JP2017510810A - 分析方法でシグナル検出を改善する吸収性粒子の使用 - Google Patents
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Abstract
Description
a)分析物の検出を目的とする少なくとも1つのスポットを含む少なくとも1つのコンパートメントを含む固体支持体を用意するステップ、
b)分析する検体を固体支持体の前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
c)分析物の少なくとも1つの検出リガンドを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、分析物の前記検出リガンドは直接または間接検出マーカーに結合している、ステップ、
d)前記検出マーカーが間接検出マーカーである場合は、前記検出リガンドに結合している間接検出マーカーのレポーターを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
e)ステップd)で用いるレポーターが間接マーカーに結合している場合は、前記レポーターに結合している間接検出マーカーのレポーターを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
f)吸収性粒子を前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、前記吸収性粒子は前記コンパートメントのスポット(複数可)と接触している液相に含まれる、ステップ、および
g)前記吸収性粒子を含む液相の存在下で、前記コンパートメントのスポット(複数可)で分析物の存在に対応するシグナルを検出するステップ
を含む分析方法を提供することである。
分析する検体は、好ましくは生体検体である。
検体で検出される分析物は、検体で検出および/または数量化しようとする天然または合成の任意のタイプの化合物であってもよい。
− ウイルス、例えばHIV(ヒト免疫不全ウイルス)、特にHIV−1またはHIV−2、HBV(B型肝炎ウイルス)、HCV(C型肝炎ウイルス)、HPV(ヒト乳頭腫ウイルス)、HTLV(ヒトTリンパ親和性ウイルス)、特にHTLV−IまたはHTLV−II、
− 寄生虫、例えばヒトまたはヒト以外の動物でトキソプラズマ症(特にトキソプラズマ原虫(Toxoplasma gondii))、マラリア(特にプラスモディウム属の寄生虫、例えば熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、三日熱マラリア原虫(Plasmodium vivax)、卵形マラリア原虫(Plasmodium ovale)、四日熱マラリア原虫(Plasmodium malariae)またはプラスモディウム・ノウレシ(Plasmodium knowlesi))またはシャガス病(特にクルーズトリパノソーマ(Trypanosoma cruzi))を引き起こすことができる寄生虫、または
− 細菌、例えばヒトまたはヒト以外の動物で梅毒(梅毒トレポネーマ(Treponema pallidum))またはライム病(特にボレリア属からの細菌)を引き起こすことができる細菌
の1つまたはいくつかの抗原および/または1つまたはいくつかの抗体を含むことができる。
捕捉リガンドは、固体支持体に、スポットに固定された化合物である。
検出リガンドは、それが特異的である化合物の存在を明らかにすることを目的とする。
検出マーカーは、直接マーカーまたは間接マーカーであってもよい。
本発明による分析方法を実行するために用いられる支持体(複数可)は、固体支持体である。
シグナルの検出は、用いるマーカーのタイプに依存する。
有利な一実施形態では、固体支持体の少なくとも1つのコンパートメントのスポット(複数可)は、対照として用いられる蛍光体を含む。
本明細書では、「吸収性粒子」は、その低減(部分的または完全な)を追求するシグナル、すなわち光干渉の起源のシグナルの放出波長範囲に部分的または完全に重なる波長範囲の光を吸収する粒子を指す。
本発明は、固体支持体のスポット(複数可)に存在する蛍光体によって放出されるシグナルの検出をさらに可能にする、吸収性粒子を選択するための方法であって、
a)試験する吸収性粒子または試験する吸収性粒子の混合物を含む液相を、固体支持体のコンパートメントのスポット(複数可)と接触させるステップであって、前記コンパートメントのスポットの少なくとも1つは蛍光体を含む、ステップ、
b)試験する前記吸収性粒子または試験する吸収性粒子の前記混合物を含む前記液相の存在下で前記蛍光体によって放出されるシグナルを検出するステップ、および
c)その存在下でステップb)で検出されるシグナルが前記蛍光体を含むスポット(複数可)を局在化することを可能にする吸収性粒子または吸収性粒子の混合物を選択するステップ
を含む方法にも関する。
好ましい一実施形態では、「吸収性粒子」の段落において上で規定される吸収性粒子は、吸収性組成物の形態で供与される。
− 吸収性組成物は、0.5μm未満、例えば0.45μm未満の直径を有する吸収性粒子を含む、
− 吸収性組成物は、0.06μmから0.1μmの平均直径、例えば0.070μmの平均直径を有する吸収性粒子を含む、
− 吸収性組成物は、その表面に官能基が付着している吸収性粒子を含む、
− 吸収性組成物は、12%から18%の吸収性粒子、例えば15%の吸収性粒子を含み、百分率は吸収性組成物の総重量の重量百分率によって表される、
− 吸収性組成物は、65ダイン/cmから75ダイン/cm、例えば70ダイン/cmの表面張力を有する、
− 吸収性組成物は、8から10、例えば9.5のpHを有する、および/または
− 吸収性組成物は、1cpから2.5cpの粘度、例えば2.1cpの粘度を有する。
本発明はさらに、特に少なくとも1つのスポットを含む固体支持体を使用して、分析方法を実行するためのキットであって、
少なくとも2つの組成物:
− ルミノール、イソルミノールおよびルミノールまたはイソルミノールの誘導体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第1の組成物、
− 酸化剤および電子伝達体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、好ましくは少なくとも1つの酸化剤および任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第2の組成物
を含み、第1の組成物および/または第2の組成物は吸収性粒子を含むこと、および/または前記キットは吸収性粒子を含む第3の組成物を含むことを特徴とするキットに関する。
− 吸収性粒子ならびにルミノール、イソルミノールおよびルミノールまたはイソルミノールの誘導体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第1の吸収性組成物、
− 酸化剤および電子伝達体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、好ましくは少なくとも1つの酸化剤および任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第2の組成物
を含むキットに特に関する。
− ルミノール、イソルミノールおよびルミノールまたはイソルミノールの誘導体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第1の組成物、ならびに
− 吸収性粒子ならびに酸化剤および電子伝達体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、好ましくは少なくとも1つの酸化剤および任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第2の吸収性組成物
を含むキットに特に関する。
− ルミノール、イソルミノールおよびルミノールまたはイソルミノールの誘導体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第1の組成物、
− 酸化剤および電子伝達体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、好ましくは少なくとも1つの酸化剤および任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第2の組成物、ならびに
− 吸収性粒子を含む第3の吸収性組成物
を含むキットに特に関する。
上で規定される吸収性粒子または上で規定されるそれらを含む吸収性組成物の使用は、特にシグナルの検出が液相の存在下で実行される場合は、スポット(複数可)における分析方法、好ましくはスポットにおける多重分析方法でシグナルの検出を改善する(したがって確実にする)ことを可能にする。
本発明は、分析物の存在に対応するシグナルの検出を改善すること(したがって確実にすること)を可能にする分析方法、特に多重分析方法であって、
a)分析物の検出を目的とする少なくとも1つのスポットを含む少なくとも1つのコンパートメントを含む固体支持体を用意するステップ、
b)分析する検体を前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
c)分析物の少なくとも1つの検出リガンドを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、分析物の前記検出リガンドは直接または間接検出マーカーに結合している、ステップ、
d)前記検出マーカーが間接検出マーカーである場合は、前記検出リガンドに結合している間接検出マーカーのレポーターを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
e)ステップd)で用いるレポーターが間接マーカーに結合している場合は、前記レポーターに結合している間接検出マーカーのレポーターを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
f)吸収性粒子を前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、前記吸収性粒子は前記コンパートメントのスポット(複数可)と接触している液相に含まれる、ステップ、および
g)前記吸収性粒子を含む液相の存在下で、前記コンパートメントのスポット(複数可)で分析物の存在に対応するシグナルを検出するステップ
を含む、またはそれからなる分析方法に特に関する。
a)分析物の検出を目的とする少なくとも1つのスポットを含む少なくとも1つのコンパートメントを含む固体支持体を用意するステップであって、前記スポットは前記分析物の捕捉リガンド、および好ましくは蛍光体を含む、ステップ、
b)分析する検体を前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
c)分析物の少なくとも1つの検出リガンドを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、分析物の前記検出リガンドは間接検出マーカー、好ましくはビオチンに結合している、ステップ、
d)前記検出リガンドに結合している間接検出マーカーのレポーター、好ましくはストレプトアビジンを前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
e)ステップd)で用いられるレポーターがペルオキシダーゼ酵素に結合している場合は、前記酵素の基質、例えばルミノール、イソルミノールおよび/またはルミノールもしくはイソルミノールの誘導体を前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップ、
e1)ステップd)で用いられるレポーターがペルオキシダーゼ酵素に結合している場合は、少なくとも1つの酸化剤、例えば過酸化物、および任意選択で少なくとも1つの電子伝達体、例えば3−(10’フェノチアジニル)プロパン1−スルホン酸ナトリウムを、前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、前記ステップe1)はステップe)の前、ステップe)の後、またはステップe)と同時に実行することができる、ステップ、
f)吸収性粒子、好ましくは炭素粒子または黄色の粒子およびマゼンタ色の粒子の混合物を前記コンパートメントのスポット(複数可)の存在下に置くステップであって、前記吸収性粒子は前記コンパートメントのスポット(複数可)と接触している液相に含まれ、ステップf)はステップe)の前もしくは後、ステップe1)の前もしくは後、またはステップe)および/もしくはステップe1)と同時に実行することができる、ステップ、ならびに
g)前記吸収性粒子を含む液相の存在下で、前記コンパートメントのスポット(複数可)で分析物の存在に対応するシグナルを検出するステップ
を含む、上で規定される方法である。
本発明は、少なくとも1つのスポットを含む固体支持体における分析方法、特に多重分析方法で分析物の存在に対応するシグナルの検出を改善する(したがって確実にする)ための、吸収性粒子の使用に特に関する。
1ウェルにつき9つのスポットを含む96ウェルのマイクロプレートを用いて、多重分析方法を実行する(第1のラインに1から3の番号を付けた3つのスポット、第2のラインに4から6の番号を付けた3つのスポットおよび第3のラインに7から9の番号を付けた3つのスポット)。
(i)炭素粒子の存在下でのシグナルの検出の改善
検体S1の場合は、分析物AHに対応するスポット(スポット格子中のスポット番号1)で、非常に強い光が放出される。
タートラジンを添加した溶液を含有するウェルおよび懸濁液状の炭素粒子を添加した溶液を含有するウェルの光学密度(OD)を、450nm(最大化学発光放出の近く)で研究した。発明者らは、驚くべきことに、タートラジンも液相でシグナルを獲得すると起こる光干渉の一部または全部を排除することを可能にすることを実際示した。
マイクロプレートのスポットで対照として存在する蛍光体によって放出されるシグナルが、吸収性粒子の存在下で実際に検出されることも確認された。
Claims (12)
- 分析物の存在に対応するシグナルの検出を改善することを可能にする分析方法であって、
a)分析物の検出を目的とする少なくとも1つのスポットを含む、少なくとも1つのコンパートメントを含む固体支持体を用意するステップ、
b)分析する検体を前記コンパートメントの前記スポットの存在下に置くステップ、
c)分析物の少なくとも1つの検出リガンドを前記コンパートメントの前記スポットの存在下に置くステップであって、分析物の前記検出リガンドは直接または間接検出マーカーに結合している、ステップ、
d)前記検出マーカーが間接検出マーカーである場合は、前記検出リガンドに結合している前記間接検出マーカーのレポーターを前記コンパートメントの前記スポットの存在下に置くステップ、
e)ステップd)で用いる前記レポーターが間接マーカーに結合している場合は、前記レポーターに結合している前記間接検出マーカーのレポーターを前記コンパートメントの前記スポットの存在下に置くステップ、
f)吸収性粒子を前記コンパートメントの前記スポットの存在下に置くステップであって、前記吸収性粒子は前記コンパートメントの前記スポットと接触している液相に含まれる、ステップ、および
g)前記吸収性粒子を含む前記液相の存在下で、前記コンパートメントの前記スポットで分析物の存在に対応するシグナルを検出するステップ
を含む分析方法。 - 前記吸収性粒子が炭素粒子または着色粒子であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記シグナルが前記固体支持体の底を通してステップg)で検出されることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- ステップg)で検出される前記シグナルが発光性化合物によって放出されるシグナルおよび/または蛍光体によって放出されるシグナルであることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記吸収性粒子が、ルミノール、イソルミノール、ルミノールまたはイソルミノールの誘導体、電子伝達体および酸化剤からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含む吸収性組成物の形態で提供される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つのスポットを含む固体支持体における分析方法において、分析物の存在に対応するシグナルの検出を改善するための吸収性粒子の使用。
- 分析物の存在に対応するシグナルの検出が液相の存在下で実行されることを特徴とする、請求項6に記載の使用。
- 検出されるシグナル対バックグラウンドノイズ比が増加することを特徴とする、請求項6または7に記載の使用。
- 前記吸収性粒子が炭素粒子または着色粒子であることを特徴とする、請求項6から8のいずれか一項に記載の使用。
- 分析物の存在に対応する前記シグナルが化学発光性化合物および/または蛍光体によって放出されることを特徴とする、請求項6から9のいずれか一項に記載の使用。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載の分析方法の実行に適切な吸収性組成物であって、吸収性粒子、ならびにルミノール、イソルミノール、ルミノールまたはイソルミノールの誘導体、電子伝達体および酸化剤からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含む、組成物。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載の分析方法の実行に適切なキットであって、
少なくとも2つの組成物:
− ルミノール、イソルミノールおよびルミノールまたはイソルミノールの誘導体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含み、任意選択で少なくとも1つの電子伝達体を含む第1の組成物、ならびに
− 少なくとも1つの酸化剤を含む第2の組成物
を含み、前記第1の組成物および/もしくは前記第2の組成物は吸収性粒子を含むこと、ならびに/または前記キットは吸収性粒子を含む第3の組成物を含むことを特徴とする、キット。
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