JP2017512068A - マイトフュージンの方法及び使用 - Google Patents
マイトフュージンの方法及び使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017512068A JP2017512068A JP2016569017A JP2016569017A JP2017512068A JP 2017512068 A JP2017512068 A JP 2017512068A JP 2016569017 A JP2016569017 A JP 2016569017A JP 2016569017 A JP2016569017 A JP 2016569017A JP 2017512068 A JP2017512068 A JP 2017512068A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mfn1
- polypeptide
- agent
- activity
- mfn2
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 129
- 101000957747 Drosophila melanogaster Transmembrane GTPase Marf Proteins 0.000 title description 8
- 101150108984 mfn-1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 162
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 66
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 34
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 106
- 101150050341 Mfn2 gene Proteins 0.000 claims description 88
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 65
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 56
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 40
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 33
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 33
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 33
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 33
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 31
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 28
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 27
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 27
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 27
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 claims description 25
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 claims description 21
- 102000013446 GTP Phosphohydrolases Human genes 0.000 claims description 19
- 108091006109 GTPases Proteins 0.000 claims description 19
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 19
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 14
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 claims description 12
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 12
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 claims description 12
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 claims description 11
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 9
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims description 7
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 claims description 7
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 6
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 5
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 83
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 53
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 40
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 33
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 23
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 21
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 21
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 19
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 18
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 15
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 14
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 12
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 6
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000015263 low fat diet Nutrition 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 4
- 230000006540 mitochondrial respiration Effects 0.000 description 4
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 3
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 3
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 3
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 108091023663 let-7 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091063478 let-7-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091049777 let-7-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 3
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000004065 mitochondrial dysfunction Effects 0.000 description 3
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UHFFFAOYSA-N 2-{[3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound OCC1OC(CO)(OC2OC(CO)C(O)C(O)C2O)C(O)C1O CZMRCDWAGMRECN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIFFUZWRFRDZJC-UHFFFAOYSA-N Antimycin A1 Natural products CC1OC(=O)C(CCCCCC)C(OC(=O)CC(C)C)C(C)OC(=O)C1NC(=O)C1=CC=CC(NC=O)=C1O UIFFUZWRFRDZJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQWZLRAORXLWDN-UHFFFAOYSA-N Antimycin-A Natural products CCCCCCC(=O)OC1C(C)OC(=O)C(NC(=O)c2ccc(NC=O)cc2O)C(C)OC(=O)C1CCCC NQWZLRAORXLWDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001123331 Homo sapiens Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha Proteins 0.000 description 2
- 108050004122 Mitofusin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000015888 Mitofusin-1 Human genes 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 2
- 102100028960 Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha Human genes 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- HIMXGTXNXJYFGB-UHFFFAOYSA-N alloxan Chemical compound O=C1NC(=O)C(=O)C(=O)N1 HIMXGTXNXJYFGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIFFUZWRFRDZJC-SBOOETFBSA-N antimycin A Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](CCCCCC)[C@@H](OC(=O)CC(C)C)[C@H](C)OC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=CC=CC(NC=O)=C1O UIFFUZWRFRDZJC-SBOOETFBSA-N 0.000 description 2
- PVEVXUMVNWSNIG-UHFFFAOYSA-N antimycin A3 Natural products CC1OC(=O)C(CCCC)C(OC(=O)CC(C)C)C(C)OC(=O)C1NC(=O)C1=CC=CC(NC=O)=C1O PVEVXUMVNWSNIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 231100001129 embryonic lethality Toxicity 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 2
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 2
- 108091053735 lin-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032363 lin-4-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028008 lin-4-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 2
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- UPMXNNIRAGDFEH-UHFFFAOYSA-N 3,5-dibromo-4-hydroxybenzonitrile Chemical compound OC1=C(Br)C=C(C#N)C=C1Br UPMXNNIRAGDFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 208000011732 Abnormal glucose homeostasis Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 229940123208 Biguanide Drugs 0.000 description 1
- XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N Biguanide Chemical compound NC(N)=NC(N)=N XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000237519 Bivalvia Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100040758 CREB-regulated transcription coactivator 2 Human genes 0.000 description 1
- 101100447427 Caenorhabditis elegans fzo-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BMZRVOVNUMQTIN-UHFFFAOYSA-N Carbonyl Cyanide para-Trifluoromethoxyphenylhydrazone Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(NN=C(C#N)C#N)C=C1 BMZRVOVNUMQTIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 1
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010012665 Diabetic gangrene Diseases 0.000 description 1
- 108700011977 Drosophila Fzo Proteins 0.000 description 1
- 101100072149 Drosophila melanogaster eIF2alpha gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000015782 Electron Transport Complex III Human genes 0.000 description 1
- 108010024882 Electron Transport Complex III Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- LLQPHQFNMLZJMP-UHFFFAOYSA-N Fentrazamide Chemical compound N1=NN(C=2C(=CC=CC=2)Cl)C(=O)N1C(=O)N(CC)C1CCCCC1 LLQPHQFNMLZJMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000891901 Homo sapiens CREB-regulated transcription coactivator 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 102100031455 NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1 Human genes 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102000003728 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000029 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 241000907663 Siproeta stelenes Species 0.000 description 1
- 108010041191 Sirtuin 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000007707 calorimetry Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000002032 cellular defenses Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000020639 clam Nutrition 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 230000003081 coactivator Effects 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- RNTXMYSPASRLFT-UHFFFAOYSA-L disodium;2-[[n'-[hydroxy(oxido)phosphoryl]carbamimidoyl]-methylamino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(C)C(N)=NP([O-])([O-])=O RNTXMYSPASRLFT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000000198 fluorescence anisotropy Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009229 glucose formation Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000006525 intracellular process Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000009707 neogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000013116 obese mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229940127017 oral antidiabetic Drugs 0.000 description 1
- 239000003538 oral antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 238000007410 oral glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000007739 porin activity proteins Human genes 0.000 description 1
- BIRNWOIQDVFTSP-WWNCWODVSA-M potassium (2R,3R,4R,5R)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexanoate Chemical compound [K+].OC[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O BIRNWOIQDVFTSP-WWNCWODVSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 102000037983 regulatory factors Human genes 0.000 description 1
- 108091008025 regulatory factors Proteins 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000035806 respiratory chain Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 229940080817 rotenone Drugs 0.000 description 1
- JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N rotenone Natural products O1C2=C3CC(C(C)=C)OC3=CC=C2C(=O)C2C1COC1=C2C=C(OC)C(OC)=C1 JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000001743 silencing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
- G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Obesity (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
a)Mfn1ポリペプチドを提供するステップ、
b)GTP分子を提供するステップ、及び
c)候補薬剤の存在下でMfn1ポリペプチドとGTP分子との結合を検出するステップ
を含む方法を提供する。
マイトフュージン−1(Mfn1)及びマイトフュージン−2(Mfn2)は、ドロソフィラ(Drosophila)Fzo又は酵母Fzo1タンパク質の哺乳動物の相同体である。哺乳動物のMfn1及びMfn2タンパク質は組織により発現レベルは異なるが、多くの組織で広く発現している。Mfn1及びMfn2はいずれもミトコンドリアの構造維持に重要である。
MAEPVSPLKHFVLAKKGITAIFDQLLEFVTEGSHFVEATYKNPELDRIATEDDLVEMQGYKDKLSIIGEVLSRRHMKVAFFGRTSSGKSSVINAMLWDKVLPSGIGHITNCFLSVEGTDGDKAYLMTEGSDEKKSVKTVNQLAHALHMDKDLKAGCLVRVFWPKAKCALLRDDLVLVDSPGTDVTTELDSWIDKFCLDADVFVLVANSESTLMNTEKHFFHKVNEWLSKPNIFILNNRWDASASEPEYMEDVRRQHMERCLHFLVEELKVANALEAQNRIFFVSAKEVLSARKQKAQGMPESGVALAEGFHARLQEFQNFEQIFEECISQSAVKTKFEQHTIRAKQILATVKNIMDSVNLAAEDKRHYSVEEREDQIDRLDFIRNQMNLLTLDVKKKIKEVTEEVANKVSCAMTDEICRLSVLVDEFCSEFHPNPDVLKIYKSELNKHIEDGMGRNLADRCTDEVNALVLQTQQEIIENLKPLLPAGIQDKLHTLIPCKKFDLSYNLNYHKLCSDFQEDIVFRFSLGWSSLVHRFLGPRNAQRVLLGLSEPIFQLPRSLASTPTAPTTPATPDNASQEELMITLVTGLASVTSRTSMGIIIVGGVIWKTIGWKLLSVSLTMYGALYLYERLSWTTHAKERAFKQQFVNYATEKLRMIVSSTSANCSHQVKQQIATTFARLCQQVDITQKQLEEEIARLPKEIDQLEKIQNNSKLLRNKAVQLENELENFTKQFLPSSNEES
(GenBank Accession No.AAK06840.1;配列番号1)
MAETVSPLKHFVLAKKAITAIFGQLLEFVTEGSHFVEATYRNPELDRIASEDDLVEIQGYRNKLAVIGEVLSRRHMKVAFFGRTSSGKSSVINAMLWDKVLPSGIGHTTNCFLSVEGTDGDKAYLMTEGSDEKKSVKTVNQLAHALHMDKDLKAGCLVHVFWPKAKCALLRDDLVLVDSPGTDVTTELDIWIDKFCLDADVFVLVANSESTLMNTEKHFFHKVNERLSKPNIFILNNRWDASASEPEYMEDVRRQHMERCLHFLVEELKVVSPSEARNRIFFVSAKEVLNSRKHKAQGMPEGGGALAEGFQARLQEFQNFEQTFEECISQSAVKTKFEQHTIRAKQILDTVKNILDSVNVAAAEKRVYSMEEREDQIDRLDFIRNQMNLLTLDVKKKIKEVTEEVANKVSCAMTDEICRLSVLVDEFCSEFHPTPSVLKVYKSELNKHIEDGMGRNLADRCTNEVNASILQSQQEIIENLKPLLPAGIQNKLHTLIPCKKFDLSYDLNCHKLCSDFQEDIVFRFSLGWSSLVHRFLGSTNAQRVLLGLSEPIFQVPRSLASTPTAPSNPAAPDNAAQEELMITLITGLASLTSRTSMGIIVVGGVIWKTVGWKLISVTLSMYGALYLYERLTWTTRAKERAFKQQFVNYATEKLQMIVSFTSANCSHQVQQEMATTFARLCQQVDVTQKHLEEEIARLSKEIDQLEKIQNNSKLLRNKAVQLESELENFSKQFLHPSSGES
(GenBank Accession No.AAO34660.1;配列番号2)
MSLLFSRCNSIVTVKKNKRHMAEVNASPLKHFVTAKKKINGIFEQLGAYIQESATFLEDTYRNAELDPVTTEEQVLDVKGYLSKVRGISEVLARRHMKVAFFGRTSNGKSTVINAMLWDKVLPSGIGHTTNCFLRVEGTDGHEAFLLTEGSEEKRSAKTVNQLAHALHQDKQLHAGSLVSVMWPNSKCPLLKDDLVLMDSPGIDVTTELDSWIDKFCLDADVFVLVANSESTLMQTEKHFFHKVSERLSRPNIFILNNRWDASASEPEYMEEVRRQHMERCTSFLVDELGVVDRSQAGDRIFFVSAKEVLNARIQKAQGMPEGGGALAEGFQVRMFEFQNFERRFEECISQSAVKTKFEQHTVRAKQIAEAVRLIMDSLHMAAREQQVYCEEMREERQDRLKFIDKQLELLAQDYKLRIKQITEEVERQVSTAMAEEIRRLSVLVDDYQMDFHPSPVVLKVYKNELHRHIEEGLGRNMSDRCSTAITNSLQTMQQDMIDGLKPLLPVSVRSQIDMLVPRQCFSLNYDLNCDKLCADFQEDIEFHFSLGWTMLVNRFLGPKNSRRALMGYNDQVQRPIPLTPANPSMPPLPQGSLTQEEFMVSMVTGLASLTSRTSMGILVVGGVVWKAVGWRLIALSFGLYGLLYVYERLTWTTKAKERAFKRQFVEHASEKLQLVISYTGSNCSHQVQQELSGTFAHLCQQVDVTRENLEQEIAAMNKKIEVLDSLQSKAKLLRNKAGWLDSELNMFTHQYLQPSR
(GenBank Accession No.AAK18728.1;配列番号3)
MSLLFSRCNSIVTVKKDKRHMAEVNASPLKHFVTAKKKINGIFEQLGAYIQESASFLEDTHRNTELDPVTTEEQVLDVKGYLSKVRGISEVLARRHMKVAFFGRTSNGKSTVINAMLWDKVLPSGIGHTTNCFLRVGGTDGHEAFLLTEGSEEKKSVKTVNQLAHALHQDEQLHAGSMVSVMWPNSKCPLLKDDLVLMDSPGIDVTTELDSWIDKFCLDADVFVLVANSESTLMQTEKQFFHKVSERLSRPNIFILNNRWDASASEPEYMEEVRRQHMERCTSFLVDELGVVDRAQAGDRIFFVSAKEVLSARVQKAQGMPEGGGALAEGFQVRMFEFQNFERQFEECISQSAVKTKFEQHTVRAKQIAEAVRLIMDSLHIAAQEQRVYCLEMREERQDRLRFIDKQLELLAQDYKLRIKQITEEVERQVSTAMAEEIRRLSVLVDEYQMDFHPSPVVLKVYKNELHRHIEEGLGRNLSDRCSTAIASSLQTMQQDMIDGLKPLLPVSMRNQIDMLVPRQCFSLSYDLNCDKLCADFQEDIEFHFSLGWTMLVNRFLGPKNSRRALLGYSDQVQRPLPLTPANPSMPPLPQSSLTQEELMVSMVTGLASLTSRTSMGILVVGGVVWKAVGWRLIALSFGLYGLLYVYERLTWTTKAKERAFKRQFVEYASEKLQLIISYTGSNCSHQVQQELSGTFAHLCQQVDITRDNLEQEIAAMNKKVEALDSLQSRAKLLRNKAGWLDSELNMFTHQYLQPSR
(GenBank Accession No.AAM88577.1;配列番号4)
本発明は、マイトフュージン、例えばMfn1又はMfn2に結合可能な薬剤を同定する方法を含む。
本発明はまた、マイトフュージン、例えばMfn1又はMfn2の活性を調節することが可能な薬剤を同定するための方法を含む。Mfn1又はMfn2の活性は、例えばMfn1又はMfn2のGTPアーゼの酵素活性を分析することによって、直接分析され得る。代わりに又は加えて、Mfn1又はMfn2の活性は、例えば細胞内のミトコンドリアの融合を分析することによって、間接的に分析され得る。
GTPアーゼ活性を測定するためのいくつかの技術が当業者に知られている。そのようなGTPアーゼアッセイは、付随して無機リン酸の放出を生じるGTPアーゼによるGTPのGDPへの変換を検出することに基づくものであり得る。これらの技術は、細胞から単離されたGTPアーゼ、例えばMfn1又はMfn2に応用することができる。Mfn1又はMfn2は組換え技術を用いて発現させることが可能である。好ましくは、かかるMfn1又はMfn2は精製されている。Mfn1及びMfn2の発現及び精製の方法は当業者に知られている。
ミトコンドリア融合に対する候補薬剤の効果も細胞内で直接分析することが可能である。ミトコンドリア融合を分析する方法は当業者に知られている。例えば、ミトコンドリアは、共焦点顕微鏡を用いるタイムラプス撮影により細胞内で可視化され得る。この技術は、Mfn1及びMfn2のノックアウトがミトコンドリア動態及び融合に及ぼす効果についての研究においてChen et al.(Chen H.et al.(2003) J.Cell Biol.160:189−200)が記載している。
Mfn1又はMfn2の発現を分析する方法は、本発明においてタンパク質レベルで候補薬剤の効果を選別するために用いられ得る。加えて、診断方法の部分として、対象者からの試料中のタンパク質、例えばMfn1、Mfn2又は他のバイオマーカーの発現レベルを分析することもできる。タンパク質の発現レベルは疾患又は疾患の素因に関連し得る。
マイトフュージン発現は、転写後遺伝子抑制(PTGS)を用いて調節することができる。2本鎖RNA(dsRNA)によりもたらされる転写後遺伝子抑制は、外来遺伝子の発現を制御するため保存された細胞防御機構である。トランスポゾン又はウイルスなどの配列の無作為な挿入が、相同な1本鎖mRNA又はウイルスのゲノムRNAの配列特異的な分解を活性化するdsRNAの発現を引き起こすと考えられている。そのサイレンシング効果はRNA干渉(RNAi)として知られている(Ralph et al.(2005) Nat.Medicine 11:429−33)。RNAiの機構は、長いdsRNAを約21〜25ヌクレオチド(nt)のRNA2重鎖にプロセシングすることを含む。これらの産物はmRNA分解の配列特異的な介在分子であり、低分子干渉RNA又はサイレンシングRNA(siRNA)と呼ばれる。分化した哺乳動物細胞では、30bpより長いdsRNAが、タンパク質合成の停止及び非特異的mRNA分解を誘導するインターフェロン応答を活性化することが明らかとなっている(Stark et al.(1998) Ann.Rev.Biochem.67:227−64)。しかし、この応答は21ntのsiRNA2重鎖を用いることにより回避され得(Elbashir et al.(2001) EMBO J.20:6877−88;Hutvagner et al.(2001) Science 293:834−8)、培養哺乳動物細胞での遺伝子機能の分析を可能とする。
本発明の薬剤は代謝疾患の処置又は予防に用いられ得る。代謝疾患は、糖尿病、インスリン抵抗性、耐糖能異常、又は空腹時血糖異常であり得る。好ましくは、代謝疾患は糖尿病である。糖尿病は1型又は2型糖尿病であり得、好ましくは2型糖尿病である。
代謝疾患、例えば、糖尿病、インスリン抵抗性、及び耐糖能異常についてのいくつかの動物モデルが当業者に知られている。上記に検討したように、C57Bl/6Jマウスモデルは、高脂肪食飼育によりヒトの代謝疾患を模倣可能であることから、動物に基づく研究に普通に用いられる。
本発明で用いる薬剤はポリペプチド又はポリヌクレオチドであり得る。ポリヌクレオチド及びポリペプチドは、本発明の方法又はスクリーニングアッセイの部分として細胞内へ導入することが必要な場合がある。
本発明のポリヌクレオチドはDNA又はRNAを含み得る。それらは1本鎖又は2本鎖であり得る。遺伝暗号の縮重の結果、数多くの異なるポリヌクレオチドが同一のポリペプチドをコードし得ることは当業者に理解されるであろう。加えて、本発明のポリペプチドを発現するいかなる特定の宿主生物におけるコドン使用をも反映して、日常的な技術を用いて、本発明のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドの配列に影響を与えずにヌクレオチドを置換することが、当業者に可能であることが理解されるべきである。
本明細書で用いられる「タンパク質」という用語は、個々の構成ポリペプチドが共有結合又は非共有結合により連結されている複数ポリペプチドの複合体に加えて、単鎖ポリペプチド分子を含む。本明細書で用いられる「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、単量体がアミノ酸であり、ペプチド結合又はジスルフィド結合を通じて連結された重合体を表す。
本明細書で言及される特定のタンパク質及びヌクレオチドに加えて、本発明は多様体、誘導体、類似体、相同体、及びこれらの断片をも包含する。
本発明で用いられるポリヌクレオチドはコドンの最適化がなされ得る。コドン最適化は、以前に国際公開第1999/041397号及び国際公開第2001/079518号に記載されている。異なる細胞では特定のコドンの使用に相違がある。このコドンの偏りは、細胞型における特定tRNAの相対量の偏りに対応している。対応するtRNAの相対量に合うよう配列中のコドンを変化させることによって発現を増加させることが可能である。同様に、対応するtRNAが特定の細胞型で稀であることがわかっているコドンを意図的に選択することによって発現を減少させることが可能である。このように、転写度合いを追加的に制御可能である。哺乳動物の細胞のコドン使用頻度は他の多様な生物と同様に当業者に知られている。
本明細書で用いられる抗体は、選択された標的に結合可能であり、Fv、ScFv、F(ab’)、及びF(ab’)2、モノクローナル及びポリクローナル抗体、キメラ、CDR移植、及びヒト化を含む設計された抗体、並びにファージディスプレイ又は代わりの技術を用いて生産された人工的に選択される抗体を含む、抗体全体又は抗体断片を表す。
本明細書中の処置というすべての表現は治療的、緩和的及び予防的処置を含むと理解されるべきである。哺乳動物、特にヒトの処置が好ましい。ヒト及び獣医学的処置はいずれも本発明の範囲内である。
本発明で使用される薬剤は単独で投与され得るとしても、特にヒトの治療法において、それらは一般的には医薬担体、賦形剤又は希釈剤との混合物で投与されるであろう。いくつかの実施形態では、薬剤は栄養剤、食品添加物、又は食品成分であり、したがって適切な食品組成物に処方され得る。それ故、薬剤は、例えば食品製品、飲料、ペットフード製品、補助食品、機能性食品、又は栄養製剤で投与され得る。
当業者は、本発明の薬剤のうちの1つについて、過度の実験を行うことなしに、対象への投与のために適切な用量を容易に決定することが可能である。一般には、医師が個々の患者に最も適切な実際の用量を決定し、その用量は、用いる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用期間、齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の方法及び時期、排泄率、併用する薬剤、特定の状態についての重症度、並びに個々に受けている治療を含む様々な要因によるであろう。もちろん、より高い又はより低い用量範囲が優れている個別の場合があり得、そのような場合は本発明の範囲内にある。
試料:
診断及び予防の方法という面での「試料」は、対象に由来する試料を表すものとして本発明の範囲内にあると理解される。生体試料は、対象から直接得られるものであってもよいし、又は前記対象から得られた培養細胞に由来するものであってもよい。
「対象」は、ヒト又はヒト以外の動物のいずれをも表す。ヒト以外の動物の例は、例えば、ヒト以外の霊長類(特に高等霊長類)、イヌ、げっ歯類(例えばマウス、ラット又はモルモット)、ブタ及びネコといった哺乳動物などの脊椎動物を含む。好ましい実施形態において対象はヒトである。
材料:
特段の記載がない場合、PJ34を含むすべての化学物質はSigma−Aldrichから入手した。
純系C57Bl/6Jを背景とした雄のMfn1のfloxマウスが、IRB Barcelona(スペイン)のAntonio Zorzano教授により作成された。その後、肝特異的にMfn1遺伝子を欠失させたマウス(Mfn1−LKO)を育成するために、このマウスと、Creリコンビナーゼ酵素を発現するマウスを交配させた。flox動物が対照として用いられた。マウスは、水並びにげっ歯類の標準食(D12450J,Research diets Inc.,New Brunswick,NJ,USA)又は高カロリー、高脂肪食(脂肪60kcal、Research Diets,New Brunswick,NJ,USA)を自由に利用できる状態で収容し、12時間の明暗周期の下で飼育した。すべての動物実験は、現地国内及びEUの倫理指針に従って実施された。体重をモニタリングするために、マウスは各週同一曜日に計量し摂食量を測定した。すべての研究において、絶食(8:00開始)した場合は6時間後(14:00)に動物を屠殺し、下記に詳述するように組織の採取及び処理を行った。経口の耐糖試験及び腹腔内インスリン耐性試験は、以前(Lagouge et al,2006)に記載されている通りに決定した。そして、血漿インスリンは、ヘパリン添加血漿試料中で特異的なELISAキット(Mercodia)を用いて決定した。ヘパリンを入れた採血管に血液試料を採取し、遠心分離後に血漿を単離した。我々は、O2消費量、CO2生成量、及び自発運動量を、文献(Lagouge et al,2006)に記載されている通り、開放型間接熱量測定系(Sabre systems,Las Vegas,NV,USA)で24〜48時間にわたり測定した。エネルギー消費量は、エネルギー当量20.1J/mL O2を用いて算出した。呼吸商は、O2消費量に対するCO2生成量の比とした。運動量測定の間、ビームラインの横断は各々15分間についてまとめた。各15分間のビームライン横断の合計を時間に対してプロットし、各実験集団で平均的であった個々のマウスについてAUCを算出した。
製造者の指示に従ってTRIzol(Invitrogen)を用いて全RNAを調製した。RNAをDNA分解酵素で処理し、2mgのRNAを逆転写(RT)に用いた。cDNAはQIAquick PCR cleanupカラム(Qiagen,Valencia,CA,USA)で精製した。50倍希釈したcDNAを定量RT−PCR(RT−qPCR)反応に用いた(Lagouge et al,2006)。RT−qPCR反応は、Light−Cyclerシステム(Roche Applied Science)及びqPCR Supermix(Qiagen)を用いて、次のプライマーで実施した:ベータ−2−マイクログロブリン(ハウスキーピング遺伝子;F:TTCTGGTGCTTGTCTCACTG(配列番号5);R:TATGTTCGGCTTCCCATTCT(配列番号6));シクロフィリン(ハウスキーピング遺伝子:F:CAGGGGAGATGGCACAGGAG(配列番号7);R:CGGCTGTCTGTCTTGGTGCTCTCC(配列番号8));Mfn1(F:AGGGGACCGATGGAGATAAAG(配列番号9);R:AAGAGGGCACATTTTGCTTTG(配列番号10));Mfn2(F:ACGTCAAAGGGTACCTGTCCA(配列番号11);R:CAATCCCAGATGGCAGAACTT(配列番号12))。Mfn1及びMfn2の発現評価は2つの常発現遺伝子により補正した。
以前(Frezza et al,2007)に記載されている通り、ミトコンドリアの単離にはおよそ0.5mgの肝臓を用いた。最終的なミトコンドリア塊は、溶解緩衝液(50mM トリス、100mM KCl、1mM EDTA、1% NP40、5mM ニコチンアミド、1mM 酪酸ナトリウム、プロテアーゼ阻害剤、pH7.4)に再懸濁された。タンパク質濃度はBCA protein assayキット(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA)を用いて測定し、試料の希釈はタンパク質濃度が等しくなるよう調整した。タンパク質は、以前(Canto et al,2004)に記載されている通り、SDS−PAGEにより分離され、ニトロセルロース膜上に移された。
Mfn1、ポリン、及びOXPHOSのカクテル抗体はAbcam(Cambridge,UK)から購入し、OPA−1抗体はBD Biosciences(San Francisco,USA)から購入した。ペルオキシダーゼ標識した2次マウス及びウサギ抗体はSigma−Aldrichから購入した。
ミトコンドリアの機能は、以前(Holmstrom et al,2012)に記載されている通り、呼吸測定器(Oroboros Oxygraph−2k;Oroboros Instruments,Innsbruck,Austria)を用いて評価された。摘出したばかりの1片の肝臓(約50mg)を計量し、弛緩液(2.8mM Ca2K2EGTA、7.2mM K2EGTA、5.8mM ATP、6.6mM 塩化マグネシウム、20mM タウリン、15mM クレアチンリン酸ナトリウム、20mM イミダゾール、0.5mM ジチオスレイトール、及び50mM MES、pH7.1)に入れ、解剖処理の最後に、エッペンドルフ製の電動乳棒を用いて、200マイクロリットルの氷冷した呼吸測定液(0.5mM EGTA、3mM 塩化マグネシウム、60mM ラクトビオン酸カリウム、20mM タウリン、10 mM リン酸二水素カリウム、20mM HEPES、110mM ショ糖、及び0.1%(w/v)ウシ血清アルブミン、pH7.1)中でこの組織をゆっくり均質化した。その後、呼吸測定液の量は、0.1mg組織/マイクロリットルの濃度となるように調整した。そして、2mgの破砕物を呼吸チャンバに加えた。すべての測定は2回反復した。基質としてリンゴ酸(終濃度2mM)、グルタミン酸(20mM)、及びピルビン酸(10mM)を添加することによって、呼吸鎖の複合体Iからの基底酸素流量(漏出)を測定した。複合体I+IIを通って収束した電子の流れについて、ADP(5mM)とそれに続く複合体IIの基質であるコハク酸(10mM)の添加によって酸化的リン酸化を定量した。その後、プロトノフォアであるカルボニルシアニド−p−トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン(0.2μM)を滴下し、電子伝達系を介する最大流量を達成した。最後に、ロテノン(0.1μM)及びアンチマイシンA(2.5μM)をそれぞれ順次添加することにより、複合体I及びIIIからの電子伝達を阻害した。
動物試験の統計解析において、すべてのデータは正規分布することが確認された。有意性の評価のために、我々は独立標本のためのスチューデントのt検定を実施した。統計解析ソフトウェアは、GraphPad Prism 5(GraphPad Software,Inc.)を用い、すべてにおいてp値<0.05を有意とした。
16週齢のMfn1−LKO及び対照マウスで、身体組成を分析するためにエコーMRI解析(エコー核磁気共鳴画像解析)を行い、その直後から日々の活動及び摂食量を評価するためにCLAMS解析を実施した。マウスは24週齢で屠殺し、Mfn1及びMfn2の発現をRT−qPCRで分析するために肝臓から全mRNAを抽出した。
対照及びMfn1−LKOマウスは24週齢で供試された。(A)実施例1の記載に従って全肝臓の破砕物を呼吸測定アッセイに用いた。すべての値は、対照マウスがn=11、Mfn1−LKOマウスがn=9の、平均+/−標準誤差(SEM)で表示されている。
(A)18週齢の雄性対照又はMfn1−LKOマウスに2g/kg体重で腹腔内注入し、記載の期間で血糖量を追跡調査した。(B)20週齢の雄性対照又はMfn1−LKOマウスに0.3U/kgのインスリンを腹腔内注入し、記載の期間で血糖量を追跡調査した。すべての値は、対照マウスがn=11、Mfn1−LKOがn=9の、平均+/−標準誤差(SEM)で表示されている。
(A)10週齢の対照及びMfn1−LKOマウスを低脂肪食(LFD)又は高脂肪食(HFD)で飼育した。(A)体重の変化。(B)8週の高脂肪食飼育後にエコーMRIにより測定された身体組成。(C)高脂肪食の開始から10週後にマウスに2g/kg体重で腹腔内注入し、記載の期間で血糖量を追跡調査した。(D)高脂肪食開始後12週に老齢マウスは0.75U/kgのインスリンを腹腔内注入され、記載の期間で血糖量が追跡調査された。曲線上面積(AOC)値は右に示されている。すべての値は、対照マウスがn=10、Mfn1−LKOがn=10の、平均+/−標準誤差(SEM)で表示されている。*は、それぞれの対照マウスに対する統計的有意差をp<0.05で示している。
メトホルミンは、ビグアニド類の経口抗糖尿病薬であり、特に腎機能が正常である体重過剰及び肥満の個体における2型糖尿病処置の第1選択薬である。メトホルミンは、インスリン抵抗性が重要因子となり得る疾患においても利用される。メトホルミンは、肝臓によるブドウ糖産生を抑制することによって作用する。メトホルミンは、インスリン又は他の医薬との組み合わせで処方されることもある。
12週齢の対照及びMfn1−LKOマウスを高脂肪食(D12492,Research Diets Inc.,USA)で8週間飼育した。その後、マウスを一晩絶食させ、生理食塩水(溶媒として)又はメトホルミン(125mg/kg)いずれかを注入した。マウスは90分後に屠殺し、直後に肝臓を摘出し凍結させた。タンパク質抽出物を得、AMPK活性化の指標であるCRTC2、eIF2アルファ及びGAPDHを検査するためにウェスタンブロット解析に用いた。測定されたAMPK活性化指標が表すように、対照マウスに比較してMfn1−LKOマウスは促進されたAMPK活性化を示した。
ミトコンドリアの呼吸を測定する方法は上記実施例1に記載されている。野生型及びMfn1−LKOマウスから抽出したてのミトコンドリアを呼吸測定液に再懸濁し、100μgのタンパク質を呼吸測定解析に用いた。複合体Iの活性はリンゴ酸及びグルタミン酸の添加により刺激した。その後、最大共役呼吸を達成するためにADPを添加し、続いてメトホルミンの効果を評価した。図4の棒グラフは、呼吸の絶対量を各遺伝子型について4つのミトコンドリア調製物の平均+/−標準誤差(SEM)で示している。*は、野生型及びMfn1−LKO間の、p<0.05の統計的有意差を示している。下の表は、異なるメトホルミン用量での最大呼吸に対する残存の百分率を表している。
対照及びMfn1−LKOマウスの肝臓における呼吸値(pmol/(秒×mg組織))。値は、アンチマイシン−A(複合体III阻害剤)添加後に残った残存呼吸を引いた後の正味の呼吸速度である。すべての値は、対照マウスがn=11、Mfn1−LKOマウスがn=9の平均+/−標準誤差(SEM)で表されている。
Canto C,Suarez E,Lizcano JM,Grino E,Shepherd PR,Fryer LG,Carling D,Bertran J,Palacin M,Zorzano A,Guma A (2004) Neuregulin signaling on glucose transport in muscle cells.J Biol Chem 279:12260−12268
Frezza C,Cipolat S,Scorrano L (2007) Organelle isolation:functional mitochondria from mouse liver,muscle and cultured fibroblasts.Nature protocols 2:287−295
Holmstrom MH,Iglesias−Gutierrez E,Zierath JR,Garcia−Roves PM (2012) Tissue−specific control of mitochondrial respiration in obesity−related insulin resistance and diabetes.Am J Physiol Endocrinol Metab 302:E731−739
Lagouge M,Argmann C,Gerhart−Hines Z,Meziane H,Lerin C,Daussin F,Messadeq N,Milne J,Lambert P,Elliott P,Geny B,Laakso M,Puigserver P,Auwerx J (2006) Resveratrol improves mitochondrial function and protects against metabolic disease by activating SIRT1 and PGC−1alpha.Cell 127:1109−1122
Anila K.Madiraju,Derek M.Erion,Yasmeen Rahimi,Xian−Man Zhang,Demetrios T.Braddock,Ronald A.Albright,Brett J.Prigaro,John L.Wood,Sanjay Bhanot,Michael J.MacDonald,Michael J.Jurczak,Joao−Paulo Camporez,Hui−Young Lee,Gary W.Cline,Varman T.Samuel,Richard G.Kibbey & Gerald I.Shulman (2014) Metformin suppresses gluconeogenesis by inhibiting mitochondrial glycerophosphate dehydrogenase,Nature 510:542−546(26 June 2014)
Claims (26)
- マイトフュージン−1(Mfn1)に結合可能な薬剤を同定する方法であって、Mfn1ポリペプチドを提供するステップ、及び前記Mfn1ポリペプチドと候補薬剤との結合を検出するステップを含む方法。
- Mfn1の活性を調節する薬剤を同定するための方法であって、Mfn1ポリペプチド若しくはポリヌクレオチドと候補薬剤とを含む調製物を提供するステップ、及び前記候補薬剤が前記Mfn1ポリペプチド若しくはポリヌクレオチドの活性に影響するか否かを検出するステップを含む方法。
- Mfn1の活性が、Mfn1のGTPアーゼ活性を決定することによって測定される、請求項2に記載の方法。
- 前記候補薬剤をGTP存在下で前記Mfn1ポリペプチドと接触させるステップ、及びGDPへのGTPの加水分解を測定するステップを含む、請求項3に記載の方法。
- Mfn1の活性を調節することが可能な薬剤であって、マイトフュージン−2(Mfn2)の活性を調節しない薬剤を同定するための方法である、請求項2〜4のいずれか一項に記載の方法。
- Mfn2の活性が、Mfn2のGTPアーゼ活性を決定することによって測定される、請求項5に記載の方法。
- Mfn1の活性を減少させる薬剤を同定するための方法である、請求項2〜6のいずれか一項に記載の方法。
- Mfn1とGTPとの相互作用を調節することが可能な化合物を同定する方法であって、
d)Mfn1ポリペプチドを提供するステップ、
e)GTP分子を提供するステップ、及び
f)候補薬剤の存在下で前記Mfn1ポリペプチドと前記GTP分子との結合を検出するステップ
を含む方法。 - Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングを調節する薬剤を同定するための方法であって、Mfn1ポリペプチドを発現する細胞を候補薬剤と接触させるステップ、及び前記Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングの増減をモニタリングするステップを含む方法。
- Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングを減少させる薬剤を同定するための方法である、請求項9に記載の方法であって、Mfn1ポリペプチドを発現する細胞を候補薬剤と接触させるステップ、及び前記Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングの減少をモニタリングするステップを含む方法。
- Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングを減少させる薬剤であって、Mfn2ポリペプチドの発現又はプロセシングを調節しない薬剤を同定するための方法である、請求項9に記載の方法。
- Mfn1関連疾患の症状を予防、調節、減少又は改善する薬剤を同定するための方法である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 代謝疾患の症状を予防、減少又は改善する薬剤を同定するための方法である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 代謝疾患の症状を予防、調節、減少又は改善する薬剤を同定する方法であって、Mfn1活性を調節するものとして同定された薬剤を前記代謝疾患の動物モデルに投与するステップ、及び前記動物モデルにおける前記代謝疾患の進行を観察するステップを含む方法。
- 前記候補薬剤が、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法を用いて同定される、請求項14に記載の方法。
- 前記代謝疾患が、インスリン抵抗性、耐糖能異常、空腹時血糖異常、及び糖尿病からなる群から選択される、請求項13〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記薬剤が、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、又は小分子である、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 代謝疾患の処置又は予防における使用のための、Mfn1の活性を調節することが可能な薬剤。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項18に記載の薬剤であって、Mfn1の活性を減少させることが可能な薬剤。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項17〜19のいずれか一項に記載の薬剤であって、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、又は小分子からなる群から選択される薬剤。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項17〜19のいずれか一項に記載のsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、又はポリペプチドをコードするベクター。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項17〜21のいずれか一項に記載のベクター又は薬剤であって、前記代謝疾患が、インスリン抵抗性、耐糖能異常、空腹時血糖異常、及び糖尿病からなる群から選択される、ベクター又は薬剤。
- 代謝疾患を予防又は処置する薬剤をスクリーニングする方法における、Mfn1ポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの使用。
- 代謝疾患のバイオマーカーとしての、Mfn1ポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの使用。
- 対象における代謝疾患又は該疾患の素因を診断する方法であって、対象から得られた試料におけるMfn1の発現レベルを測定することを含む方法。
- 前記代謝疾患が、インスリン抵抗性、耐糖能異常、空腹時血糖異常、及び糖尿病からなる群から選択される、請求項25に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14155312.3 | 2014-02-17 | ||
EP14155312 | 2014-02-17 | ||
EP14192012.4 | 2014-11-06 | ||
EP14192012 | 2014-11-06 | ||
PCT/EP2015/053169 WO2015121461A1 (en) | 2014-02-17 | 2015-02-16 | Methods and uses of mitofusins |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017512068A true JP2017512068A (ja) | 2017-05-18 |
Family
ID=52484482
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016569017A Ceased JP2017512068A (ja) | 2014-02-17 | 2015-02-16 | マイトフュージンの方法及び使用 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20190204342A1 (ja) |
EP (1) | EP3108257B1 (ja) |
JP (1) | JP2017512068A (ja) |
CN (1) | CN106030311B (ja) |
WO (1) | WO2015121461A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3307290B1 (en) | 2015-06-11 | 2020-04-15 | Société des Produits Nestlé S.A. | Dietary supplement |
WO2018200323A1 (en) * | 2017-04-23 | 2018-11-01 | Washington University | Small molecule regulators of mitochondrial fusion and methods of use thereof |
JP2022523702A (ja) | 2019-01-28 | 2022-04-26 | ミトコンドリア エモーション, インク. | トランス-4-ヒドロキシシクロヘキシルフェニルアミドマイトフュージン活性化物質及びその使用方法 |
JP7473565B2 (ja) | 2019-01-28 | 2024-04-23 | ミトコンドリア エモーション, インク. | マイトフュージン活性化物質及びその使用方法 |
CN110632327B (zh) * | 2019-10-11 | 2023-04-28 | 河北医科大学第三医院 | 人血浆线粒体融合蛋白2在作为诊断非酒精性脂肪性肝病的分子标志物中的应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002503964A (ja) * | 1997-06-06 | 2002-02-05 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | ミトフュージン遺伝子およびその利用法 |
US20020168673A1 (en) * | 1999-10-06 | 2002-11-14 | Fuller Margaret T. | Mitofusins, Fzo homologs and functional derivatives thereof |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU763020B2 (en) * | 1998-03-06 | 2003-07-10 | Oxford Biomedica (Uk) Limited | Enhanced prodrug activation |
CN1176942C (zh) * | 2001-08-02 | 2004-11-24 | 中国科学院生物物理研究所 | 一种具有强插膜能力的氨基酸多肽 |
WO2004074482A1 (es) * | 2003-02-21 | 2004-09-02 | Universidad De Barcelona | Método de diagnóstico para diabetes y obesidad |
JP2011501731A (ja) * | 2007-09-10 | 2011-01-13 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | ミトコンドリア標的化抗腫瘍剤 |
WO2011072390A1 (en) * | 2009-12-16 | 2011-06-23 | The University Of Western Ontario | Compositions and methods related to mirna in diabetic conditions |
CN102526763A (zh) * | 2012-03-22 | 2012-07-04 | 南京大学 | Ggpps拮抗剂在制备治疗ii型糖尿病药物中的用途 |
-
2015
- 2015-02-16 EP EP15705286.1A patent/EP3108257B1/en active Active
- 2015-02-16 US US15/113,334 patent/US20190204342A1/en not_active Abandoned
- 2015-02-16 JP JP2016569017A patent/JP2017512068A/ja not_active Ceased
- 2015-02-16 WO PCT/EP2015/053169 patent/WO2015121461A1/en active Application Filing
- 2015-02-16 CN CN201580008666.4A patent/CN106030311B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002503964A (ja) * | 1997-06-06 | 2002-02-05 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | ミトフュージン遺伝子およびその利用法 |
US20020168673A1 (en) * | 1999-10-06 | 2002-11-14 | Fuller Margaret T. | Mitofusins, Fzo homologs and functional derivatives thereof |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
CELL DEATH AND DIFFERENTIATION, vol. 18, no. 2, JPN6018050371, 2011, pages 235 - 247 * |
J BIOL CHEM, vol. 283, no. 48, JPN6018050370, 2008, pages 33347 - 33356 * |
J CELL SCI, vol. 117, no. 26, JPN6018050362, 2004, pages 6535 - 6546 * |
J CELL SCI, vol. 119, no. 23, JPN6018050357, 2006, pages 4913 - 4925 * |
KOREAN J PHYSIOL PHARMACOL, vol. 16, no. 1, JPN6018050364, 2012, pages 71 - 77 * |
PROC NATL ACAD SCI USA, vol. 104, no. 28, JPN6018050373, 2007, pages 11649 - 11654 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106030311B (zh) | 2019-10-18 |
EP3108257B1 (en) | 2019-10-30 |
US20190204342A1 (en) | 2019-07-04 |
WO2015121461A1 (en) | 2015-08-20 |
CN106030311A (zh) | 2016-10-12 |
EP3108257A1 (en) | 2016-12-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Li et al. | Follistatin-like 1 suppresses sensory afferent transmission by activating Na+, K+-ATPase | |
US9486521B2 (en) | Therapeutic applications targeting SARM1 | |
CN114133450B (zh) | 抗-Rho GTPase的构象单域抗体及其用途 | |
JP2017512068A (ja) | マイトフュージンの方法及び使用 | |
US20140303078A1 (en) | Modulation of pancreatic beta cell proliferation | |
US20240209370A1 (en) | Methods of modulating alk | |
CN101466410B (zh) | 新型治疗和诊断产品及方法 | |
US20190144909A1 (en) | Methods of modulating bckdh | |
US20210236593A1 (en) | Methods of supporting weight maintenance by decreasing the activity of fam46a | |
Chen et al. | ZBTB38, a novel regulator of autophagy initiation targeted by RB1CC1/FIP200 in spinal cord injury | |
KR20130096338A (ko) | Mg53-ube2h 상호작용을 이용한 제2형 당뇨 치료제의 스크리닝 방법 | |
JP5378202B2 (ja) | 脳・神経に特異的あるいは神経分化に特異的なバイオマーカー | |
EP2311478B1 (en) | Use of ip3 receptor-binding protein for controlling intracellular pH | |
Gong et al. | Annexin A1 exerts analgesic effect in a mouse model of medication overuse headache | |
US20210095288A1 (en) | Methods of modulating nkx6.3 | |
Waldron | Investigating the Role of Histidyl-tRNA Synthetase in Zebrafish Nervous System Development | |
US20210189389A1 (en) | Methods of modulating ank1 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180208 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20181212 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190408 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20190614 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190910 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191105 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200512 |
|
A045 | Written measure of dismissal of application [lapsed due to lack of payment] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A045 Effective date: 20200923 |