JP2017512209A - デングウイルスに対する抗体分子およびその使用 - Google Patents

デングウイルスに対する抗体分子およびその使用 Download PDF

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Abstract

デングウイルスに特異的に結合する抗体分子が開示されている。ある特定の実施形態において、抗体分子は、デングウイルス血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４に結合する。抗体分子を使用して、デングウイルスを処置、防止および／または診断することができる。本開示は、少なくとも一部には、デングウイルス、例えば、デングウイルスＥタンパク質に結合し、本明細書に開示されている機能的および構造的特性を含む抗体分子を提供する。一部の実施形態において、本抗体分子は、ＥＤＩＩＩ（Ｅタンパク質ＤＩＩＩドメイン）の「Ａ」ベータ−ストランドに結合する。一部の実施形態において、本抗体分子は、少なくとも１、２、３または４種のデングウイルス血清型、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４に結合するおよび／またはこれを中和する。

Description

関連出願との相互参照
本出願は、２０１４年２月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／９３８，６４６号、２０１４年６月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／０１７，９７０号、および２０１４年９月５日に出願された米国仮特許出願第６２／０４６，３７９号に対する優先権を主張する。先の出願の開示は、本出願の開示の一部である（そしてそれらの全体が参考として援用される）とみなされる。
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された、これによりここに本明細書の一部を構成するものとしてその内容全体を援用する配列表を含有する。２０１５年１月７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ２０２９−７００２ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、７５，０５２バイトのサイズである。
デングウイルスは、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ科のＦｌａｖｉｖｉｒｕｓ属に属するプラス鎖ＲＮＡウイルスである。デングウイルスは、世界中の熱帯および亜熱帯地方を通じて広く分布し、媒介蚊によってヒトに伝染する。デングウイルスは、少なくとも８ヶ国の熱帯アジア諸国における小児の入院および死亡の主因である（ＷＨＯ、１９９７年、Ｄｅｎｇｕｅ ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ： ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ−−第２版、Ｇｅｎｅｖａ： ＷＨＯ）。年間推定５千万〜１億症例のデング熱および５００，０００症例のより重症型のデングウイルス感染症、デング出血熱／デングショック症候群（ＤＨＦ／ＤＳＳ）を引き起こす、デングウイルスの４種の血清型（ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４）が存在する（Ｇｕｂｌｅｒ， Ｄ． Ｊ．およびＭｅｌｔｚｅｒ， Ｍ．１９９９年、Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５３巻：３５〜７０頁）。ＤＨＦ／ＤＳＳは、その第１のデングウイルス感染とは異なる血清型による第２のデングウイルス感染を経験する小児および成人、ならびに循環デング特異的移行抗体を持ち続けている乳児の一次感染において優勢に観察される（Ｂｕｒｋｅ， Ｄ． Ｓ．ら１９８８年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ３８巻：１７２〜８０頁；Ｈａｌｓｔｅａｄ， Ｓ． Ｂ．ら１９６９年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ １８巻：９９７〜１０２１頁；Ｔｈｅｉｎ， Ｓ．ら１９９７年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ５６巻：５６６〜７２頁）。
デングウイルスの異なる血清型は、アミノ酸レベルで約２５〜４０％異なり、抗原性の差を有し、この差異は、全血清型に対し有効な治療法を産み出す努力を妨げてきた。
全４種のデングウイルス血清型は、ウイルス表面にＥ（エンベロープ）タンパク質を呈する。Ｅタンパク質は、宿主細胞へのウイルスの付着に寄与する。Ｅタンパク質は、ＤＩドメイン（９本鎖ベータ−バレル）、ＤＩＩドメイン（宿主細胞との融合に関係付けられるドメイン）およびＤＩＩＩドメイン（免疫グロブリン様ドメイン）を含む。ヒトにおけるＥタンパク質に対する体液性応答は、一般に、ＤＩおよびＤＩＩ領域を標的とし、その抗体の多くは、高い交差（ｃｒｏｓｓ）血清型反応性、ただし低い中和活性を提示する。
ＷＨＯ、１９９７年、Ｄｅｎｇｕｅ ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ： ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ−−第２版、Ｇｅｎｅｖａ： ＷＨＯ Ｇｕｂｌｅｒ， Ｄ． Ｊ．およびＭｅｌｔｚｅｒ， Ｍ．１９９９年、Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５３巻：３５〜７０頁 Ｂｕｒｋｅ， Ｄ． Ｓ．ら１９８８年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ３８巻：１７２〜８０頁 Ｈａｌｓｔｅａｄ， Ｓ． Ｂ．ら１９６９年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ １８巻：９９７〜１０２１頁 Ｔｈｅｉｎ， Ｓ．ら１９９７年、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ５６巻：５６６〜７２頁
当技術分野において、デングウイルスの新たな予防的および治療的処置（ｔｒａｔｍｅｎｔ）、特に、このウイルスの全４種の血清型に対し有効な処置の必要がある。
本開示は、少なくとも一部には、デングウイルス、例えば、デングウイルスＥタンパク質に結合し、本明細書に開示されている機能的および構造的特性を含む抗体分子を提供する。一部の実施形態において、本抗体分子は、ＥＤＩＩＩ（Ｅタンパク質ＤＩＩＩドメイン）の「Ａ」ベータ−ストランドに結合する。一部の実施形態において、本抗体分子は、少なくとも１、２、３または４種のデングウイルス血清型、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４に結合するおよび／またはこれを中和する。一部の実施形態において、本抗体分子は、表１から選択される。一部の実施形態において、本抗体分子は、抗体Ａ１１と比較して、ＶＨ Ｓ２６の欠失および／またはＶＨ Ｔ３３Ｖ置換を含む。これらの変異は、一部の実施形態において、１種または複数の特性を改善することができる、例えば、１種または複数のデングウイルス血清型、例えば、血清型ＤＶ−４に対する抗体親和性を改善することができる。一部の実施形態において、本抗体分子は、全４種のデング血清型にわたって保存されたＥＤＩＩＩにおける部位を標的とする。抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、医薬組成物および抗体分子を作製するための方法も提供される。本明細書に開示されている抗デング抗体分子を使用して（単独で、または他の薬剤もしくは治療様式と組み合わせて）、デングウイルス、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４を処置、防止（ｐｒｅｖｅｎｔ）および／または診断することができる。
したがって、ある特定の態様において、本開示は、リスト１由来の次の特性のうち１種または複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３種または全種）を有する抗体分子（例えば、単離された、組換えまたはヒト化抗体分子）を提供する：
ａ）高親和性で、例えば、約１００ｎＭ、典型的には、約１０ｎＭ、より典型的には、約１０〜０．０１ｎＭ、約５〜０．０１ｎＭ、約３〜０．０５ｎＭ、約１〜０．１ｎＭ未満またはより強い、例えば、約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、４、３、２、１、０．５、０．２、０．１、０．０５または０．０１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、ＥＤＩＩＩ（例えば、いずれかのデングウイルス血清型由来、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４由来の１種または複数のＥＤＩＩＩ、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４由来の全４種のＥＤＩＩＩ）に結合する、
ｂ）高親和性で、例えば、約１００ｎＭ、例えば、約１０ｎＭ、例えば、約１０〜１ｎＭ未満またはより強い、例えば、約１０、８、６、５、４または３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、ＤＶ−４ ＥＤＩＩＩに結合する、
ｃ）抗体Ａ１１（本明細書において４Ｅ５Ａとも称される）および／または抗体４Ｅ１１よりも優れた親和性で、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、１５、１００、１，０００、５，０００または１０，０００倍優れた親和性で、ＤＶ−４および／またはＤＶ−３ ＥＤＩＩＩドメインに結合する、
ｄ）例えば、フォーカス減少中和検査（ｆｏｃｕｓ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において、デングウイルス（例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４のうち１種または複数、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４の全て）を中和する、
ｅ）例えば、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において、抗体Ａ１１および／または抗体４Ｅ１１と比較して改善されたＩＣ５０で、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、２５、５０、７５、１００または１，０００倍改善されたＩＣ５０で、ＤＶ−４を中和する、
ｆ）例えば、ＶＨおよび／またはＶＬにおいて、例えば、１個または複数のＣＤＲまたはフレームワーク領域において、Ａ１１と比べて１個または複数の位置に変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）を有する、
ｇ）変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、置換、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域にＴ３３Ｖ置換を有する、
ｈ）変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６に欠失を有する、
ｉ）変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）例えば、置換、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域のＴ３３Ｖ変異、および変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６の欠失の両方を有する、
ｊ）変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、置換、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域にＴ３３Ｖ変異を有し、改善された（例えば、Ａ１１と比べて）、デングウイルス、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４のうち１種または複数（例えば、全種）への結合および／またはその中和を有する、
ｋ）変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６に欠失を有し、改善された（例えば、Ａ１１と比べて）、デングウイルス、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４のうち１種または複数（例えば、全種）、例えば、ＤＶ−４への結合および／またはその中和を有する、
ｌ）変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、置換、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域のＴ３３Ｖ変異および変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６の欠失の両方を有し、改善された（例えば、Ａ１１と比べて）、デングウイルス、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４のうち１種または複数（例えば、全種）、例えば、ＤＶ−４への結合および／またはその中和を有する、
ｍ）例えば、少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、２５、５０、７５、１００または１，０００倍優れた親和性で、図１０Ａ〜図１０Ｂ、図１１および図１９〜図２１に収載されているデングウイルス株のうち１種または複数（例えば、全種）、例えば、１種または複数のＤＶ−２株、１種または複数のＤＶ−３株、１種または複数のＤＶ−４株、例えば、ＤＥＮＶ−４ ＢＣ２、ＤＥＮＶ−４−Ｓｉｎｇ１０、ＤＥＮＶ−４ ＮｅｗＣａｌ０９、ＤＥＮＶ−４ Ｐｈｉｌ５６、ＤＥＮＶ−３ Ｓｉｎｇ０９、ＤＥＮＶ−３ Ｎｉｃ１０、ＤＥＮＶ−３ Ｈ８７、ＤＥＮＶ−２ Ｐｅｒｕ９５、ＤＥＮＶ−２ Ｓｉｎｇ０８、ＤＥＮＶ−２ ＮＧＣ、ＤＥＮＶ−１ Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＤＥＮＶ−２ Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ／１９４４（ＮＧＣ）、ＤＥＮＶ−３ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／１９５６（Ｈ８７）、ＤＥＮＶ−４ Ｍｅｘｉｃｏ／１９９７（ＢＣ２８７／９７）およびＤＥＮＶ−４ Ｈ２４１のうち１種または複数のＥＤＩＩＩへの改善された結合を呈する、
ｎ）例えば、ウイルスの不活性化を引き起こし得る、ビリオンの表面におけるＥタンパク質のネイティブ構造を破壊する、
ｏ）ＥＤＩＩＩにおけるエピトープ、例えば、Ａ１１またはＢ１１モノクローナル抗体によって認識されるエピトープと同じまたは同様のエピトープに特異的に結合する、
ｐ）表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８と同じまたは同様の結合親和性もしくは特異性またはその両方を示す、
ｑ）表１に記載されている抗体分子（例えば、重鎖可変領域および軽鎖可変領域）、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８と同じまたは同様の結合親和性もしくは特異性またはその両方を示す、
ｒ）表２に示すアミノ酸配列を含む抗体分子（例えば、重鎖可変領域および軽鎖可変領域）と同じまたは同様の結合親和性もしくは特異性またはその両方を示す、
ｓ）本明細書に記載されている抗体分子、例えば、表１から選択される抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８である第２の抗体分子のＥＤＩＩＩへの結合を阻害、例えば、競合的に阻害する、
ｔ）本明細書に記載されている抗体分子、例えば、表１から選択される抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８である第２の抗体分子と同じまたは重複するＥＤＩＩＩに対するエピトープに結合する、
ｕ）結合に関して競合し、本明細書に記載されている抗体分子、例えば、表１から選択される抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８である第２の抗体分子と同じＥＤＩＩＩに対するエピトープに結合する、
ｖ）本明細書に記載されている抗体分子、例えば、表１から選択される抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の１種または複数の生物学的特性を有する、
ｗ）本明細書に記載されている抗体分子、例えば、表１から選択される抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の１種または複数の薬物動態学的特性を有する、あるいは
ｘ）デングウイルスの１種または複数の活性を阻害する、例えば、ウイルスを中和する（例えば、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において測定される）。
一部の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域にＴ３３Ｖ変異を有する。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６に欠失を有する。一部の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域のＴ３３Ｖ変異および変異（例えば、欠失、挿入、置換、例えば、保存的置換のうち１種または複数）、例えば、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６の欠失の両方を有する。
一部の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域にＴ３３Ｖ変異を有する。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、Ａ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６に欠失を有する。一部の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域のＴ３３Ｖ変異およびＡ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６の欠失の両方を有する。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、上述のリスト１の１種または複数の機能的特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）、（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）と組み合わせて、Ａ１１と比べて重鎖ＣＤＲ１領域のＴ３３Ｖ変異およびＡ１１と比べて重鎖ＦＷ１における位置２６の欠失の両方を有する。例えば、本抗体分子は、高親和性で、例えば、約１００ｎＭ、典型的には約１０ｎＭ、より典型的には約１０〜０．０１ｎＭ、約５〜０．０１ｎＭ、約３〜０．０５ｎＭもしくは約１〜０．１ｎＭ未満またはより強い、例えば、約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、４、３、２、１、０．５、０．２、０．１、０．０５または０．０１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、ＥＤＩＩＩ（例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４の）と結合することができる。さらなる例として、本抗体分子は、高親和性で、例えば、約１００ｎＭ、例えば、約１０ｎＭ、例えば、約１０〜１ｎＭ未満またはより強い、例えば、約１０、８、６、５、４または３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、ＤＶ−４ ＥＤＩＩＩに結合することができる。さらに、本抗体分子は、例えば、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において、抗体Ａ１１および／または抗体４Ｅ１１と比較して改善されたＩＣ５０で、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、１００、１，０００倍改善されたＩＣ５０で、ＤＶ−４を中和することができる。
ある特定の実施形態において、親和性は、競合ＥＬＩＳＡまたはＳＰＲによって測定される。一部の実施形態において、親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーのうち１種または複数によって測定される。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ヒト化抗体分子であり、上述のリスト１由来の１種または複数の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）を有する。
一部の実施形態において、本抗体分子は、高親和性で、例えば、マウス抗デング抗体分子、例えば、４Ｅ１１、Ａ１１またはＢ１１のＫＤよりも少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％低いＫＤで、ＥＤＩＩＩに結合する。
一部の実施形態において、本抗体分子の発現レベルは、マウス抗体分子、例えば、本明細書に記載されているマウス抗デング抗体分子の発現レベルよりも高い、例えば、少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍高い。一部の実施形態において、本抗体分子は、哺乳動物細胞、例えば、ヒトまたは齧歯類細胞において発現される。
一部の実施形態において、本抗体分子は、マウス抗デング抗体分子、例えば、本明細書に記載されているマウス抗デング抗体分子のＩＣ５０よりも低い、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％低いＩＣ５０（５０％阻害濃度）で、１種または複数のデングウイルス活性を低下させる。一部の実施形態において、デングウイルス活性は、例えば、あらゆる補足材料を含むこれにより明確にここに本明細書の一部を構成するものとしてその内容全体を援用するＴｈａｒａｋａｒａｍａｎａら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年４月２３日；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁、ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１３０３６４５１１０． Ｅｐｕｂ２０１３年４月８日に記載されているフォーカス減少中和検査において中和される。ウイルス活性の中和の評価に使用することができる他の関連する検査は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）に基づくマイクロ中和（ＭＮ）アッセイ（例えば、Ｖｏｒｎｄａｍら、Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ２００２年；６６巻：２０８〜２１２頁に記載）および蛍光抗体細胞選別機に基づくＤＣ−ＳＩＧＮ発現体樹状細胞（ＤＣ）アッセイ（例えば、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００６年；１３４巻：７４〜８５頁に記載）を含む。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、例えば、本明細書に記載されている蚊モデルによって測定される通り、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％、デングウイルスの伝染（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）を低下させる（例えば、対象（例えば、ヒト）および蚊の間の伝染を低下させる）。
他の実施形態において、本抗体分子は、例えば、本明細書に記載されている蚊モデルによって測定される通り、例えば、マウス抗デング抗体分子、例えば、本明細書に記載されているマウス抗デング抗体分子、例えば、４Ｅ１１、Ａ１１またはＢ１１よりも少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍高く、デングウイルスの伝染を低下させるための改善された能力を有する（例えば、対象（例えば、ヒト）および蚊の間でデングウイルスの伝染を低下させるための改善された能力を有する）。
他の実施形態において、本抗体分子は、例えば、本明細書に記載されている蚊モデルによって測定される通り、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％、蚊ウイルス負荷（例えば、蚊によって保有されるウイルスの量および／または感染力）を低下させる。
一部の実施形態において、本抗体分子は、改善された安定性を有し、例えば、マウス抗デング抗体分子、例えば、本明細書に記載されているマウス抗デング抗体分子、例えば、４Ｅ１１、Ａ１１またはＢ１１よりも少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで安定的である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１から選択される抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、あるいは前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）由来の少なくとも１個の抗原結合性領域、例えば、可変領域またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、あるいは前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）由来の少なくとも１、２、３または４個の可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、あるいは前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）由来の少なくとも１または２個の重鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、あるいは前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）由来の少なくとも１または２個の軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、例えば、４Ｅ５Ａおよび／もしくは４Ｅ１１または表１の抗体と比べて、ＶＨ領域における位置３３にバリンを含む（例えば、Ｔ３３Ｖ変異）。一部の実施形態において、本抗デング抗体は、例えば、４Ｅ５Ａまたは表１の抗体と比べて、ＶＨ領域にｄｅｌ２６（位置２６における欠失）を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体は、例えば、４Ｅ５Ａまたは表１の抗体と比べて、位置３３におけるバリン（例えば、Ｔ３３Ｖ変異）およびＶＨ領域におけるｄｅｌ２６変異の両方を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、あるいは前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）の重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲを（または全ＣＤＲをまとめて）含む。一部の実施形態において、ＣＤＲのうち１種または複数（または全ＣＤＲをまとめて）は、表３に示すＣＤＲと比べて、１、２、３、４、５、６個またはそれを超える変化、例えば、アミノ酸置換、挿入または欠失を有する。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲを（または全ＣＤＲをまとめて）含む。一部の実施形態において、ＣＤＲのうち１種または複数（または全ＣＤＲをまとめて）は、表３に示すＣＤＲと比べて、１、２、３、４、５、６個またはそれを超える変化、例えば、アミノ酸置換、挿入または欠失を有する。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３に示すアミノ酸配列を含む重および軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを（または全ＣＤＲをまとめて）含む。一部の実施形態において、ＣＤＲのうち１種または複数（または全ＣＤＲをまとめて）は、表３に示すＣＤＲと比べて、１、２、３、４、５、６個またはそれを超える変化、例えば、アミノ酸置換、挿入または欠失を有する。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、あるいは密接に関係したＣＤＲ、例えば、同一の、または少なくとも１個のアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４個の変更（例えば、置換、例えば、保存的置換、欠失または挿入）を超えないＣＤＲ由来の全６個のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されているいずれかのＣＤＲを含むことができる。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣｈｏｔｈｉａ高頻度可変ループ、あるいはＥＤＩＩＩに接触するこれらの高頻度可変ループ由来の少なくともアミノ酸を含む。例えば、一部の実施形態において、本明細書に提供される抗体分子は、配列番号９のＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２および配列番号５のＶＨＣＤＲ３を有する。本明細書に提供される抗体分子は、配列番号１５のＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２および配列番号５のＶＨＣＤＲ３を有することもできる。本明細書に提供される抗体分子は、配列番号２２、２４、２６、２８または３０のＶＨＣＤＲ１；配列番号１０のＶＨＣＤＲ２；および配列番号５のＶＨＣＤＲ３を有することもできる。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、任意選択で、本明細書に記載されている重鎖ＣＤＲと組み合わせて、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣｈｏｔｈｉａ高頻度可変ループ、あるいはＥＤＩＩＩに接触するこれらの高頻度可変ループ由来の少なくともアミノ酸を含む。例えば、ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体分子は、配列番号６のＶＨＣＤＲ１、配列番号７のＶＨＣＤＲ２および配列番号８のＶＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＫａｂａｔ高頻度可変ループ、あるいはＥＤＩＩＩに接触するこれらの高頻度可変ループ由来の少なくともアミノ酸を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＫａｂａｔ高頻度可変ループ、あるいはＥＤＩＩＩに接触するこれらの高頻度可変ループ由来の少なくともアミノ酸を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の重および軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２、３、４、５または６個の高頻度可変ループ、あるいはＥＤＩＩＩに接触するこれらの高頻度可変ループ由来の少なくともアミノ酸を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の重および軽鎖可変領域由来の全６個の高頻度可変ループ、あるいはＥＤＩＩＩに接触するこれらの高頻度可変ループまたは密接に関係した高頻度可変ループ、例えば、同一の、または少なくとも１個のアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４個の変更（例えば、置換、例えば、保存的置換、欠失または挿入）を超えない高頻度可変ループ由来の少なくともアミノ酸を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の相当する高頻度可変ループと同じ正準（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）構造、例えば、本明細書に記載されている抗体の重および／または軽鎖可変ドメインの少なくともループ１および／またはループ２と同じ正準構造を有する少なくとも１、２または３個の高頻度可変ループを含む。例えば、高頻度可変ループ正準構造の説明に関して、Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９９２年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２２７巻：７９９〜８１７頁；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、（１９９２年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２２７巻：７７６〜７９８頁を参照されたい。これらの構造は、これらの刊行物に記載されている表の点検により決定することができる。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個の（例えば、全）ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個の（例えば、全）ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重および軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２、３、４、５または６個の（例えば、全）ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８のアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個の（例えば、全）ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８のアミノ酸配列、あるいはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個の（例えば、全）ＣＤＲを含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、例えば、表２のＶＬおよびＶＨ配列における、本明細書に記載されている６個のＣＤＲを含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、表３から選択されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有する。６個のＣＤＲは、全てＫａｂａｔ定義、全てＣｈｏｔｈｉａ定義または一部Ｋａｂａｔおよび一部Ｃｈｏｔｈｉａ定義となり得る。例えば、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号３、９、１４、１５、２２、２４、２６、２８または３０から選択することができ；ＶＨＣＤＲ２は、配列番号４、１０または３５から選択することができ；ＶＨＣＤＲ３は、配列番号５となることができ；ＶＬＣＤＲ１は、配列番号６となることができ；ＶＬＣＤＲ２は、配列番号７となることができ；ＶＬＣＤＲ３は、配列番号８となることができる。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体の軽または重鎖可変フレームワークは、（ａ）ヒト軽もしくは重鎖可変フレームワーク、例えば、ヒト成熟抗体、ヒト生殖系列配列またはヒトコンセンサス配列由来の軽もしくは重鎖可変フレームワーク残基由来のアミノ酸残基の少なくとも８０％、８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％、９８％もしくは好ましくは１００％を含む軽または重鎖可変フレームワーク；（ｂ）ヒト軽もしくは重鎖可変フレームワーク、例えば、ヒト成熟抗体、ヒト生殖系列配列もしくはヒトコンセンサス配列由来の軽もしくは重鎖可変フレームワーク残基由来のアミノ酸残基の２０％〜８０％、４０％〜６０％、６０％〜９０％もしくは７０％〜９５％を含む軽もしくは重鎖可変フレームワーク；（ｃ）非ヒトフレームワーク（例えば、齧歯類フレームワーク）；または（ｄ）例えば、抗原性もしくは細胞傷害性決定基を除去するように修飾された、例えば、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）もしくは部分的にヒト化された非ヒトフレームワークから選択することができる。一部の実施形態において、軽または重鎖可変フレームワーク領域は、ヒト生殖系列遺伝子のＶＨまたはＶＬセグメントのフレームワークと少なくとも７０、７５、８０、８５、８７、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一または同一の軽または重鎖可変フレームワーク配列を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体のＶＨ領域（例えば、その中のフレームワーク領域）は、ヒトＶＨ領域、例えば、ヒト重鎖生殖系列コードアミノ酸配列由来の１種または複数の位置、例えば、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３およびＦＷ４のうち１種または複数（例えば、全種）に存在する位置を含む。ある特定の実施形態において、任意選択で、前文に記されているＶＨ残基と組み合わせて、本抗デング抗体のＶＬ領域（例えば、その中のフレームワーク領域）は、ヒトＶＬ領域、例えば、ヒト重鎖生殖系列コードアミノ酸配列由来の１種または複数の位置、例えば、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３およびＦＷ４のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５種または全種）に存在する位置を含む。
例えば、一部の実施形態において、本抗体分子は、表５のヒト生殖系列配列由来の重鎖または軽鎖ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３またはＦＷ４領域に従った１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０個のまたは全）残基を含む。より具体的には、一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＨ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＨ ＦＷ１残基を有し；一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＨ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＨ ＦＷ２残基を有し；一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＨ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＨ ＦＷ３残基を有し、および一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＨ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＨ ＦＷ４残基を有する。さらに、任意選択で、前文に記す重鎖残基と組み合わせて、一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＬ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＬ ＦＷ１残基を有し；一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＬ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＬ ＦＷ２残基を有し；一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＬ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＬ ＦＷ３残基を有し、および一部の実施形態において、本抗体分子は、表６のＶＬ生殖系列配列の１個または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０もしくは１５個のまたは全）ＶＬ ＦＷ４残基を有する。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、重鎖フレームワークＶＨ１−１８＊０１、ＪＨ４＊０１および／または軽鎖フレームワークＶｋ４−１＊０１、Ｊｋ２＊０２を有する。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表１のアミノ酸配列、例えば、Ｂ１１、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、例えば、可変領域全体におけるＦＲ領域のアミノ酸配列から少なくとも１、２、３、４、５、６、７、１０、１５、２０個またはそれを超える変化、例えば、アミノ酸置換、挿入または欠失を有する重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、次のうち１種または複数（例えば、少なくとも５、１０、１５もしくは２０種または全種）を有する重鎖可変ドメインを含む：表１の抗体、例えば、Ａ１１のアミノ酸配列の位置３におけるＱ、位置５におけるＶ、位置６におけるＥの欠失、位置１２におけるＶ、位置１３におけるＫ、位置２０におけるＫ、位置２１におけるＶ、位置２４におけるＫ、位置２６におけるＳの欠失、位置３３におけるＶ、位置３９におけるＲ、位置４１におけるＡ、位置４３におけるＧ、位置４９におけるＭ、位置６５におけるＬ、位置６８におけるＲ、位置６９におけるＶ、位置７１におけるＭ、位置７７におけるＴ、位置８２におけるＭ、位置８３におけるＥ、位置８５におけるＲ、位置８８におけるＲ、位置９０におけるＤ、位置９８におけるＡまたはＶまたはＳ、および位置１１７におけるＳ。これらの変異のうち１種または複数（例えば、全種）を有する抗体の例として、Ａ４８、Ｂ４８、Ｃ８８、Ｆ３８、Ｆ１０８およびＤ４８が挙げられる。一部の実施形態において、ヒト化重鎖は、次のうち１種または複数を含有する：表１の抗体、例えば、Ａ１１のアミノ酸配列の位置３におけるＱ、位置５におけるＶ、位置６におけるＥの欠失、位置１２におけるＶ、位置１３におけるＫ、位置２０におけるＫ、位置２１におけるＶ、位置２４におけるＫ、位置３９におけるＲ、位置４１におけるＡ、位置４３におけるＧ、位置４９におけるＭ、位置６５におけるＬ、位置６８におけるＲ、位置６９におけるＶ、位置７１におけるＭ、位置７７におけるＴ、位置８２におけるＭ、位置８３におけるＥ、位置８５におけるＲ、位置８８におけるＲ、位置９０におけるＤ、位置９８におけるＶまたはＡまたはＳ、および位置１１７におけるＳ。これらの変異のうち１種または複数（例えば、全種）を有する抗体の例は、Ａ６８である。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において（また、任意選択で、本明細書、例えば、前段落に記載されている重鎖置換と組み合わせて）、本抗デング抗体分子は、表１のアミノ酸配列、例えば、Ｂ１１、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８、例えば、可変領域全体におけるＦＲ領域のアミノ酸配列から少なくとも１、２、３、４、５、６、７、１０、１５、２０個またはそれを超えるアミノ酸変化、例えば、アミノ酸置換、挿入または欠失を有する軽鎖可変ドメインを含む。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体は、次のうち１種または複数（例えば、少なくとも５、１０、１５種または全種）を有する軽鎖可変ドメインを含む：表１の抗体、例えば、Ｂ１１、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８のアミノ酸配列の位置１におけるＤ、位置２におけるＩ、位置７におけるＳ、位置１７におけるＥ、位置４４におけるＰ、位置６２におけるＶ、位置６４におけるＤ、位置７２におけるＧ、位置８０におけるＳ、位置８１におけるＳ、位置８２におけるＬ、位置８３におけるＱ、位置８５におけるＥ、位置８９におけるＶ、位置９１におけるＹおよび位置１０４におけるＱ。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子の重もしくは軽鎖可変ドメインまたはその両方は、本明細書に開示されているアミノ酸と実質的に同一の、例えば、本明細書に記載されている抗体、例えば、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８の可変領域と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはより高く同一の、あるいは本明細書に記載されている抗体の可変領域から少なくとも１、２、３、４または５残基、ただし、４０、３０、２０または１０残基未満が異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子の重もしくは軽鎖可変領域またはその両方は、例えば、低ストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシーもしくは高ストリンジェンシーまたは本明細書に記載されている他のハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載されている核酸配列、あるいは表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８をコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸またはその相補体にコードされるアミノ酸配列を含む。本願は、本抗デング抗体分子の重もしくは軽鎖可変領域またはその両方も開示し、これは、例えば、低ストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシーもしくは高ストリンジェンシーまたは本明細書に記載されている他のハイブリダイゼーション条件下で、表４の核酸配列またはその相補体にコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、核酸は、表４の配列またはその一部と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれより高く同一である。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、少なくとも１、２、３または４個の抗原結合性領域、例えば、表２に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、または表２に示す配列から１、２、５、１０もしくは１５アミノ酸残基以下が異なる配列）を有する可変領域を含む。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８をコードするヌクレオチド配列、またはヌクレオチド配列のうちいずれか１種と実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、またはヌクレオチド配列のうちいずれか１種から３、６、１５、３０もしくは４５ヌクレオチド以下が異なる配列）を有する核酸にコードされるＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。一部の実施形態において、抗体分子は、この段落に記す構造的特色、およびデングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の態様において、本開示は、デングウイルスに任意選択で結合することができる抗体分子であって、
（ａ）
配列
（配列番号３）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ１と、
配列
（配列番号４）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ２と、
配列ＧＷＥＧＦＡＹ（配列番号５）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
を含む重鎖免疫グロブリン可変領域セグメント；
（ｂ）
配列ＲＡＳＥＮＶＤＫＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号６）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ１と、
配列ＲＡＳＥＬＱＷ（配列番号７）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ２と、
配列ＱＲＳＮＥＶＰＷＴ（配列番号８）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
を含む軽鎖可変領域セグメント
を含む抗体分子を提供する
一部の実施形態において、ＨＣＤＲ１の
が不変であり；一部の実施形態において、ＨＣＤＲ２の
が不変であり、一部の実施形態において、ＨＣＤＲ１の
およびＨＣＤＲ２の
の両方が不変である。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）、または配列番号１１と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ１を含む。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）、または配列番号８４と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８５と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む。
ある特定の態様において、本開示は、デングウイルスに結合することができる抗体分子であって、
（ａ）
配列番号３３と比べて位置２６の欠失を含むＦＷ１と、
配列
（配列番号１４）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ１、または配列
（配列番号３）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ１と、
配列
（配列番号４）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ２と、
配列ＧＷＥＧＦＡＹ（配列番号５）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
を含む重鎖免疫グロブリン可変領域セグメント；および
（ｂ）
配列ＲＡＳＥＮＶＤＫＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号６）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ１と、
配列ＲＡＳＥＬＱＷ（配列番号７）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ２と、
配列ＱＲＳＮＥＶＰＷＴ（配列番号８）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
を含む軽鎖可変領域セグメント
を含む抗体分子を提供する。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）、または配列番号８４と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８５と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む。
ある特定の態様において、本開示は、デングウイルスに任意選択で結合することができる抗体分子であって、
（ａ）
配列
（配列番号３）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ１と、
配列
（配列番号４）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が不変）を含むＣＤＲ２と、
配列
（配列番号５）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が、Ｉ、Ｋ、ＤまたはＥに置き換えられること）を含むＣＤＲ３と
を含む重鎖免疫グロブリン可変領域セグメント；
（ｂ）
配列
（配列番号６）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
が、Ｆに置き換えられること）を含むＣＤＲ１と、
配列ＲＡＳＥＬＱＷ（配列番号７）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ２と、
配列ＱＲＳＮＥＶＰＷＴ（配列番号８）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
を含む軽鎖可変領域セグメント
を含む抗体分子を提供する。
したがって、一部の実施形態において、重鎖ＣＤＲ３は、
（配列番号９０）、
（配列番号９１）、
（配列番号９２）または
（配列番号９３）である。一部の実施形態において、軽鎖ＣＤＲ１は、
（配列番号９４）である。言い換えれば、一部の実施形態において、抗体Ａ１１におけるアラニンである重鎖の位置１０５は、別の残基、例えば、Ｉ、Ｋ、ＤまたはＥに変化させることができる。ある特定の実施形態において、抗体Ａ１１におけるチロシンである軽鎖の位置３２は、別の残基、例えば、Ｆに変化させられる。一部の実施形態において、この段落に記載されている変異は、ＥＤＩＩＩに対する抗体分子の親和性および／またはデングウイルスの１種または複数の（または全）株または血清型に向けたその中和活性を改善する。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）、または配列番号１１と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ１を含む。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）、または配列番号８４と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列ＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８５と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む。
本明細書における態様の一部の実施形態において、本抗体分子は、デングウイルスＥＤＩＩＩ（Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ）に結合することができる。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、配列番号３〜８、１４および３５のいずれかの配列（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を有する１個または複数のＣＤＲを含む。例えば、本抗体分子は、配列番号３〜８、１４および３５のいずれかの配列を有する少なくとも２、３、４、５または６個のＣＤＲを含むことができる。
一部の実施形態において、本抗体分子は、配列番号３または１４のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４または３５のＶＨ ＣＤＲ２、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ３、配列番号６のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７のＶＬ ＣＤＲ２および配列番号８のＶＬ ＣＤＲ３を含む。例えば、本抗体分子は、配列番号３のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４のＶＨ ＣＤＲ２、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ３、配列番号６のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７のＶＬ ＣＤＲ２および配列番号８のＶＬ ＣＤＲ３を含むことができる。
一部の実施形態において、本抗体分子は、配列番号１と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本抗体分子は、配列番号８０と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本抗体分子は、配列番号１６〜２１、２４、２５、２７、２９、３１、３２、３３、３６、８０または８１のいずれかと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本抗体分子は、配列番号２または３４と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一のＶＬアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態において、本抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、本抗体分子は、カッパまたはラムダの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を含む。
本抗体分子は、単離された抗体分子および／またはヒト化抗体分子となり得る。一部の実施形態において、本抗体分子は、ヒトフレームワーク生殖系列配列に由来する１個または複数のフレームワーク領域を含有する。
一部の実施形態において、本抗体分子は、約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、４、３、２、１、０．５、０．２または０．１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、デングウイルスＥＤＩＩＩに結合することができる。本抗体分子は、約１０、８、６、５、４または３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、デングウイルス血清型ＤＶ−４ ＥＤＩＩＩに結合することができる。本抗体分子は、抗体Ａ１１または抗体４Ｅ１１よりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、１００、１，０００倍優れた親和性で、ＤＶ−３またはＤＶ−４ ＥＤＩＩＩドメインに結合することができる。本抗体分子は、抗体Ａ１１または抗体４Ｅ１１よりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、２５、５０、７５、１００または１，０００倍優れた親和性で、ＤＥＮＶ−４ ＢＣ２、ＤＥＮＶ−４−Ｓｉｎｇ１０、ＤＥＮＶ−４ ＮｅｗＣａｌ０９、ＤＥＮＶ−４ Ｐｈｉｌ５６、ＤＥＮＶ−３ Ｓｉｎｇ０９、ＤＥＮＶ−３ Ｎｉｃ１０、ＤＥＮＶ−３ Ｈ８７、ＤＥＮＶ−２ Ｐｅｒｕ９５、ＤＥＮＶ−２ Ｓｉｎｇ０８、ＤＥＮＶ−２ ＮＧＣ、ＤＥＮＶ−１ Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＤＥＮＶ−２ Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ／１９４４（ＮＧＣ）、ＤＥＮＶ−３ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／１９５６（Ｈ８７）、ＤＥＮＶ−４ Ｍｅｘｉｃｏ／１９９７（ＢＣ２８７／９７）およびＤＥＮＶ−４ Ｈ２４１のうち１種または複数から選択されるデングウイルス株に結合することができる。本抗体分子は、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査においてデングウイルスを中和することができる。本抗体分子は、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において、抗体Ａ１１または抗体４Ｅ１１よりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、５０、７５または１００倍低いＩＣ５０で、デングウイルスを中和することができる。
一部の態様において、本開示は、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子と、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤とを含む医薬組成物を提供する。
本開示は、例えば、本明細書に記載されている抗体分子の抗体重鎖または軽鎖可変領域をコードする核酸も提供する。本開示は、例えば、斯かる核酸を含む発現ベクターも提供する。本開示は、例えば、斯かる核酸を含む宿主細胞も提供する。本開示はその上、本明細書に記載されている抗体分子またはその断片を産生する方法であって、遺伝子発現に適した条件下で宿主細胞を培養するステップを含む方法を提供する。
一部の態様において、本開示は、本明細書に記載されている抗体分子を含むキットを提供する。本キットは、容器を含むことができ、この容器の中に抗体分子を配置することができる。本キットは、本抗体分子と任意選択で混合された、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含むこともできる。本キットは、送達デバイス、例えば、注射器または針を含む送達デバイスを含むこともできる。本キットは、使用説明書を含むこともできる。
ある特定の態様において、本開示は、デングウイルスを中和する方法であって、デングウイルスを本明細書に記載されている抗体分子と接触させるステップを含む方法を提供する。一部の実施形態において、デングウイルスは、血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４のものである。
一部の態様において、本開示は、デングウイルス感染を処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載されている単離された抗体分子を、ウイルスの処置に有効な量で投与するステップを含む方法を提供する。本方法は、対象に抗ウイルス剤、例えば、バラピラビル（ｂａｌａｐｉｒａｖｉｒ）、クロロキン、セルゴシビル（ｃｅｌｇｏｓｉｖｉｒ）、イベルメクチンまたはＣａｒｉｃａ ｆｏｌｉａのうち１種または複数から選択される抗ウイルス剤を投与するステップをさらに含むことができる。ある特定の実施形態において、抗ウイルス剤は、第２の抗デング抗体分子、例えば、第１の抗デング抗体分子とは異なる本明細書に記載されている抗デング抗体分子である。他の実施形態において、抗ウイルス剤は、アルファ−グルコシダーゼＩ阻害剤（例えば、セルゴシビル）、アデノシンヌクレオシド阻害剤（例えば、ＮＩＴＤ００８）；ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤（例えば、ＮＩＴＤ１０７）、宿主ピリミジン生合成、例えば、宿主ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）の阻害剤（例えば、ＮＩＴＤ−９８２およびブレキナル）、ウイルスＮＳ４Ｂタンパク質の阻害剤（例えば、ＮＩＴＤ−６１８）およびイミノ糖（例えば、ＵＶ−４）から選択される。本方法は、対象にワクチン、例えば、デングウイルスワクチンを投与するステップをさらに含むことができる。一部の実施形態において、抗体分子の投与は、非経口的または静脈内である。
本開示は、予防方法も提供する。一部の実施形態において、その時点でデングウイルスに感染していない対象に本明細書に開示されている抗体分子を投与することにより、デングウイルス感染を防止する方法が提供される。例えば、ある特定の態様において、本開示は、デングウイルスに罹患する患者リスクを低下させる方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載されている単離された抗体分子を、前記ウイルスに罹患するリスクを低下させるのに有効な量で投与するステップを含む方法を提供する。例えば、デングウイルスに罹患するリスクは、例えば、少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて低下され得る。一部の実施形態において、本抗体分子は、デングウイルスに感染していない患者に与えられ、その結果、感染が起こった場合、疾患の経過は、抗体分子を受けていない同様の患者における疾患の経過よりも軽度となる可能性がある。例えば、本抗体分子は、デング熱発症リスクを低下させることができる（例えば、患者は、無症候性感染を経験する可能性がより高くなる）。デング熱発症リスクは、例えば、抗体分子を受けていない患者と比較して、少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて低下され得る。一部の実施形態において、デング熱がデング出血熱へと進行するリスクは、例えば、抗体分子を受けていない患者と比較して、少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて低下され得る。
本開示は、デングウイルスの伝染を低下または防止する方法も提供する（例えば、対象（例えば、ヒト）および蚊の間の伝染を低下または防止する）。ある特定の実施形態において、対象は、デングウイルスに感染している。他の実施形態において、対象は、その時点ではデングウイルスに感染していないが、デングウイルス感染のリスクがある。例えば、ある特定の態様において、本開示は、デングウイルスの伝染を低下または防止する方法（例えば、対象（例えば、ヒト）および蚊の間のデングウイルスの伝染を低下または防止する）であって、対象に、本明細書に記載されている単離された抗体分子を、デングウイルスの伝染を低下させるのに有効な量で投与するステップを含む方法を提供する。例えば、対象から蚊へのデングウイルスの伝染は、例えば、本明細書に記載されている蚊モデルによって測定される通り、例えば、抗体分子を受けていない対象からの伝染と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％低下され得る。結果として、一部の実施形態において、感染蚊から非感染対象（例えば、ヒト）へのデングウイルスの伝染は、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％さらに低下され得る。
ある特定の態様において、本開示は、生物学的試料におけるデングウイルスを検出する方法であって、（ｉ）試料または対象（および任意選択で、参照試料または対象）を、本明細書に記載されている抗体分子に、抗体分子とポリペプチドとの相互作用が起こるのを可能とする条件下で接触させるステップと、（ｉｉ）抗体分子と、試料または対象（および任意選択で、参照試料または対象）との間の複合体の形成を検出するステップとを含む方法を提供する。
一部の態様において、本開示は、抗体Ａ１１のＶＨと比べて位置２６の欠失を有するＶＨ領域を含む抗デング抗体分子を提供する。例えば、請求項に記載の抗デング抗体分子は、抗体Ａ１１のＶＨと比べて約１〜３０、５〜３０、１０〜３０、１５〜３０または２０〜２５個の間の変異を有するＶＨ領域を有することができる。
一部の態様において、本開示は、配列番号３の配列、または配列番号３と比べて１、２、３、４、５、１０もしくは１５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１を含む、デングウイルスに結合することができる抗体分子を提供する。一部の実施形態において、変異は、置換、例えば、保存的置換である。
ある特定の態様において、本開示は、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）、または配列番号１１と比べて１、２、３、４、５、１０もしくは１５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ１を含む、デングウイルスに結合することができる抗体分子を提供する。一部の実施形態において、変異は、欠失および置換、例えば、保存的置換から独立的に選択される。この段落の抗体分子は、本願を通じて、例えば、前段落に記載されている特色を有することもできる。
一部の態様において、本開示は、配列番号４の配列、または配列番号４と比べて１、２、３、４、５、１０もしくは１５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２を含む、デングウイルスに結合することができる抗体分子を提供する。一部の実施形態において、変異は、置換、例えば、保存的置換である。この段落の抗体分子は、本願を通して、例えば、前の２段落に記載されている特色を有することもできる。
ある特定の態様において、本開示は、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）もしくはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８４もしくは配列番号８５と比べて１、２、３、４、５もしくは１０個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む、デングウイルスに結合することができる抗体分子を提供する。一部の実施形態において、変異は、欠失および置換、例えば、保存的置換から独立的に選択される。この段落の抗体分子は、本願を通じて、例えば、前段落に記載されている特色を有することもできる。
一部の実施形態において、本抗体分子は、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４から選択される、２種またはそれを超える、例えば、３または４種のデングウイルス血清型のＥＤＩＩＩに、前記２種またはそれを超える血清型のそれぞれに対し約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、４、３、２、１、０．５、０．２、０．１、０．０５または０．０１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合することができる。
一部の実施形態において、本抗体分子は、本明細書に記載されている可変領域（例えば、本明細書に開示されているＦＲ領域）と配列が同一の、またはそれから１、２、３もしくは４アミノ酸が異なる可変領域を有する。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、完全抗体またはその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））である。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、モノクローナル抗体または単一特異性を有する抗体である。本抗デング抗体分子は、ヒト化、キメラ、ラクダ科動物、サメまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ作製された抗体分子となることもできる。一部の実施形態において、そのうちの抗デング抗体分子は、ヒト化抗体分子である。本抗デング抗体分子の重および軽鎖は、全長（例えば、抗体は、少なくとも１本または少なくとも２本の完全重鎖と、少なくとも１本または少なくとも２本の完全軽鎖とを含むことができる）となることができる、あるいは抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ断片、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）（ｄＡｂ）、二価もしくは二重特異的抗体またはこれらの断片、これらの単一ドメインバリアント、またはラクダ科動物抗体）を含むことができる。
ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される；特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、より詳細には、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２）の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（Ｆｃ）を有する。一部の実施形態において、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、例えば、カッパまたはラムダ、一部の実施形態においては、カッパ（例えば、ヒトカッパ）の軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。一部の実施形態において、定常領域は、変更され、例えば、変異されて、本抗デング抗体分子の特性を修飾する（例えば、次のうち１種または複数を増加または減少させる：Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能）。例えば、定常領域は、位置２３４（例えば、ＬからＡ）、２３５（例えば、ＬからＡ）、２９６（例えば、ＭからＹ）、２９７（例えば、ＮからＡまたはＧまたはＱ）、２９８（例えば、ＳからＴ）、３００（例えば、ＴからＥ）、４７７（例えば、ＨからＫ）および４７８（例えば、ＮからＦ）を変異させて、Ｆｃ受容体結合を変更することができる。
一部の実施形態において、本抗体分子は、ヒト化抗体分子である。
一部の実施形態において、本抗体分子は、単離されたまたは組換えである。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ヒトまたはヒト化フレームワーク領域とＣＤＲ（相補性決定領域）の組合せを含む。
本開示は、本明細書に記載されている抗デング抗体分子の重および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。例えば、本開示は、表１に係る抗デング抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８もしくはＣ８８のそれぞれ重および軽鎖可変領域をコードする第１および第２の核酸、またはこれらと実質的に同一の配列を提供する。例えば、本核酸は、表１に係る抗デング抗体分子、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８もしくはＣ８８をコードするヌクレオチド配列、またはヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、または上述のヌクレオチド配列から３、６、１５、３０もしくは４５ヌクレオチド以下が異なる配列）を含むことができる。ある特定の実施形態において、本核酸は、表２に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。ある特定の実施形態において、本核酸は、表２に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える置換、挿入もしくは欠失、例えば、保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。一部の実施形態において、本核酸は、表２に表記されているアミノ酸配列またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１、２、３個もしくはそれを超える変異（例えば、置換、挿入または欠失、例えば、保存された置換）を有する配列）を有する重および軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。一部の実施形態において、この段落に記す構造的特色を有する核酸は、デングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する抗体分子またはその部分をコードする。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
本開示は、例えば、低ストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシーもしくは高ストリンジェンシーまたは本明細書に記載されている他のハイブリダイゼーション条件下で、表１の抗体、例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８をコードする核酸配列およびその相補体にハイブリダイズする核酸配列、例えば、核酸も提供する。本願は、例えば、低ストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシーもしくは高ストリンジェンシーまたは本明細書に記載されている他のハイブリダイゼーション条件下で、表４の核酸配列およびその相補体も開示する。一部の実施形態において、本核酸は、表４の配列、その相補体または上述の配列のいずれかの部分と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれより高く同一である。一部の実施形態において、この段落に記す構造的特色を有する核酸は、デングウイルス、例えば、ＤＶ−４に対する改善された（例えば、Ａ１１と比べて）親和性または中和活性等、１種または複数の有利な特性を有する抗体分子またはその部分をコードする。一部の実施形態において、有利な特性は、リスト１の特性、例えば、特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）または（ｘ）のうち１種または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６種または全種）である。
ある特定の態様において、本開示は、本明細書に記載されている核酸を含有する宿主細胞およびベクターを特色とする。本核酸は、単一のベクターに、または同じ宿主細胞もしくは別々の宿主細胞に存在する別々のベクターに存在し得る。本宿主細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞または原核細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉとなり得る。例えば、哺乳動物細胞は、培養された細胞または細胞株となり得る。例示的な哺乳動物細胞は、ヒト細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、リンパ球細胞株（例えば、ＮＳ０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞およびトランスジェニック動物由来の細胞を含む。
一部の態様において、本開示は、本明細書に記載されている抗体分子を用意する方法を提供する。本方法は、ＥＤＩＩＩ抗原に特異的に結合する抗体分子を用意するステップと、抗体（例えば、定常領域、フレームワークおよび／またはＣＤＲ）に１個または複数の変異を作製するステップと、抗体分子が、ＥＤＩＩＩ抗原に特異的に結合するか評価するステップ、またはデングウイルス機能の阻害における抗体分子の有効性を評価するステップとを含むことができる。本方法は、本抗体分子を精製するステップをさらに含むことができる。例えば、本抗体分子は、例えば、親和性クロマトグラフィー、例えば、プロテインＡクロマトグラフィーを含む、１種または複数のクロマトグラフィーステップによって精製することができる。本方法は、抗体分子を対象、例えば、ヒトまたは非ヒト動物に投与するステップをさらに含むことができる。
ある特定の態様において、本開示は、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と、本明細書に記載されている抗デング抗体分子のうち少なくとも１種とを含む組成物、例えば、医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、本抗体分子は、標識または治療剤にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、本組成物、例えば、本医薬組成物は、さらに本明細書に記載されている通り、本抗体分子と、第２の薬剤、例えば、治療剤との組合せ、または前述の抗体分子のうち２種またはそれ超の組合せを含む。
本明細書に開示されている抗体分子は、デングウイルスの１種または複数の活性を阻害することができる。例えば、本抗体分子は、ビリオンの表面におけるＥタンパク質のネイティブ構造を破壊し、例えば、ウイルスの不活性化をもたらすことができる。結果として、本抗体分子は、ウイルスを中和する、宿主細胞に侵入するその能力を阻害する、またはウイルス安定性を低下させることができる。一部の実施形態において、抗体分子は、１４００、１０００、８００、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、３５０、２００、１５０、１００、５０または２５ｎｇ／ｍｌ未満のまたはそれに等しいＥＣ５０またはＦＲＮＴ５０で、デングウイルスを中和する（例えば、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において）。一部の実施形態において、本抗体は、２０、１７．６、１５、１０、５、４、２、１．４、１または０．５０μｇ／ｍＬ未満のまたはそれに等しいＩＣ５０で、デングウイルスを中和する（例えば、フォーカス減少中和検査またはウイルス活性の中和を評価するための関連する検査において）。一部の実施形態において、ＤＶ−４の中和が検査され、一部の実施形態において、ＤＶ−１、ＤＶ−２またはＤＶ−３のうち１種の中和が検査される。
対象は、哺乳動物、例えば、サル、霊長類、好ましくは、高等霊長類、例えば、ヒト（例えば、デングウイルスを有するまたはこれを有するリスクがある患者）となり得る。
本開示は、対象におけるデングウイルスを処置する方法であって、対象に、本明細書に記載されている抗デング抗体分子、例えば、治療有効量の抗デング抗体分子またはその抗原結合性部分を投与するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、デングウイルスを患う患者に投与され、ウイルス負荷の低下、および／または例えば、急な発熱、頭痛、筋肉および関節痛、減量、中枢神経系浸透および／または発疹から選択される少なくとも１種の症状の低下をもたらす。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、デングウイルスに感染するリスクのある患者に投与され、感染リスクの低下または感染が起きた場合は感染重症度の低下をもたらす。
本抗デング抗体分子は、全身的に（例えば、経口、非経口、皮下、静脈内、直腸、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、経皮または吸入もしくは腔内設置による）、局所的にまたは鼻、咽頭および気管支等の粘膜への塗布により対象に投与することができる。
本明細書に記載されている方法および組成物は、他の治療様式と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、本明細書に記載されている方法は、本明細書に記載されている抗デング抗体分子を、デングウイルスのための第２の処置または予防薬と組み合わせて、前記障害の処置または防止に有効な量で対象に投与するステップを含む。本抗体分子および第２の薬剤は、同時にまたは連続的に投与することができる。
本抗デング抗体分子および他の治療様式のいずれかの組合せおよび順序を使用することができる。本抗デング抗体分子および／または他の治療様式は、活性感染の期間に、または寛解もしくはより活性の低い疾患の期間に投与することができる。本抗デング抗体分子および他の治療様式は、処置前に、処置と同時発生的に、処置後に、または感染の寛解の際に投与することができる。
一部の態様において、本開示は、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの試料（例えば、生物学的試料、例えば、血液または血清）におけるデングウイルスの存在を検出するための方法を提供する。本明細書における方法を使用して、評価（例えば、対象における本明細書に記載されている障害、例えば、デングウイルスの処置もしくは進行をモニター、診断および／またはステージ分類）することができる。本方法は、（ｉ）相互作用が起こることを可能とする条件下で、本明細書に記載されている抗デング抗体分子を試料（および任意選択で、参照、例えば、対照試料）と接触させるステップ、またはこれを対象に投与するステップと、（ｉｉ）抗体分子および試料（および任意選択で、参照、例えば、対照試料）の間の複合体の形成が為されているか検出するステップとを含むことができる。複合体の形成は、デングウイルスの存在を示し、本明細書に記載されている処置の適合性または必要を示すことができる。本方法は、例えば、免疫組織化学的検査、免疫細胞化学的検査、ＦＡＣＳ、抗体分子複合体形成した磁気ビーズ、ＥＬＩＳＡアッセイまたはＰＣＲ技法（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ）に関与し得る。
典型的には、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ診断方法において使用される本抗デング抗体分子は、検出可能物質で直接的にまたは間接的に標識されて、結合したまたは結合していない結合剤の検出を容易にする。適した検出可能物質は、様々な生物学的活性酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、常磁性（例えば、核磁気共鳴活性）材料および放射性材料を含む。
一部の態様において、本開示は、本明細書に記載されている抗デング抗体分子と、使用説明書とを含む、診断用または治療用キットを提供する。
本開示は、前述の態様および／または実施形態のいずれか１種または複数のあらゆる組合せ、ならびに詳細な説明および実施例に表記されている実施形態のいずれか１種または複数との組合せを考慮する。
本明細書における組成物および方法の他の特色、目的および利点は、記載および図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
図面および表を本明細書に提示する。
図面のそれぞれをより詳細に本明細書に記載する。
図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図１Ａ〜図１Ｉは、数種類の抗デングＥＤＩＩＩ抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、ある特定の目的の残基を囲む（優先権文書においては灰色の背景で示す）。 図２は、生きたウイルスを使用したフォーカス減少中和検査の結果を描写し、抗体Ｂ１１が、ｍＡｂ Ａ１１よりも、ＤＶ４の中和を改善することを示す。 図３は、ＤＶ４を中和する抗体Ａ１１およびＢ１１の反復的アッセイを示す。 図４は、数種類のヒト化ＥＤＩＩＩ抗体のフレームワークの機能的評価である。 図５は、抗デング抗体のＮ末端の逆変異による抗体親和性を示す。重鎖ＦＷ「０４」は、例えば、ｍＡｂ Ｂ４８と同じ重鎖フレームワークアミノ酸配列を有するフレームワークの種類を指す。軽鎖ＦＷ「０８」は、例えば、ｍＡｂ Ｂ４８と同じ軽鎖フレームワークアミノ酸配列を有するフレームワークの種類を指す。ｍＡｂ Ｂ４８の重および軽鎖フレームワーク配列を表１および２に示す。 図６は、ある特定の点変異の組み合わせが、ＥＤＩＩＩに対する親和性改善をもたらすことを示す。軽鎖ＦＷ「０８」は、例えば、ｍＡｂ Ｄ８８と同じ軽鎖フレームワークアミノ酸配列を有するフレームワークの種類を指す。ｍＡｂ Ｄ８８の軽鎖フレームワーク配列を表１および２に示す。 図７は、他の変異と組み合わせた、位置９８からＡ、ＶまたはＳへの設定の結果を示す。 図８は、選択抗体のＥＤＩＩＩ結合親和性を決定するための競合ＥＬＩＳＡの結果を示す。 図９は、４種のデングウイルス血清型のＥＤＩＩＩへの選択された抗デング抗体の結合を示す。 図１０Ａは、選択されたデングウイルス分離菌のＥＤＩＩＩアミノ酸配列の系統発生的関係性の概要を述べる。「ＤＥＮＶ」は、デングウイルスの略称であり、ＤＥＮＶ−２は、血清型ＤＶ−２を表し、ＤＥＮＶ−３は、血清型ＤＶ−３を表し、ＤＥＮＶ−４は、血清型ＤＶ−４を表す。 図１０Ｂは、多様なデングウイルス分離菌のパネルへの抗体Ｄ８８の結合を示す。＊は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和検査に使用した株を示す。 図１１は、デングウイルスの様々な株に対する選択された抗デング抗体の親和性を示す。 図１２は、フォーカス減少中和検査においてデングウイルス血清型ＤＶ−４を中和する数種類の抗デング抗体の能力を示す。 図１３は、フォーカス減少中和検査においてデングウイルス血清型ＤＶ−３を中和する数種類の抗デング抗体の能力を示す。この検査においてＤＶ−３ Ｈ８７を使用した。 図１４は、フォーカス減少中和検査においてデングウイルス血清型ＤＶ−４を中和する数種類の抗デング抗体の能力を示す。 図１５Ａ〜図１５Ｃは、熱シフト解析アッセイ（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）に基づく選択された抗デング抗体の熱安定性を示す。 図１５Ａ〜図１５Ｃは、熱シフト解析アッセイ（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）に基づく選択された抗デング抗体の熱安定性を示す。 図１５Ａ〜図１５Ｃは、熱シフト解析アッセイ（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）に基づく選択された抗デング抗体の熱安定性を示す。 図１６は、ＡＧ１２９マウスモデルにおける、デングウイルスに感染したマウスの生存における抗体Ｄ８８の効果を示す。 図１７は、ＡＧ１２９マウスモデルにおける、デングウイルスに感染したマウスの体重変化における抗体Ｄ８８の効果を示す。 図１８は、ＡＧ１２９マウスモデルにおける、デングウイルス血清型２（株ＮＧＣ）に感染したマウスにおけるウイルス血症における抗体Ｄ８８の効果を示す。 図１９は、フォーカス減少中和検査（ＦＲＮＴ）における、Ｃ６／３６昆虫細胞において繁殖したデングウイルス血清型ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４を中和する抗体Ｄ８８の能力を示す。 図２０は、フォーカス減少中和検査（ＦＲＮＴ）における、Ｖｅｒｏ（サル）細胞において繁殖したデングウイルス血清型ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４を中和する抗体Ｄ８８の能力を示す。 図２１は、フォーカス減少中和検査（ＦＲＮＴ）における、Ｖｅｒｏ（サル）細胞において繁殖したデングウイルスＤＥＮＶ−４株Ｈ２４１を中和する抗体Ｄ８８およびＡ１１の能力を示す。 図２２は、高速分子ふるいクロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）によって評価される、抗体Ａ４８、Ｃ８８およびＤ８８の凝集傾向を示す。 図２３は、抗体４Ｅ１１と比較した、ＤＥＮＶ−４に対する抗体Ｄ８８の親和性増と、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２およびＤＥＮＶ−３に対する同時発生的親和性改善を描写する。
表の簡単な説明
表のそれぞれをより詳細に本明細書に記載する。
表１は、例示的な抗デング抗体の配列の概要を述べる。
表２は、表１の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を描写する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引き、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲをイタリック体にし、ある特定の目的の残基を灰色の背景で示す。
表３は、表１のＣＤＲのアミノ酸配列を描写する。
表４は、表１の抗体をコードする核酸配列の概要を述べる。
表５は、表４に概要を述べる核酸配列を描写する。
表６は、本願を通じて記載されている追加的なアミノ酸配列を描写する。
高親和性および特異性で、デングウイルスエピトープ、例えば、ＥＤＩＩＩに結合する抗体分子が本明細書に開示されている。有利には、本明細書における抗体分子のうち数種類は、デングウイルス血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４のＥＤＩＩＩに高親和性で結合する。抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞および抗体分子を作製するための方法も提供される。本明細書に開示されている抗デング抗体分子を使用して（単独で、または他の薬剤もしくは治療様式と組み合わせて）、デングウイルス、例えば、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４を処置、防止および／または診断することができる。本明細書において、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４は、それぞれＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４と称されることもある。
定義
本明細書において、冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、この冠詞の文法上の目的語の１個または２個以上（例えば、少なくとも１個）を指す。
用語「または」は、文脈がこれ以外を明らかに示さない限り、用語「および／または」を意味するように本明細書において使用され、これと互換的に使用される。
「約」および「およそ」は、一般に、測定の性質または精度を考慮して、測定された含量に関する許容できる程度の誤差を意味する。例示的な程度の誤差は、所定の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には、１０％以内、より典型的には、５％以内である。
本明細書に開示されている組成物および方法は、指定された配列、またはそれと実質的に同一もしくは同様の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一もしくはより高い配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列の文脈において、用語「実質的に同一」は、第１および第２のアミノ酸配列が、共通構造ドメインおよび／または共通機能活性を有することができるように、ｉ）第２のアミノ酸配列における整列されたアミノ酸残基と同一である、またはｉｉ）その保存的置換である十分なまたは最小数のアミノ酸残基を含有する第１のアミノ酸を指すように本明細書において使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書に提供される配列に対し少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する共通構造ドメインを含有するアミノ酸配列。
ヌクレオチド配列の文脈において、用語「実質的に同一」は、第１および第２のヌクレオチド配列が、共通機能活性を有するポリペプチドをコードするように、または共通構造的ポリペプチドドメインもしくは共通機能的ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列における整列されたヌクレオチドと同一である十分なまたは最小数のヌクレオチドを含有する第１の核酸配列を指すように本明細書において使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書に提供される配列に対し少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するヌクレオチド配列。
用語「機能的バリアント」は、天然起源の配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有する、または実質的に同一のヌクレオチド配列にコードされるポリペプチドを指し、天然起源の配列の１種または複数の活性を有することができる。
２種のアミノ酸配列または２種の核酸配列のパーセント同一性を決定するために、配列を最適な比較目的のために整列する（例えば、最適な整列のために第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために非相同配列を無視することができる）。好まれる実施形態において、比較目的のために整列された参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、例えば、少なくとも４０％、５０％、６０％、例えば、少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、相当するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置が、第２の配列における相当する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドに占有されている場合、分子は、該位置が同一である。
２配列間のパーセント同一性は、２配列の最適な整列のために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一位置の数の関数である。
配列の比較および２配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。一部の実施形態において、２種のアミノ酸配列の間のパーセント同一性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかと、ギャップウェイト１６、１４、１２、１０、８、６または４および長さウェイト１、２、３、４、５または６を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて入手可）におけるＧＡＰプログラムに取り込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（（１９７０年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．４８巻：４４４〜４５３頁）アルゴリズムを使用して決定される。ある特定の実施形態において、２種のヌクレオチド配列の間のパーセント同一性は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスならびにギャップウェイト４０、５０、６０、７０または８０および長さウェイト１、２、３、４、５または６を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて入手可）におけるＧＡＰプログラムを使用して決定される。適したパラメータのセットの１種（および他に指定がなければ使用するべきセット）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４およびフレームシフトギャップペナルティ５によるＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスである。
２種のアミノ酸またはヌクレオチド配列の間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、ギャップ長さペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９年）ＣＡＢＩＯＳ、４巻：１１〜１７頁）のアルゴリズムを使用して決定することができる。
本明細書に記載されている核酸およびタンパク質配列を「問い合わせ配列」として使用して、公開データベースに対する検索を実行して、例えば、他のファミリーメンバーまたは関係する配列を同定することができる。斯かる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３〜１０頁のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２により実行して、本明細書に記載されている核酸と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３により実行して、本明細書に記載されているタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためのギャップ付けした整列を得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５巻：３３８９〜３４０２頁に記載されている通りにＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付けしたＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照されたい。
本明細書において、用語「低ストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシー、高ストリンジェンシーまたは超高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする」とは、ハイブリダイゼーションおよび洗浄のための条件について記載する。ハイブリダイゼーション反応を行うためのガイダンスは、ここに本明細書の一部を構成するものとしてその内容を援用するＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年）６．３．１〜６．３．６章に見出すことができる。この参考文献には水性および非水性方法が記載されており、いずれを使用してもよい。本明細書に参照されている特異的ハイブリダイゼーション条件を次に示す：１）６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、約４５℃における低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件と、続く０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、少なくとも５０℃（洗浄の温度は、低ストリンジェンシー条件に対し５５℃まで増加させることができる）における２回の洗浄；２）６×ＳＳＣ、約４５℃における中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件と、続く０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６０℃における１回または複数の洗浄；３）６×ＳＳＣ、約４５℃における高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件と、続く０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃における１回または複数の洗浄；および好ましくは４）超高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、６５℃と、続く０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６５℃における１回または複数の洗浄。超高ストリンジェンシー条件（４）が適した条件であり、他に指定がなければ使用するべき条件である。
本明細書に記載されている分子が、その機能に実質的な効果がない追加的な保存的または非必須アミノ酸置換を有し得ることが理解される。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられた置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ−分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（単鎖の場合）は、本明細書において互換的に使用される。
用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」または「ポリヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用される。
用語「単離された」は、本明細書において使用される場合、その本来またはネイティブ環境（例えば、天然起源の場合は自然環境）から除去された材料を指す。例えば、生きた動物に存在する天然起源のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、ヒトの介入によって、天然の系において共存する材料の一部または全てから分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。斯かるポリヌクレオチドは、ベクターの一部となることができる、および／または斯かるポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、組成物の一部となることができ、斯かるベクターまたは組成物が、これが本来存在した環境の一部ではないという点において、依然として単離されている。
本明細書において、用語（例えば、デングウイルス感染を）「処置する」とは、ウイルスに感染し、ウイルスの症状を経験する対象（例えば、ヒト）が、実施形態において、抗体分子が投与される場合に、抗体が投与されない場合よりも、重症度の低い症状を患う、および／またはより速く回復するであろうことを意味する。実施形態において、感染が処置される場合、対象におけるウイルスを検出するアッセイは、感染に有効な処置後に少ないウイルスを検出するであろう。例えば、本明細書に記載されている抗体分子等、抗体分子を使用した診断アッセイは、感染の有効処置のための抗体分子の投与後に、患者の生物学的試料において少ないウイルスを検出するまたは全く検出しないであろう。ＰＣＲ（例えば、ｑＰＣＲ）等、他のアッセイを使用して、患者における処置をモニターし、例えば、患者におけるウイルス感染の処置後に、存在、減少した存在（または非存在）を検出することもできる。処置は、例えば、部分的にまたは完全に緩和、寛解、軽減、阻害、重症度を低下、および／または発生率を低下させることができ、任意選択で、特定の疾患、障害、および／または状態（例えば、デングウイルス）の効果または症状、特色および／または原因の１種または複数の顕在化の発病を遅延させることができる。実施形態において、処置は、関連する疾患、障害および／もしくは状態のある特定の徴候を提示しない対象の処置である、ならびに／または疾患、障害および／もしくは状態の初期徴候のみを提示する対象の処置である。実施形態において、処置は、関連する疾患、障害および／または状態の１種または複数の確立された徴候を提示する対象の処置である。実施形態において、処置は、デングウイルスを患うと診断された対象の処置である。
本明細書において、用語（例えば、デングウイルス感染を）「防止する」とは、対象（例えば、ヒト）が、ウイルスに曝露される（例えば、１日、２日、１週間、２週間、３週間または１ヶ月またはそれより）前に抗体を受けた場合、対象が、ウイルス（例えば、デングウイルス）に感染する可能性が低いことを意味する。
本明細書において、用語「フレームワーク」、「ＦＷ」および「ＦＲ」は、互換的に使用され、本文書およびその優先権文書において同一の意義を有する。
本明細書における組成物および方法の様々な態様について、さらに詳細に後述する。追加的な定義は、本明細書を通じて示す。
抗デング抗体分子
抗デング抗体の例示的な配列について、下表１〜４で説明する。
Ａ１１およびＢ１１は、マウス抗体であり、表１の他の抗体は、ヒト化抗体である。
表２． 表１の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列の描写。Ｋａｂａｔ方式に従って定義されたＣＤＲには下線を引き太字にする一方、Ｃｈｏｔｈｉａ方式に従って定義されたＣＤＲはイタリック体にした。ある特定の目的の残基は、灰色の背景で示す。欠失は、カレット（ｃａｒｅｔ）記号（＾）で示す。
本願を通じて、マウス抗体Ａ１１の可変領域に基づき、アミノ酸位置の参照が為される。マウス抗体Ｂ１１の可変領域は、Ａ１１と比べて位置２６に欠失を有する。表１におけるヒト可変領域配列は、Ａ１１の位置６にグルタミン酸配列の欠失を有する。結果的に、Ａ１１と比べて欠失を保有する配列は、相殺されるナンバリング方式を使用する。例えば、Ａ４８重鎖は、Ａ１１と比べて位置６にグルタミン酸配列の欠失を有する。結果として、Ａ４８ ＶＨの位置２６（セリン）は、実際には、Ａ４８ ＶＨ配列（配列番号１６）の２５番目のアミノ酸である。別の例として、Ｄ８８重鎖は、Ａ１１の位置６にグルタミン酸配列の欠失およびＡ１１と比べて位置２６にセリンの欠失を有する。結果として、Ｄ８８ ＶＨの位置３３（バリン）は、実際には、Ｄ８８ ＶＨ配列（配列番号１）の３１番目のアミノ酸である。
抗体のいくつかの構造的特色は、表２におけるＶＨおよびＶＬ配列に基づき記述することができる。Ｂ１１は、Ａ１１ ＶＨ領域と比べて位置２６に欠失を有する。Ｄ８８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べて位置２６の欠失およびＴ３３Ｖ変異を有するヒト化抗体である（依然としてＡ１１ナンバリングと一貫）。Ｆ３８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べて位置２６の欠失ならびにＴ３３ＶおよびＥ４３Ｇ変異を有するヒト化抗体である。Ａ４８は、Ａ１１と同じＣＤＲを有するヒト化抗体である。Ｃ８８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＴ３３Ｖ変異を有するヒト化抗体である。Ｆ１０８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＴ３３ＶおよびＥ４３Ｇ変異を有するヒト化抗体である。Ｂ４８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べて位置２６に欠失を有するヒト化抗体である。Ａ６８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＡ９８Ｖ変異を有するヒト化抗体である。Ａ１００は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＡ９８Ｓ変異を有するヒト化抗体である。Ｃ５８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＧ２７ＹおよびＦ２８Ｗ変異を有するヒト化抗体である。Ｃ７８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＫ３１ＱおよびＴ３３Ｖ変異を有するヒト化抗体である。Ｃ６８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＫ３１ＳおよびＴ３３Ｖ変異を有するヒト化抗体である。Ｄ９８は、Ａ４８ ＶＨ領域と比べてＧ２７Ａ変異を有するヒト化抗体である。
表１および２の抗体の他の変種が想定される。例えば、本願は、Ｂ４８と比べてＡ９８Ｖ変異を有する抗体Ｂ４８＋Ａ９８Ｖ；Ａ４８と比べてＶ２Ｌ変異を有するＡ４８＋Ｖ２Ｌ；Ａ４８と比べてＩｎｓＥ６変異を有するＡ４８＋ＩｎｓＥ６；Ｂ４８と比べてＶ２Ｌ変異を有するＢ４８＋Ｖ２Ｌ；Ｂ４８と比べてＩｎｓＥ６変異を有するＢ４８＋ＩｎｓＥ６；Ａ４８と比べてＦ２８ＷおよびＴ３３Ｖ変異を有するＤ１１８；Ａ４８と比べてＧ２７Ａ、Ｆ２８ＷおよびＴ３３Ｖ変異を有するＤ１２８；Ａ４８と比べてＧ２７Ｙ、Ｆ２８ＡおよびＴ３３Ｖ変異を有するＤ１３８；Ａ４８と比べてＧ２７ＹおよびＴ３３Ｖ変異を有するＤ１４８；Ａ４８と比べてＧ２７Ｙ、Ｆ２８ＧおよびＴ３３Ｖ変異を有するＤ１５８；Ａ４８と比べてＦ２８ＹおよびＴ３３Ｖ変異を有するＤ１６８；Ａ４８と比べてＴ３３ＶおよびＡ９８Ｖ変異を有するＣ９８；Ａ４８と比べてＴ３３ＶおよびＡ９８Ｓ変異を有するＣ１２８；Ａ４８と比べてＤｅｌ２６、Ｔ３３ＶおよびＡ９８Ｖ変異を有するＤ１７８；ならびにＡ４８と比べてＤｅｌ２６、Ｔ３３ＶおよびＡ９８Ｓ変異を有するＤ１８８を提供する。
一部の実施形態において、本抗体分子は、Ａ１１と比べてＶＨ Ｔ３３Ｖ変異を含む。より具体的には、一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表１の抗体（例えば、Ｄ８８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８）のＶＨ領域のＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表１の抗体（例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８）のＶＨ領域のＣＤＲ１ならびにＣＤＲ２およびＣＤＲ３の一方または両方を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表２のＶＨおよび／またはＶＬ領域に存在する別の１、２、３、４または５（例えば、まとめて６）個のＣＤＲと組み合わせて、表１の抗体（例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８）のＶＨ領域のＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、配列番号３のＶＨ ＣＤＲ１を含む。例えば、本抗デング抗体分子は、表３のＶＨ ＣＤＲ２および／またはＶＨ ＣＤＲ３、例えば、配列番号４のＶＨ ＣＤＲ２および配列番号５のＶＨ ＣＤＲ３と組み合わせて、配列番号３のＶＨ ＣＤＲ１を含むことができる。さらなる例として、本抗デング抗体分子は、表２のＶＨおよび／またはＶＬ領域に存在する別の１、２、３、４または５（例えば、まとめて６）個のＣＤＲと組み合わせて、配列番号３のＶＨ ＣＤＲ１を含むことができる。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、Ａ１１と比べてＶＨ Ｆ６５Ｌ変異を含む。Ａ１１のＫａｂａｔ定義されたＣＤＲにおいて、位置６５は、ＣＤＲ残基であるが、Ａ１１のＣｈｏｔｈｉａ定義されたＣＤＲにおいて、位置６５は、フレームワーク残基である。一部の実施形態において、デングウイルスに対する抗体分子の親和性は、Ｆ６５Ｌ変異による影響を受けない。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表１の抗体（例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８）のＶＨ領域のＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表１の抗体（例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８）のＶＨ領域のＣＤＲ２ならびにＣＤＲ１およびＣＤＲ３の一方または両方を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表２のＶＨおよび／またはＶＬ領域に存在する別の１、２、３、４または５（例えば、まとめて６）個のＣＤＲと組み合わせて、表１の抗体（例えば、Ｄ８８、Ａ４８、Ｆ３８、Ｆ１０８またはＣ８８）のＶＨ領域のＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、配列番号４のＶＨ ＣＤＲ２を含む。例えば、本抗デング抗体分子は、表３のＶＨ ＣＤＲ１および／またはＶＨ ＣＤＲ３、例えば、配列番号３のＶＨ ＣＤＲ１および配列番号５のＶＨ ＣＤＲ３と組み合わせて、配列番号４のＶＨ ＣＤＲ２を含むことができる。さらなる例として、本抗デング抗体分子は、表２のＶＨおよび／またはＶＬ領域に存在する別の１、２、３、４または５（例えば、まとめて６）個のＣＤＲと組み合わせて、配列番号４のＶＨ ＣＤＲ２を含むことができる。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、Ａ１１と比べてＶＨ Ｆ６５Ｌ変異およびＶＨ Ｔ３３Ｖ変異を含む。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、Ａ１１と比べてＶＨにおける位置２６にＳの欠失（ｄｅｌ２６）を含む。一部の実施形態において、本抗体分子は、ＶＨ Ｔ３３Ｖ変異および／またはＶＨ Ｆ６５Ｌ変異と組み合わせてｄｅｌ２６変異を含む。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、ｄｅｌ２６変異および表３の１種または複数のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義を使用して、表２のＶＨおよび／またはＶＬ領域における１、２、３、４、５または６個のＣＤＲと組み合わせて、ｄｅｌ２６変異を含む。
後述する実施例４に示す通り、重鎖のＮ末端は、変異に対し寛容性がある。したがって、一部の実施形態において、重鎖配列の位置１〜６は、表１の抗体と比べて１、２、３、４、５または６個の変異を有する。一部の実施形態において、抗体分子は、表２における重鎖配列の残基２、３、５または６のうち１種または複数（例えば、全種）に置換、挿入または欠失を有する。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、表２の重鎖配列の部分、例えば、アミノ酸位置２〜１１７、３〜１１７、４〜１１７、５〜１１７、６〜１１７、８〜１１７または１０〜１１７を含む。
後述する実施例５に示す通り、ＶＨにおける位置２７および２８は、変異に対し寛容性があり、一部の実施形態において、位置２７および／または２８の変異は、結合を増強させる。したがって、一部の実施形態において、位置２７および２８の一方または両方は、表１の抗体と比べて変異を有する。
実施例５は、ＶＨにおける位置９８が、変異に対し寛容性があることも示し、一部の実施形態において、位置９８の変異は、結合を増強させる。したがって、一部の実施形態において、位置９８は、表１の抗体と比べて変異を有する。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表２の重鎖定常領域、軽鎖定常領域ならびに重および軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表３の１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む重鎖定常領域、軽鎖定常領域および可変領域を含む。
一部の実施形態において、重鎖可変領域は、表１の重鎖可変領域であり、ＶＨにおける残基９８は、いずれのアミノ酸でもよい。ある特定の実施形態において、残基９８は、いずれの無電荷アミノ酸でもよい。一部の実施形態において、位置９８は、Ａ、ＶまたはＳとなり得る。後述する実施例５は、位置９８に残基Ａ、ＶまたはＳを有する抗体が、ＥＤＩＩＩに対し優れた結合を有することを示す。
ヒト化プロセスにおいて、様々なフレームワーク領域（例えば、ＶＨ ＦＷ１）は、マウス抗体Ａ１１またはＢ１１由来の残基を含有するように逆変異させることができる。より広範には、一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表１のＶＨ領域の全体または部分の配列を含む。例えば、一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表１のＶＨ領域のアミノ酸５〜１１７、１０〜１１７、１５〜１１７、２０〜１１７、２５〜１１７、３０〜１１７または３２〜１１７を含む。一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、マウスＶＨ ＦＷ１領域（例えば、Ａ１１またはＢ１１に存在）またはヒトＶＨ ＦＷ１領域（例えば、表１の抗体に存在する、またはヒト生殖系列ＶＨ ＦＷ１配列）から選択されるＶＨ ＦＷ１領域を含む。一部の実施形態において、ＶＨ ＦＷ１領域は、表１のＶＨ配列のアミノ酸１〜３１と比べて非同一性の１、２、３または４個以下の位置を有する。
一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、表１の抗体のＶＨ ＦＷ２領域を含む。一部の実施形態において、ＶＨ ＦＷ２領域は、表１のＶＨ配列のアミノ酸３７〜５０と比べて非同一性の１、２、３または４個以下の位置を有する。デングウイルスの２種以上の血清型由来のＥＤＩＩＩと交差反応することができる抗体分子は、数種類の有利な特性を有する。例えば、１種類の治療法を使用して、デングの複数の血清型を処置または診断することができる。加えて、医師は、適切な治療法を決定するために、いずれの血清型に患者が感染したか決定する必要がない。したがって、一部の実施形態において、本抗デング抗体分子は、高親和性で２、３、４種またはそれを超えるデングウイルス血清型に独立的に結合することができる。例えば、本抗体分子は、ＤＶ−１およびＤＶ−２の；ＤＶ−１およびＤＶ−３の；ＤＶ−１およびＤＶ−４の；ＤＶ−２およびＤＶ−３の；ＤＶ−２およびＤＶ−４の；ＤＶ−３およびＤＶ−４の；またはＤＶ−１およびＤＶ−２およびＤＶ−３；ＤＶ−１およびＤＶ−２およびＤＶ−４の；ＤＶ−１およびＤＶ−３およびＤＶ−４の；ＤＶ−２およびＤＶ−３およびＤＶ−４の；またはＤＶ−１およびＤＶ−２およびＤＶ−３およびＤＶ−４のＥＤＩＩＩに高親和性で独立的に結合することができる。ある特定の実施形態において、本抗体分子は、ＤＶ−４のＥＤＩＩＩおよび１種または複数の他のＤＶ血清型のＥＤＩＩＩに高親和性で独立的に結合することができる。
上述のデングウイルスの各血清型は、多数の株を含有するクラスである。本明細書に記載されている抗体分子は、反応性の十分な幅を示し、異なる血清型内の複数の株に結合する（図１１を参照）。したがって、一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体分子は、１種または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０、１５または２０、２５もしくは３０種またはそれを超える）デングウイルス株、例えば、ＤＥＮＶ−４ ＢＣ２、ＤＥＮＶ−４−Ｓｉｎｇ１０、ＤＥＮＶ−４ ＮｅｗＣａｌ０９、ＤＥＮＶ−４ Ｐｈｉｌ５６、ＤＥＮＶ−３ Ｓｉｎｇ０９、ＤＥＮＶ−３ Ｎｉｃ１０、ＤＥＮＶ−３ Ｈ８７、ＤＥＮＶ−２ Ｐｅｒｕ９５、ＤＥＮＶ−２ Ｓｉｎｇ０８、ＤＥＮＶ−２ ＮＧＣ、ＤＥＮＶ−１ Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＤＥＮＶ−２ Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ／１９４４（ＮＧＣ）、ＤＥＮＶ−３ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／１９５６（Ｈ８７）、ＤＥＮＶ−４ Ｍｅｘｉｃｏ／１９９７（ＢＣ２８７／９７）およびＤＥＮＶ−４ Ｈ２４１から選択される株、図１０Ａの系統樹に収載されている株、図１０Ｂおよび図１９〜図２１に示す株、本明細書の表６に収載されている株（例えば、ＥＤＩＩＩ配列が表６に示されているそれらの株）、ＡＴＣＣに寄託されている株、Ｗｏｒｌｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ Ａｒｂｏｖｉｒｕｓｅｓ（ＷＲＣＥＶＡ）に収載されている株（ｗｗｗ．ｎｉａｉｄ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌａｂｓａｎｄｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｄｍｉｄ／ｗｒｃｅｖａ／Ｐａｇｅｓ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐｘにて利用可）、ならびにＣＤＣ’ｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｒ Ｖｅｃｔｏｒ Ｂｏｒｎｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓに収載されている株（ｗｗｗ２ａ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｎｃｚｖｅｄ／ｄｖｂｉｄ／ｍｉｓｃ／ｒｅｇ．ａｓｐにて利用可）に結合するおよび／または中和する。
一部の実施形態において、本抗体分子は、ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４のうち１種または複数に高親和性で結合する。これらの血清型のそれぞれのＥタンパク質のＥＤＩＩＩアミノ酸配列は、一部の実施形態において、表６に示すＥタンパク質配列である。
一部の実施形態において、本明細書に開示されている抗体分子は、抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）を活性化しない。ＡＤＥについては、Ｂａｌｓｉｔｉｓら、Ｌｅｔｈａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｎｇｕｅ Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｍｉｃｅ Ｉｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ ｂｙ Ｆｃ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ ６巻（２号）：ｅ１０００７９０頁、ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１０００７９０により詳細に記載されている。簡潔に説明すると、ＡＤＥは、異なる血清型のデングウイルスによる２回の連続的デング感染を経験する人と、第１の感染の出現が、第２の感染をより重症にする（例えば、デング出血熱へと進行する可能性が高くなる）状況について説明する。ＡＤＥの機構は、抗デング抗体が、ウイルスおよび宿主細胞における抗体Ｆｃ受容体に同時に結合し、感染力を増加させるという可能性がある。本明細書に開示されているＦＲＮＴ実験から明らかな通り、本願は、感染力を増加させるのではなく低下させる多数の抗体分子を提供する。したがって、ある特定の実施形態において、本明細書に記載されている抗体分子は、患者におけるＡＤＥを活性化しない。一部の実施形態において、本抗体は、他の抗体（例えば、患者の内在性抗体）によって誘導されるＡＤＥを阻害する。
ある特定の実施形態において、本抗体分子は、ＥＤＩＩＩにおける直鎖状または立体構造エピトープに結合する。
本明細書において、用語「抗体分子」は、少なくとも１個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を指す。用語、抗体分子は、例えば、全長、成熟抗体および抗体の抗原結合性断片を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列（本明細書において、ＶＨと省略）および軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書において、ＶＬと省略）を含むことができる。別の例において、抗体分子は、２個の重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列および２個の軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列を含み、これにより、抗体全体の修飾によって産生することができる、または組換えＤＮＡ技術を使用してｄｅ ｎｏｖｏ合成されるＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、単鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二重特異的）およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体等、２個の抗原結合部位を形成する。これらの機能的抗体断片は、それらのそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥが挙げられるがこれらに限定されない抗体のいずれかのクラス、ならびに抗体のいずれかのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）に由来し得る。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルとなり得る。抗体は、ヒト、ヒト化、ＣＤＲ−グラフトまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ作製された抗体となることもできる。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有することができる。抗体は、例えば、カッパまたはラムダから選択される軽鎖を有することもできる。
抗原結合性断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片；（ｖｉ）ラクダ科動物またはラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）可変ドメイン；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２巻：４２３〜４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５巻：５８７９〜５８８３頁）を参照；（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に公知の数種類の従来技法を含む、いずれか適した方法を使用して得ることができ、断片は、インタクト抗体と同じ様式で、有用性に関してスクリーニングすることができる。
用語「抗体」は、インタクト分子と共にその機能的断片を含む。抗体の定常領域を変更、例えば、変異させて、抗体の特性を修飾することができる（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能のうち１種または複数を増加または減少させることができる）。
本明細書に開示されている抗体は、単一ドメイン抗体となることもできる。単一ドメイン抗体は、その相補性決定領域が、単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含むことができる。例として、重鎖抗体、軽鎖を天然に欠く抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体および抗体由来以外の単一ドメイン足場が挙げられるがこれらに限定されない。単一ドメイン抗体は、当技術のいずれか、またはいずれか将来的な単一ドメイン抗体となり得る。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギおよびウシが挙げられるがこれらに限定されない、いずれかの種に由来することができる。一部の態様において、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として公知の天然起源の単一ドメイン抗体である。斯かる単一ドメイン抗体は、例えばＷＯ９４０４６７８に開示されている。明確さのため、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、ＶＨＨまたはナノボディとして本明細書において公知であり、４鎖免疫グロブリンの従来のＶＨからこれを区別する。斯かるＶＨＨ分子は、Ｃａｍｅｌｉｄａｅ種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコにおいて産生される抗体に由来することができる。Ｃａｍｅｌｉｄａｅ以外の他の種も、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体を産生し得る；斯かるＶＨＨも考慮される。
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と命名されるより保存された領域を散りばめた、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と命名される高頻度可変性の領域へと細分することができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、多数の方法によって正確に定義されてきた（Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２号；Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ．ら（１９８７年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１〜９１７頁；およびＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義を参照）。一般には、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ（Ｄｕｅｂｅｌ， Ｓ．およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ， Ｒ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。一部の実施形態において、次の定義が使用される：重鎖可変ドメインのＣＤＲ１のＡｂＭ定義および他のＣＤＲに対しＫａｂａｔ定義。ある特定の実施形態において、全ＣＤＲに対しＫａｂａｔ定義が使用される。加えて、ＫａｂａｔまたはＡｂＭ ＣＤＲに関して記載した実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａ高頻度可変ループを使用して実行することもできる。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端へと次の順序で配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦＲを含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
本明細書において、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、この配列は、天然起源の可変ドメインのアミノ酸配列の全体または一部を含むことができる。例えば、この配列は、１、２個またはそれを超えるＮもしくはＣ末端アミノ酸を含んでいても含まなくてもよい、あるいはタンパク質構造の形成と適合性である他の変更を含んでいてよい。
用語「抗原結合性領域」は、Ｅタンパク質またはそのエピトープに結合する界面を形成する決定基を含む抗体分子の一部を指す。タンパク質（またはタンパク質ミメティック）に関して、抗原結合性領域は、典型的には、Ｅタンパク質に結合する界面を形成する１個または複数のループ（少なくとも、例えば、４アミノ酸またはアミノ酸ミミックの）を含む。典型的には、抗体分子の抗原結合性領域は、少なくとも１もしくは２個のＣＤＲ、またはより典型的には、少なくとも３、４、５もしくは６個のＣＤＲを含む。
用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書において、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を呈する。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え方法）によって作製することができる。
「有効にヒト」タンパク質は、中和抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を惹起しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、多数の状況において、例えば、抗体分子が、例えば、慢性または再発性疾患状態の処置において反復的に投与される場合に問題になることがある。ＨＡＭＡ応答は、血清からの抗体クリアランスの増加（例えば、Ｓａｌｅｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３２巻：１８０〜１９０頁（１９９０年）を参照）や、潜在的アレルギー反応（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、５巻：５１１７〜５１２３頁（１９８６年）を参照）により、反復的抗体投与を潜在的に無効にすることができる。
抗体分子は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体となり得る。一部の実施形態において、抗体は、組換えにより産生され得る、例えば、いずれか適したファージディスプレイまたはコンビナトリアル方法によって産生され得る。
抗体を作製するための様々なファージディスプレイおよびコンビナトリアル方法が、当技術分野で公知である（例えば、ここに本明細書の一部を構成するものとしてこれら全ての内容を援用する、Ｌａｄｎｅｒら米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら国際公開第９２／１８６１９号；Ｄｏｗｅｒら国際公開第９１／１７２７１号；Ｗｉｎｔｅｒら国際公開第９２／２０７９１号；Ｍａｒｋｌａｎｄら国際公開第９２／１５６７９号；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら国際公開第９３／０１２８８号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら国際公開第９２／０１０４７号；Ｇａｒｒａｒｄら国際公開第９２／０９６９０号；Ｌａｄｎｅｒら国際公開第９０／０２８０９号；Ｆｕｃｈｓら（１９９１年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９巻：１３７０〜１３７２頁；Ｈａｙら（１９９２年）Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３巻：８１〜８５頁；Ｈｕｓｅら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６巻：１２７５〜１２８１頁；Ｇｒｉｆｆｔｈｓら（１９９３年）ＥＭＢＯ Ｊ １２巻：７２５〜７３４頁；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２年）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６巻：８８９〜８９６頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ ３５２巻：６２４〜６２８頁；Ｇｒａｍら（１９９２年）ＰＮＡＳ ８９巻：３５７６〜３５８０頁；Ｇａｒｒａｄら（１９９１年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９巻：１３７３〜１３７７頁；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１年）Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９巻：４１３３〜４１３７頁；およびＢａｒｂａｓら（１９９１年）ＰＮＡＳ ８８巻：７９７８〜７９８２頁に記載されている）。
一部の実施形態において、抗体は、完全にヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝子操作された、マウスにおいて作製された抗体）または非ヒト抗体、例えば、齧歯類（マウスまたはラット）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体である。ある特定の実施形態において、非ヒト抗体は、齧歯類（マウスまたはラット抗体）である。齧歯類抗体を産生する方法は、当技術分野で公知である。
ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを使用して作製することができる。目的の抗原で免疫化したこのようなトランスジェニックマウス由来の脾細胞を使用して、ヒトタンパク質由来のエピトープに対し特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、Ｗｏｏｄら国際公開第９１／００９０６号、ＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらＰＣＴ国際公開第９１／１０７４１号；Ｌｏｎｂｅｒｇら国際公開第９２／０３９１８号；Ｋａｙら国際公開第９２／０３９１７号；Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ．ら１９９４年 Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻：８５６〜８５９頁；Ｇｒｅｅｎ， Ｌ．Ｌ．ら１９９４年 Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７巻：１３〜２１頁；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ．Ｌ．ら１９９４年 Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１巻：６８５１〜６８５５頁；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら１９９３年 Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７巻：３３〜４０頁；Ｔｕａｉｌｌｏｎら１９９３年 ＰＮＡＳ ９０巻：３７２０〜３７２４頁；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら１９９１年 Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１巻：１３２３〜１３２６頁を参照）。
抗体は、可変領域またはその部分、例えば、ＣＤＲが、非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて作製された抗体となり得る。キメラ、ＣＤＲグラフトおよびヒト化抗体も考慮される。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて作製され、続いて例えば、可変フレームワークまたは定常領域が、ヒトにおける抗原性を減少するように修飾された抗体も考慮される。
キメラ抗体は、いずれか適した組換えＤＮＡ技法によって産生することができる。そのいくつかは当技術分野で公知である（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許公報ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願公開第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．、欧州特許出願公開第１７１，４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願公開第１７３，４９４号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願公開第１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０巻：１０４１〜１０４３頁）；Ｌｉｕら（１９８７年）ＰＮＡＳ ８４巻：３４３９〜３４４３頁；Ｌｉｕら、１９８７年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９巻：３５２１〜３５２６頁；Ｓｕｎら（１９８７年）ＰＮＡＳ ８４巻：２１４〜２１８頁；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７年、Ｃａｎｃ． Ｒｅｓ．４７巻：９９９〜１００５頁；Ｗｏｏｄら（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ ３１４巻：４４６〜４４９頁；およびＳｈａｗら、１９８８年、Ｊ． Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０巻：１５５３〜１５５９頁を参照）。
ヒト化またはＣＤＲグラフト抗体は、ドナーＣＤＲに置き換えられた少なくとも１または２、ただし一般に、全３個のレシピエントＣＤＲ（重および／または軽免疫グロブリン鎖の）を有するであろう。抗体を非ヒトＣＤＲの少なくとも部分に置き換えることができる、あるいはＣＤＲのほんの一部を非ヒトＣＤＲに置き換えることができる。ＥＤＩＩＩへのヒト化抗体の結合に必要とされるＣＤＲの数を置き換えることのみが必要である。一部の実施形態において、ドナーは、齧歯類抗体、例えば、ラットまたはマウス抗体となり、レシピエントは、ヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークとなるであろう。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。一部の実施形態において、ドナー免疫グロブリンは、非ヒト（例えば、齧歯類）である。アクセプターフレームワークは、典型的には、天然起源の（例えば、ヒト）フレームワークもしくはコンセンサスフレームワーク、またはそれと約８５％またはそれより高く、例えば、９０％、９５％、９９％またはそれより高く同一の配列である。
本明細書において、用語「コンセンサス配列」は、関係する配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成された配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ １９８７年を参照）。タンパク質のファミリーにおいて、コンセンサス配列における各位置は、ファミリーにおける該位置において最も頻繁に生じるアミノ酸によって占有される。２種のアミノ酸が、等しく頻繁に生じる場合、そのどちらがコンセンサス配列に含まれてもよい。「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列におけるフレームワーク領域を指す。
抗体は、いずれか適した方法によってヒト化させることができ、数種類の斯かる方法が当技術分野で公知である（例えば、これによりここに本明細書の一部を構成するものとしてこれら全ての内容を援用するＭｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ． Ｌ．、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９巻：１２０２〜１２０７頁、Ｏｉらによる、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４巻：２１４頁ならびにＱｕｅｅｎらＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１およびＵＳ５，６９３，７６２を参照）。
ヒト化またはＣＤＲグラフト抗体は、ＣＤＲグラフト化またはＣＤＲ置換によって産生することができ、ここで、免疫グロブリン鎖の１、２または全ＣＤＲを置き換えることができる。例えば、これにより明確にここに本明細書の一部を構成するものとしてこれら全ての内容を援用する米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら１９８６年 Ｎａｔｕｒｅ ３２１巻：５５２〜５２５頁；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら１９８８年 Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９巻：１５３４頁；Ｂｅｉｄｌｅｒら１９８８年 Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１巻：４０５３〜４０６０頁；Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９を参照されたい。Ｗｉｎｔｅｒは、ヒト化抗体の調製に使用することができるＣＤＲグラフト化方法について記載し（英国特許出願公開第２１８８６３８Ａ号、１９８７年３月２６日に出願；Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９）、明確にここに本明細書の一部を構成するものとしてその内容を援用する。
特異的なアミノ酸が置換、欠失または付加されたヒト化抗体も提供される。ドナーからアミノ酸を選択するための判断基準は、例えば、これによりここに本明細書の一部を構成するものとしてその内容を援用するＵＳ５，５８５，０８９、例えば、ＵＳ５，５８５，０８９のカラム１２〜１６に記載されている。抗体をヒト化するための他の技法は、１９９２年１２月２３日に公開されたＰａｄｌａｎらＥＰ５１９５９６Ａ１に記載されている。
抗体分子は、単鎖抗体となり得る。単鎖抗体（ｓｃＦＶ）は、操作することができる（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ， Ｄ．ら（１９９９年）Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８８０巻：２６３〜８０頁；およびＲｅｉｔｅｒ， Ｙ．（１９９６年）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２巻：２４５〜５２頁を参照）。単鎖抗体を二量体形成または多量体形成して、同じ標的タンパク質の異なるエピトープに対し特異性を有する多価抗体を作製することができる。
一部の実施形態において、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選択され；特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。別の実施形態において、抗体分子は、例えば、カッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定常領域を変更、例えば、変異させて、抗体の特性を修飾することができる（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能および／または補体機能のうち１種または複数を増加または減少させることができる）。一部の実施形態において、抗体は、エフェクター機能を有し、補体を固定することができる。他の実施形態において、抗体は、エフェクター細胞をリクルートしない、または補体を固定しない。ある特定の実施形態において、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低下しているまたは能力が全くない。例えば、これは、Ｆｃ受容体への結合を支持しないアイソタイプまたはサブタイプ、断片または他の変異体となり得る、例えば、変異誘発または欠失されたＦｃ受容体結合領域を有する。
抗体定常領域は、一部の実施形態において変更される。抗体定常領域を変更するための方法は、当技術分野で公知である。変更された機能、例えば、細胞におけるＦｃＲ等、エフェクターリガンドまたは補体のＣ１成分に対する変更された親和性を有する抗体は、抗体の定常部分における少なくとも１個のアミノ酸残基を異なる残基に置き換えることにより産生することができる（例えば、これによりここに本明細書の一部を構成するものとしてこれら全ての内容を援用するＥＰ３８８，１５１Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号を参照）。ヒトＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ（ＥＵ命名法、Ｋａｂａｔ命名法ではＳ２４１Ｐ）等、抗体構造を安定化するアミノ酸変異も考慮される。マウスまたは他の種の免疫グロブリンに適用されると、これらの機能を低下または排除するであろう、同様の種類の変更について記載することができる。
一部の実施形態において、抗デング抗体分子におけるアミノ酸のみが、正準アミノ酸である。一部の実施形態において、抗デング抗体分子は、天然起源のアミノ酸；そのアナログ、誘導体および同類物；バリアント側鎖を有するアミノ酸アナログ；および／または前述のいずれかのあらゆる立体異性体を含む。抗デング抗体分子は、アミノ酸のＤまたはＬ光学異性体およびペプチド模倣を含むことができる。
抗デング抗体分子のポリペプチドは、直鎖状または分枝状となることができ、修飾されたアミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断されていてよい。抗体分子は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーション等の他のいずれかの操作によって修飾されていてもよい。ポリペプチドは、天然供給源から単離することができ、組換え技法によって真核生物もしくは原核生物宿主から産生することができる、または合成手順の産物となることができる。
抗デング抗体分子は、非コンジュゲート型において単独で使用することができる、あるいは物質、例えば、毒素または部分（例えば、治療薬；放射線照射化合物；植物、真菌もしくは細菌起源の分子；または生物学的タンパク質（例えば、タンパク質毒素））または粒子（例えば、組換えウイルス粒子、例えば、ウイルスコートタンパク質により）に結合することができる。例えば、抗デング抗体は、α−、β−もしくはγ−エミッタまたはβ−およびγ−エミッタ等、放射性同位体にカップルすることができる。
抗体分子は、誘導体化または別の機能的分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結することができる。本明細書において、「誘導体化された」抗体分子は、修飾された抗体分子である。誘導体化方法として、蛍光部分、ラジオヌクレオチド（ｒａｄｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、毒素、酵素、またはビオチン等の親和性リガンドの付加が挙げられるがこれらに限定されない。したがって、抗体分子は、免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）分子を含む、本明細書に記載されている抗体の誘導体化および他の仕方で修飾された型を含むことが企図される。例えば、抗体分子は、別の抗体（例えば、二重特異的抗体またはダイアボディ）、検出可能剤、毒素、医薬剤、および／または別の分子（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ等）と抗体もしくは抗体部分との会合を媒介し得るタンパク質もしくはペプチド等、１種または複数の他の分子実体に機能的に連結（化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合または他の仕方により）することができる。
一部の種類の誘導体化された抗体分子は、２個またはそれを超える抗体（例えば、二重特異的抗体を作製するための同じ種類または異なる種類の）を架橋することにより産生される。適した架橋剤は、適切なスペーサーによって離間した２個の明確に異なる反応基を有するヘテロ二官能性（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ）−Ｎ−ヒドロキシサクシニミドエステル）、またはホモ二官能性（例えば、スベリン酸ジサクシンイミジル）の架橋剤を含む。斯かるリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌから入手できる。
抗デング抗体分子を誘導体化（または標識）することができる有用な検出可能剤は、蛍光化合物、様々な酵素、補欠分子族、発光材料、生物発光材料、蛍光発光金属原子、例えば、ユーロピウム（Ｅｕ）および他のランタニド（ａｎｔｈａｎｉｄｅ）ならびに放射性材料（後述）を含む。例示的な蛍光検出可能剤は、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニル（ｎａｐｔｈａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ）クロライド、フィコエリトリンその他を含む。抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋わさびペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、グルコースオキシダーゼその他等、検出可能酵素により誘導体化することもできる。抗体が、検出可能酵素により誘導体化される場合、これは、酵素が検出可能反応産物の産生に使用する追加的な試薬を添加することにより検出される。例えば、検出可能剤の西洋わさびペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加は、検出可能な発色された反応産物をもたらす。抗体分子は、補欠分子族（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン）により誘導体化することもできる。例えば、抗体は、ビオチンにより誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的測定により検出することができる。適した蛍光材料の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光材料の例として、ルミノールが挙げられ；生物発光材料の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる。
標識された抗体分子は、例えば、多数の文脈において診断的におよび／または実験的に使用することができ、（ｉ）親和性クロマトグラフィーまたは免疫沈降等、標準技法による既定の抗原の単離；（ｉｉ）タンパク質の発現の存在量およびパターンを評価するための、既定の抗原の検出（例えば、細胞ライセートまたは細胞上清における）；（ｉｉｉ）例えば、所定の処置レジメンの有効性を決定するための、臨床検査手順の一部としての組織におけるタンパク質レベルのモニターを含む。
抗体分子は、別の分子実体、典型的には、標識または治療用（例えば、免疫調節性、免疫賦活性、細胞傷害性または細胞分裂阻害性）薬剤または部分にコンジュゲートすることができる。放射性同位体は、診断または治療適用において使用することができる。抗デング抗体にカップルすることができる放射性同位体として、α−、β−もしくはγ−エミッタ、またはβ−およびγ−エミッタが挙げられるがこれらに限定されない。斯かる放射性同位体として、ヨウ素（１３１Ｉまたは１２５Ｉ）、イットリウム（９０Ｙ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、アクチニウム（２２５Ａｃ）、プラセオジム、アスタチン（２１１Ａｔ）、レニウム（１８６Ｒｅ）、ビスマス（２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉ）、インジウム（１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９ｍＴｃ）、リン（３２Ｐ）、ロジウム（１８８Ｒｈ）、イオウ（３５Ｓ）、炭素（１４Ｃ）、トリチウム（３Ｈ）、クロム（５１Ｃｒ）、塩素（３６Ｃｌ）、コバルト（５７Ｃｏまたは５８Ｃｏ）、鉄（５９Ｆｅ）、セレニウム（７５Ｓｅ）またはガリウム（６７Ｇａ）が挙げられるがこれらに限定されない。治療剤として有用な放射性同位元素は、イットリウム（９０Ｙ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、アクチニウム（２２５Ａｃ）、プラセオジム、アスタチン（２１１Ａｔ）、レニウム（１８６Ｒｅ）、ビスマス（２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉ）およびロジウム（１８８Ｒｈ）を含む。例えば、診断における使用のための標識として有用な放射性同位元素は、ヨウ素（１３１Ｉまたは１２５Ｉ）、インジウム（１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９ｍＴｃ）、リン（３２Ｐ）、炭素（１４Ｃ）およびトリチウム（３Ｈ）または上に収載されている治療用同位体のうち１種もしくは複数を含む。
本開示は、放射標識された抗体分子およびこれを標識する方法を提供する。一部の実施形態において、抗体分子を標識する方法が開示されている。本方法は、抗体分子をキレート剤に接触させ、これにより、コンジュゲートされた抗体を産生するステップを含む。コンジュゲートされた抗体は、放射性同位元素、例えば、１１１インジウム、９０イットリウムおよび１７７ルテチウムにより放射標識されて、これにより、標識された抗体分子を産生する。
上に記す通り、抗体分子は、治療剤にコンジュゲートすることができる。治療活性を有する放射性同位元素については、既に言及されている。他の治療剤の例として、抗ウイルス剤が挙げられる。
一部の態様において、本開示は、本明細書に開示されている抗体分子を用意する方法を提供する。本方法は、抗原、例えば、デングウイルスＥタンパク質またはその部分を用意するステップと、抗原に特異的に結合する抗体分子を得るステップと、前記抗原および／または抗原を発現する生物、例えば、デングウイルスの活性のモジュレートにおける抗体分子の有効性を評価するステップとを含む。本方法は、その誘導体を含む抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）を対象、例えば、ヒトに投与するステップをさらに含むことができる。
本開示は、上述の抗体分子をコードする単離された核酸分子、そのベクターおよび宿主細胞を提供する。核酸分子として、ＲＮＡ、ゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡが挙げられるがこれらに限定されない。
動物モデル
本明細書に記載されている抗体分子は、動物モデルにおいて評価することができる。例えば、動物モデルを使用して、デングウイルス感染、複製および／または伝染の低下における本明細書に記載されている抗体分子の有効性を検査することができる。本明細書に記載されている抗体分子の評価に使用することができる例示的な動物モデルとして、ＡＧ１２９マウスモデル（例えば、Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁；Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９９年；７３巻（１号）：７８３〜６頁に記載）；非マウス適応マウスモデル（例えば、ＴａｎらＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ．２０１０年；４巻（４号）：ｅ６７２頁に記載されている非マウス適応ＤＥＮＶ−２ Ｄ２Ｙ９８Ｐマウスモデル）；ヒト化マウスモデル（例えば、Ｓｒｉｄｈａｒａｎら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１３年；８７巻（２１号）：１１６４８〜５８頁に記載）；非ヒト霊長類モデル（例えば、ＧｏｎｃａｌｖｅｚらＰｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００７年；１０４巻（２２号）：９４２２〜７頁に記載）；および蚊モデル（例えば、ＶｕらＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ．２０１０年；４巻（７号）：ｅ７５７頁に記載）が挙げられるがこれらに限定されない。
Ｉ型およびＩＩ型インターフェロン受容体の両方を欠くＡＧ１２９マウス株は、ウイルス血症および他の疾患徴候を含む、デングの臨床症例において観察されるある特定の疾患所見を再現する動物モデルである（Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁；ＪｏｈｎｓｏｎらＪ Ｖｉｒｏｌ．１９９９年；７３巻（１号）：７８３〜６頁）。このモデルは、抗ウイルス処置の評価において有用であり、原理研究の証明において使用することもできる。簡潔に説明すると、ＡＧ１２９（ＩＦＮ−α／βおよびＩＦＮ−γ受容体を欠損）マウスに、デングウイルスを負荷し、候補治療抗体分子を投与する。典型的には、ウイルス血症（血液試料におけるウイルス力価）が、実験のエンドポイントである。ウイルス血症は、例えば、定量的ＲＴ−ＰＣＲにより測定することができる。例示的なＡＧ１２９マウスモデルは、実施例１０に記載されている。
非マウス適応マウスモデルは、例えば、腹腔内に投与するとＡＧ１２９マウスにおいて高度に感染性である非マウス適応ＤＥＮ２ウイルス株（Ｄ２Ｙ９８Ｐ）を使用して作製することができる（Ｔａｎら、ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ．２０１０年；４巻（４号）：ｅ６７２頁）。高用量のＤ２Ｙ９８Ｐによる感染は、サイトカイン急性発症（ｓｔｏｒｍ）、大規模臓器損傷および重症血管漏出を誘導し、ウイルス血症のピークにおける動物の出血および急死をもたらすことができる。低用量のＤ２Ｙ９８Ｐによる感染は、ヒトにおける疾患動態と同様に、関連臓器における無症候性ウイルス播種および複製に続く、ウイルスクリアランスの数日後の動物の非麻痺性死亡をもたらすことができる。出血は観察されなかったが、脾臓損傷、肝臓機能不全および血管透過性増加を瀕死の動物において観察することができ、デングショック症候群における主要特色であるインタクトな血管統合性を示唆する。
ヒト化マウスモデルは、例えば、有意なレベルのヒト血小板、単球／マクロファージおよび肝細胞を発生するＮＯＤ−ｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＮＳＧ）マウスへのヒトＣＤ３４＋胎児肝臓細胞の養子移入により作製することができる（ＳｒｉｄｈａｒａｎらＪ Ｖｉｒｏｌ．２０１３年；８７巻（２１号）：１１６４８〜５８頁）。ＤＥＮＶ血清型２（ＤＥＮＶ−２）等、デングウイルスによるこれらのマウスの感染は、ヒトにおけるデングウイルス感染のある特定の特徴的特色、例えば、一過性白血球減少症および血小板減少症を再捕捉することができる。
非ヒト霊長類モデルは、ＧｏｎｃａｌｖｅｚらＰｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００７年；１０４巻（２２号）：９４２２〜７頁に記載されている通り、例えば、ＤＥＮＶ負荷後の若齢アカゲザルにおいて作製することができる。感染したサルのウイルス血症力価は、例えば、定量的ＰＣＲまたはフォーカス形成単位（ＦＦＵ）アッセイによって決定することができる。
蚊モデルを使用して、デングウイルスに対する抗体の阻害活性、例えば、ウイルス感染の中和または感染した対象および蚊の間の伝染の低下を評価することもできる。デングウイルスは、蚊に伝染されるＲＮＡウイルスである。ある特定のデングウイルスは、より高い確率のヒトから蚊への伝染をもたらし得るｉｎ ｖｉｖｏ適応度（ｆｉｔｎｅｓｓ）利点を生じることができる（Ｖｕら、ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ．２０１０年；４巻（７号）：ｅ７５７頁）。蚊モデルを確立するために、ウイルスおよび抗体を含有する血液を蚊に与えることができる。蚊の腹部におけるウイルス負荷は、ｑＲＴ−ＰＣＲによって測定することができる。例示的な蚊モデルは、実施例１３に記載されている。
医薬組成物およびキット
一部の態様において、本開示は、薬学的に許容される担体と共に製剤化された、本明細書に記載されている抗デング抗体分子を含む組成物、例えば、薬学的に許容される組成物を提供する。本明細書において、「薬学的に許容される担体」は、生理的に適合性のありとあらゆる溶媒、分散媒、等張性および吸収遅延剤その他を含む。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口的、直腸、脊髄または上皮投与（例えば、注射または注入による）に適することができる。ある特定の実施形態において、医薬組成物における抗体分子の約５％未満、例えば、約４％、３％、２％または１％未満が、凝集体として存在する。他の実施形態において、医薬組成物における抗体分子の少なくとも約９５％、例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９８．５％、９９％、９９．５％、９９．８％またはそれ超が、単量体として存在する。一部の実施形態において、抗体凝集体または単量体のレベルは、クロマトグラフィー、例えば、高速分子ふるいクロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）によって決定される。
本明細書に示される組成物は、種々の形態となり得る。これらは、例えば、液体の溶液（例えば、注射用および注入用（ｉｎｆｕｓｉｂｌｅ）溶液）、分散または懸濁液、リポソームおよび坐剤等、液体、半固体および固体剤形を含む。適した形態は、企図される投与様式および治療適用に依存する。典型的な適した組成物は、注射用または注入用溶液の形態である。適した一投与様式は、非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。一部の実施形態において、抗体分子は、静脈内注入または注射によって投与される。ある特定の実施形態において、抗体は、筋肉内または皮下注射によって投与される。
語句「非経口的投与」および「非経口的に投与される」は、本明細書において、経腸および局所的投与以外の、通常、注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）注射および注入を限定することなく含む。
治療組成物は、典型的には、製造および貯蔵条件下で無菌かつ安定的となるべきである。組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散、リポソーム、または高抗体濃度に適した他の秩序構造として製剤化することができる。無菌注射用溶液は、必要に応じて上に列挙されている成分のうち１種または組合せと共に、適切な溶媒において要求される量の活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を取り込み、続いて濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散液は、基本分散媒および上に列挙されるもののうち要求される他の成分を含有する無菌媒体に活性化合物を取り込むことにより調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好まれる調製方法は、以前に滅菌濾過したその溶液から活性成分プラスいずれか追加的な所望の成分の粉末を生じる真空乾燥およびフリーズドライである。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用により、分散の場合は要求される粒子サイズの維持により、また、界面活性剤の使用により維持することができる。注射用組成物の延長された吸収は、組成物に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含むことによりもたらすことができる。
抗体分子は、種々の方法によって投与することができる。そのいくつかは当技術分野で公知であり、多くの治療適用のため、適切な投与経路／様式は、静脈内注射または注入である。例えば、抗体分子は、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、好ましくは、約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達する、１０ｍｇ／ｍｉｎ未満；好ましくは、５ｍｇ／ｍｉｎ未満のまたはそれに等しい速度で静脈内注入によって投与することができる。当業者に認められる通り、投与経路および／または様式は、所望の結果に応じて変動するであろう。ある特定の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む放出制御製剤等、急速な放出から化合物を保護する担体と共に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）およびポリ乳酸等、生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。斯かる製剤の調製のための多くの方法に特許が付与されている、または当業者であれば一般に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ． Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照されたい。
ある特定の実施形態において、抗体分子は、例えば、不活性希釈液または同化可能な食用担体と共に経口投与することができる。抗体分子（および必要に応じて他の成分）は、硬もしくは軟殻ゼラチンカプセルに封入する、錠剤に圧縮する、または対象の食事に直接的に取り込むこともできる。経口治療投与のため、抗体分子は、賦形剤と共に取り込み、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェーハ（ｗａｆｅｒ）その他の形態で使用することができる。非経口的投与以外によって抗体分子を投与するために、その不活性化を防止する材料で化合物をコートする、またはこれと化合物を同時投与することが必要となり得る。治療組成物は、医療用デバイスにより投与することもでき、そのいくつかは当技術分野で公知である。
投薬量レジメンは、所望の応答（例えば、治療応答）をもたらすように調整される。例えば、単一ボーラスを投与しても、複数の分割された用量を経時的に投与しても、または治療状況の緊急事態によって示される通りに用量を比例的に低下もしくは増加させてもよい。投与を容易にするために、また、投薬量の均一性のために、投薬量単位形態で非経口的組成物を製剤化することが特に有利である。投薬量単位形態は、本明細書において、処置しようとする対象のための単位投薬量として適する物理的に別々の単位を指す；各単位は、要求される医薬品担体に関連して所望の治療効果を産生するように計算された活性化合物の既定の含量を含有する。投薬量単位形態の仕様は、（ａ）抗体分子の特有の特徴および達成するべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置のための斯かる抗体分子の配合の技術分野に固有の限界によって指示され、これらに直接的に依存する。
抗体分子の治療または予防有効量の例示的な非限定的な範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１〜１０ｍｇ／ｋｇである。抗体分子は、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達する、１０ｍｇ／ｍｉｎ未満、好ましくは、５ｍｇ／ｍｉｎ未満のまたはそれに等しい速度で静脈内注入により投与することができる。投薬量の値は、緩和しようとする状態の種類および重症度と共に変動し得ることに留意されたい。いずれか特定の対象のため、特異的な投薬量レジメンは、個体の必要および組成物の投与または投与を監督する者の専門家判断に従って経時的に調整するべきであり、本明細書に表記されている投薬量範囲が、単なる例示であり、請求される組成物の範囲または実施の限定を企図しないことをさらに理解されたい。
本明細書における医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の抗体分子を含むことができる。「治療有効量」は、必要な投薬量および期間において、所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。治療有効量の修飾抗体または抗体断片は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体または抗体部分の能力等の因子に従って変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が、抗体分子のいかなる毒性または有害効果も上回る量でもある。「治療的に有効な投薬量」は、好ましくは、未処置対象と比べて、測定可能パラメータを少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、なおより好ましくは少なくとも約８０％阻害する。測定可能パラメータは、例えば、ウイルス負荷、発熱、頭痛、筋肉または関節痛、皮膚発疹、出血、血小板レベル低下および血圧低下となり得る。測定可能パラメータを阻害する抗体分子の能力は、デング熱における有効性を予測する動物モデル系において評価することができる。あるいは、組成物のこの特性は、デングウイルスを中和する抗体分子の能力を試験することにより、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでフォーカス形成をアッセイすることにより評価することができる。
「予防有効量」は、必要な投薬量および期間において、所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。典型的には、予防用量は、疾患に先立ちまたはそのより早期に対象において使用されるため、予防有効量は、治療有効量に満たないであろう。
本明細書に記載されている抗体分子を含むキットも本開示内に収まる。本キットは、使用説明書；他の試薬、例えば、標識、治療剤またはキレート化さもなければ抗体を標識もしくは治療剤にカップリングするのに有用な薬剤、または放射線防護組成物；投与のための抗体分子を調製するためのデバイスまたは他の材料；薬学的に許容される担体；および対象への投与のためのデバイスまたは他の材料を含む１種または複数の他の要素を含むことができる。
核酸
本開示は、本明細書に記載されている抗デング抗体分子の重および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む核酸も特色とする。例えば、本開示は、本明細書に開示されている抗体分子、例えば、表１の抗体または抗体の部分、例えば、表２の可変領域のうち１種または複数から選択される抗デング抗体分子のそれぞれ重および軽鎖可変領域をコードする第１および第２の核酸を特色とする。本核酸は、本明細書における表におけるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、または本明細書における表に示す配列から３、６、１５、３０もしくは４５ヌクレオチド以下が異なる配列）のうちいずれか１種をコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
ある特定の実施形態において、本核酸は、本明細書における表に表記するアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１個もしくは複数の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。一部の実施形態において、本核酸は、本明細書における表に表記されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１個もしくは複数の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。一部の実施形態において、本核酸は、本明細書における表に表記されているアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または１個もしくは複数の置換、例えば、保存された置換を有する配列）を有する重および軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
ある特定の実施形態において、本核酸は、本明細書における表５に表記されているヌクレオチド配列、それと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または本明細書に記載されているストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。一部の実施形態において、本核酸は、本明細書における表５に表記されているヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または本明細書に記載されているストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２または３個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。ある特定の実施形態において、本核酸は、本明細書における表５に表記されているヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または本明細書に記載されているストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）を有する重および軽鎖可変領域由来の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。
ある特定の実施形態において、本核酸は、本明細書における表５に表記されているヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または本明細書に記載されているストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）を含む。一部の実施形態において、本核酸は、本明細書における表５に表記されているヌクレオチド配列の部分、またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または本明細書に記載されているストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）を含む。この部分は、例えば、可変領域（例えば、ＶＨまたはＶＬ）；１、２もしくは３個またはそれを超えるＣＤＲ；あるいは１、２、３もしくは４個またはそれを超えるフレームワーク領域をコードすることができる。
本明細書に開示されている核酸は、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはこれらのアナログを含む。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれであってもよく、一本鎖の場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖となり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログ等、修飾ヌクレオチドを含むことができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識成分とのコンジュゲーションによる等、重合後にさらに修飾することができる。核酸は、組換えポリヌクレオチド、またはゲノム、ｃＤＮＡ、半合成もしくは合成起源のポリヌクレオチドとなることができ、これらは自然には発生しない、または非天然配置で別のポリヌクレオチドに連結される。
一部の態様において、本願は、本明細書に記載されている核酸を含有する宿主細胞およびベクターを特色とする。核酸は、より詳細に後述する通り、単一のベクターまたは同じ宿主細胞もしくは別々の宿主細胞に存在する別々のベクターに存在し得る。
ベクター
本明細書に記載されている抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターがさらに本明細書に提供される。一部の実施形態において、本ベクターは、本明細書に記載されている抗体分子をコードするヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、本ベクターは、本明細書に記載されているヌクレオチド配列を含む。ベクターとして、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージまたは酵母人工染色体（ＹＡＣ）が挙げられるがこれらに限定されない。
多数のベクター系を用いることができる。例えば、ベクターの１クラスは、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウイルス等、動物ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用する。ベクターの別のクラスは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルスおよびフラビウイルス等、ＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡエレメントを利用する。
その上、その染色体にＤＮＡを安定に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１種または複数のマーカーを導入することにより選択することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に原栄養性、殺生物剤抵抗性（例えば、抗生物質）または銅等の重金属に対する抵抗性その他をもたらすことができる。選択マーカー遺伝子は、発現させようとするＤＮＡ配列に直接的に連結しても、あるいは同時形質転換により同じ細胞に導入してもよい。追加的なエレメントは、ｍＲＮＡの最適な合成にも必要とされ得る。これらのエレメントは、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサーおよび終結シグナルを含むことができる。
発現ベクターまたは構築物を含有するＤＮＡ配列が、発現のために調製されたら、発現ベクターは、適切な宿主細胞にトランスフェクトまたは導入することができる。例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質に基づくトランスフェクションまたは他の従来技法等、様々な技法を用いてこれを達成することができる。プロトプラスト融合の場合、細胞を培地において育成し、適切な活性に関してスクリーニングする。
得られたトランスフェクトされた細胞を培養し、産生された抗体分子を回収するための方法および条件は、当業者に公知であり、本記載に基づき、用いられる特異的発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて変動または最適化され得る。
細胞
本開示は、本明細書に記載されている抗体分子をコードする核酸を含む宿主細胞も提供する。例えば、本宿主細胞は、表５の核酸、それと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超えて同一の、および／または本明細書に記載されているストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）、または前記核酸のうち１種の部分を含むことができる。その上、本宿主細胞は、表２もしくは表３のアミノ酸配列をコードする核酸、それと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超えて同一の配列）、または前記配列のうち１種の部分を含むことができる。
一部の実施形態において、本宿主細胞は、抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作されている。
ある特定の実施形態において、本宿主細胞は、発現カセットを使用することにより遺伝子操作される。語句「発現カセット」は、斯かる配列に適合性の宿主における遺伝子の発現に影響を与えることができるヌクレオチド配列を指す。斯かるカセットは、プロモーター、イントロンありまたはなしのオープンリーディングフレームおよび終結シグナルを含むことができる。例えば、誘導性プロモーター等、発現をもたらすために必要なまたは役立つ追加的な因子を使用することもできる。
本開示は、本明細書に記載されているベクターを含む宿主細胞も提供する。
細胞は、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞またはヒト細胞となることもできるが、これらに限定されない。適した真核細胞として、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞およびＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。適した昆虫細胞として、Ｓｆ９細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
抗デング抗体分子の使用
本明細書に開示されている抗体分子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ診断ならびに治療および予防有用性を有する。一部の実施形態において、抗体分子は、デングウイルスを中和する。例えば、このような分子は、培養中の、ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ ｖｉｖｏの細胞に、または対象、例えば、ヒト対象に例えばｉｎ ｖｉｖｏで投与して、デングウイルスを中和することができる。したがって、一部の態様において、本開示は、対象におけるデングウイルス感染を処置する方法であって、デングウイルス感染が処置されるように、本明細書に記載されている抗体分子を対象に投与するステップを含む方法を提供する。例えば、このような抗体分子は、培養中の細胞に、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ ｖｉｖｏで、または対象に、例えばｉｎ ｖｉｖｏで投与して、デングウイルス感染を処置、防止および／または診断することができる。
本明細書において、用語「対象」は、ヒトおよび非ヒト動物を含むように企図される。一部の実施形態において、対象は、ヒト対象、例えば、デングウイルスに感染したまたはデングウイルスに感染するリスクがあるヒト患者である。用語「非ヒト動物」は、非ヒト霊長類等、哺乳動物および非哺乳動物を含む。一部の実施形態において、対象は、ヒトである。本明細書に記載されている方法および組成物は、デングウイルスに感染したヒト患者の処置に適する。デングウイルスに感染した患者は、ウイルスに曝露されたが、（少なくとも一時的に）無症候性である患者、デング熱を有する患者、デング出血熱を有する患者およびデングショック症候群を有する患者を含む。
デングウイルスを処置する方法
デングウイルスは、ウイルス表面にＥ（エンベロープ）タンパク質を呈する。Ｅタンパク質は、宿主細胞へのウイルスの付着に寄与する。Ｅタンパク質は、ＤＩドメイン（９本鎖ベータ−バレル）、ＤＩＩドメイン（宿主細胞との融合に関係付けられる疎水性ドメイン）およびＤＩＩＩドメイン（細胞外ドメイン）を含む。理論に制約されることを望まないが、一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体分子は、そのＥタンパク質ＤＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）ドメインに結合することにより、例えば、ウイルスが宿主細胞と融合するのを防止する、ウイルスが宿主細胞に結合するのを防止する、Ｅタンパク質の構造を破壊する、またはウイルスを不安定化することにより、デングウイルスを中和することができる。
デング熱は、デングウイルスに起因する、通常は蚊媒介性の感染性疾患である。初期感染に続き、多くの場合、通常４〜７日間の短い無症候性期間となる。感染した患者は、デング熱のいかなる症状も発症しない場合もある。しかし、デング熱を顕在化する患者において、特徴的な症状は、急な発熱（４０℃を超えることもある）、頭痛、筋肉および関節痛ならびに発疹である。感染の発熱期において、発熱、疼痛および頭痛が顕在化する。一部の患者において、発熱期に続いて、救急期（ｃｒｉｔｉｃａｌ ｐｈａｓｅ）（デングショック症候群およびデング出血熱を伴う）となり、患者は、胸部および腹腔における液体貯留、循環からの液体の枯渇、重要臓器への不適切な血液供給ならびに出血を患う場合がある。これに続いて、回復期となる。一部の実施形態において、本明細書における抗体分子は、無症候性期間、発熱期、救急期および／または回復期の患者に投与される。
デングウイルスは、典型的には、身体検査および患者の報告した症状に基づき診断される。患者が、発熱と、悪心／嘔吐、発疹、全身性疼痛、白血球細胞レベル低下または陽性駆血帯（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｏｕｒｎｉｑｕｅｔ）検査から選択される少なくとも２種の症状とを呈する場合、可能性の高い診断を為すことができる。デング熱を示す追加的な検査は、白血球細胞数低下、低血小板レベル、代謝性アシドーシス、肝臓からのアミノトランスフェラーゼレベル上昇、血液濃縮、低アルブミン血症、超音波による液体検出（デングショック症候群を示唆）、２０ｍｍＨｇを下回る脈圧（デングショック症候群を示す）、毛細血管再充満遅延（末梢血管崩壊を示す）の検査を含む。したがって、一部の実施形態において、抗体分子は、上述の判断基準を満たす患者に投与される。
本明細書に記載されているある特定の抗体分子は、デングウイルスの少なくとも２、３または４種の血清型を処置することができる。したがって、ある特定の実施形態において、デングウイルスの血清型を決定するための検査が行われない場合、例えば、デングウイルスの血清型が不明となり得る場合、本抗体分子は、デングウイルスに感染したまたは感染リスクがある患者に投与される。一部の実施形態において、デングウイルスは、血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４のものである。
本抗体分子は、典型的には、患者が回復するまで、患者の系において抗体の治療的に有効なレベルを維持する頻度で投与される。例えば、本抗体分子は、少なくとも約１、２、５、１０、２０、３０または４０個の抗体が、各ビリオンに結合するのに十分な血清濃度を達成する頻度で投与することができる。一部の実施形態において、本抗体分子は、１、２、３、４、５、６または７日毎に投与される。
様々な抗体分子を投与する方法は、当技術分野で公知であり、後述されている。使用されている抗体分子の適した投薬量は、対象の年齢および体重ならびに使用されている特定の薬物に依存するであろう。
本抗体分子は、それ独自で、または第２の薬剤、例えば、抗ウイルス剤、毒素もしくはタンパク質、例えば、第２の抗デング抗体とコンジュゲートして使用することができる。この方法は、抗体分子を単独で、または第２の薬剤とコンジュゲートして、斯かる処置を必要とする対象に投与するステップを含む。抗体分子を使用して、種々の治療剤、例えば、毒素もしくは抗ウイルス剤またはこれらの混合物を送達することができる。
併用療法
本抗デング抗体分子は、他の治療法と組み合わせて使用することができる。例えば、併用療法は、１種または複数の追加的な治療剤、例えば、抗ウイルス剤（他の抗デング抗体を含む）、ワクチン（デングウイルスワクチンを含む）または免疫応答を増強する薬剤と同時製剤化および／または同時投与した抗デング抗体分子を含むことができる。他の実施形態において、本抗体分子は、静脈内水分補給、解熱剤（アセトアミノフェン等）または輸血等、他の治療的処置様式と組み合わせて投与される。斯かる併用療法は、投与される治療剤のより低い投薬量を有利に利用し、これにより、様々な単独療法に伴う可能性のある毒性または合併症を回避することができる。
「組み合わせて」投与するとは、本明細書において、２種（またはそれを超える）異なる処置が、対象の疾患罹患の経過の前または最中に対象に送達されることを意味する。一実施形態において、２種またはそれを超える処置は、予防的に、例えば、対象がデングウイルスに感染または診断される前に送達される。別の実施形態において、２種またはそれを超える処置は、対象がデングウイルスと診断された後に送達される。一部の実施形態において、重複が為されるように、一方の処置の送達は、第２の送達が始まるときに依然として行われている。これは本明細書において、「同時」または「同時発生的送達」と称されることもある。他の実施形態において、一方の処置の送達は、他方の処置の送達が始まる前に終わる。いずれかの事例の一部の実施形態において、組み合わせた投与のため、処置はより有効である。例えば、第２の処置は、より有効である、例えば、より少ない第２の処置により均等な効果が観察される、または第２の処置は、第１の処置の非存在下で第２の処置が投与された場合よりも優れた程度まで症状を低下させる、または第１の処置により類似の状況が観察される。一部の実施形態において、送達は、症状のまたは障害に関する他のパラメータ低下が、他方の非存在下で送達される一方の処置により観察されるものよりも優れているようなものである。２種の処置の効果は、部分的に相加的、全面的に相加的または相加的を超えるものとなり得る。送達は、送達される第１の処置の効果が、第２が送達されるときに依然として検出可能であるようなものとなり得る。
抗ウイルス剤は、例えば、バラピラビル、クロロキン、セルゴシビル、イベルメクチンまたはＣａｒｉｃａ ｆｏｌｉａとなり得る。
ワクチンは、例えば、生きた弱毒化組換えデング血清型１、２、３および４ウイルス（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１４８８８９０、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）；ＣＹＤ四価デングワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１９４３８２５、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）、キメラデング血清型（１、２、３、４）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００７３０２８８、Ｓａｎｏｆｉによる）、ＣＹＤデングワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ００９９３４４７、Ｓａｎｏｆｉによる）、四価生きた弱毒化デングワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ００３２２０４９、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅによる）、四価デングワクチン（ＴＶＤＶ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１５０２３５８、Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉｅｌ Ｃｏｍｍａｎｄによる）、キメラ四価デング（血清型１、２、３、４）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００８４２５３０、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）、デング凍結乾燥ワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１６９６４２２、Ｂｕｔａｎｔａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによる）、ＣｈｉｍｅｒｉＶａｘ（商標）四価デングワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ００６１７３４４、Ｓａｎｏｆｉによる）、二価ＣＹＤ−１、３デング（Ｖｅｒｏ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００７４０１５５、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）、二価ＣＹＤ−２、４デング（Ｖｅｒｏ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００７４０１５５、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）、四価ブレンドＶＤＶ−２／ＣＹＤ−１、３、４デング（Ｖｅｒｏ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００７４０１５５、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）、四価ＣＹＤ−１、２、３、４デング（Ｖｅｒｏ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００７４０１５５、Ｓａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒによる）、ｒＤＥＮ１ｄｅｌｔａ３０もしくはｒＤＥＮ２／４ｄｅｌｔａ３０（ＭＥ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００４５８１２０、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、修飾された生きた四価キメラデングワクチン（ＳＣまたはＩＤ）（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１１１０５５１、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、デングワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ００３８４６７０、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ａｒｍｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉｅｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙによる）、デングウイルスサブタイプ２の治験用ワクチン（例えば、ＮＣＴ０１０７３３０６、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、Ｆ１７（例えば、ＮＣＴ０１８４３６２１、Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉｅｌ Ｃｏｍｍａｎｄによる）、トランスフェクション後Ｆ１７もしくはトランスフェクション後Ｆ１９（例えば、臨床治験ＮＣＴ００４６８８５８、Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉｅｌ Ｃｏｍｍａｎｄによる）、ＤＥＮＶａｘ（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１５１１２５０、Ｉｎｖｉｒａｇｅｎ Ｉｎｃ．による）、Ｄ１ＭＥ（デング−１プレメンブラン（ｐｒｅｍｅｍｂｒａｎｅ）／エンベロープＤＮＡワクチン）（例えば、臨床治験ＮＣＴ００２９０１４７、Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｕｒｇｅｏｎ Ｇｅｎｅｒａｌによる）、ＤＥＮ１の治験用ワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１０８４２９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、生きた弱毒化四価デングワクチン（例えば、臨床治験ＮＣＴ００３５０３３７、Ｗａｌｔｅｒ Ｒｅｅｄ Ａｒｍｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈによる）、ｒＤＥＮ４ｄｅｌｔａ３０−２００，２０１（例えば、臨床治験ＮＣＴ００２７０６９９、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、ＴｅｔｒａＶａｘ−ＤＶ−ＴＶ００３もしくはｒＤＥＮ２Δ３０−７１６９（例えば、臨床治験ＮＣＴ０２０２１９６８、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、ＴｅｔｒａＶａｘ−ＤＶ、任意選択で混合物における（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１４３６４２２、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、ＤＥＮ４ワクチン候補（例えば、臨床治験ＮＣＴ００９１９１７８、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、ｒＤＥＮ４ｄｅｌｔａ３０−４９９５（例えば、臨床治験ＮＣＴ００３２２９４６、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、ｒＤＥＮ３ｄｅｌｔａ３０／３１−７１６４（例えば、臨床治験ＮＣＴ００８３１０１２、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、ＴＤＥＮＶ−ＰＩＶ（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１７０２８５７、Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉｅｌ Ｃｏｍｍａｎｄによる）、ＤＥＮＶ−１ ＰＩＶ（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１５０２７３５、Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉｅｌ Ｃｏｍｍａｎｄによる）、ｒＤＥＮ３−３’Ｄ４ｄｅｌｔａ３０（例えば、臨床治験ＮＣＴ００７１２８０３、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓによる）、Ｖ１８０（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１４７７５８０、Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．による）またはＤＥＮ１−８０Ｅ（例えば、臨床治験ＮＣＴ００９３６４２９、Ｈａｗａｉｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．による）となり得る。
他の治療法は、例えば、高張乳酸ナトリウム、活性化組換えヒト第ＶＩＩ因子または抗ｄ（例えば、臨床治験ＮＣＴ０１４４３２４７、Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈによる）となり得る。
ある特定の実施形態において、追加的な抗ウイルス剤は、第２の抗デング抗体分子、例えば、第１の抗デング抗体分子とは異なる抗デング抗体分子である。組み合わせて使用することができる例示的な抗デング抗体分子として、表１に収載されている抗体のいずれかの組合せ（例えば、Ｄ８８、Ｆ３８、Ａ４８、Ｃ８８、Ｆ１０８、Ｂ４８、Ａ６８、Ａ１００、Ｃ５８、Ｃ７８、Ｃ６８、Ｄ９８、Ａ１１（モノクローナル抗体４Ｅ５Ａとしても公知（Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁））またはＢ１１のうち２種またはそれを超えるいずれかの組合せ）；モノクローナル抗体４Ｅ１１（Ｔｈｕｌｌｉｅｒら、Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９年；６９巻（２〜３号）：１８３〜９０頁）；ヒト抗体１４ｃ１０（ＨＭ１４ｃ１０）（ＴｅｏｈらＳｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１２年６月２０日；４巻（１３９号）：１３９ｒａ８３頁）；ヒトモノクローナル抗体１Ｆ４、２Ｄ２２および５Ｊ７（ｄｅ Ａｌｗｉｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１２年；１０９巻（１９号）：７４３９〜４４頁）；ヒトモノクローナル抗体ＤＶ１．１、ＤＶ１．６、ＤＶ３．７、ＤＶ４．４、ＤＶ５．１、ＤＶ６．１、ＤＶ７．５、ＤＶ８．１、ＤＶ１０．１６、ＤＶ１３．４、ＤＶ１３．８、ＤＶ１４．５、ＤＶ１４．５、ＤＶ１５．７、ＤＶ１６．５、ＤＶ１６．８、ＤＶ１７．６、ＤＶ１８．２１、ＤＶ１８．４、ＤＶ１９．３、ＤＶ２０．１、ＤＶ２１．１、ＤＶ２１．５、ＤＶ２２．３、ＤＶ２２．３ ＬＡＬＡ、ＤＶ２３．１３、ＤＶ２５．５、ＤＶ２７．２、ＤＶ２８．１、ＤＶ２８．８、ＤＶ３４．４、ＤＶ３５．３、ＤＶ３８．１、ＤＶ５１．６、ＤＶ５２．１、ＤＶ５３．４、ＤＶ５４．７、ＤＶ５５．１、ＤＶ５６．１２、ＤＶ５４．７、ＤＶ５７．４、ＤＶ５９．３、ＤＶ６０．３、ＤＶ６１．２、ＤＶ６２．５、ＤＶ６３．１、ＤＶ６４．３、ＤＶ６５．５、ＤＶ６６．１、ＤＶ６７．９、ＤＶ６８．２、ＤＶ６９．６、ＤＶ７０．１、ＤＶ７１．１、ＤＶ７４．４、ＤＶ７５．９、ＤＶ７６．５、ＤＶ７７．５、ＤＶ７８．６、ＤＶ７９．３、ＤＶ８２．１１、ＤＶ８２．１１ ＬＡＬＡ、ＤＶ８６．２、ＤＶ８７．１、ＤＶ８７．１ ＬＡＬＡ、ＤＶ９０．３、ＤＶ２５７．１３、ＤＶ２９１．７、ＤＶ４１５．８、およびＤＶ４７０．１２（Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏら、Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ．２０１０年；８巻（３号）：２７１〜８３頁）；ヒトモノクローナル抗体３−１４７、５８／５、２Ｆ５、２Ｇ４、５Ｆ９および１３５．３（Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１０年；３２８巻（５９７９号）：７４５〜８頁）；ｍＡｂ ２Ｈ１２（Ｍｉｄｇｌｅｙら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２年；１８８巻（１０号）：４９７１〜９頁）；ヒト化モノクローナル抗体１Ａ５（Ｇｏｎｃａｌｖｅｚら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００７年；１０４巻（２２号）：９４２２〜７頁）；ならびにヒトモノクローナル抗体１Ｃ１９（Ｓｍｉｔｈら、ＭＢｉｏ．２０１３年；４巻（６号）：ｅ００８７３〜１３頁）；またはＷＯ０５／０５６６００、Ｌａｉ， Ｃ．およびＰｕｒｃｅｌｌ， Ｒ．（例えば、抗体１Ａ５および５Ｈ２；ＷＯ２０１０／０４３９７７、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ， Ａ．ら；ＷＯ２０１３／１７３３４８、Ｄｉｍｉｔｒｏｖら；ＵＳ２０１３／０２５９８７１、Ｍａｃａｒｙら；ＷＯ２０１３／０８９６４７、Ｆｉｎｋら；ＷＯ２０１３／０３５３４５、Ｓｅｔｔｈａｐｒａｍｏｔｅら；ＵＳ８，６３７，０３５、Ｈａｎ−Ｃｈｕｎｇ Ｗｕら；もしくはＷＯ２０１４／０２５５４６、Ｓａｓｉｓｅｋｈａｒａｎ， Ｒ．らに開示されている抗体のいずれか；または前述の抗体のいずれかの誘導体（例えば、そのヒトまたはヒト化型）が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書に記載されている抗デング抗体と組み合わせて使用することができる他の治療剤として、例えば、アルファ−グルコシダーゼＩ阻害剤（例えば、Ｒａｔｈｏｒｅら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２０１１年；９２巻（３号）：４５３〜６０頁に記載されているセルゴシビル）；アデノシンヌクレオシド阻害剤（例えば、Ｙｉｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００９年；１０６巻（４８号）：２０４３５〜９頁に記載されているＮＩＴＤ００８）；ＮＳ３および／またはその補助因子ＮＳ２Ｂの阻害剤（例えば、ＮＳ３内のＮＳ２Ｂ結合ポケットを遮断する化合物、例えば、Ｌｅｓｃａｒら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００８年；８０巻（２号）：９４〜１０１頁に記載されている［５−アミノ−１−（フェニル）スルホニル−ピラゾール−３−イル］化合物）；ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤（例えば、Ｎｏｂｌｅら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１３年；８７巻（９号）：５２９１〜５頁に記載されているＮＩＴＤ１０７）；宿主ピリミジン生合成、例えば、宿主ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）の阻害剤（例えば、Ｗａｎｇら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１１年；８５巻（１３号）：６５４８〜５６頁に記載されているＮＩＴＤ−９８２およびブレキナル）；ウイルスＮＳ４Ｂタンパク質の阻害剤（例えば、Ｘｉｅら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１１年；８５巻（２１号）：１１１８３〜９５頁に記載されているＮＩＴＤ−６１８）；およびイミノ糖（例えば、Ｐｅｒｒｙら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２０１３年；９８巻（１号）：３５〜４３頁に記載されているＵＶ−４）も挙げられるがこれらに限定されない。
診断方法
一部の態様において、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、血液試料等、生物学的試料における）またはｉｎ ｖｉｖｏ（例えば、対象におけるｉｎ ｖｉｖｏイメージング）でデングウイルスＥタンパク質の存在を検出するための診断方法を提供する。本方法は、（ｉ）試料を本明細書に記載されている抗体分子に接触させるステップ、または対象に抗体分子を投与するステップと、（任意選択で）（ｉｉ）参照試料、例えば、対照試料（例えば、血漿または血液等、対照生物学的試料）または対照対象を本明細書に記載されている抗体分子に接触させるステップと、（ｉｉｉ）抗体分子および試料もしくは対象または対照試料もしくは対象の間の複合体の形成を検出するステップであって、対照試料または対象と比べた試料または対象における複合体の形成の変化、例えば、統計的に有意な変化が、試料におけるデングウイルスの存在を示すステップとを含む。抗体分子は、検出可能物質で直接的にまたは間接的に標識して、結合または非結合抗体の検出を容易にすることができる。適した検出可能物質は、上述のおよびより詳細に後述する様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料および放射性材料を含む。
ポリペプチドの検出に使用される試料を指す場合、用語「試料」として、細胞、細胞溶解物、細胞のタンパク質もしくは膜抽出物、血液等の体液または組織試料が挙げられるがこれらに限定されない。
抗体分子およびデングウイルスタンパク質の間の複合体形成は、デングウイルスタンパク質に結合した抗体分子または非結合抗体分子のいずれかを測定または可視化することにより検出することができる。いずれか適した検出アッセイを使用することができ、従来の検出アッセイは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学的検査を含む。抗体分子の標識の代替として、デングウイルスタンパク質の存在は、検出可能物質で標識した標準および非標識抗体分子を利用した競合イムノアッセイにより試料においてアッセイすることができる。このアッセイにおいて、生物学的試料、標識された標準および抗体分子が組み合わされ、非標識結合分子に結合した標識された標準の量が決定される。試料におけるデングウイルスタンパク質の量は、抗体分子に結合した標識された標準の量に反比例する。
（実施例１）
抗デング抗体の構造にガイドされる設計
エピトープおよび鋳型同定
様々な中和エピトープが、デングウイルスＥタンパク質二量体に存在する。これらのエピトープは、例えば、ＥＤＩ、ＥＤＩＩ、ＥＤＩＩＩ、融合ループ、ＥＤＩ／ＩＩヒンジおよびＥＤＩＩＩ「Ａ」β鎖における領域を含む。ＥＤＩおよびＥＤＩＩは、ヒトにおいて免疫優性であり、弱く中和性だが高度に交差反応性の抗体を誘導することができる。ＥＤＩＩＩは、強力な中和抗体を誘導することができる。ＥＤＩＩに位置する融合ループに対する抗体は、多くの場合、交差血清型反応性を提示するが、弱い中和活性である。ＥＤＩ／ＩＩヒンジ領域に対する抗体は、強力な中和を提示することができるが、典型的には、このエピトープ領域の低い保存のために血清型特異的である。ＥＤＩＩＩ Ａ鎖に対する抗体は、多くの場合、一部には、抗体へのこの領域のより優れた到達性のために高い効力を提示するが、多くの場合、限定的な交差血清型反応性を有する。
デングウイルスに対する広範に反応性かつ高度に強力な中和抗体を操作するために、マウスｍＡｂ ４Ｅ１１は、ＥＤＩＩＩ Ａ鎖エピトープ領域に結合し、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２およびＤＥＮＶ−３に対する強い中和を提示するが、ＤＥＮＶ−４に対しては提示しないため、これを鋳型抗体として同定した。４Ｅ１１は、ＤＥＮＶ−４に対し非常に低い（μＭ）結合を有する。ＤＥＮＶ−４に対する親和性、ひいては中和効力を増加させるために、アプローチを利用して、ＤＥＮＶ−４に対する４Ｅ１１の分子接触を増加させた。これを行うために、ＥＤＩＩＩによる４Ｅ１１の構造的モデルを作製し、続いて解析して、４Ｅ１１の血清型特異的結合決定基を同定した。
技術およびツール開発
タンパク質工学のための従来の計算的アプローチは、典型的には、エネルギー論に基づく方法に頼る。これらの方法の結果は、一般に、構造またはモデルにおける正確な原子位置に対し高度に感応性であり、したがって、これらの方法は、典型的には、的確なモデリングおよび有益変異予測のために、タンパク質−タンパク質複合体の高分解能かつ高品質の結晶構造または同様のデータを必要とする。その上、タンパク質工学に対する従来のエネルギー論に基づくアプローチは、典型的には、抗体特異的特性および知識を取り込まない。
異なるアプローチは、経験的インフォマティクスおよび特に、残基ペアワイズ傾向方法を使用することである（Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎ Ｋ．ら（２０１３年）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２３；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁）。エピトープ環境を仮定したパラトープ残基のペアワイズ傾向（「適応度」）を評価することにより、幅広い活性およびｉｎ ｖｉｖｏ効力増加を有する、デングウイルスに対し広範に交差反応性の抗体の操作を行った。この適応度計量は、抗体−抗原構造の経験的データに基づき、他のアプローチと比較して、正確な原子位置に対する感応性が低い。よって、このアプローチを有効に使用して、抗体−抗原計算的分子ドッキングの精度を増強し、親和性増強変異の予測および親和性成熟のための位置の同定を増大することができる。
適用：全４種のＤＥＮＶ血清型に対するｐＭ〜ｎＭ結合のための鋳型ｍＡｂの操作
４Ｅ１１−ＥＤＩＩＩ構造的モデルを作製し、親和性増強変異／位置を予測した。例えば、特異的部位における個々の変異を予測し、合理的集中的コンビナトリアルライブラリーの作製のための位置を選択した。図２３に示す通り、得られたヒト化抗体Ｄ８８は、抗体４Ｅ１１と比べて、ＤＥＮＶ−４に対する１０，０００倍の親和性増と、同時発生的なＤＥＮＶ１〜３に対する親和性改善を実証する。
ｍＡｂ Ａ１１とｍＡｂ ４Ｅ１１との比較
抗デング抗体４Ｅ１１（この抗体は、Ｔｈｕｌｌｉｅｒら、Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９年４月１５日；６９巻（２〜３号）：１８３〜９０頁に記載）およびＡ１１（４Ｅ５Ａ）の間の比較は、Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁に示されている。４Ｅ５Ａは、Ａ５５Ｅ（ＶＨ）、Ｒ３１Ｋ（ＶＬ）、Ｎ５７Ｅ（ＶＬ）、Ｅ５９Ｑ（ＶＬ）およびＳ６０Ｗ（ＶＬ）に、４Ｅ１１と比べて５個の点変異を有する（Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、２０１３年、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁）。
（実施例２）
Ｄｅｌ２６は、ＤＶ−４中和活性を改善する。
Ｂ１１は、Ａ１１（４Ｅ５Ａ）と比べて、フレームワーク１（ＦＲ１）におけるＳ２６の重鎖欠失を有する抗デング抗体である。４Ｇ２は、対照抗デング抗体である。４種のデングウイルス血清型由来のＥＤＩＩＩに対する各抗体の中和活性を、フォーカス減少中和検査（ＦＲＮＴ）により検査した。
フォーカス減少中和検査は、デングウイルスが宿主Ｖｅｒｏ細胞に感染する際に形成されるフォーカスを検出する。簡潔に説明すると、抗体の希釈物を、等容量の希釈されたウイルスと混合し、この混合物をＶｅｒｏ細胞単層に移し、フォーカスを検出する。データは、相対感染力として表現する。ＦＲＮＴ５０は、５０％ウイルス中和の達成に必要とされる抗体の濃度を表す。フォーカス中和低下検査のより詳細なプロトコールは、Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、２０１３年、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁に見出すことができる。
図２の４個のグラフパネルは、デングウイルス血清型由来の代表的な株に対する各抗体の中和活性を示す。図３は、デングウイルス血清型ＤＶ−４に対する各抗体の反復的アッセイである。結果は、図２の下部の表に概要を述べ、これは、ウイルスに対する各抗体のＩＣ５０を示す（μｇ／ｍｌ単位）。
予想外なことに、フレームワーク１領域における１個のアミノ酸の欠失は、Ｂ１１に改善されたＤＶ−４中和活性を付与する。より具体的には、４．０〜１７．６μｇ／ｍＬのＩＣ５０を有するＡ１１と比較して、抗体Ｂ１１は、ＤＶ−４の中和を改善し、０．５０〜１．４μｇ／ｍＬのＩＣ５０を達成する。これらの結果は、Ｂ１１が、Ａ１１よりも約８〜約１２倍低いＩＣ５０を達成することを示す。Ｂ１１の優れた中和活性に基づき、Ｂ１１のヒト化バリアントを作製した。
（実施例３）
ヒト化抗デング抗体。
図４は、Ａ１１およびＢ１１に関係するいくつかのヒト化抗体について記載する。様々なヒト化フレームワークを検査した。最右４列は、デングウイルス血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−４およびＤＶ−４のＥＤＩＩＩに対する各抗体の親和性を示す。重鎖ＦＷ３におけるＡ９８Ｖ変異（抗体Ｂ４８＋Ａ９８Ｖを抗体Ｂ４８と比較）は、他の血清型への結合を保持または改善しつつ、ＤＶ−４への結合を約５倍改善した。
（実施例４）
ヒト化抗デング抗体の逆変異。
特にＤＶ−４におけるＥＤＩＩＩに対する抗体親和性を改善するために、選択されたヒト化抗体の重鎖Ｎ末端に様々な逆変異を作製した。図５は、Ｎ末端の完全マウス復帰であるＤ４８が、完全にヒト化されたＮ末端を有する抗体と比べて、親和性に約２倍の改善を有することを示す。他の事例において、逆変異は、ＥＤＩＩＩ−ＤＶ−４に対し同様の、僅かにより低い、または僅かにより高い親和性をもたらした。
図５の上および下の表における最右列は、ＤＶ−４に対するヒト化抗体の親和性が、７．４９４〜２６．８９ｎＭの間であることを示す。この結合活性の保持は、重鎖のＮ末端領域、例えば、位置１〜６における変異に対し相当な寛容性が存在することを示す。
（実施例５）
親和性増強変異の組合せによる抗体親和性の改善。
ＤＶ−４に対するヒト化抗体の親和性をさらに改善するために、様々な親和性増強変異を単独でまたは組み合わせて検査した。図６において、次の変異を検査した：全てＶＨにおけるＴ３３Ｖ、ｄｅｌ２６、Ｇ２７Ａ、Ｇ２７Ｙ、Ｆ２８Ｗ、Ｆ２８Ｇ、Ｆ２８ＡおよびＦ２８Ｙ。Ｄｅｌ２６およびＴ３３Ｖは共に（抗体Ｄ８８における）、Ｔ３３Ｖ変異単独（抗体Ｃ８８における）と比較して、ＥＤＩＩＩ−ＤＶ−４に対する親和性を約４倍改善することが見出された。抗体Ｄ８８に存在する二重ｄｅｌ２６およびＴ３３Ｖ変異は、また、ｄｅｌ２６変異単独を有する抗体よりも親和性を改善する。このような結合の相加的または相乗的改善は、予想外であった。
図６から、親和性を低下させることなく、または僅かに親和性を低下させるだけで、数個の変異を組み合わせることができる（例えば、抗体Ｄ１１８におけるＦ２８ＷおよびＴ３３Ｖ、抗体Ｄ９８におけるＧ２７ＡおよびＴ３３Ｖ、抗体Ｄ１４８におけるＧ２７ＹおよびＴ３３Ｖ、抗体Ｄ１０８におけるＧ２７ＹおよびＦ２８ＷおよびＴ３３Ｖ、ならびに抗体Ｄ１２８におけるＧ２７ＡおよびＦ２８ＷおよびＴ３３Ｖ）ことも明らかである。この実験は、この抗体が、位置２７および２８における置換に対しある程度の寛容性を有することを示す。
次に、ＶＨの位置９８における変異を、他の変異と組み合わせて検査した。本来のヒト化配列は、位置９８にＡを有する。図７は、Ｔ３３Ｖ変異の文脈において、９８Ｖが、９８Ｓまたは９８Ａと比べてＤＶ−４への結合を約２倍改善することを示す（表の上３行（ｒｏｗ）を参照）。表の下３行は、位置９８の変異が、二重変異ｄｅｌ２６＋Ｔ３３Ｖの文脈において強い効果を持たないことを示す。したがって、本抗体分子は、残基９８の変異に対しある程度の寛容性を有する。
（実施例６）
ヒト化抗デング抗体における追加的な結合試験。
数種類のヒト化抗デング抗体を、デングウイルス血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４由来のＥＤＩＩＩに結合するその能力に関して検査した。図８は、競合ＥＬＩＳＡアッセイによって決定される抗体の親和性を示し、図９は、ＳＰＲによって決定される抗体の親和性を示す。全ヒト化抗体は、強い親和性を有するが（例えば、全て２４．３５ｎＭ未満またはそれに等しく、多くはナノモル濃度に満たない（ｓｕｂ−ｎａｎｏｍｏｌａｒ）範囲内である）、一部の抗体は、特に強い結合を有する。例えば、Ｃ８８およびＤ８８は、Ｃ９８の場合よりも約２０倍優れた親和性でＤＶ−１に結合する。図９の全３種の抗体は、ＤＶ−２およびＤＶ−３に対しほぼ等しい親和性を有する。図９における抗体のうち、Ｄ８８は、ＤＶ−４に対し最も強い親和性を有する。
デングウイルスの遺伝的および抗原多様性は、血清型間のみならず、血清型内にも存在する。抗デングウイルス抗体による結合の幅をより完全に調べるために、解析のセットを行って、特にＥＤＩＩＩにおけるデングウイルス配列多様性をさらに捕捉する株配列のパネルを同定した。先ず、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ由来のデングウイルス分離菌の＞３，５００種のＥタンパク質配列を、ＥＤＩＩＩにおけるアミノ酸多様性に関して解析した。この解析から、２１株ＥＤＩＩＩ配列のセットを同定および選択して、デングウイルス多様性をより完全に表した。より具体的には、これらの配列は、最近の循環および大流行地域からの最近の単離の証拠を有する全遺伝子型を表す（臨床的に関連する株）。負荷分離菌、例えば、エピトープ領域の付近またはその領域内の多様性の位置を有する分離菌が、可能であれば常に選択された。その上、プロトタイプ株が含まれた。２１種のデングウイルス分離菌の選択されたパネルのＥＤＩＩＩアミノ酸配列の系統発生的関係性は、図１０Ａに概要を述べる。２１種の多様なデング株のＥＤＩＩＩタンパク質のパネルへの抗体Ｄ８８結合の結果を図１０Ｂに示す。図１０Ｂに示す通り、抗体Ｄ８８は、デングウイルスへの全範囲結合を提示する。
（実施例７）
ヒト化抗デング抗体は、血清型ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４の多数の株由来のＥＤＩＩＩに結合する。
Ｄ８８（図１１、最右列）およびＣ８８（右から２番目の列）を、デングウイルスの様々な株から単離されたＥＤＩＩＩに結合する能力に関して検査した。株の血清型および地理的位置を最左２列に示す。一般に、抗体は、結合の十分な幅を呈し、広範囲のデングウイルス株に対し有効である可能性があることを示す。
（実施例８）
ヒト化抗デング抗体は、フォーカス減少中和検査においてデングウイルスを中和する。
ヒト化抗体は、フォーカス減少中和検査においてＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３およびＤＶ−４を中和する能力を有する。このアッセイは、上の実施例２に記載されている。図１２、図１３および図１４は、代表的ＤＶ−３およびＤＶ−４株によるこれらの実験の結果を示す。ヒト化抗体は、このアッセイにおけるデングウイルスの中和において有効である。例えば、Ａ４８、Ｃ９８およびＤ８８は、マウス抗デング抗体Ａ１１よりも低いＤＶ−４に対するＥＣ５０を達成する（図１２）。図１３は、抗体Ｄ８８、Ｄ１８８およびＤ１２８が、ＤＶ−３のこの株に対する４２６〜５０６ｎｇ／ｍｌの範囲内のＥＣ５０を有することを示す。加えて、Ｄ８８、Ｄ１８８およびＤ１２８は、マウス抗デング抗体Ａ１１よりも低いＤＶ−４に対するＥＣ５０を有した（図１４）。ヒト化抗体は、ＤＶ−１およびＤＶ−２を中和する能力も有する（データ図示せず）。ヒト化抗体が、マウス抗デング抗体よりも高い活性を達成することは予想外であった。少なくとも一部には、本明細書に示す結合データおよび公知デング分離菌の配列解析に基づき、本明細書に記載されているヒト化抗デング抗体分子は、デングウイルスの多様性の代表的な本明細書に収載されている株によるあらゆる血清型および遺伝子型にわたり幅広い中和能力を有する可能性がある。
（実施例９）
ヒト化抗体の熱安定性を熱シフト解析により検査した。
試薬Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅを使用した熱シフト解析により、選択されたヒト化抗体を安定性に関してアッセイした。実験の結果を図１５Ａ、図１５Ｂおよび図１５Ｃに示す。一般に、ヒト化抗体は、多くの場合、約６４〜６８の間のＴｍを有する優れた安定性を示した。
（実施例１０）
デングウイルスのためのマウスモデル。
本明細書に記載されている抗体分子は、動物モデルにおける有効性に関して検査することができる。斯かるモデルの１種、ＡＧ１２９マウスモデルは、Ｔｈａｒａｋａｒａｍａｎら、２０１３年、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３年；１１０巻（１７号）：Ｅ１５５５〜６４頁に記載されている。Ｉ型およびＩＩ型インターフェロン受容体の両方を欠くＡＧ１２９マウス株は、ウイルス血症および他の疾患徴候を含む、デングの臨床症例において観察される疾患顕在化の一部を再現する一般的に使用される動物モデルである。感染したＡＧ１２９マウスは、このウイルスに感染したヒト患者においてごく稀にしか観察されない、脳におけるＤＥＮＶ複製に伴う神経学的機能障害を経験することができる。これは多くの場合、ウイルス負荷のほぼ１８日後に、感染したＡＧ１２９マウスに死亡をもたらす（Ｓｔｅｉｎ， Ｄ．Ａ．ら、Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、２００８年、６２巻（３号）：５５５〜６５頁；Ｊｏｈｎｓｏｎ ＡＪ、Ｒｏｅｈｒｉｇ ＪＴ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９９年１月；７３巻（１号）：７８３〜６頁）。ヒト感染と類似性を欠くにもかかわらず、このモデルは、抗ウイルス処置の評価において有用であり、原理研究の証明において使用することができる。簡潔に説明すると、ＡＧ１２９（ＩＦＮ−α／βおよびＩＦＮ−γ受容体を欠損）マウスに、デングウイルスを負荷し、候補治療抗体分子を投与する。典型的には、ウイルス血症（血液試料におけるウイルス力価）は、実験のエンドポイントである。ウイルス血症は、例えば、定量的ＲＴ−ＰＣＲにより測定することができる。この試験において、ウイルス血症、体重変化および生存を、ＤＥＮＶ−２のニューギニアＣ（ＮＧＣ）株感染後の疾患徴候として使用した。本実施例に示す結果は、ＤＥＮＶ−２マウスモデルにおける抗体Ｄ８８の強いｉｎ ｖｉｖｏ阻害活性を実証する。
ケージに従って群へと動物をブロックランダム化し、それぞれ１０匹が含まれた。動物を、ウイルス負荷１日前に抗体Ｄ８８、無関係アイソタイプマッチ対照ｍＡｂ（ＣｍＡｂ）またはプラセボで処置した。ウイルスを負荷しなかったマウスの群をＤ８８で処置し、毒性対照とした。正常対照としてのマウスの群も含まれ、処置もウイルス負荷もせず、免疫無防備状態のＡＧ１２９マウスにおける効果に関して取扱いおよびケージング（ｃａｇｉｎｇ）技法をモニターした。ウイルスの１０−１希釈（１０６．８ＣＣＩＤ５０（細胞培養感染性用量５０％）／ｍｌ）を最小基礎培地において調製した。マウスに、０．４ｍｌの希釈ウイルス（１０６．４ＣＣＩＤ５０／動物）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。死亡率を毎日３１日間観察した。０日目および１ｄｐｉ（感染後日数）から始めて１日置きにマウスを秤量した。ｑＲＴ−ＰＣＲによるウイルス血症の定量化のため、３ｄｐｉに全動物から血清を採取した。
図１６は、デングウイルス感染後に、Ｄ８８（２５ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ８８（５ｍｇ／ｋｇ）、ＣｍＡｂまたはＰＢＳを投与したマウスの生存パーセンテージを示す。図１６に示す通り、２５ｍｇ／ｋｇのＤ８８で処置したマウスの約９０％および５ｍｇ／ｋｇのＤ８８で処置したマウスの約６０％は、３１日目まで生存した一方、ＣｍＡｂまたはＰＢＳで処置した対照マウスは全て、１７日目にまたはより早くに死亡した。
図１７は、デングウイルス感染後に、Ｄ８８（２５ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ８８（５ｍｇ／ｋｇ）、ＣｍＡｂまたはＰＢＳを投与したマウスの平均体重変化を示す。Ｄ８８（２５ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳで処置したが、デングウイルスに感染しなかったマウス（偽）も検査した。図１７に示す通り、抗体Ｄ８８を投与したマウスは、感染３１日後であっても有意な体重変化がなかった一方、ＣｍＡｂまたはＰＢＳを投与したマウスは、１５日目に有意な減量が為された。対照として、Ｄ８８またはＰＢＳで処置したが、デングウイルスに感染しなかったマウスは、明らかな体重変化を提示しなかった。
図１８は、デングウイルス感染後に、Ｄ８８（２５ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ８８（５ｍｇ／ｋｇ）、ＣｍＡｂまたはＰＢＳを投与したマウスにおけるウイルス血症力価を示す。結果は、１ｍｌ当たりの外挿されたＰＦＵおよびゲノムコピー当量（ＧＣＥ）／ｍＬとして表現する。ｐ値＜０．００１による有意性は、記号＊＊＊によって示す。図１８に示す通り、ＣｍＡｂ（アイソタイプ対照）またはＰＢＳを投与したマウスは、２５ｍｇ／ｋｇのＤ８８または５ｍｇ／ｋｇのＤ８８で処置したマウスと比較してより高いウイルス血症力価を有した。
これらの結果は、抗体Ｄ８８の単一全身性投与が、循環ウイルス力価の急速な低下をもたらしたことを実証する。抗体Ｄ８８は、強い保護をもたらし、それぞれ２５および５ｍｇ／ｋｇの９／１０および６／１０匹の動物は、ＤＥＮＶ−２致死的負荷を生き延びた。抗体Ｄ８８は、ピークウイルス血症の日である感染３日後に、ウイルス力価の有意なかつ用量依存性低下を実証した。
（実施例１１）
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＡＤＥからの保護
本明細書に記載されている抗体分子は、動物モデルにおける有効性に関して検査することができる。斯かるモデルの１種、ＡＧ１２９マウスにおける抗体増強性重症デングウイルス感染は、Ｂａｌｓｉｔｉｓら、２０１０年（Ｌｅｔｈａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｓ ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ ｂｙ Ｆｃ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ、２０１０年２月１２日；６巻（２号）：ｅ１０００７９０頁）に記載されている。簡潔に説明すると、デングウイルス（例えば、Ｄ２Ｓ１０）負荷１日前に、ＡＧ１２９マウスにデングウイルス増強抗体（例えば、ＤＶ１抗血清または４Ｇ２モノクローナル抗体）を投与する。負荷１日前に（予防）または負荷１もしくは２日後に（治療）、候補抗体分子を投与する。典型的には、死亡率は、実験のエンドポイントである；血清におけるウイルス血症および炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）レベルをエンドポイントとすることもできる。
（実施例１２）
昆虫および哺乳動物細胞において繁殖したデングウイルス血清型の中和。
上の実施例２に記載されている通り、フォーカス減少中和検査（ＦＲＮＴ）により、４種のデングウイルス血清型に対するヒト化抗体の中和活性を試験した。４種のデングウイルス血清型（ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４）を昆虫細胞または哺乳動物細胞のいずれかにおいて繁殖させ、宿主Ｖｅｒｏ（サル）細胞の感染に使用した。図１６〜図１８は、代表的ＤＥＮＶ−１〜４株によるこれらの実験の結果を示す。データは、相対感染力として表現する。例えば、ＥＣ５０またはＦＲＮＴ５０値は、５０％ウイルス中和の達成に必要とされる抗体の濃度を表す。図１６〜図１８に示す通り、被験抗体は、昆虫および哺乳動物細胞において繁殖したＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４株の中和において有効である。
図１９は、抗体Ｄ８８が、Ｃ６／３６昆虫細胞において繁殖したＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４株を中和したことを示す。結果は、図１９の下部の表に概要を述べ、これは、代表的ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４株に対するＥＣ５０値を示す（ｎｇ／ｍｌ）。ＤＥＮＶ−１株Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＤＥＮＶ−２株Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ／１９４４（ＮＧＣ）、ＤＥＮＶ−３株Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／１９５６（Ｈ８７）およびＤＥＮＶ−４株Ｍｅｘｉｃｏ／１９９７（ＢＣ２８７／９７）を試験した。
図２０は、抗体Ｄ８８が、Ｖｅｒｏ細胞において繁殖したＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４株を中和したことを示す。結果は、代表的ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３およびＤＥＮＶ−４株に対するＦＲＮＴ５０値として示す（ｎｇ／ｍｌ）。ＤＥＮＶ−１株Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＤＥＮＶ−２株Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ／１９４４（ＮＧＣ）、ＤＥＮＶ−３株Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／１９５６（Ｈ８７）およびＤＥＮＶ−４株Ｍｅｘｉｃｏ／１９９７（ＢＣ２８７／９７）を試験した。
図２１は、抗体Ｄ８８およびＡ１１が、Ｖｅｒｏ細胞において繁殖したＤＥＮＶ−４株Ｈ２４１を中和したことを示す。結果は、図２１の下部の表に概要を述べ、これは、ＤＥＮＶ−４株Ｈ２４１に対する抗体のＥＣ５０値を示す（ｎｇ／ｍｌ）。
これらの結果は、抗体Ｄ８８が、＜１μｇ／ｍｌのＥＣ５０値で全４種のＤＥＮＶ血清型を強力に中和したことを実証する。抗体Ｄ８８は、負荷ＤＥＮＶ−４株Ｈ２４１を効率的に中和し、これに１００ｎＭ親和性で結合した。
（実施例１３）
抗体の阻害活性を評価するためのデングウイルスの蚊モデル。
本明細書に記載されている抗体分子は、蚊モデルにおいて有効性を検査することができる。デングウイルスは、蚊に伝染されるＲＮＡウイルスである。ある特定のデングウイルスは、ｉｎ ｖｉｖｏ適応度利点を生じることができ、これは、より高確率のヒトから蚊への伝染をもたらすことができる（Ｖｕら、ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ．２０１０年；４巻（７号）：ｅ７５７頁）。デングウイルスに対する抗体の阻害活性を評価するための蚊モデルを確立するために、ウイルスを含有する血液を、様々な希釈の抗体と混合し、３７℃で３０分間インキュベートする。抗体をスパイクした血液を蚊の給餌器に加え、蚊に約１時間給餌する。蚊を寒冷麻酔し、充血した蚊を選択する。血液給餌７日後に、蚊の腹部を採取する。ウイルス負荷は、ｑＲＴ−ＰＣＲによって測定することができる。腹部感染を有する蚊の比率は、ＰＣＲにより検査した腹部の総数で割った感染した腹部の数として計算することができる。
（実施例１４）
抗デング抗体のＨＰ−ＳＥＣ評価。
高速分子ふるいクロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）を行って、ネイティブ非ストレス条件下における抗デング抗体の凝集傾向を評価した。この方法は、単量体からの抗体二量体および凝集体の識別を可能にする。二量体および凝集体は、免疫原性のリスク増加をもたらし得る。
この試験において、抗体を精製して１ｍｇ／ｍｌとし、流速１ｍｌ／ｍｉｎによる移動相としてＰＢＳを使用した分子ふるいカラム、例えば、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＢｉｏＳｅｐ ｓ３０００によって評価した。
図２２は、抗体Ｄ８８の代表的クロマトグラムを示し、これは、単量体として存在する９８％を超える抗体（プロテインＡクロマトグラフィーによってのみ精製）を呈する。図２２の下部の表に概要を述べる通り、９９．１５％の抗体Ａ４８、９８．３７％の抗体Ｃ８８および９９．５９％の抗体Ｄ８８が、試料において単量体として存在した。
参照による援用
本明細書に言及されているあらゆる刊行物、特許および受託番号は、あたかも個々の刊行物または特許のそれぞれが、ここに本明細書の一部を構成するものとしてその内容を援用すると特にかつ個々に示されているかのように、これによりここに本明細書の一部を構成するものとしてそれらの内容全体を援用する。
均等物
本明細書における組成物および方法の特異的な実施形態を記述してきたが、上述の明細書は、説明的であって制限的ではない。本発明の多くの変種は、本明細書および後述する特許請求の範囲の概説により、当業者であれば明らかとなるであろう。本発明の全範囲は、斯かる変種と共に、その均等物の全範囲および本明細書と共に、特許請求の範囲の参照により決定されるべきである。

Claims (62)

  1. デングウイルスに結合することができる抗体分子であって、
    （ａ）
    配列
    （配列番号３）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし、
    は不変）を含むＣＤＲ１と、
    配列
    （配列番号４）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
    は不変）を含むＣＤＲ２と、
    配列ＧＷＥＧＦＡＹ（配列番号５）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
    を含む重鎖免疫グロブリン可変領域セグメント、および
    （ｂ）
    配列ＲＡＳＥＮＶＤＫＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号６）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ１と、
    配列ＲＡＳＥＬＱＷ（配列番号７）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ２と、
    配列ＱＲＳＮＥＶＰＷＴ（配列番号８）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
    を含む軽鎖可変領域セグメント
    を含む抗体分子。
  2. 配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）、または配列番号１１と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ１を含む、請求項１に記載の抗体分子。
  3. 配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）を有するＶＨ ＦＷ１を含む、請求項１に記載の抗体分子。
  4. 配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）もしくはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８４もしくは８５と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む、請求項１に記載の抗体分子。
  5. 配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）またはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）を有するＶＨ ＦＷ２を含む、請求項１に記載の抗体分子。
  6. デングウイルスに結合することができる抗体分子であって、
    （ａ）
    配列
    （配列番号３）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
    は不変）を含むＣＤＲ１と、
    配列
    （配列番号４）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし、
    は不変）を含むＣＤＲ２と、
    配列ＧＷＥＧＦＡＹ（配列番号５）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
    を含む重鎖免疫グロブリン可変領域セグメント、および
    （ｂ）配列ＲＡＳＥＮＶＤＫＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号６）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ１と、
    配列ＲＡＳＥＬＱＷ（配列番号７）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ２と、
    配列ＱＲＳＮＥＶＰＷＴ（配列番号８）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
    を含む軽鎖可変領域セグメント
    を含む抗体分子。
  7. 配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）、または配列番号１１と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ１を含む、請求項６に記載の抗体分子。
  8. 配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＧＦＮＩＫ（配列番号１１）を有するＶＨ ＦＷ１を含む、請求項６に記載の抗体分子。
  9. 配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）もしくはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８４もしくは８５と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む、請求項６に記載の抗体分子。
  10. 配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）またはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）を有するＶＨ ＦＷ２を含む、請求項６に記載の抗体分子。
  11. デングウイルスに結合することができる抗体分子であって、
    （ａ）
    配列番号３３と比べて位置２６の欠失を含むＦＷ１と、
    配列
    （配列番号３）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
    は不変）を含むＣＤＲ１と、
    配列
    （配列番号４）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列、ただし任意選択で、
    は不変）を含むＣＤＲ２と、
    配列ＧＷＥＧＦＡＹ（配列番号５）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
    を含む重鎖免疫グロブリン可変領域セグメント、および
    （ｂ）
    配列ＲＡＳＥＮＶＤＫＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号６）（または、それから１、２、３、４もしくは５アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ１と、
    配列ＲＡＳＥＬＱＷ（配列番号７）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ２と、
    配列ＱＲＳＮＥＶＰＷＴ（配列番号８）（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）を含むＣＤＲ３と
    を含む軽鎖可変領域セグメント
    を含む抗体分子。
  12. 配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）もしくはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）、または配列番号８４もしくは８５と比べて１、２、３、４もしくは５個以下の変異を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＦＷ２を含む、請求項１１に記載の抗体分子。
  13. 配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８４）またはＷＶＲＱＡＰＥＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号８５）を有するＶＨ ＦＷ２を含む、請求項１１に記載の抗体分子。
  14. デングウイルスＥＤＩＩＩ（Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ）に結合することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  15. 配列番号３〜８、１４および３５（または、それから１、２もしくは３アミノ酸以下が異なる配列）のいずれかの配列を有する１個または複数のＣＤＲを含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  16. 配列番号３〜８、１４および３５のいずれかの配列を有する１個または複数のＣＤＲを含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  17. 配列番号３〜８、１４および３５のいずれかの配列を有する少なくとも２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  18. 配列番号３のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４のＶＨ ＣＤＲ２、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ３、配列番号６のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７のＶＬ ＣＤＲ２および配列番号８のＶＬ ＣＤＲ３を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  19. 配列番号３または１４のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号４または３５のＶＨ ＣＤＲ２、配列番号５のＶＨ ＣＤＲ３、配列番号６のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号７のＶＬ ＣＤＲ２および配列番号８のＶＬ ＣＤＲ３を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  20. 配列番号１と少なくとも７０％同一であるＶＨアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  21. 配列番号１のＶＨアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  22. 配列番号１６〜２１、２４、２５、２７、２９、３１、３２、３３、３６、８０または８１のいずれかと少なくとも７０％同一であるＶＨアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  23. 配列番号１６〜２１、２４、２５、２７、２９、３１、３２、３３、３６、８０または８１の前記ＶＨアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  24. 配列番号２と少なくとも７０％同一であるＶＬアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  25. 配列番号２のＶＬアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  26. 配列番号３４と少なくとも７０％同一であるＶＬアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  27. 配列番号３４のＶＬアミノ酸配列を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  28. Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  29. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  30. カッパまたはラムダの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を含む、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  31. 単離された抗体分子である、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  32. ヒト化抗体分子である、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  33. ヒトフレームワーク生殖系列配列に由来する１個または複数のフレームワーク領域を含有する、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  34. 約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、４、３、２、１、０．５、０．２、０．１、０．０５または０．０１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、デングウイルスＥＤＩＩＩに結合することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  35. 約１０、８、６、５、４または３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で、デングウイルス血清型ＤＶ−４ ＥＤＩＩＩに結合することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  36. 抗体Ａ１１または抗体４Ｅ１１よりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、１５、２５、５０、７５、１００、１，０００、５，０００または１０，０００倍優れた親和性で、ＤＶ−３またはＤＶ−４ ＥＤＩＩＩドメインに結合することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  37. 抗体Ａ１１または抗体４Ｅ１１よりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、２５、５０、７５、１００または１，０００倍優れた親和性で、ＤＥＮＶ−４ ＢＣ２、ＤＥＮＶ−４−Ｓｉｎｇ、ＤＥＮＶ−４ ＮＣ、ＤＥＮＶ−４ Ｐｈｉｌ、ＤＥＮＶ−３ Ｓｉｎｇ、ＤＥＮＶ−３ Ｎｉｃ、ＤＥＮＶ−３ Ｈ８７、ＤＥＮＶ−２ Ｐｅｒｕ、ＤＥＮＶ−２ Ｓｉｎｇ、ＤＥＮＶ−２ ＮＧＣ、ＤＥＮＶ−１ Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＤＥＮＶ−２ Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ／１９４４（ＮＧＣ）、ＤＥＮＶ−３ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／１９５６（Ｈ８７）、ＤＥＮＶ−４ Ｍｅｘｉｃｏ／１９９７（ＢＣ２８７／９７）およびＤＥＮＶ−４ Ｈ２４１から選択されるデングウイルス株に結合することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  38. フォーカス減少中和検査においてデングウイルスを中和することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  39. フォーカス減少中和検査において抗体Ａ１１または抗体４Ｅ１１よりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、１２、２５、５０、７５または１００倍低いＩＣ５０で、デングウイルスを中和することができる、上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子。
  40. 上述の請求項のいずれかに記載の抗体分子と、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤とを含む医薬組成物。
  41. 請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子の抗体重鎖または軽鎖可変領域をコードする核酸。
  42. 請求項４１に記載の核酸を含む発現ベクター。
  43. 請求項４１に記載の核酸を含む宿主細胞。
  44. 抗体分子またはその断片を産生する方法であって、遺伝子発現に適した条件下で、請求項４３に記載の宿主細胞を培養するステップを含む方法。
  45. 請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子が内部に配置された容器と、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と、任意選択で、送達デバイスとを含むキット。
  46. 前記送達デバイスが、注射器または針を含む、請求項４５に記載のキット。
  47. 使用説明書をさらに含む、請求項４５に記載のキット。
  48. デングウイルスを中和する方法であって、前記デングウイルスを請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子と接触させるステップを含む方法。
  49. 前記デングウイルスが、血清型ＤＶ−１、ＤＶ−２、ＤＶ−３またはＤＶ−４のものである、請求項４８に記載の方法。
  50. デングウイルスを処置する方法であって、それを必要とする対象に、単離された請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子を、前記ウイルスの処置に有効な量で投与するステップを含む方法。
  51. 抗ウイルス剤を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記抗ウイルス剤が、バラピラビル、クロロキン、セルゴシビル、イベルメクチンまたはＣａｒｉｃａ ｆｏｌｉａのうち１種または複数から選択される、請求項５０に記載の方法。
  53. 前記抗ウイルス剤が、表１に収載されている抗体、４Ｅ１１、１４ｃ１０（ＨＭ１４ｃ１０）、１Ｆ４、２Ｄ２２、５Ｊ７、ＤＶ１．１、ＤＶ１．６、ＤＶ３．７、ＤＶ４．４、ＤＶ５．１、ＤＶ６．１、ＤＶ７．５、ＤＶ８．１、ＤＶ１０．１６、ＤＶ１３．４、ＤＶ１３．８、ＤＶ１４．５、ＤＶ１４．５、ＤＶ１５．７、ＤＶ１６．５、ＤＶ１６．８、ＤＶ１７．６、ＤＶ１８．２１、ＤＶ１８．４、ＤＶ１９．３、ＤＶ２０．１、ＤＶ２１．１、ＤＶ２１．５、ＤＶ２２．３、ＤＶ２２．３ ＬＡＬＡ、ＤＶ２３．１３、ＤＶ２５．５、ＤＶ２７．２、ＤＶ２８．１、ＤＶ２８．８、ＤＶ３４．４、ＤＶ３５．３、ＤＶ３８．１、ＤＶ５１．６、ＤＶ５２．１、ＤＶ５３．４、ＤＶ５４．７、ＤＶ５５．１、ＤＶ５６．１２、ＤＶ５４．７、ＤＶ５７．４、ＤＶ５９．３、ＤＶ６０．３、ＤＶ６１．２、ＤＶ６２．５、ＤＶ６３．１、ＤＶ６４．３、ＤＶ６５．５、ＤＶ６６．１、ＤＶ６７．９、ＤＶ６８．２、ＤＶ６９．６、ＤＶ７０．１、ＤＶ７１．１、ＤＶ７４．４、ＤＶ７５．９、ＤＶ７６．５、ＤＶ７７．５、ＤＶ７８．６、ＤＶ７９．３、ＤＶ８２．１１、ＤＶ８２．１１ ＬＡＬＡ、ＤＶ８６．２、ＤＶ８７．１、ＤＶ８７．１ ＬＡＬＡ、ＤＶ９０．３、ＤＶ２５７．１３、ＤＶ２９１．７、ＤＶ４１５．８、ＤＶ４７０．１２、３−１４７、５８／５、２Ｆ５、２Ｇ４、５Ｆ９、１３５．３、２Ｈ１２、１Ａ５または１Ｃ１９のいずれかのうち１種または複数から選択される抗デング抗体である、請求項５０に記載の方法。
  54. 抗ウイルス剤が、アルファ−グルコシダーゼＩ阻害剤、アデノシンヌクレオシド阻害剤、ＮＳ３および／またはその補助因子ＮＳ２Ｂの阻害剤、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤、宿主ピリミジン生合成の阻害剤、ウイルスＮＳ４Ｂタンパク質の阻害剤またはイミノ糖のうち１種または複数から選択される、請求項５０に記載の方法。
  55. 前記アルファ−グルコシダーゼＩ阻害剤が、セルゴシビルであり、前記アデノシンヌクレオシド阻害剤が、ＮＩＴＤ００８であり、前記ＮＳ３および／またはその補助因子ＮＳ２Ｂの阻害剤が、［５−アミノ−１−（フェニル）スルホニル−ピラゾール−３−イル］化合物であり、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤が、ＮＩＴＤ１０７であり、前記宿主ピリミジン生合成の阻害剤が、ＮＩＴＤ−９８２もしくはブレキナルから選択される宿主ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）の阻害剤であり、前記ウイルスＮＳ４Ｂタンパク質の阻害剤が、ＮＩＴＤ−６１８であり、または前記イミノ糖が、ＵＶ−４である、請求項５４に記載の方法。
  56. ワクチンを前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
  57. 投与が、非経口的である、請求項５０に記載の方法。
  58. 投与が、静脈内である、請求項５０に記載の方法。
  59. デングウイルス感染を防止する方法であって、それを必要とする対象に、単離された請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子を、感染の防止に有効な量で投与するステップを含む方法。
  60. デングウイルスに罹患する患者リスクを低下させる方法であって、それを必要とする対象に、単離された請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子を、前記ウイルスに罹患する前記リスクを低下させるのに有効な量で投与するステップを含む方法。
  61. 対象および蚊の間のデングウイルスの伝染を低下させる方法であって、デングウイルスの感染前または後に対象に、単離された請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子を、前記デングウイルスの伝染を低下させるのに有効な量で投与するステップを含む方法。
  62. 生物学的試料におけるデングウイルスを検出する方法であって、（ｉ）前記試料または対象（および任意選択で、参照試料または対象）を、請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体分子に、前記抗体分子とポリペプチドとの相互作用が起こるのを可能にする条件下で接触させるステップと、（ｉｉ）前記抗体分子と、前記試料または前記対象（および任意選択で、前記参照試料または対象）との間の複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
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