JP2017512068A - マイトフュージンの方法及び使用 - Google Patents
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Abstract
Description
a)Mfn1ポリペプチドを提供するステップ、
b)GTP分子を提供するステップ、及び
c)候補薬剤の存在下でMfn1ポリペプチドとGTP分子との結合を検出するステップ
を含む方法を提供する。
マイトフュージン−1(Mfn1)及びマイトフュージン−2(Mfn2)は、ドロソフィラ(Drosophila)Fzo又は酵母Fzo1タンパク質の哺乳動物の相同体である。哺乳動物のMfn1及びMfn2タンパク質は組織により発現レベルは異なるが、多くの組織で広く発現している。Mfn1及びMfn2はいずれもミトコンドリアの構造維持に重要である。
MAEPVSPLKHFVLAKKGITAIFDQLLEFVTEGSHFVEATYKNPELDRIATEDDLVEMQGYKDKLSIIGEVLSRRHMKVAFFGRTSSGKSSVINAMLWDKVLPSGIGHITNCFLSVEGTDGDKAYLMTEGSDEKKSVKTVNQLAHALHMDKDLKAGCLVRVFWPKAKCALLRDDLVLVDSPGTDVTTELDSWIDKFCLDADVFVLVANSESTLMNTEKHFFHKVNEWLSKPNIFILNNRWDASASEPEYMEDVRRQHMERCLHFLVEELKVANALEAQNRIFFVSAKEVLSARKQKAQGMPESGVALAEGFHARLQEFQNFEQIFEECISQSAVKTKFEQHTIRAKQILATVKNIMDSVNLAAEDKRHYSVEEREDQIDRLDFIRNQMNLLTLDVKKKIKEVTEEVANKVSCAMTDEICRLSVLVDEFCSEFHPNPDVLKIYKSELNKHIEDGMGRNLADRCTDEVNALVLQTQQEIIENLKPLLPAGIQDKLHTLIPCKKFDLSYNLNYHKLCSDFQEDIVFRFSLGWSSLVHRFLGPRNAQRVLLGLSEPIFQLPRSLASTPTAPTTPATPDNASQEELMITLVTGLASVTSRTSMGIIIVGGVIWKTIGWKLLSVSLTMYGALYLYERLSWTTHAKERAFKQQFVNYATEKLRMIVSSTSANCSHQVKQQIATTFARLCQQVDITQKQLEEEIARLPKEIDQLEKIQNNSKLLRNKAVQLENELENFTKQFLPSSNEES
(GenBank Accession No.AAK06840.1;配列番号1)
MAETVSPLKHFVLAKKAITAIFGQLLEFVTEGSHFVEATYRNPELDRIASEDDLVEIQGYRNKLAVIGEVLSRRHMKVAFFGRTSSGKSSVINAMLWDKVLPSGIGHTTNCFLSVEGTDGDKAYLMTEGSDEKKSVKTVNQLAHALHMDKDLKAGCLVHVFWPKAKCALLRDDLVLVDSPGTDVTTELDIWIDKFCLDADVFVLVANSESTLMNTEKHFFHKVNERLSKPNIFILNNRWDASASEPEYMEDVRRQHMERCLHFLVEELKVVSPSEARNRIFFVSAKEVLNSRKHKAQGMPEGGGALAEGFQARLQEFQNFEQTFEECISQSAVKTKFEQHTIRAKQILDTVKNILDSVNVAAAEKRVYSMEEREDQIDRLDFIRNQMNLLTLDVKKKIKEVTEEVANKVSCAMTDEICRLSVLVDEFCSEFHPTPSVLKVYKSELNKHIEDGMGRNLADRCTNEVNASILQSQQEIIENLKPLLPAGIQNKLHTLIPCKKFDLSYDLNCHKLCSDFQEDIVFRFSLGWSSLVHRFLGSTNAQRVLLGLSEPIFQVPRSLASTPTAPSNPAAPDNAAQEELMITLITGLASLTSRTSMGIIVVGGVIWKTVGWKLISVTLSMYGALYLYERLTWTTRAKERAFKQQFVNYATEKLQMIVSFTSANCSHQVQQEMATTFARLCQQVDVTQKHLEEEIARLSKEIDQLEKIQNNSKLLRNKAVQLESELENFSKQFLHPSSGES
(GenBank Accession No.AAO34660.1;配列番号2)
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(GenBank Accession No.AAK18728.1;配列番号3)
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(GenBank Accession No.AAM88577.1;配列番号4)
本発明は、マイトフュージン、例えばMfn1又はMfn2に結合可能な薬剤を同定する方法を含む。
本発明はまた、マイトフュージン、例えばMfn1又はMfn2の活性を調節することが可能な薬剤を同定するための方法を含む。Mfn1又はMfn2の活性は、例えばMfn1又はMfn2のGTPアーゼの酵素活性を分析することによって、直接分析され得る。代わりに又は加えて、Mfn1又はMfn2の活性は、例えば細胞内のミトコンドリアの融合を分析することによって、間接的に分析され得る。
GTPアーゼ活性を測定するためのいくつかの技術が当業者に知られている。そのようなGTPアーゼアッセイは、付随して無機リン酸の放出を生じるGTPアーゼによるGTPのGDPへの変換を検出することに基づくものであり得る。これらの技術は、細胞から単離されたGTPアーゼ、例えばMfn1又はMfn2に応用することができる。Mfn1又はMfn2は組換え技術を用いて発現させることが可能である。好ましくは、かかるMfn1又はMfn2は精製されている。Mfn1及びMfn2の発現及び精製の方法は当業者に知られている。
ミトコンドリア融合に対する候補薬剤の効果も細胞内で直接分析することが可能である。ミトコンドリア融合を分析する方法は当業者に知られている。例えば、ミトコンドリアは、共焦点顕微鏡を用いるタイムラプス撮影により細胞内で可視化され得る。この技術は、Mfn1及びMfn2のノックアウトがミトコンドリア動態及び融合に及ぼす効果についての研究においてChen et al.(Chen H.et al.(2003) J.Cell Biol.160:189−200)が記載している。
Mfn1又はMfn2の発現を分析する方法は、本発明においてタンパク質レベルで候補薬剤の効果を選別するために用いられ得る。加えて、診断方法の部分として、対象者からの試料中のタンパク質、例えばMfn1、Mfn2又は他のバイオマーカーの発現レベルを分析することもできる。タンパク質の発現レベルは疾患又は疾患の素因に関連し得る。
マイトフュージン発現は、転写後遺伝子抑制(PTGS)を用いて調節することができる。2本鎖RNA(dsRNA)によりもたらされる転写後遺伝子抑制は、外来遺伝子の発現を制御するため保存された細胞防御機構である。トランスポゾン又はウイルスなどの配列の無作為な挿入が、相同な1本鎖mRNA又はウイルスのゲノムRNAの配列特異的な分解を活性化するdsRNAの発現を引き起こすと考えられている。そのサイレンシング効果はRNA干渉(RNAi)として知られている(Ralph et al.(2005) Nat.Medicine 11:429−33)。RNAiの機構は、長いdsRNAを約21〜25ヌクレオチド(nt)のRNA2重鎖にプロセシングすることを含む。これらの産物はmRNA分解の配列特異的な介在分子であり、低分子干渉RNA又はサイレンシングRNA(siRNA)と呼ばれる。分化した哺乳動物細胞では、30bpより長いdsRNAが、タンパク質合成の停止及び非特異的mRNA分解を誘導するインターフェロン応答を活性化することが明らかとなっている(Stark et al.(1998) Ann.Rev.Biochem.67:227−64)。しかし、この応答は21ntのsiRNA2重鎖を用いることにより回避され得(Elbashir et al.(2001) EMBO J.20:6877−88;Hutvagner et al.(2001) Science 293:834−8)、培養哺乳動物細胞での遺伝子機能の分析を可能とする。
本発明の薬剤は代謝疾患の処置又は予防に用いられ得る。代謝疾患は、糖尿病、インスリン抵抗性、耐糖能異常、又は空腹時血糖異常であり得る。好ましくは、代謝疾患は糖尿病である。糖尿病は1型又は2型糖尿病であり得、好ましくは2型糖尿病である。
代謝疾患、例えば、糖尿病、インスリン抵抗性、及び耐糖能異常についてのいくつかの動物モデルが当業者に知られている。上記に検討したように、C57Bl/6Jマウスモデルは、高脂肪食飼育によりヒトの代謝疾患を模倣可能であることから、動物に基づく研究に普通に用いられる。
本発明で用いる薬剤はポリペプチド又はポリヌクレオチドであり得る。ポリヌクレオチド及びポリペプチドは、本発明の方法又はスクリーニングアッセイの部分として細胞内へ導入することが必要な場合がある。
本発明のポリヌクレオチドはDNA又はRNAを含み得る。それらは1本鎖又は2本鎖であり得る。遺伝暗号の縮重の結果、数多くの異なるポリヌクレオチドが同一のポリペプチドをコードし得ることは当業者に理解されるであろう。加えて、本発明のポリペプチドを発現するいかなる特定の宿主生物におけるコドン使用をも反映して、日常的な技術を用いて、本発明のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドの配列に影響を与えずにヌクレオチドを置換することが、当業者に可能であることが理解されるべきである。
本明細書で用いられる「タンパク質」という用語は、個々の構成ポリペプチドが共有結合又は非共有結合により連結されている複数ポリペプチドの複合体に加えて、単鎖ポリペプチド分子を含む。本明細書で用いられる「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、単量体がアミノ酸であり、ペプチド結合又はジスルフィド結合を通じて連結された重合体を表す。
本明細書で言及される特定のタンパク質及びヌクレオチドに加えて、本発明は多様体、誘導体、類似体、相同体、及びこれらの断片をも包含する。
本発明で用いられるポリヌクレオチドはコドンの最適化がなされ得る。コドン最適化は、以前に国際公開第1999/041397号及び国際公開第2001/079518号に記載されている。異なる細胞では特定のコドンの使用に相違がある。このコドンの偏りは、細胞型における特定tRNAの相対量の偏りに対応している。対応するtRNAの相対量に合うよう配列中のコドンを変化させることによって発現を増加させることが可能である。同様に、対応するtRNAが特定の細胞型で稀であることがわかっているコドンを意図的に選択することによって発現を減少させることが可能である。このように、転写度合いを追加的に制御可能である。哺乳動物の細胞のコドン使用頻度は他の多様な生物と同様に当業者に知られている。
本明細書で用いられる抗体は、選択された標的に結合可能であり、Fv、ScFv、F(ab’)、及びF(ab’)2、モノクローナル及びポリクローナル抗体、キメラ、CDR移植、及びヒト化を含む設計された抗体、並びにファージディスプレイ又は代わりの技術を用いて生産された人工的に選択される抗体を含む、抗体全体又は抗体断片を表す。
本明細書中の処置というすべての表現は治療的、緩和的及び予防的処置を含むと理解されるべきである。哺乳動物、特にヒトの処置が好ましい。ヒト及び獣医学的処置はいずれも本発明の範囲内である。
本発明で使用される薬剤は単独で投与され得るとしても、特にヒトの治療法において、それらは一般的には医薬担体、賦形剤又は希釈剤との混合物で投与されるであろう。いくつかの実施形態では、薬剤は栄養剤、食品添加物、又は食品成分であり、したがって適切な食品組成物に処方され得る。それ故、薬剤は、例えば食品製品、飲料、ペットフード製品、補助食品、機能性食品、又は栄養製剤で投与され得る。
当業者は、本発明の薬剤のうちの1つについて、過度の実験を行うことなしに、対象への投与のために適切な用量を容易に決定することが可能である。一般には、医師が個々の患者に最も適切な実際の用量を決定し、その用量は、用いる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用期間、齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の方法及び時期、排泄率、併用する薬剤、特定の状態についての重症度、並びに個々に受けている治療を含む様々な要因によるであろう。もちろん、より高い又はより低い用量範囲が優れている個別の場合があり得、そのような場合は本発明の範囲内にある。
試料:
診断及び予防の方法という面での「試料」は、対象に由来する試料を表すものとして本発明の範囲内にあると理解される。生体試料は、対象から直接得られるものであってもよいし、又は前記対象から得られた培養細胞に由来するものであってもよい。
「対象」は、ヒト又はヒト以外の動物のいずれをも表す。ヒト以外の動物の例は、例えば、ヒト以外の霊長類(特に高等霊長類)、イヌ、げっ歯類(例えばマウス、ラット又はモルモット)、ブタ及びネコといった哺乳動物などの脊椎動物を含む。好ましい実施形態において対象はヒトである。
材料:
特段の記載がない場合、PJ34を含むすべての化学物質はSigma−Aldrichから入手した。
純系C57Bl/6Jを背景とした雄のMfn1のfloxマウスが、IRB Barcelona(スペイン)のAntonio Zorzano教授により作成された。その後、肝特異的にMfn1遺伝子を欠失させたマウス(Mfn1−LKO)を育成するために、このマウスと、Creリコンビナーゼ酵素を発現するマウスを交配させた。flox動物が対照として用いられた。マウスは、水並びにげっ歯類の標準食(D12450J,Research diets Inc.,New Brunswick,NJ,USA)又は高カロリー、高脂肪食(脂肪60kcal、Research Diets,New Brunswick,NJ,USA)を自由に利用できる状態で収容し、12時間の明暗周期の下で飼育した。すべての動物実験は、現地国内及びEUの倫理指針に従って実施された。体重をモニタリングするために、マウスは各週同一曜日に計量し摂食量を測定した。すべての研究において、絶食(8:00開始)した場合は6時間後(14:00)に動物を屠殺し、下記に詳述するように組織の採取及び処理を行った。経口の耐糖試験及び腹腔内インスリン耐性試験は、以前(Lagouge et al,2006)に記載されている通りに決定した。そして、血漿インスリンは、ヘパリン添加血漿試料中で特異的なELISAキット(Mercodia)を用いて決定した。ヘパリンを入れた採血管に血液試料を採取し、遠心分離後に血漿を単離した。我々は、O2消費量、CO2生成量、及び自発運動量を、文献(Lagouge et al,2006)に記載されている通り、開放型間接熱量測定系(Sabre systems,Las Vegas,NV,USA)で24〜48時間にわたり測定した。エネルギー消費量は、エネルギー当量20.1J/mL O2を用いて算出した。呼吸商は、O2消費量に対するCO2生成量の比とした。運動量測定の間、ビームラインの横断は各々15分間についてまとめた。各15分間のビームライン横断の合計を時間に対してプロットし、各実験集団で平均的であった個々のマウスについてAUCを算出した。
製造者の指示に従ってTRIzol(Invitrogen)を用いて全RNAを調製した。RNAをDNA分解酵素で処理し、2mgのRNAを逆転写(RT)に用いた。cDNAはQIAquick PCR cleanupカラム(Qiagen,Valencia,CA,USA)で精製した。50倍希釈したcDNAを定量RT−PCR(RT−qPCR)反応に用いた(Lagouge et al,2006)。RT−qPCR反応は、Light−Cyclerシステム(Roche Applied Science)及びqPCR Supermix(Qiagen)を用いて、次のプライマーで実施した:ベータ−2−マイクログロブリン(ハウスキーピング遺伝子;F:TTCTGGTGCTTGTCTCACTG(配列番号5);R:TATGTTCGGCTTCCCATTCT(配列番号6));シクロフィリン(ハウスキーピング遺伝子:F:CAGGGGAGATGGCACAGGAG(配列番号7);R:CGGCTGTCTGTCTTGGTGCTCTCC(配列番号8));Mfn1(F:AGGGGACCGATGGAGATAAAG(配列番号9);R:AAGAGGGCACATTTTGCTTTG(配列番号10));Mfn2(F:ACGTCAAAGGGTACCTGTCCA(配列番号11);R:CAATCCCAGATGGCAGAACTT(配列番号12))。Mfn1及びMfn2の発現評価は2つの常発現遺伝子により補正した。
以前(Frezza et al,2007)に記載されている通り、ミトコンドリアの単離にはおよそ0.5mgの肝臓を用いた。最終的なミトコンドリア塊は、溶解緩衝液(50mM トリス、100mM KCl、1mM EDTA、1% NP40、5mM ニコチンアミド、1mM 酪酸ナトリウム、プロテアーゼ阻害剤、pH7.4)に再懸濁された。タンパク質濃度はBCA protein assayキット(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA)を用いて測定し、試料の希釈はタンパク質濃度が等しくなるよう調整した。タンパク質は、以前(Canto et al,2004)に記載されている通り、SDS−PAGEにより分離され、ニトロセルロース膜上に移された。
Mfn1、ポリン、及びOXPHOSのカクテル抗体はAbcam(Cambridge,UK)から購入し、OPA−1抗体はBD Biosciences(San Francisco,USA)から購入した。ペルオキシダーゼ標識した2次マウス及びウサギ抗体はSigma−Aldrichから購入した。
ミトコンドリアの機能は、以前(Holmstrom et al,2012)に記載されている通り、呼吸測定器(Oroboros Oxygraph−2k;Oroboros Instruments,Innsbruck,Austria)を用いて評価された。摘出したばかりの1片の肝臓(約50mg)を計量し、弛緩液(2.8mM Ca2K2EGTA、7.2mM K2EGTA、5.8mM ATP、6.6mM 塩化マグネシウム、20mM タウリン、15mM クレアチンリン酸ナトリウム、20mM イミダゾール、0.5mM ジチオスレイトール、及び50mM MES、pH7.1)に入れ、解剖処理の最後に、エッペンドルフ製の電動乳棒を用いて、200マイクロリットルの氷冷した呼吸測定液(0.5mM EGTA、3mM 塩化マグネシウム、60mM ラクトビオン酸カリウム、20mM タウリン、10 mM リン酸二水素カリウム、20mM HEPES、110mM ショ糖、及び0.1%(w/v)ウシ血清アルブミン、pH7.1)中でこの組織をゆっくり均質化した。その後、呼吸測定液の量は、0.1mg組織/マイクロリットルの濃度となるように調整した。そして、2mgの破砕物を呼吸チャンバに加えた。すべての測定は2回反復した。基質としてリンゴ酸(終濃度2mM)、グルタミン酸(20mM)、及びピルビン酸(10mM)を添加することによって、呼吸鎖の複合体Iからの基底酸素流量(漏出)を測定した。複合体I+IIを通って収束した電子の流れについて、ADP(5mM)とそれに続く複合体IIの基質であるコハク酸(10mM)の添加によって酸化的リン酸化を定量した。その後、プロトノフォアであるカルボニルシアニド−p−トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン(0.2μM)を滴下し、電子伝達系を介する最大流量を達成した。最後に、ロテノン(0.1μM)及びアンチマイシンA(2.5μM)をそれぞれ順次添加することにより、複合体I及びIIIからの電子伝達を阻害した。
動物試験の統計解析において、すべてのデータは正規分布することが確認された。有意性の評価のために、我々は独立標本のためのスチューデントのt検定を実施した。統計解析ソフトウェアは、GraphPad Prism 5(GraphPad Software,Inc.)を用い、すべてにおいてp値<0.05を有意とした。
16週齢のMfn1−LKO及び対照マウスで、身体組成を分析するためにエコーMRI解析(エコー核磁気共鳴画像解析)を行い、その直後から日々の活動及び摂食量を評価するためにCLAMS解析を実施した。マウスは24週齢で屠殺し、Mfn1及びMfn2の発現をRT−qPCRで分析するために肝臓から全mRNAを抽出した。
対照及びMfn1−LKOマウスは24週齢で供試された。(A)実施例1の記載に従って全肝臓の破砕物を呼吸測定アッセイに用いた。すべての値は、対照マウスがn=11、Mfn1−LKOマウスがn=9の、平均+/−標準誤差(SEM)で表示されている。
(A)18週齢の雄性対照又はMfn1−LKOマウスに2g/kg体重で腹腔内注入し、記載の期間で血糖量を追跡調査した。(B)20週齢の雄性対照又はMfn1−LKOマウスに0.3U/kgのインスリンを腹腔内注入し、記載の期間で血糖量を追跡調査した。すべての値は、対照マウスがn=11、Mfn1−LKOがn=9の、平均+/−標準誤差(SEM)で表示されている。
(A)10週齢の対照及びMfn1−LKOマウスを低脂肪食(LFD)又は高脂肪食(HFD)で飼育した。(A)体重の変化。(B)8週の高脂肪食飼育後にエコーMRIにより測定された身体組成。(C)高脂肪食の開始から10週後にマウスに2g/kg体重で腹腔内注入し、記載の期間で血糖量を追跡調査した。(D)高脂肪食開始後12週に老齢マウスは0.75U/kgのインスリンを腹腔内注入され、記載の期間で血糖量が追跡調査された。曲線上面積(AOC)値は右に示されている。すべての値は、対照マウスがn=10、Mfn1−LKOがn=10の、平均+/−標準誤差(SEM)で表示されている。*は、それぞれの対照マウスに対する統計的有意差をp<0.05で示している。
メトホルミンは、ビグアニド類の経口抗糖尿病薬であり、特に腎機能が正常である体重過剰及び肥満の個体における2型糖尿病処置の第1選択薬である。メトホルミンは、インスリン抵抗性が重要因子となり得る疾患においても利用される。メトホルミンは、肝臓によるブドウ糖産生を抑制することによって作用する。メトホルミンは、インスリン又は他の医薬との組み合わせで処方されることもある。
12週齢の対照及びMfn1−LKOマウスを高脂肪食(D12492,Research Diets Inc.,USA)で8週間飼育した。その後、マウスを一晩絶食させ、生理食塩水(溶媒として)又はメトホルミン(125mg/kg)いずれかを注入した。マウスは90分後に屠殺し、直後に肝臓を摘出し凍結させた。タンパク質抽出物を得、AMPK活性化の指標であるCRTC2、eIF2アルファ及びGAPDHを検査するためにウェスタンブロット解析に用いた。測定されたAMPK活性化指標が表すように、対照マウスに比較してMfn1−LKOマウスは促進されたAMPK活性化を示した。
ミトコンドリアの呼吸を測定する方法は上記実施例1に記載されている。野生型及びMfn1−LKOマウスから抽出したてのミトコンドリアを呼吸測定液に再懸濁し、100μgのタンパク質を呼吸測定解析に用いた。複合体Iの活性はリンゴ酸及びグルタミン酸の添加により刺激した。その後、最大共役呼吸を達成するためにADPを添加し、続いてメトホルミンの効果を評価した。図4の棒グラフは、呼吸の絶対量を各遺伝子型について4つのミトコンドリア調製物の平均+/−標準誤差(SEM)で示している。*は、野生型及びMfn1−LKO間の、p<0.05の統計的有意差を示している。下の表は、異なるメトホルミン用量での最大呼吸に対する残存の百分率を表している。
対照及びMfn1−LKOマウスの肝臓における呼吸値(pmol/(秒×mg組織))。値は、アンチマイシン−A(複合体III阻害剤)添加後に残った残存呼吸を引いた後の正味の呼吸速度である。すべての値は、対照マウスがn=11、Mfn1−LKOマウスがn=9の平均+/−標準誤差(SEM)で表されている。
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Claims (26)
- マイトフュージン−1(Mfn1)に結合可能な薬剤を同定する方法であって、Mfn1ポリペプチドを提供するステップ、及び前記Mfn1ポリペプチドと候補薬剤との結合を検出するステップを含む方法。
- Mfn1の活性を調節する薬剤を同定するための方法であって、Mfn1ポリペプチド若しくはポリヌクレオチドと候補薬剤とを含む調製物を提供するステップ、及び前記候補薬剤が前記Mfn1ポリペプチド若しくはポリヌクレオチドの活性に影響するか否かを検出するステップを含む方法。
- Mfn1の活性が、Mfn1のGTPアーゼ活性を決定することによって測定される、請求項2に記載の方法。
- 前記候補薬剤をGTP存在下で前記Mfn1ポリペプチドと接触させるステップ、及びGDPへのGTPの加水分解を測定するステップを含む、請求項3に記載の方法。
- Mfn1の活性を調節することが可能な薬剤であって、マイトフュージン−2(Mfn2)の活性を調節しない薬剤を同定するための方法である、請求項2〜4のいずれか一項に記載の方法。
- Mfn2の活性が、Mfn2のGTPアーゼ活性を決定することによって測定される、請求項5に記載の方法。
- Mfn1の活性を減少させる薬剤を同定するための方法である、請求項2〜6のいずれか一項に記載の方法。
- Mfn1とGTPとの相互作用を調節することが可能な化合物を同定する方法であって、
d)Mfn1ポリペプチドを提供するステップ、
e)GTP分子を提供するステップ、及び
f)候補薬剤の存在下で前記Mfn1ポリペプチドと前記GTP分子との結合を検出するステップ
を含む方法。 - Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングを調節する薬剤を同定するための方法であって、Mfn1ポリペプチドを発現する細胞を候補薬剤と接触させるステップ、及び前記Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングの増減をモニタリングするステップを含む方法。
- Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングを減少させる薬剤を同定するための方法である、請求項9に記載の方法であって、Mfn1ポリペプチドを発現する細胞を候補薬剤と接触させるステップ、及び前記Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングの減少をモニタリングするステップを含む方法。
- Mfn1ポリペプチドの発現又はプロセシングを減少させる薬剤であって、Mfn2ポリペプチドの発現又はプロセシングを調節しない薬剤を同定するための方法である、請求項9に記載の方法。
- Mfn1関連疾患の症状を予防、調節、減少又は改善する薬剤を同定するための方法である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 代謝疾患の症状を予防、減少又は改善する薬剤を同定するための方法である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 代謝疾患の症状を予防、調節、減少又は改善する薬剤を同定する方法であって、Mfn1活性を調節するものとして同定された薬剤を前記代謝疾患の動物モデルに投与するステップ、及び前記動物モデルにおける前記代謝疾患の進行を観察するステップを含む方法。
- 前記候補薬剤が、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法を用いて同定される、請求項14に記載の方法。
- 前記代謝疾患が、インスリン抵抗性、耐糖能異常、空腹時血糖異常、及び糖尿病からなる群から選択される、請求項13〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記薬剤が、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、又は小分子である、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 代謝疾患の処置又は予防における使用のための、Mfn1の活性を調節することが可能な薬剤。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項18に記載の薬剤であって、Mfn1の活性を減少させることが可能な薬剤。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項17〜19のいずれか一項に記載の薬剤であって、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、又は小分子からなる群から選択される薬剤。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項17〜19のいずれか一項に記載のsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、又はポリペプチドをコードするベクター。
- 代謝疾患の処置における使用のための請求項17〜21のいずれか一項に記載のベクター又は薬剤であって、前記代謝疾患が、インスリン抵抗性、耐糖能異常、空腹時血糖異常、及び糖尿病からなる群から選択される、ベクター又は薬剤。
- 代謝疾患を予防又は処置する薬剤をスクリーニングする方法における、Mfn1ポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの使用。
- 代謝疾患のバイオマーカーとしての、Mfn1ポリペプチド又は該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの使用。
- 対象における代謝疾患又は該疾患の素因を診断する方法であって、対象から得られた試料におけるMfn1の発現レベルを測定することを含む方法。
- 前記代謝疾患が、インスリン抵抗性、耐糖能異常、空腹時血糖異常、及び糖尿病からなる群から選択される、請求項25に記載の方法。
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