JP2017503528A - コリスチンシンセターゼ及び対応する遺伝子のクラスター - Google Patents
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Abstract
Description
ポリミキシン類は、バチルス属(Bacillus)種又はパエニバチルス属(Paenibacillus)種から単離された抗生物質分子である。これらの分子は、
・環状ヘプタペプチドと3個のアミノ酸の側鎖で構成された、10個のアミノ酸を含むペプチド鎖と、
・そのペプチドのN末端に結合した脂肪酸と
からなるリポペプチドである。
・アデニル化ドメイン(A):ペプチドシンセターゼの作用において中心的なドメイン。このドメインは、特異的アミノ酸の結合及びそのアミノ酸のアデニル化反応(そのアミノ酸のアデニル化アミノアシルへの変換)によるその活性化を可能にする;
・チオール化ドメイン(T又はペプチジル担体タンパク質についてはPCP:Peptidyl Carrier Protein):このドメインは、チオエステル結合による伸長過程を通じてシンセターゼに結合したままペプチドが合成されることを可能にする;
・縮合ドメイン(C):このドメインは、隣接するモジュールの2個のアミノ酸間のペプチド結合の形成を可能にする。
・PmxAモジュールは、各々がポリミキシン分子中へ特異的アミノ酸を組み込む「結合ポケット」として三次元的に構成された、4つのアデニル化ドメインを有する;
・PmxBモジュールは、1つのアデニル化ドメインを有し、単一個のアミノ酸の組込みを担う;
・PmxEモジュールは、ポリミキシンのペプチド鎖を構成する5個の他のアミノ酸を組み込む5つのアデニル化ドメインを有する。
ポリペプチド及びポリヌクレオチド
本発明は、ポリミキシンEシンセターゼをコードする新規遺伝子、特に、ロイシン又はイソロイシン残基の、ポリミキシン分子中への組込みを可能にする特異的な結合ポケットを形成する特定のアデニル化部位を有する「PmxA」シンセターゼをコードする遺伝子の単離及び同定に関する。
VTEAEKADLLGRFNDTTTEFPRGKTLIQLFEEQVERIPDAAAITLNEQELTYRELNERVNRLARTLRSHGISKGRLVAILAERSIEMVVGMLAAHKAGAAYVPIDPEYPEERIRFLIEDSGGQVMLTQSRLRERLAGSDPVILLDDESFYHEDGTNLNTGIEATDLACVIYTSGTTGKPKGNPVSHRNIVRVVQNTNYIDITERDHVLQLSSYSFDGATFDIFGALTNGARLVLVPYETLLEIGRLADLIQRERISVMFITTAFFNILVDVNVDCLRDVRAILFGGERVSVGHVRKALAHIGPGRLNHVYGPTESTVYTTYLPVDFVDELAVTVPIGRPISNTTVYIVDSRNKLLPIGVAGELCVGGEGLVRGYNNRPELTAEKFVDNPFVPGERMYRTGDLAKWLPDGTIEYVGRTDDQVKIRGFRIELGEIEAQLQKVEGIRKTTVFARENASGEKQLCAYYEADCELPAAELKSVLSKELPAYMIPAYLIQLERLPLTTNGKVDRRSLPAPEESLQPGGG(配列番号1)
と少なくとも90%の同一性を有することを特徴とし、
下線が施されたアミノ酸DGFFLGVVYKは保存され、かつロイシン、イソロイシン又はバリン残基に特異的な結合ポケットを形成している、PmxAシンセターゼに関する。
・ロイシン残基に特異的な、DAWIVGAIVK(配列番号2)、
・ロイシン、イソロイシン又はバリン残基に特異的な、DGFFLGVVYK(配列番号3)、
・ジアミノ酪酸残基に特異的な、DVGEISAIDK(配列番号4)、
・ジアミノ酪酸残基に特異的な、DVGEISAIDK(配列番号5)、
を含む4つの特異的な結合ポケットを含む。
・残基234Lから残基751Yまで;
・残基1741Vから残基2263Gまで;
・残基2815Pから残基3345Tまで;
・残基3900Eから残基4428Gまで。
に4つのアデニル化部位を有する。
・残基265Lから残基782Yまで;
・残基1772Vから残基2294Gまで;
・残基2846Pから残基3376Tまで;
・残基3931Eから残基4459Gまで。
に存在する。
・上に定義されるPmxAシンセターゼをコードする遺伝子、及び
・PmxB及びPmxEのシンセターゼそれぞれをコードする遺伝子
を含む、ポリミキシンE合成に関与する酵素をコードする遺伝子群に関する。
・配列番号1の配列の下線が施されたアミノ酸DGFFLGVVYKをコードするヌクレオチドは保存されるという条件で、配列番号7の配列と少なくとも90%の同一性を有するpmxA遺伝子と、
・配列番号8の配列と少なくとも90%の同一性を有するpmxB遺伝子と、
・配列番号9の配列と少なくとも90%の同一性を有するpmxE遺伝子と
を含む。
・下線が施されたアミノ酸DGFFLGVVYKをコードする核酸の部分は保存されるという条件で、配列番号7の配列と少なくとも95%の同一性を有するpmxA遺伝子と、
・配列番号8の配列と少なくとも95%の同一性を有するpmxB遺伝子と、
・配列番号9の配列と少なくとも95%の同一性を有するpmxE遺伝子と
を含む。
・配列番号7の配列と100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、特に、配列番号26に示されるヌクレオチド配列を含む、pmxA遺伝子と、
・配列番号8の配列と100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むpmxB遺伝子と、
・配列番号9の配列と100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むpmxE遺伝子と
を含む。
本発明はまた、上に定義されるPmxAシンセターゼをコードする遺伝子、又は上に定義されるPmxAシンセターゼをコードする核酸、及び/又は上に定義されるPmxEシンセターゼをコードする遺伝子を含む発現ベクターに関する。
・複製起点、
・導入された遺伝子の発現を可能にする、例えば、適当なプロモーター、エンハンサー等のようなエレメント、
・その発現が望まれる少なくとも1つのヌクレオチド配列
を含むベクターに関する。
他の酵素は、ポリミキシン合成、特に、ポリミキシンE合成に関与する。これらは、ポリミキシンEのペプチド鎖に主に組み込まれるDab残基の生合成を可能にする酵素と、そのペプチド部分への脂肪酸の結合を可能にする酵素である。
用語「宿主細胞」又は「宿主微生物」は、形質転換された、すなわち、特に、対象となる配列を含む発現ベクターの形態の外来DNAが導入された細胞を表すために本発明の文脈において使用され、上記配列は、外来DNAから、このDNAに対応するメッセンジャーRNA及びタンパク質を合成することが可能な、宿主細胞の細胞機構によって発現される。
・上に定義されるPmxAシンセターゼをコードする遺伝子、又は
・上に定義されるPmxEシンセターゼをコードする遺伝子、又は
・上に定義されるPmxAシンセターゼをコードするDNA配列、特に、配列番号7又は配列番号26に示される配列を含む発現ベクター
を導入することにより移入された微生物に関する。
本出願はまた、ポリミキシンEを生産するための方法であって、
・上に定義される形質転換された微生物を適当な無機培地中で培養する工程、及び
・その培養培地から、生産されたポリミキシンEを精製する工程
を含む方法に関する。
パエニバチルス・アルベイ種に属する、コリスチン(ポリミキシンE1及びE2)を生産する微生物(B−LR)を、自然環境から単離し、培養した。ゲノムDNAライブラリーを、フォスミドベクター(900クローン)を使用して大腸菌で構築した。コリスチンを合成する酵素をコードする遺伝子の探索は、縮重PCRによって行った。使用したプライマーは、コリスチンの構造を最も表しているアミノ酸(6個のアミノ酸/12個)であるジアミノ酪酸(Dab)の組込みにおいて特定されるドメインの増幅を目的として定義した。配列から対象となる3つのクローンを選択した(Roche GS FLX)。得られた配列は50kbより大きくアセンブルすることができた。オープンリーディングフレームを求めた。A、B、C、D及びEと称するそれらのうちの5つは、A(14.9kb)、B(3.3kb)、C(1.8kb)、D(1.7kb)及びE(18.9kb)を有する約41kbのクラスターを表し、これは図2に表している。
ポリミキシン生産に関与する酵素は、非リボソームペプチドシンセターゼ(NRPS)ファミリーに属する。これらのシンセターゼは、mRNA鋳型の翻訳に依存せずに特定のペプチドを生産することが可能である。生産されたペプチド鎖の特異性は、アデニル化ドメインを構成するシンセターゼのアミノ酸の正確な配列に依存する。B−LRのシンセターゼAについては4つのアデニル化ドメインがin silicoで確認され、Bについては1つ、Eについては5つが確認された。各アデニル化ドメインは、伸長中に非リボソームペプチド中へ正確なアミノ酸を組み込む特異性に与える10個のアミノ酸の署名を含有する。これらの署名はin silicoで確認され、次のウェブアドレスで利用可能なプログラムを使用して文献に記載されているものと比較した(表4):http://nrps.informatik.uni−tuebingen.de/。
pmxDの終了部から始まり、pmxEの開始部で終わる1650bpの配列を選択し、増幅した。この配列は、特有のSacII酵素制限部位を保有するという特殊性を有する。増幅した配列をpGEM(登録商標)7Zプラスミドにクローニングした。アプラマイシン耐性をコードする遺伝子をSacII制限部位に組み込んだ。この構築物をエレクトロポレーションによりB−LRに導入した。二重組換えイベントを受けた突然変異体の選択を、アプラマイシンを補給した寒天培地上で培養することにより行った。突然変異体の上清の抗微生物活性(antiomicrobial activity)をB−LRのものと比較した。突然変異体5の培養上清は、野生型B−LR菌のものよりも緑膿菌に対して活性が低い(図4)。
PmxEシンセターゼのペプチド配列は、配列番号14の配列に示される。エピマー化ドメインの配列は配列番号30に示され、それは、配列番号14の配列の残基Val3205〜Leu3665の間に含まれかつそれらを含む少なくとも461個の残基を含む。非リボソームペプチドの特徴の1つは、(L)立体異性を有するアミノ酸が存在することである。通常、(L)アミノ酸は、Aドメインによって活性化され、その後、それにAドメインが直接組み込まれる。しかしながら、この(L)型アミノ酸は、ペプチド結合形成前に任意のエピマー化ドメインによってその(D)型へと変換されることがある。in silico予測によれば、2つのエピマー化ドメインがpmxクラスターのモジュール3及び6において確認された。これは、これらの部位に存在するアミノ酸での立体化学的変化が可能であることを示唆する。従って、3位(Dab−3)及び6位(Leu−6)に存在するアミノ酸はそれらの(D)型でペプチド鎖中に組み込まれることになる。これは、全てのポリミキシンE類にその(D)型で組み込まれるLeu−6については知られているが、Dab−3残基では珍しい。
微生物(B−LR)は、7位にロイシン、イソロイシン又はバリン残基を含むいくつかの種類のポリミキシンE分子を生産する。
バチルス属はB−LRに系統発生的に近い異種発現宿主である。コリスチン生産クラスターの全てを収容するように操作されたフォスミドを、エレクトロポレーションによってレシピエント株に移入する。形質転換株は、抗生物質を補給した寒天培地上で選択する。コリスチン生産は、ジアミノ酪酸(合成前駆体)を補給した液体培地中で行う。培養上清からバイオマスを分離した後、コリスチンが検出される。抽出することにより、質量分析によるその特性評価の前にコリスチンを単離することができる。
特許文献
US 8 329 430
WO 1998/020836
WO 2009/098357
非特許文献
Sambrook et al.‘Molecular Cloning:a Laboratory Manual’.Second Edition,1989,Cold Spring Harbor Lab.,Cold Spring Harbor,New York
Niu B,Vater J,Rueckert C,Blom J,Lehmann M,Ru JJ,Chen XH,Wang Q,Borriss R.“Polymyxin P is the active principle in suppressing phytopathogenic Erwinia spp.by the biocontrol rhizobacterium Paenibacillus polymyxa M−1”.BMC Microbiol.2013 Jun 18;13(1):137.
Choi SK,Park SY,Kim R,Kim SB,Lee CH,Kim JF,Park SH−“Identification of a polymyxin synthetase gene cluster of Paenibacillus polymyxa and heterologous expression of the gene in Bacillus subtilis”J. Bacteriol.May 2009 vol.191 no.10−3350−3358
M Shaheen,J Li,AC Ross,JC Vederas,SE Jensen−“Paenibacillus polymyxa PKB1 Produces Variants of Polymyxin B−Type Antibiotics”−Chemistry&biology,Volume 18,Issue 12,23 December 2011,Pages 1640−1648
Martti Vaara,Timo Vaara−“Structure-activity studies on novel polymyxin derivatives that carry only three positive charges”−Peptides,Volume 31,Issue 12,December 2010,Pages 2318−2321
Govaerts, C.,Orwa, J.,Van Schepdael,A.,Roets,E.&Hoogmartens,J.Characterization of polypeptide antibiotics of the polymyxin series by liquid chromatography electrospray ionization ion trap tandem mass spectrometry.−J Pept Sci 8,45−55.(2002a).
Govaerts,C.,Orwa,J.,Van Schepdael,A.,Roets,E.&Hoogmartens,J.Liquid chromatography−ion trap tandem mass spectrometry for the characterization of polypeptide antibiotics of the colistin series in commercial samples.J Chromatogr A 976,65−78.(2002b).
Hong SY,Oh JE,Lee KH.Effect of D−amino acid substitution on the stability,the secondary structure,and the activity of membrane−active peptide.Biochem Pharmacol.1999 Dec 1;58(11):1775−80.
Lee DL, Powers JP, Pflegerl K, Vasil ML,Hancock RE,Hodges RS.Effects of single D−amino acid substitutions on disruption of beta−sheet structure and hydrophobicity in cyclic 14−residue antimicrobial peptide analogs related to gramicidin S.J Pept Res.2004 Feb;63(2):69−84.
DeCrescenzo Henriksen,D.R.Phillips and J.B.Doran Peterson.Polymyxin E production by P.amylolyticus E.Letters in Applied Microbiology,Volume 45,Issue 5,pages 491-496,November 2007.
Claims (20)
- 4つのアデニル化部位を含む、ポリミキシンE合成に関与するPmxAシンセターゼであって、第2のアデニル化部位が、配列番号1:
VTEAEKADLLGRFNDTTTEFPRGKTLIQLFEEQVERIPDAAAITLNEQELTYRELNERVNRLARTLRSHGISKGRLVAILAERSIEMVVGMLAAHKAGAAYVPIDPEYPEERIRFLIEDSGGQVMLTQSRLRERLAGSDPVILLDDESFYHEDGTNLNTGIEATDLACVIYTSGTTGKPKGNPVSHRNIVRVVQNTNYIDITERDHVLQLSSYSFDGATFDIFGALTNGARLVLVPYETLLEIGRLADLIQRERISVMFITTAFFNILVDVNVDCLRDVRAILFGGERVSVGHVRKALAHIGPGRLNHVYGPTESTVYTTYLPVDFVDELAVTVPIGRPISNTTVYIVDSRNKLLPIGVAGELCVGGEGLVRGYNNRPELTAEKFVDNPFVPGERMYRTGDLAKWLPDGTIEYVGRTDDQVKIRGFRIELGEIEAQLQKVEGIRKTTVFARENASGEKQLCAYYEADCELPAAELKSVLSKELPAYMIPAYLIQLERLPLTTNGKVDRRSLPAPEESLQPGGG
のペプチド配列と少なくとも90%の同一性を有することを特徴とし、
下線が施されたアミノ酸DGFFLGVVYKは保存され、かつロイシン、イソロイシン又はバリン残基に特異的な結合ポケットを形成している、PmxAシンセターゼ。 - 以下のアミノ酸:
ロイシン残基に特異的な、DAWIVGAIVK(配列番号2)、
ロイシン、イソロイシン又はバリン残基に特異的な、DGFFLGVVYK(配列番号3)、
ジアミノ酪酸残基に特異的な、DVGEISAIDK(配列番号4)、
ジアミノ酪酸残基に特異的な、DVGEISAIDK(配列番号5)、
を含む4つの特異的な結合ポケットを含むことを特徴とする、請求項1に記載のPmxAシンセターゼ。 - 配列番号6のペプチド配列を含み、好ましくは、配列番号25のペプチド配列を含むことを特徴とする、請求項1に記載のPmxAシンセターゼ。
- 5つのアデニル化部位及び1つのエピマー化部位を含む、ポリミキシンE合成に関与するPmxEシンセターゼであって、前記エピマー化部位が、配列番号30のペプチド配列と少なくとも90%の同一性を有することを特徴とする、PmxEシンセターゼ。
- 配列番号7のヌクレオチド配列と少なくとも90%の同一性を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載のポリミキシンE合成に関与するシンセターゼをコードする、オープンリーディングフレームを含む核酸であって、ただし、前記配列番号1の配列の前記下線が施されたアミノ酸DGFFLGVVYKをコードするヌクレオチドが保存されている、核酸。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のPmxAシンセターゼをコードする遺伝子と、PmxB及びPmxEシンセターゼをそれぞれコードする遺伝子とを含む、ポリミキシンE合成に関与する酵素をコードする遺伝子群。
- PmxC及びPmxD輸送タンパク質をそれぞれコードする遺伝子も含むことを特徴とする、請求項6に記載の遺伝子群。
- 配列番号7の配列と少なくとも90%の同一性を有するpmxA遺伝子であって、ただし、配列番号1の配列の下線が施されたアミノ酸DGFFLGVVYKをコードするヌクレオチドが保存されている、pmxA遺伝子と、
配列番号8の配列と少なくとも90%の同一性を有するpmxB遺伝子と、
配列番号9の配列と少なくとも90%の同一性を有するpmxE遺伝子と
を含む、請求項6に記載の遺伝子群。 - ポリミキシンE合成に関与する遺伝子群を含む、配列番号10の配列又は配列番号29の配列の核酸。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のPmxAシンセターゼをコードする遺伝子、又は請求項5に記載の核酸、及び/又は請求項4に記載のPmxEシンセターゼをコードする遺伝子を含む発現ベクター。
- 請求項6〜8のいずれか一項に記載の遺伝子群又は請求項9に記載の核酸の全体又は一部を含む発現ベクター。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のPmxAシンセターゼをコードする遺伝子、又は請求項4に記載のPmxEシンセターゼをコードする遺伝子、又は請求項5に記載の核酸、又は請求項10に記載のベクターを導入することにより形質転換された微生物。
- 請求項6〜8のいずれか一項に記載の遺伝子群、又は請求項9に記載の核酸、又は請求項11に記載の少なくとも1つのベクターを導入することにより形質転換された微生物。
- 前記遺伝子又は前記遺伝子群が過剰発現することを特徴とする、請求項12又は13に記載の形質転換された微生物。
- バチルス属又はパエニバチルス属に属することを特徴とする、請求項12〜14のいずれか一項に記載の形質転換された微生物。
- ポリミキシンEを生産するための方法であって、請求項12〜15のいずれか一項に記載の微生物を適当な無機培地中で培養する工程、及びその培養培地から、生産されたポリミキシンEを精製する工程を含む、方法。
- 前記培養が30℃の温度で行われ、少なくとも25時間継続することを特徴とする、請求項16に記載のポリミキシンE生産方法。
- ポリミキシンE変異体を生産するための方法であって、請求項12〜15のいずれか一項に記載の微生物を適当な無機培地中で培養する工程、及びその培養培地から、ポリミキシンE変異体(単数又は複数)を精製する工程を含む、方法。
- 請求項18に記載の生産方法によって得られるポリミキシンE変異体。
- グラム陰性菌による細菌感染症の治療におけるポリミキシンE変異体の使用のための、請求項19に記載のポリミキシンE変異体。
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Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US11913731B2 (en) * | 2021-01-08 | 2024-02-27 | Sanisure, Inc. | Process cooling rod |
EP4330269A2 (en) * | 2021-04-27 | 2024-03-06 | The Rockefeller University | Macolacins and methods of use thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100279347A1 (en) * | 2005-12-09 | 2010-11-04 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Polymyxin synthetase and gene cluster thereof |
JP2011511045A (ja) * | 2008-02-08 | 2011-04-07 | ノーザン アンチバイオティクス オイ | 短鎖脂肪酸の尾部を有するポリミキシン誘導体およびその使用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69705414T2 (de) | 1996-11-15 | 2002-05-02 | Pathogenesis Corp | Reines, biologisch aktives colistin, seine bestandteile und eine colistin-zubereitung zur behandlung von entzündungen der atemwege |
US8193148B2 (en) * | 2008-02-08 | 2012-06-05 | Northern Antibiotics Ltd. | Short fatty acid tail polymyxin derivatives and uses thereof |
-
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US20100279347A1 (en) * | 2005-12-09 | 2010-11-04 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Polymyxin synthetase and gene cluster thereof |
JP2011511045A (ja) * | 2008-02-08 | 2011-04-07 | ノーザン アンチバイオティクス オイ | 短鎖脂肪酸の尾部を有するポリミキシン誘導体およびその使用 |
Non-Patent Citations (3)
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"Gramicidin S synthetase ll [Paenibacillus alvei TS-15]", GENBANK:EPY07789, JPN6018051695, 31 July 2013 (2013-07-31) * |
J. BIOL. CHEM., vol. Vol.239, JPN6018051697, 1964, pages 865 - 871 * |
JOURNAL OF PEPTIDE RESEARCH, vol. Vol:57, JPN5017000488, 1 March 2001 (2001-03-01), pages 175 - 187 * |
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