
a各「増殖が陽性」の区画で、蛍光が陽性であり、観察可能な気泡がないことを、増殖の証拠とした。区画内の蛍光は、区画内の細菌の増殖が陽性と見なした。
実施例1に従って型押し培養デバイスを準備したが、0.5mg/mLのMUG(4−メチルウンベリフェリル−β−D−グルクロニド)ではなく、0.1又は0.01mg/mLのリザズリン(Sigma−Aldrich Corp.;St.Louis,MO)を使用した。リザズリンの添加は、細菌の酸化還元活性の検出を可能にし、MUGのように、微生物の活性を検出するのに特有の酵素活性(β−D−グルクロニダーゼ)に依拠しない。
a実施例3の各「増殖が陽性」の区画で、色が変化し、観察可能な気泡がないことを、増殖の証拠とした。
COLILERT(登録商標)細菌学的培地(IDEXX laboratories;Westbrook,Maine)を使用し、実施例1と同様に培養デバイスを構築して植菌したが、MUGがCOLILERT培地内にすでに含有されているため、4−メチルウンベリフェリル−β−D−グルクロニド(MUG)は添加しなかった。
この表は、本開示の型押し培養デバイスの各区画内で陽性の増殖を観察するまでに必要としたインキュベーション時間(分)を報告する。「NG」は増殖がない(すなわち、その区画内の蛍光が微生物の増殖を判定するための記載の閾値を超過しなかった)ことを示す。
パウチの準備
パウチを準備するプロセスを図4a〜図4eに示す。実施例1に記載したように、二軸延伸ポリプロピレンから構成した基材12を、シリコーンベースの感圧接着剤(接着剤15、図4a)で被覆した。
実施例1に記載したように、4−メチルウンベリフェリル−β−D−グルクロニド蛍光性指示薬を有する細菌学的培地(COLILERT培地、IDEXX laboratories;Westbrook,Maine)及びEscherichia coli American Type Tissue Collection #25922(EZ−CFU,Microbiologics;St.Cloud,Minnesota)を含む試験溶液を準備した。
パウチの準備
ガラスバブルではなく粉末状細菌学的培地(BACTO Trypticase Soy Broth(Becton Dickinson and Company,Franklin Lakes,NJ))を二次コーティングとして使用したことを除いて、実施例6に記載した通りパウチ状物品を準備した。
植菌の際、粉末被覆された植菌ポートが上向きになるようにパウチを垂直に保持した。1mLの試験溶液(4−メチルウンベリフェリル−β−D−グルクロニド蛍光性指示薬を有する細菌学的培地(COLILERT細菌学的培地、IDEXX laboratories;Westbrook,Maine)及びEscherichia coli American Type Tissue Collection #25922を含む)をパウチ内へ直接分注し、下部に沈降させた。
実施例1に従って、培地、従属栄養細菌数(Heterotrophic Plate Count、HPC、QUANTI−TRAY培地用)(IDEXX laboratories;Westbrook,Maine)を使用し、Pseudomonas aeruginosa ATCC #15442(American Type Tissue Collection;Manassas,Virginia)を試験微生物として使用して、型押し培養デバイスを準備した。
a実施例8の各「増殖が陽性」の区画で蛍光が陽性であることを、増殖の証拠とした。
実施例1に従って、培地、37g/LのBrain Heart Infusion Broth、5g/LのBACTO Yeast Extract(Becton,Dickinson and Company;Franklin Lakes,New Jersey)、0.5g/Lのシステイン塩酸塩、0.5g/Lの亜硫酸ナトリウム、及び0.5g/Lの硫酸鉄(Sigma Aldrich;St.Louis,MO)を使用して、型押し培養デバイスを準備した。
a実施例9の各「増殖が陽性」の区画内に黒い沈澱物があることを、増殖の証拠とした。
実施例2.1に記載したように、型押し培養デバイスを準備し、HPC培地を植菌した。1組のデバイスにPseudomonas aeruginosa ATCC #15442を植菌し、別の組の培養デバイスにEscherichia coli ATCC #25922を植菌した。どちらの組も、24時間にわたって37℃でインキュベートした。
Claims (20)
- 基材を含み、前記基材が第1の主表面を有する基部と、
前記第1の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、
前記接着剤を介して前記基材に結合された、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、前記複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び前記粘着付与剤を含む、前記ポリマーカバーフィルムと、
前記基材と前記カバーフィルムとの間に配置され、複数の閉鎖区画の各区画が、前記複数の閉鎖区画のうちの少なくとも1つの他の区画との液体連通を防止する封止部によって画定されている、複数の閉鎖区画と、
前記閉鎖区画のうちの2つ以上の中に配置された水性液と
を含み、前記封止部が、前記カバーフィルムと前記感圧接着剤との間の接触によって形成されている、デバイス。 - 前記粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、請求項1に記載のデバイス。
- 前記カバーフィルムの弾性回復率が20%以下である、請求項1又は2に記載のデバイス。
- 前記接着剤が非水溶性である、請求項1〜3のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記第1の主表面が実質的に平面である、請求項1〜4のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記基材が、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリエチレン、ポリエステル、ポリイミド、フルオロポリマー、ポリカーボネート、ポリスチレン、前記材料のいずれか1つの誘導体、及び前記材料のいずれか2つ以上の組み合わせからなる群から選択される材料から作られている、請求項1〜5のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記基材が金属箔を含んでいる、請求項1〜6のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記感圧接着剤が、水性液に接触したときに接着特性を保持する材料から作られている、請求項1〜7のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記感圧接着剤がシリコーンポリウレア接着剤である、請求項1〜8のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記感圧接着剤の厚さが少なくとも約0.02mmである、請求項1〜9のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記カバーフィルムの少なくとも一部分の厚さが0.01mm〜0.5mmである、請求項1〜10のいずれか一項に記載のデバイス。
- 引き伸ばされたときの前記カバーフィルムの少なくとも一部分の厚さが0.01mm〜0.2mmである、請求項1〜11のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記水性液が生体試料を含んでいる、請求項1〜12のいずれか一項に記載のデバイス。
- 各区画の容積が200nL〜10mLである、請求項1〜13のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記基材と前記カバーフィルムとの間に配置されたスペーサ要素を更に備えている、請求項1〜14のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記感圧接着剤の少なくとも一部分の上に配置された二次コーティングを更に含んでいる、請求項1〜15のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記二次コーティングが本質的に乾燥粉末からなる、請求項16に記載のデバイス。
- 液体試料を分析する方法であって、
予め定められた体積の液体を基材の第1の表面上に載せて、その液体試料が、
非水溶性の感圧接着剤で被覆された前記第1の表面と、
ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、前記複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び前記粘着付与剤を含む前記ポリマーカバーフィルムと
の間に配置されるようにする工程と、
前記カバーフィルムに外部手段を付勢させて、カバーフィルムの個別領域を前記基材の前記感圧接着剤に接触させ、その結果、前記液体を前記基材と前記カバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
前記複数の閉鎖区画のうちの少なくとも1つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程
を含む、前記方法。 - 前記カバーフィルムに前記外部手段を付勢させる前、前記基材及び/又は前記カバーフィルムが実質的に平坦である、請求項18に記載の方法。
- 前記定量的分析が、前記試料中の微生物又は生体分子の計数を含む、請求項18又は19に記載の方法。
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